JPS58201719A - 生物学的に活性な多糖類コンセントレ−ト及びその物質を含む組成物の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は特に抗炎症性を有する生物学的に活性な多糖類
コンセントレート及びそのような物質を含む治療学的も
しくは化粧剤組成物並びにその製造方法に関する。多糖
類コンセントレートは本発明の方法によって植物起源の
□出発原料から入手可能である。

本発明の実施において多糖類は所望により、グリコシド
もしくはエーテル結合によるフラノースもしくはピラノ
ース構造の単糖類の単位からできた活性な複合多糖類で
あシ、それらの塩基性もしくは酸性のものは特定の環境
下でタン／４’り質及び／又はペプチドと結合すること
ができるように作用する（ペプチド多糖類又は糖タン・
母り質）。本発明の実施において抗炎症活性はカラグエ
ナンのねずみの足の浮腫テストによって示され、又はそ
れによって除外されない可能性のあるすべての活性を包
含する。ねずみの足の浮腫テストによって活性であると
立証された抗炎症剤は抗リウマチ薬、あるいは外部使用
のためにクリーム、ゼリー、溶液の形をした抗潰瘍剤、
又は生物活性の化粧剤であってよい。

現在薬剤に使用される合成起源の抗炎症剤は一方では多
くの耐性の問題、例えばそれらがしばしハホルモン活性
を働かせること、があるステロイドからなり、有機体に
おいてナトリウムイオンを保持し、萎縮を引き起す。他
力非ステロイドの炎症抑制剤の使用はまたその副効果の
友め制限されている。これらの副効果は一般にインドメ
タシン及びアセチルサリシレートに付着して、有機体の
耐性を減少し、胃腸のトラブル、内出血、潰瘍を生ずる
。これらの有毒な逆効果のために天然起源の抗炎症剤を
研究することは有益であると思われた。研究の増加する
激烈さは組織酸素の放出の問題、例えば心臓発作及び他
の組織循環問題並びにシ冒、り状態、の処理に対する抗
炎症剤のまた拡張された使用によって一層刺激されてい
る。多数の薬用植物及びそれから製造された組成物は抗
炎症剤物質の存在を必要とする分野において薬剤及び化
粧剤に使用されている。活性を有する種々の薬剤及びそ
れらから製造された組成物の成分の構造は大部分Ｆｉま
だ明らかにされていない。例えｄカモミレフロス（Ｃｈ
ａｍｏｍｉｌｌａ＠ｆｌｏｗ）　　は種々の病気　−を
治すために薬剤、混合薬剤、留出物（揮発油）の形で広
く使用されている。カモミレの薬物生活性が抗炎症性の
ものであシ、平滑筋において活性のあることが推測され
、一部立証されている。

（Ｆ、　Ａｕ＋５ｔｅｒ　：　Ｊ、　５ｃｈａｆｓｒ　
：　Ａｒｚｎ＊１ｐｆｌａｎｚ＠ｎ　１５．１９゜２１
、　Ｌｌａｆ＠ｒｕｎｇ＠ｎ　：　Ｗ、　５ｐａｉｃｈ
　：　Ｍｏｄａｒｎｅ　ｐｈｙｔｏｔｅｒａｐｉｅ。

Ｈａｕｇｅ　Ｖｓｒｌａｇ　１９７８．）　　カモミレ
の多方面の薬剤及び化粧剤の応用はまず第一に皮膚及び
粘膜の炎症過程の処理に適応される計その処理はクリー
ム、浴、吸入、薬剤、ある場合には水による抽出物又は
化粧剤の中へ混入された活性物質によって行なわれる。

内的な使用のためにそれは消化路のカタル及びけいれん
性の病気、潰瘍性退化又は粘膜の亀裂に対して薬剤の形
で使用される。今日までの研究の結果としてカモミレの
抗炎症活性はｌｊ　／イド状テルペン類（アズレン、α
−ビス７ｙｔ”ロレ、ビスアがロレオキシド、Ｏ，ｌ５
ｏａｋ：　Ｐｌａｎｔａ　Ｍ＠ｄ。

３５．１１８．／１９７９／）に帰する。活性キャリヤ
ーの抗炎症効果を測定することによりてそれらのＥＤ５
ｏ値が１４６５〜ａ１ｓ＋ＩＲ９／＃の間にあることが
わかった。しかしながら薬剤又はその組成物中の活性物
質の有効濃度と活性物質に帰され皮製薬学的な効果との
間には重大な差がある。（Ｖ＊ｒｚａｒｎ＊。

Ｐｅｔｒｉ　Ｇ、　：　Ｍａｒｃｚａｌ　Ｊ、’　：　
Ｈｅｒｂａ　Ｈｕｎｇ、　１５　（２）　６９　。

／１９７６／）　　もし指定された活性キャリャーリポ
イド状化合物が水に貧溶であるならば、いかにしてそれ
らが水性薬剤の最も重要な活性成分であることができる
かという問題を起こす。多数の薬剤又は非薬用植物が知
られているが、それから抗炎症性成分を分離する試みは
不成功であった。そのようなものはアオイ属、菩提柑橘
、オオバコ、リニウムウシチタシマム（Ｌｉｎｕｍ　ｕ
ｓｉｔｉｔａｓｓｉｍｕｍ）、コロハ種子、シトニア　
オブロンガラ（Ｃｙｄｏｎｌａｏｂｌｏｎｇａｒａ）で
ある。本発明の目的は容易に分離することができ、かつ
梨物学的なもしくは化粧剤の組成物の製造用に使用され
てもよい、既に研究された又は薬剤として使用されない
植物からの生物学的に活性で主に抗炎症性の物質群の分
離であって、それは現在使用されている合成化合物に匹
敵できる抗炎症活性を示し、同時にずっと低い毒性を有
する。本発明によれば生物学的に活性な物質は次の属：
ウリ科、醐蝶花亜科、シナツキ科、クチビルパナ科、ア
オイ科、アステラセアエ（Ａａ、ｔｅｒａｃａａｅ）、
カラカサノ々す科、マツカゼンウ科、アカザ科、イバラ
科及びオオバコ科に属する植物を処理することによって
得ることができる。前記属からカモミレ　フロス（（：
１１６ｍ（Ｈｌｌｉｌｌａｅ　ｆｌｏｓ）、チリアエ　
フロス（Ｔｉｌｉａｅ　ｆｌｏｓ）、アルサエア　ラデ
ィクス（Ａｌｔｈａｅａ　ｒａｄｌｘ）、マルパエフォ
リウムエト　フロス（Ｍａｌｖａｅ　ｆｏｌｌｕｍ　ｅ
ｔ　ｆｌｏａ）、マルパエ　アルボラエアヘル／４　（
Ｍａｌｖａｅ　ａｒｂｏｒａｅａ　ｈｅｒｂａ）、プラ
ンクギ＝−ス　７＃リウム（Ｐｌａｎｔａｇｉｎｉｓ　
ｆｏｌｉｕｍ）、シルリ一種（Ｐｓｙｌｌｉｉｓｅｍｅ
ｎ）、シドニアエ種（Ｃｙｄｏｎｉａｅ　ｓｅｍｅｎ）
、リニ種（Ｌｉｎｉ　ｗｏｍｅｎ）、）リゴネラ　フォ
エニーグラエシ種（Ｔｒｉｇｏｎｅｌｌａ　ｆｏｅｎｉ
−ｇｒａｅｃｌ　ｓｅｍｅｎ）、ククルビタエ　マキシ
マエ　フルクタス（Ｃｕｃｕｒｂｉｔａｅ　ｍａｘｉｍ
ａｅ　ｆｒｕｃｔｕｓ）、キタイベラ　ビチフォリアエ
　ヘルバ（Ｋｉｔａｉｂａｌａｖｉｔｉｆｏｌｉａｅ　
ｈｅｒｂａ）、ダウクス　カロックエ　ラディｙクス（
Ｄａｕａｕａ　ｃａｒｏｔｔａａ　ｒａｄｉｘ）、ベー
タ　ブルガリス　コンハリエタス　コンディチパエ　ラ
ディックス（Ｂｅｔａｖｕｌｇａｒｉｓ　ｅｏｎｖａｒ
ｉｅｔａａ　ｃｏｎｄｉｔｉｖａｅ　ｒａｄｔｘ）又は
それらの混合が好ましい。

重要な抗炎症活性・を有する多糖類の留分は通常の抽出
環境とは異なった環境下で列挙した植物の出発原料から
、゛また新鮮で再水和された乾燥薬剤からも同様に分離
することができる。抽出は周囲温度において少量の水と
共に行なわれる。付随的に沈澱及びその後の精製によっ
て得られたこの多糖類留分は製薬学的もしくは化粧剤組
成物中へ混入されるコンセントレートへ変換することが
できる。

本発明による植物起源の多糖類は以下のことによって特
徴づけることができる。

ＩＬ、７５０００〜２００００００の分子量を有するこ
と、 ｂ、最大５−の窒素（ワグナー−パーネスミクローケル
ダール法）、 ｃ、　　Ｐ２Ｏ５で表わされた最大５チの燐（モリブデ
ンば塩−アイコノシン試薬）、 ｄ、最小３０チの還元糖（０−トルイジンによって測定
される酸性加水分解後）、 ｅ、最小６０．チの全糖（フェノール−硫酸法によって
測定されグルコースとして表わされる）、ｆ、最大２５
チの灰分、を含むこと、 ｇ、５ｅｐｈａｄｅｘ　Ｇ　−７５のモレキュラーシー
ブで充填されたカラムにおいて分析した場合、７５００
０より低い分子量を有するいかなる物質も実質的に存在
しないこと、 ｈ、酸性加水分解後、それらはグルコース、ガラクトー
ス、キシロース、ラムノース、アラビノース及びウロン
酸からなる群から選ばれた員になること、但し゛それら
は少なくとも２種の前記員を含むこと、 ｉ、ねずみの足のカラグエナン浮腫テストによって検討
された場合、それらはフェニルブタシンもしくはインド
メタシンと同じオーダーの抗炎症活性を示すこと、 ｊ、経口的はつかねずみにおけるＬＤ５ｏ値は３０００
ｍ？Ａ９より大きいか又はねずみにおいては２０００１
ｇよシ大きいこと。

ククルビタマキシマエ　フラクタスーから抽出された多
糖類は次の特性：　３０００００よシ大きい分子量、９
素含有量最大３％、燐含有量（Ｐ２Ｏ５として表現）最
大５％、灰分含有量最大２０％、還元糖含有ｉ最小３０
％、全糖含有量最小６０チ、酸性加水分解後主にグルコ
ース、ガラクトース及びウロン酸に分解すること、ねず
みの足のカラグエナン浮肛テストにおいてｉ　ｏ　ｍ９
Ａｃｇ　　投与量でのその抗炎症活性は少なくとも５０
％であること、を有する。

同様に好ましいものはコロハ種子からの多糖類であシ、
それは１０００００より大きい分子量を有し、その箒累
含有量は最大３％であり、燐含有量は最大４ｑ６（Ｐ２
Ｏ３として表現）、灰分含有量は最大５％、還元糖含有
量は最小５０チ、全糖含有量は最小７０％（酸性加水分
解後グルコースとして表現）であり、それは主にガラク
トースとマンノースに分解し、ねずみの足のカラグエナ
ン浮肚テストにおける１　０ｍ９Ａｇ　　投与量での抗
炎症活性は少なくとも４０ｑ６である。本発明による多
糖類コンセントレートは、新たに収集されもしくは乾燥
され又は先に有機溶剤で処理された薬種が、０〜４０℃
の温度で、先の砕解の袂もしくは水による砕解と同時に
有利に、１〜２４時間の間処理される方法によって得ら
れ、固形分は分解され、そして水性相に存在するタンパ
ク質の沈殿後、多糖類コンセントレートは１〜３個の炭
素原子を有するアルコール、もしくはアセトン、又は１
〜３価のカチオンを添加することによって沈殿し、その
沈殿物は水性相から分離しさらに所望により精製する。

その水性抽出は薬剤の量に関連して１〜２０倍の水の量
で行なわれる。新らしい植物又は乾燥し水で処理された
植物は随時粉砕又は砕解され、そのひき割りをその後プ
レスし、残りを水で再度処理し次いで再度プレスする。

多糖類コンセントレートはメタノール又はエタノールを
添加することによって有利に水溶液から沈殿し、次いで
それを水の中に再度溶解しかつそれを１〜３個の炭素原
子を有するアルコールで沈殿及び／又は抽出することに
よって精製される。水溶液中に存在するタンパク質留分
を分離するために、それを４０〜８０℃まで加熱する。

薬剤を水性媒体において砕解することは好ましいことで
ある。乾燥した薬剤を使用する場合には、乾式又は湿式
の砕解が適用可能である。例えば粗く粉砕された根の場
合には水性抽出は砕解なしで行なうことができる。水性
抽出は約＋４℃の温度で冷却することによって達せられ
るが、しかしある場合には３０℃以王の温度が有益であ
る。出発原料は湿式で粉砕され、次いで繰り返して低も
しくは高圧でプレスされ、そのプレスされた材料は随時
水で再度処理されるので、連続的な処理が好ましい。プ
レスされもしくは抽出され及びプレスによって分離され
た汁は所望の最終生成物である多糖類留分を含む。コン
セントレートは１〜３個の炭素原子を有するアルコール
もしくはアセトン、又は１〜３価のカチオンの使用によ
って水性媒体から沈殿する。沈殿のための個々の方法は
お互いに組み合わせることができる。得ることができる
多糖類コンセントレートの重量は出発原料の乾燥物質含
有量に関連して０．１〜１０重量％である。

さらに加工処理することができることは、粉砕された植
物材料のその重さの１〜２０倍の水の量による抽出、６
０℃での抽出物の熱処理ミ遠心分離もしくは濾過による
熱処理された抽出物の精製、多糖類のその容積の２〜３
倍のアルコールによる溶液からの沈殿、並びに２４時間
放置させた後遠心分離もしくは濾過による母液からの沈
殿物の分離及びそれをアルコールで洗浄すること、であ
る。

沈殿された生の多糖類コンセントレートの精製はその重
量の１０倍の量の水にその湿潤材料を溶解し、それを７
５℃まで加熱し、その沈着した材料を蓮心分離によって
分離し、かつその上澄みをその容積の３倍のアルコール
と共に混合することによって達成される。２４時間静止
後沈着した固体は遠心分離及び濾過によって分離され、
アルコールで洗浄され、そして最高４０℃で減圧乾燥さ
れる。

さらに精製はその乾燥生成物を３０〜４０倍の重量の水
に５０〜７５℃で溶解し、それを遠心分離によって澄ま
せ、さらに７５０００より小さい分子量の物質を通すよ
うな膜を通して３〜１０ａｔｍの圧力でそれを濾過し、
次いで多糖類をこの大きな分子量側の膜の上に残った溶
液からアルコールによって沈殿させることによって達成
することができる。その多糖類はアセトンによる水溶液
からの沈殿物でも同様である。

本発明による抗炎症性組成物は製薬学的に満足な成分又
はキャリヤーと共に、前記プロセスによって分離された
多糖類及びある場合には非ステロイド系抗炎症剤、特に
インドメタシン又はアセチルサリチル酸、を含んでなる
。製薬学的な組成物は経口的に又は非経口的に与えるの
に適当である。

その形態に関してそれは錠剤、糖剤、カプセル剤、冷浸
剤、乳剤、注射薬、水薬、生薬、移植剤、又は外的に適
用可能な水薬、粘漿剤、乳脂、軟こうもしくはゼリーで
あってよい。抗炎症性組成物は製薬学的もしくは化粧剤
の目的に対して適当なものであり、前記多糖類コンセン
トレートを製薬学的もしくは化粧剤組成物の製造に通常
的な成分及び／又はキャリヤと共に混合し、かつこれに
よりて既知の方法で炎症抑制の組成物を調製することに
よって製造される。

本発明により製造された多糖類コンセントレートの抗炎
症活性はウィンターらによるねずみの足のカラグエナン
浮腫テストにおいて研究された（Ｐｒｏｃ、　Ｓｏａ、
　Ｅｘｐ、　Ｂｉｏｌ、　Ｍａｄ、　１１１．５４４．
／１９６２／）。

そのコンセントレートは重要な特定の活性を有し有利な
抗炎症活性と関連して、それは著しく低い毒性を有する
。標準として使用されたフェニルブタシンの１００ｍ９
７に９の投与量の４５チ抑制に比較して、同じ投与量に
おける本発明によるコンセントレートは７０〜８０％の
抑制を示す。同じような有利な効果はインドメタシンと
比較しても示される。

生物学的活性は多糖類コンセントレートを水中に０，５
チ濃度で溶解させることによって簡単に示すことができ
る。得られた溶液はのどの含轍、口の含漱（咽頭炎、歯
肉炎）、眼の水洗（結膜炎）、外耳道の炎症における水
°洗、及び湿らした〃−ゼの適用による湿布に対して適
当である。多糖類からつくられた腰部体温は肛門裂癒、
痔結節、膣炎、外陰部膣炎、乳房裂の処理に対して、ま
た皮膚炎に対する湿布として有益である。

本発明による多糖類の分離及び製薬学的な活性は次の例
によって説明される。

ｔ」 ４００　ｍｌの水を有する２００ｐの新鮮なカモミレフ
ロスを湿式砕解によって均質化し、次いで２０℃で２０
時間静止せしめた。水性相を遠心分離によって分離し、
残る固形分を濾過によって除去した。１００ｍ／のメタ
ノールを後に連続攪拌の間、水性抽出物に与え、沈殿さ
れた固形分を濾過し、メタノールで洗浄し、乾燥して、
それによって０．３Ｐの多糖類コンセントレートを得た
。もしメタノールの代９に１０００ＷＬｌのエタノール
が使用された場合、得られた生成物は０．３．２　Ｆの
コンセントレートであった。

１ ２００Ｆの乾燥カモミレ７０スを１０００１１１７の水
と共に砕解し、次いで２０℃で２時間保持した。

水性部分を遠心分離と論過によって精製し、次いで２５
００ｍＡ’のメタノールを添加し、その沈゛着した固形
分ｔ−濾過した。沈殿物をメタノールで洗浄し、２．１
２ｐの多糖類を得た。

例３ ２００Ｆの新鮮なカモミレフロスを粉砕し、その穀物を
プレスした。残りを２０℃で１時間２００−の水で処理
し、再度プレスした。−緒にした水性相を濾過し、次い
で６００−のメタノールを攪拌しながら添加した。沈殿
した固形分を濾過し、メタノールで洗浄し乾燥した。０
．２６Ｆの多糖類を得た。

例４　　　　・ 手順は２５００ｄのメタノールの代９に２０００−のア
セトンを水性抽出物に添加したという違いを除いて、例
３と同じである。沈殿した固形分を濾過し、アセトンで
洗浄して乾燥した。収量は２．４３Ｆの多糖類コンセン
トレートでありた。

例５． ２００Ｆの乾燥チリアエ　７０スを１５００−の水と共
に砕解し、次いで２０℃で３時間保持した。

ｐ過後水性抽出物を例１に従って処理し、１．８６ノの
多糖類を得た。　　　　　　　　　　ｙＬ下余白例６ ２００ｐの新鮮衣カモミレ７０スを例３に従って加工処
理した。収量は０．６２ｊｌの多糖類コンセントレート
であった。

例７ ２０００ｊｌの乾燥チリアエフロスを粉砕し、ひき割シ
を２０℃で２４時間６０％メタノール５００（１＋Ａ！
で処理した。固形材料をプレス及び濾過によって分離し
た。乾燥を周囲温度で行なった。

２８）の水をその乾燥材料に添加し、次いでそれを２０
℃で２４時間攪拌し、次いで水性相を遠心分離によって
分離した。５６ノのエタノールを攪拌しながら水性相に
添加し、沈殿した固形分を濾過し、エタノールで洗浄し
乾燥した。４７．１８５１の多糖類コンセントレートを
このようにして得て、それを５００ｄの水に溶解し、そ
れを１０１００Ｏのメタノールで沈殿させることによっ
て精製した。

精製した多糖類コンセントレー１３２．６４ｊｌ。

重量であった。　　　　　　　　　　　　　以下余白−
烈」− ７，８Ｆの新鮮なシドニアエ種を＋４℃で２４時間５０
ＩＩＩｌの水に浸軟させた。次いでそれを濾過し、１０
０ｍＪのメタノールを攪拌下で水性相に添加し、沈殿し
た固形分をｐ遇し、メタノールで洗浄し乾燥した。収率
は２．４２の多糖類コンセントレートであった。

例９ ２００ノの乾燥リニ種を＋３６℃で２時間５００ｍ１の
水によって抽出した。濾過後１０００ｍ／のメタノール
を水性抽出物に添加し、沈殿した固形分を濾過し、メタ
ノールで洗浄しＪ乾燥した。収量１１６．７９５ｍの多
糖類コンセントレートであった。

例１０ ２００ｊｌの新鮮なアルテアエ　ラディックスを粗く切
り、＋２０℃で４時間４００１／の水で処理した。

水性相を遠心分離によって分離し、次いで攪拌下で８０
０ｍＡ！のエタノールをそれに添加し、沈殿した固体を
濾過し、エタノールで洗浄し乾燥した。

０．３４９の多糖類コンセントレートを得た。

例１１ ３２ゆの新鮮なキタイペラ　ビチフォリアエ　ヘルパを
３０ノの水の存在で砕解し、次いで２３０ａｔｍの圧力
でプレスした。５０ノのプレス汁を得、それを７５℃ま
で加熱し、沈殿したタンパク質を遠心分離によって除去
した。上澄みを減圧下で２ノに濃縮し、１４ノのメタノ
ールを攪拌下でそのコンセントレートに添加し、そして
その混合物を２４時間静止せしめた。次いで沈殿生成物
を遠心分離によって分離し、メタノールで洗浄し、６０
℃で乾燥した。８７．ＯＦの多糖類コンセントレートを
得た。

例１２ １−のトリゴネラ　フォニーグラエシ種を２誌の篩イン
サートを備えたハンマーミルによって砕解し、次いで粉
砕された材料を＋２３℃で６時間８，７ノの水で攪拌し
た。次いで水性抽出物を遠心分離で分離し、得られた５
ノの溶液を７２℃まで加熱し、沈殿したタンパク質を濾
過によって除去した。次いで５ノのｎ−プロパツールを
攪拌下で濾過された汁に添加し、次いでそれを１３時間
静止させて後で遠心分離した。沈殿物を０．５ノのプロ
パツールと混合し、水性媒体中に砕解し、次いで再度遠
心分離した。次いで沈殿物を減圧下の４５℃で乾燥した
。収量は５０．０ｊｌの多糖類コンセントレートであっ
た。

例１３ １　ｋｇのククルビタ　マキシマエ　フラクタスをその
表皮及び種子から取り除き、２０℃で１．５ノの水と混
合し、ディスインチグレーターでつきつぶし、次いで油
圧プレスにおいて１３０　ａｔｍでプレスした。

プレス汁をに−５５ｓｉｔｚ　フィルターを通して濾過
した。１５０ｏ＊／のＰ液を得、次いでそれを減圧下４
０℃で４０％の乾燥物質含有量まで濃縮した。

３００ｍ／の９６％濃度のエタノールを攪拌下で１４０
ｍＪのコンセントレートに添加した。次いでその沈殿物
含有混合物を室温で１２時間静止させた。沈殿物を遠心
分離によって分離し、次いで１００ｍ／の９６チ練度の
エタノールと共にすりつぶし、濾過し減圧下で乾燥し、
３．ＯＦの多糖類コンセントレートを得た。

碧」工 ２００Ｐ（７）乾燥マルパエ　フォリウムを１ノの水で
抽出した。水性抽出物を２時間静止させ、次いでその水
性相をプレスしそのプレス汁を遠心分離し濾過すること
によって分離した。２ノのメタイールを攪拌下で清澄彦
水性抽出物に添加し、沈殿した固形分を濾過し、メタノ
ールで洗浄した。収１ｔＧ−１２，１＋多糖類コンセン
トレートであった。もし出発原料として乾燥マルパエ　
フォリウムの代りに同値の乾燥しすりつぶしたマルバエ
フロスを使用した場合、３．５９の多糖類コンセントレ
ートを得た。

また同じ方法で２００２の乾燥しすりつぶしたマルパエ
　アルカラエ　ヘルハカラ出発シテ、１．ＯＦの多糖類
コンセントレートを得た。

例１５ ２００Ｆの乾燥しすシつぶしたプランタギニスフォリウ
ム　を例１４に従って加工処理し、０．５５１の多糖類
コンセントレートを得た。

例１６ ２００Ｆの乾燥クルリ種を５０（ＩＡ！の水で抽出し、
さらに例１４に従って加工処理した。１０．ＯＦ）多糖
類コンセントレートを得た。

例１７ ２００Ｆの乾燥テリアエ　フロスを例５に従って抽出し
、３０ノのＢａ（ＯＨ）ｚを清浄々水性抽出物に添加し
た。堆積した沈殿物を濾過し、アルコール及び硫酸ナト
リウム水溶液で洗浄した。２．３Ｆの多糖類コンセント
レートを得た。

Ｂａ（ＯＨ）２の代りに４５５１の（ＮＨ４）２ＳＯ４
を添加したのを除いて、上記例を繰９返した。沈殿物を
濾過しアルコールで洗浄した。収量は２．ＯＦの多糖類
コンセントレートであった。

例１８ ２００Ｆの乾燥しすりつぶしたマルバエフ０スと２００
９の乾燥しす９つぶしたシルリ種の混合物を２ノの水で
抽出し、さらに例１４に従って加工処理した。２．７Ｆ
の多糖類コンセントレートを得た。

旦」且 １５％の乾燥物質、４チの還元糖及び５チの非還元糖、
並びに３チの多糖類を含んだ１０ｋ１９のククルビタ　
マキシマエ　フラクタスを二等分し、その種子を除去し
た。出発原料をディスインチグレーターによって粗・９
ルプにすりつぶし、次いで１０ノの水と混合した。混合
物を攪拌下で３５℃まで加熱し、１時間攪拌し、その後
６時間放置し、それをフロスして、１２ノのプレス汁を
得た。残りの方を１０ノの水中に懸濁させ、１時間攪拌
し、次いでプレスし、さらにもう一つの１２ノのプレス
汁を得た。

２つの汁を一緒にして、攪拌下で６０℃まで加熱し、次
いで遠心分離し、タンパク質沈殿物を廃棄した。遠心分
離された溶液を５ｅｌｔｚ　Ｋ　−５フィルターを通し
て濾過し、固形分を廃棄した。透明な溶液を６０℃の温
度で減圧下で１０〜２０％の乾燥物質含有量まで濃縮し
た。次いで室温に冷却されたコンセントレートを遠心分
離し、沈殿物を廃棄した。次いで強力攪拌下で上澄み液
にその容積の３倍のメタノールを添加し、沈殿物との混
合物を室温で２４時間静止させた。上澄みをデカントし
廃棄した。次いで沈殿性の溶液を遠心分離し、沈殿物を
５００ｍ７！のメタノール中で砕解し、再度遠心分離し
た。遠心分離によって得られた沈殿物をさらに２回メタ
ノールで洗浄した。沈殿物の３回目の砕解の後、沈殿物
を含む溶液を真空フィルターに移し、母液を濾過した。

湿ったフィルターケークは白色沈殿物であった。これを
その重量の１０倍の蒸留水において砕解し、その溶液を
７５℃まで加熱し、保温しながら遠心分離した。次いで
その容積の３倍の量のメタノールを攪拌下でその精製さ
れた溶液に添加し、室温で２４時間放置させた。後でそ
れを遠心分離し、得られた沈殿物を３００１ｒＬｌのメ
タノール中に砕解し、再度遠心分離し喪。次いでメタノ
ールでの洗浄及び砕解をさらに二度繰９返し、三度目の
精製操作の後沈殿物を真空フィルター上で濾過し、その
濾過された堆積物を４０℃で真空乾燥した。収量は２１
．１５１の白色粉末状の多糖類コンセントレートであっ
た。

さらに精製のためにその多糖類を５０℃で６００ｍ１の
蒸留水中に溶解し、１時間放置し、次いで遠心分離した
。その上澄みを７５０００よりも高い分子量を有する物
質を保持した膜フィルターにおいて、５　ａｔｍの圧力
で濾過した（Ｄｉａｆｌｏ　ＸＭ３００　。

Ａｍ１ａｏｎ　Ｃｏ・ＵＳＡ）。高分子量側の膜上に残
った溶液を蒸留水でその容積の３倍まで稀釈し、次いで
再度膜を通してプレスした。最後に高分子量側の膜上に
残った溶液を遠心分離し、その容積の３倍のメタノール
を攪拌下でその上澄みに添加した。

次いでそれを室温で２４時間放置した。沈殿した固形分
を真空フィルターにおいてい過し、４０℃で減圧乾燥し
た。精製された多糖類の重量は１３．２２であった。

週」１ １０−のトリゴネラ　フォニーグラエシ種を３ｍの篩イ
ンサートを備えたハンマーミル中で粉砕した。

４０ノの水を３５℃でそのひき割９に添加し、それを６
時間攪拌し、次いで固形分をセパレーターによって除去
した。次いで抽出を３時間攪拌することによって３５℃
で３０ノの水で繰返した。−緒にした水性抽出物を６０
℃まで加熱し、次いで遠心分離及び濾過によって精製し
た。その容積の２倍の９６％濃度のエタノールを強力攪
拌下で水性相に添加した。次いでそれをさらに例１９に
従って加工処理し、１８０Ｐの多糖類コンセントレート
を得た。酸性の加水分解の後ガラクトース及びマンノー
スを検出した。

例１〜２０に従った多糖類コンセントレートをＳ　ｅｐ
ｈａｄｅｘ　Ｇ　−７５モレキネラーシープで充填され
たカラムに通過させ、分析した。

分析データは次のとおりであるニ ー　分子量：　７５０００〜２００００００−　それら
は最大５％の窒素及びＰ２Ｏ５で表わして５ｑ６の燐を
含む。

−　それらは最大２５チの灰分を含む。

−それらはグルコースで表わして最小６０％の全糖及び
全糖の中で最小３０％の還元糖を含む。

−ｙ性の加水分解後それらはグルコース、ガラクトース
、キシロース、ラムノース、アラビノース及びウロン酸
からなる群から選ばれた負であって少なくとも２つの員
又はそれらの混合物を含む。

−ねずみの足のカラグエナン浮腫テストによって試験し
たところそれらはインドメタシン又はフェニルブタシン
とほぼ同じオーダーの抗炎症活性をふるう。

−経口によるねずみにおけるそれらのＬＤ５゜は３００
０ｒｎ９Ａｇより大きい。

使用された分析方法： 燐含有量：　Ｐａａａ−Ｔｒａｃｅｙ　：　Ｍｏｄｅｒ
ｎｅ　Ｍｅｔｈｏｄａｎ　ｄｅｒＰｆｌａｎｚｅｎａｎ
ａｌｙｓｅ　Ｖｏｌｕｍｅ　ＩＶ、ｐ、　３０８゜還元
糖含有量：　Ｒ，ＲｌａｈｔａｒｉＣｈ　：　Ｋｌｉｎ
ｉｓｅｈｅＣｈｓｍｌｅ　１９６８　＊　ｐ、２３３　
＋　Ｃａｒｇｅｒ　Ｅｄ、　Ｂａｓｅｌ−ＮｅｗＹｏｒ
ｋ 全糖含有量：　Ｍ、　Ｄｕｂｏｉｓ　：　Ａｎａｌ、　
Ｃｈ＠ｍ、　２８　。

ｐ、３５，１９５６゜ 男」ユ 抗炎症性生薬を例１９に従って精製された多糖類コンセ
ントレートから調製する。それを１〜５ミクロンの間の
粒度まで超微粉砕した。次いで０．５Ｆの超微粉砕され
た多糖類を４０℃で成形された、５”−３（ｌのＢｕｔ
ｌｒｕｍ　ｃａｃａｏを含むＡｄｅｐｓｓｏｌｉｄｕｓ
　（ラノリン）からなった３Ｐの生薬の中へ混合させた
（Ｐｈａｒｍａａｏｐｅａ　Ｈｕｎｇａｒｉｃａ　ＶＩ
　、　Ｅｄ、■。

Ｔｏｍ・１・）・ あ」ヱ 外的に適用可能彦ゼリーをＩＮの水酸化ナトリウムによ
ってｐｉｌ　７．０まで調整された３チの水性カルｚｙ
ｓ−ル９３４溶液及び例１９に従った３％の多糖類コン
セントレートから調製した。後者は使用前に水性相中に
溶解された。そのゼリーは０．５チのソルビン酸又は０
．１％の二Ａ？ギンによって保護された。

例２３ 軟こうを例２０に従った保護剤を用いて調製した。両者
を水中５チ磯度で溶解し、その溶液を１０００Ｆの乳剤
状こう（組成２１００Ｆのカルボキシエタン−ステアレ
ート、１００Ｆのパラフイン、３００Ｆのセチルアルコ
ール−ステアレート、５００Ｆの白色ワセリン）と１：
１の比で混合し、均質化した。

例２４ 経口的な製薬学的サスベンジ冒ンを１００Ｐの水に溶解
された例２０に、従った５Ｆの精製多糖類を用いて調製
した。０．１２５１のソルビン酸、２．８Ｆの酸化マグ
ネシウム、８Ｐの水酸化アルミニウム、６０２のメチル
セルロース−ヒドロゲル及び２０ｊｌｌのソルビットを
添加し、その混合物を蒸留水で２００Ｆまで満たした。

例２５ 経口的用途のための錠剤を次の組成： ６０部のラクトース １６部のスクロース ２０部のジャガイモデンゾン ２部のメルク ２部のステ□アリン酸マグネシウム を有する粒状単体で共に錠剤にプレスされた例１９に従
った０、２５５１の多糖類コンセントレートを用いて調
製・した。本発明に従った多糖類コンセントレートの抗
炎症活性をねずみの足のカラグエナン浮腫テストにより
ねずみについて腹腔内的に研究した。同時に多糖類コン
セントレートのＬＤ５ｏ値（１，ｐ、）を測定した。

カモミレ　フロス、新鮮（例１）　　　　５０　７４．
１　　）１５００カモミレ　フロス、乾燥（例２）　　
　１００　７１．７　　）１５００テイリアエ　フロス
、乾燥（例７）　　１００　　８０．３　　）１０００
７啓フｒイックス、新鮮（例１０）　１００　５４．２
　　）１５００シドニア工種、新鮮（例８）　　　　１
００　５２．５　　）１α力す二種、乾燥（例９）　　
　　　　１００　４３．８　　）１０００フエニルブタ
シン　　　　　　　　　１００　　４５．０　　　２１
５調製された多糖類コンセントレートの抗炎症活性を同
様にねずみの足のカラグエナン浮腫テストを用いてイン
ドメタシンと比較して測定した。多糖類試料を炎症を誘
発するカラグエナンの１、時間前に腹腔内的に注射した
。基準として１チメチルセルロース溶液中に懸濁された
経口的に適用されるインドメタシンを使・用し、カラグ
エナンのＣＦＹねずみ及びＣＦＬＰはつかねずみへ、の
投与の１時間前に胃管を通して胃の中へ与えた。投与量
は毒性研究を通して同様であった。個々の多糖類の抗炎
症活性、それらのＬＤ５ｏ及び治療学的な指数は次の衆
において説明されて諭る（ねずみにおける腹腔内的な投
与ｉ′）。

ククルビタ（例１９）　　０．５１　　’ｏ、ａ’ｚ　
　　ｏ２′２１９．６　３０２゜７テイリア（例？）　
　　２．８３　２．２０　　１５０　５３．０　６８．
２トリゴネラ（しｔ１２０）　　２．１９　１．１７　
　２００　　９１．３　１７０．９インドメタシ４ｐ、
ｏ、）３．１４　　’２．’２０　　’　　　３２　　
１０．２　１４．５インドメタシンに比較して本発明に
従って調製されたいくつかの多糖類の活性は次の表にお
いて説明される　：　　　　　　　　　　　　　　１下
余白ククルビタ　　　　　　　６．１６　　　　　５．
９５テイリア　　　　　　　　　　１．１１　　　　　
　１．００トリゴネラ　　　　　　　１．４３　　　　
　１．８８いくつかの広く使用されている抗炎症剤に比
較して本発明に従って製造されたいくつかの多糖類の活
性を次の表に宍わす： ククルビタ　　　　１０　　５４　　２１４　　０．０
４６トリゴネラ　　　　１０　　４０　　２５０　　０
．０４０インドメタシン（ｐ、ｏ、）’　　　１０’　
　　５１　　　１７　　　０．５８０本発明に従って製
造された多糖類は３週間の腹腔内的な処理において、慢
性炎症型、例えばねずみにおける媒質関節炎に対して有
意な効果を示しいる： ククルビタ　　　　　５０４６ ククルビタ　　　　　１０　　　　４６トリゴネラ　　
　　　５０３７ フエニルプタゾン　　　　５０　　　　　６４薬物学的
な研究のもう一つの重要な結果は抗炎症性物質として研
究された多糖類が多分炎症のキニン相に影替を及はすこ
とによりて作用するであろうということである。カラグ
エナン浮腫テストの展開が３相、すなわちアミン（ヒス
タミン、セロトニン）、キニン（グラディキニン）７Ｈ
ｊｆロスタグランデイン（ＰＧ）相、を示すということ
は知られている。ＰＧ相を展開するために、炎症を引き
起す力２グエナンの注射から５時間が必要とされている
。本発明の多糖類コンセントレートはＰＧ合成を抑制し
ない。というのはそれらは潰瘍性物質を有しないからで
ある。この重要さは非ステロイド系抗炎症性でかつ抗リ
ウマチ性剤がＰＧ合成の抑制によってそれらの活性を展
開し、胃又は腸における潰瘍をまた展開することができ
るため強調されるべきである。もしこれらの非ステロイ
ド抗炎症剤、特にインドメタシン及びアセチルサリチル
酸銹導体、が本発明の多糖類と組合せられる場合、前者
の剤の潰瘍性物質の活性は防ぐことができる。毒物学的
研究に従ってねずみ及びはつかねずみにおける多糖類コ
ンセントレートの急性毒性はむしろ急勾配の投与量活性
曲線によって特性づけることができる。急性投与量の１
／３又は１／１０　を有する８日の腹腔内的投与量は実
質的にねずみ又ははつかねずみのいずれにおいても死に
到らしめていない。

以下余白 第１頁の続き 優先権主張　０１９８３年２月９日■ハンガリー（ＨＵ
）■６６０７８２ ０発　明　者　ラヨス・ウォルフ ハンガリー国１１２６ブダペスト・ ネメトベルジエイ・ウッツア２ ８／ア

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、抗炎症活性を有する植物抽出物から得られた多糖類
   であって、 ａ）　　７５０００〜２００００００の間の分子量を有
   すること、 ｂ）最大５％の窒素 Ｃ）最大５％の燐（Ｐ２Ｏ３で表現） ｄ）最大２５％の灰分 ｅ）最小３０％の還元糖 ｆ）　　！小６０％の全糖（酸性の加水分解後、グルコ
   ースとして表現）を含むこと、 ｇ）　　５ｅｐｈａｄｅｘ　Ｇ−７５モレキユラーシー
   プで充填されたカラム上で分析して、それらは実質上７
   ５０００よりも低い分子量を有するいかなる物質もない
   こと ｈ）酸性の加水分解後それらはグルコース、ガラクトー
   ス、キシロース、ラムノース、アラビノース及びウロン
   酸からなる群から選ばれた員になるが、但しそれらは少
   々くとも２種の前記員を含むこと １）ねずみの足のカラグエナン浮触テストによって検討
   された場合、それらはフェニルブタシン又はインドメタ
   シンと同じオーダーの抗炎症活性を示すこと、 ｊ）経口的なはつかねすみにおけるそれらのＬＤ５ｏ値
   は３０００Ｖ′に９よりも大きいか又はねずみにおいて
   は２０００４勺よりも大きいことを特徴とする多糖類。 ２、次の属：ウリ科、醐蝶花亜科、シナツキ科、クチビ
   ルパナ科、アオイ科、アステラセアエ、カラカサパナ科
   、マツカゼソウ科、アカザ科、アマ科、イバラ科及びオ
   オバコ科に属する植物を加工処理することによって得ら
   れることを特徴とする特許請求の範囲第１項記載の多糖
   類。 ３、次の植物：カモミレフロス、ティリアエフロス、ア
   ルセアエラデイックス、マルバエフォリプランタギニス
   　フォリウム、シルリ一種、シドニアエ種、リニ種、ト
   リ、ゴネラ　フォエニーグラエシ種、ククルビタ　マキ
   シマエ　フラクタス、キタイペラ　ビテ　フォリアエ　
   ヘルパ、ダウクス　カロッタエ　ラディ、クス、ベータ
   　ブルガリス　コンパリエタス　コンディナシ９工　２
   デイツクスの中の１種又はそれらの混合物を加工処理す
   ることによって得られることを特徴とする特許請求の範
   囲第１項記載の多糖類。 ４、　ククルビタ　マキシマから得られ、３０００００
   よりも大きい分子量を有し、最大３％の窒素、最大５％
   Ｑ燐（Ｐ２Ｏ５で表現）、最大２０チの灰分、最小３０
   チの還元糖、最小６０チの全糖を含み、酸性の々０水分
   解後主にグルコース、ガラクトース及びウロン酸に分解
   し、ねずみの足のカシグエナン浮腫テストにおいて少な
   くとも５０％の抗炎症活性を示すことを特徴とする特許
   請求の範囲第１項記載の多糖類。　　　　　・ ５、’）９がネラ　フォエニーグラエシ種から得られ、
   １０００００よりも大きい分子量を有し、最大３％の窒
   素、最大４チの燐（Ｐ２Ｏ３で表現）、最大５％の灰分
   、最小５０％の還元糖、最小７０％の全糖を食み、酸性
   の加水分解後主にガラクトース及びマンノースに分解し
   、ねずみの足のカラグエナン浮腫テストにおいて少なく
   とも４０％の抗炎症活性を示すことを特徴とする特許請
   求の範囲第１項記載の多糖類。 ６、製薬学的に満足な成分ちび製薬学的なキャリヤーと
   共に、特許請求の範囲一１項から第５項までのいずれか
   に記載の多糖類コンセントレート及び所望により非ステ
   ロイド系抗炎症剤、特にインドメタシンもしくはアセチ
   ルサリ、チル酸酵導体、を含んでなる主として抗炎症活
   性を有する多糖類組成物。 ７、化粧剛的に満足なキャリヤー及び成分と共に、特許
   請求の範囲第１項から第５項までのいずれかに記載の多
   糖類コンセントレートを含んでなる化粧側組成物。 ８、特に抗炎症性多糖類の製造方法であって、新たに収
   集されもしくは乾燥され又はある与えられた場合に先に
   有機溶剤で抽出された特許請求の範囲第２項及び第３項
   記載の業種が、随時１〜２４時間の水による先の砕解の
   後もしくは砕解と同時に、０℃と４０℃との間の温度で
   処理され、その固形分が盆離され、そしてその水性部分
   から所望ならばタンパク質状物質を沈殿させた彼、多糖
   類コンセントレートが１〜３個の炭素原子を有するアル
   コール、アセトンもしくは１〜３価のカチオンを添加す
   ることによって沈着され、スのコンセントレートが水性
   相から分離され、さらに所望ならばそれを水性媒体から
   沈殿させることによって精製される方法。 ９、水性処理のために水が加工処理される植物の重量に
   基づいて計量された１〜２０倍の重賞で使用される特許
   請求の範囲第８項記載の方法。 １０、水で処理された新鮮な植物もしくは乾燥植物か粉
   砕されもしくは１砕解され、次いでそのひき割りがプレ
   スされ、残りが水で処理され、繰り返しプレスされる特
   許請求の範囲第８項記載の方法。 １１、水性抽出物中に存在するタンパク質状物質の分離
   のために、その抽出物が４０〜８０℃の間の温度まで加
   熱され、得られた沈殿物が分離される特許請求の範囲第
   ８項記載の方法。 １２、砕解された植物材料が植物の重量に基づいて計算
   された１〜２０倍の量で水によって抽出され、その抽出
   物が６０℃で熱処理され、タン・ぞり質析出物が遠心分
   離及び濾過によって分離され、そして多糖類が溶液から
   その容積の２〜３倍以上のアルコールを添加し静止せし
   めた後沈殿し、その沈殿物が遠心分離及び／又は濾過に
   よって母液から分離しさらにアルコールで洗浄される特
   許請求の範囲第８項記載の方法。 １３、未精製の多糖類コンセントレートがその重量に基
   づいて計算された１０倍の水の童で溶解され、７５℃ま
   で加熱され、沈殿した固体は遠心分離によって除去され
   、その上澄みはその容積の３倍以上のアルコールと混合
   されそして放置後沈殿物は遠心分離及び濾過によって分
   離され、アルコールで洗浄され最高４０℃で減圧乾燥さ
   れる特許請求の範囲第１２項記載の方法。 １４、未精製多糖類が５０〜７５℃の温度で３０〜４０
   倍の容積の水に溶解し、遠心分離によって精製し、７５
   ０００よりも低い分子量の物質を保持しない膜フィルタ
   ーを通して圧力によって濾過され、さらに後でその多糖
   類がＰ液をアルコールで処理することによって沈殿する
   特許請求の範囲第１２項及び第１３項記載の方法。 １５、特許請求の範囲第８項記載の方法によって調製さ
   れた植物の抽出物。 １６、製薬学的に満足なキャリヤーと共に特許請求の範
   囲第８項に従って調製された多糖類コンセントレートを
   含んでなる製薬学的組成物。