CN111317750A - 番荔枝种子总内酯在制备防治糖尿病的药物中的应用 - Google Patents

番荔枝种子总内酯在制备防治糖尿病的药物中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了番荔枝种子总内酯及其番荔枝内酯单体化合物在制备防治糖尿病及其糖尿病肾病的药物中的应用。本发明通过大量实验筛选，结果表明番荔枝总内酯及其番荔枝内酯单体化合物可降低糖尿病肾病大鼠空腹血糖功效，且能显著降低糖尿病肾病大鼠血清肌酐、尿素氮和尿蛋白的含量，具有很好的降血糖和保护肾脏的作用。

Description

番荔枝种子总内酯在制备防治糖尿病的药物中的应用
技术领域
本发明属中药制药领域，具体涉及一种番荔枝种子总内酯在制备防治糖尿病的药物中的应用。
背景技术
糖尿病是一种全球性的常见病和多发病，已成为继肿瘤和心血管疾病之后的第三大疾病。临床上常见的有糖尿病性心脏病和糖尿病肾病。目前治疗糖尿病及其并发症的药物较多，临床上使用的西药，虽具有一定的疗效，但多数存在较大的不良反应，如出现停药后反弹，患者肝肾损害、横纹肌融解症等副作用，治标不治本。
番荔枝(Annona squamosa)是番荔枝科(Annonaceae)植物番荔枝属植物，在我国南方广东，广西，云南和海南等地有大范围栽种，番荔枝的种子是人们食用番荔枝果实后的丢弃物，未得到深加工应用，且污染环境。番荔枝内酯药理实验表明具有强大抗癌、杀虫、杀寄生虫、抗菌等药理活性，在过去的近30年里，国内外学者从番荔枝科植物中共分离得到了近500个番荔枝内酯化合物，目前研究主要是集中在番荔枝内酯抗肿瘤活性上，目前还没有报道番荔枝种子总内酯在治疗糖尿病及其糖尿病肾病中的应用。
发明内容
发明目的：本发明的目的是对番荔枝种子中的番荔枝内酯活性进行系统深入研究，开发出番荔枝内酯在防治糖尿病及其糖尿病肾病中的新用途。本发明可充分利用食用丢弃的番荔枝种子成分，开发出其新的临床用途，具有重要的意义。
技术方案：为了实现本发明的目的是通过如下技术方案实现的：
番荔枝种子总内酯在制备防治糖尿病的药物中的应用。
番荔枝种子总内酯在制备防治糖尿病肾病的药物中的应用。
作为优选方案，以上所述的应用，所述的番荔枝种子总内酯的制备方法为：取番荔枝种子，加入有机溶剂，提取，过滤，浓缩得到。
作为优选方案，以上所述的应用，所述的番荔枝种子总内酯的制备方法为：取番荔枝种子，粉碎，加入乙醇，采用超声、回流或连续回流提取，过滤，浓缩得到，浓缩物，上大孔吸附树脂柱，先用乙醇洗脱，然后用氯仿洗脱，收集氯仿洗脱部位，浓缩得到番荔枝种子总内酯。
作为优选方案，以上所述的应用，所述的番荔枝种子总内酯的制备方法为：
取番荔枝种子，粉碎过80目筛，采用超临界CO2萃取番荔枝种子中番荔枝内酯；最佳提取工艺为压力25Mpa，萃取温度35℃，萃取时间3小时，夹带剂为乙醇，乙醇用量是药材用量的20％。
作为优选方案，以上所述的应用，所述的番荔枝种子总内酯包括邻位四氢呋喃番荔枝内酯、间位四氢呋喃番荔枝内酯和单四氢呋喃番荔枝内酯。
番荔枝内酯化合物在制备防治糖尿病的药物中的应用。
番荔枝内酯化合物在制备防治糖尿病肾病的药物中的应用。
作为优选方案，以上所述的应用，所述的番荔枝内酯化合物为bullatacin，desacetyluvaricin，Isodesacetyluvaricin，motrilin，squamocin，squamostatin A，squamostatin-D，murisolin、uvarigrandin A或annoglaxin中的一个或多个的混合物。结构式分别如下：
(1)bullatacin：
Figure BDA0002385267360000021
(2)desacetyluvaricin
Figure BDA0002385267360000022
(3)Isodesacetyluvaricin
Figure BDA0002385267360000023
(4)motrilin
Figure BDA0002385267360000024
(5)squamocin
Figure BDA0002385267360000031
(6)squamostatinA
Figure BDA0002385267360000032
(7)squamostatin-D
Figure BDA0002385267360000033
(8)murisolin
Figure BDA0002385267360000034
(9)Annoglaxin
Figure BDA0002385267360000035
(10)uvarigrandin A
Figure BDA0002385267360000036
作为优选方案，以上所述的应用，将番荔枝内酯化合物与药学上可接受的载体制备成片剂、颗粒剂、胶囊剂、丸剂、口服液、合剂或浸膏剂的药物。
有益效果：本发明提供的具有治疗糖尿病肾病的番荔枝内酯具有以下优点：
本发明提供的具有治疗糖尿病的番荔枝内酯，通过大量实验筛选，结果表明，番荔枝内酯可降低糖尿病肾病大鼠空腹血糖功效，且能显著降低糖尿病肾病大鼠血清肌酐、尿素氮和尿蛋白的含量，具有很好的降血糖和保护肾脏的作用。
另外通过不同单体实验结果表明，双四氢呋喃番荔枝内酯的降糖活性强于单四氢呋喃番荔枝内酯的将血糖活性，且相邻四氢呋喃番荔枝内酯的降糖活性强于间位四氢呋喃番荔枝内酯的将血糖活性。
本发明可拓宽番荔枝种子的临床活性，为其临床应用提供更多的选择，且对环境保护具有重要的意义。
具体实施方式
根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的具体的物料配比及其结果仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
以下实施例所用的番荔枝内酯单体化合物bullatacin，squamostatinA，murisolin均为实验室自制，纯度为98％以上。
实施例1
一种具有治疗糖尿病肾病的番荔枝内酯的制备方法，其包括以下步骤：
取番荔枝种子，粉碎过80目筛，加入番荔枝种子重量10倍体积量的乙醇，采用回流提取2次，每次2小时，过滤，合并滤液，浓缩，得浓缩物，上大孔D101大孔树脂柱，先用10％乙醇洗脱6倍柱体积，再用50％乙醇洗脱6倍柱体积，然后再用氯仿洗脱10倍柱体积，收集氯仿洗脱部位，浓缩得到番荔枝种子番荔枝总内酯。
实施例2
一种具有治疗糖尿病肾病的番荔枝内酯的制备方法，其包括以下步骤：
取番荔枝种子，粉碎过80目筛，采用超临界CO2萃取番荔枝种子中番荔枝内酯；超临界CO2萃取工艺为压力25Mpa，萃取温度35℃，萃取时间3小时，夹带剂为乙醇，乙醇用量是药材用量的20％。
实施例3降血糖、降血脂以及保护肾损伤实验
1、受试药物：
实施例1制备得到的番荔枝总内酯，化合物bullatacin，squamostatin和Amurisolin；
2、实验方法：
(1)、取SD大鼠，体重(220±20)g，雄性屏障环境大鼠(SPF级)，适应性饲养5天，实验期间空白组10只大鼠一直喂养常规饲料，其余大鼠一直喂养高糖高脂及0.5％葡萄糖水，3周后，按30mg/kg连续3天腹腔内注射STZ，高糖高脂及葡萄糖水继续喂养4天后，大鼠禁食不禁水，12h后尾静脉取血测定空腹血糖，以血糖值高于13mmol/L为造模成功。将造模成功的糖尿病大鼠根据空腹血糖水平随机分为正常组、模型组，实施例1制备得到的番荔枝总内酯，化合物bullatacin，squamostatinA和murisolin高低剂量组，每组10只。分别连续15天灌胃实施例1番荔枝总内酯(2g/kg·d)、bullatacin高、低剂量组(0.2g/kg·d和0.5g/kg·d)，squamostatin高、低剂量组(0.2g/kg·d和0.5g/kg·d)和Amurisolin高、低剂量组(0.2g/kg·d和0.5g/kg·d)。正常组与模型组大鼠灌胃相同剂量的0.5％羧甲基纤维素钠。
给药完后，将大鼠禁食不禁水置于代谢笼中，收集24h尿液，第24h时称大鼠体质量，随后尾静脉取血测定各组大鼠空腹血糖值，最后腹主动脉取血收集每只大鼠血清，并迅速剥离大鼠左右肾组织称其质量，随后迅速切取左肾部分皮质部位于福尔马林中用于HE染色。用考马斯亮蓝G-250法检测24h尿中蛋白的含量，相应的试剂盒分别测定血清中尿素氮、血清肌酐。
3、实验结果
3.1对空腹血糖的影响
通过尾静脉取血测定空白组、模型组及实施例1制备得到的番荔枝总内酯，化合物bullatacin，squamostatin和Amurisolin给药组大鼠的空腹血糖，结果表明，实施例1制备得到的番荔枝总内酯和番荔枝内酯化合物bullatacin，squamostatin和Amurisolin组大鼠的空腹血糖均明显低于模型组(p<0.01)。且经过对比发现，单体番荔枝内酯的活性明显优于番荔枝总内酯的降糖活性；而番荔枝内酯单体化合物的活性依次是squamostatin A＞bullatacin＞Amurisolin。结果如表1所示。
表1各组对糖尿病模型大鼠空腹血糖的影响
Figure BDA0002385267360000051
注：与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。
3.2对肾功能损伤相关指标的影响
通过试剂盒测定正常组、模型组及各给药组对大鼠血清中尿素氮和血清肌酐的含量，用考马斯亮蓝G-250法检测24h尿中蛋白的含量，并计算肾脏指数(肾脏指数＝(左肾质量+右肾质量)/(大鼠体质量*100))。结果发现，实施例1制备得到的番荔枝总内酯和番荔枝内酯化合物bullatacin，squamostatinA和Amurisolin组大鼠的空腹血糖均明显低于模型组(p<0.05)。且经过对比发现，单体番荔枝内酯的活性明显优于番荔枝总内酯的降糖活性；番荔枝内酯单体化合物中邻位的双四氢呋喃番荔枝内酯squamostatinA的活性最优，如表2所示。
表2各组对糖尿病模型大鼠肾功能相关指标的影响
Figure BDA0002385267360000061
3.3对肾组织病理状态的影响
给药结束后，取各组大鼠肾组织进行HE染色染色，光镜下所见正常组大鼠肾小管及肾小球正常，模型组肾小管上皮空泡变性、肾间质大量炎细胞浸润、肾小球囊腔扩张，而本发明实施例1制备得到的番荔枝总内酯和番荔枝内酯化合物bullatacin，squamostatinA和Amurisolin组大鼠的样品给药组大鼠肾脏结构接近正常组。表明本发明分离得到的番荔枝总内酯和番荔枝内酯单体化合物对糖尿病并发的肾脏损伤具有很好的保护作用。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.番荔枝种子总内酯在制备防治糖尿病的药物中的应用。
2.番荔枝种子总内酯在制备防治糖尿病肾病的药物中的应用。
3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述的番荔枝种子总内酯的制备方法为：取番荔枝种子，加入有机溶剂，提取，过滤，浓缩得到。
4.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述的番荔枝种子总内酯的制备方法为：取番荔枝种子，粉碎，加入乙醇，采用超声、回流或连续回流提取，过滤，浓缩得到，浓缩物，上大孔吸附树脂柱，先用乙醇洗脱，然后用氯仿洗脱，收集氯仿洗脱部位，浓缩得到番荔枝种子总内酯。
5.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述的番荔枝种子总内酯的制备方法为：
取番荔枝种子，粉碎过80目筛，采用超临界CO2萃取番荔枝种子中番荔枝内酯；最佳提取工艺为压力25 Mpa，萃取温度35℃，萃取时间3小时，夹带剂为乙醇，乙醇用量是药材用量的20%。
6.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述的番荔枝种子总内酯包括邻位四氢呋喃番荔枝内酯、间位四氢呋喃番荔枝内酯和单四氢呋喃番荔枝内酯。
7.番荔枝内酯化合物在制备防治糖尿病的药物中的应用。
8.番荔枝内酯化合物在制备防治糖尿病肾病的药物中的应用。
9.根据权利要求7或8所述的应用，其特征在于，所述的番荔枝内酯化合物为bullatacin，desacetyluvaricin，Isodesacetyluvaricin，motrilin，squamocin，squamostatin A，squamostatin-D，murisolin、uvarigrandin A或 annoglaxin中的一个或多个的混合物。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，将番荔枝内酯化合物与药学上可接受的载体制备成片剂、颗粒剂、胶囊剂、丸剂、口服液、合剂或浸膏剂的药物。
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