JPS58198758A - ヒトエノラーゼの定量方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は検体中のエノラーゼ、特も、臨床医学的に有用
な神経組繊細胞あるいは神経内分泌細胞から遊出される
神経組織特異的エノラーゼを定量する方法並びにこのエ
ノラーゼを定量することによってこれら細胞を含む組織
の腫瘍や癌の診断又はそれらの治療効果あるいは予後の
判断に利用する方法に関する。

エノラーゼは２−ホスホグリセリン酸＃ホスホ、１　　
　　　エノールピルビン酸の反応を触媒する酵素で、２
量体構造をもち、分子量約４万〜５万の３種類のサブユ
ニット（ａ、β、γ）より成る（フレンチ（３） ャーら（Ｌ、　Ｆｌｅ　ｔｃｈｅ　ｒら）：バイオチミ
カバイオフィジカ　アクタ（Ｂｉｏｃｈｉｍ、　Ｂｉｏ
ｐｈｙＳ。

Ａｃｔａ　）第４５２巻、２４５〜２５２ページ、１９
７６年）。

これらのうち、γγ型およびαγ型が神経組織特異的エ
ノラーゼ（ｎｅｕｒｏｎ−ｓｐｅｃｉｆ　１ｃｅｎｏｌ
ａｓｅ、以下ＮＳＥと略す）である。このＮＳＥは免疫
組織化学的に神経細胞体、軸索、シナラプスに存在し正
常のダリア細胞内には存在しない。ダリア細胞内に存在
するエノラーゼはαα型で非神経組織特異的エノラーゼ
（ｎｏｎ−ｎｅｕｒｏｎａ　１ｅｎｏｌａｓｅ＋以下Ｎ
ＮＥと略す）である。

ＮＳＥは神経組織ではその可溶性蛋白の１％以上を占め
、神経細胞の分化に拌って増量し、特に１； シナラプス形成時期に急激も、増加することが知られて
いる。このようにＮＳＥは神経細胞に多量に存在し、し
かも細胞体の分化とともに増量することなど神経細胞の
高次機能との密接な関連が示（４） 胸中にもＮＳＥが存在することが確認された（マランゴ
スら（Ｐ、ＪｏＭａｒａｎｇｏｓら）：ジャーナル　オ
ブ　ニューロケミストリー（Ｊ、Ｎｅ鳴ｒｏｃｈｅｍ）
第３３巻、３１９〜３２９ページ、１９７９年および、
タビアら（Ｐ、Ｊ、Ｔａｐｉａら）：ザ　ランセット（
Ｔｈｅ　　Ｌａｎｃｅｔ）、第１巻、８０８〜８１１ペ
ージ、１９８１年）。このことは神経組織の損傷あるい
はそれらの腫瘍細胞の崩壊や細胞分裂にともなってＮＳ
Ｅが体液（唾液、脳を髄液など）中に遊出してくること
が予想される。

本発明はこのような背景のもとに完成されたものであっ
て、その目的とするところは、ヒト体液中の微量のエノ
ラーゼ、特に臨床医学的に有用なＮＳＥを酵素免疫測定
法により高感度に定量するし本発明の定量方法は上記に
限定されるものではなく：ＮＮＥの定量あるいは体液以
外の組織中のＮＳＥ、ＮＮＥの定量も可能である。

従来エノラーゼの定量法としては、限られた組（５） 織材料で各種のエノラーゼアイソザイムを分離操作なく
、区別して特異的に定量するために、それぞれの抗血清
を用いたラジオイムノアッセイ（Ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎ
ｏａｓｓａｙ、以下ＲＩ　Ａと略す）法が用いられて来
た。例六ばマラソゴスら（Ｐ、Ｊ。

Ｍａｒａｎｇｏｓら：ジャーナル　オブ　ニューロケミ
ストリー（Ｊ、Ｎｅ　ｕ　ｒｏ　ｃ　ｈｅｍ、）１第３
３巻、３１９〜３２９ページ、１９７９年）はラット、
サル、ヒトの脳組織中のＮＳＥ、ＮＮＥをＲＩＡ法によ
りｎｇの単位で測定している。ブラウンら（Ｋ、　Ｗ。

Ｂｒｏｗｎ　ら：クリニカ　チミカ　アクタ（ｃｌｉｎ
ｉｃａｃｈｉｍｉｃａ　、Ａｃｔａ）、第１０１巻、２
５７〜２６４ページ、１９８０年）はＲＩＡ法によりヒ
トの脳を髄液及び血清中のＮＳＥを測定し、その感度の
限界は１５０　Ｐｇであると述べている。またパーマら
（ＡｏＭ、　Ｐａｒｍａら：ジャーナル　オプ　ニュー
ログミスドリー（Ｊ、　Ｎｅ　ｕ　ｒｏ　ｃ　ｈｅｍ、
）　、第３６巻、１０９３〜１０９６ページ、１９８１
年）はより高感度のＲＩＡ法により１０８　ｐｇ〜２ｎ
ｇの範囲でＮＳＥを検出している。

（６） このようにＲＩＡ法では約１１００ｐレベルのエノラー
ゼの定量が可能である。しかしＲＩＡ法では脳組織など
のように大量のエノラーゼの存在する検体の定量には充
分であるが、細胞培養液中や体液（例えば脳を髄液、血
液、尿等）中の微量のエノラーゼの定量には適さない。

またＲＩＡ法の各測定系はそれぞれのサブユニット（α
とγ月こ特異的であり、ハイブリッド型のαγとホモ型
のに、ｒｒとαγあるいはααとαγの交差は多少認め
られるが、例えば抗体番こモノクローナル抗体を用いる
ことにより完全に交差しない測定系をつくることが可能
である。ＲＩＡ二抗体法ではたと六モノクローナル抗体
を使用しても交差は除くことができない。さらにＲＩＡ
法の不利な点として放射性同位元素を使用するため特別
な施設、設備を必要とすること及び使用するアイソトー
プの半減期の問題から安定性が低い点があげられる。

そこで、本発明者らは大腸菌のβ−Ｄ−ガラク（７） トシダーゼを標識酵素として用いた酵素免疫測定法（Ｅ
ｎｚｙｍｅｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ法、以下ＥＩＡ法と
ことを知り本発明を完成したものである。本発明の方法
によればＲＩＡ法の約３０倍の感度でエノラーゼの定量
が可能で、しかも特別な設備を必要とせず、反応系は長
期間安定である。

即ち、本発明は抗エノラーゼ抗体結合固相に検体中のエ
ノラーゼを反応せしめて得られる反応物に酵素標識抗エ
ノラーゼ抗体を作用せしめるか又は検体中のエノラーゼ
と酵素標識抗エノラーゼ抗体を反応せしめて得られる反
応物を抗エノラーゼ抗体結合同相に作用せしめることに
よって抗エノラーゼ抗体を介してエノラーゼ及び酵素標
識抗体中のエノラーゼ量を求めることを特徴とするエノ
ラーゼの定量方法及び該方法を用いる癌の診断方法に関
する。

（８） 本発明の方法、特に臨床医学的に有用なＮＳＥの定量に
おいて、抗体結合同相、酵素標識抗体の調製に用いられ
るエノラーゼのｒサブユニットは免疫化学的Ｏこ種特異
性がなく、例えばヒトのみならずラット、ウシ、ブタ、
ウサギ等いずれ一私ものでも使用できる。

一ゼ、アルカリホヌファターゼ、パーオキシダーゼ、グ
ルコースオキシダーゼ、リンゴ酸脱水素酵素等通常用い
られる酵素であればいずれでもよいが、特にβ−Ｄ−ガ
ラクトシダーゼが測定感度が高いので高感度測定のため
に好ましい。

酵素標識抗エノラーゼ抗体の調製に際して用いられる酵
素とエノラ・−ゼ抗体との結合法は、酵素、抗エノラー
ゼ抗体の各々の活性（触媒活性、抗体結合能）が失なわ
れないような方法であればどのような方法でもよい、具
体的にはグルタルアルデヒド、カルボジイミド、Ｎ、Ｎ
’−０−フェニレンジマレイミド、ｍ−マレイミドベン
ゾイル−Ｎ−（９） ハイドロキシサクシニミドエステル（ｍ　−Ｍａ　１　
ｅ　ｉ　ｍ−１ｄｏｂｅｎｚｏｙｌ　−Ｎ−Ｈｙｄｒｏ
ｘｙｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｅＥｓｔｅｒ）等の既知の二
官能性試薬が使用できる。

固相（不溶性担体）としてはアガロース、デキストラン
、セルロースなどの多糖類、ポリスチレン等の合成樹脂
、あるいは、ガラス、ポリアクリルアミド等が用いられ
、形態としてはビーズ状、繊維状であることが好ましい
。抗エノラーゼ抗体と固相との結合は物理的吸着を利用
してもよいが、通常蛋白質あるいは酵素等を不溶化する
のに用いられる方法を利用してもよい。例六ば不溶性多
糖を用いる場合があれば不溶性多糖を臭化シアン、過沃
素酸ナトリウム、エピクロルヒドリン、１゜また、同相
に適当なスペーサーを導入した後、スペーサーを介して
抗エノラーゼ抗体を結合させてもよい。更に抗エノラー
ゼ抗体と固相の結合（１０） を可逆的な結合、例λばＳ−８結合にした場合には、測
定後固相に結合した免疫反応物を固相より切断、除去し
Ｃ例λばＳ−８結合の場合還元剤ｔこより切断される）
、固相をくり返し使用することもできる。カラムを用い
る場合には固相に不溶化する抗体の量は不溶性担体１−
当り０．１〜２０〜が適当であるが、可能ならば更に多
量の抗エノラーゼ抗体を不溶化することによって測定感
度、測定精度を向」ニさせることが可能である。

ここで使用される抗エノラーゼ抗体タンパクはそのまま
でもよいが、抗原結合部位のみを分離したＦ　（ａｂ’
　）２部分などを使用することもできる。

Ｆａｂ”部分の調製法については、石川らの報告がある
（スカンジナビアン　ジャーナル　オブ　ザイム′ロジ
ー（Ｓｃａｎｄ、　Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　）第８巻
４３頁、１９７８年）。

生体体液成分による干渉作用を抑制あるいは除去するた
めに用いる疎水性蛋白質としてはぜラチンなど、塩類と
しては、食塩などが用いられる。

本発明によればこのように、測定しようとするエノラー
ゼを生体体液成分による影響も受けず、高感度で精度の
高い測定が可能となり更に、自動測定系への応用も容易
である。

本発明によるエノラーゼの定量方法を利用して体液（例
λば血液、脳を髄液、尿など）中のＮＳＥを定量するこ
とにより神経組織あるいは発生学的に神経細胞Ｑこ近い
細胞、例えば神経内分泌細胞を含む組織（脳下垂体前葉
、甲状腺、膵臓ランゲルハンス成鳥、副腎など）の破壊
を伴う疾患およびそれらの組織から発生する腫瘍などの
疾患の早期診断、治療効果の判定および予後の良否の判
定に有効である。

又、ある種の癌（例λば食道癌、腎臓癌、直腸癌、膵臓
癌、肝臓癌など）のうち悪性の未分化癌患者の体液中に
ＮＳＥが多量に存在することおよび良性の癌ではＮＳＥ
レベルが上昇しないことがわかり、このような疾患の診
断などにも本発明の方法は有用である。

本発明のエノラーゼの定量方法は従来の定量法よりも数
十倍の感度で、微量のエノラーゼが定量できるため前記
目的のためには極めて有用である。

以下実施例により詳細に説明する。

実施例１ （１）抗血清の調製 抗α血清及び抗ｒ血清はヒト脳より鉛末らの方法（Ｆ、
５ｕｚｕｋｉ　＋ジャーナル・オブ・ザ・バイオグミス
トリー（Ｊ　、Ｂｉｏｃｈｅｍ、　）第８７巻、１５８
７〜１５９４ページ、１９８０年）に従い精製したαα
エノラーゼ又はｒｒエノラーゼでウサギを免疫して作成
した。

（２）エノラーゼ特異抗体及びそのＦ（ａｂ’）２フラ
グメントの調製 ウサギ３匹より得た抗血清１００−に冷却下（４℃）硫
酸アンモニウムを５０％飽和になるように加えＩｇＧ（
イムノグロブリンＧ）両分を沈澱させた。沈澱を遠心分
離（１０，０００ｘｒ・１５分・４℃）して集め、０．
１％ＮａＮｇを含む０．０１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，
０）に溶解し、室温で同じ緩衝液に透析（１３） した。次にこれを抗原結合セファロース４Ｂ（５ｅｐｈ
ａｒｏｓｅ　４　Ｂ、ファルマシア社製）カラム（１，
０Ｘ２０ｏ＋＋）に通した。カラムに吸着した抗体の溶
離はＩＭＮａｃｔを含む０．１Ｍグリシン〜塩酸緩衝液
（ｐＨ２，ｓ）により行った。溶離して来た精製抗体画
分を集め、中和したのち、減圧下コロジオンバッグ（Ｓ
Ｍ１３２００１ｆグマ社製）を加えて、３７℃、１６時
間処理しＦ（ａｂ′）２フラグメントを得た。

（３）抗体Ｆａｂ’　−Ｇａｌ複合体の調製抗体Ｆ（ａ
ｂ″）２フラグメントを２−メルカプトエチルアミンで
還元しＦａｂ’　（ＳＨ）フラグメントとしてから、過
剰のＮ　−Ｎ’−０フエニレンデイマレイミド（Ｎ−Ｎ
’　−〇−Ｐｈｅｌｌｅｔｒｅ−ｄｉｍａｌｅｉｍｉｄ
ｅ　　（アルドリッヒ社製）　溶液中＆：加λて反応さ
せ、マレイミド−Ｆａｂ’　を得、これをβ−Ｄ−ガラ
クトシダーゼ（以下Ｇａｔと略す。ベーリンガー社）と
を反応ＪＡ今させた。Ｆ’ａｂ・（１４） −Ｑａｔ複合体量はＧａｔ活性で表わし、ｌ　ｕｖ＆ｉ
　を活性−１１１ｍｏｌｅ生成物／ｍｉｎである。こう
して１０　ｍＱのＦ　（ａｂ・）２両分から調製された
酵素標識抗体は約７万〜８万検体分の測定に使用できる
。

（４）抗体結合同相の調製 シリコンゴム片（径３ｍｍのひもを長さ４ｍｍに切った
円柱、サンコープラスチック社側に抗体Ｆ（ａｂ・）２
フラグメントを物理的吸着させた。すなわち適当に稀釈
した上記Ｆ（ａｂ・）２溶液（ｐＨ７，０、Ａ２８０キ
０．５）中に、シリコンゴム片を浸し、４℃で一夜放置
し、抗体溶液を回収した後、固相をＱ、ＯＩＭ’Ｊン酸
緩衝液（ｐＨ７０）、次いでＡ液（０，０１Ｍリン酸緩
衝液、ｐＨ７，０、含０．１　Ｍ　Ｎａ　ｃ　ｔ、　１
　ｍＭ　Ｍｇｃ１２．０．１％牛血清アルブミン（ＢＳ
Ａ）、ｏ、ｉ％ＮａＮＢ）でよく洗って、Ａ液中４℃で
２日間以上保存後測定に用いた。抗体Ｆ（ａｂ・）２溶
液は反復使用が可能で、抗体結合固相は少なくとも一ヶ
月は安定であった。

なお、αγエノラーゼ測定系では抗体結合固相に抗ｒ抗
体を、酵素標識抗体に抗α抗体をそれぞれ使用した。こ
れを逆にして抗体結合同相に抗α抗体を、酵素標識抗体
に抗ｒ抗体をそれぞれ使用しても全く差しつかえない。

（５）測定操作 標準ヒトエノラーゼを含むＧｉ（０，０１Ｍリン酸緩衝
液、ｐＨ７，０含０．３　Ｍ　ＮａＣ１，１ｍＭＭｇＣ
ｌ。、０．１％ＢＳＡ、０．５％ゼラチン、０．１％Ｎ
ａＮ３　’）　０．５　ｍｌに抗体結合同相を一個ずつ
入れ、３０℃で振盪した。５時間後に反応液を吸引除去
して、試験管内で同相を洗った（Ａ液１艷×２回）。Ａ
液で稀釈した酵素標識抗体（３ｍｕｎｉｔｓ１０．２ｆ
ｎｌ）中に同相を移し、４℃で一夜静置した。翌日反応
液を吸引除去し、Ａ液で固相を洗ってから、固相−ヒに
結合したＧａｔ活性を測った。Ｇａｔ活性は、４−メチ
ルウンベリフェリーβ−Ｄ−ガラクトサイド（４−ｍｅ
−ｔｈｙｌｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒｙｌ−β−Ｄ−ｇａｌ
ａｃｔｏ！１ｉｄｅ”）を基質とし、生成した４−メチ
ルウムベリフェロン（４−ｍｅｔｈＶｌｕｍｂｅｌｌｉ
ｆｅｒｏｎｅ　）を螢光光度計で測定した。

使用した３Ｍ類のエノラーゼ標準品は前に述べた鉛末ら
の方法によって調製した。最終標品プロティン　アッセ
イ法（ＭｏＭ、１３ｒａｄｆｏｒｄ　：アナリティカル
　バイオケミストリー（ＡｎａｌＢｉｏｃｈｅｍ、　）
第７２巻、２４８〜２５４ページ、１９７６年）に従っ
て測定した。

これらエノラーゼ標準品（約Ｉ　Ｑ　／　ｍｅ　）は２
、５　ｍ　Ｍ　Ｍｇｃｔｚ、５０％グリセリンを含む３
０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ６，８）中で、−３０℃にお
いて少なくとも３ケ月間免疫活性的に安定である。

γγ、αγ、ααエノラーゼの検量線をそれぞれ第１図
、第２図、第３図に示す。図中−０−１，ｔγｒエノラ
ーゼを、−の−はαγエノラーゼを、−〇−はααエノ
ラーゼをそれぞれ表わす。ｒγエノラーゼ測測定線最少
的３１）ｇ（１７） の感度で測定で矢、ααエノラーゼの交差反応は認めら
れなかった。

ハイブリッド型αγエノラーゼはγγエノラーゼ測測定
尺びαａエノラーゼ測定系に約３０％交差反応した。

実施例２ ラットの脳より精製したγγエノラーゼでウサギを免疫
して作成した抗体を用い実施例１と同様に操作し、検量
線を求めた。結果を第４図に示す。本実施例の方法でも
、実施例１と同様に１測定当り３〜１００００　ｐｇの
Ｎ’ＳＥが定量可能である。

実施例３ 神経芽細胞腫および神経節神経芽細胞腫患者の血清中の
Ｎ　Ｓ−Ｅを実施例１に従って定量した。

血清サンプルは病院に入院した患者２０名より採取した
ものを使用した。

対照として正常成人の血清は健康診断の際の血清の一部
（２０〜６０才、２０例、男女各１０例）を使用し、又
対照小児の血清は長径へ（１８） ルニア手術のため入院した他に疾病のない小児（１〜７
オ、２０例、男１５例、女５例）より採取した。測定結
果を第５図に示す。図中りは神経節神経芽細胞腫患者の
ＮＳＥレベルを表わす。

正常成人対照群の直清ＮＳＥレベルは平均２．８７±１
．１８ｎｇ／ｌｎ１．小児対照群のそれは平均５．７６
±２．４２　ｎｇ　／　ｍｅであった。これζ；対し神
経芽細胞腫群の血清ＮＳＥレベルは１３．６〜３３０　
ｎｇ／ｍｌ（平均９６　ｎｇ／ｍ／！　）で正常群（こ
比較して非常に高い値を示した。一方良性の神経節神経
芽細胞腫群の血清ＮＳＥ値は正常小児のそれと同じレベ
ルであった。

なお、γサブユニットに特異的な測定系ではγｒ１　α
γエノラーゼがそれぞれ異なる親和性で検出されるため
、これをｒｒ当価として血清中のＮＳＥ濃度を表示した
。

実施例４ ．１ 肺癌および膵臓癌患者の血清中ＮＳＥを実施例１＆こ従
って定量した。血、清サンプルは各種肺癌で入院した患
者計５２名および膵臓癌で入院した患者を、それぞれ表
わす。悪性の未分化癌である小細胞型肺癌患者の血清Ｎ
ＳＥレベルは、正常値と変わりないものもあるが半数は
異常値を示し、最高７４　ｎｇ／−という極めて高い値
を膵臓癌の患者の場合は特別な場合を除いて血清ＮＳＥ
レベルは正常値と変わりない。

実施例５ 神経芽細胞腫患者の尿中ＮＳＥを実施例１に従って定量
した。測定サンプルは患者３名、正常人３名から得た。

正常人の尿中ＮＳＥは本発明の定量方法では検出できな
かったが、神経芽細胞腫患者のそれは１５１．７２．１
５　ｐｇ／ｍｅのレベルを示した。

実施例６ 神経芽細胞腫の患者１名および神経節神経芽細胞腫の患
者２名の直情ＮＳＥを継続的に測定した。測定結果は第
１表Ｇこ示すように神経芽細胞腫の患者の血清ＮＳＥは
症状の悪化とともに急激に高くなるのが観察された。又
、神経節神経芽細胞腫の患者の血清ＮＳＥは神経芽細胞
腫の患者のそれに比べて低いが、放射線治療により急激
に増加しな。これは腫瘍細胞が放射線により破壊された
結果であるとみられる。

第１表 （２１） 実施例７ 血清ＮＳＥレベルの高かった肺癌患者４例を追跡調査し
た。実施例１に従い血清ＮＳＥを経時的に測定したとこ
ろ第７図に示す結果を得た。

（−〇−’）の例では１週間目に化学療法と放射線療法
を開始したところ血清ＮＳＥ値は急激に減少した。しか
し２５日目に治療を中断したところ再びＮＳＥの上昇が
みられた。

（−ロー）の例は化学療法と放射線療法の結果ＮＳＥが
低下したことを示している。

（−へ−）の例は始め症状の変化があまりなかったが４
０日以後悪化とともにＮＳＥレベルも」１昇を示した。

（−・−）の例は治療効果なくついに軽快しなかった。

その間血清ＮＳＥレベルも低下することなく、増加する
一方であった。

実施例８ 胸腺カルチノイド患者の血清ＮＳＥを実施例１に従い経
時的に定量した。経果を第８図に示す。同図中の矢線は
放射線療法を行った日を示（２２） す。分化癌である胸腺カルチノイドに罹患している本患
者の血清ＮＳＥは、初期は正常値レベルであるが放射線
療法の開始とともに腫瘍細胞の破壊番こより急増し、照
射を中止すると低下した。そして４０日目には完全に正
常値に戻った。

実施例９ 直情ＮＳＥレベルの高かった未分化型の膵臓癌、食道癌
、直腸癌の患者各１名ずつの血清ＮＳＥを経時的番こ定
量した。結果を第９図に示す。

（−ｏ−）は膵臓癌の例で症状の悪化にともないＮＳＥ
レベルが上昇した。（−へ−）は食道癌の例で治療効果
が表れ、症状の軽快とともにＮＳＥレベルが低下した。

（−ロー）は直腸癌の例で症状は小康状態を続けた後急
変し、それにともないＮＳＥレベルが急上昇した。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明の定量法に′ｊるγγエノラーゼの検量
線を示す。第２図は同じくαγエノラーゼの第３図は同
じ＜、ααエノラーゼの検量線を示す。 第１〜３図において（−・−）はγγエノラーゼを、（
−〇−）はαγエノラーゼヲ、（−〇−）はααエノラ
ーゼをそれぞれ表わす。 第４図はラット脳のエノラーゼを免疫して作成した抗体
を反応系に使用した場合のγｒエノラーゼの検量線を示
す。 第５図は神経芽細胞腫の患者群の血清ＮＳＥレベルの分
布を表わす図である。第６図は肺癌および膵臓癌患者群
の血清ＮＳＥレベルの分布を表わす図である。 第７図は肺癌患者４例の血清ＮＳＥレベルの変化を表わ
す図である。図しく第８図は胸腺カルチノイド患者の、
第９図は膵臓癌、食道癌、直腸癌患者の血清ＮＳＥレベ
ルの変化を表わす図である。 第９図において（−〇−）は膵臓癌、（−八−）は食道
癌、（−ロー）は直腸癌の例をそれぞれ表わす。 特許出願人　　天野製薬株式会社 し 第１図 ヒトエノラーゼアイソザイム（ｐｇ） 第２図 ヒトエノラーゼアイソザイム（ｐｇ） 第３図 ヒトエノラーゼアイソザイム（ｐｇ） 第４図 ０　　　　　１０　　　　１００　　　１０００　　１
００００ヒトγγエノラーゼ（ｐｇ） 第５図

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）抗エノラーゼ抗体結合固相に検体中のエノラーゼ
   を反応せしめて得られる反応物に酵素標識抗エノラーゼ
   抗体を作用せしめるか又は検体中のエノラーゼと酵素標
   識抗エノラーゼ抗体を反応せしめて得られる反応物を抗
   エノラーゼ抗体結合同相に作用せしめることによって抗
   エノラーゼ抗体を介してエノラーゼ及び酵素標識抗エノ
   ラーゼ抗体を固相に固定化せしめた後、同相に結合した
   該標識酵素活性を測定することにより検体中のエノラー
   ゼ量を求めることを特徴繊維状であり、カラムに充填さ
   れて使用され、免疫反応終了後、カラム内にて酵素活性
   を測定することを特徴とする特許請求の範囲第１項記（
   １） 載のエノラーゼの定量方法。 （３）抗エノラーゼ抗体をプロテアーゼ処理して得られ
   るＦ（ａｂ”）２フラグメントまたはＦａｂ’フラグメ
   ントを使用することを特徴とする特許請求の範囲第１項
   又は第２項記載のエノラーゼの定量方法。 （４）反応時に高濃度の塩類と疎水性蛋白質を添加する
   ことにより検体中の干渉物質の影響を除去することを特
   徴とする特許請求の範囲第１項、第２項又は第３項記載
   のエノラーゼの定量方法。 （５）検体がヒトの体液である特許請求の範囲第１項、
   第２項、第３項又は第４項記載のエノラーゼの定量方法
   。 （６）体液が血液、髄液、リンパ液、細胞組織液、尿、
   唾液、胸水、腹水、羊水、胃液、膵液又は　　　　゛喀
   痰である特許請求の範囲第５項記載のエノラーゼの定量
   方法。 （７）抗エノラーゼ抗体結合固相と酵素標識、抗エノラ
   ーゼ抗体を用いる方法により検体中のエノラーゼを定量
   することを特徴とする癌の診断（２） 方法。 （８）被検者の検体中エノラーゼの定量値と正常人の当
   該値とを比較することを特徴とする特許請求の範囲第７
   項記載の癌の診断方法。 （９）被検者の検体中エノラーゼを継続的に定量し治療
   効果の判定および／又は予後の判定番こ利用することを
   特徴とする特許請求の範囲第７項記載の癌の診断方法。