CN102764294B - 一种祛痰止咳组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种祛痰止咳组合物及其制备方法。所述祛痰止咳组合物包含青钱柳、青钱柳提取物、青钱柳悬浮培养细胞或青钱柳悬浮培养细胞提取物。本发明还提供青钱柳、青钱柳提取物、青钱柳悬浮培养细胞或青钱柳悬浮培养细胞提取物在制备祛痰止咳的药物或保健食品中的应用。本发明拓宽了青钱柳的医药应用，为患者提供了一种效果好、副作用小的祛痰止咳药物。另外，运用现代植物组织和细胞培养技术，规模化培养青钱柳细胞，以该培养细胞替代青钱柳，从而有效的保护珍稀植物资源，做到了环境友好，可持续发展。

Description

一种祛痰止咳组合物及其制备方法

技术领域

本发明属于医药和保健食品领域，具体涉及一种祛痰止咳组合物及其制备方法。

背景技术

咳嗽是呼吸系统病症中常见的一种，为高发病。从生理学的角度来看，咳嗽是人体呼吸道受到刺激 (如炎症、异物)、由神经末梢发出冲动传入延髓咳嗽中枢引起的一种生理反射，通过咳嗽动作以排出呼吸道分泌物或异物(如粘痰、细菌体、纤维)，以此来保持呼吸道的清洁和通畅。无痰的剧烈干咳，或有痰而过于频繁地剧咳，不仅增加病人痛苦，影响休息和睡眠，增加体力消耗，而且可能加重病情。

目前用于治疗咳嗽的药物可分为西药类和中药两大类，其中西药又按作用机制不同分为中枢性止咳药和外周性止咳药。中枢性止咳药物通过抑制咳嗽中枢，使其不能下达咳嗽的指令而止咳，中枢性镇咳药则直接作用于咳嗽神经中枢，对咳嗽反射产生选择性抑制作用而止咳。中枢性镇咳药大多数作用强大，仅适用于剧烈而频繁的无痰性干咳，痰多者则须禁用，这类药物虽然对咳嗽疗效显著，但有的有成瘾性。外周性止咳药主要通过对支气管的局部麻醉作用来止咳，其止咳作用较中枢性止咳药弱，如咳嗽糖浆，口服后可覆盖在咽喉部粘膜表面，保护局部黏膜少受刺激，并促进唾液分泌和吞咽动作，起到轻度止咳作用。另一种是外周性止咳口服药片--莫吉司坦，是一种上市不久的外周性非麻醉性镇咳药物。与西药相比，中药在止咳的同时一般还具有化痰作用，其优点是药性温和、副作用小，但药效不如西药显著，且治疗周期比较长。中药又可分为中成药和中草药两大类，常见的中成药有京都念慈庵、潘高寿、克咳、急支糖浆、通宣理肺丸、川贝枇杷露、蛇胆川贝液、VC银翘片、罗汉果止咳冲剂等；常用的中草药主要有：紫苏叶、黄芩、杏仁、甘草、枳壳、桔梗、橘红、前胡、麻黄、桑叶、菊花、连翘、薄荷、芦根、沙参、栀子、麦冬、贝母、桑白皮、鱼腥草、挂金灯、薏苡仁、冬瓜子、半夏、茯苓、陈皮、白芥子、天花粉、玉竹、百合等。应用中药治疗咳嗽时，需遵循中医理论辨证论治，细分寒热虚实，对症用药方能有较好的疗效。

近年来，中药在化痰止咳方面显示了独特的优点，因而受到了患者青睐。

但随着开发利用范围和强度的不断加大，很多优良资源已经出现稀缺的局面，有的甚至濒临灭绝，如何解决资源供给难题急待解决。

青钱柳（Cyclocarya paliurus (Batal.) Iljinsk）为我国特有的胡桃科青钱柳属单种属珍稀植物。据《中国中药资源志要》记载，其树皮、叶具有清热消肿、止痛的功能，可用于治疗顽癣 。江西民间长期取其叶制作饮料，因其昧甜，有清热解暑、降血压、降血糖等功能，故又称甜茶、神茶。研究发现，青钱柳叶含多种活性成分，如具有降糖和增加糖耐量的多糖，具有抗菌、抗炎、抗氧化、抗肿瘤作用的黄酮类、酚酸类和三萜类化合物。但是青钱柳及其提取物在祛痰止咳方面的应用，尚未见报道。

另外，青钱柳是国家重点保护的濒危植物之一，目前其可利用的资源稀少，有限的资源零星分布于深山老林之中，或保存于自然保护区内；而且其有性繁殖系数低，无性繁殖困难，严重制约其开发利用。为了解决上述问题，发明人利用细胞工程技术，以青钱柳无菌幼叶为外植体，诱导出愈伤组织。选择绿色、较为疏松的愈伤组织继续筛选和继代培养，获得疏松易碎、生长旺盛、适于悬浮培养的优良愈伤组织，建立了青钱柳细胞悬浮培养体系。在此基础上，优化了悬浮培养条件，得到活性成分富集的青钱柳悬浮培养细胞。该条件下悬浮细胞生长迅速，最大生长量(干质量)达到15.56g/ L，总三萜产量达1179.85 mg/L。相关研究，已经发表于《深圳大学学报理工版》（2011年9月第28卷第5期，430-435页）。因此，青钱柳悬浮培养细胞完全可以替代青钱柳，从而有效保护植物资源。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种以青钱柳或青钱柳悬浮培养细胞为原料的祛痰止咳组合物。研究表明，本发明所述组合物具有明确的祛痰、止咳作用，而且因其来源于天然植物资源，安全性好。

为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：

一种祛痰止咳药用组合物，包含青钱柳、青钱柳提取物、青钱柳悬浮培养细胞或青钱柳悬浮培养细胞提取物。

优选的，所述青钱柳悬浮培养细胞，通过如下方法制备：

以青钱柳叶、茎段等营养器官为外植体诱导愈伤组织，对所诱导的愈伤组织进行继代、筛选和改良，选取生长旺盛的优良愈伤组织建立青钱柳细胞悬浮培养体系；然后采用生物发酵罐或生物反应器规模化培养，收获新鲜细胞，干燥，即得。

优选的，所述青钱柳提取物或青钱柳悬浮培养细胞提取物，是指以青钱柳或青钱柳悬浮培养细胞为原料，以水或30%~95%乙醇为溶媒，采用常规提取、浓缩、干燥方法，得到的粗提物，或者再经过分离、纯化得到的三萜类活性部位。

所述提取方法优选为，以95%乙醇为溶媒，55℃下超声提取两次，每次30分钟。

本发明所述的祛痰止咳组合物，还可以包含其他治疗咳嗽的药物。

所述其他治疗咳嗽的药物，选自紫苏叶、黄芩、杏仁、甘草、枳壳、桔梗、橘红、前胡、麻黄、桑叶、菊花、连翘、薄荷、芦根、沙参、栀子、麦冬、贝母、桑白皮、鱼腥草、挂金灯、薏苡仁、冬瓜子、半夏、茯苓、陈皮、白芥子、天花粉、玉竹、百合中的一种或几种。

本发明的另一个目的是提供一种祛痰止咳组合物的制备方法，所述组合物包含青钱柳悬浮培养细胞或青钱柳悬浮培养细胞提取物，包括如下步骤：

以青钱柳叶、茎段等营养器官为外植体诱导愈伤组织，对所诱导的愈伤组织进行继代、筛选和改良，选取生长旺盛的优良愈伤组织建立青钱柳细胞悬浮培养体系；然后采用生物发酵罐或生物反应器规模化培养，收获新鲜细胞，干燥，得到所述青钱柳悬浮培养细胞，直接制成临床上可以接受的制剂，或者加入药用辅料，制成临床上可以接受的制剂，即得；或

以青钱柳叶、茎段等营养器官为外植体诱导愈伤组织，对所诱导的愈伤组织进行继代、筛选和改良，选取生长旺盛的优良愈伤组织建立青钱柳细胞悬浮培养体系；然后采用生物发酵罐或生物反应器规模化培养，收获新鲜细胞，干燥，得到所述青钱柳悬浮培养细胞；以水或30%~95%乙醇为溶媒，采用常规提取、浓缩、干燥方法，得到粗提物，直接制成临床上可以接受的制剂，或者加入药用辅料，制成临床上可以接受的制剂，即得；或

以青钱柳叶、茎段等营养器官为外植体诱导愈伤组织，对所诱导的愈伤组织进行继代、筛选和改良，选取生长旺盛的优良愈伤组织建立青钱柳细胞悬浮培养体系；然后采用生物发酵罐或生物反应器规模化培养，收获新鲜细胞，干燥，得到所述青钱柳悬浮培养细胞；以水或30%~95%乙醇为溶媒，提取液经过分离、纯化，得到三萜类活性部位，直接制成临床上可以接受的制剂，或者加入药用辅料，制成临床上可以接受的制剂，即得。

本发明的另一个目的，是提供青钱柳、青钱柳提取物、青钱柳悬浮培养细胞或青钱柳悬浮培养细胞提取物，在制备祛痰止咳的药物或保健食品中的应用。

所述青钱柳、青钱柳提取物、青钱柳悬浮培养细胞或青钱柳悬浮培养细胞提取物，可以单独，也可以联合其他治疗咳嗽的药物，制备所述药物或保健食品。

所述其他治疗咳嗽的药物，选自紫苏叶、黄芩、杏仁、甘草、枳壳、桔梗、橘红、前胡、麻黄、桑叶、菊花、连翘、薄荷、芦根、沙参、栀子、麦冬、贝母、桑白皮、鱼腥草、挂金灯、薏苡仁、冬瓜子、半夏、茯苓、陈皮、白芥子、天花粉、玉竹、百合中的一种或几种。

有关青钱柳愈伤组织悬浮培养，可以采用《青钱柳细胞悬浮培养及三萜化合物积累》（《深圳大学学报理工版》，2011年9月第28卷第5期，430-435页）中记载的培养优化培养条件，即：MS培养基为基本培养基、2,4一D0.8mg/L、NAA1.8mg/L、6-BA0.8mg/L、KT 0.8mg/L、蔗糖40g/L，pH值6.0；每10~15ml培养基接种量为1g(鲜质量)。

青钱柳悬浮培养细胞；以水或30%~95%乙醇为溶媒，提取液的分离、纯化方法可以选自水提醇沉、醇提水沉、大孔树脂吸附、硅胶柱层析、凝胶柱层析、高效液相法、中压柱层析、重结晶等方法中的一种或几种，

本发明所述“药用辅料”，选自淀粉、羧甲基纤维素、微晶纤维、β-环糊精、卵磷脂等常规使用的药用辅料。

本发明所述“临床上可以接受的制剂”，可以是片剂、胶囊剂、乳剂、粉剂、注射剂、大输液、冻干粉、滴丸、乳悬液、水悬液、水溶液、胶体、胶体溶液、缓释制剂、纳米制剂等。

药理研究证明，青钱柳悬浮培养细胞醇提物以及三萜类活性部位具有良好的祛痰止咳作用。

试验例 1 青钱柳悬浮培养细胞醇提物的祛痰止咳作用

试验药物：青钱柳悬浮培养细胞醇提物（以下简称“醇提取物”）

选取1公斤干燥的青钱柳悬浮培养细胞，粉碎后过40目筛，55℃下，以料液比为1:10的95%乙醇超声提取两次，每次提取30分钟，离心分离，合并提取液，减压浓缩，喷雾干燥，即得。

实验动物：昆明种小鼠，雌雄各半，体重18~22 g，SPF级。

实验方法：

（1）对浓氨水致咳小鼠的影响：将50只小鼠随机分为模型组、试验组（设3组，醇提物低、中、高剂量组分别为500、1500、4500mg/kg体重)、阳性对照组(美沙芬，30 mg/kg体重)，每组10只。灌胃给药，每天1次，连续3 天，模型组以等体积溶媒灌胃。末次给药后1 小时进行氨水引咳实验。将小鼠逐只放入特制的透明喷雾试验箱内，安静1分钟，采用超声波雾化器以恒定压力匀速将280ml/L的氨水喷入试验箱内，喷雾持续10 秒。观察咳嗽情况，以小鼠张口咳嗽为指标，记录咳嗽潜伏期（从开始喷雾到引起小鼠第1次咳嗽的时间)及2分钟内的咳嗽次数。

（2）对小鼠气管酚红排泌量的影响：将60只小鼠随机分为模型组、试验组（设3组，醇提物低、中、高剂量组分别为500、1500、4500mg /kg体重)、阳性对照组(氯化铵，1.0 g/kg体重)和正常对照组，每组10只。各组小鼠每天灌胃给药1次，连续3天，模型组和正常对照组以等体积溶媒灌胃。末次给药后30 分钟，按10 ml/kg体重的剂量给模型组、用药组、阳性对照组的每只小鼠腹腔注射50 g/L酚红生理盐水溶液，注射后30分钟，以后颈椎脱臼处死小鼠；分离气管，剪下自甲状软骨下缘至气管分叉处的一段气管，将各气管段放入预先盛有2 ml生理盐水的试管中，旋涡震荡器震荡5 分钟，再以超声波清洗20分钟，加入50 g/L NaHCO₃溶液1 ml，以1500 转/分钟离心10分钟；取上清液于546 nm处测OD值。正常组小鼠相应气管段经同样处理后为对照。按酚红测定标准曲线回归方程计算酚红排泄量，根据所测酚红含量和动物体重计算校正酚红含量。

实验结果：

（1）醇提物对浓氨水致咳小鼠的影响：实验结果如表1所示，醇提物中剂量（1500mg/kg体重）和高剂量（4500mg/kg体重）能显著延长氨水引起小鼠咳嗽的潜伏期，且呈现较为明显的量效关系。高、中、低剂量均能极显著的减少2分钟内的咳嗽次数。

表1 青钱柳悬浮培养细胞醇提物对浓氨水致咳小鼠的影响

组别	剂量(mg/kg体重)	咳嗽潜伏期（秒）	咳嗽次数
				模型组	-	12.34±2.45	18.24±2.94
醇提物低剂量组	500	15.01±6.14	14.12±3.49**
				醇提物中剂量组	1500	20.60±4.27*	9.50±1.83**
醇提物高剂量组	4500	26.91±6.78**	8.01±2.55**
				阳性对照组	30	31.48±8.30**	6.11±1.62**

注：与模型组进行比较：上标“*”表示P≤0.05，上标“**”表示P≤0.01。

（2）醇提物对小鼠气管酚红排泌量的影响：实验结果如表2所示。从表中数据可知：青钱柳悬浮培养细胞醇提物连续灌胃给药3天，可极显著地增加酚红的排泄量，表明其具有较好的祛痰作用。

表2 青钱柳悬浮培养细胞醇提物对小鼠气管酚红排泌量的影响

组别	剂量(mg/kg体重)	酚红排泄量（mg/L）
			模型组	-	1.54±0.50
醇提物低剂量组	500	2.60±0.94**
			醇提物中剂量组	1500	2.81±0.48**
醇提物高剂量组	4500	2.95±1.18**
			阳性对照组	1000	3.28±0.91**

注：与模型组进行比较：上标“*”表示P≤0.05，上标“**”表示P≤0.01。

实验结论：青钱柳悬浮培养细胞醇提物具有较好的祛痰、止咳作用效果。

试验例 2 ：青钱柳悬浮培养细胞三萜类活性部位祛痰止咳作用

试验药物：青钱柳悬浮培养细胞三萜类活性部位（以下简称“三萜活性部位”）

选取1公斤干燥的青钱柳悬浮培养细胞，粉碎后过40目筛，55℃下，以料液比为1:10的95%乙醇超声提取两次，每次提取30分钟，离心分离，合并提取液，减压浓缩，浓缩液以水复溶，上X-5大孔树脂柱，水洗去杂，以95%乙醇洗脱，浓缩得到大孔树脂纯化物，再以Sephadex LH-20 凝胶柱层析，得到三萜活性部位。

三萜活性部位定性定量检测：

（1）总三萜定性检测方法：采用高效薄层层析方法进行定性检测。铝质高效预制薄板（Merck公司）；展开剂：石油醚/乙酸乙酯/甲醇=30/10/7；L-B特征显色。

（2）总三萜定量测定方法：比色法测定总三萜含量。

检测标准曲线的绘制：精确吸取熊果酸标准溶液(90μg/mL)200μL、400μL、600μL、800μL、1000μL、1200μL、1400μL、1800μL、2200μL，分别加入具塞试管，水浴挥干。分别加入50 g／L香草醛-冰乙酸和高氯酸各0.3mL和1.0mL，混匀，70℃水浴15 min，迅速冷却后加入4.0mL冰乙酸，混匀后，于550 nm波长测定吸光度，建立检测回归方程。

供试样品溶液的制备：精确称取适量的待测三萜活性部位样品，甲醇溶解，按熊果酸标准对照品溶液的制备方法，制备成供试样品溶液。

样品测定：上述供试样品溶液，按照标准曲线测定条件进行吸光度的测定，计算百分含量。

样品测定结果：所述三萜活性部位总三萜含量为90.15%。

实验动物：昆明种小鼠，雌雄各半，体重18~22 g，SPF级。

实验方法：

（1）对浓氨水致咳小鼠的影响：将50只小鼠随机分为模型组、试验组（设3组，三萜活性部位低、中、高剂量组分别为60、180、540 mg/kg体重)、阳性对照组(美沙芬，30 mg/kg体重)，每组10只。灌胃给药，每天1次，连续3 天，模型组以等体积溶媒灌胃。末次给药后1 小时进行氨水引咳实验。将小鼠逐只放入特制的透明喷雾试验箱内，安静1分钟，采用超声波雾化器以恒定压力匀速将280ml/L的氨水喷入试验箱内，喷雾持续10 秒。观察咳嗽情况，以小鼠张口咳嗽为指标，记录咳嗽潜伏期（从开始喷雾到引起小鼠第1次咳嗽的时间)及2分钟内的咳嗽次数。

（2）对小鼠气管酚红排泌量的影响：将60只小鼠随机分为模型组、试验组（设3组，三萜活性部位低、中、高剂量组分别为60、180、540 mg/kg体重)、阳性对照组(氯化铵，1.0 g/kg体重)和正常对照组，每组10只。各组小鼠每天灌胃给药1次，连续3天，模型组和正常对照组以等体积溶媒灌胃。末次给药后30 分钟，按10 ml/kg体重的剂量给模型组、用药组、阳性对照组的每只小鼠腹腔注射50 g/L酚红生理盐水溶液，注射后30分钟，以后颈椎脱臼处死小鼠；分离气管，剪下自甲状软骨下缘至气管分叉处的一段气管，将各气管段放入预先盛有2 ml生理盐水的试管中，旋涡震荡器震荡5 分钟，再以超声波清洗20分钟，加入50 g/L NaHCO₃溶液1 ml，以1500 转/分钟离心10分钟；取上清液于546 nm处测OD值。正常组小鼠相应气管段经同样处理后为对照。按酚红测定标准曲线回归方程计算酚红排泄量，根据所测酚红含量和动物体重计算校正酚红含量。

实验结果：

（1）三萜活性部位对浓氨水致咳小鼠的影响：实验结果如表3所示，三萜活性部位低剂量（60 mg/kg体重）、中剂量（180 mg/kg体重）和高剂量（540 mg/kg体重）均能极显著延长氨水引起小鼠咳嗽的潜伏期，呈现较为明显的量效关系。高、中、低剂量均能极显著的减少2分钟内的咳嗽次数，也呈现一定的量效关系。

表3 青钱柳悬浮培养细胞醇提物对浓氨水致咳小鼠的影响

组别	剂量(mg/kg体重)	咳嗽潜伏期（秒）	咳嗽次数
				模型组	-	13.84±1.90	17.15±2.17
三萜活性部位低剂量组	60	19.51±4.07**	13.22±3.62**
				三萜活性部位中剂量组	180	25.79±5.11**	10.73±2.54**
三萜活性部位高剂量组	540	30.42±5.39**	7.78±3.09**
				阳性对照组	30	32.78±7.53**	5.40±2.68**

注：与模型组进行比较：上标“*”表示P≤0.05，上标“**”表示P≤0.01。

（2）三萜活性部位对小鼠气管酚红排泌量的影响：实验结果如表4所示。从表中数据可知：三萜活性部位连续灌胃给药3天，可极显著地增加酚红的排泄量，表明其具有很好的祛痰作用。

表4 青钱柳悬浮培养细胞醇提物对小鼠气管酚红排泌量的影响

组别	剂量(mg/kg体重)	酚红排泄量（mg/L）
			模型组	-	1.78±0.92
三萜活性部位低剂量组	60	2.82±0.77**
			三萜活性部位中剂量组	180	3.04±0.95**
三萜活性部位高剂量组	540	3.29±1.28**
			阳性对照组	1000	3.57±1.04**

注：与模型组进行比较：上标“*”表示P≤0.05，上标“**”表示P≤0.01。

本发明不仅提供了青钱柳祛痰止咳的新医药用途，拓宽了青钱柳的市场应用，为患者提供了一种效果好、副作用小的祛痰止咳药物。另外，运用现代植物组织和细胞培养技术，规模化培养青钱柳细胞，以该培养细胞替代青钱柳，从而有效的保护珍稀植物资源，做到了环境友好，可持续发展。

具体实施方式

实施例 1 青钱柳悬浮培养细胞的制备

（请补充详细的制备青钱柳悬浮培养细胞的过程，包括过程中涉及的各种材料的量，条件参数等，最后得到的悬浮培养细胞的量。因为尽管青钱柳悬浮培养细胞已经被文章公开，但是这种原料在市场上如果没有销售，就必须提供制备的方法。）

（1）愈伤组织诱导

将外植体（青钱柳叶、茎、根等）接种于诱导培养基上（以MS培养基为基础培养，以1～5 % 蔗糖、葡萄糖等为糖源，添加0～4.0 mg/L 2,4-D、0～3.0 mg/L 6-BA、0～2.0 mg·L-1 NAA、0～2.0 mg·L-1 KT等植物激素，以及5～15 g/L琼脂，pH 5～7），暗培养5～10天，而后进行光培养或光暗交替培养，获得愈伤组织。

（2）愈伤组织继代培养及改良

选取质地相对较好愈伤组织，接种于继代培养基上（以MS培养基为基础培养，以1～5 % 蔗糖、葡萄糖等为糖源，添加0～3.0 mg/L 2,4-D、0～4.0 mg/L 6-BA、0～3.0 mg·L-1 NAA、0～3.0 mg·L-1 KT等植物激素，以及5～15 g/L琼脂，pH 5～7），光暗交替或暗培养。经多次继代培养，获得质地疏松、生长旺盛、性状稳定优良愈伤组织。

（3）悬浮培养细胞制备

选取优良愈伤组织，接种于液体培养基中进行悬浮培养，经多次继代培养后建立悬浮细胞系。以优良的悬浮细胞系进行扩大培养，制备青钱柳悬浮培养细胞。悬浮培养条件如下：MS培养基为基础培养，以1～5 % 蔗糖、葡萄糖等为糖源，添加0～4.0 mg/L 2,4-D、0～4.0 mg/L 6-BA、0～4.0 mg·L-1 NAA、0～4.0 mg·L-1 KT等植物激素，pH 5～7，振荡悬浮培养，或采用各种生物发酵罐或生物反应器进行悬浮培养。经检测，悬浮培养细胞的产量达20.65 g/L（干重产量）。

实施例 2 ：以青钱柳悬浮培养细胞制备祛痰止咳袋泡茶

选取1公斤实施例1制备的青钱柳悬浮培养细胞，经多次洗涤后抽滤滤干，60℃干燥，粉碎，包装，每袋4克，即得。

实施例 3 ：以青钱柳悬浮培养细胞醇提物制备祛痰止咳速溶茶

选取1公斤实施例1制备的青钱柳悬浮培养细胞，经多次洗涤后抽滤滤干，60℃干燥，粉碎后过40目筛，55℃下，以料液比为1:10的95%乙醇进行超声提取两次，每次30分钟，离心分离，合并提取液，加入适量的β-环糊精和卵磷脂，浓缩，喷雾干燥，包装，每袋1克，即得（醇提物含量≥90%）。

实施例 4 ：以青钱柳悬浮培养细胞醇提物制备祛痰止咳速溶茶

选取1公斤实施例1制备的青钱柳悬浮培养细胞，经多次洗涤后抽滤滤干，60℃干燥，粉碎后过40目筛，以料液比为1:8的75%乙醇加热提取两次，每次1个小时，离心分离，合并提取液，加入适量的β-环糊精，浓缩，喷雾干燥，包装，每袋1克，即得（醇提物含量：~85%）。

实施例 5 ：以青钱柳悬浮培养细胞三萜类活性部位制备祛痰止咳胶囊

选取1公斤实施例1制备的青钱柳悬浮培养细胞，经多次洗涤后抽滤滤干，60℃干燥，粉碎后过40目筛，60℃下,以料液比为1:10的95%乙醇进行超声提取两次，每次30分钟，离心分离，合并提取液，回收乙醇，浓缩。浓缩液以水复溶，上X-5大孔树脂柱，水洗去杂，再以95%乙醇洗脱，收集95%乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩得到打孔树脂纯化物。大孔树脂纯化物再以Sephadex LH-20 凝胶柱层析，以？？为洗脱剂，获得三萜类活性部位，加入适量淀粉，灌制成胶囊（250 mg三萜类活性部位/粒），即得。

实施例6：以青钱柳制备祛痰止咳袋泡茶

将选取1公斤新鲜青钱柳叶，60℃条件下干燥，而后粉碎、过筛，包装成每袋2 g或4 g。

实施例7：以青钱柳提取物制备祛痰止咳片

青钱柳干燥枝叶5公斤，粉碎，以料液比为1:10的水加热提取两次，每次1个小时，离心分离，合并水提液，减压浓缩，浓缩液以水复溶，上AB-8大孔树脂，水洗去杂质，75%乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收溶剂，喷雾干燥，加入适量淀粉和微晶纤维，压片，每片0.2g（含青钱柳提取物0.1g），即得。

Claims (4)

1.青钱柳悬浮培养细胞三萜类活性部位在制备祛痰止咳的药物或保健食品中的应用，所述青钱柳悬浮培养细胞三萜类活性部位通过如下方法制备：

选取1公斤干燥的青钱柳悬浮培养细胞，粉碎后过40 目筛，55℃下，以料液比为1:10的95% 乙醇超声提取两次，每次提取30 分钟，离心分离，合并提取液，减压浓缩，浓缩液以水复溶，上X-5 大孔树脂柱，水洗去杂，以95% 乙醇洗脱，浓缩得到大孔树脂纯化物，再以Sephadex LH-20 凝胶柱层析，得到三萜活性部位。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：青钱柳悬浮培养细胞三萜类活性部位单独或者联合其他治疗咳嗽的药物，制备所述药物或保健食品。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述其他治疗咳嗽的药物，选自紫苏叶、黄芩、杏仁、甘草、枳壳、桔梗、橘红、前胡、麻黄、桑叶、菊花、连翘、薄荷、芦根、沙参、栀子、麦冬、贝母、桑白皮、鱼腥草、挂金灯、薏苡仁、冬瓜子、半夏、茯苓、陈皮、白芥子、天花粉、玉竹、百合中的一种或几种。

4.一种青钱柳悬浮培养细胞三萜类活性部位的制备方法，具体操作为：

选取1公斤干燥的青钱柳悬浮培养细胞，粉碎后过40 目筛，55℃下，以料液比为1:10的95% 乙醇超声提取两次，每次提取30 分钟，离心分离，合并提取液，减压浓缩，浓缩液以水复溶，上X-5 大孔树脂柱，水洗去杂，以95% 乙醇洗脱，浓缩得到大孔树脂纯化物，再以Sephadex LH-20 凝胶柱层析，得到三萜活性部位。