CN112168878B - 一种黄花倒水莲降脂组合物及其制备方法 - Google Patents

一种黄花倒水莲降脂组合物及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种黄花倒水莲降脂组合物，其特征在于，包括以下重量份成分：黄花倒水莲提取物10‑20份、山楂提取物10‑20份、葛根提取物10‑20份和百香果种籽提取物10‑30份。本发明同时提供了该组合物的制备方法。本发明黄花倒水莲降脂组合物经体内、外药效学研究明确，具有显著的降脂作用，且显示出很好的协同增效的作用，并且本发明原料药食同源，安全、有效。

Description

一种黄花倒水莲降脂组合物及其制备方法
技术领域
本发明涉及降脂保健技术领域，更具体的说是涉及一种黄花倒水莲降脂组合物及其制备方法。
背景技术
随着我国经济水平的快速发展，国民不健康的生活方式和饮食结构的变化，是引发冠心病、心肌梗死、脑卒中、动脉粥样硬化等心脑血管疾病的发生与发展主要因素。据《中国心血管病报告2018概要》统计，我国国民高脂血症的发生率逐年上升，心脑血管疾病的患病人数高达2.9亿，而且每5例死亡中就有2例死于心脑血管疾病，心脑血管疾病已成为我国重大的公共卫生问题。
通常情况下，高脂血症表现为血浆或血清中总胆固醇、甘油三脂、低密度脂蛋白-胆固醇水平升高和(或)高密度脂蛋白-胆固醇水平降低，是引起心脑血管疾病的病理学基础，如冠心病、心肌梗塞、脑梗塞等，因此通过对机体内胆固醇、甘油三脂等关键因素进行干预，是预防和治疗高脂血症疾病，预防中老年人心脑血管疾病的有效措施。
近年来，中医药对高脂血症的控制取得了很大的进展，研究表明，中药对降血脂具有多靶点、多途径、标本兼治等特色，而且效果优于单纯西药，毒副作用也明显小于西药。因此，降脂中药的应用受到越来越多患者的青睐，许多单味中药已应用于批量生产，如山楂、茯苓、半夏、当归、陈皮、甘草、丹参、黄莲、女贞子、姜黄、川芎等。
越来越多的研究表明，中药降血脂作用与其所含的活性成分密切相关(如皂苷类、黄酮类、蒽醌类、生物碱类、多糖类、多酚类、不饱和脂肪酸类等)，而且不同类型的功能成分的降脂机理各不相同，它们间可能存在协同增效或拮抗作用。
因此，如何从药材中获得所需的功能成分，并进行组合，实现不同类型成分发挥协同降脂的作用，是中药降脂药物开发利用亟需解决技术瓶颈。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了一种黄花倒水莲降脂组合物，该组合物安全、有效降血脂。
为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种黄花倒水莲降脂组合物，包括以下重量份成分：黄花倒水莲提取物10-20份、山楂提取物10-20份、葛根提取物10-20份和百香果种籽提取物10-30份。
作为本发明优选的技术方案，一种黄花倒水莲降脂组合物，其特征在于，包括以下重量份成分：黄花倒水莲提取物10份、山楂提取物10份、葛根提取物10份和百香果种籽提取物20份。
本发明黄花倒水莲降脂组合物，由黄花倒水莲、山楂、葛根和百香果四种药食同源植物的功能成分组合而成，经体内外药效学研究明确本发明的组合物具有显著的降脂作用。在体外降胆固醇作用研究中，本发明的黄花倒水莲提取物、山楂提取物、葛根提取物、百香果提取物，均能有效降低HepG2细胞内胆固醇含量，降低胆固醇作用IC50值分别为：41.5、94.4、47.2、37.8μg/mL。本发明优选的技术方案，黄花倒水莲提取物：山楂提取物：葛根提取物：百香果种籽提取物，重量比为10：10：10：20，降低细胞内胆固醇作用最佳，IC50值为23.0μg/mL(阳性药，洛伐他汀IC50值为3.52μg/mL)；而且该组合物对高脂血症动物体内的胆固醇和甘油三酯水平也具有调节作用，降低效果分别为TC为2.45±0.19mmol/L(阳性对照，洛伐他汀为2.50±0.22mmol/L)，TG为1.43±0.21mmol/L(阳性对照，洛伐他汀为1.38±0.18mmol/L)。
本发明的另一目的是，提供上述黄花倒水莲降脂组合物的制备方法，包括以下步骤：
(1)分别制备黄花倒水莲提取物、山楂提取物、葛根提取物和百香果提取物；
(2)按配比称取所述黄花倒水莲提取物、山楂提取物、葛根提取物和百香果提取物，经粉末混合器混合均匀，搅拌转速30-40rpm，混合时间为6-8min，得黄花倒水莲降脂组合物。
作为本发明优选的技术方案，步骤(1)制备黄花倒水莲提取物具体操作为：
黄花倒水莲根粗粉与10-20倍重量的水，95℃加热回流提取1h，过滤，滤渣加入5-15倍重量的水，95℃加热回流提取0.5h，过滤，合并2次提取液，提取液经DM-130大孔树脂吸附后，依次以25％乙醇、65％-75％乙醇进行洗脱，收集65％-75％乙醇洗脱液，浓缩、冷冻干燥，得黄花倒水莲提取物。
更优选的技术方案为：黄花倒水莲根粗粉与15倍重量的水，95℃加热回流提1h，过滤，滤渣加入10倍重量的水，95℃加热回流提取0.5h，过滤，合并提取液，提取液经DM-130大孔树脂吸附后，依次以25％乙醇、70％乙醇进行洗脱，收集70％乙醇洗脱液，浓缩、冷冻干燥，得黄花倒水莲提取物。
黄花倒水莲为远志科远志属黄花倒水莲植物干燥的根，其根中含有具有降脂作用的皂苷成分。该类成分极性较大，结构稳定，易溶于水，因此采用热水提取，而且研究发现，DM-130树脂对黄花倒水莲皂苷具有较好纯化效果：先通过25％乙醇先去除非皂苷类成分，然后收集65％-75％乙醇洗脱液，浓缩干燥，即得到富含皂苷的黄花倒水莲提取物。
作为本发明优选的技术方案，步骤(1)制备山楂提取物具体操作为：
山楂粗粉与10-20倍重量的水，95℃加热回流提取1h，过滤，滤渣加入5-15倍重量的水，95℃加热回流提取0.5h，过滤，合并2次提取液，提取液经DM-130大孔树脂吸附后，依次以纯水、65％-75％乙醇进行洗脱，收集65％-75％乙醇洗脱液，浓缩、冷冻干燥，得山楂提取物。
更优选的技术方案为：山楂粗粉与15倍重量的水，95℃加热回流提取1h，过滤，滤渣加入10倍重量的水，95℃加热回流提取0.5h，过滤，合并2次提取液，提取液经DM-130大孔树脂吸附后，依次以纯水、70％乙醇进行洗脱，收集70％乙醇洗脱液，浓缩、冷冻干燥，得山楂提取物。
山楂为蔷薇科山楂属山楂的干燥果实，果实中丰富的黄酮类成分，且具有降脂作用。本发明采用热水将山楂中的黄酮功能成分溶出，并利用DM-130大孔树脂对黄酮成分具有较好的富集作用，获得富含黄酮成分的山楂提取物。
作为本发明优选的技术方案，步骤(1)制备葛根提取物具体操作为：
葛根粗粉与10-20倍重量的水，95℃加热回流提取1h，过滤，滤渣加入5-15倍重量的水，95℃加热回流提取0.5h，过滤，合并2次提取液，加入等体积95％乙醇，过滤，收集滤液，浓缩、冷冻干燥，得葛根提取物。
更优选的技术方案为：葛根粗粉与15倍重量的水，95℃加热回流提取1h，过滤，滤渣加入10倍重量的水，95℃加热回流提取0.5h，合并2次提取液，加入等体积95％乙醇，过滤，收集滤液，浓缩、冷冻干燥，得葛根提取物。
葛根为豆科葛属植物干燥的根，根中黄酮成分丰富，其中黄酮结构以异黄酮成分为主，该类型黄酮降脂作用显著，但由于葛根中淀粉含量高，因此，本发明采用水提醇沉，有效去除淀粉、多糖等大极性成分，提高葛根提取物中功能成分含量。
作为本发明优选的技术方案，步骤(1)制备百香果提取物具体操作为：
百香果种籽粗粉与10-20倍重量的65％-85％乙醇于50℃超声波提取1h，过滤，滤渣加入5-15倍重量的65％-85％乙醇，50℃超声波提取0.5h，过滤，合并2次提取液，50℃减压回收乙醇溶剂后，往浓缩液中加入乙酸乙酯进行萃取2次，每次乙酸乙酯用量为浓缩液体积的1-2倍量，回收乙酸乙酯萃取液，50℃减压浓缩干燥，得百香果种籽提取物。
更优选的技术方案为：百香果种籽粗粉与15倍重量的75％乙醇于50℃超声波提取1h，过滤，滤渣加入10倍重量的75％乙醇，50℃超声波提取0.5h，过滤，合并2次提取液，50℃减压回收乙醇溶剂后，往浓缩液中加入乙酸乙酯进行萃取2次，每次乙酸乙酯用量为浓缩液体积的1-2倍量，回收乙酸乙酯萃取液，50℃减压浓缩干燥，得百香果种籽提取物。
百香果为西番莲属多年生藤本植物的果实，果实中的种籽含有丰富的白皮杉醇低聚物成分，而且该类成分生物活性广泛，对脂质调节具有较好疗效。白皮杉醇低聚物为二苯乙烯的衍生物，可溶于较高浓度的乙醇水溶液、乙酸乙酯等中等极性溶剂中。本发明利用相似相溶原理，采用极性相近的高浓度的乙醇溶剂将百香果种籽中的白皮杉醇低聚物提出，随后利用另外一种极性相近的乙酸乙酯溶剂，从提取液中将白皮杉醇低聚物萃取出来，进而达到进一步纯化作用，获得富含白皮杉醇低聚物的百香果种籽提取物。
本发明的又一目的是，提供上述黄花倒水莲降脂组合物在制备降脂药物、降脂保健产品中的应用。
作为本发明优选的技术方案，降脂药物、降脂保健产品为液体制剂、固体制剂或半固体制剂。
经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明公开提供了一种黄花倒水莲降脂组合物及其制备方法。本发明黄花倒水莲降脂组合物经体内外药效学研究明确，具有显著的降脂作用，且显示出很好的协同增效的作用，并且本发明原料药食同源，安全、有效。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明实施例公开了一种黄花倒水莲降脂组合物及其制备方法，所涉及的原料和试剂均为市售可得，对其来源不做具体限定。例如黄花倒水莲根粗粉可采购自广西昭平县七冲瑶山生态有限公司，山楂粗粉可采购自陕西新天地域生物科技有限公司，葛根粗粉可采购自江苏津杰食品有限公司，百香果种籽粗粉可采购自广西宏邦食品有限公司。本发明未提及的方法均为常规操作，在此不再一一赘述。
实施例1
(1)制备各提取物
a.制备黄花倒水莲提取物
取黄花倒水莲根粗粉1000g，加入15L的水，95℃加热回流提取1h，过滤，滤渣加入10L的水，95℃加热回流提取0.5h，过滤，合并2次提取液，提取液经DM-130大孔树脂柱(Φ6.5×60cm)吸附后，依次用25％乙醇8L、70％乙醇10L进行洗脱，收集70％乙醇洗脱液，60℃减压浓缩至洗脱液中无乙醇后，于-60℃冷冻干燥，得到含水率为4.2％的黄花倒水莲提取物15g。
b.制备山楂提取物
取山楂粗粉1000g，加入15L的水，95℃加热回流提取1h，过滤，滤渣加入10L的水，95℃加热回流提取0.5h，过滤，合并2次提取液，提取液经DM-130大孔树脂柱(Φ6.5×60cm)吸附后，依次以纯水8L、70％乙醇10L进行洗脱，收集70％乙醇洗脱液，60℃减压浓缩至洗脱液中无乙醇后，于-60℃冷冻干燥，得到含水率为4.5％的山楂提取物35g。
c.制备葛根提取物
取葛根粗粉1000g，加入15L的水，95℃加热回流提取1h，过滤，滤渣加入10L的水，95℃加热回流提取0.5h，过滤，合并2次提取液，加入等体积95％乙醇，过滤，收集滤液，60℃减压浓缩至提取液中无乙醇后，于-60℃冷冻干燥，即得到含水率为4.1％的葛根提取物131.2g。
d.制备百香果种籽提取物
取百香果种籽粗粉1000g，加入15L的75％乙醇，50℃超声波提取1h，过滤，滤渣加入10L的75％乙醇，50℃超声提取0.5h，过滤，合并2次提取液，50℃减压回收乙醇溶剂后，往浓缩液中加入乙酸乙酯进行萃取2次，每次乙酸乙酯用量为浓缩液体积的2倍量，回收乙酸乙酯萃取液，50℃减压浓缩干燥，即得到含水率为4.9％的百香果种籽提取物21.1g。
(2)此实施例制备方法获得的黄花倒水莲提取物、山楂提取物、葛根提取物、百香果种籽提取物，按黄花倒水莲提取物10份、山楂提取物10份、葛根提取物10份和百香果种籽提取物20份，经粉末混合器混合均匀，搅拌转速35rpm，混合时间7min，得到本实施例黄花倒水莲降脂组合物，用于体外降胆固醇效果研究和/或大鼠体内降脂效果研究。
实施例2
(1)制备各提取物
a.制备黄花倒水莲提取物
取黄花倒水莲根粗粉1000g，加入10L的水，95℃加热回流提取1h，过滤，滤渣加入5L的水，95℃加热回流提取0.5h，过滤，合并2次提取液，提取液经DM-130大孔树脂柱(Φ6.5×60cm)吸附后，依次用25％乙醇6L、65％乙醇8L进行洗脱，收集65％乙醇洗脱液，50℃减压浓缩至洗脱液中无乙醇后，于-60℃冷冻干燥，得到含水率为3.9％的黄花倒水莲提取物14.4g。
b.制备山楂提取物
取山楂粗粉1000g，加入10L的水，95℃加热回流提取1h，过滤，滤渣加入5L的水，95℃加热回流提取0.5h，过滤，合并2次提取液，提取液经DM-130大孔树脂柱(Φ6.5×60cm)吸附后，依次以纯水6L、65％乙醇8L进行洗脱，收集65％乙醇洗脱液，50℃减压浓缩至洗脱液中无乙醇后，于-60℃冷冻干燥，得到含水率为4.2％的山楂提取物34.5g。
c.制备葛根提取物
取葛根粗粉1000g，加入10L的水，95℃加热回流提取1h，过滤，滤渣加入5L的水，95℃加热回流提取0.5h，过滤，合并2次提取液，加入等体积95％乙醇，过滤，收集滤液，50℃减压浓缩至提取液中无乙醇后，于-60℃冷冻干燥，即得到含水率为4.8％的葛根提取物128.9g。
d.制备百香果种籽提取物
取百香果种籽粗粉1000g，加入10L的65％乙醇，50℃超声波提取1h，过滤，滤渣加入5L的65％乙醇，50℃超声波提取0.5h，过滤，合并2次提取液，50℃减压回收乙醇溶剂后，往浓缩液中加入乙酸乙酯进行萃取2次，每次乙酸乙酯用量为浓缩液体积的1倍量，回收乙酸乙酯萃取液，50℃减压浓缩干燥，即得到含水率为5.3％的百香果种籽提取物20.6g。
(2)此实施例制备方法获得的黄花倒水莲提取物、山楂提取物、葛根提取物、百香果种籽提取物，按黄花倒水莲提取物10份、山楂提取物10份、葛根提取物10份和百香果种籽提取物20份，经粉末混合器混合均匀，搅拌转速30rpm，混合时间6min，得到本实施例黄花倒水莲降脂组合物，用于大鼠体内降脂效果研究。
实施例3
(1)制备各提取物
a.制备黄花倒水莲提取物
取黄花倒水莲根粗粉1000g，加入20L的水，95℃加热回流提取1h，过滤，滤渣加入15L的水，95℃加热回流提取0.5h，过滤，合并2次提取液，提取液经DM-130大孔树脂柱(Φ6.5×60cm)吸附后，依次用25％乙醇8L、75％乙醇12L进行洗脱，收集75％乙醇洗脱液，65℃减压浓缩至洗脱液中无乙醇后，于-60℃冷冻干燥，得到含水率为4.0％的黄花倒水莲提取物15.7g。
b.制备山楂提取物
取山楂粗粉1000g，加入20L的水，95℃加热回流提取1h，过滤，滤渣加入15L的水，95℃加热回流提取0.5h，过滤，合并2次提取液，提取液经DM-130大孔树脂柱(Φ6.5×60cm)吸附后，依次以纯水8L、75％乙醇12L进行洗脱，收集75％乙醇洗脱液，65℃减压浓缩至洗脱液中无乙醇后，于-60℃冷冻干燥，得到含水率为4.8％的山楂提取物35.3g。
c.制备葛根提取物
取葛根粗粉1000g，加入20L的水，95℃加热回流提取1h，过滤，滤渣加入15L的水，95℃加热回流提取0.5h，过滤，合并2次提取液，加入等体积95％乙醇，过滤，收集滤液，65℃减压浓缩至提取液中无乙醇后，于-60℃冷冻干燥，即得到含水率为5.2％的葛根提取物132.5g。
d.制备百香果种籽提取物
取百香果种籽粗粉1000g，加入20L的85％乙醇，50℃超声波提取1h，过滤，滤渣加入15L的85％乙醇，50℃超声波提取0.5h，过滤，合并2次提取液，50℃减压回收乙醇溶剂后，往浓缩液中加入乙酸乙酯进行萃取2次，每次乙酸乙酯用量为浓缩液体积的2倍量，回收乙酸乙酯萃取液，50℃减压浓缩干燥，即得到含水率为5.1％的百香果种籽提取物21.8g。
(2)此实施例制备方法获得的黄花倒水莲提取物、山楂提取物、葛根提取物、百香果种籽提取物，按黄花倒水莲提取物10份、山楂提取物10份、葛根提取物10份和百香果种籽提取物20份，经粉末混合器混合均匀，搅拌转速40rpm，混合时间8min，得到本实施例黄花倒水莲降脂组合物，用于大鼠体内降脂效果研究。
实施例4
按照实施例1方法获得的黄花倒水莲提取物、山楂提取物、葛根提取物、百香果种籽提取物，以黄花倒水莲提取物10份、山楂提取物10份、葛根提取物10份和百香果种籽提取物10份混合均匀，得到本实施例黄花倒水莲降脂组合物，用于体外降胆固醇效果研究。
实施例5
按照实施例1方法获得的黄花倒水莲提取物、山楂提取物、葛根提取物、百香果种籽提取物，以黄花倒水莲提取物10份、山楂提取物10份、葛根提取物20份和百香果种籽提取物10份混合均匀，得到本实施例黄花倒水莲降脂组合物，用于体外降胆固醇效果研究。
实施例6
按照实施例1方法获得的黄花倒水莲提取物、山楂提取物、葛根提取物、百香果种籽提取物，以黄花倒水莲提取物10份、山楂提取物20份、葛根提取物10份和百香果种籽提取物10份混合均匀，得到本实施例黄花倒水莲降脂组合物，用于体外降胆固醇效果研究。
实施例7
按照实施例1方法获得的黄花倒水莲提取物、山楂提取物、葛根提取物、百香果种籽提取物，以黄花倒水莲提取物20份、山楂提取物10份、葛根提取物10份和百香果种籽提取物10份混合均匀，得到本实施例黄花倒水莲降脂组合物，用于体外降胆固醇效果研究。
实施例8
按照实施例1方法获得的黄花倒水莲提取物、山楂提取物、葛根提取物、百香果种籽提取物，以黄花倒水莲提取物10份、山楂提取物10份、葛根提取物10份和百香果种籽提取物30份混合均匀，得到本实施例黄花倒水莲降脂组合物，用于体外降胆固醇效果研究。
对比例1
(1)制备各提取物
a.制备黄花倒水莲水提取物
取黄花倒水莲根粗粉1000g，加入15L的水，95℃加热回流提取1h，过滤，滤渣加入10L的水，95℃加热回流提取0.5h，过滤，合并2次提取液，60℃减压浓缩至500mL的浓缩液后，-60℃冷冻干燥，得到含水率为5.1％的黄花倒水莲水提取物180.5g。
b.制备山楂水提取物
取山楂粗粉1000g，加入15L的水，95℃加热回流提取1h，过滤，滤渣加入10L的水，95℃加热回流提取0.5h，过滤，合并2次提取液，60℃减压浓缩至500mL的浓缩液后，-60℃冷冻干燥，得到含水率为4.5％的山楂水提取物225.4g。
c.制备葛根水提取物
取葛根粗粉1000g，加入15L的水，95℃加热回流提取1h，过滤，滤渣加入10L的水，95℃加热回流提取0.5h，过滤，合并2次提取液，60℃减压浓缩至500mL的浓缩液后，-60℃冷冻干燥，得到含水率为4.7％的葛根水提取物312.5g。
d.制备百香果种籽醇提取物
取百香果种籽粗粉1000g，加入15L的75％乙醇，50℃超声波提取1h，过滤，滤渣加入10L的75％乙醇，50℃超声波提取0.5h，过滤，合并2次提取液，50℃减压浓缩至干，即得到含水率为5.2％的百香果种籽醇提取物76.2g。
(2)此对比例制备方法制备的黄花倒水莲水提取物、山楂水提取物、葛根水提取物、百香果种籽醇提取物，按黄花倒水莲提取物10份、山楂提取物10份、葛根提取物10份和百香果种籽提取物20份，经粉末混合器混合均匀，搅拌转速35rpm，混合时间7min，得到本对比例组合物，用于体外降胆固醇效果研究和/或大鼠体内降脂效果研究。
对比例2
按照实施例1方法获得的黄花倒水莲提取物，得到本对比例组合物，用于体外降胆固醇效果研究。
对比例3
按照实施例1方法获得的山楂提取物，得到本对比例组合物，用于体外降胆固醇效果研究。
对比例4
按照实施例1方法获得的葛根提取物，得到本对比例组合物，用于体外降胆固醇效果研究。
对比例5
按照实施例1方法获得的百香果种籽提取物，得到本对比例组合物，用于体外降胆固醇效果研究。
对比例6
按照实施例1方法获得的黄花倒水莲提取物、山楂提取物，以黄花倒水莲提取物10份、山楂提取物10份混合均匀，得到本对比例组合物，用于体外降胆固醇效果研究。
对比例7
按照实施例1方法获得的黄花倒水莲提取物、山楂提取物，以黄花倒水莲提取物20份、山楂提取物10份混合均匀，得到本对比例组合物，用于体外降胆固醇效果研究。
对比例8
按照实施例1方法获得的黄花倒水莲提取物、山楂提取物，以黄花倒水莲提取物10份、山楂提取物20份混合均匀，得到本对比例组合物，用于体外降胆固醇效果研究。
对比例9
按照实施例1方法获得的黄花倒水莲提取物、山楂提取物、葛根提取物，以黄花倒水莲提取物10份、山楂提取物10份、葛根提取物10份混合均匀，得到本对比例组合物，用于体外降胆固醇效果研究。
对比例10
按照实施例1方法获得的黄花倒水莲提取物、山楂提取物、葛根提取物，以黄花倒水莲提取物20份、山楂提取物10份、葛根提取物10份混合均匀，得到本对比例组合物，用于体外降胆固醇效果研究。
对比例11
按照实施例1方法获得的黄花倒水莲提取物、山楂提取物、葛根提取物，以黄花倒水莲提取物10份、山楂提取物20份、葛根提取物10份混合均匀，得到本对比例组合物，用于体外降胆固醇效果研究。
对比例12
按照实施例1方法获得的黄花倒水莲提取物、山楂提取物、葛根提取物，以黄花倒水莲提取物10份、山楂提取物10份、葛根提取物20份混合均匀，得到本对比例组合物，用于体外降胆固醇效果研究。
安全性试验
急性毒性研究
本发明所使用的材料均为药食两用植物，食用安全。采用食品安全国家标准急性经口毒性试验(GB15193.3-2014)中的限量法对本发明组合物的安全性进行评价。
1.样品溶液配制
取本发明实施例1黄花倒水莲降脂组合物，用0.1％的羧甲基纤维素水溶液配成1g/mL的样品溶液。
2.实验动物
健康的SPF级SD大鼠(180-220g)40只，雌雄各半，由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供，实验动物生产许可证SCXK(湘)2016-0002。
3.动物分组与实验
将SD大鼠适应性喂养1周后，实验动物分空白组和给药组，空白组和给药组再分别分为雌雄两个小组，每小组各10只大鼠，按急性毒性剂量分级，给药组动物将给予10g/kg·d的灌胃剂量，空白组动物灌胃给予相应的纯净水。动物在给药前16小时禁食，饮水不受限，2周内观察动物情况。
4.结果
试验观察期间，与空白组动物相比较，给药组动物经口给予10g/kg·d的剂量下，动物生长正常如表1所示，无中毒现象，2周内无一例死亡。根据急性毒性剂量分级标准(GB15193.3-2014)，本发明的组合物属于无毒级。
表1本发明组合物对大鼠体重的影响
Figure BDA0002732707730000131
Figure BDA0002732707730000132
效果试验1
体外降胆固醇效果
1.样品制备
表2中阳性对照洛伐他汀用DMSO溶解，配成浓度为10mg/mL的阳性对照母液，其他各实施例组合物和各对比例组合物用DMSO溶解，配成浓度为200mg/mL的样品母液，置于4℃保存，备用。
2细胞培养
将HepG2细胞复苏并传代培养，使用添加10％胎牛血清(FBS)的DMEM完全培养基培养细胞。将生长状态良好的细胞制成密度约为1×10^5个/mL的单细胞悬液，进行后续实验。
3给药处理
将单细胞悬液，按每孔0.5mL接种到24孔细胞培养板中。细胞置于5％二氧化碳37℃的培养箱中培养12小时。然后，将培养液换成含2％胎牛血清的DMEM，并用表2中各样品母液和阳性对照母液进行不同浓度处理，各样品终浓度分别为10、20、40、80、160、200μg/mL，阳性对照(洛伐他汀)终浓度分别为1、2、4、6、8、10μg/mL。给药处理24小时后，去掉培养液，并用PBS对细胞清洗两遍。用裂解液对细胞进行裂解，收集裂解物，4℃，12000r/min离心10分钟，取上清液。
4总胆固醇含量测定
根据细胞内总胆固醇检测试剂盒说明书(北京普利莱基因技术有限公司，货号：E1015)，测定上清液中的总胆固醇含量，并用BCA法定量裂解液中的总蛋白质含量。细胞内的总胆固醇的含量归一化为裂解液中每含有1g蛋白质的同时含有的胆固醇量，结果如表2。
表2
Figure BDA0002732707730000141
由表2可知，经本发明工艺提取得到的各种提取物，能够显著降低细胞内的总胆固醇，其中，实施例1黄花倒水莲降脂组合物体现出很好的协同增效作用。
效果试验2
体内降脂效果
1.实验动物
健康的SPF级SD大鼠(雄性)70只，由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供，实验动物生产许可证SCXK(湘)2016-0002。
2.高脂血症大鼠模型的建立
将SD大鼠适应性喂养1周后，根据体重随机分成2组，空白组(10只)和高脂血症造模组(60只)。空白组动物从实验开始至结束用普通饲料喂养，高脂血症造模组动物均以高脂、高胆固醇饲料喂养，12周后，尾尖取血，高脂血症造模组动物血清中总胆固醇(TC)含量、甘油三酯(TG)含量分别3.85±0.33、2.02±0.19mmol/L，空白组动物血清中TC、TG的含量分别2.22±0.15、1.35±0.18mmol/L，此时，造模组血清中TC、TG的含量比空白组的显著增高，判定高脂血症大鼠模型建成。
3.动物分组及实验
上述高脂血症造模组大鼠进一步随机平均分成模型组、阳性对照组、对比例组、实验1组、实验2组和实验3组，每组10只。给药期间，阳性对照组给予洛伐他汀，4mg/kg.d；实验1组给予实施例1组合物，400mg/kg.d；试验2组给予实施例2组合物，400mg/kg.d；实验3组给予实施例3组合物，400mg/kg.d；对比例组给予对比例1组合物，400mg/kg.d；空白组和模型组给予相同体积的纯水。给药期间，空白组给予普通饲料，其他组给予高脂高胆固醇饲料。给药30d，末次给药后禁食12h，以3％戊巴比妥钠(1.2mL/kg)腹腔注射麻醉，腹主动脉取血。3000rpm离心10min，取上层血清，用全自动生化分析仪检测TC、TG的含量。
4.实验结果
与模型组相比较，本发明的组合物显示出更好的降脂作用，而且降脂效与阳性对照的作用相当，结果如表3所示(n＝10)。
表3
Figure BDA0002732707730000151
Figure BDA0002732707730000161
综上所述，本发明的组合物在体内外均显示出较好的降脂作用，该组合物可为降脂药物或保健产品开发提供高效低毒的理想候选组合物。
本说明书中各个实施例采用递进的方式描述，每个实施例重点说明的都是与其他实施例的不同之处，各个实施例之间相同相似部分互相参见即可。
对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。

Claims (4)

1.一种黄花倒水莲降脂组合物，其特征在于，由以下重量份成分组成：黄花倒水莲提取物10 份、山楂提取物10 份、葛根提取物10份和百香果种籽提取物20 份；
其中，所述黄花倒水莲提取物的制备方法为黄花倒水莲根粗粉与10-20 倍重量的水，95℃加热回流提取1h，过滤，滤渣加入5-15 倍重量的水，95℃加热回流提取0.5h，过滤，合并2 次提取液，提取液经DM-130 大孔树脂吸附后，依次以25%乙醇、65%-75%乙醇进行洗脱，收集65%-75%乙醇洗脱液，浓缩、冷冻干燥，得黄花倒水莲提取物；
所述山楂提取物的制备方法为山楂粗粉与10-20 倍重量的水，95℃加热回流提取1h，过滤，滤渣加入5-15 倍重量的水，95℃加热回流提取0.5h，过滤，合并2 次提取液，提取液经DM-130 大孔树脂吸附后，依次以纯水、65%-75%乙醇进行洗脱，收集65%-75%乙醇洗脱液，浓缩、冷冻干燥，得山楂提取物；
所述葛根提取物的制备方法为葛根粗粉与10-20 倍重量的水，95℃加热回流提取1h，过滤，滤渣加入5-15 倍重量的水，95℃加热回流提取0.5h，过滤，合并2 次提取液，加入等体积95%乙醇，过滤，收集滤液，浓缩、冷冻干燥，得葛根提取物；
所述百香果种籽提取物的制备方法为百香果种籽粗粉与10-20 倍重量的65%-85%乙醇于50℃超声波提取1h，过滤，滤渣加入5-15 倍重量的65%-85%乙醇，50℃超声波提取0.5h，过滤，合并2 次提取液，50℃减压回收乙醇溶剂后，往浓缩液中加入乙酸乙酯进行萃取2次，每次乙酸乙酯用量为浓缩液体积的1-2 倍量，回收乙酸乙酯萃取液，50℃减压浓缩干燥，即得百香果种籽提取物。
2.权利要求1 所述的一种黄花倒水莲降脂组合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）分别制备黄花倒水莲提取物、山楂提取物、葛根提取物和百香果种籽提取物；
（2）按配比称取所述黄花倒水莲提取物、山楂提取物、葛根提取物和百香果种籽提取物，混合均匀，得黄花倒水莲降脂组合物。
3.权利要求1 所述黄花倒水莲降脂组合物在制备降脂药物、降脂保健产品中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，所述降脂药物、降脂保健产品为液体制剂、固体制剂或半固体制剂。
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