CN105796625A - 含红曲红花的药物组合物及其制剂 - Google Patents

Abstract

本发明属于中药领域，涉及一种含红曲红花的药物组合物及其制剂。具体地，所述药物组合物还含有选自丹参、三七和银杏叶中的一种或者多种。本发明药物组合物具有活血化瘀、通脉活络、祛痰化浊的功效，对缺血性损伤心肌具有明显的保护作用，包括降低心肌梗死面积，减轻心肌缺血损伤范围与程度，降低缺血性心律失常的严重程度。并说明红曲与红花配伍合理，产生了协同增效作用。

Description

含红曲红花的药物组合物及其制剂

技术领域

本发明属于中药领域，涉及一种含红曲红花的药物组合物及其制剂。

背景技术

冠状动脉性心脏病(coronaryarteryheartdisease,CHD)简称冠心病，是指因冠状动脉狭窄或阻塞、发生冠状循环障碍，引起心肌氧供需之间失衡导致心肌缺血缺氧或坏死的一种心脏病。CHD高发病率和死亡率，严重危害人类身体健康，从而被称作是“人类的第一杀手”。病理解剖发现，81％的心脏猝死的主要原因是冠心病，常见的病理改变为广泛的多支冠状动脉粥样硬化。

目前治疗冠心病主要有三大手段，即药物治疗、冠状动脉搭桥手术(CABG)和经皮介入治疗(PCI)。CABG和PCI费用昂贵，易复发和血管内再狭窄的风险，适合病情较严重患者。药物治疗是冠心病治疗的基础，但临床上多为化药，基本无法解决动脉粥样硬化导致的血管狭窄问题，且长期服用会产生一定的副作用。

因此，尚需要开发新的防治冠心病和/或高血脂症的中药制剂。旨在充分发挥中药在治疗冠心病中的优势，复方后发挥协同增效作用。

发明内容

本发明人经过深入的研究和创造性的劳动，得到了一种含红曲红花的药物组合物并制得了相应的制剂。本发明人惊奇地发现，含红曲红花的药物组合物及其制剂具有良好的防治心脑血管疾病特别是防治冠心病和/或高血脂症的效果。该本发明人还在进一步的研究中发现，该药物组合物进一步包含选自丹参、三七和银杏叶中的一种或者多种之后，具有更佳的协同增效作用。由此提供了下述发明：

(一)含红曲红花的药物组合物、药物制剂、制备方法

本发明的一个方面涉及一种含红曲红花的药物组合物；具体地，其包含如下组分：

红曲1－9重量份、红花0.5－8.5重量份。

根据本发明任一项所述的含红曲红花的药物组合物，其包含如下组分：

红曲1－7.5重量份、红花1－3重量份。

根据本发明任一项所述的含红曲红花的药物组合物，其包含如下组分：

红曲7重量份、红花1重量份；

红曲7.5重量份、红花2.5重量份；

红曲5重量份、红花5重量份；或者

红曲1重量份、红花3重量份。

在本发明的一个实施方案中，所述药物组合物由红曲和红花组成。

所述药物组合物还可以任选地包含药学上可接受的辅料。

本发明的另一方面涉及一种药物制剂，其由本发明中任一项所述的含红曲红花的药物组合物制得。

根据本发明任一项所述的药物制剂，其还包含药学上可接受的辅料。

根据本发明任一项所述的药物制剂，在本发明的一个实施方案中，所述药物制剂是供口服的药物，其制备采用制剂学常规技术的制备方法，包括将药物组合物与口服药物的辅料混合的步骤，其中口服药物制剂的辅料选自淀粉、可压性淀粉、糊精、糖粉、乳糖、甘露醇、硫酸钙二水物、磷酸氢钙、氧化镁、碳酸钙、碳酸镁、水、乙醇、淀粉浆、糖浆、液状葡萄糖、饴糖、炼蜜、蔗糖粉、枸橼酸、香精、阿拉伯胶浆、明胶浆、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、胶浆、微晶纤维素、羧甲基纤维素钠、羟丙基甲基纤维素、硬脂酸镁、硬脂酸、硬脂酸锌、硬脂酸钙、滑石粉、聚乙二醇4000、聚乙二醇6000、微粉硅胶、植物油、硬脂酸钠、甘油明胶、单硬脂酸甘油酯、虫蜡、氢化油的一种或者几种组合。

本发明所述的口服制剂选自：片剂、分散片、硬胶囊剂、丸剂、软胶囊剂、颗粒剂、散剂、滴丸剂、缓释制剂、控释制剂、糖浆剂、口服液体制剂、煎膏剂和浸膏剂等药剂学上所有可以接受的剂型。

本发明的药物制剂的制备方法可以是如下方法：

将红曲(例如粉碎过筛)或红曲提取物和红花或红花提取物制成制剂。具体地，所述红曲提取物或红花提取物可以为水提醇沉法得到浸膏；也可以为醇或水醇提取法得到浸膏，其中醇可为乙醇、甲醇、正丁醇等。或者，水提醇沉法或醇提法或水醇提法得到的提取液可进一步粗滤、超滤或大孔树脂纯化，再浓缩成浸膏。然后按照常规方法，加入辅料，制成药剂学上可接受的剂型，包括但不限于片剂、硬胶囊剂、丸剂、软胶囊剂、颗粒剂、散剂、滴丸剂、缓释制剂、控释制剂、糖浆剂、分散片、口服液体制剂、煎膏剂和浸膏剂。

根据本发明任一项所述的药物制剂，其中：

所述红曲提取物可以由如下的步骤(1)或(2)制得：

(1)取红曲药材1重量份，每次加入2－10倍体积份50％－90％乙醇、甲醇或乙酸乙酯加热回流提取1－3小时，提取2－3次；提取液过滤，合并滤液，回收乙醇、甲醇或乙酸乙酯，挥尽乙醇、甲醇或乙酸乙酯后，浓缩至在55℃－60℃下测相对密度0.95－1.06，得红曲提取物。

(2)取红曲药材1重量份，每次加入2－10倍体积份50％－90％乙醇、甲醇或乙酸乙酯加热回流提取1－3小时，提取2－3次；提取液过滤，合并滤液，回收乙醇、甲醇或乙酸乙酯，浓缩至在55℃－60℃下测相对密度0.95－1.06，浓缩液中加0.5－2.0倍去离子水混匀，室温或冷藏放置2－12小时，离心，收集沉淀，干燥，得到红曲提取物。

步骤(1)优选为：取红曲药材1重量份，加入3倍体积份75％乙醇加热回流提取3小时，提取液过滤；滤渣加入2体积份75％乙醇加热回流提取2小时，提取液过滤，合并两次滤液，减压回收乙醇，浓缩至在55－60℃下测相对密度0.95－1.06的浓缩液，干燥，得红曲提取物。

步骤(2)优选为：取红曲药材1重量份，加入3倍提积份75％乙醇加热回流提取3小时，提取液过滤；滤渣加入2体积份75％乙醇加热回流提取2小时，提取液过滤，合并两次滤液，减压回收乙醇，挥尽乙醇，浓缩至在55－60℃下测相对密度0.95－1.06的浓缩液，浓缩液中加1倍去离子水混匀，室温或冷藏放置8小时，离心，收集沉淀，80℃下干燥8小时，粉碎过60目筛，得红曲提取物。

所述红花提取物可以由如下的步骤(3)或(4)制得：

(3)红花药材1重量份，每次加10－30倍体积份20％-50％乙醇水溶液，在50℃－100℃下浸提0.5－1.5小时，提取2－3次，提取液过滤，合并滤液，回收溶剂，浓缩至稠膏，干燥，得红花提取物。

(4)红花药材1重量份，每次加10－30倍体积份水溶液，在50℃－100℃下浸提0.5－1.5小时，提取2－3次，提取液过滤，合并滤液，回收溶剂，浓缩至稠膏，浓缩液中加入乙醇至浓度为60％－90％，室温或冷藏放置6－24小时，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至稠膏，干燥，得红花提取物。

步骤(3)优选为：取红花药材1重量份，第一次加入15倍体积份20％乙醇水溶液，在70℃下浸提1小时，过滤得滤液；药渣加入10倍体积份20％乙醇水溶液，在70℃下浸提30分钟，提取两次，过滤，合并滤液，回收溶剂，浓缩至稠膏，干燥，得红花提取物。

步骤(4)优选为：取红花药材1重量份，每次加20倍体积份水溶液，在70℃下浸提45分钟，提取3次，提取液过滤，合并滤液，回收溶剂，浓缩至稠膏，浓缩液中加入乙醇至乙醇浓度为70％，室温或冷藏放置12小时，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至稠膏，干燥，得红花提取物。

(二)含红曲红花丹参的药物组合物、药物制剂、制备方法

本发明的一个方面涉及一种含红曲红花丹参的药物组合物；具体地，其包含如下组分：

红曲2－10重量份、红花1－5重量份、丹参5－40重量份。

根据本发明任一项所述的含红曲红花丹参的药物组合物，其包含如下组分：

红曲3－5重量份、红花1－5重量份、丹参5－30重量份。

根据本发明任一项所述的含红曲红花丹参的药物组合物，其包含如下组分：

红曲5重量份、红花3重量份、丹参30重量份；

红曲3重量份、红花2重量份、丹参15重量份；

红曲4重量份、红花2重量份、丹参8重量份；或者

红曲5重量份、红花3重量份、丹参8重量份。

在本发明的一个实施方案中，所述药物组合物由红曲、红花和丹参组成。

所述药物组合物还可以任选地包含药学上可接受的辅料。

本发明的另一方面涉及一种药物制剂，其由本发明中任一项所述的含红曲红花丹参的药物组合物制得。

根据本发明任一项所述的药物制剂，其还包含药学上可接受的辅料。

所述药物制剂的辅料和剂型可以参考上面的第(一)项中的辅料和剂型。

根据本发明任一项所述的药物制剂，其通过如下步骤制得：

A1将红曲粉碎成细粉，混合过80目筛，粒径不大于75μM；

B1将丹参粉碎与红花混合或单独，按重量份每次加入5－25倍体积份水溶液，在60℃－100℃下浸提0.5－2.5小时，提取2－3次，合并滤液，并进行初步澄清或超滤处理；

C1将步骤B1所得处理液减压回收成稠膏，再将稠膏干燥成干膏粉与步骤A1细粉混合即可。

步骤B1中，初步澄清处理可用一般的材料如纱布等进行过滤，也可以用较专业的材料如陶瓷膜进行微滤，还可以用水提醇沉法除去大部分杂质，也可用絮凝剂如壳聚糖、101果汁等絮凝澄清剂吸附澄清而除去药液中的悬浮颗粒，也可以高速离心后分取上清液。可单独用上述澄清方法，也可联合应用，例过滤－吸附澄清，吸附澄清－高速离心，过滤－微滤，过滤－醇沉，过滤－醇沉－大孔树脂等。

步骤B1中，超滤所用的超滤膜可为二醋酸纤维素膜、三醋酸纤维素膜、聚砜模等，截留分子量一般为20000－50000。

优选地，所述药物制剂通过如下步骤制得：

A2将红曲粉碎成细粉，混合过80目筛，粒径不大于75μm；

B2丹参粉碎与红花混合，按重量份每次加入12倍体积份水溶液提取1.5小时，在80℃－90℃提取2次，提取液过滤，合并滤液，浓缩成稠膏，加入乙醇至70％以上，静置10小时使沉淀，过滤，滤液回收，浓缩至稠膏；

C2将步骤B2所得稠膏干燥成干膏粉与步骤A2细粉混合即可。

或者，

根据本发明任一项所述的药物制剂，其通过如下步骤制得：

a1红花，按重量份每次加入10－30倍体积份20％－50％乙醇水溶液，在50℃－100℃加热回流提取0.5－1.5小时，提取2－3次；提取液过滤，合并滤液；

b1丹参与红曲混合或单独，按重量份每次加入3－15体积份溶剂提取1－3小时，提取1－3次，提取液过滤，合并滤液；

c1将步骤a1、b1中得到的滤液单独或混合后进行初步澄清或超滤处理；

d1将步骤c1中得到的处理液进行浓缩，干燥，即得。

步骤b1中，所述溶剂提取分两种情况，一种为丹参与红曲混合提取时，溶剂提取指50％－90％乙醇水溶液加热回流或渗漏；另外一种为丹参与红曲单独提取时，红曲溶剂提取指50％－90％乙醇水溶液加热回流，丹参溶剂提取指可以为水溶液或50％－90％乙醇水溶液加热回流提取。

步骤c1中，初步澄清处理可用一般的材料如纱布等进行过滤，也可以用较专业的材料如陶瓷膜进行微滤，还可以高速离心后分取上清液，也可用絮凝剂如壳聚糖、101果汁等絮凝澄清剂吸附澄清而除去药液中的悬浮颗粒，也可醇提水沉法/水提醇提除去大部分杂质。可单独用上述澄清方法，也可联合应用，例过滤－吸附澄清，吸附澄清－高速离心，过滤－微滤，过滤－醇沉/水沉，过滤－醇沉/水沉－大孔树脂等。

步骤c1中，超滤处理所用的超滤膜可为二醋酸纤维素膜、三醋酸纤维素膜、聚砜模等，截留分子量一般为20000－50000。

优选地，所述药物制剂通过如下步骤制得：

a2红曲与丹参混合，按重量份第一次加入10倍提积份75％乙醇加热回流提取2小时，提取液过滤；滤渣加入5体积份75％乙醇加热回流提取2小时，提取液过滤，合并两次滤液，减压回收乙醇，挥尽乙醇，浓缩至稠膏；

b2红花药材，第一次加入15倍体积份20％乙醇水溶液，在70℃－80℃下浸提45分钟，过滤得滤液；药渣加入10倍体积份20％乙醇水溶液，在70℃－80℃下浸提30分钟，提取两次，过滤，合并滤液，回收溶剂，浓缩至稠膏；

c2将步骤a2、b2所得稠膏干燥成干膏粉，即可。

(三)含红曲红花三七的药物组合物、药物制剂、制备方法

本发明的一个方面涉及一种含红曲红花三七的药物组合物；具体地，其包含如下组分：

红曲1－10重量份、红花1－10重量份、三七1－10重量份。

根据本发明任一项所述的含红曲红花三七的药物组合物，其包含如下组分：

红曲2－8重量份、红花1－2重量份、三七1－4重量份。

根据本发明任一项所述的含红曲红花三七的药物组合物，其包含如下组分：

红曲5重量份、红花1重量份、三七2重量份；

红曲4重量份、红花1重量份、三七3重量份；

红曲7重量份、红花2重量份、三七3重量份；或者

红曲3重量份、红花1重量份、三七3重量份。

在本发明的一个实施方案中，所述药物组合物由红曲、红花和三七组成。

所述药物组合物还可以任选地包含药学上可接受的辅料。

本发明的另一方面涉及一种药物制剂，其由本发明中任一项所述的含红曲红花三七的药物组合物制得。

根据本发明任一项所述的药物制剂，其还包含药学上可接受的辅料。

所述药物制剂的辅料和剂型可以参考上面的第(一)项中的辅料和剂型。

根据本发明任一项所述的药物制剂，其通过如下步骤制得：

A1将红曲和三七粉碎成细粉，混合过80目筛，粒径不大于75μm；

B1将红花，按重量份每次加入10－40倍体积份溶剂提取0.5－1.5小时，提取2－3次，合并滤液，初步澄清后，低温浓缩成稠膏；

C1将步骤B1所得稠膏干燥成干膏粉与步骤A1细粉混合即可。

步骤B1中，所述溶剂提取可以是水溶液加热回流，也可以是20％-50％乙醇水溶液加热回流或渗漏。

步骤B1中，所述初步澄清处理可用一般的材料如纱布等进行粗滤，也可以用较专业的材料如陶瓷膜进行微滤，还可以高速离心后分取上清液，也可用絮凝剂如壳聚糖、101果汁等絮凝澄清剂吸附澄清而除去药液中的悬浮颗粒，也可水提醇沉法除去大部分杂质。可单独用上述澄清方法，也可联合应用，例粗滤-吸附澄清，吸附澄清-高速离心，粗滤-微滤，粗滤-水沉，粗滤-水沉-大孔树脂等。

优选地，所述药物制剂通过如下步骤制得：

A2将红曲和三七粉碎成细粉，混合过80目筛，粒径不大于75μm；

B2取红花药材，第一次加入15倍体积份20％乙醇水溶液，在70℃下浸提1小时，过滤得滤液；药渣加入10倍体积份20％乙醇水溶液，在70℃下浸提30分钟，提取两次，过滤，合并滤液，回收溶剂，浓缩至稠膏；

C2将步骤B2所得稠膏干燥成干膏粉与步骤A2细粉混合即可。

或者，

根据本发明任一项所述的药物制剂，其通过如下步骤制得：

a1红曲粉、三七药材粉碎，混合或单独提取：重量份每次加入2－15倍体积份溶剂提取1－3小时，提取1－3次；提取液过滤，合并滤液；

b1红花药材，按重量份每次加入10－40倍体积份溶剂提取0.5－1.5小时，提取2－3次，提取液过滤，合并滤液；

c1将步骤a1、b1中得到的滤液单独或混合后进行初步澄清或超滤处理；

d1将步骤c1中得到的处理液进行浓缩，干燥。

步骤a1中，所述溶剂提取分两种情况，一种为三七与红曲混合提取时，溶剂提取指50％－90％乙醇水溶液加热回流或渗漏；另外一种为三七与红曲单独提取时，红曲溶剂提取指50％－90％乙醇水溶液加热回流，三七溶剂提取指可以为水溶液或50％－90％乙醇水溶液加热回流提取或渗漏。

步骤1b中，所述溶剂提取可以是水溶液加热回流，也可以是20％-50％乙醇水溶液加热回流或渗漏。

步骤c1中，初步澄清处理可用一般的材料如纱布等进行粗滤，也可以用较专业的材料如陶瓷膜进行微滤，还可以高速离心后分取上清液，也可用絮凝剂如壳聚糖、101果汁等絮凝澄清剂吸附澄清而除去药液中的悬浮颗粒，也可醇体水沉法除去大部分杂质，还可以用醇沉法(50-90％的乙醇)除去大部分杂质。可单独用上述澄清方法，也可联合应用，例粗滤-吸附澄清，吸附澄清-高速离心，粗滤-微滤，粗滤-醇沉，粗滤-醇沉/水沉-大孔树脂等。超滤处理所用的超滤膜可为二醋酸纤维素膜、三醋酸纤维素膜、聚砜模等，截留分子量一般为20000－50000。

优选地，所述药物制剂通过如下步骤制得：

a2红曲药材，加入3倍提积份75％乙醇水溶液加热回流提取3小时，提取液过滤；滤渣加入2体积份75％乙醇水溶液加热回流提取2小时，提取液过滤，合并两次滤液，减压回收乙醇，挥尽乙醇，浓缩，浓缩液中加1倍去离子水混匀，室温或冷藏放置8小时，离心，收集沉淀，80℃下干燥8小时，粉碎过80目筛；

b2三七药材，粉碎，加入8体积份水溶液提取1.5小时，提取2次，提取液过滤，合并滤液，浓缩成稠膏，加入乙醇至乙醇浓度70％以上，室温或冷藏放置8小时，过滤，滤液回收，浓缩成稠膏；

c2红花药材，每次加入20倍体积份水溶液，在60℃－70℃下浸提45分钟，提取3次，提取液过滤，合并滤液，回收溶剂，浓缩至稠膏，浓缩液中加入乙醇至乙醇浓度70％以上，室温或冷藏放置12小时，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至稠膏；

d2将步骤b2、c2所得稠膏干燥成干膏粉与步骤a2细粉混合即可。

(四)含红曲红花银杏叶的药物组合物、药物制剂、制备方法

本发明的一个方面涉及一种含红曲红花银杏叶的药物组合物；具体地，其包含如下组分：

红曲2－15重量份、红花1－10重量份、银杏叶5－40重量份。

根据本发明任一项所述的含红曲红花银杏叶的药物组合物，其包含如下组分：

红曲3－15重量份、红花1－6重量份、银杏叶15－33重量份。

根据本发明任一项所述的含红曲红花银杏叶的药物组合物，其包含如下组分：

红曲6重量份、红花4重量份、银杏叶24重量份；

红曲5重量份、红花3重量份、银杏叶30重量份；

红曲8重量份、红花6重量份、银杏叶20重量份；或者

红曲4重量份、红花2重量份、银杏叶20重量份。

在本发明的一个实施方案中，所述药物组合物由红曲、红花和银杏叶组成。

所述药物组合物还可以任选地包含药学上可接受的辅料。

本发明的另一方面涉及一种药物制剂，其由本发明中任一项所述的含红曲红花银杏叶的药物组合物制得。

根据本发明任一项所述的药物制剂，其还包含药学上可接受的辅料。

所述药物制剂的辅料和剂型可以参考上面的第(一)项中的辅料和剂型。

根据本发明任一项所述的药物制剂，其通过如下步骤制得：

A1将红曲粉碎成细粉，混合过80目筛，粒径不大于75μm；

B1将红花药材，每次加入10－30倍体积份水溶液，在50℃－100℃下浸提0.5－1.5小时，提取2－3次，提取液过滤，合并滤液；

C1将银杏叶，粉碎，按重量份每次加入5－15倍体积份50％－90％乙醇，在60℃－100℃下浸提1－5小时，提取2－3次，合并滤液；

D1将步骤B1、C1中得到的滤液分别进行初步澄清或超滤处理；

E1将步骤D1所得提取液，进行浓缩稠膏干燥成干膏粉与步骤A1细粉混合即可。

步骤D1中，初步澄清处理可用一般的材料如纱布等进行粗滤，也可以用较专业的材料如陶瓷膜进行微滤，还可以高速离心后分取上清液，也可用絮凝剂如壳聚糖、101果汁等絮凝澄清剂吸附澄清而除去药液中的悬浮颗粒，也可醇提水沉/水提醇沉法除去大部分杂质。可单独用上述澄清方法，也可联合应用，例粗滤-吸附澄清，吸附澄清-高速离心，粗滤-微滤，粗滤-醇沉，粗滤-醇沉-大孔树脂等。

步骤D1中，超滤处理所用的超滤膜可为二醋酸纤维素膜、三醋酸纤维素膜、聚砜模等，截留分子量一般为20000－50000。

优选地，所述药物制剂通过如下步骤制得：

A2将红曲粉碎成细粉，混合过80目筛，粒径不大于75μm；

B2红花药材，每次加20倍体积份水溶液，在70℃下浸提45分钟，提取3次，提取液过滤，合并滤液，回收溶剂，浓缩至稠膏，浓缩液中加入乙醇至乙醇浓度为70％，室温或冷藏放置12小时，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至稠膏；

C2银杏叶，粉碎，加入8倍体积份60％乙醇，在70℃－80℃下浸提5小时，提取2次，提取液过滤，合并滤液，回收乙醇浓缩，浓缩液中加入1倍去离子水混匀，冷藏放置6小时，过滤得滤液，滤液回收乙醇并浓缩至稠膏；

D2将步骤B2、C2所得稠膏干燥成干膏粉与步骤A2细粉混合即可。

或者，

根据本发明任一项所述的药物制剂，其通过如下步骤制得：

a1红曲药材粗粉，每次加入2－10倍体积份50％－90％乙醇水溶液加热回流提取1－3小时，提取2－3次；提取液过滤，合并滤液；

b1银杏叶药材粉碎，每次加5－15倍体积份30％－90％乙醇水溶液，在50℃－100℃下浸提1－5小时，提取2－3次，提取液过滤，合并滤液；

c1红花药材，每次加10－30倍体积份水溶液或20％－50％乙醇水溶液，在50℃－100℃下浸提0.5－1.5小时，提取2－3次，提取液过滤，合并滤液；

d1将步骤a1、b1、c1中得到的滤液单独或混合后进行初步澄清或超滤处理；

e1将步骤d1中得到的处理液进行浓缩，干燥。

步骤d1中，初步澄清处理可用一般的材料如纱布等进行粗滤，也可以用较专业的材料如陶瓷膜进行微滤，还可以高速离心后分取上清液，也可用絮凝剂如壳聚糖、101果汁等絮凝澄清剂吸附澄清而除去药液中的悬浮颗粒，也可醇体水沉法除去大部分杂质，还可以用醇沉法(50％－90％乙醇水溶液)除去大部分杂质。可单独用上述澄清方法，也可联合应用，例粗滤-吸附澄清，吸附澄清-高速离心，粗滤-微滤，粗滤-醇沉，粗滤-醇沉/水沉-大孔树脂等。

步骤d1中，超滤处理所用的超滤膜可为二醋酸纤维素膜、三醋酸纤维素膜、聚砜模等，截留分子量一般为20000－50000。

优选地，所述药物制剂通过如下步骤制得：

a2红曲药材，加入3倍提积份75％乙醇加热回流提取3小时，提取液过滤；滤渣加入2体积份75％乙醇加热回流提取2小时，提取液过滤，合并两次滤液，减压回收乙醇，挥尽乙醇，浓缩至在55－60℃下测相对密度0.95－1.06的浓缩液，浓缩液中加1倍去离子水混匀，室温或冷藏放置8小时，离心，收集沉淀，干燥，粉碎；

b2红花药材，第一次加入15倍体积份20％乙醇水溶液，在70℃下浸提1小时，过滤得滤液；药渣加入10倍体积份20％乙醇水溶液，在70℃下浸提30分钟，提取两次，过滤，合并滤液，回收溶剂，浓缩至稠膏；

c2银杏叶药材，粉碎，每次加6－8倍体积份50％乙醇，在60℃－70℃下浸提3小时，提取2次，提取液过滤，合并滤液，回收乙醇浓缩，浓缩液中加入1.5倍去离子水混匀，冷藏放置6小时，过滤得滤液，上大孔树脂柱待吸附后，分别用纯净水、10％乙醇梯度冲洗，再用70％乙醇解吸附得洗脱液，洗脱液减压浓缩至稠膏；

d2将步骤b2、c2所得稠膏干燥成干膏粉与步骤a2细粉混合即可。

本发明的再一方面还涉及本发明(一)至(四)中任一项所述的药物组合物或者药物制剂在制备治疗和/预防和/或辅助治疗心血管疾病、缺血性心肌损伤、冠心病或高血脂症的药物或者在制备活血化瘀、通脉活络和/或祛痰化浊的药物中的用途。

本发明的再一方面涉及一种和/预防和/或辅助治疗心血管疾病、缺血性心肌损伤、冠心病或高血脂症的方法，或者一种活血化瘀、通脉活络和/或祛痰化浊的方法，包括给与或者使用有效量的本发明(一)至(四)中任一项所述的药物组合物或者药物制剂的步骤。

本发明中：

术语“红曲”可以是普通红曲、功能性红曲、高含量红曲或特制红曲。

功能性红曲：针对特定功能的需要，采取一定的红曲霉菌发酵工艺，得到的较高含量的洛伐他汀类或其他类成分的红曲，所述特定功能包括但不限于降脂、减肥等。

高含量红曲：由红曲或功能性红曲通过提取、纯化工艺得到，其有效成分含量明显高于常规市售红曲或红曲提取物。

特制红曲：由特定的红曲菌株，按照一定的工艺条件下，产生准量的Monacolins，确保生产出来的产品能在调整血脂方面达到最大功效，而又不会对人体产生不良的副作用。从而与传统意义上的红曲有很大区别的纯天然红曲菌制成品。

术语“有效量”是指可在受试者中实现治疗、预防、减轻和/或缓解本发明所述疾病或病症的剂量。

本发明中，如果没有特别说明，所述原料药是指红曲、红花、丹参、三七和/或银杏叶。

本发明中，如果没有特别说明，所述红曲、红花、丹参、三七和银杏叶分别为红曲药材、红花药材、丹参药材、三七药材和银杏叶药材。

本发明中，所述乙醇的浓度，如果没有特别说明，均指体积百分比浓度。

本发明中，如果没有特别说明，所述重量份/体积份是指克/毫升。

发明的有益效果

本发明药物组合物具有活血化瘀、通脉活络、祛痰化浊的功效，对缺血性损伤心肌具有明显的保护作用，包括降低心肌梗死面积，减轻心肌缺血损伤范围与程度，降低缺血性心律失常的严重程度。并说明红曲与红花配伍合理，产生了协同增效作用。

本发明的制剂采用合理的制备方法，并进行药效学研究，最终制成适合患者服用，疗效确切的中药制剂。

具体实施方式

下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。

下面的试验例中，空白对照组和模型对照组均给予1％CMC水溶液。空白对照组均不进行手术。

(一)红曲红花提取物、组合物及其制剂的制备和生物学试验

实施例A1：红曲红花胶囊剂的制备(1)

红曲药材(80目)5kg：购买于浙江三禾生物工程有限公司；

红花药材1kg，加入10倍体积份20％乙醇水溶液，在50℃－60℃下浸提1.5小时，提取3次，提取液过滤，合并滤液，回收溶剂，浓缩至稠膏，干燥，得叶提取物Ⅱ；

红曲药材、提取物Ⅱ加入制剂辅料，按照常规工艺，制成临床接受的胶囊剂。

实施例A2：红曲红花软胶囊剂的制备

红曲药材7kg，加入4倍体积份75％乙醇加热回流提取3小时，提取液过滤；滤渣加入2体积份75％乙醇加热回流提取2小时，提取液过滤，合并两次滤液，减压回收乙醇，浓缩至在55℃－60℃下测相对密度0.95－1.06的浓缩液，浓缩液中加入2倍的去离子水混匀，放置8小时，离心，收集沉淀，干燥，得提取物Ⅰ；

红花药材1kg，加入15倍体积份50％乙醇水溶液，在60℃－70℃下浸提45分钟，提取3次，提取液过滤，合并滤液，回收溶剂，浓缩至稠膏，干燥，得叶提取物Ⅱ；

提取物Ⅰ、提取物Ⅱ加入制剂辅料，按照常规工艺，制成临床接受的软胶囊剂。

实施例A3：红曲红花片剂的制备(1)

红曲药材10kg，加入6倍体积份90％乙醇加热回流提取2小时，提取液过滤；滤渣加入4倍体积份90％乙醇加热回流提取2小时，提取液过滤，合并两次滤液，减压回收乙醇，浓缩至在55℃－60℃下测相对密度0.95－1.06的浓缩液，浓缩液中加入1倍的去离子水混匀，冷蔵12小时，离心，收集沉淀，干燥，得提取物Ⅰ；

红花药材1kg，加入20倍体积份水溶液，在50℃－60℃下浸提1小时，提取3次，提取液过滤，合并滤液，回收乙醇浓缩至稠膏，浓缩液中加入乙醇至浓度为80％，冷藏放置16小时，过滤得滤液，

减压浓缩成稠膏，干燥，得叶提取物Ⅱ；

提取物Ⅰ、提取物Ⅱ加入制剂辅料，按照常规工艺，制成临床接受的片剂。

实施例A4：红曲红花片剂的制备(2)

红曲药材3kg，加入10倍体积份50％乙醇加热回流提取1.5小时，提取3次，提取液过滤，合并两次滤液，减压回收乙醇，浓缩至在55℃－60℃下测相对密度0.95－1.06的浓缩液，干燥，得提取物Ⅰ；

红花药材1kg，加入30倍体积份40％乙醇水溶液，在80℃－90℃下浸提30分钟，提取2次，提取液过滤，合并滤液，回收溶剂，浓缩至稠膏，干燥，得叶提取物Ⅱ；

提取物Ⅰ、提取物Ⅱ加入制剂辅料，按照常规工艺，制成临床接受的片剂。

实施例A5：红曲红花胶囊剂的制备(2)

红曲药材(80目)1kg：北京北大维信生物科技有限公司生产；

红花药材3kg，加入10倍体积份水溶液，在60℃－70℃下浸提1.5小时，提取3次，提取液过滤，合并滤液，回收乙醇浓缩至稠膏，浓缩液中加入乙醇至浓度为60％，冷藏放置6小时，过滤得滤液，减压浓缩成稠膏，干燥，得叶提取物Ⅱ；

红曲药材、提取物Ⅱ加入制剂辅料，按照常规工艺，制成临床接受的胶囊剂。

实施例A6：红曲红花滴丸剂的制备

红曲药材1kg，加入3倍体积份75％乙醇加热回流提取3小时，提取液过滤，滤渣加入2倍体积份75％乙醇加热回流提取2小时，提取液过滤，合并两次提取液，减压回收乙醇，浓缩至在55℃－60℃下测相对密度0.95－1.06的浓缩液，干燥，得提取物Ⅰ；

红花药材6kg，加入15倍体积份水溶液，在70℃－80℃下浸提45分钟，提取3次，提取液过滤，合并滤液，回收乙醇浓缩至稠膏，浓缩液中加入乙醇至浓度为70％，冷藏放置10小时，过滤得滤液，减压浓缩成稠膏，干燥，得叶提取物Ⅱ；

提取物Ⅰ、提取物Ⅱ加入制剂辅料，按照常规工艺，制成临床接受的滴丸剂。

实施例A7：红曲红花口服液的制备

红曲药材1kg，加入5倍体积份80％乙醇加热回流提取2小时，提取液过滤；滤渣加入3倍体积份80％乙醇加热回流提取1小时，提取液过滤，合并两次滤液，减压回收乙醇，浓缩至在55℃－60℃下测相对密度0.95－1.06的浓缩液，得提取物Ⅰ；

红花药材1kg，加入20倍体积份30％乙醇水溶液，在70℃－80℃下浸提1小时，提取3次，提取液过滤，合并滤液，回收溶剂，在55℃－60℃下浓缩至稠膏，得提取物Ⅱ；

提取物Ⅰ、提取物Ⅱ加入制剂辅料，按照常规工艺，制成临床接受的口服液。

实施例A8：红曲红花粒剂的制备

红曲药材2kg，加入10倍体积份50％乙醇加热回流提取2小时，提取液过滤；滤渣加入5体积份50％乙醇加热回流提取1小时，提取液过滤，合并两次滤液，减压回收乙醇，浓缩至在55℃－60℃下测相对密度0.95－1.06的浓缩液，浓缩液中加入1.5倍的去离子水混匀，冷蔵4小时，离心，收集沉淀，干燥，得提取物Ⅰ；

红花药材1kg，加入30倍体积份水溶液，在80℃－90℃下浸提30小时，提取2次，提取液过滤，合并滤液，回收乙醇浓缩至稠膏，浓缩液中加入乙醇至浓度为90％，冷藏放置24小时，过滤得滤液，减压浓缩成稠膏，干燥，得叶提取物Ⅱ；

提取物Ⅰ、提取物Ⅱ加入制剂辅料，按照常规工艺，制成临床接受的颗粒剂。

试验例A1：红曲红花药物组合物对整体大鼠心肌缺血模型的研究

1.实验材料：

(1)受试药制备

红曲药材或红曲提取物制备：分别参照实施例A1至A4中的红曲药材或者红曲提取物。

红花提取物制备：分别参照实施例A1至A4中的红花提取物Ⅱ。

复方药物制剂的制备：分别参照实施例A1至A4中制得的制剂。

以上各药均在临用前加1％CMC配制成0.75g(生药)/ml(液体)。

(2)动物：SD大鼠50只，体重253.61±18.02g，雄性，购买自北京维通利华实验动物技术有限公司。

(3)试剂：磷酸肌酸激酶(CK)试剂盒和乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒购买于南京建成生物工程研究所，水合氯醛购买于中国医药公司北京采购供应站。

(4)动物分组及给药

将动物随机分为5组，每组10只，分别为：

①空白对照组：给予溶剂灌胃5ml×10天，其它组手术前灌胃给予溶剂5ml；

②模型对照组：给予溶剂灌胃5ml×10天，手术前灌胃给予溶剂5ml；

③红曲组：给予红曲溶液灌胃5ml×10天，手术前灌胃给予红曲溶液5ml；

④红花组：给予红花提取物溶液灌胃5ml×10天，手术前灌胃给予红花提取物溶液5ml；

⑤复方组：给予复方溶液灌胃5ml×10天，手术前灌胃给予复方溶液5ml。

2.实验方法

将雄性SD大鼠用水合氯醛(0.4g/kg,i.p.)腹腔注射麻醉，每隔30min定量补充水合氯醛(0.016g/kg,i.p.)维持麻醉状态，固定于鼠手术台，在颈部做正中切口，暴露气管，作气管插管并接呼吸机(潮气量2ml，呼吸频率为70次/分)，然后分离大鼠左侧颈总动脉，将颈总动脉插管插入颈总动脉，留作采血用；再于胸骨正中切开皮肤，在大鼠左侧胸廓第四肋间打开胸腔，用拉钩拉开，暴露心脏，用玻璃分针挑开心包膜，用5/0的细丝线于冠状动脉前降支上1/3处下面穿过结扎；缺血120min后颈总动脉取血，测定血清LDH和CK，摘取心脏，以TTC染色测定心肌梗死面积。

试验数据以平均数±标准差表示，采用SPSS19.0统计软件进单因素方差分析。

3.实验结果

分别如下面的表1至表4所示。

表1：实施例A1红曲药材、红花提取物以及复方制剂对大鼠心肌

缺血后心肌梗死面积、血清LDH和CK(U/L)浓度的影响

*p＜0.01、**p＜0.05，与模型对照组比较

与冠脉结扎模型组比较，冠状动脉前降支结扎2小时后，红花组、红曲组、红曲复方组均可显著降大鼠低心肌梗死面积、LDH浓度和CK浓度(P＜0.01，P＜0.05表1)；与其它组比较，红曲复方组降低幅度高于红花组和红曲组，表明红曲与红花组方具有更明显的降低心肌梗死面积、LDH浓度和CK浓度的作用。

表2：实施例A2红曲提取物、红花提取物以及复方制剂对大鼠心

肌缺血后心肌梗死面积、血清LDH和CK(U/L)浓度的影响

*p＜0.01、*p＜0.05，与模型对照组比较△p＜0.05，与红曲组比较

与冠脉结扎模型组比较，冠状动脉前降支结扎2小时后，红花组、红曲组、红曲复方组和市售红曲复方组均可显著降大鼠低心肌梗死面积、LDH浓度和CK浓度(P＜0.01或P＜0.05，表2)；与其它组比较，红曲复方组降低幅度高于单味中药组和市售红曲复方组，表明血脂康特制红曲与红花组方具有更明显的降低心肌梗死面积、LDH浓度和CK浓度的作用。

表3：实施例A3红曲提取物、红花提取物以及复方制剂对大鼠心肌缺血后心肌梗死面积、血清LDH和CK(U/L)浓度的影响

*p＜0.01、*p＜0.05，与模型对照组比较△p＜0.05，与红曲组比较

与冠脉结扎模型组比较，冠状动脉前降支结扎2小时后，红花组、红曲组、红曲复方组均可显著降大鼠低心肌梗死面积、LDH浓度和CK浓度(P＜0.01或P＜0.05，表3)；与其它组比较，红曲复方组降低幅度高于红花组和红曲组，表明红曲与红花组方具有更明显的降低心肌梗死面积、LDH浓度和CK浓度的作用。

表4：实施例A4红曲提取物、红花提取物以及复方制剂对大鼠心

肌缺血后心肌梗死面积、血清LDH和CK(U/L)浓度的影响

*p＜0.01、*p＜0.05，与模型对照组比较△p＜0.05，与红曲组比较

大鼠注射Pit后，T波明显抬高，30s时达到高峰，45s后出现T波低平、双相、倒置，心率减慢等。与模型组比较，注射垂体后叶素后15s和30s，红曲组、红花组和复方组使由垂体后叶素引起的急性心肌缺血性ST-T抬高显著降低(P＜0.01或P＜0.05，表4)，复方组较红曲组和红花组降低更明显，且5分钟内给药组ST-T抬高均表现降低趋势。

试验例A2：红曲红花药物组合物对垂体后叶诱发大鼠急性心肌缺 血的研究

1.实验材料

(1)受试药

红曲药材或红曲提取物制备：分别参照实施例A5至A8中的红曲药材或者红曲提取物。

红花提取物制备：分别参照实施例A5至A8中的红花提取物Ⅱ。

复方药物制剂的制备：分别参照实施例A5至A8中制得的制剂。

以上各药均在临用前加1％CMC配制成0.75g(生药)/ml(液体)。

(2)动物：SD大鼠50只，体重253.11±16.39g，购买自北京维通利华实验动物技术有限公司。

(3)试剂：实验用试剂盒购买于南京建成生物工程研究所，垂体后叶索(Pit)购买与沈阳济世制药有限公司，水合氯醛购买于中国医药公司北京采购供应站。

(4)仪器：RM-6240型多道生理信号采集处理系统(成都仪器厂)；TU-1901型紫外分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)。

(5)动物分组及给药大鼠雌雄分开饲养，并标记，对大鼠进行垂体后叶素敏感性筛选实验。方法：大鼠舌下静脉注射垂体后叶素0.35U/kg(浓度为1U/2ml)，观察Ⅱ导联心电图变化情况，选取对垂体后叶素敏感大鼠用于实验(ST段抬高或压低0.1mV以上，T波先高耸后低平或倒置)，将不敏感及心电图不正常大鼠淘汰，筛选Pit敏感大鼠50只随机分组，分别为：

①空白对照组：给予溶剂灌胃5ml×10天，其它组手术前灌胃给予溶剂5ml；

②模型对照组：给予溶剂灌胃5ml×10天，手术前灌胃给予溶剂5ml；

③红曲组：给予红曲提取物溶液灌胃5ml×10天，手术前灌胃给予红曲提取物溶液5ml；

④红花组：给予红花提取物溶液灌胃5ml×10天，手术前灌胃给予红花提取物溶液5ml；

⑤复方组：给予复方溶液灌胃5ml×10天，手术前灌胃给予复方溶液5ml。

2.实验方法

于末次给药后1h，对动物进行造模，称重后，将SD大鼠用水合氯醛(0.4g/kg,i.p.)腹腔注射麻醉，仰卧位固定于鼠手术台，四肢连续多道电生理记录仪，测定正常标准肢体Ⅱ导联心电图，空白组给予舌下静脉注射生理盐水，模型组及给药组给予舌下静脉注射PIT0.6U/kg，于5S内注射完毕，注射垂体后叶素后连续记录心电图5min，分析心电图ST-T改变情况。

试验数据以平均数±标准差表示，采用SPSSl9.0统计软件进行单因素方差分析。

3.实验结果

分别如下面的表5至表8所示。

表5：实施例A5红曲药材、红花提取物以及复方制剂对垂体后叶素诱发的急性缺血心肌ST-T(mV)改变的影响

*p＜0.01、**p＜0.05，与模型对照组比较

大鼠注射Pit后，T波明显抬高，30s时达到高峰，45s后出现T波低平、双相、倒置，心率减慢等。与模型组比较，注射垂体后叶素后15s和30s，红曲组、红花组和复方组使由垂体后叶素引起的急性心肌缺血性ST-T抬高显著降低(P＜0.01或P＜0.05，表5)，复方组较红曲组和红花组降低更明显，且5分钟内给药组ST-T抬高均表现降低趋势。

表6：实施例A6红曲提取物、红花提取物以及复方制剂对垂体后叶素诱发的急性缺血心肌ST-T(mV)改变的影响

*p＜0.01，**p＜0.05与模型对照组比较

大鼠注射Pit后，T波明显抬高，30s时达到高峰，45s后出现T波低平、双相、倒置，心率减慢等。与模型组比较，注射垂体后叶素后15s和30s，红曲组、红花组和复方组使由垂体后叶素引起的急性心肌缺血性ST-T抬高显著降低(P＜0.01或P＜0.05，表6)，复方组较红曲组和红花组降低更明显，且5分钟内给药组ST-T抬高均表现降低趋势。

表7：实施例A7红曲提取物、红花提取物以及复方制剂对垂体后叶素诱发的急性缺血心肌ST-T(mV)改变的影响

*p＜0.01，**p＜0.05与模型对照组比较

大鼠注射Pit后，T波明显抬高，30s时达到高峰，45s后出现T波低平、双相、倒置，心率减慢等。与模型组比较，注射垂体后叶素后15s和30s，红曲组、红花组和复方组使由垂体后叶素引起的急性心肌缺血性ST-T抬高显著降低(P＜0.01或P＜0.05，表7)，复方组较红曲组和红花组降低更明显，且5分钟内给药组ST-T抬高均表现降低趋势。

表8：实施例A8红曲提取物、红花提取物以及复方制剂对垂体后叶素诱发的急性缺血心肌ST-T(mV)改变的影响

*p＜0.01，**p＜0.05与模型对照组比较

大鼠注射Pit后，T波明显抬高，30s时达到高峰，45s后出现T波低平、双相、倒置，心率减慢等。与模型组比较，注射垂体后叶素后15s和30s，红曲组、红花组和复方组使由垂体后叶素引起的急性心肌缺血性ST-T抬高显著降低(P＜0.01或P＜0.05，表8)，复方组较红曲组和红花组降低更明显，且5分钟内给药组ST-T抬高均表现降低趋势。

(二)红曲红花丹参提取物、组合物及其制剂的制备和生物学试验

实施例B1：红曲红花丹滴丸剂的制备

处方：红曲250g、红花150g、丹参1500g(5：3：30)。

制备方法：

a、红曲，粉碎，加入4倍体积份75％乙醇溶液提取2小时，滤渣加入2倍体积份75％乙醇加热回流提取1小时，提取液过滤，合并两次滤液浓缩，浓缩液中加入1倍的去离子水混匀，冷藏10小时，离心，收集沉淀，干燥粉碎；

b、丹参粉碎与红花混合，按重量份每次加入10倍体积份水溶液，在80℃－90℃下浸提1小时，提取3次，提取液过滤，合并滤液，回收乙醇浓缩至稠膏，浓缩液中加入乙醇至浓度为75％，冷藏放置10小时，过滤得滤液，减压浓缩成稠膏；

c、将步骤b所得稠膏干燥成干膏粉与步骤a干粉混合，加入制剂辅料，按照常规工艺，制成临床接受的滴丸剂。

实施例B2：红曲红花丹参胶囊剂的制备(1)

处方：红曲200g、红花100g、丹参1600g(4：2：32)。

制备方法：

a、红曲粉碎为粒径不大于75μm细粉，混合；

b、丹参粉碎与红花混合，按重量份每次加入12倍体积份水溶液，在70℃－80℃下浸提1.5分钟，提取3次，提取液过滤，合并滤液，回收乙醇浓缩至稠膏，浓缩液中加入乙醇至浓度为75％，冷藏放置16小时，过滤得滤液，减压浓缩成稠膏；

c、将步骤b所得稠膏干燥成干膏粉与步骤a细粉混合，加入制剂辅料，按照常规工艺，制成临床接受的胶囊。

实施例B3：红曲红花丹参软胶囊剂的制备(1)

处方：红曲200、红花200、丹参1400(4：4：28)。

制备方法：

a、红曲粗粉与丹参混合，按重量份每次加入8倍体积份75％乙醇溶液提取2小时，提取2次，提取液过滤，合并滤液，浓缩至稠膏；

b、红花，按重量份每次加入15倍体积份30％乙醇水溶液，在60℃－70℃下浸提45分钟，提取3次，提取液过滤，浓缩至稠膏；

c、将步骤a、b所得稠膏混合，加入制剂辅料，按照常规工艺，制成临床接受的软胶囊。

实施例B4：红曲红花丹参片剂的制备(1)

处方：红曲250、红花200g、丹参1000(5：4：20)。

制备方法：

a、红曲粗粉与丹参混合，按重量份每次加入6倍体积份85％乙醇溶液提取1.5小时，提取3次，提取液过滤，合并滤液；

b、红花，按重量份每次加入20倍体积份20％乙醇水溶液，在80℃－90℃下浸提30分钟，提取3次，提取液过滤，浓缩至稠膏；

c、将步骤a、b滤液分别用截留分子量20000的二醋酸纤维素膜，按照常规的参数进行超滤，超滤液分别浓缩得到相对密度为0.95－1.05的稠膏；

d、将步骤c所得稠膏混合，干燥成干膏粉，加入制剂辅料，按照常规工艺，制成临床接受的片剂。

实施例B5：红曲红花丹参胶囊剂的制备(2)

处方：红曲300g、红花200g、丹参1500g(6：4：30)。

制备方法：

a、红曲粗粉，加入3倍体积份65％乙醇加热回流提取3小时，提取液过滤；滤渣加入2体积份65％乙醇加热回流提取2小时，提取液过滤，合并两次滤液，减压回收乙醇，浓缩，浓缩液中加入1倍的去离子水混匀，放置8小时，离心，收集沉淀，干燥。

b、丹参粉碎与红花混合，按重量份第一次加入15倍体积份水溶液，在70℃－80℃下浸提1.5小时，提取2次，提取液过滤，合并滤液，回收乙醇浓缩至稠膏，浓缩液中加入乙醇至浓度为70％，冷藏放置8小时，过滤得滤液，减压浓缩成稠膏；

c、将步骤a、b所得稠膏混合干燥成干膏粉，加入制剂辅料，按照常规工艺，制成临床接受的胶囊剂。

实施例B6：红曲红花丹参片剂的制备(2)

处方：红曲300g、红花250g、丹参1000g(6：5：20)。

制备方法：

a、红曲粗粉与丹参混合，按重量份第一次加入12倍体积份90％乙醇溶液提取2小时，提取液过滤，滤渣加入8倍体积份90％乙醇溶液提取1小时，提取液过滤、合并两次滤液，浓缩至稠膏；

b、红花，按重量份每次加入30倍体积份50％乙醇水溶液，在80℃－90℃下浸提30分钟，提取2次，提取液过滤，浓缩至稠膏；

c、将步骤a、b所得稠膏干燥成干膏粉，加入制剂辅料，按照常规工艺，制成临床接受的片剂。

实施例B7：红曲红花丹参颗粒剂的制备

处方：红曲400g、红花300、丹参1000g(4：3：10)。

制备方法：

a、红曲粗粉，加入5倍体积份60％乙醇水溶液提取3小时，滤渣加入2倍体积份50％乙醇加热回流提取1小时，提取液过滤，合并两次滤液浓缩，浓缩液中加入1倍的去离子水混匀，冷藏4小时，离心，收集沉淀，干燥；

b、红花，加入20倍体积份的20％乙醇水溶液，在60℃－70℃浸润45小时，提取2次，提取液过滤，合并滤液，回收乙醇浓缩至稠膏；

c、丹参粉碎，按重量份加入8倍体积份水溶液，加热回流提取1.5小时，提取3次，提取液过滤，合并滤液，回收乙醇浓缩至稠膏，浓缩液中加入乙醇至浓度为60％，冷藏放置8小时，过滤得滤液，减压浓缩成稠膏；

d、将步骤b、c所得稠膏干燥成干膏粉与步骤a干粉混合，加入制剂辅料，按照常规工艺，制成临床接受的颗粒剂。

实施例B8：红曲红花丹参分散片剂的制备

处方：红曲400g、红花200g、丹参800g(4：2：8)。

制备方法：

a、红曲粗粉，按重量份每次加入5倍体积份50％乙醇加热回流提取2小时，提取2次，提取液过滤，合并两次滤液，减压回收乙醇，浓缩稠膏，干燥粉碎；

b、红花，按重量份加入20倍体积份水溶液，加热回流提取1小时，提取2次，提取液过滤，合并滤液，回收乙醇浓缩至稠膏，浓缩液中加入乙醇至浓度为80％，冷藏放置24小时，过滤得滤液，减压浓缩成稠膏；

c、丹参，粉碎，按重量份每次加入10倍体积份90％乙醇，加热回流提取2.5小时，提取2次，滤过，合并滤液，回收乙醇浓缩至稠膏，加入1.5倍去离子水混匀，冷藏放置12小时，过滤得滤液，回收溶剂浓缩至稠膏；

d、将步骤b、c所得稠膏干燥成干膏粉与步骤a干粉混合，加入制剂辅料，按照常规工艺，制成临床接受的分散片剂。

实施例B9：红曲红花丹参丸剂的制备

处方：红曲500g、红花300g、丹参800g(5：3：8)。

制备方法：

a、红曲粗粉，按重量份加入4倍体积份75％乙醇水溶液提取2.5小时，提取液过滤，滤渣加入3倍体积份75％乙醇加热回流提取1.5小时，提取液过滤，合并两次滤液浓缩，浓缩液中加入2倍的去离子水混匀，冷藏放置6小时，离心，收集沉淀，干燥粉碎；

b、丹参粉碎与红花混合，按重量份加入20倍体积份水溶液，在80℃－90℃下浸提2小时，提取液过滤，滤渣加入15倍体积份水溶液，在80℃－90℃下浸提1小时，提取液过滤，合并滤液，回收乙醇浓缩至稠膏，浓缩液中加入乙醇至浓度为80％，冷藏放置6小时，过滤得滤液，减压浓缩成稠膏；

c、将步骤b所得稠膏干燥成干膏粉与步骤a干粉混合，加入制剂辅料，按照常规工艺，制成临床接受的丸剂。

实施例B10：红曲红花丹参软胶囊剂的制备(2)

处方：红曲600g、红花400g、丹参600g(6：4：6)。

制备方法：

a、红曲粗粉与丹参混合，按重量份每次加入6倍体积份75％醇水液提取3小时，提取2次，过滤，合并滤液；

b、红花，按重量份第一次加入15倍体积份的40％乙醇加热提取1.5小时，过滤，滤渣加入10倍体积份的40％乙醇加热提取45分钟，过滤，合并滤液；

c、将步骤a、b滤液分别用截留分子量20000的二醋酸纤维素膜，按照常规的参数进行超滤，超滤液分别浓缩得到相对密度为0.95－1.05的稠膏；

d、将步骤c所得稠膏混合，干燥成干膏粉，加入制剂辅料，按照常规工艺，制成临床接受的软胶囊。

实施例B11：红曲红花丹参口服液的制备

处方：红曲700g、红花400g、丹参700g(7：4：7)。

制备方法：

a、红曲粗粉，按重量份每次加入10倍体积份75％乙醇溶液提取3小时，加热回流提取1次，提取液过滤，合并滤液，减压浓缩成稠膏；

b、丹参，粉碎，按重量份每次加入10倍体积份90％乙醇，加热回流提取2小时，提取2次，提取液过滤，合并滤液，回收乙醇浓缩至稠膏，加入1倍去离子水混匀，冷藏放置12小时，过滤得滤液，减压浓缩成稠膏；

c、红花，按重量份每次加入12倍体积份的20％乙醇加热提取45分钟，提取2次，过滤，合并滤液，减压浓缩成稠膏；

d、将步骤a、b、c所得稠膏干燥成干膏粉，加入制剂辅料，按照常规工艺，制成临床接受的口服液。

试验例B1：红曲红花丹参药物组合物对整体大鼠心肌缺血模型的 研究

1.实验材料：

(1)受试药制备

复方1组(红曲250g、红花150g、丹参1500g)：为实施例B1的滴丸剂；

复方2组：为实施例B2的胶囊剂；

复方3组：为实施例B3的软胶囊剂；

复方4组：为实施例B4的片剂；

简化1组：取红曲250g、丹参1500g，按照实施例B1的工艺制成滴丸剂；

简化2组：取红花150g、丹参1500g，按照实施例B1的工艺制成滴丸剂；

简化3组：取红曲250g、红花150g，按照实施例B1的工艺制成滴丸剂；

复方丹参片组：取市售的复方丹参片(广州白云山和记黄埔中药有限公司生产)。

以上各药均在临用前加水溶液配制成0.75g(生药)/ml(液体)。

(2)动物：SD大鼠100只，体重247.80±15.69g，雄性，购买自北京维通利华实验动物技术有限公司。

(3)试剂：磷酸肌酸激酶(CK)试剂盒和乳酸脱氢酶(LDH小时)试剂盒购买于南京建成生物工程研究所，水合氯醛购买于中国医药公司北京采购供应站。

(4)动物分组及给药将动物随机分为10组，每组10只，分别为：

①空白对照组：给予溶剂灌胃5ml×7天，其它组手术前灌胃给予溶剂5ml；

②模型对照组：给予溶剂灌胃5ml×7天，手术前灌胃给予溶剂5ml；

③复方1组：给予复方1溶液灌胃5ml×7天，手术前灌胃给予复方1溶液5ml；

④复方2组：给予复方2溶液灌胃5ml×7天，手术前灌胃给予复方2溶液5ml；

⑤复方3组：给予复方3溶液灌胃5ml×7天，手术前灌胃给予复方3溶液5ml；

⑥复方4组：给予复方4溶液灌胃5ml×7天，手术前灌胃给予复方4溶液5ml；

⑦简化1组：给予简化1组溶液灌胃5ml×7天，手术前灌胃给予简化1组溶液5ml；

⑧简化2组：给予简化2组溶液灌胃5ml×7天，手术前灌胃给予简化2组溶液5ml；

⑨简化3组：给予简化3组溶液灌胃5ml×7天，手术前灌胃给予简化3组溶液5ml；

⑩复方丹参片组：给予复方丹参片溶液灌胃5ml×7天，手术前灌胃给予复方丹参片溶液5ml。

2.实验方法

将雄性SD大鼠用水合氯醛(0.4g/kg,i.p.)腹腔注射麻醉，每隔30min定量补充水合氯醛(0.016g/kg,i.p.)维持麻醉状态，固定于鼠手术台，在颈部做正中切口，暴露气管，作气管插管并接呼吸机(潮气量2ml，呼吸频率为70次/分)，然后分离大鼠左侧颈总动脉，将颈总动脉插管插入颈总动脉，留作采血用；再于胸骨正中切开皮肤，在大鼠左侧胸廓第四肋间打开胸腔，用拉钩拉开，暴露心脏，用玻璃分针挑开心包膜，用5/0的细丝线于冠状动脉前降支上1/3处下面穿过结扎；缺血120min后颈总动脉取血，测定血清LDH小时和CK，摘取心脏，以TTC染色测定心肌梗死面积。

试验数据以平均数±标准差表示，采用SPSS19.0统计软件进单因素方差分析。

3.实验结果

表9：各组药物对大鼠心肌缺血后心肌梗死面积、血清LDH和CK(U/L)浓度的影响

*p＜0.01，**p＜0.05与模型对照组比较；▲p＜0.05与简化2组、复方丹参片组比较

与冠脉结扎模型组比较，冠状动脉前降支结扎2小时后，复方组、简化组和复方丹参片组均可显著降低心肌梗死面积、LDH浓度和CK浓度(P＜0.01或P＜0.05，表9)，复方组降低幅度高于简化组和复方丹参片组。表明本发明药物组合物具有更明显的降低心肌梗死面积、LDH浓度和CK浓度的作用。

试验例B2：红曲红花丹参药物组合物对垂体后叶诱发大鼠急性心 肌缺血的研究

1.实验材料

(1)受试药

复方1组(红曲300g、红花200g、丹参1500g)：为实施例B5的胶囊剂；

复方2组：为实施例B6的片剂；

复方3组：为实施例B7的颗粒剂；

复方4组：为实施例B10的软胶囊；

简化1组：取红曲300g、丹参1500g，按照实施例B7的工艺制成颗粒剂；

简化2组：取红花200g、丹参1500，按照实施例B1的工艺制成胶囊剂；

简化3组：取红曲300g、红花200g，按照实施例B1的工艺制成胶囊剂；

复方丹参片组：取市售的复方丹参片(广州白云山和记黄埔中药有限公司生产)。

以上各药均在临用前加水溶液配制成0.75g(生药)/ml(液体)。

(2)动物：SD大鼠100只，体重245.25±16.70g，购买自北京维通利华实验动物技术有限公司。

(3)试剂：实验用试剂盒购买于南京建成生物工程研究所，垂体后叶索(Pit)购买与沈阳济世制药有限公司，水合氯醛购买于中国医药公司北京采购供应站。

(4)仪器：RM－6240型多道生理信号采集处理系统(成都仪器厂)；TU－1901型紫外分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)。

(5)动物分组及给药大鼠雌雄分开饲养，并标记，对大鼠进行垂体后叶素敏感性筛选实验。方法：大鼠舌下静脉注射垂体后叶素0.35U/kg(浓度为1U/2ml)，观察Ⅱ导联心电图变化情况，选取对垂体后叶素敏感大鼠用于实验(ST段抬高或压低0.1mV以上，T波先高耸后低平或倒置)，将不敏感及心电图不正常大鼠淘汰，筛选Pit敏感大鼠50只随机分组，分别为：

①空白对照组：给予溶剂灌胃5ml×7天，其它组手术前灌胃给予溶剂5ml；

②模型对照组：给予溶剂灌胃5ml×7天，手术前灌胃给予溶剂5ml；

③复方1组：给予复方1溶液灌胃5ml×7天，手术前灌胃给予复方1溶液5ml；

④复方2组：给予复方2溶液灌胃5ml×7天，手术前灌胃给予复方2溶液5ml；

⑤复方3组：给予复方3溶液灌胃5ml×7天，手术前灌胃给予复方3溶液5ml；

⑥复方4组：给予复方4溶液灌胃5ml×7天，手术前灌胃给予复方4溶液5ml；

⑦简化1组：给予简化1组溶液灌胃5ml×7天，手术前灌胃给予简化1组溶液5ml；

⑧简化2组：给予简化2组溶液灌胃5ml×7天，手术前灌胃给予简化2组溶液5ml；

⑨简化3组：给予简化3组溶液灌胃5ml×7天，手术前灌胃给予简化3组溶液5ml；

⑩复方丹参片组：给予复方丹参片溶液灌胃5ml×7天，手术前灌胃给予复方丹参片溶液5ml。

2.实验方法

于末次给药后1小时，对动物进行造模，称重后，将SD大鼠用水合氯醛(0.4g/kg,i.p.)腹腔注射麻醉，仰卧位固定于鼠手术台，四肢连续多道电生理记录仪，测定正常标准肢体Ⅱ导联心电图，空白组给予舌下静脉注射生理盐水，模型组及给药组给予舌下静脉注射PIT0.6U/kg，于5S内注射完毕，注射垂体后叶素后连续记录心电图5min，分析心电图ST－T改变情况。

试验数据以平均数±标准差表示，采用SPSS19.0统计软件进行单因素方差分析。

3.实验结果

表10：各组药物对垂体后叶素诱发的急性缺血心肌ST－T(mV)改变的影响

*p＜0.01，**p＜0.05与模型对照组比较

大鼠注射Pit后，T波明显抬高，30s时达到高峰，45s后出现T波低平、双相、倒置，心率减慢等。与模型组比较，注射垂体后叶素后15s和30s，复方组、简化组及复方丹参片组均使由垂体后叶素引起的急性心肌缺血性ST－T抬高显著降低(P＜0.01或P＜0.05，表10)，复方组较简化组和复方丹参片降低更明显，且5分钟内给药组ST－T抬高均表现降低趋势。

(三)红曲红花三七提取物、组合物及其制剂的制备和生物学试验

实施例C1：红曲红花三七滴丸剂的制备

处方：红曲800g、红花300g、三七400g(8：3：4)。

制备方法：

a、红曲粗粉，第一次加入4倍体积份70％乙醇溶液提取2小时，滤渣加入2倍体积份70％乙醇加热回流提取1小时，提取液过滤，合并两次滤液浓缩，浓缩液中加入1倍的去离子水混匀，冷藏10小时，离心，收集沉淀，干燥；

b、三七粗粉，红花药材混合，加入10倍体积份的水溶液，在70℃－90℃浸提1.5小时，提取3次，提取液过滤，合并滤液，浓缩成稠膏，加入乙醇至乙醇浓度70％，冷蔵10小时使沉淀，过滤，滤液回收，浓缩至稠膏；

c、将步骤b所得稠膏干燥成干膏粉与步骤a干粉混合，加入制剂辅料，按照常规工艺，制成临床接受的滴丸剂。

实施例C2：红曲红花三七胶囊剂的制备(1)

处方：红曲800g、红花400g、三七600g(4：2：3)。

制备方法：

a、三七和红曲分别粉碎为粒径不大于75μm细粉，混合；

b、红花药材，加入10倍体积份水溶液，在60℃－70℃下浸提1.5小时，提取3次，提取液过滤，合并滤液，回收乙醇浓缩至稠膏，浓缩液中加入乙醇至乙醇浓度60％，冷藏放置6小时，过滤得滤液，减压浓缩成稠膏；

c、将步骤b所得稠膏干燥成干膏粉与步骤a细粉混合，加入制剂辅料，按照常规工艺，制成临床接受的胶囊剂。

实施例C3：红曲红花三七软胶囊剂的制备(1)

处方：红曲700g、红花200g、三七300g(7：2：3)。

制备方法：

a、红曲和三七粗粉，混合，第一次加入6倍体积份75％乙醇溶液提取2小时，第二次加入4倍体积份75％乙醇加热回流提取1小时，第三次加入4倍体积份75％乙醇加热回流提取1小时，提取液过滤，合并滤液；

b、红花药材，加入15倍体积份50％乙醇水溶液，在60℃－70℃下浸提45分钟，提取3次，提取液过滤，合并滤液；

c、将步骤a、b所得滤液用截留分子量20000的二醋酸纤维素膜，按照常规的参数进行超滤，超滤液浓缩得到相对密度为0.95－1.05的稠膏；

d、将步骤c所得稠膏，加入制剂辅料，按照常规工艺，制成临床接受的软胶囊剂。

实施例C4：红曲红花三七泡腾片剂的制备

处方：红曲600g、红花200g、三七500g(6：2：5)。

制备方法：

a、红曲粗粉，加入3倍体积份50％乙醇溶液提取3小时，滤渣加入2倍体积份50％乙醇加热回流提取1小时，提取液过滤，合并两次滤液浓缩，浓缩液中加入1倍的去离子水混匀，冷藏4小时，离心，收集沉淀，干燥；

b、三七粗粉，加入15倍体积份的60％乙醇浸润2小时，浸渍16小时后，再以3-5ml/min的速度渗漉，收集初漉液，另器保存，继续渗漏至渗漉液颜色变淡或近无色时为止，收集续漉液，浓缩至稠膏，加入初漉液，混匀浓缩至稠膏；

c、红花，加入15倍体积份水溶液，在70℃－80℃下浸提45分钟，提取3次，提取液过滤，合并滤液，回收乙醇浓缩至稠膏，浓缩液中加入乙醇至浓度为70％，冷藏放置10小时，过滤得滤液，减压浓缩成稠膏；

d、将步骤b、c所得稠膏干燥成干膏粉与步骤a干粉混合，加入制剂辅料，按照常规工艺，制成临床接受的泡腾片。

实施例C5：红曲红花三七颗粒剂的制备(1)

处方：红曲500g、红花100g、三七200g(5：1：2)。

制备方法：

a、红曲粗粉，第一次加入3倍体积份75％乙醇水溶液加热回流提取3小时，提取液过滤；滤渣加入2体积份75％乙醇水溶液加热回流提取2小时，提取液过滤，合并两次滤液，减压回收乙醇，浓缩，浓缩液中加入1倍的去离子水混匀，放置8小时，离心，收集沉淀，干燥。

b、三七粗粉，每次加入6倍体积份的70％乙醇水溶液加热提取1小时，提取三次，过滤，合并滤液，浓缩，上D101型大孔树脂柱待吸附后，用纯净水冲洗，再用70％乙醇水溶液解吸附得洗脱液，洗脱液浓缩至稠膏；

c、红花，加入20倍体积份水溶液，在50℃－60℃下浸提1小时，提取3次，提取液过滤，合并滤液，回收乙醇浓缩至稠膏，浓缩液中加入乙醇至浓度为80％，冷藏放置16小时，过滤得滤液，减压浓缩成稠膏；

d、将步骤b、c所得稠膏干燥成干膏粉与步骤a干粉混合，加入制剂辅料，按照常规工艺，制成临床接受的颗粒剂。

实施例C6：红曲红花三七片剂的制备(1)

处方：红曲400g、红花100g、三七300g(4：1：3)。

制备方法：

a、红曲和三七粗粉，混合，每次加入5倍体积份60％乙醇水溶液提取1.5小时，提取3次，提取液过滤，合并两次滤液，减压浓缩至稠膏；

b、红花，加入20倍体积份30％乙醇水溶液，在70℃－80℃下浸提1小时，提取3次，提取液过滤，合并滤液，回收溶剂，在55℃－60℃下浓缩至稠膏；

c、将步骤a、b所得稠膏，加入制剂辅料，按照常规工艺，制成临床接受的片剂。

实施例C7：红曲红花三七软胶囊剂的制备(2)

处方：红曲400g、红花100g、三七200g(4：1：2)。

制备方法：

a、红曲粗粉，第一次加入4倍体积份80％乙醇水溶液提取3小时，滤渣加入3倍体积份80％乙醇水溶液加热回流提取1小时，提取液过滤，合并两次滤液浓缩，浓缩液中加入1倍的去离子水混匀，冷藏4小时，离心，收集沉淀，干燥；

b、三七粗粉，每次加入6倍体积份的80％乙醇水溶液加热提取1小时，提取三次，过滤，合并滤液，浓缩成稠膏；

c、红花，每次加入30倍体积份水溶液，在80℃－90℃下浸提30分钟，提取2次，提取液过滤，合并滤液，回收乙醇浓缩至稠膏，浓缩液中加入乙醇至浓度为90％，冷藏放置24小时，过滤得滤液，减压浓缩成稠膏；

d、将步骤b、c所得稠膏干燥成干膏粉与步骤a干粉混合，加入制剂辅料，按照常规工艺，制成临床接受的软胶囊剂。

实施例C8：红曲红花三七胶囊剂的制备(2)

处方：红曲400g、红花600g、三七600g(2：3：3)。

制备方法：

a、红曲粉碎为粒径不大于75μm细粉；

b、三七粗粉，每次加入5倍体积份的85％乙醇水溶液加热提取1小时，提取三次，过滤，合并滤液，浓缩成稠膏；

c、红花，加入30倍体积份40％乙醇水溶液，在80℃－90℃下浸提30分钟，提取2次，提取液过滤，合并滤液，回收溶剂，浓缩至稠膏；

d、将步骤b、c所得稠膏干燥成干膏粉与步骤a细粉混合，加入制剂辅料，按照常规工艺，制成临床接受的胶囊剂。

实施例C9：红曲红花三七丸剂的制备

处方：红曲600g、红花200g、三七600g(3：1：3)。

制备方法：

a、红曲粗粉，每次加入3倍体积份90％乙醇水溶液加热回流提取2小时，提取2次，过滤，合并合并滤液，浓缩至稠膏；

b、三七粉碎为粒径不大于75μm细粉；

c、红花，加入25倍体积份30％乙醇水溶液，在60℃－70℃下浸提30分钟，提取3次，提取液过滤，合并滤液，回收溶剂，在55℃－60℃下浓缩至稠膏；

d、将步骤a、c所得稠膏干燥成干膏粉与步骤b干粉混合，加入制剂辅料，按照常规工艺，制成临床接受的丸剂。

实施例C10：红曲红花三七片剂的制备(2)

处方：红曲300g、红花300g、三七400g(3：3：4)。

制备方法：

a、红曲粗粉，第一次加入3倍体积份75％乙醇水溶液加热回流提取3小时，提取液过滤；滤渣加入2体积份75％乙醇水溶液加热回流提取2小时，提取液过滤，合并两次滤液，减压回收乙醇，浓缩至在55－60℃下测相对密度0.95－1.06的浓缩液，浓缩液中加入1倍的去离子水混匀，放置8小时，离心，收集沉淀，干燥。

b、三七粗粉，每次加入6倍体积份的70％乙醇水溶液加热提取1小时，提取三次，过滤，合并滤液，浓缩，上D101型大孔树脂柱待吸附后，用纯净水冲洗，再用70％乙醇水溶液解吸附得洗脱液，洗脱液浓缩至稠膏；

c、红花，每次加入20倍体积份水溶液，在70℃－80℃下浸提45分钟，提取2次，提取液过滤，合并滤液，回收乙醇浓缩至稠膏，浓缩液中加入乙醇至浓度为80％，冷藏放置16小时，过滤得滤液，减压浓缩成稠膏；

c、将步骤b、c所得稠膏与步骤a干粉混合，加入制剂辅料，按照常规工艺，制成临床接受的片剂。

实施例C11：红曲红花三七颗粒剂的制备(2)

处方：红曲400g、红花200g、三七600g(2：1：3)。

制备方法：

a、红曲药材，每次加入3倍体积份60％乙醇溶液提取2小时，提取3次，提取液粗滤，合并滤液；

b、红花和三七粗粉，混合，每次加入10倍体积份60％乙醇，在80℃－90℃下浸提5小时，提取2次，提取液过滤，合并滤液；

c、将步骤a、b滤液用截留分子量20000的二醋酸纤维素膜，按照常规的参数进行超滤，超滤液浓缩得到相对密度为0.95－1.05的稠膏；

d、将步骤c所得稠膏干燥成干膏粉，加入制剂辅料，按照常规工艺，制成临床接受的颗粒剂。

试验例C1：红曲红花三七药物组合物对整体大鼠心肌缺血模型的 研究

1.实验材料：

(1)受试药制备

复方1组(红曲800g、红花300g、三七400g)：为实施例C1的滴丸剂；

复方2组：为实施例C2的胶囊剂；

复方3组：为实施例C3的软胶囊剂；

复方4组：为实施例C4的泡腾片剂；

简化1组：取红曲800g、三七400g，按照实施例C1的工艺制成滴丸剂；

简化2组：取红花300g、三七400g，按照实施例C1的工艺制成滴丸剂；

简化3组：取红曲800g、红花300g，按照实施例C1的工艺制成滴丸剂；

复方丹参片组：取市售的复方丹参片(广州白云山和记黄埔中药有限公司生产)。

以上各药均在临用前加水溶液配制成0.75g(生药)/ml(液体)。

(2)动物：SD大鼠100只，体重249.53±17.67g，雄性，购买自北京维通利华实验动物技术有限公司。

(3)试剂：磷酸肌酸激酶(CK)试剂盒和乳酸脱氢酶(LDH小时)试剂盒购买于南京建成生物工程研究所，水合氯醛购买于中国医药公司北京采购供应站。

(4)动物分组及给药将动物随机分为10组，每组10只，分别为：

①空白对照组：给予溶剂灌胃5ml×7天，其它组手术前灌胃给予溶剂5ml；

②模型对照组：给予溶剂灌胃5ml×7天，手术前灌胃给予溶剂5ml；

③复方1组：给予复方1溶液灌胃5ml×7天，手术前灌胃给予复方1溶液5ml；

④复方2组：给予复方2溶液灌胃5ml×7天，手术前灌胃给予复方2溶液5ml；

⑤复方3组：给予复方3溶液灌胃5ml×7天，手术前灌胃给予复方3溶液5ml；

⑥复方4组：给予复方4溶液灌胃5ml×7天，手术前灌胃给予复方4溶液5ml；

⑦简化1组：给予简化1组溶液灌胃5ml×7天，手术前灌胃给予简化1组溶液5ml；

⑧简化2组：给予简化2组溶液灌胃5ml×7天，手术前灌胃给予简化2组溶液5ml；

⑨简化3组：给予简化3组溶液灌胃5ml×7天，手术前灌胃给予简化3组溶液5ml；

⑩复方丹参片组：给予复方丹参片溶液灌胃5ml×7天，手术前灌胃给予复方丹参片溶液5ml。

2.实验方法

将雄性SD大鼠用水合氯醛(0.4g/kg,i.p.)腹腔注射麻醉，每隔30min定量补充水合氯醛(0.016g/kg,i.p.)维持麻醉状态，固定于鼠手术台，在颈部做正中切口，暴露气管，作气管插管并接呼吸机(潮气量2ml，呼吸频率为70次/分)，然后分离大鼠左侧颈总动脉，将颈总动脉插管插入颈总动脉，留作采血用；再于胸骨正中切开皮肤，在大鼠左侧胸廓第四肋间打开胸腔，用拉钩拉开，暴露心脏，用玻璃分针挑开心包膜，用5/0的细丝线于冠状动脉前降支上1/3处下面穿过结扎；缺血120min后颈总动脉取血，测定血清LDH小时和CK，摘取心脏，以TTC染色测定心肌梗死面积。

试验数据以平均数±标准差表示，采用SPSS19.0统计软件进单因素方差分析。

3.实验结果

表11：各组药物对大鼠心肌缺血后心肌梗死面积、血清LDH和CK(U/L)浓度的影响

*p＜0.01，**p＜0.05与模型对照组比较；▲p＜0.05与简化2组、复方丹参片组比较

与冠脉结扎模型组比较，冠状动脉前降支结扎2小时后，复方组、简化组和复方丹参片组均可显著降低心肌梗死面积、LDH浓度和CK浓度(P＜0.01或P＜0.05，表11)，复方组降低幅度高于简化组和复方丹参片组。表明本发明药物组合物具有更明显的降低心肌梗死面积、LDH浓度和CK浓度的作用。

试验例C2：红曲红花三七药物组合物对垂体后叶诱发大鼠急性心 肌缺血的研究

1.实验材料

(1)受试药

复方1组(红曲400g、红花100g、三七300g)：为实施例C6的片剂；

复方2组：为实施例C5的颗粒剂；

复方3组：为实施例C7的软胶囊；

复方4组：为实施例C11的颗粒剂；

简化1组：取红曲400g、红花100g，按照实施例C7的工艺制成片剂；

简化2组：取红花100、三七300g，按照实施例C1的工艺制成片剂；

简化3组：取红曲400g、三七300g，按照实施例C1的工艺制成片剂；

复方丹参片组：取市售的复方丹参片(广州白云山和记黄埔中药有限公司生产)。

以上各药均在临用前加水溶液配制成0.75g(生药)/ml(液体)。

(2)动物：SD大鼠100只，体重251.64±19.05g，购买自北京维通利华实验动物技术有限公司。

(3)试剂：实验用试剂盒购买于南京建成生物工程研究所，垂体后叶索(Pit)购买与沈阳济世制药有限公司，水合氯醛购买于中国医药公司北京采购供应站。

(4)仪器：RM-6240型多道生理信号采集处理系统(成都仪器厂)；TU-1901型紫外分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)。

(5)动物分组及给药大鼠雌雄分开饲养，并标记，对大鼠进行垂体后叶素敏感性筛选实验。方法：大鼠舌下静脉注射垂体后叶素0.35U/kg(浓度为1U/2ml)，观察Ⅱ导联心电图变化情况，选取对垂体后叶素敏感大鼠用于实验(ST段抬高或压低0.1mV以上，T波先高耸后低平或倒置)，将不敏感及心电图不正常大鼠淘汰，筛选Pit敏感大鼠50只随机分组，分别为：

①空白对照组：给予溶剂灌胃5ml×7天，其它组手术前灌胃给予溶剂5ml；

②模型对照组：给予溶剂灌胃5ml×7天，手术前灌胃给予溶剂5ml；

③复方1组：给予复方1溶液灌胃5ml×7天，手术前灌胃给予复方1溶液5ml；

④复方2组：给予复方2溶液灌胃5ml×7天，手术前灌胃给予复方2溶液5ml；

⑤复方3组：给予复方3溶液灌胃5ml×7天，手术前灌胃给予复方3溶液5ml；

⑥复方4组：给予复方4溶液灌胃5ml×7天，手术前灌胃给予复方4溶液5ml；

⑦简化1组：给予简化1组溶液灌胃5ml×7天，手术前灌胃给予简化1组溶液5ml；

⑧简化2组：给予简化2组溶液灌胃5ml×7天，手术前灌胃给予简化2组溶液5ml；

⑨简化3组：给予简化3组溶液灌胃5ml×7天，手术前灌胃给予简化3组溶液5ml；

⑩复方丹参片组：给予复方丹参片溶液灌胃5ml×7天，手术前灌胃给予复方丹参片溶液5ml。

2.实验方法

于末次给药后1小时，对动物进行造模，称重后，将SD大鼠用水合氯醛(0.4g/kg,i.p.)腹腔注射麻醉，仰卧位固定于鼠手术台，四肢连续多道电生理记录仪，测定正常标准肢体Ⅱ导联心电图，空白组给予舌下静脉注射生理盐水，模型组及给药组给予舌下静脉注射PIT0.6U/kg，于5S内注射完毕，注射垂体后叶素后连续记录心电图5min，分析心电图ST-T改变情况。

试验数据以平均数±标准差表示，采用SPSS19.0统计软件进行单因素方差分析。

3.实验结果

表12：各组药物对垂体后叶素诱发的急性缺血心肌ST-T(mV)改变的影响

*p＜0.01，**p＜0.05与模型对照组比较

大鼠注射Pit后，T波明显抬高，30s时达到高峰，45s后出现T波低平、双相、倒置，心率减慢等。与模型组比较，注射垂体后叶素后15s和30s，复方组、简化组及复方丹参片组均使由垂体后叶素引起的急性心肌缺血性ST-T抬高显著降低(P＜0.01或P＜0.05，表12)，复方组较简化组和复方丹参片降低更明显，且5分钟内给药组ST-T抬高均表现降低趋势。

(四)红曲红花银杏提取物、组合物及其制剂的制备和生物学试验

实施例D1：红曲红花银杏片剂的制备(1)

处方：红曲250g、红花150g、银杏叶1500g(5：3：30)。

制备方法：

a、红曲粗粉，加入4倍体积份70％乙醇水溶液提取3小时，滤渣加入2倍体积份70％乙醇加热回流提取2小时，提取液过滤，合并两次滤液浓缩，浓缩液中加入1倍的去离子水混匀，冷藏10小时，离心，收集沉淀，干燥；

b、红花，每次加入15倍体积份的20％乙醇水溶液，70℃提取30分钟，提取3次，提取液过滤，合并滤液，回收乙醇浓缩至稠膏；

c、银杏叶，粉碎，加入12倍体积份70％乙醇水溶液，在60℃－70℃下浸提3小时，提取2次，提取液过滤，合并滤液，回收乙醇浓缩至稠膏，浓缩液中加入1.5倍去离子水混匀，冷藏放置5小时，过滤得滤液，上DM130型大孔树脂柱待吸附后，分别用纯净水、15％乙醇梯度冲洗，再用70％乙醇水溶液解吸附得洗脱液，洗脱液浓缩至稠膏；

d、将步骤b、c所得稠膏与步骤a干粉混合，加入制剂辅料，按照常规工艺，制成临床接受的片剂。

实施例D2：红曲红花银滴丸剂的制备

处方：红曲200g、红花100g、银杏叶1600g(2：1：16)。

制备方法：

a、红花加入15倍体积份30％乙醇水溶液，在60℃－70℃下浸提45分钟，提取3次，提取液过滤，合并滤液；

b、银杏叶粉碎与红曲混合，加入8倍体积份70％乙醇水溶液，在80℃－90℃下浸提3小时，提取3次，提取液过滤，合并滤液；

c、将步骤a、b所得滤液用截留分子量20000的二醋酸纤维素膜，按照常规的参数进行超滤，超滤液浓缩得到相对密度为0.95－1.05的稠膏；

d、将步骤c所得稠膏干燥成干膏粉，加入制剂辅料，按照常规工艺，制成临床接受的滴丸剂。

实施例D3：红曲红花银杏软胶囊剂的制备

处方：红曲200g、红花100g、银杏叶1000g(2：1：10)。

制备方法：

a、红曲粉碎，第一次加入3倍体积份75％乙醇水溶液提取3小时，第二次加入2倍体积份75％乙醇加热回流提取1小时，提取液过滤，合并滤液，减压浓缩至稠膏；

b、红花药材加入15倍体积份水溶液，在70℃－80℃下浸提45分钟，提取3次，提取液过滤，合并滤液，回收乙醇浓缩至稠膏，浓缩液中加入乙醇至浓度为70％，冷藏放置10小时，过滤得滤液，减压浓缩成稠膏；

c、银杏叶，粉碎，加入10倍体积份75％乙醇水溶液，在60℃－70℃下浸提3小时，提取2次，提取液过滤，合并滤液，回收乙醇浓缩，浓缩液中加入1.5倍去离子水混匀，冷藏放置8小时，过滤得滤液，减压浓缩至稠膏。

d、将步骤a、b、c所得稠膏混合干燥成干膏粉，加入制剂辅料，按照常规工艺，制成临床接受的软胶囊剂。

实施例D4：红曲红花银杏滴丸剂的制备

处方：红曲300g、红花200g、银杏叶1800g(3：2：18)。

制备方法：

a、红曲粗粉，加入5倍体积份60％乙醇水溶液提取3小时，滤渣加入2倍体积份60％乙醇加热回流提取1小时，提取液过滤，合并两次滤液浓缩，浓缩液中加入1倍的去离子水混匀，冷藏4小时，离心，收集沉淀，干燥；

b、红花粗粉，加入15倍体积份的20％乙醇水溶液，在70℃浸润45小时，提取2次，提取液过滤，合并滤液，回收乙醇浓缩至稠膏；

c、银杏叶，粉碎，加入10倍体积份60％乙醇水溶液，在70℃－80℃下浸提3小时，提取2次，提取液过滤，合并滤液，回收乙醇浓缩，浓缩液中加入2倍去离子水混匀，冷藏放置6小时，过滤得滤液，上DM130型大孔树脂柱待吸附后，分别用纯净水、20％乙醇水溶液梯度冲洗，再用60％乙醇水溶液解吸附得洗脱液，洗脱液浓缩至稠膏；

d、将步骤b、c所得稠膏与步骤a干粉混合，加入制剂辅料，按照常规工艺，制成临床接受的滴丸。

实施例D5：红曲红花银杏胶囊剂的制备(1)

处方：红曲300g、红花200g、银杏叶1200g(3：2：12)。

制备方法：

a、红曲粗粉，加入3倍体积份75％乙醇水溶液加热回流提取3小时，提取液过滤；滤渣加入2体积份75％乙醇水溶液加热回流提取2小时，提取液过滤，合并两次滤液，减压回收乙醇，浓缩至在55－60℃下测相对密度0.95－1.06的浓缩液，浓缩液中加入2倍的去离子水混匀，放置8小时，离心，收集沉淀，干燥。

b、红花粗粉，每次加入10倍体积份水溶液，在60℃－70℃下浸提1小时，提取3次，提取液过滤，合并滤液，回收乙醇浓缩至稠膏，浓缩液中加入乙醇至浓度为60％，冷藏放置6小时，过滤得滤液，减压浓缩成稠膏，；

c、银杏叶，粉碎，加入8倍体积份75％乙醇水溶液，在70℃－80℃下浸提3.5小时，提取2次，提取液过滤，合并滤液，回收乙醇浓缩，浓缩液中加入2倍去离子水混匀，冷藏放置6小时，过滤得滤液，上DM130型大孔树脂柱待吸附后，分别用纯净水、15％乙醇水溶液梯度冲洗，再用75％乙醇水溶液解吸附得洗脱液，洗脱液浓缩至稠膏；

d、将步骤b、c所得稠膏与步骤a干粉混合，加入制剂辅料，按照常规工艺，制成临床接受的胶囊剂。

实施例D6：红曲红花银杏胶囊剂的制备(2)

处方：红曲400g、红花200g、银杏叶1200g(4：2：12)。

制备方法：

a、红曲分别粉碎为粒径不大于75μm细粉，混合；

b、银杏叶粉碎与红花混合，加入8倍体积份50％乙醇，在70℃－80℃下浸提2小时，提取3次，提取液过滤，合并滤液；

c、将步骤b所得滤液用截留分子量20000的二醋酸纤维素膜，按照常规的参数进行超滤，超滤液浓缩得到相对密度为0.95－1.05的稠膏；

d、将步骤c所得稠膏干燥成干膏粉与步骤a细粉混合，加入制剂辅料，按照常规工艺，制成临床接受的胶囊剂。

实施例D7：红曲红花银杏颗粒剂的制备

处方：红曲400g、红花300、银杏叶1000g(4：3：10)。

制备方法：

a、红曲粗粉，加入4倍体积份65％乙醇水溶液提取3小时，滤渣加入3倍体积份65％乙醇水溶液加热回流提取1小时，提取液过滤，合并两次滤液浓缩，浓缩液中加入1倍的去离子水混匀，冷藏4小时，离心，收集沉淀，干燥粉碎；

b、红花粗粉，每次加入15倍体积份水溶液，在70℃－80℃下浸提45分钟，提取3次，提取液过滤，合并滤液，回收乙醇浓缩至稠膏，浓缩液中加入乙醇至浓度为70％，冷藏放置10小时，过滤得滤液，减压浓缩成稠膏；

c、银杏叶，粉碎，加入15倍体积份65％乙醇水溶液，在70℃－80℃下浸提5小时，滤过，滤渣加入8倍体积份65％乙醇水溶液，在70℃－80℃下浸提3小时，滤过，合并滤液，回收乙醇浓缩至稠膏，加入2倍去离子水混匀，冷藏放置8小时，过滤得滤液，回收溶剂浓缩至稠膏；

d、将步骤b、c所得稠膏干燥成干膏粉与步骤a干粉混合，加入制剂辅料，按照常规工艺，制成临床接受的颗粒剂。

实施例D8：红曲红花银杏胶囊剂的制备(3)

处方：红曲500g、红花300g、银杏叶1000g(5：3：10)。

制备方法：

a、红曲粉碎为粒径不大于75μm细粉；

b、红花药材，每次加入20倍体积份水溶液，在50℃－60℃下浸提1小时，提取2次，提取液过滤，合并滤液，回收乙醇浓缩至稠膏，浓缩液中加入乙醇至浓度为80％，冷藏放置16小时，过滤得滤液，减压浓缩成稠膏；

c、银杏叶，粉碎，每次加入8倍体积份80％乙醇，在70℃－80℃下浸提43时，浸提3次，滤过，合并滤液，回收乙醇浓，浓缩，加入1倍去离子水混匀，冷藏放置12小时，过滤得滤液，回收溶剂浓缩至稠膏；

d、将步骤b、c所得稠膏干燥成干膏粉与步骤a细粉混合，加入制剂辅料，按照常规工艺，制成临床接受的胶囊剂。

实施例D9：红曲红花银杏片剂的制备(2)

处方：红曲600g、红花300g、银杏叶900g(4：2：6)。

制备方法：

a、红曲粗粉，每次加入3倍体积份85％乙醇水溶液加热回流提取2小时，提取2次，过滤，合并合并滤液，浓缩至稠膏；

b、红花，每次加入20倍体积份50％乙醇水溶液，在70℃－80℃下浸提0.5小时，提取3次，提取液过滤，合并滤液，回收溶剂，在55℃－60℃下浓缩至稠膏；

c、银杏叶，粉碎，加入8倍体积份85％乙醇水溶液，在70℃－80℃下浸提3.5小时，提取2次，提取液过滤，合并滤液，回收乙醇浓缩，浓缩液中加入2倍去离子水混匀，冷藏放置6小时，过滤得滤液，上DM130型大孔树脂柱待吸附后，分别用纯净水、15％乙醇水溶液梯度冲洗，再用85％乙醇水溶液解吸附得洗脱液，洗脱液浓缩至稠膏；

d、将步骤a、b、c所得稠膏干燥成干膏粉，混合，加入制剂辅料，按照常规工艺，制成临床接受的片剂。

实施例D10：红曲红花银杏分散片剂的制备

处方：红曲800g、红花400g、银杏叶800g(4：2：4)。

制备方法：

a、红曲粗粉，加入3倍体积份90％乙醇水溶液加热回流提取3小时，提取液过滤；滤渣加入2体积份90％乙醇水溶液加热回流提取2小时，提取液过滤，合并两次滤液，减压回收乙醇，浓缩至在55－60℃下测相对密度0.95－1.06的浓缩液，浓缩液中加入1倍的去离子水混匀，放置8小时，离心，收集沉淀，干燥粉碎。

b、红花粗粉，每次加入30倍体积份40％乙醇水溶液，在80℃－90℃下浸提30分钟，提取2次，提取液过滤，合并滤液，回收溶剂，浓缩至稠膏；

c、银杏叶，粉碎，加入10倍体积份90％乙醇水溶液，在70℃－80℃下浸提3.5小时，提取2次，提取液过滤，合并滤液，回收乙醇浓缩，浓缩液中加入2倍去离子水混匀，冷藏放置10小时，过滤得滤液，上DM130型大孔树脂柱待吸附后，分别用纯净水、15％乙醇梯度冲洗，再用90％乙醇解吸附得洗脱液，洗脱液浓缩至稠膏；

c、将步骤b、c所得稠膏与步骤a细粉混合，加入制剂辅料，按照常规工艺，制成临床接受的分散片。

实施例D11：红曲红花银杏口服液的制备

处方：红曲800g、红花400g、银杏叶600g(4：2：3)。

制备方法：

a、红曲药材粉碎，加入8倍体积份50％乙醇水溶液加热回流提取2小时，提取液过滤；滤渣加入5体积份50％乙醇水溶液加热回流提取1小时，提取液过滤，合并两次滤液，减压回收乙醇，浓缩至在55℃－60℃下测相对密度0.95－1.06的浓缩液，浓缩液中加入1.5倍的去离子水混匀，冷蔵8小时，离心，收集沉淀，干燥粉碎；

b、红花药材1kg，加入30倍体积份水溶液，在80℃－90℃下浸提30小时，提取2次，提取液过滤，合并滤液，回收乙醇浓缩至稠膏，浓缩液中加入乙醇至浓度为90％，冷藏放置16小时，过滤得滤液，减压浓缩成稠膏；

c、银杏叶，粉碎，每次加入8倍体积份50％乙醇，在60℃－70℃下浸提4小时，提取2次，滤过，合并滤液，回收乙醇浓缩，加入1.5倍去离子水混匀，冷藏放置8小时，过滤得滤液，回收乙醇浓缩至稠膏；

d、将步骤b、c所得稠膏干燥成干膏粉与步骤a细粉混合，加入制剂辅料，按照常规工艺，制成临床接受的口服液。

试验例D1：红曲红花银杏药物组合物对整体大鼠心肌缺血模型的 研究

1.实验材料：

(1)受试药制备

复方1组(红曲250g、红花150g、银杏叶1500g)：为实施例D1的片剂；

复方2组：为实施例D2的滴丸剂；

复方3组：为实施例D3的软胶囊剂；

复方4组：为实施例D4的滴丸剂；

简化1组：取红曲250g、银杏叶1500g，按照实施例D1的工艺制成片剂；

简化2组：取红花150g、银杏叶1500g，按照实施例D1的工艺制成片剂；

简化3组：取红曲250g、红花150g，按照实施例D1的工艺制成片剂；

复方丹参片组：取市售的复方丹参片(广州白云山和记黄埔中药有限公司生产)。

以上各药均在临用前加水溶液配制成0.75g(生药)/ml(液体)。

(2)动物：SD大鼠100只，体重249.21±16.38g，雄性，购买自北京维通利华实验动物技术有限公司。

(3)试剂：磷酸肌酸激酶(CK)试剂盒和乳酸脱氢酶(LDH小时)试剂盒购买于南京建成生物工程研究所，水合氯醛购买于中国医药公司北京采购供应站。

(4)动物分组及给药将动物随机分为10组，每组10只，分别为：

①空白对照组：给予溶剂灌胃5ml×7天，其它组手术前灌胃给予溶剂5ml；

②模型对照组：给予溶剂灌胃5ml×7天，手术前灌胃给予溶剂5ml；

③复方1组：给予复方1溶液灌胃5ml×7天，手术前灌胃给予复方1溶液5ml；

④复方2组：给予复方2溶液灌胃5ml×7天，手术前灌胃给予复方2溶液5ml；

⑤复方3组：给予复方3溶液灌胃5ml×7天，手术前灌胃给予复方3溶液5ml；

⑥复方4组：给予复方4溶液灌胃5ml×7天，手术前灌胃给予复方4溶液5ml；

⑦简化1组：给予简化1组溶液灌胃5ml×7天，手术前灌胃给予简化1组溶液5ml；

⑧简化2组：给予简化2组溶液灌胃5ml×7天，手术前灌胃给予简化2组溶液5ml；

⑨简化3组：给予简化3组溶液灌胃5ml×7天，手术前灌胃给予简化3组溶液5ml；

⑩复方丹参片组：给予复方丹参片溶液灌胃5ml×7天，手术前灌胃给予复方丹参片溶液5ml。

2.实验方法

将雄性SD大鼠用水合氯醛(0.4g/kg,i.p.)腹腔注射麻醉，每隔30min定量补充水合氯醛(0.016g/kg,i.p.)维持麻醉状态，固定于鼠手术台，在颈部做正中切口，暴露气管，作气管插管并接呼吸机(潮气量2ml，呼吸频率为70次/分)，然后分离大鼠左侧颈总动脉，将颈总动脉插管插入颈总动脉，留作采血用；再于胸骨正中切开皮肤，在大鼠左侧胸廓第四肋间打开胸腔，用拉钩拉开，暴露心脏，用玻璃分针挑开心包膜，用5/0的细丝线于冠状动脉前降支上1/3处下面穿过结扎；缺血120min后颈总动脉取血，测定血清LDH小时和CK，摘取心脏，以TTC染色测定心肌梗死面积。

试验数据以平均数±标准差表示，采用SPSS19.0统计软件进单因素方差分析。

3.实验结果

表13：各组药物对大鼠心肌缺血后心肌梗死面积、血清LDH和CK(U/L)浓度的影响

*p＜0.01，**p＜0.05与模型对照组比较；▲p＜0.05与简化2组、复方丹参片组比较

与冠脉结扎模型组比较，冠状动脉前降支结扎2小时后，复方组、简化组和复方丹参片组均可显著降低心肌梗死面积、LDH浓度和CK浓度(P＜0.01或P＜0.05，表13)，复方组降低幅度高于简化组和复方丹参片组。表明本发明药物组合物具有更明显的降低心肌梗死面积、LDH浓度和CK浓度的作用。

试验例D2：红曲红花银杏药物组合物对垂体后叶诱发大鼠急性心 肌缺血的研究

1.实验材料

(1)受试药

复方1组(红曲300g、红花200g、银杏叶1200g)：为实施例D5的胶囊剂；

复方2组：为实施例D6的胶囊剂；

复方3组：为实施例D7的颗粒剂；

复方4组：为实施例D9的片剂；

简化1组：取红曲300g、银杏叶1200g，按照实施例D5的工艺制成胶囊剂；

简化2组：取红花200g、银杏叶1200，按照实施例D5的工艺制成胶囊剂；

简化3组：取红曲300g、红花200g，按照实施例D5的工艺制成胶囊剂；

复方丹参片组：取市售的复方丹参片(广州白云山和记黄埔中药有限公司生产)。

以上各药均在临用前加水溶液配制成0.75g(生药)/ml(液体)。

(2)动物：SD大鼠100只，体重250.84±17.05g，购买自北京维通利华实验动物技术有限公司。

(3)试剂：实验用试剂盒购买于南京建成生物工程研究所，垂体后叶索(Pit)购买与沈阳济世制药有限公司，水合氯醛购买于中国医药公司北京采购供应站。

(4)仪器：RM-6240型多道生理信号采集处理系统(成都仪器厂)；TU-1901型紫外分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)。

(5)动物分组及给药大鼠雌雄分开饲养，并标记，对大鼠进行垂体后叶素敏感性筛选实验。方法：大鼠舌下静脉注射垂体后叶素0.35U/kg(浓度为1U/2ml)，观察Ⅱ导联心电图变化情况，选取对垂体后叶素敏感大鼠用于实验(ST段抬高或压低0.1mV以上，T波先高耸后低平或倒置)，将不敏感及心电图不正常大鼠淘汰，筛选Pit敏感大鼠50只随机分组，分别为：

①空白对照组：给予溶剂灌胃5ml×7天，其它组手术前灌胃给予溶剂5ml；

②模型对照组：给予溶剂灌胃5ml×7天，手术前灌胃给予溶剂5ml；

③复方1组：给予复方1溶液灌胃5ml×7天，手术前灌胃给予复方1溶液5ml；

④复方2组：给予复方2溶液灌胃5ml×7天，手术前灌胃给予复方2溶液5ml；

⑤复方3组：给予复方3溶液灌胃5ml×7天，手术前灌胃给予复方3溶液5ml；

⑥复方4组：给予复方4溶液灌胃5ml×7天，手术前灌胃给予复方4溶液5ml；

⑦简化1组：给予简化1组溶液灌胃5ml×7天，手术前灌胃给予简化1组溶液5ml；

⑧简化2组：给予简化2组溶液灌胃5ml×7天，手术前灌胃给予简化2组溶液5ml；

⑨简化3组：给予简化3组溶液灌胃5ml×7天，手术前灌胃给予简化3组溶液5ml；

⑩复方丹参片组：给予复方丹参片溶液灌胃5ml×7天，手术前灌胃给予复方丹参片溶液5ml。

2.实验方法

于末次给药后1小时，对动物进行造模，称重后，将SD大鼠用水合氯醛(0.4g/kg,i.p.)腹腔注射麻醉，仰卧位固定于鼠手术台，四肢连续多道电生理记录仪，测定正常标准肢体Ⅱ导联心电图，空白组给予舌下静脉注射生理盐水，模型组及给药组给予舌下静脉注射PIT0.6U/kg，于5S内注射完毕，注射垂体后叶素后连续记录心电图5min，分析心电图ST-T改变情况。

试验数据以平均数±标准差表示，采用SPSS19.0统计软件进行单因素方差分析。

3.实验结果

表14：各组药物对垂体后叶素诱发的急性缺血心肌ST-T(mV)改变的影响

*p＜0.01，**p＜0.05与模型对照组比较

大鼠注射Pit后，T波明显抬高，30s时达到高峰，45s后出现T波低平、双相、倒置，心率减慢等。与模型组比较，注射垂体后叶素后15s和30s，复方组、简化组及复方丹参片组均使由垂体后叶素引起的急性心肌缺血性ST-T抬高显著降低(P＜0.01或P＜0.05，表14)，复方组较简化组和复方丹参片降低更明显，且5分钟内给药组ST-T抬高均表现降低趋势。

尽管本发明的具体实施方式已经得到详细的描述，本领域技术人员将会理解。根据已经公开的所有教导，可以对那些细节进行各种修改和替换，这些改变均在本发明的保护范围之内。本发明的全部范围由所附权利要求及其任何等同物给出。

Claims (14)

1.一种药物组合物，其包含红曲和红花；

具体地，其包含：

红曲1－9重量份、红花0.5－8.5重量份；

红曲1－7.5重量份、红花1－3重量份；

红曲7重量份、红花1重量份；

红曲7.5重量份、红花2.5重量份；

红曲5重量份、红花5重量份；或者

红曲1重量份、红花3重量份。

2.一种药物制剂，其由权利要求1所述的药物组合物制得；任选地，所述药物制剂还包含药学上可接受的辅料。

3.根据权利要求2所述的药物制剂，其中，将红曲制得红曲提取物，并且将红花制得红花提取物；

具体地，

所述红曲提取物可以由如下的步骤(1)或(2)制得：

(1)取红曲药材1重量份，每次加入2－10倍体积份50％－90％乙醇、甲醇或乙酸乙酯加热回流提取1－3小时，提取2－3次；提取液过滤，合并滤液，回收乙醇、甲醇或乙酸乙酯，挥尽乙醇、甲醇或乙酸乙酯后，浓缩至在55℃－60℃下测相对密度0.95－1.06，得红曲提取物；

(2)取红曲药材1重量份，每次加入2－10倍体积份50％－90％乙醇、甲醇或乙酸乙酯加热回流提取1－3小时，提取2－3次；提取液过滤，合并滤液，回收乙醇、甲醇或乙酸乙酯，浓缩至在55℃－60℃下测相对密度0.95－1.06，浓缩液中加0.5－2.0倍去离子水混匀，室温或冷藏放置2－12小时，离心，收集沉淀，干燥，得到红曲提取物；

具体地，

所述红花提取物可以由如下的步骤(3)或(4)制得：

(3)红花药材1重量份，每次加10－30倍体积份20％-50％乙醇水溶液，在50℃－100℃下浸提0.5－1.5小时，提取2－3次，提取液过滤，合并滤液，回收溶剂，浓缩至稠膏，干燥，得红花提取物；

(4)红花药材1重量份，每次加10－30倍体积份水溶液，在50℃－100℃下浸提0.5－1.5小时，提取2－3次，提取液过滤，合并滤液，回收溶剂，浓缩至稠膏，浓缩液中加入乙醇至浓度为60％－90％，室温或冷藏放置6－24小时，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至稠膏，干燥，得红花提取物。

4.根据权利要求3所述的药物制剂，其特征在于如下的1)－4)项中的任意一项或者多项：

1)所述步骤(1)为：取红曲药材1重量份，加入3倍体积份75％乙醇加热回流提取3小时，提取液过滤；滤渣加入2体积份75％乙醇加热回流提取2小时，提取液过滤，合并两次滤液，减压回收乙醇，浓缩至在55－60℃下测相对密度0.95－1.06的浓缩液，干燥，得红曲提取物；

2)所述步骤(2)为：取红曲药材1重量份，加入3倍提积份75％乙醇加热回流提取3小时，提取液过滤；滤渣加入2体积份75％乙醇加热回流提取2小时，提取液过滤，合并两次滤液，减压回收乙醇，挥尽乙醇，浓缩至在55－60℃下测相对密度0.95－1.06的浓缩液，浓缩液中加1倍去离子水混匀，室温或冷藏放置8小时，离心，收集沉淀，80℃下干燥8小时，粉碎过60目筛，得红曲提取物；

3)所述步骤(3)为：取红花药材1重量份，第一次加入15倍体积份20％乙醇水溶液，在70℃下浸提1小时，过滤得滤液；药渣加入10倍体积份20％乙醇水溶液，在70℃下浸提30分钟，提取两次，过滤，合并滤液，回收溶剂，浓缩至稠膏，干燥，得红花提取物；

4)所述步骤(4)为：取红花药材1重量份，每次加20倍体积份水溶液，在70℃下浸提45分钟，提取3次，提取液过滤，合并滤液，回收溶剂，浓缩至稠膏，浓缩液中加入乙醇至乙醇浓度为70％，室温或冷藏放置12小时，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至稠膏，干燥，得红花提取物。

5.一种药物组合物，其包含红曲、红花和丹参；

具体地，其包含：

红曲2－10重量份、红花1－5重量份、丹参5－40重量份；

红曲3－5重量份、红花1－5重量份、丹参5－30重量份；

红曲5重量份、红花3重量份、丹参30重量份；

红曲3重量份、红花2重量份、丹参15重量份；

红曲4重量份、红花2重量份、丹参8重量份；或者

红曲5重量份、红花3重量份、丹参8重量份。

6.一种药物制剂，其由权利要求5所述的药物组合物制得；任选地，所述药物制剂还包含药学上可接受的辅料。

7.根据权利要求6所述的药物制剂，其通过如下的步骤A1－C1、A2－C2、a1－d1或者a2－c2制得：

A1将红曲粉碎成细粉，混合过80目筛，粒径不大于75μM；

B1将丹参粉碎与红花混合或单独，按重量份每次加入5－25倍体积份水溶液，在60℃－100℃下浸提0.5－2.5小时，提取2－3次，合并滤液，并进行初步澄清或超滤处理；

C1将步骤B1所得处理液减压回收成稠膏，再将稠膏干燥成干膏粉与步骤A1细粉混合即可；

或者

A2将红曲粉碎成细粉，混合过80目筛，粒径不大于75μm；

B2丹参粉碎与红花混合，按重量份每次加入12倍体积份水溶液提取1.5小时，在80℃－90℃提取2次，提取液过滤，合并滤液，浓缩成稠膏，加入乙醇至70％以上，静置10小时使沉淀，过滤，滤液回收，浓缩至稠膏；

C2将步骤B2所得稠膏干燥成干膏粉与步骤A2细粉混合即可；

或者

a1红花，按重量份每次加入10－30倍体积份20％－50％乙醇水溶液，在50℃－100℃加热回流提取0.5－1.5小时，提取2－3次；提取液过滤，合并滤液；

b1丹参与红曲混合或单独，按重量份每次加入3－15体积份溶剂提取1－3小时，提取1－3次，提取液过滤，合并滤液；

c1将步骤a1、b1中得到的滤液单独或混合后进行初步澄清或超滤处理；

d1将步骤c1中得到的处理液进行浓缩，干燥，即得；

或者

a2红曲与丹参混合，按重量份第一次加入10倍提积份75％乙醇加热回流提取2小时，提取液过滤；滤渣加入5体积份75％乙醇加热回流提取2小时，提取液过滤，合并两次滤液，减压回收乙醇，挥尽乙醇，浓缩至稠膏；

b2红花药材，第一次加入15倍体积份20％乙醇水溶液，在70℃－80℃下浸提45分钟，过滤得滤液；药渣加入10倍体积份20％乙醇水溶液，在70℃－80℃下浸提30分钟，提取两次，过滤，合并滤液，回收溶剂，浓缩至稠膏；

c2将步骤a2、b2所得稠膏干燥成干膏粉，即可。

8.一种药物组合物，其包含红曲、红花和三七；

具体地，其包含：

红曲1－10重量份、红花1－10重量份、三七1－10重量份；

红曲2－8重量份、红花1－2重量份、三七1－4重量份；

红曲5重量份、红花1重量份、三七2重量份；

红曲4重量份、红花1重量份、三七3重量份；

红曲7重量份、红花2重量份、三七3重量份；或者

红曲3重量份、红花1重量份、三七3重量份。

9.一种药物制剂，其由权利要求8所述的药物组合物制得；任选地，所述药物制剂还包含药学上可接受的辅料。

10.根据权利要求9所述的药物制剂，其通过如下的步骤A1－C1、A2－C2、a1－d1或者a2－d2制得：

A1将红曲和三七粉碎成细粉，混合过80目筛，粒径不大于75μm；

B1将红花，按重量份每次加入10－40倍体积份溶剂提取0.5－1.5小时，提取2－3次，合并滤液，初步澄清后，低温浓缩成稠膏；

C1将步骤B1所得稠膏干燥成干膏粉与步骤A1细粉混合即可；

或者

A2将红曲和三七粉碎成细粉，混合过80目筛，粒径不大于75μm；

B2取红花药材，第一次加入15倍体积份20％乙醇水溶液，在70℃下浸提1小时，过滤得滤液；药渣加入10倍体积份20％乙醇水溶液，在70℃下浸提30分钟，提取两次，过滤，合并滤液，回收溶剂，浓缩至稠膏；

C2将步骤B2所得稠膏干燥成干膏粉与步骤A2细粉混合即可；

或者

a1红曲粉、三七药材粉碎，混合或单独提取：重量份每次加入2－15倍体积份溶剂提取1－3小时，提取1－3次；提取液过滤，合并滤液；

b1红花药材，按重量份每次加入10－40倍体积份溶剂提取0.5－1.5小时，提取2－3次，提取液过滤，合并滤液；

c1将步骤a1、b1中得到的滤液单独或混合后进行初步澄清或超滤处理；

d1将步骤c1中得到的处理液进行浓缩，干燥；

或者

a2红曲药材，加入3倍提积份75％乙醇水溶液加热回流提取3小时，提取液过滤；滤渣加入2体积份75％乙醇水溶液加热回流提取2小时，提取液过滤，合并两次滤液，减压回收乙醇，挥尽乙醇，浓缩，浓缩液中加1倍去离子水混匀，室温或冷藏放置8小时，离心，收集沉淀，80℃下干燥8小时，粉碎过80目筛；

b2三七药材，粉碎，加入8体积份水溶液提取1.5小时，提取2次，提取液过滤，合并滤液，浓缩成稠膏，加入乙醇至乙醇浓度70％以上，室温或冷藏放置8小时，过滤，滤液回收，浓缩成稠膏；

c2红花药材，每次加入20倍体积份水溶液，在60℃－70℃下浸提45分钟，提取3次，提取液过滤，合并滤液，回收溶剂，浓缩至稠膏，浓缩液中加入乙醇至乙醇浓度70％以上，室温或冷藏放置12小时，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至稠膏；

d2将步骤b2、c2所得稠膏干燥成干膏粉与步骤a2细粉混合即可。

11.一种药物组合物，其包含红曲、红花和银杏叶；

具体地，其包含：

红曲2－15重量份、红花1－10重量份、银杏叶5－40重量份；

红曲3－15重量份、红花1－6重量份、银杏叶15－33重量份；

红曲6重量份、红花4重量份、银杏叶24重量份；

红曲5重量份、红花3重量份、银杏叶30重量份；

红曲8重量份、红花6重量份、银杏叶20重量份；或者

红曲4重量份、红花2重量份、银杏叶20重量份。

12.一种药物制剂，其由权利要求11所述的药物组合物制得；任选地，所述药物制剂还包含药学上可接受的辅料。

13.根据权利要求12所述的药物制剂，其通过如下的步骤A1－E1、A2－D2、a1－e1或者a2－d2制得：

A1将红曲粉碎成细粉，混合过80目筛，粒径不大于75μm；

B1将红花药材，每次加入10－30倍体积份水溶液，在50℃－100℃下浸提0.5－1.5小时，提取2－3次，提取液过滤，合并滤液；

C1将银杏叶，粉碎，按重量份每次加入5－15倍体积份50％－90％乙醇，在60℃－100℃下浸提1－5小时，提取2－3次，合并滤液；

D1将步骤B1、C1中得到的滤液分别进行初步澄清或超滤处理；

E1将步骤D1所得提取液，进行浓缩稠膏干燥成干膏粉与步骤A1细粉混合即可；

或者

A2将红曲粉碎成细粉，混合过80目筛，粒径不大于75μm；

B2红花药材，每次加20倍体积份水溶液，在70℃下浸提45分钟，提取3次，提取液过滤，合并滤液，回收溶剂，浓缩至稠膏，浓缩液中加入乙醇至乙醇浓度为70％，室温或冷藏放置12小时，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至稠膏；

C2银杏叶，粉碎，加入8倍体积份60％乙醇，在70℃－80℃下浸提5小时，提取2次，提取液过滤，合并滤液，回收乙醇浓缩，浓缩液中加入1倍去离子水混匀，冷藏放置6小时，过滤得滤液，滤液回收乙醇并浓缩至稠膏；

D2将步骤B2、C2所得稠膏干燥成干膏粉与步骤A2细粉混合即可；

或者

a1红曲药材粗粉，每次加入2－10倍体积份50％－90％乙醇水溶液加热回流提取1－3小时，提取2－3次；提取液过滤，合并滤液；

b1银杏叶药材粉碎，每次加5－15倍体积份30％－90％乙醇水溶液，在50℃－100℃下浸提1－5小时，提取2－3次，提取液过滤，合并滤液；

c1红花药材，每次加10－30倍体积份水溶液或20％－50％乙醇水溶液，在50℃－100℃下浸提0.5－1.5小时，提取2－3次，提取液过滤，合并滤液；

d1将步骤a1、b1、c1中得到的滤液单独或混合后进行初步澄清或超滤处理；

e1将步骤d1中得到的处理液进行浓缩，干燥；

或者

a2红曲药材，加入3倍提积份75％乙醇加热回流提取3小时，提取液过滤；滤渣加入2体积份75％乙醇加热回流提取2小时，提取液过滤，合并两次滤液，减压回收乙醇，挥尽乙醇，浓缩至在55－60℃下测相对密度0.95－1.06的浓缩液，浓缩液中加1倍去离子水混匀，室温或冷藏放置8小时，离心，收集沉淀，干燥，粉碎；

b2红花药材，第一次加入15倍体积份20％乙醇水溶液，在70℃下浸提1小时，过滤得滤液；药渣加入10倍体积份20％乙醇水溶液，在70℃下浸提30分钟，提取两次，过滤，合并滤液，回收溶剂，浓缩至稠膏；

c2银杏叶药材，粉碎，每次加6－8倍体积份50％乙醇，在60℃－70℃下浸提3小时，提取2次，提取液过滤，合并滤液，回收乙醇浓缩，浓缩液中加入1.5倍去离子水混匀，冷藏放置6小时，过滤得滤液，上大孔树脂柱待吸附后，分别用纯净水、10％乙醇梯度冲洗，再用70％乙醇解吸附得洗脱液，洗脱液减压浓缩至稠膏；

d2将步骤b2、c2所得稠膏干燥成干膏粉与步骤a2细粉混合即可。

14.权利要求1、5、8和11中任一项所述的药物组合物或者权利要求2－4、6－7、9－10和12－13中任一项所述的药物制剂在制备治疗和/或预防和/或辅助治疗心血管疾病、缺血性心肌损伤、冠心病或高血脂症的药物或者在制备活血化瘀、通脉活络和/或祛痰化浊的药物中的用途。