CN117838719A

CN117838719A - 一种预防或治疗酒精性胃黏膜损伤的组合物及其制备方法

Info

Publication number: CN117838719A
Application number: CN202311790229.5A
Authority: CN
Inventors: 杨静峰; 孙景赫; 严婷婷; 王志鹏; 孙瑞临; 张玉莹; 刘柯; 王超慧; 张馨婷
Original assignee: Dalian Polytechnic University
Current assignee: Dalian Polytechnic University
Priority date: 2023-12-22
Filing date: 2023-12-22
Publication date: 2024-04-09

Abstract

本发明涉及抗酒精性胃损伤的功能产品技术领域，特别是涉及一种预防或治疗酒精性胃黏膜损伤的组合物及其制备方法。提供一种预防或治疗酒精性胃黏膜损伤的组合物，其包括马尾藻岩藻多糖粗提物；所述马尾藻岩藻多糖粗提物主要包括如下组成：岩藻糖、半乳糖、甘露糖和半乳糖醛酸；岩藻糖：半乳糖：甘露糖：半乳糖醛酸的重量比为(3.4～4.5):(3.1～3.7):(1～2):(1～1.4)。本发明提供了一种来源丰富、安全性高、毒副作用小且预防或治疗酒精性胃黏膜损伤效果显著的马尾藻岩藻多糖粗提物制备方法。

Description

一种预防或治疗酒精性胃黏膜损伤的组合物及其制备方法

技术领域

本申请涉及抗酒精性胃损伤的功能产品技术领域，特别是涉及一种预防或治疗酒精性胃黏膜损伤的组合物及其制备方法。

背景技术

酒是世界上消费的大宗饮料产品，过量饮酒是促发胃黏膜损伤疾病的主要原因之一。酒精性胃黏膜损伤广泛发生在世界各地，且发病率逐年提高，对缓解酒精性胃黏膜损伤的有效方法有着广泛的市场需求。酒精中的乙醇分子及其代谢产物乙醛可通过多种途径破坏胃粘膜的防御系统，导致胃组织易遭受胃酸、各类消化酶及胆汁等侵袭，而引起胃粘膜组织水肿、糜烂，甚至出血、坏死，严重时诱发胃溃疡的产生。酒精性胃黏膜损伤主要分为直接损伤和间接损伤两种。直接损伤机理表明高浓度乙醇作为一种高刺激性攻击因子，可以溶解胃部表面的胃粘膜粘液-碳酸氢钠-磷脂防御层，破坏了胃黏膜表面的粘液层和粘液细胞使胃部充血、溃疡等；间接损伤机理表明乙醇使胃酸分泌失调，激发了大量的炎症因子释放并伴随着过量的氧自由基增加，最终诱导胃细胞凋亡。

目前，针对胃溃疡的治疗主要体现在三方面，即通过抑制胃酸分泌、保护胃黏膜和根除幽门螺杆菌。使用两种或三种药物的联合用药和其他组合用药，如奥美拉唑、西咪替丁等，该药物在规范合理的治疗中能够短时对胃粘膜表现出修复作用。然而，大量临床研究表明，这些药物在治疗胃溃疡时会产生明显的不良反应、耐药性增加、复发率很高，这些临床的不良反应极大限制了上述药物的广泛通用。因此，开发一种副作用小的胃保护剂极为重要。

马尾藻(Sargassum siliquastrum)属于马尾藻科、马尾藻属，是褐藻的一种，属于暖温带性海藻。马尾藻是我国传统的药用海藻之一，《神农本草经》就曾有过记载马尾藻具有“主瘿瘤气，颈下核，破散结气，痈肿，瘕坚气腹中上下鸣，下十二水肿”之功效；《本草纲目》中也明确记载，其主治“瘿瘤结气”，能“利小便”、“治疗奔豚气、脚气、水气浮肿、宿食不消”之活性。马尾藻富含丰富的多糖资源，尤以硫酸多糖，如岩藻多糖及其衍生物作为代表，在抗炎、抗溃疡、抗氧化、凝血、加速细胞再生方面发挥了巨大的生物活性效用。此外，岩藻多糖是能参与各种生理机能调节天然产品，且通常具有安全性高、毒副作用小等特点在食品和医学等领域受到广泛关注。丁香酚是一种主要从天然植物中提取出来的可食用的天然香料，具有“散寒止痛、温中散寒、消炎抑菌和抗氧化”之功效，近年来在医疗、卫生、保健等方面的应用越来越普遍。

然而，虽然有文献报道岩藻多糖能够用于降低酒精对胃肠粘膜的损伤或损害，但是在本发明实际研究过程中发现采用不同植物源及不同方法制备的岩藻多糖提取物对预防或治疗酒精性胃黏膜损伤效果差异巨大。且暂未见有关于马尾藻提取物，特别是岩藻多糖提取物对预防或治疗酒精性胃黏膜损伤效果的报道。

发明内容

技术问题：

提供一种预防或治疗酒精性胃黏膜损伤的组合物及其制备方法。

技术方案：

一方面，提供一种预防或治疗酒精性胃黏膜损伤的组合物，其包括马尾藻岩藻多糖粗提物；所述马尾藻岩藻多糖粗提物主要包括如下组成：岩藻糖、半乳糖、甘露糖和半乳糖醛酸；岩藻糖：半乳糖：甘露糖：半乳糖醛酸的重量比为(3.4～4.5):(3.1～3.7):(1～2):(1～1.4)。

在一些实施例中，岩藻糖：半乳糖：甘露糖：半乳糖醛酸的重量比为4.4:3.2:1:1.4或4.5:3.7:1:1.1或3.4:3.1:1.6:1.3。

在一些实施例中，所述预防或治疗酒精性胃黏膜损伤的组合物还包括丁香酚；所述马尾藻岩藻多糖粗提物和所述丁香酚的重量比为(10～100):(0～1)。

另一方面，还提供一种预防或治疗酒精性胃黏膜损伤的组合物的制备方法，其包括如下步骤：

(1)制备马尾藻岩藻多糖粗提物：

S1、将新鲜的裂叶马尾藻或半叶马尾藻清洗干净、晾晒后，制成粉末、过筛网，得到马尾藻干粉；

S2、将马尾藻干粉按照1:(5～20)的体积比充分溶解于70％～100％的乙醇水溶液中，在10～25℃下静置4～30h以去除色素和脂肪；随后，离心，收集沉淀，烘干；

S3、将步骤S2制得的马尾藻干粉按照1:(5～20)的体积比与水或酸溶液混匀，在40～80℃下持续搅拌1～5h，得到马尾藻水溶液；随后离心，收集上清液加入无水氯化钙以使溶液中氯化钙的质量体积比浓度为0.1～10mg/mL，充分反应1～30h，得到混合液；

S4、将步骤S3制得的混合液离心以去除杂质，收集上清液加入终体积浓度为0～10％的乙酸水溶液混合搅拌均匀，在1～30℃下静置1～12h，离心收集上清液，以碱液调节pH至中性；

S5、向步骤S4制得的pH呈中性的上清液中加入无水乙醇至乙醇的终体积浓度为20～30％，在1～15℃下静置5～30h，随后离心收集上清液；再次加入无水乙醇至乙醇的终体积浓度为60～90％，在1～15℃下静置10～30h，再次离心收集沉淀；

S6、将步骤S5制得的沉淀复溶于水后，除蛋白，过滤后经透析、冻干，得到马尾藻岩藻多糖粗提物；所述马尾藻岩藻多糖粗提物主要包括如下组成：岩藻糖、半乳糖、甘露糖和半乳糖醛酸；岩藻糖：半乳糖：甘露糖：半乳糖醛酸的重量比为(3.4～4.5):(3.1～3.7):(1～2):(1～1.4)。

在一些实施例中，预防或治疗酒精性胃黏膜损伤的组合物的制备方法，还包括：

(2)马尾藻岩藻多糖粗提物与丁香酚的复配：将所述马尾藻岩藻多糖粗提物与丁香酚按照(10～100):(0～1)的重量比混合，得到预防或治疗酒精性胃黏膜损伤的组合物。

在一些实施例中，所述马尾藻岩藻多糖粗提物提取自裂叶马尾藻或半叶马尾藻的根、茎或叶中的至少一种。

在一些实施例中，步骤S3中的酸溶液的溶质包括盐酸、氯酸或硝酸中的任一种。

在一些实施例中，步骤S4中碱液的溶质包括氢氧化钠、氢氧化钾或碳酸氢钠中的任一种。

在一些实施例中，步骤S4和步骤S5中离心转速为3000～10000rpm，离心时间为10～30min。

在一些实施例中，步骤S6中的透析使用1～10kDa的透析袋。

在一些实施例中，步骤S6中所述的除蛋白采用Sevage法或三氯乙酸法中的至少一种。

又一方面，提供一种预防或治疗酒精性胃黏膜损伤的药物，其包括功能成分、辅料、湿润剂和粘合剂，所述功能成分为前述的预防或治疗酒精性胃黏膜损伤的组合物。

又一方面，提供一种前述预防或治疗酒精性胃黏膜损伤的药物的制备方法，其包括如下步骤：将前述的预防或治疗酒精性胃黏膜损伤的组合物与辅料混匀，加入湿润剂和粘合剂混匀后压片，得到药物片剂。

在一些实施例中，所述湿润剂包括但不限于淀粉浆等。

又一方面，提供一种预防或治疗酒精性胃黏膜损伤的口服溶液，其包括功能成分、矫味剂和防腐剂，所述功能成分为前述的预防或治疗酒精性胃黏膜损伤的组合物。

在一些实施例中，所述矫味剂包括但不限于糖浆。

在一些实施例中，所述防腐剂包括但不限于山梨酸等。

又一方面，提供前述的预防或治疗酒精性胃黏膜损伤的口服溶液的制备方法，其包括如下步骤：将前述的预防或治疗酒精性胃黏膜损伤的组合物、矫味剂和防腐剂混匀，过滤澄清，分装后灌封于口服试剂瓶中，灭菌，制成口服溶液。

又一方面，提供一种预防或治疗酒精性胃黏膜损伤的药物，其包括功能成分、pH调节剂和甜味剂，所述功能成分为前述的预防或治疗酒精性胃黏膜损伤的组合物。

在一些实施例中，所述pH调节剂包括但不限于枸橼酸钠或磷酸二氢钠等。

在一些实施例中，所述甜味剂包括但不限于甜菊苷或三氯蔗糖等。

在一些实施例中，所述预防或治疗酒精性胃黏膜损伤的药物包括但不限于口服溶液、冲剂颗粒或糖衣片。

又一方面，提供一种风味饼干，其包括功能成分、面粉、植物油和糖粉；所述功能成分为前述的预防或治疗酒精性胃黏膜损伤的组合物。

又一方面，提供前述风味饼干的制备方法，其包括如下步骤：将功能成分在40～80℃条件下烘干后，与面粉、植物油和糖粉等食品添加剂混匀后，压制，得到富含岩藻多糖的风味饼干。

有益效果：

1、基于特定植物源裂叶马尾藻或半叶马尾藻和特定的制备方法制得的马尾藻岩藻多糖粗提物，主要包括如下组成：岩藻糖、半乳糖、甘露糖和半乳糖醛酸；岩藻糖：半乳糖：甘露糖：半乳糖醛酸的重量比为(3.4～4.5):(3.1～3.7):(1～2):(1～1.4)。该马尾藻岩藻多糖粗提物与人胃粘膜细胞(Ges-1)处理24h后，人胃粘膜细胞增殖显著增长，证实了其具有促胃黏膜愈合的作用；将其应用于酒精性胃黏膜损伤的BALB/c小鼠的体内表明，小鼠胃组织中相关表皮生长因子含量相较模型组显著提高，小鼠胃组织出血情况得到显著抑制；该马尾藻岩藻多糖粗提物应用于抗酒精诱导引发的急性胃损伤具有明显优势，能够有效抑制因酒精刺激导致的Ges-1细胞的凋亡，并能够提高小鼠胃组织中生长因子的再生、降低炎症侵袭，从而发挥保护酒精性胃黏膜损伤的功能。马尾藻岩藻多糖作为天然的海藻食物来源的活性产物，对人体无毒副作用、其来源广泛、提取方式简便、成本低廉、效果显著，作为预防和治疗酒精对人体的胃损伤效果显著，有潜力作为待开发的功能食品和药物；由于其具有预防酒精引发的胃粘膜损伤的作用，能够开发成休闲食品、功能食品和相关药物，作为预防和治疗酒精性胃黏膜损伤的产品。

2、本发明的预防或治疗酒精性胃黏膜损伤的组合物的制备方法，通过水提法和分级醇沉法，通过优化植物源及水提和分级醇沉参数，成功提取出特定组成的马尾藻岩藻多糖粗提物。该马尾藻岩藻多糖粗提物能够作为一种功能食品或药物在预防酒精引发胃黏膜受损中得以应用，能够抑制因酒精刺激所引发的动物胃黏膜损伤，具有保护胃粘膜的效果，并提高了胃组织生长因子再生的水平、降低炎症浸润。

3、本发明提供了一种来源丰富、安全性高、毒副作用小且预防或治疗酒精性胃黏膜损伤效果显著的马尾藻岩藻多糖粗提物制备方法。

附图说明

图1为实施例1中不同浓度的马尾藻岩藻多糖粗提物(SFuc)和人胃粘膜细胞(Ges-1)共培养24小时后经0.9M的无水乙醇刺激4小时后的细胞活力与空白组、模型组的对比图；

图2为实施例2中Ges-1细胞的MTT结果(A)和BALB/c小鼠口服200mg/kg的SFuc后的胃组织中表皮生长因子(EGF)(B)和前列腺素2(PGE2)(C)的表达水平与空白组、模型组和阳性对照组的对比图；

图3为实施例3中Ges-1细胞的MTT结果(A)和BALB/c小鼠口服50mg/kg的SFuc和丁香酚的混合液后血清中炎症因子(B、C)与空白组、模型组和阳性对照组的对比图；

图4为实施例4中BALB/c小鼠急性酒精性损伤后胃组织的表观照片(A)和相关评分(B)；

图5为对比例1制得的羊栖菜多糖复合物(Fuc)的单糖组成(A)和实施例1制得的SFuc单糖组成(B)，以及对比例1制得的Fuc和人胃粘膜细胞(Ges-1)共培养24小时后经0.9M的无水乙醇刺激4小时后的细胞活力与空白组、模型组的对比图(C)。

其中，图1至图5中，*代表p<0.05，**代表p<0.01，***/###代表p<0.001。

具体实施方式

实施例1

一种预防或治疗酒精性胃黏膜损伤的组合物的制备方法，其采用如下步骤：

制备马尾藻岩藻多糖粗提物(SFuc)：

S1、将新鲜的裂叶马尾藻清洗干净、晾晒后，制成粉末、过300目筛网，得到马尾藻干粉；

S2、将马尾藻干粉按照1:10的体积比充分溶解于90％的乙醇水溶液中，在室温下静置6h以去除色素和脂肪；随后，在10℃下离心15min，收集沉淀，烘干；

S3、将步骤S2制得的马尾藻干粉按照1:8的体积比与水混匀，在40℃下持续搅拌3h，得到马尾藻水溶液；在10℃、转速为4000rpm条件下离心15min后，收集上清液加入无水氯化钙(CaCl₂)以使溶液中CaCl₂的质量体积比浓度为3mg/mL，室温下充分反应1h，得到混合液；

S4、将步骤S3制得的混合液离心以去除海藻酸钠等杂质，收集上清液加入终体积浓度为1％的乙酸水溶液混合搅拌均匀，在室温下静置1h，离心收集上清液，以6M的NaOH水溶液调节pH至中性；

S5、向步骤S4制得的pH呈中性的上清液中加入无水乙醇至乙醇的终体积浓度为30％，在4℃下静置10h，随后在4℃、转速为5000rpm下离心20min收集上清液；再次加入无水乙醇至乙醇的终体积浓度为75％，在4℃下静置10h，再次离心收集沉淀；

S6、将步骤S5制得的沉淀复溶于水后，采用Sevage法除蛋白，过滤后经3500Da透析袋透析、冻干，得到马尾藻岩藻多糖粗提物(SFuc)；马尾藻岩藻多糖粗提物(SFuc)包括如下组成：甘露糖、半乳糖醛酸、半乳糖和岩藻糖；其中，甘露糖：半乳糖醛酸：半乳糖：岩藻糖的重量比为1:1.4:3.2:4.4；SFuc提取率为44.45％；其中糖含量根据苯酚硫酸法进行测定为70.43±1.45％。

体外实验：人胃粘膜细胞(Ges-1)培养于含有10％的胎牛血清和1％双抗的DMEM高糖培养基中，细胞静置于95％空气和5％CO₂的培养箱中进行贴壁培养。采用0.25％的EDTA的胰酶消化细胞后于1000rpm离心5min，加入完全培养基重悬细胞，按照1×10⁵个/孔的密度将细胞加入96孔培养板，每孔细胞体积为100μL，每组设有6平行，随后将细胞静置于培养箱；24h后，空白组和模型组培养基替换为新鲜的DMEM溶液，实验组中将原有的细胞培养基换成不同浓度的实施例1制得的SFuc溶液(溶剂同原有的细胞培养基)后再次培养24h；除空白组外，每孔加入无水乙醇至乙醇终浓度为0.9M。4h后每孔避光加入20μL的浓度为5mg/mL的MTT溶液，共同培养4h后吸除细胞上清液，每孔加入150μL的DMSO溶液溶解甲瓒结晶，混匀后在490nm处检测吸光度，按照下式计算细胞存活率：

实验组：细胞存活率(％)＝100％*(实验组OD₄₉₀空白组OD₄₉₀)/空白组OD₄₉₀

模型组：细胞存活率(％)＝100％*(模型组OD₄₉₀空白组OD₄₉₀)/空白组OD₄₉₀

结果分析：MTT结果表明(图1)，当0.9M的乙醇刺激Ges-1细胞4h后已经对细胞产生毒性影响，模型组的细胞的存活率为60.91±1.91％，表明乙醇诱导Ges-1细胞损伤的模型已成功建立；当采用浓度为40、60、80和100μg/mL的实施例1制得的SFuc溶液预处理细胞24h后，细胞的存活率分别相较于模型组提高了22.50％、22.30％、23.91％、19.25％，MTT结果证明实施例1制得的SFuc具有保护胃粘膜细胞的作用，尤其在实施例1制得的SFuc浓度为40～80μg/mL时，和模型组相比细胞的存活率显著提升，并在实施例1制得的SFuc浓度为80μg/mL发挥了最佳保护作用。

实施例2

制备马尾藻岩藻多糖粗提物(SFuc)：

S1、将新鲜的半叶马尾藻叶片清洗干净、晾晒后，制成粉末、过300目筛网，得到马尾藻干粉；

S3、将步骤S2制得的马尾藻干粉按照1:15的体积比与水混匀，在60℃下持续搅拌4h，得到马尾藻水溶液；在转速为4000rpm条件下离心15min后，收集上清液加入无水氯化钙(CaCl₂)以使溶液中CaCl₂的质量体积比浓度为10mg/mL，室温下充分反应1h，得到混合液；

S4、将步骤S3制得的混合液离心以去除海藻酸钠等杂质，收集上清液加入终体积浓度为1％乙酸水溶液混合搅拌均匀，室温静置1h，离心收集上清液，以6M的NaOH水溶液调节pH至中性；

S5、向步骤S4制得的pH呈中性的上清液中加入无水乙醇至乙醇的终体积浓度为20％，在4℃下静置12h，随后在8000rpm下离心15min收集上清液；再次加入无水乙醇至乙醇的终体积浓度为50％，在4℃下静置12h，离心后再次离心收集上清液；再次加入无水乙醇至乙醇的终体积浓度为75％，在4℃下静置12h，再次离心收集沉淀；

S6、将步骤S5制得的沉淀复溶于水后，在6℃下加入体积浓度为5％的三氯乙酸充分搅拌除蛋白，过滤后经3500Da透析袋透析、冻干，得到马尾藻岩藻多糖粗提物(SFuc)；其中，马尾藻岩藻多糖粗提物(SFuc)包括如下组成：甘露糖、半乳糖醛酸、半乳糖和岩藻糖；其中，甘露糖：半乳糖醛酸：半乳糖：岩藻糖的重量比为2:1.1:3.7:4.5；SFuc提取率为31.34％；其中糖含量根据苯酚硫酸法进行测定为67.33±1.71％。

参照实施例1的体外实验进行了测试，结果表明：当0.9M的乙醇刺激Ges-1细胞4h后模型组的细胞的存活率为61.41±3.38％，当采用浓度为40、60、80和100μg/mL的实施例2制得的SFuc溶液预处理细胞24h后，细胞的存活率分别相较于模型组分别提高了1.18、1.35、1.37和1.29倍，MTT结果证明实施例2制得的SFuc对酒精导致的胃粘膜损伤有保护作用。

体内实验：将8周龄的无菌SPF级雄性小鼠适应性喂养7天，空白组和模型组小鼠每日灌胃纯净水，实验组小鼠每日灌胃200mg/kg的实施例2制得的SFuc溶液(SFuc溶解于纯净水)，阳性对照组每日灌胃40mg/kg的奥美拉唑(奥美拉唑溶解于纯净水)，持续灌胃14天，每日灌胃体积为0.1mL/10g BW，每组设8平行。小鼠安乐死前24h禁食，并在最后一次灌胃1h后模型组、阳性对照组和实验组小鼠再次灌胃90％的无水乙醇诱导急性胃损伤。1h后安乐死小鼠后获取胃组织，将胃组织沿中心线剪开，用预冷的无菌PBS溶液冲洗胃内残留物，胃组织冻存于-80℃。根据南京建成ELISA试剂盒说明书检测小鼠胃组织中表皮生长因子(EGF)(货号：H031)和前列腺素2(PGE2)(货号：H099)含量。

结果分析：高浓度乙醇导致的急性胃损伤会伴随着胃组织表皮受损破裂、血流量增加，阻碍了胃组织中细胞和组织的再生。EGF是一种存在于胃组织内的生长因子，胃内的细胞经EGF刺激后会增殖和分化，加速胃组织愈合。如图2所示，模型组小鼠经过乙醇刺激后胃中EGF的含量相比与正常小鼠呈现出显著降低的趋势，而实施例2制得的SFuc有效逆转了上述现象。此外，PGE2能够促进胃酸、粘液和碳酸氢盐的分泌，促进胃内血流增加，同时PGE2促进胃粘膜细胞的更新，促进胃上皮细胞的修复和再生。PGE2的结果证实，本实验组小鼠胃中PGE2的含量是模型组的1.52倍，以此说明，实施例2制得的SFuc能够通过加速胃组织相关中生长因子再生来和血液循环来发挥胃保护作用。

实施例3

(1)制备马尾藻岩藻多糖粗提物：

S1、将新鲜的裂叶马尾藻清洗干净、晾晒后，制成粉末、过筛网，得到马尾藻干粉；

S2、将马尾藻干粉按照1:10的体积比充分溶解于90％的乙醇中，在室温下抽提6h以去除色素和脂肪；随后，在10℃下离心15min，收集沉淀，烘干；

S3、将步骤S2制得的马尾藻干粉按照1:15的体积比与水混匀，在60℃下持续搅拌4h，得到马尾藻水溶液；在转速为4000rpm条件下离心15min后，收集上清液加入无水氯化钙(CaCl₂)以使溶液中CaCl₂的质量体积比浓度为10mg/mL，室温下充分反应2h，得到混合液；

S4、将步骤S3制得的混合液离心以去除海藻酸钠等杂质，收集上清液加入5％盐酸溶液混合搅拌均匀，静置0.5h，离心收集上清液，以6M的NaOH溶液调节pH至中性；

S5、向步骤S4制得的pH呈中性的上清液中加入无水乙醇至乙醇的终体积浓度为25％，在10℃下静置12h，随后在4℃、转速为4000rpm下离心30min收集上清液；再次加入无水乙醇至乙醇的终体积浓度为80％，在4℃下静置12h，再次离心收集沉淀；

S6、将步骤S5制得的沉淀复溶于水后，除蛋白，过滤后经1000Da透析袋透析、冻干，得到马尾藻岩藻多糖粗提物(SFuc)；马尾藻岩藻多糖粗提物(SFuc)包括如下组成：甘露糖、半乳糖醛酸、半乳糖和岩藻糖，其中，甘露糖：半乳糖醛酸：半乳糖：岩藻糖的重量比为1.6:1.3:3.1:3.4；SFuc提取率为35.64％；其中糖含量根据苯酚硫酸法进行测定为71.02±2.33％。

参照实施例1的体外实验进行了测试，结果表明：当0.9M的乙醇刺激Ges-1细胞4h后模型组的细胞的存活率为60.81±3.95％，当采用浓度为40、60、80和100μg/mL的实施例3制得的SFuc溶液预处理细胞24h后，细胞的存活率分别相较于模型组分别提高了1.21、1.35、1.35和1.32倍，MTT结果证明实施例3制得的SFuc可以减少酒精导致的胃粘膜细胞受损。

体内实验：将8周龄的无菌SPF级雄性小鼠适应性喂养7天，实验组1小鼠每日灌胃50mg/kg的实施例3制得的SFuc，实验组2小鼠每日灌胃SFuc和丁香酚的复合溶液(SFuc-DXF溶液，SFuc与丁香酚重量比为20:1)，其余灌胃方式同实施例2。14天后安乐死小鼠收集血清，冻存-80℃。根据南京建成ELISA试剂盒说明书检测小鼠血清中关键促炎因子TNF-α(货号：H052)和抑炎因子IL-10(货号：H009)含量。

结果分析：过度的乙醇刺激会加速炎症细胞的浸润和炎症因子的释放，导致机体产生不同程度的免疫和炎症反应，这也是胃组织受损后的主要病例现象之一。炎症细胞通常分为促炎因子和抑炎因子两大类，例如TNF-α和IL-10，二者相互平衡共同参与免疫调节。如图4所示，TNF-α实验结果表明，模型组小鼠经酒精损伤后血清中的促炎因子TNF-α的含量显著高于对照组小鼠(p<0.01)；与模型组相比，实验组1小鼠血清中TNF-α水平下降了1.44倍，实验组2中TNF-α含量显著下调了1.63倍。TNF-α是单核细胞和巨噬细胞分泌的内源性多向炎症细胞因子，是导致溃疡形成的重要炎症介质，另外，TNF-α再次激活其他炎症因子，如IL-10、IL-6的释放，导致机体严重受损；相反，抑炎因子IL-10的结果证明，SFuc能增强血清中IL-10的水平，并且这种效果在实验组2小鼠中更加明显。由此说明，实施例3制得的SFuc可以显著抑制炎症因子的释放来发挥其抗胃损伤之功效，此外，实施例3制得的SFuc和丁香酚复配后能更大程度地发挥其抗炎功能。

实施例4

本实施例制备SFuc和体内实验同实施例3。

在小鼠安乐死后获取胃组织，将胃组织沿中心线剪开，拍照记录胃部组织的表观变化，并用image J软件定量计算溃疡指数和胃损伤(面积)指数。评分标准如下：0：无病变；1：血管舒张或红斑；2：1-10个分散性小溃疡(<5mm)；3：>10个散在性小溃疡(<5mm)；4：1-10个分散性中度溃疡(5-10毫米)；5：>10个分散性中度溃疡(5-10mm)。

结果分析：如图4所示，表观照片的结果表明，空白组小鼠胃部组织无任何病变，而经过酒精急性诱导后的模型组小鼠胃组织内部褶皱表现出充血、肿胀，且胃组织出现了溃疡性病变。而经过奥美拉唑和实施例3制得的SFuc的预处理后，小鼠的胃组织充血肿胀的水平明显下降。此外，溃疡指数和损伤指数的评分结果证明，与模型组相比，实验组小鼠中二者的评分显著下降了2.06和4.68倍，这体现了实施例3制得的SFuc在机体内很好地发挥了保护酒精性胃受损的生理效能。

对比例1

一种预防或治疗酒精性胃黏膜损伤的组合物的制备方法，参照实施例1，区别仅在于，岩藻多糖的植物源不同，采用除裂叶马尾藻、半叶马尾藻以外其他的马尾藻科马尾藻属藻类植物，例如羊栖菜(马尾藻科马尾藻属藻类植物)作为植物源，提取方法及参数不变同实施例1，由此制得羊栖菜多糖复合物(Fuc)。

对羊栖菜多糖复合物(Fuc)的单糖组成和分子量以及硫酸基含量进行检测。其中，单糖组成采用LXQ仪器分析，流动相溶液为0.02M的乙酸铵-乙腈水溶液，色谱柱型号为C18(250×4.6mm,5μm)；分子量组成通过Waters仪器检测，流动相为0.1M的乙酸铵溶液，色谱柱型号为TSKG4000PWXL column(7.8mm×300mm,10μm)；通过明胶比浊法分析马尾藻多糖组合物和羊栖菜多糖组合物中硫酸基含量，使用硫酸钾作为标品；通过间羟基联苯法检测二者的糖醛酸含量，使用葡萄糖醛酸作为标品。

单糖组成分析结果表明，实施例1制得的马尾藻岩藻多糖粗提物(SFuc)主要由岩藻糖、半乳糖、甘露糖和半乳糖醛酸构成；而对比例1制得的羊栖菜多糖复合物(Fuc)则主要由甘露糖、岩藻糖、氨基半乳糖和半乳糖醛酸构成，其中，甘露糖：半乳糖醛酸：氨基半乳糖：岩藻糖的重量比为3.6:1.2:2.3:2.7。实施例1制得的马尾藻岩藻多糖粗提物(SFuc)的平均分子量约为300.7kDa，而对比例1制得的羊栖菜多糖分子量约为350.2kDa。此外，实施例1制得的马尾藻多糖所富含的硫酸基和糖醛酸含量分别为13.97±0.75％、14.90±1.09％，而对比例1制得的羊栖菜多糖所富含的硫酸基和糖醛酸含量分别为6.72 0±0.83％、9.37±1.14％。上述结果表明，尽管采用相同的提取方式，但是由于植物源不同，极大的影响了其多糖组合物的具体组成和含量。

参照实施例1的体外实验方法进行Ges-1细胞MTT实验以测试对比例1制得的Fuc的性能。

经测试，MTT结果证实了对比例1制得的Fuc对于细胞的酒精性损伤无法起到预防作用。由此可见，采用除裂叶马尾藻、半叶马尾藻以外其他的马尾藻科马尾藻属藻类植物，例如羊栖菜，根据本发明的方法制得的提取物对于细胞的酒精性损伤无法起到预防作用。说明不同植物来源的多糖提取物，由于组成差异，对酒精性胃粘膜损伤的保护效能不同，而本发明的源自裂叶马尾藻、半叶马尾藻的尾藻岩藻多糖粗提物在酒精性胃损伤的预防方面发挥了显著的活性优势。

以上所提供的实施例并非用以限制本发明所涵盖的范围，所描述的步骤也不是用以限制其执行顺序。本领域技术人员结合现有公知常识对本发明做显而易见的改进，亦落入本发明权利要求书所界定的保护范围之内。

Claims

1.一种预防或治疗酒精性胃黏膜损伤的组合物，其特征在于，包括马尾藻岩藻多糖粗提物；所述马尾藻岩藻多糖粗提物主要包含单糖：岩藻糖、半乳糖、甘露糖和半乳糖醛酸；其比例，岩藻糖：半乳糖：甘露糖：半乳糖醛酸的重量比为(3.4～4.5)：(3.1～3.7)：(1～2):(1～1.4)。

2.根据权利要求1所述的预防或治疗酒精性胃黏膜损伤的组合物，其特征在于，组合物中除所述马尾藻岩藻多糖粗提物外，还包括丁香酚。

3.根据权利要求2所述的预防或治疗酒精性胃黏膜损伤的组合物，其特征在于，所述马尾藻岩藻多糖粗提物和所述丁香酚的重量比为(10～100):(0～1)。

4.一种预防或治疗酒精性胃黏膜损伤的组合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)制备马尾藻岩藻多糖粗提物：

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，还包括：

6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述马尾藻岩藻多糖粗提物提取自裂叶马尾藻或半叶马尾藻的根、茎或叶中的至少一种。

7.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤S3中的酸溶液的溶质包括盐酸、氯酸或硝酸中的任一种。

8.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤S6中的透析使用1～10kDa的透析袋。

9.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤S6中所述的除蛋白采用Sevage法或三氯乙酸法中的至少一种。

10.一种预防或治疗酒精性胃黏膜损伤的药物，其特征在于，包括功能成分、辅料、湿润剂和粘合剂，所述功能成分为权利要求1～3中任一项所述的预防或治疗酒精性胃黏膜损伤的组合物。