CN110960569A - 一种余甘子提取物及其制备方法和应用 - Google Patents

一种余甘子提取物及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种余甘子提取物，所述的余甘子提取物包括没食子酸和葡糖倍苷，所述的没食子酸和葡糖倍苷的总质量为所述的余甘子提取物总质量的50％及以上。本发明的余甘子提取物中的没食子酸和葡糖倍苷的含量高，能够更好的降低尿酸，且本发明的余甘子提取物的制备方法简单，可作为潜在降尿酸药物用于高尿酸血症的治疗。

Description

一种余甘子提取物及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及一种余甘子提取物及其制备方法和应用。
背景技术
痛风是长期嘌呤代谢障碍，血尿酸增高引起组织损伤的一组异质性疾病。临床特点是：高尿酸血症(hyperuricemia，HUA)，急性痛风性关节炎反复发作，痛风石沉淀，特征性慢性关节炎和关节畸形，常累及肾引起慢性间质性肾炎和肾尿酸结石形成，重者可出现关节残疾和肾功能不全。上述表现可单独或联合存在。近年来，随着饮食结构的变化，痛风和高尿酸血症的患病率增加显著，现在已经有人将高尿酸血症列为除高血压，高血脂，高血糖之外的“第四高”，正在引起越来越多患者和医药厂商的重视。
目前，痛风的药物治疗可分为间歇期和慢性期的降尿酸治疗以及痛风的急性期治疗。间歇期和慢性期的降尿酸药物治疗中，降尿酸药物主要有三大类：一是抑制尿酸的生成，常用药物为别嘌醇和非布司他。二是促进尿酸的排泄，常用药物为丙磺舒，苯溴马隆。三是尿酸酶类药物，如拉布立酶。而痛风急性期药物治疗的主要目的是控制症状，常用药物如非甾体消炎药，秋水仙碱等。上述药物在痛风治疗中应用广泛，取得了一定的治疗效果，但是服用药物后的不良反应以及毒副作用较多，引起肝肾功能损害、弥漫性血管炎和多脏器损害等，严重者甚至会引起患者死亡，妨碍了痛风以及高尿酸血症的治疗进展。高效低毒的抗痛风和高尿酸血症药物依然是目前药学研究的一个热点，中医药的应用将成为新的突破口和研究重点。
余甘子是大戟科植物Phyllanthus emblica L.的干燥成熟果实，主要分布在福建、广东、云南等地，为传统的民族药，在我国已经有1800年的药用历史，被中国药典收录，主要用于治疗口干咳嗽、消化不良、腹痛、慢性肝炎、肠胃炎、高血脂等症[李秀丽，叶峰，俞腾飞.余甘子的药理研究进展[J].时珍国医国药，2006，17(2):266‐267.]。在印度、斯里兰卡等东南亚地区，余甘子被广泛使用，在医药体系中具有很高的地位[刘延泽，李海霞，许利嘉等.药食兼用余甘子的现代研究概述及应用前景分析[J].中草药，2013,44(12):1700‐1705.]。由于其良好的药用价值和极高的营养价值，国家卫生部将余甘子列入首批药食同源名单。近年来余甘子的药理研究集中在抗菌、抗氧化、抗肿瘤等领域[何晓敏.余甘子药理作用研究进展[J].中国中医药科技，2014,21(5):593‐595.]。
发明内容
本发明的目的是提供一种有效成分含量高的余甘子提取物及其制备方法和应用。
为解决以上技术问题，本发明采用如下技术方案：
本发明的一个目的是提供一种余甘子提取物，所述的余甘子提取物包括没食子酸和葡糖倍苷，所述的没食子酸和葡糖倍苷的总质量为所述的余甘子提取物总质量的50％及以上。
优选地，所述的没食子酸的质量为所述的余甘子提取物总质量的10％及以上，进一步优选为14％及以上。
优选地，所述的葡糖倍苷的质量为所述的余甘子提取物总质量的35％及以上，进一步优选为39％及以上。
本发明的另一个目的是提供一种所述的余甘子提取物的制备方法，将余甘子药材投入设备中，加入质量为所述的余甘子药材质量7～10倍的纯化水，在75～100℃下提取1.8～3h，收集第一提取液；再加入质量为所述的余甘子药材质量7～10倍的纯化水，在75～100℃下提取 0.8～1.5h，收集第二提取液；将所述的第一提取液和所述的第二提取液合并，然后在0.05～0.06 大气压、45～55℃下减压浓缩至相对密度为1.01～1.04，得到浓缩液；再将所述的浓缩液在12000 ～16000rpm离心，取上清液以0.8～1.2Bv/h的速度上D101树脂柱，以纯化水洗脱，收集第 1.4～4Bv洗脱液，减压浓缩、干燥得到所述的余甘子提取物。
本发明的第三个目的是提供一种所述的余甘子提取物在制备治疗高尿酸血症和/或痛风药物中的应用。
本发明的第四个目的是提供一种药物组合物，其包括所述的余甘子提取物和药学上可接受的辅料。
优选地，所述的余甘子提取物的质量百分含量为40～80％。
优选地，所述的药学上可接受的辅料包括胶质、淀粉类、糖、纤维素材料、西黄蓍胶粉、麦芽、滑石粉、油、醇类、酯类、缓冲剂、褐藻酸、水、林格氏液中的一种或多种。
优选地，所述的药学上可接受的辅料包括质量百分含量为40～50％的微晶纤维素、质量百分含量为2～8％的羧甲基淀粉钠、质量百分含量为0.5～1.5％的硬脂酸镁。
优选地，所述的药物组合物为胶囊剂、片剂、丸剂、颗粒剂、膏剂、合剂或混悬剂。
由于以上技术方案的实施，本发明与现有技术相比具有如下优势：
本发明的余甘子提取物中的没食子酸和葡糖倍苷的含量高，能够更好的降低尿酸，且本发明的余甘子提取物的制备方法简单，可作为潜在降尿酸药物用于高尿酸血症的治疗。
附图说明
图1为W3供试品的液相色谱图；
图2为没食子酸标准品的液相色谱图；
图3为葡糖倍苷标准品的液相色谱图。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明做进一步详细说明。应理解，这些实施例是用于说明本发明的基本原理、主要特征和优点，而本发明不受以下实施例的限制。实施例中采用的实施条件可以根据具体要求做进一步调整，未注明的实施条件通常为常规实验中的条件。
余甘子药材购于安国市一方中药材有限公司；
D101大孔树脂购于天津农药股份有限公司树脂分公司；
没食子酸标准品，购自中国食品药品检定研究总院；
葡糖倍苷标准品，购自上海纯优生物科技有限公司。
实施例1余甘子活性成分制备及没食子酸及葡糖倍苷含量检测
余甘子活性成分W1的制备
提取工艺：将50kg余甘子药材投入多功能提取罐中，分别加入350kg纯化水进行两次提取，每次提取温度为75℃，提取时间分别为3h和1.5h，过滤，药渣弃去，合并提取液，在0.05～0.06大气压，50℃下减压浓缩至相对密度1.01～1.03，所得浓缩液12000rpm离心，取上清液以0.8Bv/h的速度上D101树脂柱(柱体积200L，分三次上样)，以4倍柱体积的量用纯化水洗脱，前1.3Bv洗脱液弃去，收集1.4～3.8Bv洗脱液，减压浓缩，干燥，粉碎，得余甘子活性成分W1质量为2.23kg，得率4.46％。
余甘子活性成分W2的制备
提取工艺：将50kg余甘子药材投入多功能提取罐中，分别加入500kg纯化水进行两次提取，每次提取温度为85℃，提取时间分别为2.5h和1.2h，过滤，药渣弃去，合并提取液，在0.05～0.06大气压，50℃下减压浓缩至相对密度1.02～1.04，14000rpm离心，取上清液以1.2Bv/h的速度上D101树脂柱(柱体积200L，分三次上样)，以4倍柱体积的量用蒸馏水洗脱，前1.7Bv洗脱液弃去，收集1.8～4Bv洗脱液，减压浓缩，干燥，粉碎，得余甘子活性成分 W2质量为2.42kg，得率4.84％。
余甘子活性成分W3的制备
提取工艺：将50kg余甘子药材投入多功能提取罐中，分别加入400kg纯化水，煎煮2次，分别为1.8h和0.8h，过滤，药渣弃去，合并提取液，在0.05～0.06大气压，50℃下减压浓缩至相对密度1.02～1.03，16000rpm离心，取上清液以1Bv/h的速度上D101树脂柱(柱体积200L，分三次上样)，先以4倍柱体积的量蒸馏水洗脱，前1.5Bv洗脱液弃去，收集1.5～4Bv洗脱液，减压浓缩，干燥，粉碎，得余甘子活性成分W3质量为2.38kg，得率4.76％。
W1，W2，W3没食子酸及葡糖倍苷含量的液相检测
对照品溶液的制备：分别精密称取没食子酸、葡糖倍苷对照品适量，加50％甲醇超声溶解并定容，摇匀，制得每1mL含没食子酸118μg、葡糖倍苷227μg的对照品溶液。
供试品溶液的制备：取W1，W2，W3各供试品5.9mg，精密称定，分别放至10mL容量瓶中，加50％乙醇超声溶解，定容，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法：分别精密吸取对照品混合标准溶液或供试品溶液各5μL，注入液相色谱仪，测定，记录色谱图，即得。
液相图谱检测条件如下：
液相色谱仪：Agilent 1290UPLC
色谱柱：ZORBAX Eclipse XDB‐C18(4.6mm×150mm 5μm)色谱柱；
流动相：流动相A：水相(添加36％的乙酸，添加量为2％)；流动相B：甲醇；
柱温：30℃；
流速：0.8mL/min；
检测波长：273nm；
进样量：5μL
洗脱方式：梯度洗脱，洗脱梯度如下：
时间(min) 流动相A(％) 流动相B(％)
0 95 5
3 95 5
10 50 50
11 10 90
11.5 95 5
16 95 5
表1余甘子活性成分W1、W2、W3中没食子酸和葡糖倍苷的含量
Figure BDA0001819113750000041
Figure BDA0001819113750000051
本发明制备的余甘子活性成分W1，W2，W3中的没食子酸和葡糖倍苷的含量如表1所示，由表1中数据可知，本发明提取方案在提取率及没食子酸和葡糖倍苷含量方面均优于对比例中使用乙醇提取的方案获得的余甘子乙醇提取物E1(没食子酸含量为9.86％，葡糖倍苷含量为24.51％，没食子酸+葡糖倍苷为35.37％，见对比例1)。其中余甘子活性成分W3及没食子酸标准品，葡糖倍苷标准品的液相色谱图如图1至图3所示。
实施例2余甘子活性成分片剂的制备
【处方】
Figure BDA0001819113750000052
【制法】
取200g余甘子活性成分W3，加微晶纤维素180g，羧甲基淀粉钠16g，硬脂酸镁4g，混匀，压片，制成1000片，包衣，包装，即得。
本发明的余甘子活性成分还可用常规辅料制成临床上应用的各种剂型例如胶囊剂、片剂、丸剂、颗粒剂、膏剂、合剂、混悬剂等。
本领域技术人员可以使用本领域中已知的任何方式施用本发明的余甘子活性成分，包括但不限于口服、经鼻、胃肠外、局部、经皮或直肠的施用途径。本发明的药物组合物优选适用于口服或局部施用的剂型，例如，片剂、胶囊(包括硬胶囊、软胶囊)、丸剂、溶液、粉末或粒料、悬浮液、贴片等。且本发明的余甘子活性成分可以采用本领域中公知的方法制为相应剂型。
对比例1：余甘子乙醇提取物E1的制备
提取工艺取余甘子药材1kg，分别加入8kg 70％乙醇，于65℃下提取两次，分别为2h 和1h，滤液合并，减压浓缩干燥，获得余甘子浸膏480.5g。取300g浸膏，用纯化水溶解后，经D101大孔树脂(4L)分离，水洗脱4BV，弃去第一个柱体积，收集2‐4BV，减压浓缩，干燥，粉碎过60目筛，得余甘子提取物E1质量为30.5g，得率为3.05％。使用实施例1中的液相检测方法，没食子酸含量为9.86％，葡糖倍苷含量为24.51％，没食子酸+葡糖倍苷为35.37％。
实验例1余甘子活性成分对高尿酸血症小鼠血清尿酸的影响
订购3周大的雄性昆明小鼠，由上海灵畅生物科技有限公司提供，按体重随机分成9组，每组12只，设立空白对照组、高尿酸血症模型组、别嘌醇阳性药物组(60mg·kg‐1)、余甘子提物E1组(400mg·kg‐1)、活性成分W1组(400mg·kg‐1)、活性成分W2组(400mg·kg‐1)、活性成分W3组(400mg·kg‐1)，没食子酸对照品(400mg·kg‐1)，葡糖倍苷对照品(400mg·kg‐1)。空白对照组和高尿酸血症模型组分别灌胃生理盐水，其余各组按照设计的供试品剂量灌胃给药，每天一次，连续给药7天，记录各组动物体重。末次给药前0.5h腹腔注射氧嗪酸钾，剂量为300mg·kg‐1，空白对照组腹腔注射0.5％羧甲基纤维素钠(CMCA)，1.5h后摘眼球采血，血样采集后于室温放置约1h，待血液完全凝固后于3500r·min‐1、4℃条件下离心10min，取血清用生化分析仪检测血清尿酸含量，结果见表2。
表2余甘子提取物对高尿酸血症模型小鼠血清尿酸含量的影响
Figure BDA0001819113750000061
(注：*：与模型组比，P<0.05；**表示和模型组相比P<0.01；***表示和模型组相比P<0.001；###表示和空白对照组相比P<0.001)
由表2结果可知，余甘子活性成分W1，W2，W3能够非常显著的降低患有高尿酸血症小鼠的血清尿酸水平(和模型组相比P<0.001)，降尿酸效果和阳性对照别嘌醇相当，且降尿酸效果优于对比例的余甘子乙醇提取物E1、没食子酸单体及葡糖倍苷单体，可能是本发明余甘子活性成分中活性单体相互协同作用从而达到了更佳的降尿酸效果，本发明余甘子活性成分可作为潜在降尿酸药物用于高尿酸血症的治疗。
上述实施例只为说明本发明的技术构思及特点，其目的在于让熟悉此项技术的人士能够了解本发明的内容并据以实施，并不能以此限制本发明的保护范围，凡根据本发明精神实质所作的等效变化或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种余甘子提取物，其特征在于：所述的余甘子提取物包括没食子酸和葡糖倍苷，所述的没食子酸和葡糖倍苷的总质量为所述的余甘子提取物总质量的50％及以上。
2.根据权利要求1所述的余甘子提取物，其特征在于：所述的没食子酸的质量为所述的余甘子提取物总质量的10％及以上。
3.根据权利要求1所述的余甘子提取物，其特征在于：所述的葡糖倍苷的质量为所述的余甘子提取物总质量的35％及以上。
4.一种如权利要求1至3中任一项所述的余甘子提取物的制备方法，其特征在于：将余甘子药材投入设备中，加入质量为所述的余甘子药材质量7～10倍的纯化水，在75～100℃下提取1.8～3h，收集第一提取液；再加入质量为所述的余甘子药材质量7～10倍的纯化水，在75～100℃下提取0.8～1.5h，收集第二提取液；将所述的第一提取液和所述的第二提取液合并，然后在0.05～0.06大气压、45～55℃下减压浓缩至相对密度为1.01～1.04，得到浓缩液；再将所述的浓缩液在12000～16000rpm离心，取上清液以0.8～1.2Bv/h的速度上D101树脂柱，以纯化水洗脱，收集第1.4～4Bv洗脱液，减压浓缩、干燥得到所述的余甘子提取物。
5.一种如权利要求1至3中任一项所述的余甘子提取物在制备治疗高尿酸血症和/或痛风药物中的应用。
6.一种药物组合物，其特征在于：其包括权利要求1至3中任一项所述的余甘子提取物和药学上可接受的辅料。
7.根据权利要求6所述的药物组合物，其特征在于：所述的余甘子提取物的质量百分含量为40～80％。
8.根据权利要求6所述的药物组合物，其特征在于：所述的药学上可接受的辅料包括胶质、淀粉类、糖、纤维素材料、西黄蓍胶粉、麦芽、滑石粉、油、醇类、酯类、缓冲剂、褐藻酸、水、林格氏液中的一种或多种。
9.根据权利要求6所述的药物组合物，其特征在于：所述的药学上可接受的辅料包括质量百分含量为40～50％的微晶纤维素、质量百分含量为2～8％的羧甲基淀粉钠、质量百分含量为0.5～1.5％的硬脂酸镁。
10.根据权利要求6所述的药物组合物，其特征在于：所述的药物组合物为胶囊剂、片剂、丸剂、颗粒剂、膏剂、合剂或混悬剂。
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