FI71170B - Foerfarande foer stabilisering av peroxidas till vilket ett imunologiskt aktivt aemne kopplats i ett medium innehaollan deerum eller serumprotein - Google Patents

Foerfarande foer stabilisering av peroxidas till vilket ett imunologiskt aktivt aemne kopplats i ett medium innehaollan deerum eller serumprotein Download PDF

Info

Publication number
FI71170B
FI71170B FI822224A FI822224A FI71170B FI 71170 B FI71170 B FI 71170B FI 822224 A FI822224 A FI 822224A FI 822224 A FI822224 A FI 822224A FI 71170 B FI71170 B FI 71170B
Authority
FI
Finland
Prior art keywords
ett
peroxidase
medium
serum
serumprotein
Prior art date
Application number
FI822224A
Other languages
English (en)
Other versions
FI822224A0 (fi
FI71170C (fi
FI822224L (fi
Inventor
Harald Gallati
Hans Brodbeck
Original Assignee
Hoffmann La Roche
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hoffmann La Roche filed Critical Hoffmann La Roche
Publication of FI822224A0 publication Critical patent/FI822224A0/fi
Publication of FI822224L publication Critical patent/FI822224L/fi
Publication of FI71170B publication Critical patent/FI71170B/fi
Application granted granted Critical
Publication of FI71170C publication Critical patent/FI71170C/fi

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12QMEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/26Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
    • C12Q1/28Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase involving peroxidase
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/96Stabilising an enzyme by forming an adduct or a composition; Forming enzyme conjugates
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12QMEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2326/00Chromogens for determinations of oxidoreductase enzymes
    • C12Q2326/90Developer
    • C12Q2326/964-Amino-antipyrine

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Thiazole And Isothizaole Compounds (AREA)
  • Synchronisation In Digital Transmission Systems (AREA)
  • Laminated Bodies (AREA)
  • Nonmetallic Welding Materials (AREA)
  • Crystals, And After-Treatments Of Crystals (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Description

1 71170
Menetelmä peroksidaasin, johon on kytketty immunologises-ti aktiivista ainetta, stabiloimiseksi seerumia tai see-rumiproteiinia sisältävässä väliaineessa 5 Keksintö koskee menetelmää peroksidaasin, johon on kytketty immunologisesti aktiivista ainetta, stabiloimiseksi seerumia tai seerumiproteiinia sisältävässä väliaineessa.
Peroksidaasientsyymi, erityisesti piparjuuriperok-10 sidaasi, on hyvin monipuolisesti käyttökelpoinen, ja tulee kyseeseen erityisesti immunologisten reaktiokumppa-neiden, esimerkiksi hapteenien, antigeenien tai vasta-aineiden, merkitsemisessä immunologisissa koemenetelmissä. Koska peroksidaasin aktiivisuus tai läsnäolo on helposti 15 ja yksinkertaisesti todettavissa, on erityisen edullista käyttää peroksidaasia immunologisissa menetelmissä. Tähän perustuen sisältävät myös kaupallisesti saatavat entsyy-mi-immunomenetelmässä käytettävät välineet olennaisena aineosanaan aktiivista materiaalia, johon peroksidaasi 20 on liitetty. Koska tällaisia välineitä kuljetetaan ja varastoidaan vaihtelevia aikoja, on välttämätöntä, että entsyymin aktiivisuus säilyy mahdollisimaan pitkään. On kuitenkin tunnettua, että peroksidaasientsyymi, riippumatta siitä, onko se sidottuna toiseen komponenttiin, ei 25 ole kovin hyvin säilyvä, erityisesti pieninä pitoisuuksina. Siksi myös varastointikestävyys on heikko, mikä huonontaa tällaisten välineiden kaupallista merkitystä.
Nykyään peroksidaasikonjugaatteja säilytetään seerumia tai seerumiproteiinia sisältävässä reaktioväliai-30 neessa, joka voi sisältää esimerkiksi noin 20 % vuohen seerumia. Tässä yhteydessä on osoittautunut, että seerumin mukanaolo parantaa konjugaatin stabiilisuutta. Toisaalta havaittiin korkeammissa säilytyslämpötiloissa (esimerkiksi 37°C) ja/tai pitkähköjen varastointiaikojen (esimerkik-35 si 6 kk) jälkeen, että seerumi vaikuttaa peroksidaasia inaktivoivasti lohkaisemalla hemiiniosia entsyymistä. Tämä inaktivointi johtuu ilmeisesti hemiini-vuorovaikutuksista 2 71170 peroksidaasin ja hemiiniä sitovien seerumiproteiinien välillä. Tämän keksinnön yhteydessä on havaittu, että peroksidaasin inaktivoitumista voidaan merkittävästi vähentää lisäämällä 4-aminoantipyriiniä väliaineeseen. Siten lisät-5 täessä 4-aminoantipyriiniä reaktioväliaineeseen paranee peroksidaasin stabiilisuus huomattavasti.
Peroksidaasin stabilointia kuvataan US-patentti-julkaisussa 4 252 896 ja FI-hakemusjulkaisussa 772 747. US-patenttijulkaisun 4 252 896 mukaan peroksidaasi voidaan 10 stabiloida lisäämällä 8-anilino-l-naftaliinisulfonihappoa, ja FI-hakemusjulkaisun 772 747 mukaan peroksidaasia sisältävien seosten stabilointiin käytetään polyvalenttisia metalli-ioneja.
Tämä keksintö koskee menetelmää peroksidaasin, jo-15 hon on kytketty immunologisesti aktiivista ainetta, sta-biloimiseksi seerumia tai seerumiproteiinia sisältävässä väliaineessa, jolle menetelmälle on tunnusomaista, että väliaineeseen lisätään 4-aminoantipyriiniä.
Peroksidaasina tulee keksinnön mukaisessa mene-20 telmässä kyseeseen ennen kaikkea piparjuuriperoksidaasi. Seerumina on osoittautunut edulliseksi erityisesti vuohen seerumi, voidaan kuitenkin käyttää myös esimerkiksi fetaa-lista vasikan seerumia. Seerumiproteiiniksi soveltuu esimerkiksi albumiini.
25 4-aminoantipyriinin pitoisuus väliaineessa on edul lisesti 10-1000 mg/1, erityisesti 40-300 mg/1. Aivan erityisen edullisesti käytetään 4-aminoantipyriinin pitoisuutta 100 tai 200 mg/1.
Seuraava esimerkki kuvaa keksintöä.
30 Esimerkki: 0,1 mg/1 (vuohen) anti-CEA-peroksidaasikonjugaattia liuotetaan 0,2 M natriumfosfaattipuskuriin (pH 6,5), joka sisältää 2 g/1 naudan seerumialbumiinia, 20 % normaalia vuohen seerumia (inaktivoitu 56°C:ssa 30 min) sekä 0,5 g/1 35 "Thimerosal":ia (Fluka). Tämä anti-CEA-peroksidaasiliuos jaetaan kahteen osaan. Toiseen osaan tätä anti-CEA-perok-sidaasiliuosta lisätään 0,2 g/1 4-aminoantipyriiniä. Molem- 3 71170 mat anti-CEA-peroksidaasiliuokset suodatetaan steriilistä (suodatin 0,2 jxm) ja laitetaan 20 ml:n annoksina steriileihin kierrekorkilla suljettaviin lasipuolloihin.
Näitä anti-CEA-peroksidaasiliuoksia säilytetään 2-8°C:ssa . . „ _o 5 ja vastaavasti 37 C:ssa.
Tietyin väliajoin yksittäisten anti-CEA-peroksi-daasiliuosten peroksidaasiaktiivisuudet määritetään lisäämällä substraattipuskuriliuokseen (0,5 ml) (0,1 M natriumsitraatti, pH 5,0, joka sisältää 6 mmol/1 10 ja 40 mmol/1 o-fenyleenidiamiini) 0,050 ml kyseessä olevaa anti-CEA-peroksidaasiliuosta (laimennettu ennalta suhteessa 1:20 9 g/1 NaCl-liuoksella) ja inkuboimalla 15 min huoneen lämpötilassa. Peroksidaasireaktio pysäytetään lisäämällä 2,0 ml 1 N HC1, ja absorptioero 15 (Δ A492 nm/RT/15 min) mitataan fotometrisesti. 4-ami- noantipyriinin stabiloivan vaikutuksen määrittämiseksi lasketaan prosentuaalinen reaktiivisuus 37°C:ssa säilytetylle anti-CEA-peroksidaasiliuokselle verrattuna vastaavaan 2-8°C:ssa säilytettyyn näytteeseen.
20 Seuraavaan taulukkoon on koottu edellä kuvatun kokeen tulokset, ja se osoittaa 4-aminoantipyriinin stabiloivan vaikutuksen.
4 71170 ! λ a__ m g tn 'q c» cm •m o co > % 1 s m > ro ;d S cW> cW>
C ^ O CM
n) i—i co G tN __ 3 ä rö >
(0 -H
d :rd <*p <*> +j G o i~~ ö r- S 3-- 2 | o. £ :3 <*> <#> G O. <n o
•H O
tn t“" .-t rö (0 Τ3
H G
tn -g λ: .5 o .¾ up <*> G G o o (0 O o
O. O »H i—I
:<0 *rH (0 c u H <0
•H M
U
>t G
di Ή
•H G
-P -H
G -H
(0 U
0 >i
G G
•H -H
g +J
3 c 1 to
^ O
G
G -H
(0 S
e 5
r-4 I
H rr

Claims (7)

1. Menetelmä peroksidaasin, johon on kytketty immu-nologisesti aktiivista ainetta, stabiloimiseksi seerumia tai 5 seerumiproteiinia sisältävässä väliaineessa, tunnettu siitä, että väliaineeseen lisätään 4-aminoantipyriiniä.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että peroksidaasi on piparjuuriperoksi-daasi.
3. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että seerumi on vuohen seerumi.
4. Jonkin patenttivaatimuksista 1-3 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että 4-aminoantipyriiniä lisätään siten, että sen pitoisuus on 10 - 1000 mg/1.
5. Patenttivaatimuksen 4 mukainen menetelmä, tun nettu siitä, että 4-aminoantipyriiniä lisätään siten, että sen pitoisuus on 40 - 300 mg/1.
5 71170
6. Patenttivaatimuksen 5 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että 4-aminoantipyriiniä lisätään siten, 20 että sen pitoisuus on 100 mg tai 200 mg/1.
7. Stabiloitu peroksidaasi, johon on kytketty immu-nologisesti aktiivista ainetta, seerumia tai seerumiproteiinia sisältävässä väliaineessa, tunnettu siitä, että väliaine sisältää 4-aminoantipyriiniä.
FI822224A 1981-07-30 1982-06-21 Foerfarande foer stabilisering av peroxidas till vilket ett imunologiskt aktivt aemne kopplats i ett medium innehaollan deerum eller serumprotein FI71170C (fi)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CH494481 1981-07-30
CH494481 1981-07-30

Publications (4)

Publication Number Publication Date
FI822224A0 FI822224A0 (fi) 1982-06-21
FI822224L FI822224L (fi) 1983-01-31
FI71170B true FI71170B (fi) 1986-08-14
FI71170C FI71170C (fi) 1986-11-24

Family

ID=4285239

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
FI822224A FI71170C (fi) 1981-07-30 1982-06-21 Foerfarande foer stabilisering av peroxidas till vilket ett imunologiskt aktivt aemne kopplats i ett medium innehaollan deerum eller serumprotein

Country Status (10)

Country Link
US (1) US4448882A (fi)
EP (1) EP0070992B1 (fi)
JP (1) JPS6054039B2 (fi)
AT (1) ATE11152T1 (fi)
AU (1) AU537173B2 (fi)
CA (1) CA1186990A (fi)
DE (1) DE3261832D1 (fi)
DK (1) DK155953C (fi)
FI (1) FI71170C (fi)
NO (1) NO163745C (fi)

Families Citing this family (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5084379A (en) * 1983-04-29 1992-01-28 Biowhittaker, Inc. Fluorometric assay of chymopapain hypersensitivity and reagents therefor
JPS60188067A (ja) * 1984-03-09 1985-09-25 Takeda Chem Ind Ltd ペルオキシダ−ゼ含有組成物
US4622294A (en) * 1985-02-08 1986-11-11 Kung Viola T Liposome immunoassay reagent and method
GB8505899D0 (en) * 1985-03-07 1985-04-11 Boots Celltech Diagnostics Assay reagents
DE3509238A1 (de) * 1985-03-14 1986-09-18 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Stabilisierung der aktivitaet von peroxidase in loesung
DE3511327A1 (de) * 1985-03-28 1986-10-02 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Stabilisierung der aktivitaet von peroxidase in loesung
US4824784A (en) * 1985-04-08 1989-04-25 Hygeia Sciences, Incorporated Chromogenic solution for immunoassay
US4931385A (en) * 1985-06-24 1990-06-05 Hygeia Sciences, Incorporated Enzyme immunoassays and immunologic reagents
US4868108A (en) * 1985-12-12 1989-09-19 Hygeia Sciences, Incorporated Multiple-antibody detection of antigen
US5102788A (en) * 1988-11-21 1992-04-07 Hygeia Sciences, Inc. Immunoassay including lyophilized reactant mixture
US5460944A (en) * 1991-10-28 1995-10-24 Boehringer Mannheim Gmbh Storable protein solution
KR100375159B1 (ko) * 2000-05-16 2003-03-08 김일한 팔미토일 보효소 a를 이용한 포유동물의 혈청알부민의 과산화효소 활성을 증가시키는 방법
EP1865054B1 (en) * 2006-06-09 2010-10-06 Roche Diagnostics GmbH Inhibition of peroxidase enzymatic activity
ATE483799T1 (de) * 2006-06-09 2010-10-15 Hoffmann La Roche Hemmung der enzymatischen peroxidaseaktivität

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4378429A (en) * 1979-08-23 1983-03-29 Modrovich Ivan Endre Enzymatic method and stabilized solutions for determining total cholesterol in human serum
EP0024578B1 (en) * 1979-08-23 1983-12-07 Ivan Endre Modrovich Method of stabilizing an enzyme solution for use in total cholesterol determination, stabilized solution and test kit therefor
US4252896A (en) * 1980-01-07 1981-02-24 Abbott Laboratories Method of stabilizing peroxidase in a serum protein based medium

Also Published As

Publication number Publication date
EP0070992B1 (de) 1985-01-09
EP0070992A1 (de) 1983-02-09
FI822224A0 (fi) 1982-06-21
DE3261832D1 (en) 1985-02-21
NO822609L (no) 1983-01-31
FI71170C (fi) 1986-11-24
DK337482A (da) 1983-01-31
NO163745C (no) 1990-07-11
FI822224L (fi) 1983-01-31
DK155953B (da) 1989-06-05
JPS5823786A (ja) 1983-02-12
US4448882A (en) 1984-05-15
DK155953C (da) 1989-12-18
JPS6054039B2 (ja) 1985-11-28
CA1186990A (en) 1985-05-14
NO163745B (no) 1990-04-02
AU8552682A (en) 1983-02-03
AU537173B2 (en) 1984-06-14
ATE11152T1 (de) 1985-01-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
FI71170B (fi) Foerfarande foer stabilisering av peroxidas till vilket ett imunologiskt aktivt aemne kopplats i ett medium innehaollan deerum eller serumprotein
US8753858B2 (en) Reagents and processes for stabilizing alkaline phosphatase or conjugates thereof
Melbye et al. Leucine aminopeptidase (bovine lens): stability and size of subunits
US4515890A (en) Immunoassay of terminal deoxynucleotidyl transferase
US4252896A (en) Method of stabilizing peroxidase in a serum protein based medium
Chhabra et al. A comparative study of two procedures used in the determination of hepatic microsomal aniline hydroxylation
Perata et al. Immunological detection of acetaldehyde-protein adducts in ethanol-treated carrot cells
US4504579A (en) Stabilized peroxidase compositions
US4764468A (en) Process for stabilizing the activity of peroxidase in solution
Gould et al. Involvement of sulfhydryl groups in the activity of anti-A hemagglutinins of Phaseolus lunatus
US4757016A (en) Process for stabilizing the activity of peroxidase in solution
Weidman et al. Purification and characterization of proteoliaisin, a coordinating protein in fertilization envelope assembly.
AU640090B2 (en) Storable protein solution
RU2142136C1 (ru) СТАБИЛИЗИРУЮЩАЯ СРЕДА ДЛЯ α-GST В МОЧЕ И СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОЛИЧЕСТВА α-GST В МОЧЕ
Pohorecky et al. Purification and properties of rat adrenal phenylethanolamine-N-methyl transferase
JP4039590B2 (ja) ヘモグロビン試料の安定化
US4500514A (en) Process for preparing a heat-stable aqueous solution of human urine kallikrein and product prepared
Brock et al. Enzyme immunoassay of human cholinesterase (EC 3.1. 1.8) comparison of immunoreactive substance concentration with catalytic activity concentration in randomly selected serum samples from healthy individuals
JPS6178385A (ja) 安定なペルオキシダ−ゼ組成物
Place et al. A colorimetric immunoassay based on an enzyme inhibitor method
Bernstein et al. Origin of mitochondrial enzymes. V. The polypeptide character and the biosynthesis of rat liver cytochrome c oxidase polypeptides by mitochondria
Tsudzuki Studies on the uptake of [3H] dopamine by synaptic vesicle fraction isolated from bovine brain
US4724203A (en) Caproylamidobiotinylated peroxidase
AIHARA et al. Immunocytochemical and enzyme-cytochemical localization of intestinal alkaline phosphatase of rats
JP3188974B2 (ja) ミエロペルオキシダーゼの抗原性を安定化する方法

Legal Events

Date Code Title Description
MM Patent lapsed
MM Patent lapsed

Owner name: F. HOFFMANN-LA ROCHE AG