JPS58185546A - Ａ４１０３０抗生物質群 - Google Patents
Ａ４１０３０抗生物質群Info
- Publication number
- JPS58185546A JPS58185546A JP58049665A JP4966583A JPS58185546A JP S58185546 A JPS58185546 A JP S58185546A JP 58049665 A JP58049665 A JP 58049665A JP 4966583 A JP4966583 A JP 4966583A JP S58185546 A JPS58185546 A JP S58185546A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- water
- factor
- weak
- medium
- strong
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Landscapes
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Feed For Specific Animals (AREA)
- Fodder In General (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は抗微生物活性を有する新規な発酵１１−、 ｓ
物および従来知られていない微生物、ストレプトマイセ
ス（Ｓ ｔｒｅｐｔｏＩＶｃｅｓ ）科の微生物を培養
づることにより該抗生物質を製造する方法に関する。 これらの新規な化合物は米国特許第４３２２３４３号お
よび４３２２４０６号に記載されＣいる抗生物質に類似
している。 病原微生物の、抗生物質に対４る耐性株が発生する可能
性があり常にその驚異にさらされているので、新規な抗
生物質を開発する必要性がある。 特にダラム陽性菌であるスタフィロコッカス（５ｔａｐ
ｈｙ＋ｏｃｏｃｃｕｓ ）属およびストレプト」ツカス
（５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）属に属する病原菌は、
ページリンや■リスロマイシンのような通常使用される
抗生物に対して耐性を有する（例えばＷ、０゜Ｆ ｏｙ
ｅ、 Ｐ ｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｍ ｅｄｉｃ
ｉｎａｌ Ｃｈｃｕ＋１ｓｔｒｙ。 ６８４〜６８６頁、１９７４年参照）。 本発明者らはＡ４１０３０？！合体およびその囚１′群
△、口、０．１）、「、１−おにびＧあるい１．１−ｆ
れらの薬学的に４容し得る塩類が（＋効なり’を微１１
物剤（あることを見い出した。 これらの新規な抗り物質は従来知られてい／ｆｉいＳ目
゛ｃｐ＋ｏｎ＋ｙｃｅｓ ｖｉｒｇｉｎｉａｅ Ｎ
ＲＲｌ ’＋ ２５）２５またほぞの親株（ある
Ｓ ｔｒｅｐｔｏａ＋ｙｃｅｓ ｖｉｒｇｉ旧ａｅ Ｎ
１７Ｒ１１５１ｂ６を同化し得る疾′Ａ源、窒本源お五
〇無Ｉａ塩類を含りする培養培地ぐ好気何重することに
Ｊ、り製造りることがＣさる１、これらの微４ ？’ｌ
＜ｔト＊、ｔ 因’ｆ Ａ 、 １１ 、 Ｃ、’
Ｄ、［−１［第５１、ヒ（１と命名されたいくつかの抗
生物質囚１￥がらへる抗り物質複合体（二」ンプレック
ス）を４．産づる。 簡略化の！、めに、培養し１．：微生物、Ｓ Ｉｒｅｐ
ｌｏｉｙｃｅｓ ｖｉｒｇｉｎｉａｅ Ｎ ＲＲＬ １
２５２５は本弁明賃らの研究全°ｃ ＜、ｔノｊルｆｖ
Ａ４’１０３０．４とＱ名した。３ ｔｒｅｐｊｏ
ｍｙｃｅｓ ｖｉｒｇｉｎｉａｅ Ｎ ＲＲ１１５１ｈ
６１．ｔ ７’ｉ々（１） ？ｊｌ 入’ｉ”（’
Ｌ、ｔ Ａ ４１０３ （１トｆａｉｌ 名Ｌ ／、：
、。 個々の因子ｉＹのみ外吸収スペクトルを添（Ｊの図面に
承り。Ｊ ’ｔｈわ］）第１図しＬ Ａ ／Ｉ １ （
１３０囚了Ａ（Ｋ ［３ｒ法）、第２図はＡ ４１０３
０囚ｉ’Ｂ（ＫＢｒ ａ）、第３図はＡ４１０３０因子
Ｃ（ＫＢｒ法）、第４図はＡ４１０３０因子Ｄ （ＫＢ
ｒ法〉、第５図はＡ４１０３０因子Ｅ （ＫＢｒ法）、
第６図はＡ−４１０３０因子Ｆ （ＫＢｒ法）、第７図
はＡ４１０３０因子Ｇ （ＫＢｒ法）を夫々示している
。 本明細書において、および発酵技術分野において使用さ
れる用語「複合体」は、−緒に生産された個々の抗生物
質因子の混合物を意味する。発酵による抗生物質の生産
について詳しい当業者には容易に理解されるように、抗
生物質複合体中に占める個々の因子群の割合および量は
、発酵条件および菌株に応じて変動する。 インディアナ州、インディアナポリスで採集された土壌
サンプルから初めて単離された５ｔｒｅｐ−ｔｏｓｙｃ
ｅｓ ｖｉｒｇｉｎｉａｅ （Ａ ４１０３０ ）培
養株から化学的に誘導した突然変異株であるカルチャー
Ａ４１０３０．４は、イリノイ州ベオリア、Ｎｏｒｔｈ
ｅｒｎ Ｒｅｃ＋１ｏｎａｌ Ｒｅ５ｅａｒｃｈ Ｃｅ
ｎｔｅｒ、 Ｕ。 Ｓ、 ［）ｅｐａｒｔｇａｅｎｔ ｏｆ Ａｇｒｉｃ
ｕｌｔｕｒｅ、 Ａｇｒｉｃｕト＋ｕｒａｌ Ｒｅ５ｅ
ａｒｃｌ＋ ５ｅｒｖｉｃｅ１．：寄託され、ス１〜ツ
クカル／ｌＩ−、＋レクシー］ンの一部とｈっ（おり、
ぞこからＮＲＲ＋１２５２５の番号で・誰でｂ Ｌれを
利用４ることか（゛さる。本発明の複合体を生産する親
株、Ｓ ｔｒｅｐｌｐｍｙｃｅｓ ｖｉｒｇｉｎｉａｃ
（Ａ ４１ （１３０） ｂＮｏｌｌ＋ｅｎ＋
ｌぐ ｅｇｉｏ＋＋ａｌ ｔ−＜ｅｓｅａｒｃ！
； Ｃｅ＋＋Ｉｅｒに寄託され（おり寄託ａｉ号ＮＲ
ＲＩ １ ｂ１ｂ６の番シツ（誰（゛も利用ζることが
′Ｃ−さる。 カルＬＩｌ−Ａ４１０３（’）、４１Ｊノｊルｆ ｓ−
−Ａ １１１ （’） 、’） ０をミｈ ン−１’
シン０１次い−（゛Ｎ−メ１ルＮ’ −二Ｉ＝ｎ−Ｎ
、、 −ｔ−ｒ」ソゲ７ニシン（［！理りることにＪ、
り得ることが（・きる。 カルｆ！−−Ａ４１０３０をぞの他の突然塵巽、六発処
理にか４Ｊることにより、３１ｒｅｐ［ＯｍｙＣＯ３ｖ
ｉｒｇｉ＋＋ｉａｅ ＮＲｔｔ ｌ １２５２５と同
じ生合成能をし）たその他の株をｌ（産し１！４ること
は当業名には明らか（゛あるはｆである１、ミ１ヘマイ
シン０以外の適当な変異誘発＃ｉには、ｊ′クリノラど
ン、ＩクリシンＡレンジ、Ｌブシウム１１−］ミドおよ
びその他の化学物負が含まれる。 Ｎ ＲＲＬ ｉ ２
５２５を得るだめに、ミドマイシンＣとともにＮ−メチ
ルＮ′−二トローＮ−二トロソグアニジンを使用したが
、その他の既知の変異誘発素、例えば紫外線高周波、放
ｔ１４活性物質の放射線、Ｘ線およびその他の化学物質
などを、突然変異を誘発するのに使用することができる
。 ３ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ａｖｉｄｉｎｉｉ ＡＴ
ＣＣ２７４１９Ｓ ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｃｏｌｕ
ｉｂｉｅｎｓｉｓ Ａ Ｔ ＣＣ２７４２５、Ｓ ｔ
ｒｅｐｔｏ−ｙｃｅｓ ｇｏｓｈｉｋｉｅｎｓｉｓ
Ａ Ｔ （〕 Ｃ２、’３９１４．３ ｔｒｅｐ
ｔｏｉ＋ｙｃｅｓ ｑｒｉｓｅｏｌａｖｅｎｄｕｓ
Ａ Ｔ ＜。 Ｃ２５４５７、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ １ａｖｅ
ｎｄｕｌａｅ Ａ ＩＣＣ８６６４、Ｓ ｔｒｅ
ｐｔｏｉｙｃｅｓ ｔｏｘｙｔｒｉｃｉｎｉ Ａ
’ｆＣＣ１９８１３、およびＳ ｔｒｅｐｔｏｉｙｃ
ｅｓ ｖｉｒｇｉｎｉａｅ １Ｇｒｕｎｄｙ、Ｗｈｉｔ
ｍａｎ、 Ｐｄｚｏｋ、 Ｈａｎｅｓおよ（ＩＳｙｌｖ
ｅｓｔｅｒｌ ９５２ 、ＡＴＣＣ１９８１７との同
時培養に基づいて、Ａ４１０３０は３ ｔ ｒ ｅ ｐ
ｌ’ ＯＩｌｌ Ｖｃｅ５ ｖｉｒａｉｎｉａｅの１
株であり、カルチＶ−へ４１０３０．４は３ ｔｒｅｐ
ｔｏｍｙｃｅｓ ｖｉｒｇｉｎｉａｅの菌株から化学的
に誘導された突然変異株であると分類された。３ｈｉｒ
ｌｉｎＱおよびＧｏｔｔｌｉｅｂのｒ Ｍ ｅｔｈｏｄ
ｓｏｆ ＣＩ＋ａｒａｅ＋ｃｒｉｌａｔｉｏｎ ｏ
ｆ ５Ｉｒｅｐｌｏｏ１ｙｃｅｓＳ １＋ｅｃｉｅｓ
ｌ （Ｉ ｎｔ、Ｊ、 ５ｙｓ１．Ｉ（ａｃｌｅｒ
ｉｏｌ、ｌ ６（３）−１３１３〜３４０貞、１９６６
ｉｔ ）にＨＩ３切、きれＣいるｆ、払Ｊｊよび−ｆ段
、ならびに追加的ＩＣ試Ｍを１を川Ｌ／、：、ｈＬＦｖ
−Ａ４１０３０．４Ｌ、Ｌ。 ｌ ＲｅｒｇｅＶ ’ Ｓ Ｍａｎｌｌａｌ ｏｆ
［）ｅｌｅｒｍｉｕ旧１ｖ（！Ｆｌ ａｃｔｃｒｉｏ
ｌｏｇｙ ｌ （（３版 、 Ｒ、［−、３１１
ｃｔｌａｌｌａｌｌ 、ＩＪ、ひＮ 、 Ｆ−、Ｇ
ｌｌ１ｂＯｎＳ、 Ｔ Ｉ＋ｅ Ｗ １ｌｌＩａ
ｌｌｌｓ ａｌｌ＋ＩＷｉｌｋｉｎＳ （’、Ｃ
”）、 、 Ｂａｌ目ａｄｏｒｅ、Ｍａｒｙｌａｎ
ｄ ） ：お、Ｊ、びＳ ｆｒｉｌｌ ｉ＋＋ｇお
五〇Ｇ ｏｆ ｌ Ｉ ｆｅｌｌ、 ｌ Ｃ００１’ｌ
ｆ！Ｉ’１ｌｆｉｖｅＪ）ｅｓｃｒｉｌ＋ｔｉｏｎ
ｏｒ Ｔ ｙｐｅ ５ｔｒａｉｎｓ ｏｆＳ ｔｒ
ｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｌ （Ｉ旧、 Ｊ 、 Ｓｙｓ＋
、１１ ＋＋ＩｅｒｉｏｌＩｆｌ＜２）、１７８０．１
９６８年）中の１記の菌株に）い（の記載とも比較した
。 ノノルＦ ｔｒ−△ｌＩ １０３０．４１．Ｌいがなる
培地中（し気中菌糸（４Ｊメ、五〇胞子を’４ ｒｇ−
： Ｌ ＜ｔいの（川−認の仝（の菌株ど巽っＣいる。 Ａ４１０３０ＬＬＪ、＜ １１違り、ｌ ｒｙ 気中菌
糸体ｄｊ ヨ（Ｊｌｌ、り７晒を作りそれらはともに」
イル状（・あり鉤形１（メＪ、びループを示づ。Ａ４１
０３（’）は、第１次形いと１． （は、Ｐｕｄｂａｉ
らｒＡ Ｇｕｉｄｅ ｆｏｒ ｔｈｅｔｌｄｓｓｌ「
１ｃａｔｉｏｎ ｏｆ ５ｔｒｅｐｒｏｍｙｃｅ
ｓ ＡＣＣＯｒｃｌｉｌｌｇＩｔ−Ｉ ５ｅｌｅｃ
ｔｅｄ Ｑｒｏｕｐｓ Ｊ （Ａ１１＋）１．Ｍｉｃｒ
ｏｂｉｏｌ。 ・５．５２〜７９ｎ、１９５７年）のらせん状（ｓ）′
ｊルーｌに荀メし７、第２次形態とじ（はｐｒｉｄｉｌ
ａｌｌｌらのＴ ｅｔｉＴｌａｃｕｌｌｌｌ −Ａ ｐ
ｅｒｔｕｍ （ＲＡ ＞グル−ノに１１“Ｉ置づる。Ａ
４１０３０．４は気中菌糸体も胞ＹＯ産牛しない。 底ｍ 種々の培地中（・の］３ルヂＶ−△４１０３０、Ａ４１
０３０．４およびＳ 、 ｖｉｒｏｉｎｉａｅ Ａ １
− ＣＣ１ｊ） ８１７の発會特竹を表１に示す。 色名はＩ Ｓ ＣＣ−Ｎ Ｂ Ｓ Ｃｅｎｔｒｏｉｄ
ｃｏｌｏｒＣｈａｒｔｓ ３ ｔａｎａａｒｄ Ｓ
ａｍｐｌｅ Ｎｏ 、 ２１０６（Ｎａｔｉｏｎ
ａｌ Ｂｕｒｅａｕ ｏｆ ５ｔａｎｄａｒｄｓ
、Ｕ、Ｓ。 ［） ｅｐａｒｔｉｅｎｔ ｏｆ Ｃｏ５ｇ＋ｅｒｃ
ｅ、 １９５８年）およびＣｏ１ｏｒ ｌ−１ａｒｉ
ｏｎｙ Ｍａｎｕａｌ 、第４版、（ＣｏｌｏｒＳｔ
ａｎｄａｒｄｓ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ、Ｃｏｎｔａ
ｉｎｅｒ Ｃｏｒｐｏ−ｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ａ
ｍｅｒｉｃａ 、Ｃｈｉｃａｇｏ、 Ｉ １ｌｉｎ
ｏｉｓ、１９５８年）に従って決定した。 カルチャーＡ４１０３０．４の生理学的性質を標準的な
手法に従って調べた。観察された性質および特性値を表
２に示Ｔ０ カルチャーＡ４１０３０．カルチャーＡ４１０３０．４
およびＳ ｔｒｅｐｔｏａｙｃｅｓ ｖｉｒｇｉｎｉａ
ｅ Ａ Ｔ ＣＣ１９８１７の炭素利用パターンを、最
ＩＦ１度が１．０％となるように、濾過滅菌した炭＊ｍ
を加えたｌ５ＰＮｏ、９基礎培地を用いて比較した。 ３０℃で１４日間インキュベートした後観察を行なった
。結果を表３に示す。 表２ Ａ４１０３０．４の生理学的性質 Ｕ下の培地でのフライド様 色素の生産： ３、チロシン寒天斜面 メラノイド様色素（Ｉ
ＳＰ＄７”ｉ なし硝酸塩還元
反応陰性ゼラチンの液化 反応
陰性ＮａＣ１耐性 ３％スターチの
加水分解 反応陰性スキムミルク
一部加水分解生育温度 １０
−３４°Ｃ表３ Ａ４１０３０、Ａ４１０３０．４およびＳｔｒｅｐｔｏ
ｍｙｃｅｓ ｖｉｒｇｉｎｉａｅ ＡＴＣＣ１９８１７
の炭素利用性 注）−一利用性なし ＋＝利用性あり ±＝一部利用 １３ｅｃｋｅｒ ら の １ノ？人（△ ｐｐｌ
１Ｍ １ｃｒｏｂｉｏ１． ］土。 ４２１−４２３．１９６４年）に従つ（微′１物の加水
分解した全細胞を用いてジアミノピメリン酸巽Ｍ体を測
定した１その結果を以十に７１％ ’ｌ。 越−Ｍ 枯 ψ−２，６−
シノノミノピリン酸の異性体 １．、 ｌ−異ゼ１体カ
ルｆＩ□−Ａ／１１０３０、力Ｊしｆｌ・−八４１０３
０．４およびＳ ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｖｉｒｇｉ
ｎｉａｅ Ａ Ｔ ＣＣ１９８１７の類似性および相違
Ｎ、ｊを表７１に示（ｊｌ。 （へ名は既述したようにして決定し、形態は前記（１）
ｌ’ ｕｄｈａａ＋らの指ｉｔ ニＪ、 ッだ。 △４″１０３０４″１０３０複載されたことのない微＋
１物Ｓ ｔｅｒｐｌｏｉｙｃｅｓ ｖｅｒｇｉｎｉａｅ
Ｎ ＲＲｌ−１５１１） ６ 、 Ｓ ｔｒｅｐｔ
ｏｍｙｃｅｓ ｖｅｒｇｉｎｉａｅ Ｎ ＲＲＬ
１ ２！１２５またはぞれらのＡ４１０３０生産能
を有４）変責株を、同化し得る炭素源、窒素源および無
ト、嘩龜類を含りする培Ｊ１１８地中、液中好気培基条
例１・（多聞の抗生物質活性が得られるまで培養づ−る
（−とにより製造することができる。抗生物質活性ｉＬ
Ｌとしてブ［ｌス中に見い出されるが、少量の抗生物
質活性は菌糸体にも存在する。Ａ４１０３０両合体は発
酵混合物から、濾過によって菌糸体、・１へわらビオマ
スを除去することによって最も筒中１ご分離ｅきる。菌
糸体は通常捨てる。ついＣ抗′１物賀複合体は、好まし
くは適当イｆ吸着剤と、例、イばメタノール／水（１／
１）の混合物を溶出剤、′シ（用いたカラムク［１ント
グラフイーにより、縞過した発酵ブ〔ｌスから分離Ｊる
。 θｆ適／、４吸鴇剤には、セファデックス樹脂、親水性
の不溶↑１１ ［し１１）−シー／’）ＩＩンｌヘゲツ
ノイー用媒質〈架橋ｒ′■ストランｉこよ−）（製」６
される゛）および−（ＳＫゲルの他、夫木、ＩルミＪ、
）′４ンおよび力ｆＡン父険樹脂、シリカゲル、ボリノ
ｌミド、カルボλシメ＝ｆル１２）し【］−ス、スルシ
ンｄｉよひシビールベンＵンの多孔性Ｉボリンー１例λ
ばタイＩイＡンＩＩ ｆ）−２０、アンバーノイ１〜Ｘ
ＡＤ樹脂およびＦ Ｓ −８６５のよう４ｆジＪＡノ
イ［・樹１１ｉｉ ／ｈとが半けられる。タイメイＡン
樹脂は−４化学［−業株＞’Ｓ会拐の製品Ｃ−ある。）
Ｉンバーライｉ・Ｘ △ １）樹 脂 （ま Ｒｏｔｖ
ａｎｄ １ｌａｓｓ （〕 イ ノ ｌ
ル ノ イア７、ペンシル八ニア）により製造され（い
る。ジノΔノイ１〜樹脂はｌ） ｉａｍｏｎｄ Ｓ
ｈａ＋ｕｒｏｃｋ （レッｌ’ウッド山、カリノ４ル
ーア）の製品ぐある。、Ｐノ／／−ｉツクス樹脂はｐ
ｈａｒＩＩｌａｃｉａ ｌ−ｉｎｅ Ｃｌ＋ｅｍｉｃ
ＩＩＩＳＡ ｒ３ （ＬＪ ＋＋＋＋５ａｌａ、スウｌ
−ゲン）テ製造、、Ｌ−ｉｔ ｃ イる。Ｔ Ｓ Ｋグ
ルは［−、Ｍ ｅｒｃｋ （Ｖ） ａｎｎｓｌａｔｌｌ
） ｄｉよひｌ（１ｏ＝Ｒａｄ （２２（’） ０Ｗ
ｒｉｑｂｌΔＶｅ、ＩＩ ツ／ ［ント、カリノ１ル−
フ 、９４８０４＞の製品（゛ある。 このＳ ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｖｉｒｇｉｎｉａｅ
Ｎ ＲＲＬ Ｉ ２ ’＋２５または３．ｖｉｒｇ
ｉｎｉａｅ Ｎ ＲＲＬ １５１５ Ｇを発育させＡ
４１０３０複合体を生産するための培養培地は、多くの
培地のいずれであつ−Ｃもよい。 しかし経済的な生産、最高収量、生成物の簡単な単離を
達成するにはある種の培地を使用するのか好ましい。こ
れらの培地には同化し得るＦ２糸源、窒素源および無機
塩類が含まれていなければならない。好ましい炭素源と
しては例えばデ１ストリン、でんぷん、マンノース、グ
リセロールおよび綿実油などが挙げられる。炭素源の級
適瀧度は約２〜３重量％である。好ましい窒素源とじＣ
はあらびき大豆、大豆粉、ピーナツ粉、魚粉、ニクＩ＼
ブトン、豚血液粉などが挙げられる。 微生物の発育および生合成に必要な必須微ＦＡｊ」素は
、培地中の他の成分に不純物として含まれ（いるのが普
通である。しかしナトリウム、／Ｊリパノム、マグネシ
ウム、カルシウム、アンモニウム、クロライド、カーボ
ネイト、ホスフェート、スルフェート、ニトレートイオ
ンなどを与え得る可溶性の栄Ｗ１無機塩が１をさらに培
養培地−Ｌご入れるのか好ましい。 発酵培地にツウで−ン８０〈油状の液状ポリオ４シ１
ｆレンソルヒタンｔ］Ａレイン酸］スＩルｌ ＣＩ
Ａ ｍｅｒｉｃ（Ｉｓ、ｌ ｎｃ、 （Ｗ ｉｌｍｉ
ｎｇｌｏｎ、Ｄ ｔ！１． ）の製品）を２・〜・４％
の濃度（・添加４ろと収φが約：’、 ０ （）％増加
りる１、シかしこの条＋！１ト（゛はＡ４１ｒ’＋ ３
０抗生物質の９離がガしい場合かある。 掘撮ノラス１培養によって少量のへ４１０３０抗！＋物
質をｌｒ／ることかできるが、多義のＡ ４１ ｒ）３
０抗１１物負をｌ［Ｒりるにはタンク中Ｃ−液中りｆ気
性培養を行なうのが好ましい。タンク培＆ ｉ、ｍ １
．Ｌ増殖接種物を使用（ｌるのが好ましい。増殖接種物
を％Ｊ造りる（こは、少量の培Ｉｋ培地に胞ｒまたは菌
糸体ノノグヌンＩ・を接種する。このようにしＣ新訂（
・活発に増殖しでいる培養物が得られる。ついＣ１（二
の増イＪ接神物をより人さｈタンクに移し、過当＜ｉ’
Ｍ間インキュヘーシ」ンづるとＡ４１０３０ＩＪ’Ｌｑ
物ｔｌが最泗収吊Ｃ生産される。。 増殖培地用の接種物４得るためのし）１）のｌ。 法は、胞子の水性懸濁液の代りに凍結乾燥ペレツ１〜を
用いることである。凍結乾燥ペレットは既知のｈ法で製
造することができる。凍結乾燥のための胞子塩懸濁液の
１造法は、滅菌蒸溜水の代りに滅菌生血清を使用する他
は水性胞子懸濁液の調製ン人と同じＣある。 へ１１１０３０生産微生物は約１０〜約３４℃の広い湿
度範囲で発育することができる。約３０℃の時にＡ４１
０３０抗生物質複合体の生産が厳島になるようである。 好気付液中培養法においては通常のことであるが、滅菌
空気を培養培地に分散導入する。微生物を効率よく増殖
させるためには、タンク生産に使用される空気の容ｉは
、１分当り、培養培地１容憾当り空気的０．１〜約０．
５容量（ｖ／ｖ／ｌ）であり、約１００〜約３０ Ｏｒ
＋）−で攪拌するのがよい。発酵培地１００ｆｉを含有
する１６５℃の容器を用い、約２００ ｒｐ−で回転す
る羽根車で攪拌した場合の最適吹き込み率は約０．２５
ｖ／ ｖ／ｍである。 抗′４物質ｉ、’、 ｔ’ｌは通帛約４ ｆ３時間世に
あられｔｌ、ＲＭ ＩＩＱ 間中／ｌ＞ ＜ トｂ ｌ
４ ｉｌ １Ｌ’ｔ 間（ｆ Ｉ’ｌ Ｊ ６ 、、
ｋＪ ４％ （’３抗生物質′１産は約９６ ＋］：
’１間から約１２ （”） １１．’１間の発酵１１．
’１間ｔごＩ】’ｊねれる。 Ａ４１０３０ｂ’ｔ’ｔ ｖＪＪ質ノ’１ｆ１１．ｉ、
発酵中、Ｆ３ 。 ５ｕｂｔｉｌｉｓを用い１．：、 １人拡散？人か、５
ｌａｐｈｙｌ。 Ｃ０ＣＣＬＩＳ ａｕｒｅ＋＋ｓ Ａ −Ｉ’ Ｃ，Ｃ
９１１４を用い／Ｊｌｉｔ Ｉｔｊ 法によつ（七−タ
ー（Ｊる。二とができる。 本発明（こ係る抗′ト物質複合体、１５よびその個々の
因子（１、Ｓ 、ｖｉｒｇｉ＋＋ｉａｅ Ｎ ＲＲ１
ｉ ５１ ｈ ６まＩ：ｔ、Ｌｓ 、ｖｉｒｇｉｎｉａ
ｅ Ｎ ＲＲｌ ’ｌ ２５２５のいｆれかを用い、
香しい記１ｕ、ｌｌＩ問および培地成力りど、大筒的に
でｊしい発酵条件１・で製造される。（２かし７コノＪ
、）へ条ｆｌ ト（はＳ 、ｖｉｒｇｉｎｉａｅ Ｎ
Ｉ＜ ｌ＜ ｌ Ｉ２５２５の（４１）か抗生物質
複合体の／ｉ Ｉｖ−響かいくらか多い」、）（・ある
。 Ｌスト（，１，；施例をγ・げ（本発明をさら（、゛１
細に。）２明４るが、本発明）まこれらの実施例（こ１
１）（限゛ル゛されるしの（−ｉ、Ｌイ：ｕ’ｎ Ｘ鳥〔−第１段階接種物の調製 ′、） ｔｒｅｐｔｏｉｙｃ ｅｓ ｖｉｒｇｉｎｉ
ａｅ ＮＲＲｌ １ ２ ５ ２ ５Ｊ５、」、（
ｆ ５ｌｒｐｌｏｉｙｃｅｓ ｖｉｒｇｉｎｉａｅ
Ｎ ＲＲｌ−１５１０６を寒天斜面培養するために使用
−４６培地を以１・（、挙げる。 〕−１１１１１−一一一、−（；、、−７，−ｍ−！］
［−２，＝ｋ１１ストリン（ン４．１＞
１０．０内ｉ Ｉ＜ｊ Ｉ−’ｒ ス
１
、 ０＾？木加水分解ツノげイン（汀２＞ ２．０
′１肉エキス １．０（：ｏＣＩ２
・６目２０ ０．０１寒天
２０．０１１１２イＡン水
水を加え−Ｕ１ｆｆｉ＋ｉＬ １） Ｍａｔ
ｈｅｓｏｎ Ｃｏｌｅｍａｎ ＆ Ｂｅ１
ｌ。 ＼ｏｒｗｏｏｄ、 Ｑｈｉｏ ４５２１２（ｉＬ ２）
Ｎ −Ｚ−Ａｌｉｎｅ Ａ （ｔｌｕｌｋｏ ３
ｈｅｆ−ｒｉｔｌｄ Ｃｈｅｍｉｃａｌ （’、
ｏ、、 Ｍｅｍｐｈｉｓ、 Ｔｅｎｎ、＞調製され
た培地のＩ）Ｈは６．５′ｃあり、オー］〜゛ｌレーノ
ｋか【Ｊる前に５Ｎ水酸化ノ１〜す・クム水溶？１７を
用いて７．３１こ調節した。オー１−クレープにＩζｉ
Ｉｚ後の培地の１１＋−１は６．９７”あった。 人々の黴ノ：物の胞ｆ４．１記の成分（・調製し！′年
大斜面に田神し、この斜面培１１ｔ！！を約３０て〕の
（晶麿（・約６１１間インＶＩべ−１〜した。１次いＣ
成熟ｌ。 た培養物の１に滅菌蒸溜水を注ぎ、滅菌りを使）Ｃ胞子
および菌糸体を（Ｊがした。１１１られｌＪ胞ｆ懸濁液
１成を使つ（増殖培地５戯に接種した１１曽ｈ“１縞地
川の接種物を１！Ｊる別の１１法１．Ｌ、木竹胞ｊ′懸
濁液の代りに凍結乾燥ベレツｌ−４用いること（あろ１
ＮＲＲＩ １２’、）２５の／：＆＋の増殖１６地の
組成ｉ、Ｌ ＩＸトの通り（パあ）た。 處□ １ 量〕−韮−１］−グル
１−ス ２０．０あうひさ人（ｌ（
ま／、： １．１人＋１ヲ粉）１５）、０とうもろこし
浸イ＾液 １０ｉ）ＯａＣＯ３２，０ 水道水 水をハ１１え（１２
ＮＲＲＩ ’Ｉ り’Ｉ ５６のための増殖培地の組成
（、↓ 。 以１・の通り（あ） ／Ｊｕ 威−−−−一−−−−二領 １ニ−Ｌ二
虹斤グルｌ−ス １ｈ、０デキスト
リン ２０．０あらびき大豆（または
大豆粉） １５．０とうもろこし浸漬液
１０．ＯＣａ ＣＯａ ２．０
水道水 水を加えて］ｉ！。 未調節の培地１）Ｈは５．５であり、これをオートクレ
ーブにかける前に５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液でｐＨ６
，５に調節した。オートクレー１にかけた後の培地のｐ
Ｈは７．０であった。 各増殖接種物を培地５０戴を含有する２５０戴の広ロエ
ーレンマイヤーフラスコに入れ、直径２インチの円弧で
２５０ ｒｌ）ｌで回転するシェーカーく振盪器）上、
約４８時間、約３０℃でインキュベートした。このイン
キュベートした培地は、小さな発酵器（接種物は発酵培
地容量の約１％である）に接種する、かあるいは大口の
培養物を生産するための増殖培地と同じ組成の第２段階
の培地に接種するのに使用する。 の 生産培地５０−に、１％（０，５ｄ）の上記のインキュ
ベートした増殖培地を接種、シ・た、生産培地の組成は
以ドの通りである。 灰−一一一−−丸 ａ 、”ｚ＞デ
キストリン（ンＥｌ） ３０．’０あらびき
大豆 ６．０ＫＺＨＰＯ４１，０ ＦｅＳＯ４・７Ｈ２００，００５ ＭＱ ８０４ ・ ７ＨｚＯ１，ＯＮａ Ｎ
Ｏａ １．０Ｃａ ＣＯ３２
，０（ｆｆ２） 脱イオン水 水を加え（１え（）主
１）デキストリンはタピオカデキストリンであっても、
ポテトデキストリンであってもよい。 （注２）ＮＲＲＬ１２５２５の発酵のためにはＣａ Ｃ
Ｏ３の１１麿は４．Ｏｏ／ｊ！であった。Ｋ２ＨＰＯ４
は水に溶解し、この溶液を別に滅菌し、オートクレーブ
（高１’Ｅ滅菌）にかけたその他の培地成分に添加した
。 インキュベートした発酵培地５０戴を２５０鱈のエーレ
ン？イヤーノラスコに入れ、直径２インチの円弧で２５
Ｏｒｐｍで回転する振盪器上、約４〜５日間、約３０
℃でインキュベートした。 ３ ｔｒｅｐｔｏｉｖｃｅｓ ｖｅｒｇｉｎｉａｅ Ｎ
ＲＲＬ １２５２５は上記の生産培地を用い、１６５
リツトルおよび１６００ガロンのタンクを用いた大規模
な発ｅＭ模でインキュベートした。 接種した生産培地は、培地１００２を含有する１６５乏
の発酵タンク中、約３２℃の温度で約２１０Ｒ間（８，
７５日）発酵さ「た。この発酵培地には０．２５ ｖ
／ｖ ／ｍの割合で滅菌空気を吹込み、通常の１ｇｌ痒
器を用いて約２００ ｒｐｍでＷ＆拌した。この大規模
なＮＲＲｌｌ、２５２５の発酵物からＡ４１０３０抗生
物質を、以下に述べる方法で分離した。 支１［［ｉ Ａ４１０３０抗生物質群の分離実／１ｉ
ＶＡ１に記載した方法で得た全発酵ブロス（４２１５ｉ
を、フィルタープレスに濾過助剤（ハイフ・Ｏ・スーパ
ーセル、ケイソウ土、Ｊ ｏｈｎｓＭａｎｖｉｌｌｅ
Ｐｒｏｄｕｃｔｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を入れて
、１過した。濾過したブロスを、ダイアイオン１１Ｐ−
２，０’（ビーズ状の多孔質スチレンジビニルベンピン
コポリマー、三菱化学１業）１０Ｃ１をａ！４するカラ
ムに４２／分の流速で流した。カラムに水３０（１次い
でメタノールと水の混合物（１：３）を４℃／分の速さ
で流すことにより洗浄した。 次いでメタノールと水の混合物（１：１）を、６乏／分
の速さで流して溶出し、１００２のフラウン」ンを集め
た１、各フラクションの生物活性を分析した。３ａｃｉ
ｌｌｕｓ ｓｙｂ口１ｉｓを接種した可大平板上、ペー
パーデｆスク分析によりバイＡアツヒイを？ｊな一〕だ
。フラクシニ」ン１は捨てた。フラウン」ン２−１５を
集め、減圧下ζ・濃縮し、得られた１１編物を凍結乾燥
すると粗抗生物質複合体２２０ｑが得られた。 この複合体’＋１０（ｌをメタノールと水の混合物（１
：１）５２に溶解し、水酸化ノトリウム水溶液（−１）
ｔｌ １０に調節し濾過した。この濾液を予めメタノー
ルと水の混合物（１：１）で平衡化ｌまた粗しファデッ
クスＧ−５（’）（親水性の不溶すりのモレギュラーシ
ーアクロマトグラフイー用媒体、架噛ｆキストランで製
造されたもの、Ｐ ｈａｒｉａｃｉａｌ ｉｎｅ Ｃｈ
ｅｓｉｃａｌｓ、 Ｐ ｉｓｃａｔａｗａｙ、Ｎ Ｊ
Ｏ８８５４がら販売）を入れた３（ｌのカラム（０，２
ｘ１１１１）に５０戴、７分の速さで流した。カラムを
メタ７−ルと水の混合物（１：１）で５０７１β／分の
速□、覧ぐ溶出し、３１．のフラクションを集めた。 ｌ−（ａｃｉｌｕｓ ５ｕｂｔｉｌｉｓに対して活性を
有覆るフラツジ」ン１３〜２４を集め、減圧下で濃縮し
、凍結乾燥するとＡ４１０３０抗生物質複合体３５．７
９が得られた。 本発明によって生産される抗−１物質は本明細書（、−
おいては便宜的にＡ４１０３０抗生物質群と菖）。こ（
７）Ａ４１０３０複合体はＡ４１０３０因子へ、Ｂ、Ｃ
，ｒ）、Ｅ、ＦおよびＧと命名される個′Ｚの因子群を
含んでいる。以下の記載におい（、・ｆの有用性を説明
するにあたりｒＡ４１０３０抗′１物質−１′％なる用
語は、Ａ４１０３０複合体のみな・）ず、Ａ４１０３０
因子Ａ、Ｂ、Ｃ，ｒ）、Ｅ、Ｆ１メＪ、びＧからなる群
から選ばれるいずれかをも意味・ｌるものとηる。 発酵から７種もの抗り一物質因子群が回収され、これら
は混合物４１（ＪわらΔ４１０３（’）１９合体としで
得られる。、Ａ４１０３０１ａ合体中ノ囚７’ ＭＹ
０．１１１１合いは、発酵茶ｆ１に応じＣ変動りること
ｉ、ｌ Ｍ ”４ Ｇご理解されるＣ・あろう。個々の
因子１！Ｙ Ａ、［３，０、［）、Ｅ＝、（−１３よび
Ｇは、以下に述べるｆｊ沫て゛個々の化合物に分離づる
ことができる。Ａ ４１ ｏ：（０複合体は水、希酸水
溶液、希塩基水溶液、メタノールと水の混合物、■タノ
ールと水の０合物、ジメチルホルムアミド、ジメチルホ
ルムアミドと水の混合物、ジメチルスル小キシド、ジメ
チルスルホ１シトど水との混合物、アセト−トリル、／
’ １！トン、酢ＭＩチル、テトラヒト［］フラン、メ
Ｆレンクロリドなどの溶媒に可溶である３゜以トに、Ａ
４１０３０因子群の分離、これよ（・に確認されたぞれ
らの物理的性質およびスペ勺１−ル特性をポリ。 ｋｉｌｌ △７１１０３０因子Ａ（７）ｉｌｌｌｉｌｌ
￥施例２′Ｃ−得たＡ４１０３０複合（Ａ８（Ｊを、水
：アセト−トリル：塩化ナトリウム（８４：１６：７Ｑ
／ｊｌｉ）からなる溶１１２００πβに溶解して濾過し
た。この濾液を、米国特許第４２９９７６３号の実施例
６および７に記載されている特別の方法（−１本発明寵
らの研究所ｅ調製した１０〜２０ミ′）１］ンのしＰ１
／Ｃｗ＋逆相シリカゲル４１！、を充填したスＴンレス
スチール力ラム（８×１００Ｃ１ｌｌ）Ｃ５入れた。こ
のノコラムはＣｈｒｏｍａｔｏｓｐａｃ Ｐｒｅｐ −
１００１ニツト（Ｊｏｂｉｎ ’ｙ’ｖａｎ、１６−
１８Ｒｕｅ ｄｕ Ｃａｎａ１９１１６０ＬＯｎ（ｌｊ
ｕｌｌｅａｕ、Ｆ ｒａｎＣｅ ）の 部ぐある。カラ
ムを水ニアセトニトリル：塩化１トリウム（８４：１６
：２ ｇ／ｊ！ｌの混液Ｃ６０戴／分の速さぐ溶出し、
４８０７ｊｕ２のフラクションを集めた。溶出液はタイ
プ６光学単位を備えた１ｓｃＯｔデル（）Ａ −５ｔＪ
Ｖ Ｅ ニター（Ｉｎ−：＋Ｉｒｕｌｅｎｔａ目ｏｎ
５ｐｅｃｉａｌｔｉｅｓ Ｃｏ、、 Ｌ、１
ｎｃｏＩｎ。 ＮＦ６８５０５）を用いて、２５４ ｒｖでモニター１
、た。、集めたフラクションにつき分析用の高速液体り
［ｌマトグフノイ−（ＨＰＬＣ）（上記の方法Ｃ本発明
者らの研究室で調製した１０ミクロンの１１）−１／’
Ｃ記を充填した４、６Ｘ２５０ｍｍのステンレススｆ−
ル／Ｊラムを使用）を用い（囚ｆΔの存ず１を分析した
。試料はしＡタインしＪ゛ルア１２０インジ１／／シー
ｌンバルフ（Ｒｔ＋ｅｏｄｙｎｅ ｌ ｎｃ、。 Ｂｅｒｋｅｌｅｙ、 ｃ△９４７１ （’） ）を用い
で２１人した。１水ニアセトニトリル：酢酸ナトリウム
（８１：１９ ： Ｏ，０３Ｍ）からなり、′１ＫＦｆ
Ｉ酸（’１．１ｌＩｒ口調節した溶媒をミル！ヘン・ロ
イ・ジ−ｌプレックス・ミニポンプ（ｌ ａｂｏｒａｔ
ｏｒｙ Ｄａｔａ Ｃｏｎｔｒｏｌ、 Ｄ １ｖｉｓｉ
ｏｎ ｏｆ Ｍｉ目ｏｎ Ｒｏｙ Ｃｏ、、 Ｒｉｖ
ｅｒａ Ｂｅａｃｈ。 Ｆ Ｌ ３３４０４ ）を用い−（１戴／分（１２００
ｐＳｉ）′Ｃ″流した。因子Δはｌ Ｓ Ｃ（’） ｔ
、−ル」ｊΔ５ Ｕ Ｖ検出器を用いて２５４ ｒｖ
で検出しＩＪ０ノ゛ツクシー」ン１〜５１は捨てた。因
子Δに冨んだフラクション５２へ・７９を集め、減圧下
で濃縮し容量を５００ ｆｆ１Ｌどした。この濃縮液を
水酸化Ｊトリウム水溶液でｐ）１８．２に調節し濾過し
た。この縞液を予め水で平衡化した１００戴のダイアイ
４ンＨＰ −２０樹脂を入れｌＪツノラム（２，８Ｘ２
２ＣＩｌ１１に１５１１β１．７分の速痘で充填した。 塩化銀沈澱法により塩素が洗液中に検出されなくなるま
Ｃカフ１１を水（蟻酸でｐＨ２，５に調節したもの、４
００．ｔｇ）で洗浄した。次いで水ニアセトニトリル（
８：２）の混液で、１５戴／分の速さで溶出し、１にの
フラクションを集めた。このフラクションのＦ３ａｃｉ
ｌｌｕｓ ５ＬｌｂｔｉｌｉＳに対する活性を分析した
。フラクション２を冷凍することにより生成した結晶性
因子Ａを濾取した（３８９．６ｍｏ）。フラクション１
およびフラクシ」ン２からの濾液を夫々減ｆＩＴ−で濃
縮し、凍結乾燥すると夫々因子Ａが７３１．８＋ｅｏお
よび５１４醜ｇ得られた。 抗生物質Ａ４１０３０因子Ａは白色の結晶性固体である
。Ａ４１０３０因子Ａのおおよその元素分析値は以下の
通りである：炭素５６．４４％、水素３．５８％、窒素
８．１１％、酸素２３．２０％、塩素８．２９％。ツイ
ールドブソープションおよｑプラズマデソープション質
饅分析の結果、Ａ４１０３０因子への分子量は１２３１
であった。 Ｉｊ本分析および分子−に基づいて因子Ａの実験式はＣ
＃＃ Ｈ，（ＣＩ ３ Ｎ ？ Ｏｓと決定された。６
６％ジメチルホルムアミド水ｍＨ中で因子Ａを電気滴定
した結果、１）Ｋａ値が約５．５３．７．６０および１
０．３７である３個の滴定可能基の存在が確認された（
さらに１ｏ、５以十のｐＫａ鎗のものが存在する可能性
あり、初期ｐＨ７，８３＞。 抗生物質Ａ４１０３０因子Ａのｉｔ旋光度は以下の通り
である：（α） 、−１９，６° （Ｃ＝９゜Ｏ１ジ
メチルスルホキシド中）。Ａ４１０３０因子ＡのＫＢｒ
法による赤外吸収スペクトルを第１図に示す。以下に示
す顕著な吸収極大が観察された：３４４８−３２２６
（強、ブロード）、１６５３（強）、１６１０（弱）、
１５８７（中）、１５１５（強）、１４８８（弱）、１
４２９（中）、１２２７（強）、１１３９（中）、１０
６４（強）、および１０１０（強）ｃ［１゜酸性、中性
、および塩基性条件下におけるメタノールと水（１：１
）の混合物中でのＡ４１０３０因子群Ａ−Ｇの紫外線吸
収スペクトルを表５に挙げる。 表５ Ａ４１０３０因子群のＵＶスペクトル 抗生物質Ａ４１０３０囚子Ａは、アルコ１−ルと水の混
液、ジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミド、ジ
メチルスルホキシドど水の混液、ジメチルホルムアミド
と水の混液、希酸水溶液および希塩基本溶液に可溶であ
る。 以下の物理化学的データに基づ＜Ａ４１ （１３０因子
Ａの構造式は以下に示す通りである。 尚、バイオアッセイおよび＾速流体り［］マドグラフィ
ー分析の結末、因子Ａがカルチャー△４１０３０．４に
よって生産される抗生物質因子群の約９４〜約９６ｍ
ｌ ％ ヲ占メ、囚−７８，Ｃ，Ｉ”）、Ｅ、Ｆおよび
Ｇが残りの約４〜約６φ量％を占めでいることがわかっ
た。 因子Ａ ＯＨ 支ｆＬｆＬ上 Ａ４１０３０因子Ｂの１１１１Ａ４０１
３０櫓合体１．０ｇを、水ニアしトートリル：塩化フト
リウム（８５：１５：２ ｇ／６）からなる溶媒３５
戴に溶解し、この溶液を、２５〜４０ミク【１ンのｌ
ｉ Ｃｈｒｏｐｒｅｐ ＲＰ −１８（シリカゲルに化
学的に結合させた炭化水素相（Ｃ，、）、 Ｍ Ｃ／
Ｂ Ｍ ａｎｕｆａｃｔｕｒｉｒ＋ｇＣｈｅｍｉｓｔ
ｓ、 Ｉ ｎｃ、。 Ｃ１ｎｃｉｎｎａｔｉ、０１」）を本発明省らの研究室
で光頃じた４、７ｘ４５ｃｍのＭ １ｃｈｅｌ −Ｍ
１ｌｌｅｒ＾速但圧液体クロマトグラフィー（トＩ Ｐ
Ｌ Ｐ Ｌ、 Ｃ）ガノスカラム（Ａｃｅ Ｑｌａ
ｓｓ、 Ｉｎｃ、、Ｖｉｎｅｌａｎｄ、Ｎ、）０８３
６０）に注入した。試料を溶解するのに使用したのと同
じ溶媒系を使って、１−Ｍ１バルブレスビス［ヘンポン
プ（Ｆ １ｕｉｄ Ｍｅｔｅｒｉｎｇ 口１ｃ、。 ０ｙｓｔｅｒ Ｂａｙ 、ＮＹ １１７７１ ）により
、２１藪／分（１００ｐｓｉ）の速度で溶出し、２１戚
のフラクションを集めた。溶出液はｌ５ＣＯＥデル（ｊ
Ａ −５ｔＪ Ｖ検出器を用い、２８０ｎｍでセニター
した。ツノクシ」ン１〜１８３は捨Ｃた。囚０３に富ん
だツノクシ」り１８４〜２４５を合せ、減汁１・（”
２ Ｆ＋ ｉＲまで濃縮した。同様の精製を７回行な、
（Ｉｌｌた濃縮物を合せ、水で１．４乏に希釈し、ｐめ
水Ｃ平衡化したダイアイオントＪＰ−２０樹脂ＩＣ）０
戴を入れたカラムに、８〜１０戴／分の速１な（入れた
。塩化銀沈澱法により洗液中に塩素が検出されなくなる
まで水（６００ｙｉｒｉ ）でカラムを洗浄した。水と
メタノール（１：１）の混液で、８・〜１０７１ｆｆｉ
／分の速度で溶出し、３００πβのフラクションを集め
、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ５ｕｂｔｉｌｉｓに対する活１１
を分析した。フラクション１〜５を合せＣ減［ｆトＣ濃
縮し、凍結乾燥すると粗因子Ｂ５２３ＩＩ１ｇがｉｌら
れた。 ２回の操作ぐ冑た粗因子８５５０ｍｇを水ニアセトニト
リルニジ１チルアミン＜７５：２５：０゜０３Ｍ、リン
Ｍ′ｃ ｐ８７．８にａｍしたも（７）） かＣ）なる
溶媒１０戴に、溶液になるまでテトラブチル水酸化アン
モニウムを加えることにより溶解しＩ−ｏこの溶液を２
５〜４０ミクロンのＬｉＣｈｒＯ−１１’（：Ｄ Ｒ
Ｐ −１８（前記参照）を充填した２、８＝： ５９
ｃ−のＭ １ｃｈｅｌ −Ｍ １ｌｌｅｒ高速低圧液体
クロントゲフッｒ −（ＩＩＰＩ Ｐｌ、 Ｃ）ハフス
ｈ−ツムに：ｉ−１人した。ｌＮ１１ポンｌを使−）【
、試料の溶解に用イタものと同し溶媒系（５ｙｉｒｉｔ
／’５＞ ＜３５）ｐｓｉ ）の速度で溶出した。溶出
液はｌ Ｓ Ｃ（Ｉ Ｌ−ｌルｔＪ Ａ−５１Ｊ Ｖ検
出器を用い２５４ｎｌＣｔニターした。 集めた２ ７ ｙｚｉｌのツノクシ：］ンについて、１
０ミクロ＞ａ）１ｉ Ｃｈｒｏｐｒｅｐ ＲＰ−１８（
市販の逆相シリカゲル、Ｆ、 、 Ｍ ｅｒｃｋ （Ｏ
ａｒ＋ｎ５ｔａｄｔ、 Ｇｅｒｍａｎｙ ）社製）を充
填した４、６ｘ２５０ｍｌｌｌのスｊンレススチール力
ラムを用いた分析用１１１ｒＥで、因子Ｂの存在を分析
した。試料はレオダイン［ｆルア１２０インシエクシ」
ンバルブを使って２１人した１、水：アレ１〜ニトリル
；ジブチルアミン（８２：１８ ： ０．０３Ｍ）から
４１つ、リンＩり ’−（” ａｌｌ ２ 、５に請願
した溶媒を］ンスタメト・リンク■ポンプ（Ｉ Ｄ Ｃ
−１ａｂｏｒａｒｏｒｙ ｐａ［ａ ｃｏｎｔｒｏｌ、
Ｄ １ｖｉｓｉｏ＋＋ ｏｆ １ｙｌｉｌｔｏｎ
Ｒｏｙ Ｃｏ、、 ＲｉｖｉｅｒａＢｅａｃｂ、
Ｉ−１３３４０４＞を用い（１濾 分（７５０ｐｓｉ）
で゛注入した。因子Ｂは、１．、 Ｄ Ｃスペクトロヒ
ニター■司変波艮ＩＪ Ｖ検出器を用いＣ２２！＋ｎｌ
′Ｃ″検出しｌＪｌ、ＲＰ’−８カラムから溶出した、
因子Ｂに富んだ９９９戴〜１２９６πβのフラクシＩン
を２００厄になるまで濃縮した。この濃縮物’＝ ｋ、
ｌ ００戴まで希釈し、リン酸でｐＨ２，０に調１ｌｉ
） Ｌ、、イＡンン一カーとして塩化ノトリウム（１１
１＋１Ｊ・戴）を加えた。この溶液を、Ｆめ水で平衡化
したダイアイオンＨＰ−２０樹脂１００πβを入れにカ
ラム（２，８Ｘ２２ｃｍ）に、２０戴／分の割合（−充
填した。カラムを、塩化銀沈澱払により塩素が検出され
なくなるまで、蟻酸でｐｔ−ｔ２．５に調節した水（５
００ｙｍ ）で洗浄した。次いで水とｔ′シト二１〜リ
ル（６：４）１℃で、３０戴／分の速度ｅ溶出した。溶
出液を減圧下て・濃縮し、凍結乾燥づると粗大ｆＢ２９
５．６１０（ｌが得られた。 ＦＣ得た因子Ｂ２８５１１１１をジメチルホルムアミ１
ど水＜４：６）の混液３０７１βに加熱溶解し、室ｉ１
．．ｊ 、ｌぐ冷却し、次いで冷凍ケると因子［３の沈
澱が１成した。この沈澱を濾取し、アセトンで洗浄し減
１！下Ｃ・乾燥するど因子８８４１１（＋が得られた。 抗生物質Ａ４１０３０因子Ｂは白色の固体であり、以ト
のおＣ（５」、その元累分析艙を有する；炭素５８．５
４％、水素４．２１％、窒素８．６３％、塩素５．＜３
６％、酸素２２．６６％（斧から）。 因子Ｂを６６％ジメチル小ルムアミド水溶液中Ｃ゛電気
滴定した結果、約５．６および７，５のｐＫａ［ｉを杓
づる２個の滴定可能基の（ｆ合が確認された（さらに１
０以」のｐＫａＶｉを有するもσ）の０７１する司能竹
がある、初期ＤＨ６，２２）。 高速原子−１撃マススペクトルによる分子１よ約１１９
７ｅあ一〕だ。元素分析および分子＆Ａに基５く因子１
３の実験式はＣ１２ｆ」ｇｚｃ ｌ ２ Ｎ ｚ Ｃ）
ａである。 ＫＨｒ法による抗生物質Ａ４１０３０因子Ｈの赤外吸収
スペクトルを第２図に承り。以トの顕髭な吸収極太が観
察された： ３４４ Ｂ〜３２２６〈強、ブＬ】−ド）
、１６５３（強）、１６１０（中）、１５８７（弱＞、
１５１５（強）、１４８８（弱）、１４２９（中）、１
２９０（弱）、１２２７（強）、１１３９（中）、１０
６４ （強）、および１０１０（強） ｃｒｌ 。 中性、酸ｔ１１および塩基性のメ゛タノールと水の混液
（１：１＞中のＡ４１０３０因子Ｂの紫外線吸１１シ極
人を表５に承り。 抗生物質Ａ４１０３０因子Ｂの溶＠性は因子△と同じで
ある。 観察された物理化学的データに基づ＜Ａ４１０３０因子
Ｂの橘造式は以下の通りである：因子Ｂ Ｈ 天」ｉ」（ｂ−Ａ ４１０３０囚子Ｃの中間Ａ４１０３
．０複合体９．Ｏｇを水ニアセトニトリル：塩化ｔ１ヘ
リウム（８３：１７：２ｏ／λ）からなる溶１２００戴
に溶解し、この溶液を濾過した。濾液を、実施例３に記
載した方法で本発明名らの研究所Ｃ・調製した１０〜２
０ミクロンのＬＰ−１・Ｃ６逆相シリカゲル４℃を充填
した８×１００ＣＩのステンレススチールカラムに充填
した。 ＣＩｌ＋”０１ａｌＯ３ｐａｃ Ｐ ｒ１３Ｄ −１０
０ユニツトの一部Ｃイｈるこのカラｌいを、試料の溶解
に使用したのと同じ溶媒系で、６０１β／分の速度で溶
出し、４８０ｔｅｌのフラクションを集めた。溶出液は
ｒｓｃｏモＩルｔＪ Ａ −５ｔＪ Ｖ検出ＦＡ’Ｆｒ
用イＴ ２５４ ｎｍｒ 七二ン一シた。染めたフラク
ションにつき、２５〜４（’） ミ’７ ｊｌ ”、ｉ
のｌ ｉ Ｃｈｒｏｐｒｅｐ ＲＰ−８を充填した（１
．８Ｘ３０ｃｍのＭ ｉｃｈｅｉＭ １ｌｌｅｒガラス
カノムを用いた分析用ＨＰ Ｌ Ｐ Ｌ Ｃで因子Ｃの
存在今分析した。Ｆ’ＭＩポンプを使って水：アヒトニ
ｉ・リル：塩化ブトリウム（８４：１６：２０／乏）Ｊ
）溶媒を４鱈７．′分で流した。因子Ｃはｌ５ＣＯモデ
ル（）Ａ −５）ＬＩ Ｖ検出器を用いて２ ”、）４
ｎ＋ｉ ＜゛検出した。ノウクシ−１ン１〜２７は捨
てＩこ。囚−ｆ Ｃに冨むフーンクシ］ン２８−、５２
を東め、減Ｉｔ ｈ （’ り０ ０ ７７β 【こ
′ａ 編 し ｌこ 。 同様の精製を２回（１なって冑ｌご濃縮液を合口（−過
し、予め水Ｃ平衡化した１００杼のダイアイＡン目Ｐ
−２０（耐１１１１を入れたカラムに１０虐λ ５）の
速度で光填した。塩化銀沈Ｊ１２法により塩素か洗液中
に検出されイ１くなるまで・ノｊフムを水（２Ｉ２）で
洗浄１７だ。次いＣ水とアセトニトリルの混液１乏で−
、１５πβ，′分の速度で゛溶出を（−ｉ １．；″）
だ。溶出液を減圧下でａＩＩｉｌｉシ、凍結乾燥づると
囚γ０に富んた混合物２．７！′）０が得られた。この
混合物１．２５Ｑを水；アセトニ１〜リル：ジノｆルｌ
ノミン＜８０： ２０ ： （１．０３Ｍ、リン酸（ｐ
ｔ１７．８に調節したもの）からなる溶媒？（、 、、
ｚに、溶液にイするまＣ・テトノブ天ル水酸化アンし一
１′ツムを加えることにより溶解した。試１１を、２！
′）〜４０ミク［１ンのｌ ｉ Ｃ ｈｒｏｐｒｅｐ
Ｒ Ｐ − ８を光填した２、８×５９ＣＩＩｌのＭ
ｉｃｈｅｌ−Ｍｉ ｌ ｌｅｒカウスカノカラ１１人し
、ＦＭＩポンプを用い、試料の溶解（４−使用しｔこも
のと同じ溶媒で、４戴／分の速度ｅ溶出した。溶出液は
ＩＳＣＯモｆルｊＪ Ａ＝ ５ ｔＪ Ｖ検出器を用い
て２５４ｎ■でモニターした。集めた２ ８ｙｚ１２の
７ラクシコンにつき、１０ミクロンのＮｕｃｌｅｏｓｉ
ｌ Ｃｍ （市販の逆相シリカゲル、Ｒ ａｉｎｉｎ
Ｉ ｎｓｔｒｕｉｅｎｔ Ｃ Ｏ 、、 Ｉ ｎｃ，
、Ｗｏｂｕｒｎ，Ｍ Ａ０１８０１）を本発呻；者ら
の研究室において充填した４．６Ｘ１５０−一のステン
レススチー１しカラムを用いた分析用ＨＰＩＣにより、
因子Ｃの存（［を追跡した。試料はレオダインｔデル７
１２０インジＪクシ］ンバルブを用いて注入した。ミル
トン・ロイ・ジＬ’ｆレックス・ミニポンプを用いで、
永ニアセトニトリル：酢酸ナトリウム（８１！：１Ｑ
： ２ （１／１２ ）からなり氷酢酸で０１６に調節
しｌ、溶媒を１鱈／′分で供給した。因子ＣをＩｓｃＯ
ｔｆル１８００可変波艮ＬＪ Ｖ検出器を用いて２２艷
） ｎｍぐ検出した。囚ＰＣに冨んだ４，２℃〜５。 １２の溶出液を減圧下で５００戴に濃縮した。 同様の精製を３回行なって得た濃縮物を合１ＩＣ溶解し
、リン酸を＋ｎ＋えて ＩＩＬＩ １ 、 ７ ＋−
Ｔ Ｌ，た。塩化ノトリウム（ １ ｍ（１・戯）をイ
４ンンーｈ−とＬ （加えｌ，：。この試料を、ｊ；め
水で中衛化しＩ、、 ｌ ００戴ダイ／イＡン１１−２
０８１脂を入れたカラム（２．８Ｘ２２ｃｏ＋）に２
０；Ｗβ，・分の割合（光填した。カラムを、塩化銀検
出法によ【〕洗液中に塩素が検出され％ くなるま（・
、ｐ目２．５）の′８Ｍ水溶液（ ３ ０ ０ １β）
で洗浄した。次いで水と〆し１・−ｌ〜リル（（′１：
４）の混液１乏で、３０戚 分の逓反Ｃ溶出した。溶出
液を集め、減１１Ｆで濃縮し凍結乾燥づるど、ある稈度
粘製されＩＪ囚因子、０。 ８７りが１【Ｉられた。この生成物を水；アレ］・−Ｉ
・リル：シｆチルアミン＜８０ ：２０ ： ０．０３
Ｍ、リン酸で １１ ７ 、 ８にｗ４節したもの）か
ら＜（る溶媒２０〃βに、溶液となるよぐテトラ／チル
水酸化７ン七ニウ１１庖加えることによし〕溶解した。 この試料を、前ｇｅ． （’） ２ ５ 〜４ ０ ミ
ツ１−１ンのｌ− ｉ Ｃ， ｆｉｒ。 ｐｒｅｐ Ｒ ｆ）−８を光填した２．８Ｘ５９ｃｍ
のＭ ｉｃｈｅｌ Ｍ ｉｌｌｅｒガラスカラムに入れ
てり＋＋ｚｉーグラノイーしＩζ。２．４５乏から３．
２０乏の浴出液を減圧下で濃縮して５００πβとした。 同様の精製を２回行なって得た濃縮物を合せ、既述した
ようにダイアイオンＨＰ −２０樹脂を含イ１するｈ５
ムで脱塩した。溶出液を減圧下で濃縮して凍結乾燥する
と因子０６８８Ｉ（］が得られた。 この生成物６７８１１（＋を水とアセトニトリル（６：
４）の混？８ｉ６０１１βに加熱溶解した。この溶液を
冷ＩＪ１シ、冷凍すると因子Ｃが沈澱した１、この沈澱
物庖繍取し、アセトンで洗浄し減圧ド（・乾燥すると因
子Ｃ４２Ｂ＋ａｇが得られた。 抗生物質Ａ４１０３０因子Ｃは白色固体であつ（、以上
のおおよその元素分析値を右ＩＪる：炭素／１８．８７
％、水素４．３９％、窒素６．１６％、１）１１桑６．
９６％、酸素３３．８１％。６６％のジヌＪルホルムア
ミド水溶液中で因子Ｃを電気滴定（、た結巣、約５．５
および７．１のｐＫａ（ｉを持、 ｌ： ２個の滴定可
能基の存在づ゛ることが解った（さらにｐＫａ値が１０
以上のものが存在する司ｆｉｔ：竹がある、初期ｐ）１
６．．６）。高速原子衝撃ンススベクトルによる観察さ
れた分子慟は約１３９３ぐあ・）だ。九Ａづ）４１ｉお
よび分子艶に基づく因子Ｃの実験式はＣよや［１□Ｃｌ
３ Ｎ ｙ ＯＺ！である。 Ｋ Ｒｒ法により測疋した抗生物質Ａ ４１０３０因子
Ｃの赤外吸収スペクトルを第３図に承り。以下の顕著な
吸収極大が１！整された：３／Ｉ４８〜３２２６（強、
ブ［１−ド）、１６５３（強）、１６１０（中）、１Ｆ
ｉ８７ （弱）、１５０４ （強）、１４８１（弱）、
１／１２９（中）、１２２ｏ（強）、１’１３６（強）
、１０６４（弱）、１ｏ５３（中）、および１０（”）
５（強）ｃｍｌ。 中ｆ１、酸性および塩基性のメタノールと水の混１（１
：１）中Ｃ′ｆｆｉす定した紫外線吸収極大を表１）に
示す。 抗１物賀へ４１（’）３０囚子ＣｔＪ、因子Ａ トｆ？
Ｉ Ｉ；溶媒に可溶である。 観察された物理化学的データーに基づくＡ４１０３０因
子Ｃの構造を［ス下に示す： 因子Ｃ Ｈ メこＬ例り石− △’ｌ １０３０囚了（）の甲−Ａ４
１０３（’）複合体６．０（］を水：ノ’Ｉ２＋−！・
リル：塩化ノ］〜リウム（８３：１７：２Ｌ乏）からな
る溶媒２００ ＋Ｊβに溶解し、得られｌご溶液を１過
した。この濾液を、実施例３に記載したＩ】法により本
発明者らの研究室で調製し／、： １０・〜２０ミリミ
ク［］ンのＩＰ−１／Ｃ，逆相シリカゲル４℃を充填し
た８ ｘ １００ Ｃ−のスｊンレススｆ−ルｈラムに
入れＩコ。ＣｈｒＯＩａｔＯ３Ｉ）ａＣＰｒｅｐ −１
１つ０−１−ツトの部品ぐあるこのカラムを、試料の調
製に使用し、ｋものと同じ溶媒ｒ、６０ｗｅ 、７分の
速醜で溶出し、４８０戴のフラクシ−」ンを集めた。溶
出液はｌ５ＣＯモデルＩＪ Ａ −５１Ｊ Ｖ検出器を
用い（−２５４＋１ｍ’Ｃｔ ニターした。ｉ メタ−
７）’／ シ３ ンにつき、２５−４０ミクロンのｌ
ｉ ＣｈｒＯｐｒｅｌｌ Ｒト）−８を充填した０、８
ｘ３０ｃｍのＭｉｃｈｃ１Ｍｉｌｌｅｒガ）スノｊ−）
ムを用いた分析用１１ Ｆ）ｌ ト月−Ｃにまり因子［
）の存在を分析した。［〜１１ポンｌを用いて水二）’
ｔ？ｌ−ニトリル：ＩＭ化すトリウム（８４：１６：２
リ／！！、）からなる溶媒を４ノｉｉ：）の速度で供
給した。因子りはｌ５ＣＯモデルＬＪへ一５ＵＶ検出器
を用いて２５４ ｎｌｌで検出した。 フラウン」ン１〜３４は捨てた。因子りに富んだノラク
ション３５〜５３を集め、減圧下で約５００、ｖＩ２に
なるまで濃縮しｔこ。 同様の精製を２回行なって得た濃縮物を集め、水ぐ３ｉ
！、に希釈し、予め水で平衡化した１００πβのダイア
イオント（Ｐ−２０樹脂をカラム（２，８：＜２２ＣＩ
）に充填したものに、８〜１０戴／分のｉ！度で入れた
。このカラムを、塩化銀沈澱法によ番）塩素が洗液中に
検出されなくなるまで水（３００妊）で洗浄した。次い
で水とアセ１ヘニトリル＜ ６ ： ４ ）の混液から
なる溶媒１乏で、８〜１０２、′カの速度（−溶出した
。溶出液を減圧下で濃縮（２、凍結乾燥すると因子りに
冨んだ因子群混合物！、３３（ｌが得られた。 この混合物１．１５ｇを水ニアヒトニトリル：２； ７Ｆルアミン（８０： ２０ ： Ｏ，（’）３Ｍ、リ
ン＋ｉ０ （−ｐＨ７、８に調節したもの）からなる溶
媒２”）Ｉだに、溶液となるまでテトラブチル水酸化ア
ンし−ラムを加えることに」、り溶解した。この試寧４
を、２５−、４０ミク［１ンのｌ−ｉ ＣｈｒｏＢｅｐ
ＲＰ８を充填した２ 、 ８ Ｘ ５９ ｃ＋ａｆ７
）Ｍ ｉｃｈｅｌ−Ｍ １ｌｌｅｒカラス７Ｊツムに充
填し、試料を溶解するの（ご用（、ＸＩＪものと同じ溶
媒で、ＩＩＭＩポン１を使−） ’Ｃ５Ｈλ／分の速度
で溶出した。溶出液をｌ ３ （’、 ０ シデルｊｌ
Ａ−５Ｕ Ｖ検出器を用いて２５４ ＋１１−ｔ？
ｔニターした。集めた２５顧のフラウン」ンにつ３．１
０ミ／７１１７）ｌ ｉ にｈｒｏｐｒｅｐ ＲＰ−１
８（市販の逆相シ１．）カゲル、［、Ｍ ｆ４ｒＣｋ
（Ｄ ａｒｍｓＩａｄｔ、 Ｇ ｅｒｍａｎｙ） ）を
充填し／；：４ 、６Ｘ ２５．＋ｕ＋のステンレスス
Ｌ−ルカラムを用いた分析用ｔ＋ ｐ ｌ−ｃ ｔ、二
上り因子［）の存在を分析した。試１はしＡダイン［デ
ル７″１２０インシＩクションバルブを使−〕Ｃｉ１人
した。水；アレト二１−リル：ジブチル７ミンｌＯ：２
０：０．０．’１Ｍ）からなり、リン酸で １１１１２
゜５】に調節しｔ、：溶媒をミルｌ〜ン・［１１′・シ
Ｌブレ゛ノクス・ミニポンプを用いＵ ０ 、７５，７
１７′分の速ＩＧで供給した。因子りはｌ５ＣＯモ丁゛
ル１８００可変波長Ｕ Ｖ検出器を用い（２２５ｎｍで
検出した、。 ）、６２から３．４にの、因子りに冨んだ溶出液′＝減
圧十て３００πβまで濃縮した。 同様の精製を３回行なって得た濃縮物を集め、；ｊン酸
を加えて溶解し、ｐｔ−１７，７とした。塩化Ｊトリウ
ム（１１（＋／πβ）をイオンマーカーとして１）ＩＩ
えた。この試料を予め水で平衡化した１００戯のダイア
イオンＩ Ｐ −２０樹脂をカラム（２，８Ｘ ２２
Ｃ１１）に充填したものに２０戚／分の割合い（・充填
した。このカラムを蟻酸水溶液でｐＨ２゜５に調節した
水３００紙で、塩化銀沈澱法により４λ液中に塩素が検
出されなくなるまで洗浄した。 次いて水およびアセトニトリル（６：４）の混液１２を
用いて、３０戴／分の速度で溶出した。溶出液を減圧下
で・濃縮し凍結乾燥するとかなり精製された因子Ｄ０．
６３（ｌが得られた。この生成物４、水ニアセトニトリ
ル：ジブチルアミン（８０：、・（３：０．０３Ｍ、リ
ン酸でｐＨ７，８に調節しＩｂの）からなる溶媒１５戴
に、溶液になるよでｌトラブチル水酸化アンモニウムを
加えることに１、←）溶解した。この溶液を、既述した
ように、２゜８ Ｘ ！−） ９ ｃ：ｍのＭ ｉｃｈ
ｅｉＭ ｉ ｌ ｌｃｒ力゛ラスカラム中の２ ！：）
−ＩＩ Ｏミツ１１ンのｌ−ｉ ０ｈｒｏｐｒｅｐ Ｒ
Ｐ −Ｅ″ｌζ゛りＬ１ン］−グシノイーした。２．５
２〜３．ｏｅの溶出波を減Ｊｔ ’Ｉ−Ｃ約２００ ｎ
ｉま（’１縮しＩ、。このｒＩＡ輸液を既述したように
、ダイアイオン）ＩＰ ２０樹脂をａ４１するカラムＣ
脱塩した８、溶出液を減圧Ｆ −（＝ ｍ縮し、凍結乾
燥ケろとか／（０精製されＩご因子Ｄ １９３ ｒｎ（
ＪｈＸｍらねＩＪ。 同様の操作を（コなって得た粗大子Ｄ２ｈ９ｕを。 水：Ｉし１〜二１−リル： ２ＬｉＭ竹リン酸フトリウ
ム（８２： １８：Ｇ、０３Ｍ、リン酸て゛ ＋＋ｌ！
７．８に調節したもの）から＜Ｃる溶１６．ｈβに溶解
し、５ＮＮａＯｌ−１水溶液を加えてｐＨ１（’）に調
節しＩＪ。 この溶油４．２５〜４０のｌ、 ｉ Ｃｈｒｏｐｒｅｐ
ＲＰ８を充填した２、８Ｘ５９ｃｇｌのｆｖｌ １ｃ
ｈｅｌ−ｆｖｌ １ｌｌｃｒカラスカラムに入れ、Ｆ−
１ｖＩ Ｉポンプを用いて、試料を溶解づるのに用いた
ものと同じ溶媒で、４戚／分の速度で溶出した。溶出液
はｌ５Ｏ（’）七１−ルＵ Ａ −５Ｕ Ｖ検出器を用
いて２５４ ｎ１Ｉｌで七−ターしＩＪｏ集めた２７妊
のノラクシ］ンを、１０ミタ１１ンのＮｕｃｌｅｏｓｉ
ｌ Ｃｍを充填した４、６Ｘ１５ｉ １１１１のステ
ンレススチールカラムを用いた分析用ＩＩ Ｐ Ｌ、
Ｃにより、因子りの存在を分析した。試料はレオゲイン
モデル７１２０インジエクシヨンバルブを使っＵ ｉ１
人した。ブレパラ−Ｔイブ溶出液に１東用したのと同じ
溶媒を、ミルｌ〜ン・ロイ・シュｌ゛レックス・ミニポ
ンプを用いて０．６ｆｆｆｆｉ／分ｅ供給した。因子り
は、ｌ５ＣＯモデル１８００可斐波長ＵＶ検出器により
２２５ｎｌｌで検出した。４０５〜１１３４ｍの溶出液
を減圧下で５００厭ま（゛濃縮し、既述したように、ダ
イアイオン）−ＩＰ−；ｒｏｓＩ脂を含有するカラムぐ
脱塩した。溶出液を、１１ｆｌｆｆ下で濃縮し凍結乾燥
すると因子Ｄ１２０１１１（ｌが１９られた。 抗生物質Ａ４１０３０因子りは白色の無晶形固ｉ４．
（’あり、おおよその元素分析値は以上の通りでしする
：炭素５４．４６％、水素４．３５％、窒素７．５８％
、塩素４．２７％、ＩＮ素２９．３４％（差から）。６
６％ジメチル小ルノォアミド水溶液中Ｃ因子［）を電気
滴定した結果、約５．５および７．６のｐＫａｔｆｆｉ
を（１！ｌる２−）の滴定１ｑ能ｕ カ／／イｆケるこ
とが解った（さらに１０以（のいＫ １１偵を右りるも
のが存在づる可能性がある、初期ｐ［＋６．８３）、高
速原子衝撃ンススベクトルに１、る分子量は約１３２６
であった。 Ｋ ［１ｒ法により測定した抗生物質Δ／ｌ ’１０３
０因ｆＯのみ外吸収スペクトルを第４図にホす。以上の
顕茗な吸収輸入が観察された：３４４ε３・・３２２６
（強、Ｉロード）、２９５９（弱）、１６６１（強）、
１５９２（強）、１５１１（強）、１４２９（弱）、１
２９０（弱）、１２２７（弱）、１２１２（中）、１１
６３（弱）、１１４３（弱）、１（’）５３（中）、お
よび１０１０（強）ＣＩｌｌ＋。 中性、酸性および＠基竹のメタノール：水（１：１）混
液中で測定した紫外線吸収極人碩を表５１に承り。 抗でＬ物質Ａ４１０３０囚子りは囚ｆΔと同じ溶媒に可
溶（゛ある。 観察された物理化学的ｆ−タにＩＪづ＜ Ａ ／Ｉ １
（１；０囚了りの構造を以下に示づ： ｎ目 １１またはイれ以上のｎ−ブチル基 支加り作Ｖフー △／Ｉ ’Ｉ ０３０因子Ｆ−の甲岨
Ａ ４１０３０〜合体０，３ｇを水：〕′シ］・ニトリ
ル：塩化ノｌ〜リウム（８５： １５ ： ２ （１，
’２〉からなる溶媒３０緘に溶解し、２５）〜４０ミク
［」ンのｉ ｉ Ｃｈｒｏｐｒｃｔｌ ＲＰ −８を本
発明名らの夙先至で充填した２、８ｘ５９ｃｍのＭ １
ｃｈｅｌｆｖｌ １ｌｌｅｒカラスカラムに充填した。 ＦＭｌポン／゛を用い（、試Ｆ１を溶解づるのに用いた
ものと回し溶媒系で、１２戴／分（８ｈ＋ｌ５ｉ）ｃ溶
出し、２４ ｙｘｉ（の７ノクシ」ンを集めた。溶出液
はＩ Ｓ ＣＯモｆルＵΔ−５ＵＶ検出器を用い、２５
４ ｎ１ｌｌで［ニターした。 ノックジョン１〜５４は捨てた。因子ｎ（二冨んＩごフ
ラツジ」ン５ Ｆｉ〜１２２を合口、減ｎトて・５０鱈
ま−Ｃ濃縮した。同様の精製を１３回４ｊなってｉ！Ｉ
だ濃縮液を水−（・希釈して１．５２とし、１；め水Ｃ
平衡化したノックｌｚ （２，８ｘ２２ｃ１１１）中の
１００鱈のダイアイオンＨＰ−２０樹脂に５ｒｉｉ・分
の速曳ぐ入れＩこ。塩化銀沈澱法によ１）洗液中に層系
が検出されなくなるまく一水９０′０戚て”）Ｊ’＞ム
を洗浄した。次いて水とメタノール（１：１）の混液（
゛、（０鱈／′分の速度で溶出し、３００戚のワラクシ
１ンを集めた。フラクションはＢ ａｃｉ ｌ ｌｕｓ
５ｕｂ−１１ｉｓに対ツる活性について分析した。フ
ラクシ」ン１〜８を集め、減圧下で濃縮し、凍結乾燥４
ると因子［に富んだ図１群混合物１．Ｃ）ＩＶＪが得ら
れた。この混合物０．５ａを、水ニアセトニ］−リル：
ＦＡ化ｔトリウム（８４：１４ ： ２ ｇ／Ｉ！、
）からなル１（１！１ＯＮＩ！ニ溶解シ、２５ ”−４
０ミ’ｙ ｔｌンのり、 ｉ Ｃｈｒｏｐｒｅｐ ＲＰ
−８を充填した２、８×ｈ９ｃｍのＭ ｉｃｈｅｌ−
Ｍｉｌｌｅｒガラスカラムに充填しｋＯＦ’ＭＩポンプ
を用いて、試料を溶解するのに使用したものと同じ溶媒
で、５戴／分の速度ぐ溶出を行な−い、２５鱈のフラク
ションを集めた。溶出液ハ、ｌ５ＣＯｔデルＵＡ−５１
ＪＶ検出器を用いて２５４＋＋ｍ″ｃｆニターした。集
めたフラクションに゛つき、５ミクロンのＯＤ Ｓ −
ｔｌ Ｖｌ）ｅｒｓｐｂｅｒｅｓ（Ｓ ｈａｎｄｏｎ
５ｏｕｔｈｅｒｎ Ｐｒ’ｏｄｃｔｓ、 Ｌ
ｔｄ、、Ｃｈｅ−！ＩＩＢｒａ、 Ｆ ｎｇｌａｎ
ｄ）を本発明者らの研究室で充填し／・１．６ｘ１５０
＋ｕｅのステンレススチールカラム４用いた分析用ＨＰ
Ｌ Ｃにより因子Ｆの存在を分析した。試料（ＪしＡ
ダインモデル７１２０インシ１クシ」ンハルｆを用いで
注入した。水： ／’ 廿ｆ−二トリル：Ｆ１１酸丈ト
リウＡ（８１：１９：２ リ２）からなる、氷ｍ酸で
Ｄ）４６ Ｋニ調節しｊこ溶媒をミルトン・１］イ・
シュ／レックス・ミーポンＩを用いＴＯ，６５戯７′分
て注入した。因子［−はｌ ＳＣＯ七）：′ル１８００
可変波肢ｊＪ Ｖ検出器をｆψ）（２２５ｎｍで検出し
た。１５２（’）＋ｚ６から１７８０ ｄの溶出液を減
圧トで５０１βにｉｌ縮した。 同様のＭ製を３回（１なって得ｋ１ｍ輸液を合Ｕ、水Ｃ
１乏に希釈し、予め水でψ換）化しｔニカフム（２，８
Ｘ２２ｃｎ＋）中の１００紙のゲイメイＡン１−１ ）
） −２０樹１指に、１０７Ｉｉ／′分のｉ８度で入れ
た。 このカラムを、蟻酸水溶液でｐＨ２、５３に′Ｊ４節し
ｌこ水２００臆Ｃ，塩化銀沈澱法により洗液中に塩水が
検出されむくなるまで洗浄した。次いで水とアヒトニト
リル（６： ４ ）の混Ｎ０．５乏を用い、１５戚／分
の速庶′Ｃ′溶出した。溶出液を減ＦモＦで濃縮し凍結
乾燥（Ｊるとかなり精製されｌご因子［２０２，２１１
１０が得られた。これを水：）′セト−１・１ｊル：塩
化ｊトリウム（８６：１４：２（＋／乏）からなる溶媒
４厭に溶解し、既述した２５〜４０ミクロンのＬ ｉ
ＣｈｒｏｐｒｅｐＲＰ −８を充填した２゜８×５９Ｃ
ＩｌのＭ ｉｃｈｅｉＭ １ｌｌｅｒガラスｈラムｒ４
ｄ７′分の割合いでクロマトグラフィーした。因子（に
富んだ２０６０厭から２４８ｎｚｘの溶出液を減圧下で
５Ｑ、ｖｆに濃縮した。同様の精製を３回行）１って得
た濃縮液を合せ、既述したように、カラ１１に入れた１
００ｄのダイアイオンＨＰ−２０樹１１ｎにまり脱塩し
た。溶出液を減圧下で濃縮し凍結乾燥すると因子Ｅ２４
２１（ｌが得られた。 抗生物質Δ４１０３０因子Ｅは白色固体Ｃあり、Ｉｌ’
Ｆに示１おおよその元素分析値を有する：１ｌｊ２索ｌ
ＩＦ５．０６％、水素４．０６％、窒素８．５３％、１
、：４ｇ３．５０％、Ｉｆ素２７．８５％（差から）。 Ｄ６％のジメチルホルムアミド水溶液中で因子トー！−
電気滴定した結果、約５．８および７．７の＋＋Ｋａ顧
を１′ｉする２つの滴定可能基があることが解った（ざ
らに１０以−ＦのｐＫａｉａを有するもの、・Ｉ Ｉ’
ｊ存する可能性がある、初期ｐＨ６，５７）。 高速隙了物＠−ノススペクトルにより観察された分子鯖
は約１１６３である。因子［の実験八番Ｊ Ｃ，ｇト１
４ｔ４ ＣＩ Ｎ ７０ ｓａ ”ある。 抗生物質Ａ４１０３．０囚子Ｅ ｆ Ｋ ［３ｒ法に、
ふり測定した赤外吸収スペクトルを第５図に承り。以上
のｗ４帖へ吸収極大が観察された：３４！１８・−コ）
２２６（強、ブし−１−ド）、１６５３（強）、１ｆ５
００（中）、１５０４（強）、１４２９＜弱）、１２９
０ （弱）、１１９８（中）、１１３６（弱）、１０６
４（弱）および１０．１０（強）Ｃ１゜中性、酸性およ
び塩基性のメタノール：水（１：１）混液中のＡ４１０
３（”）因子Ｆの紫外線吸収極大愉を表５に示ケ。 抗生物質Ａ４１０３（１囚子Ｅは、因子△の場合と同じ
溶媒に可溶である。 観察された物理化学的データーにＶづくＡ４１０３０囚
子Ｅの構造式は以下の通りぐある：因子Ｅ ＯＨ 支ｉ九毘 △４１０３０因了Ｆの単− Ａ４１ （’）３０両合体９．０９を水：ノ′Ｌ！１〜
−トリル：塩化Ｊ［−リウム（８３：１７：２ リ 、
２）からなる溶’Ｓ ２００ａｉに溶解し、得られｌＪ
溶液を濾過した。この濾液を、実施例３の７’Ｊ法（゛
木発明石らの研究室（こａ３い（Ｉ製しｒこ１０へ・２
０ミク［ｌンの １−１〕−１ＣＩ８逆相シリカゲル４
２を充填し１．：、 Ｂ Ｘ １００ｃｉ１のステンレ
スストールカラムに入れた。Ｃｈｒｏｍａｔｏｓｐａｃ
Ｐｒｅｌ） −１０（’ｌ −１ニノｌ−の部品であ
るこのカラムを、試１’ｌを溶解するのに使用したもの
と同じ溶媒系を用い、６０１１１−カ（溶出して４８０
ｆｆｆｆｌのフラウン」ンを集めＩζ。溶出液はｌ ３
００ シＹルＵ Ａ−５Ｕ Ｖ検出器を１（１い（２Ｆ
ｉ ４ ｎｍて・セニターした。集めたフラウン」ンに
つさ、２５−４０ミクロンのＬ ｉ Ｃｈｒｏｐｒｅｐ
１１１）−８を充填した ０．８ｘ３Ｑｃｍの〜４
ｉｃｌ＋ｅＩＭｉｌｌｅｒカラスカラムを用いた分析用
Ｈ１）ｌｒ’ＩＣにより氏子［の存在を分析した。水；
）′セ［・二１−リル：塩化ノトリウム（８４：１６：
２ ９．１２）がらへる溶媒をＦＭＩポンプにより４
ｙｉｒｌ 、’分の割合いで注入した。因子Ｆはｌ５Ｃ
ＯモデルｔＪＡ−５ＵＶ検出器を用いて２５４ ｎｍで
検出した。フラクション１〜２５は捨て、因子Ｆに富ん
だフラウン」ン２６へ・３６を集めて減圧下で約５００
戴まで濃縮した。 同様の精製を３回行なって得た濃縮液を集めて濾過し、
この濾液を、予め水で平衡化したダイアイオンＨＰ−２
０樹脂１００−を入れたカラム（２゜８Ｘ２２ＣＩ）に
１０鱈／分の割合いで充填した。このカラムを塩化銀沈
澱法により洗液中にＦＡ素が検出されなくなるまで水９
００顧で洗浄した。次いで水とアセトニトリル（６：４
）の混液１℃を用い１５戴／分の速度で溶出を行なった
。 溶出液を減圧下で濃縮して凍結乾燥するとかなり精製さ
れた因子Ｆ２．６Ｑが得られた。この生成物５００ｆｌ
１ｇを水ニアセトニトリル：塩化ナトリウム（８４：１
６：２ Ω／ｊ）からなる溶媒１０戴に、水酸化ナトリ
ウム水溶液でｐＨ７，０に調節しながら溶解した。この
ＷＩＨを、２５〜４０ミク１１ンのｌ ｉ Ｃｈｒｏｐ
ｒｅｐ ＲＰ−８を充填した４、７Ｘ ４５ ｃｍのＭ
ｉｃｈｅｌＭ １ｌｌｅｒ ガ°ノスノＪ ’７ムに
（１人した。１〜１１ボンｌを使っ（、試料を溶解４る
のニ用イたものどＩｉＪ］じ溶ｔＢ？″′、６ｙｉ（（
、−分の速厩（−ｉｌｌ出をｈ’ ＜Ｎい、２４πβの
フラツジ」ンを集めた。？／ｉ出液をｌ Ｓ ００ Ｌ
ｊ−ルＵ Ａ−ｈ ｊｌ Ｖ 検出器ヲＩｆｌ イで
２５４ ｎｍでモーターした。集めたフラツジ」ンに′
〕さ、既述した分析用ＨＰ １． ｒ）１． Ｃ系を用
い（因子１丁の存ｎを分析した。因ｆ １１．二冨んｌ
ど１９４Ｑ１１〜２５２０ｔｐｂＯ）溶出液を減／「）
？−約３００ ＴＡ２まで・濃縮し／＝ 、同様の精
製を２同（ｊな）で１８だ濃縮液を含Ｕ、水（ｐめ平衡
化した、カうム（２８Ｘ２２Ｃｍ）中の１００誠のタイ
アイＡンＨＰ −２０樹脂に、１０鱈、７分の割合い（
゛充填した。／Ｊプラム、！Ｌ化銀沈澱法により洗液中
に塩素が検出されなく ’ｔ＞るよて・、蟻酸てｐＨ２
，５に調節しＩ、−水（３００１β）で洗浄し１５０次
い（−水と〆ｔｅ＋・−１〜リル（６： ’ｌ ）の混
液０．７５ｆｆｉで溶出を７！イシ−＞／Ｊ、溶出液を
減Ｊｆ： Ｔ ’（−濃縮し、凍結乾燥４ろど因子ｒ−
２＜） ９ ｉ＋ｇが１ｊＩられ／＝ ０抗９−物質Ａ
１１１ （’） ３０因子Ｆは白色の固体であリ、以
下に示すおおよその元素分析値を有づる：炭素５１．３
９％、水素３．９６％、塩素６．４５％、窒素６．４５
％、酸素２８．６５％。６６％のジメチルホルムアミド
水溶液中、因子Ｆを電気滴定した結果的５．４および７
．１のｐＫａｌを有する２つの滴定可能基の存在が確認
されたくさらに１０以上のｐＫａ値を有するものが存在
する可能性がある、初期ｐＨ５，９３）。高速原子衝撃
マススペクトルを使って観察された分子量は約１５５５
であった。因子Ｆの仮実験式はＣ７６８４、ｚｃＩ ３
Ｎ ７０鵡である。 この分子量から、因子Ｆは因子Ａと２個の糖部分が付加
している点で異っており、分子量が奇数であることから
７ミノ糖が存在していないことが解る。 ＫＢｒ法で測定した抗生物質Ａ４１０３０囚了Ｆの赤外
吸収スペクトルを第６図に示す。以上の顕著な吸収極大
が観察された： ３４４８〜３２２６（強、ブロード）
、１６５３（強）、１６００（中）、１５０４ （強＞
、１４２９（弱）、１２５８（弱＞、１２２７（強）、
１１３６（強）、１０７５（強）、’ＩＯ’５３（強）
、および１０１０（強）ｃｍｌ。 中ｆ’ｌ 、酸性および塩基性のメタノール；水（１：
１）混液中のＡ４１０３０因子Ｆの紫外吸収極人顧を表
５に示俳。 抗／を物ｇ−ｆ Ａ ４１０３０囚子Ｆは因子△と同じ
々Ｉ媒に１１Ｔ溶で・ある。 観察された物理化学的データーに基づくΔ４１０３０囚
了「の％＞ｈ式は以下の通りである：因子Ｆ ２ τ［１９−Ａ４１０３０囚子Ｇの甲離 実施例２（ｉ４〕Ｉ、：Δ４１０３０１Ｅ１合体８９４
−水：ノ′ヒｌ−ニトリル：塩化ナトリウム（８４：
’ｌ ｆ５ ：２（Ｊ／Ｊｌ）からなる溶Ｑｌ ２０
Ｑ ｔｔｒｉ ニ溶解しく１ｌＪｌ過した。この濾液を
、実施例３に記載したｈ払（本発明省らの研究所ぐ調製
した１０〜２０ミク１１ンのＬ Ｐ −１、′’Ｃｆｌ
逆相シリカゲル４乏を充填しにステンレススチールカラ
ム（８Ｘ １００ｃｍ）に充填した。このカラムはＣ１
１ｒｏｍａｔｏｓｐａｃ Ｐ Ｉ’ｅｌ １００ユ
ニツトの部品である（実施例３を照）。ノ」ラムを、水
ニアしトニトリル：塩化−） ｌ−リウム（８４：１６
：２ ａ／Ｉｌ＞（１）Ｎｍで、６０ 就’ ５’ｊの
速度で溶出し、４８０叡のフラクションを集めた。溶出
液は実施例３に記載したように２ ｈ ７１＋＋ｔｎて
モニターした。集めたフラクションにつさ、既）小しＩ
ζ＾ζ波速り【］ン］−グラフィー（Ｈ））＋（’、）
分析法により因子Ｇの存在を分析した。 因子Ｇ Ｋ富むフラツジ」ン２２〜３ｂを東め減７ｔド
で５００塾にａ縮した。同様の精製を、１ ＋１１１
＋’ｊなってｙｌに濃縮液を合せ、水酸化Ｊ１−リ・”
ノｌｚ水溶液でｐＨ８，５に講節し濾過した。この濾液
を、予め水で平衡化したカラム（２，８Ｘ２２ｃｍ）中
のダイアイオンＨＰ−２０樹脂１００戴に１０戴／分の
速度で充填した。塩化銀沈澱法により洗液中に塩素が検
出されなくなるまで水（４００，ｍ、蟻１１１ｒ １）
Ｈ２，５に調節したもの）でカラムを洗浄した。次いで
水ニアセトニトリル（６：４）の混液を用い１５戴／分
の速度で溶出し、１にのフラクションを集めた。このフ
ラクションの３ａ−ｃｉｌｌｕｓ ５ｕｂｔｉｌｉｓに
対する活性を分析した。活性をａするフラクションを集
め、減圧下で濃縮し凍結乾燥すると生成物２．８５ｇが
得られた。 この生成物０．５ｏを水ニアセトニトリル：ジブチルア
ミン（８０： ２０ ： ０．０３Ｍ、リン酸−ｅ１１
１−１７．８に調節したもの）からなる溶！１１１０／
１βに、溶液となるまでジブチルアミンを加えることに
より溶解した（最終ｐＨ８，２）。この溶液を、２５〜
４０ミクロンのＬ ｉ Ｃｈｒｏｐｒｅｐ ＲＰ −Ｂ
（ＭＣ／Ｂ Ｍａｉｕｆａｃｔｕｒｉｎｏ Ｃｈ
ｅｍｉｓｔｓ、Ｉｎｃ。 、 Ｃ１ｎｃｉｎｎａｔｉ、ＯＨ）を充填した２、８Ｘ
５９ｃｇ＋のＭｉｃｈｅｌ Ｍｉｌｌｅｒ （ＨＰＩ
ＰＩ Ｃ）力゛ノスカラムに充填しｌＪ。 ＦＭＩボンｌを用い、試料を溶解するの（二１史］ｋも
のと同じ溶媒で４戴、７７分の速度Ｃ溶出を（＋ １．
ｔ−）／、１゜溶出液１．ｌ ｌ ＳＣＯＥ７’／ｌ／
ＩＪΔ−５１ｉ Ｖ 検出器を使って２５４ ｎｍて゛
七ニターした。ｉｋめた１０７１℃の一ノラクシ」ンｔ
こつさ、既述した１Ｈ）ｌｃ分柘法により因−ｒ Ｇの
存在を分析した。 因子Ｇに菖んだ一ノラタシコン５）１１−７４を、同様
の精製を（ｊなつで１りたクラクシ１ンと合１４．Ｉｓ
め水Ｃ平衡化しにカラム（２，８Ｘ２２ｃ＋＋＋＞中の
ダイアイオンＩ Ｐ −２０樹脂１００鱈に１０ｄ分の
速厖（充填した。蟻酸でｒｌｌ１２．５に調節した水３
００戚で、塩化銀沈澱法ｔこよシ）洗液中ば聴衆が検出
されなくなるまでカラムを洗浄しＩご。水ニア廿トニト
リル（６：４）の混成Ｏ７５〕乏（゛ンｄ出を行なつＩ
Ｊ０溶出液を減Ｉｆトぐ濃縮し凍結乾燥すると因子Ｇ
９６０ ｍ（］が得られた。 抗〈１物質Ａ１１１０３０囚子Ｇは白色の固体（あり以
トにホ１おおよその元拳分相偵をイｊ４る：炭素５０．
０２％、水素４，６１％、塩素４．７１％、窒素６．１
１％、酸素３０．７０％。６６°ｌ。 のジメチルホルムアミド水溶液中で因子Ｇを電気滴定し
た結果、約５．４および７．０のｐＫａＭｔを有する滴
定可能基が存在することが解つｔこ（さらに１０．５以
上のｐＫａ値を有づるものの（ｆ（Ｉする可能性がある
、初期ｐ）−１６，３２）。高速ｊｉｊ＋子衝撃マスス
ペクトルにより観察された分子Ｉｉｉ ｔＪ約１６８４
であった。 ＫＢｒ法により測定した抗生物質Ａ ４１０３０因子Ｇ
の赤外吸収スペクトルを第７図に示づ。以下の顕著な吸
収極大が観察された：３３２０（強、極めてブロード）
、２９７５（弱、シャープ゛）。 ２９２０（弱、シャープ＞、１６５９（強、ノーマル）
、１５９４（強、ブロード）、１５１２（強、シャープ
）、１４９２（肩）、１４３０（弱、シャープ）、１３
８６（弱、ブロード）、１３３７（弱、ブロード）、１
３０８（弱、シー・−プ）、１２６４（弱、シャープ）
、１２３０（中、ブロード）、１１４５（中、ブロード
）、１（）７７（１，シ１／−））、１０６２（中、シ
ト−）） 、１ （’） １４ （中、シャー−７）、
ａ’；よび８４６（中、ゾ【１−１〜）ｃｌｌｌｌ。 中性、酸性および塩基性のメタノール：＄＜１：１）の
混液中のＡ４１０３０囚イＧの紫外吸収惨人を表５にｉ
ｊＸす。 抗生物質Ａ ／Ｉ １０３ （’）因Ｆ Ｃ，は、因子
Ａと同し溶媒１こ可溶である。 Ａ４１０３０倫合体の因子Ａ、Ｂ、Ｃ，Ｄ、ｌ、Ｆお１
ひ０は、シリアＪゲル薄層り１１７トグラノｒ−Ｉ’Ｔ
ＩＣ）およびペーパーク１１ントグノノイーにより、シ
フいに分離し区別することがＣさる。ハイＡ４−トゲラ
フイーに使用づる微生物は、バ１ルス・スブチリス（Ｒ
，ｓｕｂ口１ｉｓ）であった。Ａ４１０３０囚了Ａの移
動紡を１ 、００とした１ｌｉｌ＋の移ＩＩＩ率（Ｒ×
）を表−６に示ゴ。 表６ Ａ系 ペーパー：ワットマンＮ１１（非処理）溶媒：水飽和ブ
タノール：メタノール（ｉ：１）Ｂ系 吸着剤：メルク・ダルムシュタットシリカゲル６゜溶媒
：アセトニトリル：エタ／−４：水（８：１：１．５） １０ｆノのリフ［］１１ルｆ （ｌ １ｃｈｒｏｓａｒ
ｂ ） Ｒ１）１８を充填しｊこステンレスカラムおよ
び蟻酸Ｃ゛１１１１２．５に調節した水： ？ｔ？トニ
］・リル：シＩデルアミン（８２：１８ ：０．０３Ｍ
）から／、Ｓる溶媒を用いｒ、Ａ４１０３０囚子△ない
しＧの＾速液体り［１マドグラフイー（ＨＰ ｉ Ｃ）
保持８）間を測定した。溶媒は０．７５戴７分の流速１
１１人しｌＪ。溶出ｉ１．Ｌ２２５ｔ＋＋ｎにお＋ｊる
ｔＪ Ｖ吸収により七−ターしＩこ。Ａ４１０３０囚了
Ａに対りる各因子の保持時間の比、即ら、相対的保持鎮
を表 ７に示１．。 表７ 抗住物質Δ４１０３０の因子群は両性、即ら、アミノ基
とカルボキシル基の両者を含んでいるので、適当なｍお
よび塩基と塩類を形成することができる。このような塩
類、特に薬学的に許容し得る塩類も本発明に包含される
。［薬学的に許容し得る」塩類とは、温自動物の化学療
法に使用し得る塩類を６う。Ａ４１０３０因了Ａ、Ｂ、
Ｃ，Ｄ、Ｅ、ＦおよびＧの代表的な、かつ好適な塩類と
しては、例えば１ｉＫｌｉｌｌ、りん酸、塩酸、酢酸、
琥珀醸、くえん酸、乳酸、マレイン酸、フマル酸、バル
ミチン酸、−１−ル酸、パモイック酸、ムチン酸、１）
−グルタミン酸、ｄ−樟脳酸、グルタル酸、グリコール
酸、フタール酸、酒石酸、ラウリン酸、ステアリン酸、
サルチル酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、
ソルビン酸、・ピクリン酸、安息香酸、けいひ酸、等の
有機および無ＩＩｔａとの標準的な反応によって形成さ
れる酸付加塩、Ｊ３よび水酸化ナトリウム、炭酸ナトリ
ウム、炭酸カリウム、水酸化ノコルシウム、水酸化カリ
ウム、トリメチルアミン、水酸化アンモニウム、ジエタ
ノールＩミン等の塩基とカルボキシル基との反応によっ
て生成する塩類等をあげることができる。 抗生物質Ａ４１０３０複合体およびその因子群は、スタ
フィロコッカスおよびストレプトコッカス種を包含する
グラム陽性微生物に対して活性を有する。またこれらの
抗生物質は、家禽、豚および牛の成長促進および飼料利
用効率の改善にも有効ｅある。Ａ／１１０３０複合体お
よびその個々の因子群の活性を以下の実施例群において
示す。 ’ｆｆ １０ 生物検定用飼料の調製および乾燥
全１０ス中のＡ４１０３０因子Ａの定量分析全ブロス１
２を２００．ｔｇまで濃縮し凍結乾燥すると乾燥全ブロ
ス３１．５ＣＩが得・られた。この乾燥全ブロス４００
量ＱをＤＨ８，５の水１０戴で３回抽出した。抽出液を
合わせ、１０戴まで濃縮し、この濃縮物を生物検定に使
用した。Ｎ、Ｒ。 Ｋｕ７ｅｌおよびＦ、 Ｗ、 ＫａｖａｎａｕｏｈＬＪ
、 Ｐｈａｒ −Ｉｌａｃｅｕｔ、 、 ３ｃｉ、 ６
０ （５） 、 ７６４および７６７頁、１９７１年）
の半自動システム（Ａｕｔｏ−＋ｕｒｂ＠Ｍ ｉｃｒｏ
ｂｉｏｌｏｇｉｃａ１分析システム、Ｅ １ａｎｃｏ
）により濁度分析を１１なった。Ａ ４１０３０複合体
の試験では、以下の試験パラメーターを用いた：スタフ
ィロコッカス・アウレウス△ＴＣＣ９１４４（栄養ブロ
ス培地（ｐＨ７）、３７°Ｃで４時間インキュベート）
。被験試料および標品をメタノールと水（１：１）の混
液に溶解した。標品、Ａ／１１（’）３０囚子Ａ’Ｅ：
０．４．０．６．０．９．１゜２および１ 、５ ｍｃ
ｇ／ｓｉｒの濃度でＡｕｔＯｔｕｒｂ ”同転体（ｃａ
ｒｏｕｓｅｌ ）に入れた。 上記の濃縮物１戴を、ＨＰＬＣ分析に使用される以下の
手法で精製した。 （ａ ）Ｃ−１８ＳＥＰ−ＰＡＫ＠カートリッジ（シリ
カゲルカートリッジ、Ｗ ａｔｅｒＳ Ａ ５ＳＯｃ
ｉａｔｅｓ、 Ｉ ｎｃ、 、 Ｍｉｌｆｏｒｄ、
ｆｖｌａｓｓ 、）を当！ｆｌにはよく知られている１
ｕｅｒフイツテイングを備えた１０戴のシリンジを使っ
て、メタノール１０叡で洗浄した。 （ｂ）同じカートリッジを水１０戴で洗浄する。 （Ｃ）約１７１β／分で、カートリッジで上記の濃縮物
１７Ｉβを適用する。 （ｄ ）水１猷でカートリッジを洗浄し、吹いてｈ −
トリッジを乾燥する。 （ｅ）ｊトラヒドロフランと水（１：１溶液）１戴でカ
ートリッジを約０．５ｄ／分で溶出する。 （ｆ）溶出液から減圧あるいは窒素雰囲気下Ｃｊトラヒ
ドロフランを除・去し、ぞの溶出物に水を如えて１厭と
する。 （０）この溶液を既述したＨＰＬＣ法により分析する。 全ブロスの１１Ｐ Ｌ Ｃ分析および生物活性の検定の
結果を表−８に示す。 寒天希釈分析法 ＭＩＣＩを測定するためにＩ ｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａ
ｌｔ’、 ｏｌｌａｂｏｒａｔｉｖｅ ３ ｔｕｄｙ
（Ｉ ＣＳ ＞グループによ）Ｃ＆！載された寒天希
釈分析法を使用した。 寒天希釈分析法による抗生物質△４１０３０因＋’Ａに
ついての試験結果を表−９に示す。 表９ Ａ４１０３０因子Ａの活性 × ベンジルペニシリン感受性 ×× ベンジルペニシリン耐性 一イスクプレー ８ 被験微生物とともにインキ１べ−１〜した寒天平板を使
用した；６１Ｉｌｌの１″イスク（Ｑ、０２戴容１）を
抗生物質溶液の１０ｇ２希釈液で飽和した。ラーイスク
含−は使用した溶液濃度の１，１５または１″５０であ
った。即ら、５００ｚ、／戴ｍ度の溶液からディスク含
１１００１０または１０−９を１３だ。個々のディスク
含けにおけるＡ ４１０３０囚子Ａ抗住物穎による阻Ｉ
Ｆ帯のサイズを表−１０（こホす。 表１０ Ａ４１０３０因子Ａの活性 Ｘ ベンジルペニシリン感受性 ＸＸ ベンジルペニシリン耐性 ××※ ベンジルペニシリン耐性、メチシリン耐性抗生
物質Ａ／Ｉ １０３０囚子Ａは、寒天稀釈法によりへモ
ノイルス・インフル１ンリ゛Ｕ （ｔｌ ｅｉ。 ｐｈｉｌｕｓ ｉｒ汀１ｕｅｎｚａｅ）の多くの株に
灼して粘性を有することがわがった。試験結果を表 １
１にホす。 抗生物質Ａ＝１１０３０因子Ａは、寒天に釈？ｌ、＃二
よりネイセリャ・Ｔス・ビー（Ｎ ｅｉｓｓｃｒｉａ
ｓｐ、 ）に対しＣ活性を有することがねがった。試
験結電を表−１２に承り。 抗１１物質Ａ４１０３０因子Ａ Ｇ、ｔ、寒天Ｍ 釈？
／、により、各種の細菌に対して活性を有する（表 １
３参照）。 Ａ４１０３０抗生物質群、因子Ａ、 ＩＩＪＩＪ、ヒｃ
はバクＴ １．ｊ Ｊイデス−ニス・ビー（Ｂ ａｃｔ
ｅｒｏｉｄｅｓＳｊｌ、 ）と命名される婚気性細菌族
に対しＣ活性を有する。寒天稀釈法による２４時間のＭ
Ｔ ＣＶｉを表−１４に承り。 表１１ Ｈｅｍｏｐｈｉｌｕｓ １ｎｆｌｕｅｎｚａｅ株に対す
るＡ４１０３０因子Ａの活性 表１２ Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｓｐ、に対する Ａ４１０３０因子Ａの活性 表１３ 種々の細菌に対する Ａ４１０３０因子Ａの活性 表１３つつき × ペニシリン耐性 ×× ペニシリン、メチシリンおよびエリスロマイシン
耐性 表１４ Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｓｐ、に対するＡ４１０３０
因子群の活性 抗り物質△／Ｉ １０３０因子Δ、Ｂおよび０はまた、
プロピオニバクテリウム・アクネス（ｔ′）ｒｏｐｉｏ
ｎｉｂａｃｌｃｒｉｕｍ ａｃｎｅｓ ）と命名され
る帰一（性細菌群にｆ、ｌ Ｌ／ （粘性を有すること
がわが・）た１゜２ ／Ｉ １１．１間の屡゛大稀釈へ
によるＭ Ｉ Ｃ１ｌｆｌを人−１１）に示す１、 抗生物質Ａ４１０３０因子Ａ、Ｂ、（Ｅ、Ｉ’）、［。 Ｆ Ａ３よＵ Ｇ ｌ、Ｌ、多く）＠気性細菌に（４Ｌ
、 （活１４４杓４ることかわがっ〕、−ｏ寒天橘釈結
にｊ、）（測’ｒｆしたＭ［Ｃ値を人−１６に承り。 抗！ｊ物賀Ａ ４１０３０囚子Ａ、ＢＪＬＬび０はべ−
１ｌ−：＋ ツｈ ス（Ｆ）ｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ＞
ａ；よひベプｌ−ストレプト］ツカス（Ｐ ｅｐｔＯ３
ｔｒｅｐｔ０１ｃｃｌＩｓ ）と呼ばれる２つの属の各
種の嫌気性球菌１．’：対しく活性を石４る。寒天稀釈
法により測定したｌｖｌ ＋ に ｌめ４人１７に示４
．． 。 Ａ４１０３０抗生物質因子Ａ、ｓ、ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆおよ
びＧはまた、クロストリディウム・ディフイシレ（ＣＩ
ｏｓｔｒｉｄｉｕｓ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ ）の多く
の株に対して活性を有する。寒天稀釈法により試験した
結果を表−１８に示す。 抗生物質Ａ４１０３０因子Ａ、Ｂ、Ｃ１Ｄ、Ｅ、Ｅおよ
びＧの種々の好気性細菌に対するインビトロにおける活
性を標準的な寒天稀釈法により測定した。２４時間後の
終点の読みの結果を表−１９に示す。 抗生物質Ａ４１０３０因子ＡおよびＢのストレプトコッ
カス・１ス・ビー（Ｓ ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓＳＯ
，）・グループＤを含む代表的な好気性ダラム陽性菌に
対する活性を標準的な寒天稀釈法により測定した。２４
時間後の終点の読みの結果を表−２０に示す。 抗生物質Ａ４１０３０複合体の多くの動物病原体に対す
る活性を、標準的なインビトロにおける抗微生物ブロス
微ｉ漬定試験により測定しｒこ。結果を表−２１に示す
。 表２０ 好気性細菌に対する Ａ４１０３０因子ＡおよびＢの活性 表２０つづき 表２１ 動物病原菌に対する Ａ４１０３０複合体の活性 試験し／、：Ａ４１０３０因子群はすへ（、実験的細ｉ
ｈＪ染に対し、インビボにおい（抗倣′１物ＩＡ ｔｉ
を示し／、＝。代表的な感染症のマウスに、２投’−ｉ
１’ｌＹの試験化合物を皮下ｔｉ制し、観察されに結
束を、ＦＩＴ）５０給（゛表わした（ＥＤ５ ｏ蛤は被
験動物の５０％を保護する鱒をＨ／Ｍｌで表わしたもの
（・ル）る。ワレンヴ（”ｌり（Ｗ ａｒｒｅｎｗｉｃ
ｋ ）ら１、」。 Ｆ３ａｔ；ｔｅｒｉｏｌ、 、 ８１ 、 ２３３
〜．２３５ Ａ、１０６１年参照）。Ａ４１０３０囚子
Ａ１Ｒ，Ｇ、１）、Ｅおよび［のＥ ［−１５０値を表
−２２に示す。 抗９物賀△＝１１０３ （’ｌ因Ｆｌ＼、１３．およ（
）ｆ；ｉハ急＋１４市↑１を、マウス（調・＼ｌＪとこ
ろ、腹Ｗν内ＩＱ ’Ｊ ｉ・へおいＣ３（’ｌ □
ｍす、′１以Ｉ、（゛あ′）ｌＪ（＋抗′１物質△４１
０３０囚子△、１３Ｊ５よひ０のＩＤ ｈ ｊ５１１１
：ｌを７ウスにおいＣ調べｌこと、二））、町ｌ−ト内
（捷 Ｌ） （ご お い Ｃ３（’ｌ （）ｍ
リ ’ｋＱＬス Ｂ あ Ｉ ＩＪｌ）抗’
ｌ Ｔｈ！１ｌＡ４ ＋ ０３０囚ｆＡ、１もオ」、＋
７’ Ｃ〕（ｈ インし小にお（する絆（−１７占ゼ１
を、マウス（こお（ｊろ１ス・バ（Ａ ’／ネスについ
（調べたところ、１００ｎし１にり×２以１−（あった
。 本ブで明はＡ ４１０３０ｈ’ｉＱ物ｔ−コ抜合体、ｉ
／、：はぞの因ｊ′あるいはぞの薬学的に許容しくす
う塩類の化学療法的な４＋効品１例えば約２ ：）ｍ
ｇ・・約２００（）＋ｎｇを渇面動ν〕ｉこ役ＬＪ−ツ
ることがらｈる該Ｖ〕物の感染ＩＩＩの治療７Ｕ ？ｌ
、を提供づる６の（（ｂろ。 因子ｌ＼また１３Ｌぞの薬学的にｉｉ’ｌ ’？ｆ シ
得る塩はヒトの感染も１の治療にｉもｆＬＪＩｌｌｌづ
ることか（さるが、般（、一本発明の複合Ｉ４および他
の囚ｉ’ ＲＹあるいは℃の塩類はヒト以外の瀉血動物
の感染ｔ１１舎？ｌ；捺（Ｊるのに最す適しくいる。 ヒｉ〜の感染１を治療するには、この抗１物貿因Ｙ、好
ましくは因子Δを非軽［１投句、例えば筋肉内注射また
（、未静脈内注入により投与することがＣさる。？、１
射４る場合は、この抗イ［物質またはその薬学的に冶金
し得る塩を所ψのａ瓜で薬学的にδ１賓し得る希釈剤に
溶解しで投りりる。好適’ｔＺ希釈剤としで【、１珪射
用水、０．９％食塩水、５％デー１、＜１−Ｉ−１−ス
、リンゲル液、あるいはぞの他の通富使用される希釈剤
があげられる。静脈注入するに（，１、抗９物質または
その塩を適当な濃度の′１即的液体あるい【、１薄い栄
養液の溶液にづることか（さ−く）。例えば約５％およ
び約１０％の溶液どじＣゆ）くりと２１人する。あるい
は口の杭／ｌ：物貿ｔまピ１−一 バック（ＦｌｉＱｇ
Ｖ −ｂａｃｋ）法により投与しくムＬい。 個々の因子群、ぞれらの組み合ぜ物または囚ｒ群の４１
＼（の複合体４５よびそれらの薬学的にへ′１容し得る
塩類【３Ｌ、蜜月バイＶル、滅菌しｌこ一１１１栓ｔ１
き゛バイヤルまたはプラスチック袋内の投与ＩＩ （Ｃ
／製ｎすに調製ｑることができる。このような単（＜／
投り製剤には、抗酸化剤、安定化剤、分倣剤 籾妙＋１
１１１青の賦形剤を、′？まけることが（さる。この」
、う＜＝投イノｊｕ ｌｅＩ製剤はゴノ、（ｆチルｆ’
ｌ＞）ｒ栓をＬ・Ｉ−ハイ−ノル中に因ｊ″−Ａまたは
その薬学的に訂ン； ｔ、 Ｉ！ｊる塩１００ｍｇをＦ
Ｊ４ＪしＵいる。Ｊした、別の１２ ’Ｊ中旬製剤（ま
藏菌が１１→ハ（Ｓフル１１コ、因子△、１ｋ（１ε（
ノコ１鋺２Ｆ＋□ｍｇを含有しくいる。静脈ｉｔ人１１
４の甲（１”ｌ投与製剤ト１因ｆ△よＩこは薬学的１５
−直打ｔ、 １するｉ品！）りをノ゛ノスｆツク貸中に
ａイｊしくいるしの（ある。 Ａ ／１１０３０枚合体または八４１０３０囚１′４抗
菌剤としく使用する場合（、↓、粁ｌ］まＬはＪ１軒１
１投！ＪすることかＣきる。当業名にとつＣは周知のこ
とＣ・あるが、△４コ０３ （’）複１’ｉ １本よＩ
、１．ｔ（の囚ｒは通常兼学的（こ、′１谷し１９る中
休まｌこは希釈剤とどしに投ｒ〕される。Ａ７′１１０
３０複合体まＬ（１囚１′の役！）ｆｊＭ Ｉｔ個々の
感染症の性質よＩごは弔篤１すのよ）イ「＋１ト々の囚
了にしむじてゆわる。、ＩＱ’ノのｌ、めの適当／、に
段′Ｊ範囲および まＩごは甲（１７投り艶は、〜ｌｌ
Ｃｌ山お上ひＦ Ｉ’） ｊｌｏ（ｌ自および市ｎ Ｕ
−ターイにらひＧ’−１人１？′ｉあるいＬＬ宿１４ｊ
らぴに１悠染黴′１物の神ｌン／７）因子に応じて決め
ることが（−きる。 へ４１０３（１抗生物質群は特に、スタフィロ−」・ツ
ノ）ス、ストレプト］ツ）Ｊス、およびプロピオ−ハリ
ｆリウム・アクネス微１物群の増殖を抑制り・、〉のに
ｈ用（あり、従つ（例えば、座癒の治療に１・ｊ４ Ｉ
ｌｌ することがで゛さる。Ａ４１０３０の個々の囚１
′訂あるい１．（イれらの混合物（よ精製した状態（、
ｆソ／ＩＪピル／ルＪ−ルのような薬学的にｈ′Ｆ￥ｖ
し１゛する希釈剤とともに製剤化し、皮膚に適用するこ
Ｊが（−きる。このようｆｅｉ溶液の抗」物質ｍ石は、
約１−・、約１５小ケア／′容φ％とすることができる
。 あるいｔ、ｔ ：した これらの抗／ｌ物質群は皮膚用
のクリームまたｔま１］−シコンの形に製剤化すること
も（きる。 Ａ４１０３０抗体物質群はまた、腸内においＣ己模↑１
１ 入１１１Ａｉ４（Ｐｓｅｕｄｏｍｅｍｂｒａ＋＋
ｏｕｓ ｃｏｌｉｔｉｓ）＋／’Ｉ原囚となるり（
１ストディリウム・フイノイリイ’Ｌ、（Ｃ，１ｏｓｔ
ｒｉｄｉｕ＋ ｄｉｆｒｉｃｉｌｅ ）微１物群の増
殖５抑υ１するのにイｊ用である。Ａ ４１０３０因了
ま／、＋、１その混合物、あるいはそれらの薬学的に計
容″しｉｓｉる塩のｈ動産を薬・′ｉ°的ｋＴｉ’をン
Ｆ シｌ！？る）ＱｌＪ形仏；に調製（１、これを＃￥
１１投りづる（二どに」、すｗｌ ｌＩ＊ Ｉ’１人陽
炎の治療に使用４ることか（さる。このＪ゛）イＣ用途
にはこの抗ノ１物ｕ ＃！Ｙ１．ｔ Ｕ ／ ）ンノＪ
Ｉ １．； ル：したは液状懸濁液の形て役〜するこ
とが（きる１、本発明に係る抗で１物ｖ１群はまた、動
物用ト薬としく家畜ａ＞ Ｊ、ひ農呆用動物の感染症の
治療（−便月１りることか（さるｉｌ ’−れらの抗’
４ ’／ｌ＋ ｕ Ｒ￥ １．ＬさＩ−、に！ＩＩ物農
菓の分野（、例λ（Ｌ肉′１およびぞの曲の反都仙物の
成長を（１ｒ進４るのに使用りろこと（〕（・さる２３
本発明の抗′１物質群の特に価賄あろ用途（（、九′１
のミルク！■産を増大さＵる１１ヒノノを４１・１６点
Ｉ５−ある。１′ｌ］・に計速するこれらの用途す本発
明の部’Ｊ ＜１：’Ｊもの（ある。 Ａ ４１０３０複合体【、（インビｌ １１ （こおい
（＝１０ｎｉ ｃす・′αｉの瀾１ら（゛感染Ｐ１尺肝
炎ウィルスにλ・＋ １． ＜活性をｉｌづ。まＩ、−
Ａ４′１０３０〜４′１０３０〜ンＩ：’ ｔ・１１（
Ｊおい（，２０ｌＩｌｃｇ、−’ 、ｔｒｉ２の１ｌｌ
ａ（’偽５１大病に女・１しく活ｆ１を小し１．、：ｏ
−ｈＡ４１０３０Ａ４１０３０因了でｉ−ｎにｄりい（
，２０ｍ ｃｇ 、ｔｉのｉｌｌ ｆｆｌ （偽５１
大病に対して活性を示した。 抗生物質Ａ４１０３０複合体は、ひよこの成長促進剤と
しての活性を有する。これについての試験は以下のごと
くして行なった。 試験１ この試験では８日令のペンノブスコツトブロイ’！ −
（ｐｅｎｏｂｓｃｏｔ ｂｒｏｉｄｅｒｓ）のひよこ
を使用した。全部で５６０羽のひよこを使用しこれを７
羽ずつのグループに分けた。３５群を対照群として使用
し、５群には抗生物質Ａ４１０３０複合体２０ｇを飼料
１トンに添加した標準的なひよこ用飼料で処置した。飼
料および水は２１日間自由に摂取させた。２回の反復試
験を行なった。活性の評価基準は以下の通りである：１
回または２回の反復試験において３％の体重増加および
／または飼料利用効率の２％の改善をみたもの。結果を
表−２３に示す。 従って本発明はまた、飼料１トン当り抗９．物質Ａ４１
０３０因子またはＡ４１０３０抗生物質複合体あるいは
それらの薬学的に許容し得る塩約２０〜約３０ａを混入
して得た飼料をひよこに投与することからなる、ひよこ
の成長促進法を提供するものである。抗生物質因子また
は複合体は薬学的に許容し得る非毒性塩の形でひよこの
飲”用水に入れて投与することもできる。 抗生物質Ａ４１０３０はまた、離乳した豚に投与しても
成長促進剤として作用する。この抗生物質を、種々の投
与口で若い豚に投与して試験した。 試験２ 抗生物質Ａ４１０３０複合体を、体重約２１ボンドの豚
（５〜７週令）のえさに５．２０．５０および１ｏ ｏ
ｐｐｉの濃度となるように混入し、試験した。この実
験は豚小屋中金網の床を持）た空ｇｌｒＡ育設備中にお
いて行なった。処置ごとに５回の反復実験を行ない、２
７日間の反復試験ごとに５匹の豚を使用した。実験の結
果を表−２４に示す。 この実験において、５ｐｐ−および１ｏｏｐｐ−の投与
量における結果が示しているように、離乳した豚の成長
は投与量に応じて改善された。 試験３ 抗生物質Ａ４１０３０複合体はまた、離乳した豚（１７
ボンド、４〜６週令）に、２５．５０、および１００ｇ
／トン（飼料）の割合で３５日間投与した。処置ごとに
６匹の豚を使用し４回反復試験を行なった。 抗生物質Ａ４１０３０複合体を上記の割合で離乳した豚
に投与したところ、それぞれ５．６％、８．５％、７．
０％の体重増加を示した。また飼料に２５．５０および
１００ｏ／トンの割合で混入したとき、飼料変換効率を
それぞれ６．６％、９．２％、３．１％改善した。これ
らの結果を表−２５に示す。 従って本発明はまた、Ａ４１０３０抗生物￥４ ｈ合体
またはＡ４１０３０抗生物質因子あるいＧ、Ｌぞの薬学
的に許容し得る非毒性塩を約５〜約１００１１１１ｍの
割合で餌料に混合して豚に投与することからなる離乳し
た豚の成長促進法、およびΔ４１０３０抗生物質複合体
またはその薬学的にｉ打し得る非毒性塩を飼料１トン当
り約２５〜約１００ｇの割合で混入して豚に投与するこ
とからなる離乳した豚の成長促進法を提供するものであ
る１、１１°Ｆ ／１物質Ａ４１０３０複合体は薬学的
に許容し得る非毒性塩の形で飲用水に入れて豚に投与づ
ることしできる。 Ａ４１０３０抗生物質群はまた、反為動物の飼料利用効
率を増大させるにの有用である。艮禍初物における炭水
化物の利用効率は、反榔動物の前胃菌相を刺激してアセ
テートまたはブチレート化合物よりプロピオネート化合
物の生産を促進４るような処置を講することにより増大
することが知られている（ Ｃｈｕｒｃｈら、″［）ｉ
ｇｅｓｔｉｖｅ Ｐｂｙｓｉｏｌｏａｙ ａｎｄ
Ｎ ｕｔｒｉｔｉｏｎ ｏｆ Ｒｕｉｉｎａｎｔ
ｓ″第２４．６２２〜・６２５）Ｑ （１’：’＋ ７
１１ ｉ ＆照゛）前胃４Ｊ ｄｉ イ（’！’ ｅ（
ｃ３れる押゛介す〕Ｉ ｔｌｉｉ ＩＩ／＋ ＭのＩＬ
４ ＋！’７金づる抗１１物負へ４ ’Ｉ ０３０〜
合体（１）、Ｊ、ひ八／Ｉ ｌ０Ｊ３０因ｒＡのイｒ
効ｔ／ｌ ｉｔ、１１ トに−小’Ｉ ｉ’ シシｉ
＋１（の試験（こ１゛）Ｃノ〒、される。 試験４ 外ｌＩ ｆ山（こｊり前冑中に開（１している′＋λ秋
高１１′を備えｌこ層らトから前胃液を冑ｌこ。この層
１は以１・の紺ｊＪｌｉ ’ａ （ｉ”Ｊ ６ ｔＱ類
に畠んだＩ！ＩＩｌ １Ｎ （ｆｉａｌ ｆｔ シ／、
：相杓砕１−“ノし［ド］シ ６ ！１ 、
０：’＋ ”ｉ。 粉砕トつＬ１１１シ穂軸 １０％１人Ωミール（
市白質５０％） ８％ ツノ ル ノ 、・ ル ノ 、・ ミ − ル
Ｆ’ｌ ９＋’＋糖
輩 ５％１Ａ
ぐ 木
Ｏ、（） ％す／し酸−ノｊルシウム
０．５）も；炭酸ノノルシウｌい ０
．５ｆｊ。 食 塩 ０３（ｊ、、、じタ
ミン／＼お」−ひ ０．０７９Ｆ。 １）ｚ７’レミックス ビタミンＦプレミックス ０．０５％痕跡のミネ
ラルプレミックス ０．０３％前胃液試料を４層のチ
ーズクロスでこし、濾液を真空びんに集めた。チーズク
ロスに残った粒状物質をもとの前胃液の量になるまで生
理緩衝液に再懸濁し、この懸濁液を再びチーズクロスで
こした。使用した緩衝液は以下の通りである：Ｎａ ２
ＨＰＯａ ０．３１６Ｑ ／１２Ｋ）−＋
２ ＰＯａ Ｏ，１５２０／ｉ。 Ｎａ ＨＣＯａ ２．２６００ ／ｌＫＣ
ｌ！、 ０．３７５Ｑ ／ＩＮａ Ｃ
ｆｆ１ ０．３７５ｇ／ｚＭｇＳＯａ
０．１１２０ ／１２Ｃａ Ｃ１ｔ２
０．０３８（１／ＩＦｅ ＳＯａ ・７Ｈ２
００，００８０／ｌＭｎ５Ｏａ ０１０
０４ｇ／Ａ７ｎＳＯｔ ・７Ｈ２００，００４Ｑ ／乏
Ｃｕ ＳＯａ ・５Ｈ２００，００２（Ｊ ／ＩＣｏ
ＣＩ！、２ ０．００１（１／ｋＣｈｅｎ
ｏら、Ｊ、 Ｄａｉｒｙ ３ｃｉ、 、 ３８
． １２２５ （１９５５１）参照。 ２つの濾液を分液１１−１・に東め、ｌｉｔ私物？′４
か表面に浮かぶま（” Ｍｔ冒した。澄明な層を分−１
し、同じ緩衝液（−１： １に希釈し、ｐＨ７，０に調
節（。 ｌこ。 この希釈した前胃液１０辰を前置の組成をイ１りる細か
く粉砕した飼料９０ｍｕを入れた２ Ｆ＋ ｋｉのフラ
ス−］に入れた。試験しよ）とする化合物を。］す、１
記の適当な溶媒に溶解した。この溶液をそれぞれの試験
フラスコ中の微粉砕飼料の１が６入れ乾燥した。 ４個の未処理灼照ノラス］２レッＩ−を用点しＩ、。 ４個の未処理対照フラスコ】の１セツトは試験用ノンス
」とともに３８℃（・１６時間インキ１１＼−１〜した
。もう〜ｈの４個の未処理対照−７７−ス：ｌ］ １．
Ｌ （１時間対照とし、フラスコを調整した泊１９に２
５）％メタ燐酸２脈を加λて１１１１Ｍを停止１さ口ｌ
Ｊ０イン１１へ−１−シた試験用ｄ５よび対照用ノノス
：目１コの醗酵は、２５％メタ燐＠ ２ ｘｉを１６助
間後に加えて停止１さυた。 すべての試料を静置しその上澄液をカス′／ｊ１ントグ
ラフィー法により、アセテート、プロじＡネートおよび
フチレートについて分析した。 未処理対照群および試験用フラスコの分析舶からＯ時間
対照群の揮発性脂肪酸の分析値を引いＩＪ５得られた値
は１６時間のｌｌｉｌ期間中に生産されｌこそれぞれの
揮発性脂肪酸の量を表わしＣいる。 以下に示す表−２６のデーターは、未処叩対照フラスコ
中で生産された揮発性脂肪酸にえｊづる処置フラスコ中
で生産された揮発性脂肪酸の比を表わしている。このデ
ーター表示法は、本発明に係る飼料利用効率改善法によ
ってもたらされる前冑中の化学的な変化の結果を最も明
瞭に表わしくいる。また、表−２６のデーターは、本発
明に係る抗生物質群が前胃におけるプロピオネート牛Ｈ
を増大するのに有効であることを示している。。 この方法に有用な抗生物質化合物を投与することにより
、飼料利用効率を改善するとともにケト−ジスを予防お
よび治療することができる。ケト−ジスがおこる機構は
、プロピオネート化合物の生産が不足する点にある。現
在推奨されている治療法はプロピオン酸あるいは優先的
にプロピオネートを生産する飼料を与えることである。 本明細占に開示された方法は、明らかに、通常の飼料か
らプロピオネート生産を増大させ、ケト−ジスの発生を
減少させるものである。 本発明者らは、プロピオネートを増大させるに有効な口
の本発明抗生物質を投与すると反ｎｏ物において飼料利
用効率が増大することを見出した。 この抗生物質群は、個々の成分であるいは全複合体の形
で、あるいは経済的には、精製度の低い全複合体の形で
動物用飼料に混入して好適に投与することができる。し
かしこの抗生物質化合物はその他の方法でも投与するこ
とができる。例えば錠剤、トレンチ、剤、巨丸剤、カプ
セル剤等に混入して初物に投与することができる。本発
明の抗生物質化合物をこの上″）な役１ノ杉態に１剤化
する方法は動物学分野においＣよく知られ（いろ。個々
び）１Ｇ ’ノ甲（１′／Ｉ：田、Ｌ、処置しようとづ
る初物にとって適当な１日量に＆−１接関連４る繰の飼
卑゛１利用Ｑｊ＋凶沃化合物が含まれ（いへければなら
ない。 あらゆる形態の所望の抗Ｚｔ、物質をゼー２−１ンカｌ
レルに光頃することにより、容易番ご力ｌＬル剤を製造
４ることがぐきる。所望により、この抗′１物質は不活
竹粉末希釈剤、例えば庶糖、゛（゛ん粉あろいは精製し
た結晶セル［１−スで希釈し、ＩＪ ＩＬル（こ光＠す
るに都合のよい容轍とづるＳとがＣ゛きる。 この抗９物質の錠剤は、通常の薬学的なＩＪ ＞Ａ （
・製造することができる。錠剤の製造法（、Ｌよく知ら
れＣおり非単に発達した技術で・ある。錠１’ｉｌｌ
Ｍ ｆよｊ山常活性成分の他に基剤、崩壊剤、吸収剤、
結ｆ）剤おＪ、び滑沢剤などが含まれている。代表的＜
ｔＮ剤は乳糖、粉砂糖、塩化ナトリウム、でん粉および
ンンーット４ｃどて・ある、、Ｃん粉（ま７ルＶン酸と
としに良好な崩壊剤て・もある。まＩＪ、戸′ノリルＭ
１酸リトリウ１１お、ｌ、びスルホコハク酸ジオクｆル
ノトリウムなどの界面活性剤も使用することが（・する
−通常使用される吸収剤はでん粉および乳糖であり、ま
た炭酸マグネシウムは油状物質にも有用（・ある。 よく使用される結合剤はゼラチン、ガム、て・ん粉、デ
キストリン、および種々のセルロース誘導体である。通
常使用される滑沢剤はステアリン酸マグネシウム、タル
ク、パラフィンワックス、種々の金属石けん、およびポ
リエチレングリコールなどである。 本発明に係る抗生物質化合物は、徐放性巨丸剤の形で投
与することもできる。このような［丸剤は、抗生物質の
溶解を遅らせる手段を除いては錠剤と同様にして製造さ
れる。巨丸剤は長期間放出を保つように製造される。水
に溶解しにくい抗生物質を選択することによりその溶解
を遅らせることができる。巨丸剤の密度をあげ、前胃の
底に安定に保持するために鉄充填−のような物質を加え
る。 抗生物質を埋め込んだ不溶性物質からなるマトリックス
を使用することによって抗生物質の溶解を遅らＵろ、Ｌ
、？ ｂ ’ｔニーきる。例えば植物ワ・ノクス、精製
ミネラルｌノックス、ｄｉよび水不溶性φ合物質なと７
八石用Ｃある。 本発明に係る抗１１物質のドレンｆ剤Ｇ、Ｌ、水”Ｉ
ｆｌ’ｉ色の抗生物質を選ぶことにより容易に装造りろ
ことが（゛さる。へんらがの理由ぐ不溶ｆ］の抗牛物７
：１を使用したい場合にｆｌ、懸濁液の形に・Ｊること
が（−ｄる。あるいｃｒｔドレンｆ〜ＩＧよ、／＋ １
！［’学的にｎ行しくりる溶媒、例えばポリ丁チレング
リコールの１谷液の形に製剤化しくもよい。 不溶性の形の本発明に係る抗′４物質の懸濁液は、ぞの
抗／Ｉ物質の形に応じＣ、ピーフッ油、とうもろこし曲
、またはごま油のよ−）な稙物浦のごとｃ！ 、７１溶
ｌｖ、あるいはプロピレングリ−Ｊ−ルーＬＬはポリエ
チレングリコールのようなグリ」−ルチ′１、あるい（
を水を用いｃＵ４暫してもよい。 抗１１物質を懸濁さ″ぜておくために、適当イＮ／ｌ即
学的にム１容し１１る補助剤が必Ｌ（−ある。この、１
、）な補助剤とじ（（，１シツクナー、例えばカルホλ
−シメｆ ／Ｌ、 ｔル１１−ス、ポリビニルビ１］リ
ドン、しノチン、アルギネートなどを使用することがで
きる。 多くの界面活性剤は抗生物質を５ｉａｉさせるのに有用
である。例えばレシチン、アルキルフェノールポリエチ
レンオキシド付加物、ナフタレンスルホネート、アルキ
ルベンゼンスルホネート、およびポリオキシエチレンソ
ルビタンエステルなどは液状の非溶媒懸濁液を調製する
のに有用である。 さらに、場合に応じて、液体の親水性、密度および表面
張力に影響を与える物質を、懸濁液を調製するだめの補
助剤として使用することができる。 例えばシリコン消泡剤、グリコール、ソルビトールおよ
び庶糖は懸濁化剤として有用である。 懸濁可能な抗生物質は、動物飼育者に１！濁液として提
供してもよいし、また、使用前に希釈する抗生物質と補
助剤との乾燥混合物の形で提供してもよい。 本発明の抗生物質は、反舅動物の飲用水に投与づること
もできる。水可溶性の、あるいは水懸濁性の形の所望の
抗生物質を適当農水に加えることにより、飲用水への混
入を行なうことができる。 飲用水に添＋１１１４６ための抗り物質の製剤化１．１
．ルン１剤の製剤化ど同じ原理Ｃｈ ’ｆう。 本発明の抗生物質で動物を処訪する顧し大際的イ１方法
は、この化合物を飼料添１ノ１１物（、二渥へしく製剤
１に４ること（゛ある。通常の乾燥飼料、液状ｆｌ＝Ｉ
Ｆ＋およびベレット状飼利／ｉど、あらゆる’／ （
−ｆ ｔａｒ ｆ！ｇｌ料にこのＶＬ’ｌ物買を混入す
ることがて−さる８動物川飼利に薬物を入れて製剤化す
るＩＪ法ＬＬ ｉく知られ１いる。医療用餌料用の原￥
１１１７１賀ど１７（、ａ縮薬物プレミックスを調製す
るのが西通Ｃ゛あう、。 例えば曲型的む薬物プレミックスは、ｌレミックス１ポ
ンド当り約１００へ約／Ｉｏ（”ｌ（Ｉの薬物をＪ（右
している。鰻終飼利中におＩｊる希望される薬物の広い
′ａ亀範囲に応じＣ広い範囲のブレミツ′ノスが調製さ
れる。このプレミックスは液状で“あ）でも固状であ・
） −７’ ５よい。 治療にイｊ用な適切な嬶の抗生物質を含ＲＬ （いる動
物用飼料の製剤化は、１とし【泪ｃ１１Ｊ 、１、−〕
（１２、−われる。動物が摂取４６１日当りの飼Ｆ＋１
都および使用しようとりるプレミックス中の抗１１ルｉ
？１の濃度を考慮して、１匹の動物に投与したい抗体物
質の量を計算し、そして飼料中の抗生物質の適切な濃度
を計算しさえすればよい。 反異動物あるいは非反異動物の飼料技術において通常使
用される製剤化法、混合法、およびペレット化法などは
、すべてこの方法に使用し得る本発明の抗生物質を含有
する飼料を製造するのにそのまま適用することができる
； 抗生物質Ａ４１０３０複合体は食肉用の反榔動物におけ
る飼料利用効率を増大させるのみならず、発達した前胃
機能を持った授乳用動物に投らするとミルクの品質に悪
影響を及ぼすことなく、ミルク生産量に著しい改善をも
たらすことがわかった。 乳牛のような授乳用反異動物における飼料利用の必要性
および目的は、食肉用として飼育される反異動物のそれ
とは著しく異なっている。反為動物における揮発性脂肪
酸（ＶＦＡ）の生産は、イれがその動物の正常な維持、
およびその動物によって生産されるミルクの質および儲
に直接関係しているので極めて重要なことである。しか
し授乳用友祁動物Ｌ：、 ｊ目Ｘ−Ｃは、授乳のための
ｌネル髪゛−はミルクイ［Ｈにおいて最も制限された囚
ｆＣ−＋ｈる、。 ７レフー１・はミルク脂肪の合成に必要であるが、−ｈ
ブ［１じＡネートはグル１−スの（［産（ご使用され（
これはシクトースの合成に必要である）、ミルク脂肪の
１１−所にはあまりΦ東（・はない。／ル−トは脂肪形
成性とい）よりはむしろ糖形成竹てあり、イの脂肪形成
ｆ１は間接的なものＣあろ３．ミロ゛ＧらプＬレートは
、長鎖の脂肪酸合成、即Ｉ〕、ミルク脂肪の合成に利用
されるｌ１１１にま・ｒ７しＩ−ト１１位に分解され！
； ＬＪればならないからである。 従つＣ反為動物においてミル’／ ／ｉ Ａを増大さ１
４るには、ルテートおよびブチレー１への／１産をさは
ど犠打にづること％ ＜ ７１−１じ４ネートの（（４
を増大さけることが必要である。？Ｌ ｊ−ｈおＬびＩ
プレートの淵１ａがＬしく減少σろと、ミルク脂肪の含
φを極度に減少させることどなり、品質おＪ、ひ経済的
む而からミルク生産をより実能率なものにしＣしよう（
ミルクの価格は一部にはミルク脂肋含嬉によって決定さ
れる）。 ミルク生産における本発明の改良法は、脂肪含齢をさほ
ど変化させることなくミルクの蛋白質含量を増大させる
のが特徴である。この改良法は、抗生物質Ａ４１０３０
複合体のプロピオネートを増大させるに有効な量を授乳
反異動物に経口投与することからなる。 抗生物質Ａ４１０３０複合体は、反部動物に経口投与す
るのに便利な形に製剤化することができ、このような製
剤は飼料プレミックス、飼料付加物、リック（なめ物）
、水添加物などの形であってよく、所望により抗生物質
Ａ４１０３０複合体は１回の投与で長期量体々に放出す
る形の製剤とすることもできる。 プロピオネートを増大させるに有効な量の抗生物質Ａ４
１０３０？！合体を、発達した前胃機能を持った授乳用
反異動物に投与することにより、ミルク組成に悪影響を
与えることなくミルク生産を改善し得ることはインビボ
実験により確認された。 試験５ 出産したばかりのホルスタイン種の牛を使って２つの実
験を（１なつＩＪ、、最初の実験（・は、１２頭の生を
使Ｉ’ｌｌ シロ頭ずつの２つのグループに分＋ｊ ｊ
： 。 出産２週間後から、被験動物につい（１週間の予備期間
を開始し、この間すべての動物【こ［］常Ｃ７’）飼料
および水を１−ｔλ抗’ｉｔ ｖ！Ｊ質は投すしなか）
１．：。 づへての動物（こ、とうもろこしスレッジ〈斬軒１１貯
藏物）５０％、乾燥アルノ〆ルノト２０％ｄ３よび下記
に示４組成の濃縮物３０％からなる標準的へ ｌ！ｉｌ
専１ を ！ノ え Ｉこ ：濃 縮 物 成 分 パーヒント ポンド、／川・ン黄色
粉砕 ２３．５０ ４７（”）、０とうも
ろこし りん酸二ノ」ル １．５０ ３０．０シウ
ム ヒルイ＋ １．２５ ２５．（１
糖蜜（Ｄｅｌ＋ｙ ） ２．１５４３．０〜１
叶りんＭ Ｏ，１０２，０−ｊｌ−リウム 人Ω油ミール ４７．００ ９４０．（”）ビ
タミンＡ＋０３ ０．３５ ７．０プレミツク
ス（ Ｃａ −０１） Ｎ４ １） しタミンＥブレミ ０．１’０ ２．０ノク
ス（汀２） しレンブレミツ ０．０５ １．ＯシスＮ
ｆ３） 良 ｊ！ａ １．０（’） ２
０．０Ｌ１１ＶＡｉＩＪトリウム １．００
２０．０−ｐ、 １ ｌ！の乾燥 ２２．００
４／１０．０ゾルＩル（とう Ｌ）ろこし） １００．００ ２０００．０ （注１）ビタ、ミンＡおよびＤ３プレミックス１ポンド
はビタミンＡ ２００００００ＬＩＳＰψ位、ビタミ
ンｎ３ ２２５７５０ＵＳＰ単位を含んでいる。 ＜ ｔ１２ ）ビタミンＥプレミックス１ポンドはビ′
ＩミンＥ ２００００１ｔＪを含んでいる。 （注３）セレンプレミックスｌｋｏはセレンナトリ１ク
ムとしＣのし【ノン２（１０ｍｇを１（んでｄｉす。 セレンの計ｎされた分析顧は、プレミックスのみからの
もの（ある。 すべ（の牛には、休Φ（体Φｔま１過間の予備期間の開
始Ｅ１に測定した）の２．９５％のυ１合の標準的飼料
および以下に示す組成をｈ１４る１−ツノ゛ドレスと呼
ばれる製剤２ポンドを摂取さ１！／、、：：粉砕黄色
２０．００ ／１００．０どうｂろこし 粉砕−０とうｂ ３８．Ｏ（’） ’Ｖ６ｏ、
（”）ろこし穂軸 茎糖蜜 ２．５０ Ｆ＋０． Ｏ
からづ？ １１．００ ２２０．０人Ω
油ミール ２Ｆ＋、Ｏｎ ５００．０ビタミ
ンＡ＋Ｄ３ １．１０ ２２．Ｏｌプレミッ
クス Ｃ△−０１＞ （ｔ＋ １ ） 食 塩 （’）、４０
８．０１す１ｍ１ｌｌｉ
００
０ （１−−１００，００２０００，Ｃ） 叫１１）ビタミンＡおよび１１３プレミックス１１：ン
ドはビタミンＡ ２００００００ ｊＪ Ｓ Ｐ単位
へ、ビタミン０３ ２２５７５０ＬＪＳＰ甲位を含（１
している。 １週間の予備用間中、すべての牛に対照トップドレスを
与えた。処置期間の開始日から被験初物（、−、トップ
ドレスに抗生物質Ａ４１０３０？Ｓ１合体（試験化合物
）を混合したものを８週間与えた。 祠照鼾には、予１期間中のトップドレスと同じ、−物を
添加しでいないトップドレスを摂取させた。 ｌ・１照用トツ１ドレスおよび抗生物質Ａ４１０３０（
合体を含有しているトップドレスは、上記の標・１的ｒ
ｉｌ料の朝の摂食時１時間以内に、１日２ポンドの割合
で実験動物に摂取させた。処置群は抗生１々１賀を（ｉ
（１０１（＋／頭／日の割合で投与された。 Ｙ記の方法で同じ実験を繰り返し実験２とした。 実験１および実験２について平均的な１日当り１１）ミ
ルク１産、ミルク組成およびミルク生産の持続性を分析
し表−２７（こまとめ１＝ 、持較竹碩（１α賀明間中
のミルウシ１産品を、予備用間中の’Ｐ均的生産吊（・
割ったしの”（゛ある。この持続Ｈ顧は、処置開始前の
ものと比較した場合の処置後の効ψかとの程亀であるか
を示している。通常のドＩ続↑ＩＩ ｌｌｌ’１の明持
舶は約９４−・約９６％であ） ／、： 、い・ｒれの
実験にＪ＞いでも、Δ４１０３０複合体を摂敗しｌど／
［は高い枯続ｆ［稙を示しｔコ。これは処置（こよる顕
箸な反応を表わづものである（即し、処置群（は対照群
に比べ、予備用間中のミル９′１イが凸く頓持されてい
る）。 表−２７のミルク組成を分析ツると、ミルク脂肪におい
ては処置群と非処置群との間に差がないが、蛋白質＠
ｉ ４Ｊ ３．者の方が優れていることがわかる。ミル
ク蛋白質が増加することは、たとえその増加がわずかで
あっても、ミルクから製造されるチーズの縁を著しく増
大させるので゛非常に望ましいことｅある。 抗生物質Ａ４１０３０複合体および因子Ａ、Ｂ、Ｃ，Ｄ
、Ｅ、ＦおよびＧは、既述した実施例に記載の方法で分
離して動物用飼料に使用ケることができる。また、所望
ならば、Ａ４１０３０抗士物質を生産した後、全醗酵ブ
ロスを乾燥しぞの乾燥詠を直接飼料または飼料プレミッ
クスに混合しでもよい。 さらに本発明に係るＡ４１０３０抗生物質〜合体および
その因子群は、亜硫酸化フェノールホルムアルデヒド合
成タンニンである合成タンニン削（例えばＡ、Ｊ、
＆ Ｏ，Ｊ、Ｐｉｌａｒ Ｉｎｃ。 （Ｎｅｗａｒｋ 、 Ｎ、 Ｊ、 ）からＴｒｕｔａｎ
ＲＪＲｅｇｕｌａｒの商品名で発売されているもの
）と混合ｆることができる。この抗生物質と合成タンニ
ン剤との混合物、抗生物質−合成タンニン複合体は成分
に分離することなく、上記の動物用飼料補助剤に入れる
ことができる。 反ｊａｌｌｌ物のような経済的価値を有する動物には全
生涯を通じて、種々の成長促進剤、病気の予防剤・１メ
よび治療剤を投与するのが普通である。このよ）へ薬物
は組合せて使用されることが多い。本発明方法もその他
の処置と同時に行なうことができる。 既述したように、抗生物質Ａ４１０３０複合体およびＡ
４１０３０因子Ａは、前胃中のアセテート生産に比較し
てプロピオネート生産を改善さぼる。このような処置は
、盲腸で植物性の繊維物質を醗酵させる単胃動物にも適
応することができるここで甲冑動物とは、繊維性の植物
性飼料を消費し、盲腸で微生物のｓＩ醇により少なくと
もその一部を消化゛する動物を言う。ＮＷＡにおける醗
酵の化学的１０セスは前胃における醗酵のものと類似し
辷ものである。 食物の一部を６賜における醗酵（こよ−）Ｃ間化ｊする
代表的な動物は、馬、豚および兎である。このような動
物における全飼料利用効率は、プロピオネート／ラレデ
ート比を有利に変化させる本発明、 の抗生物質を経
口投与することにより改善される３馬や兎は、全消化過
程の大部分を盲腸にお１ノろ醗酵で行なう代表的な動物
であり、従って本発明の抗生物質はこれらの動物にと・
）て特に利用Ｃある。
物および従来知られていない微生物、ストレプトマイセ
ス（Ｓ ｔｒｅｐｔｏＩＶｃｅｓ ）科の微生物を培養
づることにより該抗生物質を製造する方法に関する。 これらの新規な化合物は米国特許第４３２２３４３号お
よび４３２２４０６号に記載されＣいる抗生物質に類似
している。 病原微生物の、抗生物質に対４る耐性株が発生する可能
性があり常にその驚異にさらされているので、新規な抗
生物質を開発する必要性がある。 特にダラム陽性菌であるスタフィロコッカス（５ｔａｐ
ｈｙ＋ｏｃｏｃｃｕｓ ）属およびストレプト」ツカス
（５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）属に属する病原菌は、
ページリンや■リスロマイシンのような通常使用される
抗生物に対して耐性を有する（例えばＷ、０゜Ｆ ｏｙ
ｅ、 Ｐ ｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｍ ｅｄｉｃ
ｉｎａｌ Ｃｈｃｕ＋１ｓｔｒｙ。 ６８４〜６８６頁、１９７４年参照）。 本発明者らはＡ４１０３０？！合体およびその囚１′群
△、口、０．１）、「、１−おにびＧあるい１．１−ｆ
れらの薬学的に４容し得る塩類が（＋効なり’を微１１
物剤（あることを見い出した。 これらの新規な抗り物質は従来知られてい／ｆｉいＳ目
゛ｃｐ＋ｏｎ＋ｙｃｅｓ ｖｉｒｇｉｎｉａｅ Ｎ
ＲＲｌ ’＋ ２５）２５またほぞの親株（ある
Ｓ ｔｒｅｐｔｏａ＋ｙｃｅｓ ｖｉｒｇｉ旧ａｅ Ｎ
１７Ｒ１１５１ｂ６を同化し得る疾′Ａ源、窒本源お五
〇無Ｉａ塩類を含りする培養培地ぐ好気何重することに
Ｊ、り製造りることがＣさる１、これらの微４ ？’ｌ
＜ｔト＊、ｔ 因’ｆ Ａ 、 １１ 、 Ｃ、’
Ｄ、［−１［第５１、ヒ（１と命名されたいくつかの抗
生物質囚１￥がらへる抗り物質複合体（二」ンプレック
ス）を４．産づる。 簡略化の！、めに、培養し１．：微生物、Ｓ Ｉｒｅｐ
ｌｏｉｙｃｅｓ ｖｉｒｇｉｎｉａｅ Ｎ ＲＲＬ １
２５２５は本弁明賃らの研究全°ｃ ＜、ｔノｊルｆｖ
Ａ４’１０３０．４とＱ名した。３ ｔｒｅｐｊｏ
ｍｙｃｅｓ ｖｉｒｇｉｎｉａｅ Ｎ ＲＲ１１５１ｈ
６１．ｔ ７’ｉ々（１） ？ｊｌ 入’ｉ”（’
Ｌ、ｔ Ａ ４１０３ （１トｆａｉｌ 名Ｌ ／、：
、。 個々の因子ｉＹのみ外吸収スペクトルを添（Ｊの図面に
承り。Ｊ ’ｔｈわ］）第１図しＬ Ａ ／Ｉ １ （
１３０囚了Ａ（Ｋ ［３ｒ法）、第２図はＡ ４１０３
０囚ｉ’Ｂ（ＫＢｒ ａ）、第３図はＡ４１０３０因子
Ｃ（ＫＢｒ法）、第４図はＡ４１０３０因子Ｄ （ＫＢ
ｒ法〉、第５図はＡ４１０３０因子Ｅ （ＫＢｒ法）、
第６図はＡ−４１０３０因子Ｆ （ＫＢｒ法）、第７図
はＡ４１０３０因子Ｇ （ＫＢｒ法）を夫々示している
。 本明細書において、および発酵技術分野において使用さ
れる用語「複合体」は、−緒に生産された個々の抗生物
質因子の混合物を意味する。発酵による抗生物質の生産
について詳しい当業者には容易に理解されるように、抗
生物質複合体中に占める個々の因子群の割合および量は
、発酵条件および菌株に応じて変動する。 インディアナ州、インディアナポリスで採集された土壌
サンプルから初めて単離された５ｔｒｅｐ−ｔｏｓｙｃ
ｅｓ ｖｉｒｇｉｎｉａｅ （Ａ ４１０３０ ）培
養株から化学的に誘導した突然変異株であるカルチャー
Ａ４１０３０．４は、イリノイ州ベオリア、Ｎｏｒｔｈ
ｅｒｎ Ｒｅｃ＋１ｏｎａｌ Ｒｅ５ｅａｒｃｈ Ｃｅ
ｎｔｅｒ、 Ｕ。 Ｓ、 ［）ｅｐａｒｔｇａｅｎｔ ｏｆ Ａｇｒｉｃ
ｕｌｔｕｒｅ、 Ａｇｒｉｃｕト＋ｕｒａｌ Ｒｅ５ｅ
ａｒｃｌ＋ ５ｅｒｖｉｃｅ１．：寄託され、ス１〜ツ
クカル／ｌＩ−、＋レクシー］ンの一部とｈっ（おり、
ぞこからＮＲＲ＋１２５２５の番号で・誰でｂ Ｌれを
利用４ることか（゛さる。本発明の複合体を生産する親
株、Ｓ ｔｒｅｐｌｐｍｙｃｅｓ ｖｉｒｇｉｎｉａｃ
（Ａ ４１ （１３０） ｂＮｏｌｌ＋ｅｎ＋
ｌぐ ｅｇｉｏ＋＋ａｌ ｔ−＜ｅｓｅａｒｃ！
； Ｃｅ＋＋Ｉｅｒに寄託され（おり寄託ａｉ号ＮＲ
ＲＩ １ ｂ１ｂ６の番シツ（誰（゛も利用ζることが
′Ｃ−さる。 カルＬＩｌ−Ａ４１０３（’）、４１Ｊノｊルｆ ｓ−
−Ａ １１１ （’） 、’） ０をミｈ ン−１’
シン０１次い−（゛Ｎ−メ１ルＮ’ −二Ｉ＝ｎ−Ｎ
、、 −ｔ−ｒ」ソゲ７ニシン（［！理りることにＪ、
り得ることが（・きる。 カルｆ！−−Ａ４１０３０をぞの他の突然塵巽、六発処
理にか４Ｊることにより、３１ｒｅｐ［ＯｍｙＣＯ３ｖ
ｉｒｇｉ＋＋ｉａｅ ＮＲｔｔ ｌ １２５２５と同
じ生合成能をし）たその他の株をｌ（産し１！４ること
は当業名には明らか（゛あるはｆである１、ミ１ヘマイ
シン０以外の適当な変異誘発＃ｉには、ｊ′クリノラど
ン、ＩクリシンＡレンジ、Ｌブシウム１１−］ミドおよ
びその他の化学物負が含まれる。 Ｎ ＲＲＬ ｉ ２
５２５を得るだめに、ミドマイシンＣとともにＮ−メチ
ルＮ′−二トローＮ−二トロソグアニジンを使用したが
、その他の既知の変異誘発素、例えば紫外線高周波、放
ｔ１４活性物質の放射線、Ｘ線およびその他の化学物質
などを、突然変異を誘発するのに使用することができる
。 ３ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ａｖｉｄｉｎｉｉ ＡＴ
ＣＣ２７４１９Ｓ ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｃｏｌｕ
ｉｂｉｅｎｓｉｓ Ａ Ｔ ＣＣ２７４２５、Ｓ ｔ
ｒｅｐｔｏ−ｙｃｅｓ ｇｏｓｈｉｋｉｅｎｓｉｓ
Ａ Ｔ （〕 Ｃ２、’３９１４．３ ｔｒｅｐ
ｔｏｉ＋ｙｃｅｓ ｑｒｉｓｅｏｌａｖｅｎｄｕｓ
Ａ Ｔ ＜。 Ｃ２５４５７、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ １ａｖｅ
ｎｄｕｌａｅ Ａ ＩＣＣ８６６４、Ｓ ｔｒｅ
ｐｔｏｉｙｃｅｓ ｔｏｘｙｔｒｉｃｉｎｉ Ａ
’ｆＣＣ１９８１３、およびＳ ｔｒｅｐｔｏｉｙｃ
ｅｓ ｖｉｒｇｉｎｉａｅ １Ｇｒｕｎｄｙ、Ｗｈｉｔ
ｍａｎ、 Ｐｄｚｏｋ、 Ｈａｎｅｓおよ（ＩＳｙｌｖ
ｅｓｔｅｒｌ ９５２ 、ＡＴＣＣ１９８１７との同
時培養に基づいて、Ａ４１０３０は３ ｔ ｒ ｅ ｐ
ｌ’ ＯＩｌｌ Ｖｃｅ５ ｖｉｒａｉｎｉａｅの１
株であり、カルチＶ−へ４１０３０．４は３ ｔｒｅｐ
ｔｏｍｙｃｅｓ ｖｉｒｇｉｎｉａｅの菌株から化学的
に誘導された突然変異株であると分類された。３ｈｉｒ
ｌｉｎＱおよびＧｏｔｔｌｉｅｂのｒ Ｍ ｅｔｈｏｄ
ｓｏｆ ＣＩ＋ａｒａｅ＋ｃｒｉｌａｔｉｏｎ ｏ
ｆ ５Ｉｒｅｐｌｏｏ１ｙｃｅｓＳ １＋ｅｃｉｅｓ
ｌ （Ｉ ｎｔ、Ｊ、 ５ｙｓ１．Ｉ（ａｃｌｅｒ
ｉｏｌ、ｌ ６（３）−１３１３〜３４０貞、１９６６
ｉｔ ）にＨＩ３切、きれＣいるｆ、払Ｊｊよび−ｆ段
、ならびに追加的ＩＣ試Ｍを１を川Ｌ／、：、ｈＬＦｖ
−Ａ４１０３０．４Ｌ、Ｌ。 ｌ ＲｅｒｇｅＶ ’ Ｓ Ｍａｎｌｌａｌ ｏｆ
［）ｅｌｅｒｍｉｕ旧１ｖ（！Ｆｌ ａｃｔｃｒｉｏ
ｌｏｇｙ ｌ （（３版 、 Ｒ、［−、３１１
ｃｔｌａｌｌａｌｌ 、ＩＪ、ひＮ 、 Ｆ−、Ｇ
ｌｌ１ｂＯｎＳ、 Ｔ Ｉ＋ｅ Ｗ １ｌｌＩａ
ｌｌｌｓ ａｌｌ＋ＩＷｉｌｋｉｎＳ （’、Ｃ
”）、 、 Ｂａｌ目ａｄｏｒｅ、Ｍａｒｙｌａｎ
ｄ ） ：お、Ｊ、びＳ ｆｒｉｌｌ ｉ＋＋ｇお
五〇Ｇ ｏｆ ｌ Ｉ ｆｅｌｌ、 ｌ Ｃ００１’ｌ
ｆ！Ｉ’１ｌｆｉｖｅＪ）ｅｓｃｒｉｌ＋ｔｉｏｎ
ｏｒ Ｔ ｙｐｅ ５ｔｒａｉｎｓ ｏｆＳ ｔｒ
ｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｌ （Ｉ旧、 Ｊ 、 Ｓｙｓ＋
、１１ ＋＋ＩｅｒｉｏｌＩｆｌ＜２）、１７８０．１
９６８年）中の１記の菌株に）い（の記載とも比較した
。 ノノルＦ ｔｒ−△ｌＩ １０３０．４１．Ｌいがなる
培地中（し気中菌糸（４Ｊメ、五〇胞子を’４ ｒｇ−
： Ｌ ＜ｔいの（川−認の仝（の菌株ど巽っＣいる。 Ａ４１０３０ＬＬＪ、＜ １１違り、ｌ ｒｙ 気中菌
糸体ｄｊ ヨ（Ｊｌｌ、り７晒を作りそれらはともに」
イル状（・あり鉤形１（メＪ、びループを示づ。Ａ４１
０３（’）は、第１次形いと１． （は、Ｐｕｄｂａｉ
らｒＡ Ｇｕｉｄｅ ｆｏｒ ｔｈｅｔｌｄｓｓｌ「
１ｃａｔｉｏｎ ｏｆ ５ｔｒｅｐｒｏｍｙｃｅ
ｓ ＡＣＣＯｒｃｌｉｌｌｇＩｔ−Ｉ ５ｅｌｅｃ
ｔｅｄ Ｑｒｏｕｐｓ Ｊ （Ａ１１＋）１．Ｍｉｃｒ
ｏｂｉｏｌ。 ・５．５２〜７９ｎ、１９５７年）のらせん状（ｓ）′
ｊルーｌに荀メし７、第２次形態とじ（はｐｒｉｄｉｌ
ａｌｌｌらのＴ ｅｔｉＴｌａｃｕｌｌｌｌ −Ａ ｐ
ｅｒｔｕｍ （ＲＡ ＞グル−ノに１１“Ｉ置づる。Ａ
４１０３０．４は気中菌糸体も胞ＹＯ産牛しない。 底ｍ 種々の培地中（・の］３ルヂＶ−△４１０３０、Ａ４１
０３０．４およびＳ 、 ｖｉｒｏｉｎｉａｅ Ａ １
− ＣＣ１ｊ） ８１７の発會特竹を表１に示す。 色名はＩ Ｓ ＣＣ−Ｎ Ｂ Ｓ Ｃｅｎｔｒｏｉｄ
ｃｏｌｏｒＣｈａｒｔｓ ３ ｔａｎａａｒｄ Ｓ
ａｍｐｌｅ Ｎｏ 、 ２１０６（Ｎａｔｉｏｎ
ａｌ Ｂｕｒｅａｕ ｏｆ ５ｔａｎｄａｒｄｓ
、Ｕ、Ｓ。 ［） ｅｐａｒｔｉｅｎｔ ｏｆ Ｃｏ５ｇ＋ｅｒｃ
ｅ、 １９５８年）およびＣｏ１ｏｒ ｌ−１ａｒｉ
ｏｎｙ Ｍａｎｕａｌ 、第４版、（ＣｏｌｏｒＳｔ
ａｎｄａｒｄｓ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ、Ｃｏｎｔａ
ｉｎｅｒ Ｃｏｒｐｏ−ｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ａ
ｍｅｒｉｃａ 、Ｃｈｉｃａｇｏ、 Ｉ １ｌｉｎ
ｏｉｓ、１９５８年）に従って決定した。 カルチャーＡ４１０３０．４の生理学的性質を標準的な
手法に従って調べた。観察された性質および特性値を表
２に示Ｔ０ カルチャーＡ４１０３０．カルチャーＡ４１０３０．４
およびＳ ｔｒｅｐｔｏａｙｃｅｓ ｖｉｒｇｉｎｉａ
ｅ Ａ Ｔ ＣＣ１９８１７の炭素利用パターンを、最
ＩＦ１度が１．０％となるように、濾過滅菌した炭＊ｍ
を加えたｌ５ＰＮｏ、９基礎培地を用いて比較した。 ３０℃で１４日間インキュベートした後観察を行なった
。結果を表３に示す。 表２ Ａ４１０３０．４の生理学的性質 Ｕ下の培地でのフライド様 色素の生産： ３、チロシン寒天斜面 メラノイド様色素（Ｉ
ＳＰ＄７”ｉ なし硝酸塩還元
反応陰性ゼラチンの液化 反応
陰性ＮａＣ１耐性 ３％スターチの
加水分解 反応陰性スキムミルク
一部加水分解生育温度 １０
−３４°Ｃ表３ Ａ４１０３０、Ａ４１０３０．４およびＳｔｒｅｐｔｏ
ｍｙｃｅｓ ｖｉｒｇｉｎｉａｅ ＡＴＣＣ１９８１７
の炭素利用性 注）−一利用性なし ＋＝利用性あり ±＝一部利用 １３ｅｃｋｅｒ ら の １ノ？人（△ ｐｐｌ
１Ｍ １ｃｒｏｂｉｏ１． ］土。 ４２１−４２３．１９６４年）に従つ（微′１物の加水
分解した全細胞を用いてジアミノピメリン酸巽Ｍ体を測
定した１その結果を以十に７１％ ’ｌ。 越−Ｍ 枯 ψ−２，６−
シノノミノピリン酸の異性体 １．、 ｌ−異ゼ１体カ
ルｆＩ□−Ａ／１１０３０、力Ｊしｆｌ・−八４１０３
０．４およびＳ ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｖｉｒｇｉ
ｎｉａｅ Ａ Ｔ ＣＣ１９８１７の類似性および相違
Ｎ、ｊを表７１に示（ｊｌ。 （へ名は既述したようにして決定し、形態は前記（１）
ｌ’ ｕｄｈａａ＋らの指ｉｔ ニＪ、 ッだ。 △４″１０３０４″１０３０複載されたことのない微＋
１物Ｓ ｔｅｒｐｌｏｉｙｃｅｓ ｖｅｒｇｉｎｉａｅ
Ｎ ＲＲｌ−１５１１） ６ 、 Ｓ ｔｒｅｐｔ
ｏｍｙｃｅｓ ｖｅｒｇｉｎｉａｅ Ｎ ＲＲＬ
１ ２！１２５またはぞれらのＡ４１０３０生産能
を有４）変責株を、同化し得る炭素源、窒素源および無
ト、嘩龜類を含りする培Ｊ１１８地中、液中好気培基条
例１・（多聞の抗生物質活性が得られるまで培養づ−る
（−とにより製造することができる。抗生物質活性ｉＬ
Ｌとしてブ［ｌス中に見い出されるが、少量の抗生物
質活性は菌糸体にも存在する。Ａ４１０３０両合体は発
酵混合物から、濾過によって菌糸体、・１へわらビオマ
スを除去することによって最も筒中１ご分離ｅきる。菌
糸体は通常捨てる。ついＣ抗′１物賀複合体は、好まし
くは適当イｆ吸着剤と、例、イばメタノール／水（１／
１）の混合物を溶出剤、′シ（用いたカラムク［１ント
グラフイーにより、縞過した発酵ブ〔ｌスから分離Ｊる
。 θｆ適／、４吸鴇剤には、セファデックス樹脂、親水性
の不溶↑１１ ［し１１）−シー／’）ＩＩンｌヘゲツ
ノイー用媒質〈架橋ｒ′■ストランｉこよ−）（製」６
される゛）および−（ＳＫゲルの他、夫木、ＩルミＪ、
）′４ンおよび力ｆＡン父険樹脂、シリカゲル、ボリノ
ｌミド、カルボλシメ＝ｆル１２）し【］−ス、スルシ
ンｄｉよひシビールベンＵンの多孔性Ｉボリンー１例λ
ばタイＩイＡンＩＩ ｆ）−２０、アンバーノイ１〜Ｘ
ＡＤ樹脂およびＦ Ｓ −８６５のよう４ｆジＪＡノ
イ［・樹１１ｉｉ ／ｈとが半けられる。タイメイＡン
樹脂は−４化学［−業株＞’Ｓ会拐の製品Ｃ−ある。）
Ｉンバーライｉ・Ｘ △ １）樹 脂 （ま Ｒｏｔｖ
ａｎｄ １ｌａｓｓ （〕 イ ノ ｌ
ル ノ イア７、ペンシル八ニア）により製造され（い
る。ジノΔノイ１〜樹脂はｌ） ｉａｍｏｎｄ Ｓ
ｈａ＋ｕｒｏｃｋ （レッｌ’ウッド山、カリノ４ル
ーア）の製品ぐある。、Ｐノ／／−ｉツクス樹脂はｐ
ｈａｒＩＩｌａｃｉａ ｌ−ｉｎｅ Ｃｌ＋ｅｍｉｃ
ＩＩＩＳＡ ｒ３ （ＬＪ ＋＋＋＋５ａｌａ、スウｌ
−ゲン）テ製造、、Ｌ−ｉｔ ｃ イる。Ｔ Ｓ Ｋグ
ルは［−、Ｍ ｅｒｃｋ （Ｖ） ａｎｎｓｌａｔｌｌ
） ｄｉよひｌ（１ｏ＝Ｒａｄ （２２（’） ０Ｗ
ｒｉｑｂｌΔＶｅ、ＩＩ ツ／ ［ント、カリノ１ル−
フ 、９４８０４＞の製品（゛ある。 このＳ ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｖｉｒｇｉｎｉａｅ
Ｎ ＲＲＬ Ｉ ２ ’＋２５または３．ｖｉｒｇ
ｉｎｉａｅ Ｎ ＲＲＬ １５１５ Ｇを発育させＡ
４１０３０複合体を生産するための培養培地は、多くの
培地のいずれであつ−Ｃもよい。 しかし経済的な生産、最高収量、生成物の簡単な単離を
達成するにはある種の培地を使用するのか好ましい。こ
れらの培地には同化し得るＦ２糸源、窒素源および無機
塩類が含まれていなければならない。好ましい炭素源と
しては例えばデ１ストリン、でんぷん、マンノース、グ
リセロールおよび綿実油などが挙げられる。炭素源の級
適瀧度は約２〜３重量％である。好ましい窒素源とじＣ
はあらびき大豆、大豆粉、ピーナツ粉、魚粉、ニクＩ＼
ブトン、豚血液粉などが挙げられる。 微生物の発育および生合成に必要な必須微ＦＡｊ」素は
、培地中の他の成分に不純物として含まれ（いるのが普
通である。しかしナトリウム、／Ｊリパノム、マグネシ
ウム、カルシウム、アンモニウム、クロライド、カーボ
ネイト、ホスフェート、スルフェート、ニトレートイオ
ンなどを与え得る可溶性の栄Ｗ１無機塩が１をさらに培
養培地−Ｌご入れるのか好ましい。 発酵培地にツウで−ン８０〈油状の液状ポリオ４シ１
ｆレンソルヒタンｔ］Ａレイン酸］スＩルｌ ＣＩ
Ａ ｍｅｒｉｃ（Ｉｓ、ｌ ｎｃ、 （Ｗ ｉｌｍｉ
ｎｇｌｏｎ、Ｄ ｔ！１． ）の製品）を２・〜・４％
の濃度（・添加４ろと収φが約：’、 ０ （）％増加
りる１、シかしこの条＋！１ト（゛はＡ４１ｒ’＋ ３
０抗生物質の９離がガしい場合かある。 掘撮ノラス１培養によって少量のへ４１０３０抗！＋物
質をｌｒ／ることかできるが、多義のＡ ４１ ｒ）３
０抗１１物負をｌ［Ｒりるにはタンク中Ｃ−液中りｆ気
性培養を行なうのが好ましい。タンク培＆ ｉ、ｍ １
．Ｌ増殖接種物を使用（ｌるのが好ましい。増殖接種物
を％Ｊ造りる（こは、少量の培Ｉｋ培地に胞ｒまたは菌
糸体ノノグヌンＩ・を接種する。このようにしＣ新訂（
・活発に増殖しでいる培養物が得られる。ついＣ１（二
の増イＪ接神物をより人さｈタンクに移し、過当＜ｉ’
Ｍ間インキュヘーシ」ンづるとＡ４１０３０ＩＪ’Ｌｑ
物ｔｌが最泗収吊Ｃ生産される。。 増殖培地用の接種物４得るためのし）１）のｌ。 法は、胞子の水性懸濁液の代りに凍結乾燥ペレツ１〜を
用いることである。凍結乾燥ペレットは既知のｈ法で製
造することができる。凍結乾燥のための胞子塩懸濁液の
１造法は、滅菌蒸溜水の代りに滅菌生血清を使用する他
は水性胞子懸濁液の調製ン人と同じＣある。 へ１１１０３０生産微生物は約１０〜約３４℃の広い湿
度範囲で発育することができる。約３０℃の時にＡ４１
０３０抗生物質複合体の生産が厳島になるようである。 好気付液中培養法においては通常のことであるが、滅菌
空気を培養培地に分散導入する。微生物を効率よく増殖
させるためには、タンク生産に使用される空気の容ｉは
、１分当り、培養培地１容憾当り空気的０．１〜約０．
５容量（ｖ／ｖ／ｌ）であり、約１００〜約３０ Ｏｒ
＋）−で攪拌するのがよい。発酵培地１００ｆｉを含有
する１６５℃の容器を用い、約２００ ｒｐ−で回転す
る羽根車で攪拌した場合の最適吹き込み率は約０．２５
ｖ／ ｖ／ｍである。 抗′４物質ｉ、’、 ｔ’ｌは通帛約４ ｆ３時間世に
あられｔｌ、ＲＭ ＩＩＱ 間中／ｌ＞ ＜ トｂ ｌ
４ ｉｌ １Ｌ’ｔ 間（ｆ Ｉ’ｌ Ｊ ６ 、、
ｋＪ ４％ （’３抗生物質′１産は約９６ ＋］：
’１間から約１２ （”） １１．’１間の発酵１１．
’１間ｔごＩ】’ｊねれる。 Ａ４１０３０ｂ’ｔ’ｔ ｖＪＪ質ノ’１ｆ１１．ｉ、
発酵中、Ｆ３ 。 ５ｕｂｔｉｌｉｓを用い１．：、 １人拡散？人か、５
ｌａｐｈｙｌ。 Ｃ０ＣＣＬＩＳ ａｕｒｅ＋＋ｓ Ａ −Ｉ’ Ｃ，Ｃ
９１１４を用い／Ｊｌｉｔ Ｉｔｊ 法によつ（七−タ
ー（Ｊる。二とができる。 本発明（こ係る抗′ト物質複合体、１５よびその個々の
因子（１、Ｓ 、ｖｉｒｇｉ＋＋ｉａｅ Ｎ ＲＲ１
ｉ ５１ ｈ ６まＩ：ｔ、Ｌｓ 、ｖｉｒｇｉｎｉａ
ｅ Ｎ ＲＲｌ ’ｌ ２５２５のいｆれかを用い、
香しい記１ｕ、ｌｌＩ問および培地成力りど、大筒的に
でｊしい発酵条件１・で製造される。（２かし７コノＪ
、）へ条ｆｌ ト（はＳ 、ｖｉｒｇｉｎｉａｅ Ｎ
Ｉ＜ ｌ＜ ｌ Ｉ２５２５の（４１）か抗生物質
複合体の／ｉ Ｉｖ−響かいくらか多い」、）（・ある
。 Ｌスト（，１，；施例をγ・げ（本発明をさら（、゛１
細に。）２明４るが、本発明）まこれらの実施例（こ１
１）（限゛ル゛されるしの（−ｉ、Ｌイ：ｕ’ｎ Ｘ鳥〔−第１段階接種物の調製 ′、） ｔｒｅｐｔｏｉｙｃ ｅｓ ｖｉｒｇｉｎｉ
ａｅ ＮＲＲｌ １ ２ ５ ２ ５Ｊ５、」、（
ｆ ５ｌｒｐｌｏｉｙｃｅｓ ｖｉｒｇｉｎｉａｅ
Ｎ ＲＲｌ−１５１０６を寒天斜面培養するために使用
−４６培地を以１・（、挙げる。 〕−１１１１１−一一一、−（；、、−７，−ｍ−！］
［−２，＝ｋ１１ストリン（ン４．１＞
１０．０内ｉ Ｉ＜ｊ Ｉ−’ｒ ス
１
、 ０＾？木加水分解ツノげイン（汀２＞ ２．０
′１肉エキス １．０（：ｏＣＩ２
・６目２０ ０．０１寒天
２０．０１１１２イＡン水
水を加え−Ｕ１ｆｆｉ＋ｉＬ １） Ｍａｔ
ｈｅｓｏｎ Ｃｏｌｅｍａｎ ＆ Ｂｅ１
ｌ。 ＼ｏｒｗｏｏｄ、 Ｑｈｉｏ ４５２１２（ｉＬ ２）
Ｎ −Ｚ−Ａｌｉｎｅ Ａ （ｔｌｕｌｋｏ ３
ｈｅｆ−ｒｉｔｌｄ Ｃｈｅｍｉｃａｌ （’、
ｏ、、 Ｍｅｍｐｈｉｓ、 Ｔｅｎｎ、＞調製され
た培地のＩ）Ｈは６．５′ｃあり、オー］〜゛ｌレーノ
ｋか【Ｊる前に５Ｎ水酸化ノ１〜す・クム水溶？１７を
用いて７．３１こ調節した。オー１−クレープにＩζｉ
Ｉｚ後の培地の１１＋−１は６．９７”あった。 人々の黴ノ：物の胞ｆ４．１記の成分（・調製し！′年
大斜面に田神し、この斜面培１１ｔ！！を約３０て〕の
（晶麿（・約６１１間インＶＩべ−１〜した。１次いＣ
成熟ｌ。 た培養物の１に滅菌蒸溜水を注ぎ、滅菌りを使）Ｃ胞子
および菌糸体を（Ｊがした。１１１られｌＪ胞ｆ懸濁液
１成を使つ（増殖培地５戯に接種した１１曽ｈ“１縞地
川の接種物を１！Ｊる別の１１法１．Ｌ、木竹胞ｊ′懸
濁液の代りに凍結乾燥ベレツｌ−４用いること（あろ１
ＮＲＲＩ １２’、）２５の／：＆＋の増殖１６地の
組成ｉ、Ｌ ＩＸトの通り（パあ）た。 處□ １ 量〕−韮−１］−グル
１−ス ２０．０あうひさ人（ｌ（
ま／、： １．１人＋１ヲ粉）１５）、０とうもろこし
浸イ＾液 １０ｉ）ＯａＣＯ３２，０ 水道水 水をハ１１え（１２
ＮＲＲＩ ’Ｉ り’Ｉ ５６のための増殖培地の組成
（、↓ 。 以１・の通り（あ） ／Ｊｕ 威−−−−一−−−−二領 １ニ−Ｌ二
虹斤グルｌ−ス １ｈ、０デキスト
リン ２０．０あらびき大豆（または
大豆粉） １５．０とうもろこし浸漬液
１０．ＯＣａ ＣＯａ ２．０
水道水 水を加えて］ｉ！。 未調節の培地１）Ｈは５．５であり、これをオートクレ
ーブにかける前に５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液でｐＨ６
，５に調節した。オートクレー１にかけた後の培地のｐ
Ｈは７．０であった。 各増殖接種物を培地５０戴を含有する２５０戴の広ロエ
ーレンマイヤーフラスコに入れ、直径２インチの円弧で
２５０ ｒｌ）ｌで回転するシェーカーく振盪器）上、
約４８時間、約３０℃でインキュベートした。このイン
キュベートした培地は、小さな発酵器（接種物は発酵培
地容量の約１％である）に接種する、かあるいは大口の
培養物を生産するための増殖培地と同じ組成の第２段階
の培地に接種するのに使用する。 の 生産培地５０−に、１％（０，５ｄ）の上記のインキュ
ベートした増殖培地を接種、シ・た、生産培地の組成は
以ドの通りである。 灰−一一一−−丸 ａ 、”ｚ＞デ
キストリン（ンＥｌ） ３０．’０あらびき
大豆 ６．０ＫＺＨＰＯ４１，０ ＦｅＳＯ４・７Ｈ２００，００５ ＭＱ ８０４ ・ ７ＨｚＯ１，ＯＮａ Ｎ
Ｏａ １．０Ｃａ ＣＯ３２
，０（ｆｆ２） 脱イオン水 水を加え（１え（）主
１）デキストリンはタピオカデキストリンであっても、
ポテトデキストリンであってもよい。 （注２）ＮＲＲＬ１２５２５の発酵のためにはＣａ Ｃ
Ｏ３の１１麿は４．Ｏｏ／ｊ！であった。Ｋ２ＨＰＯ４
は水に溶解し、この溶液を別に滅菌し、オートクレーブ
（高１’Ｅ滅菌）にかけたその他の培地成分に添加した
。 インキュベートした発酵培地５０戴を２５０鱈のエーレ
ン？イヤーノラスコに入れ、直径２インチの円弧で２５
Ｏｒｐｍで回転する振盪器上、約４〜５日間、約３０
℃でインキュベートした。 ３ ｔｒｅｐｔｏｉｖｃｅｓ ｖｅｒｇｉｎｉａｅ Ｎ
ＲＲＬ １２５２５は上記の生産培地を用い、１６５
リツトルおよび１６００ガロンのタンクを用いた大規模
な発ｅＭ模でインキュベートした。 接種した生産培地は、培地１００２を含有する１６５乏
の発酵タンク中、約３２℃の温度で約２１０Ｒ間（８，
７５日）発酵さ「た。この発酵培地には０．２５ ｖ
／ｖ ／ｍの割合で滅菌空気を吹込み、通常の１ｇｌ痒
器を用いて約２００ ｒｐｍでＷ＆拌した。この大規模
なＮＲＲｌｌ、２５２５の発酵物からＡ４１０３０抗生
物質を、以下に述べる方法で分離した。 支１［［ｉ Ａ４１０３０抗生物質群の分離実／１ｉ
ＶＡ１に記載した方法で得た全発酵ブロス（４２１５ｉ
を、フィルタープレスに濾過助剤（ハイフ・Ｏ・スーパ
ーセル、ケイソウ土、Ｊ ｏｈｎｓＭａｎｖｉｌｌｅ
Ｐｒｏｄｕｃｔｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を入れて
、１過した。濾過したブロスを、ダイアイオン１１Ｐ−
２，０’（ビーズ状の多孔質スチレンジビニルベンピン
コポリマー、三菱化学１業）１０Ｃ１をａ！４するカラ
ムに４２／分の流速で流した。カラムに水３０（１次い
でメタノールと水の混合物（１：３）を４℃／分の速さ
で流すことにより洗浄した。 次いでメタノールと水の混合物（１：１）を、６乏／分
の速さで流して溶出し、１００２のフラウン」ンを集め
た１、各フラクションの生物活性を分析した。３ａｃｉ
ｌｌｕｓ ｓｙｂ口１ｉｓを接種した可大平板上、ペー
パーデｆスク分析によりバイＡアツヒイを？ｊな一〕だ
。フラクシニ」ン１は捨てた。フラウン」ン２−１５を
集め、減圧下ζ・濃縮し、得られた１１編物を凍結乾燥
すると粗抗生物質複合体２２０ｑが得られた。 この複合体’＋１０（ｌをメタノールと水の混合物（１
：１）５２に溶解し、水酸化ノトリウム水溶液（−１）
ｔｌ １０に調節し濾過した。この濾液を予めメタノー
ルと水の混合物（１：１）で平衡化ｌまた粗しファデッ
クスＧ−５（’）（親水性の不溶すりのモレギュラーシ
ーアクロマトグラフイー用媒体、架噛ｆキストランで製
造されたもの、Ｐ ｈａｒｉａｃｉａｌ ｉｎｅ Ｃｈ
ｅｓｉｃａｌｓ、 Ｐ ｉｓｃａｔａｗａｙ、Ｎ Ｊ
Ｏ８８５４がら販売）を入れた３（ｌのカラム（０，２
ｘ１１１１）に５０戴、７分の速さで流した。カラムを
メタ７−ルと水の混合物（１：１）で５０７１β／分の
速□、覧ぐ溶出し、３１．のフラクションを集めた。 ｌ−（ａｃｉｌｕｓ ５ｕｂｔｉｌｉｓに対して活性を
有覆るフラツジ」ン１３〜２４を集め、減圧下で濃縮し
、凍結乾燥するとＡ４１０３０抗生物質複合体３５．７
９が得られた。 本発明によって生産される抗−１物質は本明細書（、−
おいては便宜的にＡ４１０３０抗生物質群と菖）。こ（
７）Ａ４１０３０複合体はＡ４１０３０因子へ、Ｂ、Ｃ
，ｒ）、Ｅ、ＦおよびＧと命名される個′Ｚの因子群を
含んでいる。以下の記載におい（、・ｆの有用性を説明
するにあたりｒＡ４１０３０抗′１物質−１′％なる用
語は、Ａ４１０３０複合体のみな・）ず、Ａ４１０３０
因子Ａ、Ｂ、Ｃ，ｒ）、Ｅ、Ｆ１メＪ、びＧからなる群
から選ばれるいずれかをも意味・ｌるものとηる。 発酵から７種もの抗り一物質因子群が回収され、これら
は混合物４１（ＪわらΔ４１０３（’）１９合体としで
得られる。、Ａ４１０３０１ａ合体中ノ囚７’ ＭＹ
０．１１１１合いは、発酵茶ｆ１に応じＣ変動りること
ｉ、ｌ Ｍ ”４ Ｇご理解されるＣ・あろう。個々の
因子１！Ｙ Ａ、［３，０、［）、Ｅ＝、（−１３よび
Ｇは、以下に述べるｆｊ沫て゛個々の化合物に分離づる
ことができる。Ａ ４１ ｏ：（０複合体は水、希酸水
溶液、希塩基水溶液、メタノールと水の混合物、■タノ
ールと水の０合物、ジメチルホルムアミド、ジメチルホ
ルムアミドと水の混合物、ジメチルスル小キシド、ジメ
チルスルホ１シトど水との混合物、アセト−トリル、／
’ １！トン、酢ＭＩチル、テトラヒト［］フラン、メ
Ｆレンクロリドなどの溶媒に可溶である３゜以トに、Ａ
４１０３０因子群の分離、これよ（・に確認されたぞれ
らの物理的性質およびスペ勺１−ル特性をポリ。 ｋｉｌｌ △７１１０３０因子Ａ（７）ｉｌｌｌｉｌｌ
￥施例２′Ｃ−得たＡ４１０３０複合（Ａ８（Ｊを、水
：アセト−トリル：塩化ナトリウム（８４：１６：７Ｑ
／ｊｌｉ）からなる溶１１２００πβに溶解して濾過し
た。この濾液を、米国特許第４２９９７６３号の実施例
６および７に記載されている特別の方法（−１本発明寵
らの研究所ｅ調製した１０〜２０ミ′）１］ンのしＰ１
／Ｃｗ＋逆相シリカゲル４１！、を充填したスＴンレス
スチール力ラム（８×１００Ｃ１ｌｌ）Ｃ５入れた。こ
のノコラムはＣｈｒｏｍａｔｏｓｐａｃ Ｐｒｅｐ −
１００１ニツト（Ｊｏｂｉｎ ’ｙ’ｖａｎ、１６−
１８Ｒｕｅ ｄｕ Ｃａｎａ１９１１６０ＬＯｎ（ｌｊ
ｕｌｌｅａｕ、Ｆ ｒａｎＣｅ ）の 部ぐある。カラ
ムを水ニアセトニトリル：塩化１トリウム（８４：１６
：２ ｇ／ｊ！ｌの混液Ｃ６０戴／分の速さぐ溶出し、
４８０７ｊｕ２のフラクションを集めた。溶出液はタイ
プ６光学単位を備えた１ｓｃＯｔデル（）Ａ −５ｔＪ
Ｖ Ｅ ニター（Ｉｎ−：＋Ｉｒｕｌｅｎｔａ目ｏｎ
５ｐｅｃｉａｌｔｉｅｓ Ｃｏ、、 Ｌ、１
ｎｃｏＩｎ。 ＮＦ６８５０５）を用いて、２５４ ｒｖでモニター１
、た。、集めたフラクションにつき分析用の高速液体り
［ｌマトグフノイ−（ＨＰＬＣ）（上記の方法Ｃ本発明
者らの研究室で調製した１０ミクロンの１１）−１／’
Ｃ記を充填した４、６Ｘ２５０ｍｍのステンレススｆ−
ル／Ｊラムを使用）を用い（囚ｆΔの存ず１を分析した
。試料はしＡタインしＪ゛ルア１２０インジ１／／シー
ｌンバルフ（Ｒｔ＋ｅｏｄｙｎｅ ｌ ｎｃ、。 Ｂｅｒｋｅｌｅｙ、 ｃ△９４７１ （’） ）を用い
で２１人した。１水ニアセトニトリル：酢酸ナトリウム
（８１：１９ ： Ｏ，０３Ｍ）からなり、′１ＫＦｆ
Ｉ酸（’１．１ｌＩｒ口調節した溶媒をミル！ヘン・ロ
イ・ジ−ｌプレックス・ミニポンプ（ｌ ａｂｏｒａｔ
ｏｒｙ Ｄａｔａ Ｃｏｎｔｒｏｌ、 Ｄ １ｖｉｓｉ
ｏｎ ｏｆ Ｍｉ目ｏｎ Ｒｏｙ Ｃｏ、、 Ｒｉｖ
ｅｒａ Ｂｅａｃｈ。 Ｆ Ｌ ３３４０４ ）を用い−（１戴／分（１２００
ｐＳｉ）′Ｃ″流した。因子Δはｌ Ｓ Ｃ（’） ｔ
、−ル」ｊΔ５ Ｕ Ｖ検出器を用いて２５４ ｒｖ
で検出しＩＪ０ノ゛ツクシー」ン１〜５１は捨てた。因
子Δに冨んだフラクション５２へ・７９を集め、減圧下
で濃縮し容量を５００ ｆｆ１Ｌどした。この濃縮液を
水酸化Ｊトリウム水溶液でｐ）１８．２に調節し濾過し
た。この縞液を予め水で平衡化した１００戴のダイアイ
４ンＨＰ −２０樹脂を入れｌＪツノラム（２，８Ｘ２
２ＣＩｌ１１に１５１１β１．７分の速痘で充填した。 塩化銀沈澱法により塩素が洗液中に検出されなくなるま
Ｃカフ１１を水（蟻酸でｐＨ２，５に調節したもの、４
００．ｔｇ）で洗浄した。次いで水ニアセトニトリル（
８：２）の混液で、１５戴／分の速さで溶出し、１にの
フラクションを集めた。このフラクションのＦ３ａｃｉ
ｌｌｕｓ ５ＬｌｂｔｉｌｉＳに対する活性を分析した
。フラクション２を冷凍することにより生成した結晶性
因子Ａを濾取した（３８９．６ｍｏ）。フラクション１
およびフラクシ」ン２からの濾液を夫々減ｆＩＴ−で濃
縮し、凍結乾燥すると夫々因子Ａが７３１．８＋ｅｏお
よび５１４醜ｇ得られた。 抗生物質Ａ４１０３０因子Ａは白色の結晶性固体である
。Ａ４１０３０因子Ａのおおよその元素分析値は以下の
通りである：炭素５６．４４％、水素３．５８％、窒素
８．１１％、酸素２３．２０％、塩素８．２９％。ツイ
ールドブソープションおよｑプラズマデソープション質
饅分析の結果、Ａ４１０３０因子への分子量は１２３１
であった。 Ｉｊ本分析および分子−に基づいて因子Ａの実験式はＣ
＃＃ Ｈ，（ＣＩ ３ Ｎ ？ Ｏｓと決定された。６
６％ジメチルホルムアミド水ｍＨ中で因子Ａを電気滴定
した結果、１）Ｋａ値が約５．５３．７．６０および１
０．３７である３個の滴定可能基の存在が確認された（
さらに１ｏ、５以十のｐＫａ鎗のものが存在する可能性
あり、初期ｐＨ７，８３＞。 抗生物質Ａ４１０３０因子Ａのｉｔ旋光度は以下の通り
である：（α） 、−１９，６° （Ｃ＝９゜Ｏ１ジ
メチルスルホキシド中）。Ａ４１０３０因子ＡのＫＢｒ
法による赤外吸収スペクトルを第１図に示す。以下に示
す顕著な吸収極大が観察された：３４４８−３２２６
（強、ブロード）、１６５３（強）、１６１０（弱）、
１５８７（中）、１５１５（強）、１４８８（弱）、１
４２９（中）、１２２７（強）、１１３９（中）、１０
６４（強）、および１０１０（強）ｃ［１゜酸性、中性
、および塩基性条件下におけるメタノールと水（１：１
）の混合物中でのＡ４１０３０因子群Ａ−Ｇの紫外線吸
収スペクトルを表５に挙げる。 表５ Ａ４１０３０因子群のＵＶスペクトル 抗生物質Ａ４１０３０囚子Ａは、アルコ１−ルと水の混
液、ジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミド、ジ
メチルスルホキシドど水の混液、ジメチルホルムアミド
と水の混液、希酸水溶液および希塩基本溶液に可溶であ
る。 以下の物理化学的データに基づ＜Ａ４１ （１３０因子
Ａの構造式は以下に示す通りである。 尚、バイオアッセイおよび＾速流体り［］マドグラフィ
ー分析の結末、因子Ａがカルチャー△４１０３０．４に
よって生産される抗生物質因子群の約９４〜約９６ｍ
ｌ ％ ヲ占メ、囚−７８，Ｃ，Ｉ”）、Ｅ、Ｆおよび
Ｇが残りの約４〜約６φ量％を占めでいることがわかっ
た。 因子Ａ ＯＨ 支ｆＬｆＬ上 Ａ４１０３０因子Ｂの１１１１Ａ４０１
３０櫓合体１．０ｇを、水ニアしトートリル：塩化フト
リウム（８５：１５：２ ｇ／６）からなる溶媒３５
戴に溶解し、この溶液を、２５〜４０ミク【１ンのｌ
ｉ Ｃｈｒｏｐｒｅｐ ＲＰ −１８（シリカゲルに化
学的に結合させた炭化水素相（Ｃ，、）、 Ｍ Ｃ／
Ｂ Ｍ ａｎｕｆａｃｔｕｒｉｒ＋ｇＣｈｅｍｉｓｔ
ｓ、 Ｉ ｎｃ、。 Ｃ１ｎｃｉｎｎａｔｉ、０１」）を本発明省らの研究室
で光頃じた４、７ｘ４５ｃｍのＭ １ｃｈｅｌ −Ｍ
１ｌｌｅｒ＾速但圧液体クロマトグラフィー（トＩ Ｐ
Ｌ Ｐ Ｌ、 Ｃ）ガノスカラム（Ａｃｅ Ｑｌａ
ｓｓ、 Ｉｎｃ、、Ｖｉｎｅｌａｎｄ、Ｎ、）０８３
６０）に注入した。試料を溶解するのに使用したのと同
じ溶媒系を使って、１−Ｍ１バルブレスビス［ヘンポン
プ（Ｆ １ｕｉｄ Ｍｅｔｅｒｉｎｇ 口１ｃ、。 ０ｙｓｔｅｒ Ｂａｙ 、ＮＹ １１７７１ ）により
、２１藪／分（１００ｐｓｉ）の速度で溶出し、２１戚
のフラクションを集めた。溶出液はｌ５ＣＯＥデル（ｊ
Ａ −５ｔＪ Ｖ検出器を用い、２８０ｎｍでセニター
した。ツノクシ」ン１〜１８３は捨Ｃた。囚０３に富ん
だツノクシ」り１８４〜２４５を合せ、減汁１・（”
２ Ｆ＋ ｉＲまで濃縮した。同様の精製を７回行な、
（Ｉｌｌた濃縮物を合せ、水で１．４乏に希釈し、ｐめ
水Ｃ平衡化したダイアイオントＪＰ−２０樹脂ＩＣ）０
戴を入れたカラムに、８〜１０戴／分の速１な（入れた
。塩化銀沈澱法により洗液中に塩素が検出されなくなる
まで水（６００ｙｉｒｉ ）でカラムを洗浄した。水と
メタノール（１：１）の混液で、８・〜１０７１ｆｆｉ
／分の速度で溶出し、３００πβのフラクションを集め
、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ５ｕｂｔｉｌｉｓに対する活１１
を分析した。フラクション１〜５を合せＣ減［ｆトＣ濃
縮し、凍結乾燥すると粗因子Ｂ５２３ＩＩ１ｇがｉｌら
れた。 ２回の操作ぐ冑た粗因子８５５０ｍｇを水ニアセトニト
リルニジ１チルアミン＜７５：２５：０゜０３Ｍ、リン
Ｍ′ｃ ｐ８７．８にａｍしたも（７）） かＣ）なる
溶媒１０戴に、溶液になるまでテトラブチル水酸化アン
モニウムを加えることにより溶解しＩ−ｏこの溶液を２
５〜４０ミクロンのＬｉＣｈｒＯ−１１’（：Ｄ Ｒ
Ｐ −１８（前記参照）を充填した２、８＝： ５９
ｃ−のＭ １ｃｈｅｌ −Ｍ １ｌｌｅｒ高速低圧液体
クロントゲフッｒ −（ＩＩＰＩ Ｐｌ、 Ｃ）ハフス
ｈ−ツムに：ｉ−１人した。ｌＮ１１ポンｌを使−）【
、試料の溶解に用イタものと同し溶媒系（５ｙｉｒｉｔ
／’５＞ ＜３５）ｐｓｉ ）の速度で溶出した。溶出
液はｌ Ｓ Ｃ（Ｉ Ｌ−ｌルｔＪ Ａ−５１Ｊ Ｖ検
出器を用い２５４ｎｌＣｔニターした。 集めた２ ７ ｙｚｉｌのツノクシ：］ンについて、１
０ミクロ＞ａ）１ｉ Ｃｈｒｏｐｒｅｐ ＲＰ−１８（
市販の逆相シリカゲル、Ｆ、 、 Ｍ ｅｒｃｋ （Ｏ
ａｒ＋ｎ５ｔａｄｔ、 Ｇｅｒｍａｎｙ ）社製）を充
填した４、６ｘ２５０ｍｌｌｌのスｊンレススチール力
ラムを用いた分析用１１１ｒＥで、因子Ｂの存在を分析
した。試料はレオダイン［ｆルア１２０インシエクシ」
ンバルブを使って２１人した１、水：アレ１〜ニトリル
；ジブチルアミン（８２：１８ ： ０．０３Ｍ）から
４１つ、リンＩり ’−（” ａｌｌ ２ 、５に請願
した溶媒を］ンスタメト・リンク■ポンプ（Ｉ Ｄ Ｃ
−１ａｂｏｒａｒｏｒｙ ｐａ［ａ ｃｏｎｔｒｏｌ、
Ｄ １ｖｉｓｉｏ＋＋ ｏｆ １ｙｌｉｌｔｏｎ
Ｒｏｙ Ｃｏ、、 ＲｉｖｉｅｒａＢｅａｃｂ、
Ｉ−１３３４０４＞を用い（１濾 分（７５０ｐｓｉ）
で゛注入した。因子Ｂは、１．、 Ｄ Ｃスペクトロヒ
ニター■司変波艮ＩＪ Ｖ検出器を用いＣ２２！＋ｎｌ
′Ｃ″検出しｌＪｌ、ＲＰ’−８カラムから溶出した、
因子Ｂに富んだ９９９戴〜１２９６πβのフラクシＩン
を２００厄になるまで濃縮した。この濃縮物’＝ ｋ、
ｌ ００戴まで希釈し、リン酸でｐＨ２，０に調１ｌｉ
） Ｌ、、イＡンン一カーとして塩化ノトリウム（１１
１＋１Ｊ・戴）を加えた。この溶液を、Ｆめ水で平衡化
したダイアイオンＨＰ−２０樹脂１００πβを入れにカ
ラム（２，８Ｘ２２ｃｍ）に、２０戴／分の割合（−充
填した。カラムを、塩化銀沈澱払により塩素が検出され
なくなるまで、蟻酸でｐｔ−ｔ２．５に調節した水（５
００ｙｍ ）で洗浄した。次いで水とｔ′シト二１〜リ
ル（６：４）１℃で、３０戴／分の速度ｅ溶出した。溶
出液を減圧下て・濃縮し、凍結乾燥づると粗大ｆＢ２９
５．６１０（ｌが得られた。 ＦＣ得た因子Ｂ２８５１１１１をジメチルホルムアミ１
ど水＜４：６）の混液３０７１βに加熱溶解し、室ｉ１
．．ｊ 、ｌぐ冷却し、次いで冷凍ケると因子［３の沈
澱が１成した。この沈澱を濾取し、アセトンで洗浄し減
１！下Ｃ・乾燥するど因子８８４１１（＋が得られた。 抗生物質Ａ４１０３０因子Ｂは白色の固体であり、以ト
のおＣ（５」、その元累分析艙を有する；炭素５８．５
４％、水素４．２１％、窒素８．６３％、塩素５．＜３
６％、酸素２２．６６％（斧から）。 因子Ｂを６６％ジメチル小ルムアミド水溶液中Ｃ゛電気
滴定した結果、約５．６および７，５のｐＫａ［ｉを杓
づる２個の滴定可能基の（ｆ合が確認された（さらに１
０以」のｐＫａＶｉを有するもσ）の０７１する司能竹
がある、初期ＤＨ６，２２）。 高速原子−１撃マススペクトルによる分子１よ約１１９
７ｅあ一〕だ。元素分析および分子＆Ａに基５く因子１
３の実験式はＣ１２ｆ」ｇｚｃ ｌ ２ Ｎ ｚ Ｃ）
ａである。 ＫＨｒ法による抗生物質Ａ４１０３０因子Ｈの赤外吸収
スペクトルを第２図に承り。以トの顕髭な吸収極太が観
察された： ３４４ Ｂ〜３２２６〈強、ブＬ】−ド）
、１６５３（強）、１６１０（中）、１５８７（弱＞、
１５１５（強）、１４８８（弱）、１４２９（中）、１
２９０（弱）、１２２７（強）、１１３９（中）、１０
６４ （強）、および１０１０（強） ｃｒｌ 。 中性、酸ｔ１１および塩基性のメ゛タノールと水の混液
（１：１＞中のＡ４１０３０因子Ｂの紫外線吸１１シ極
人を表５に承り。 抗生物質Ａ４１０３０因子Ｂの溶＠性は因子△と同じで
ある。 観察された物理化学的データに基づ＜Ａ４１０３０因子
Ｂの橘造式は以下の通りである：因子Ｂ Ｈ 天」ｉ」（ｂ−Ａ ４１０３０囚子Ｃの中間Ａ４１０３
．０複合体９．Ｏｇを水ニアセトニトリル：塩化ｔ１ヘ
リウム（８３：１７：２ｏ／λ）からなる溶１２００戴
に溶解し、この溶液を濾過した。濾液を、実施例３に記
載した方法で本発明名らの研究所Ｃ・調製した１０〜２
０ミクロンのＬＰ−１・Ｃ６逆相シリカゲル４℃を充填
した８×１００ＣＩのステンレススチールカラムに充填
した。 ＣＩｌ＋”０１ａｌＯ３ｐａｃ Ｐ ｒ１３Ｄ −１０
０ユニツトの一部Ｃイｈるこのカラｌいを、試料の溶解
に使用したのと同じ溶媒系で、６０１β／分の速度で溶
出し、４８０ｔｅｌのフラクションを集めた。溶出液は
ｒｓｃｏモＩルｔＪ Ａ −５ｔＪ Ｖ検出ＦＡ’Ｆｒ
用イＴ ２５４ ｎｍｒ 七二ン一シた。染めたフラク
ションにつき、２５〜４（’） ミ’７ ｊｌ ”、ｉ
のｌ ｉ Ｃｈｒｏｐｒｅｐ ＲＰ−８を充填した（１
．８Ｘ３０ｃｍのＭ ｉｃｈｅｉＭ １ｌｌｅｒガラス
カノムを用いた分析用ＨＰ Ｌ Ｐ Ｌ Ｃで因子Ｃの
存在今分析した。Ｆ’ＭＩポンプを使って水：アヒトニ
ｉ・リル：塩化ブトリウム（８４：１６：２０／乏）Ｊ
）溶媒を４鱈７．′分で流した。因子Ｃはｌ５ＣＯモデ
ル（）Ａ −５）ＬＩ Ｖ検出器を用いて２ ”、）４
ｎ＋ｉ ＜゛検出した。ノウクシ−１ン１〜２７は捨
てＩこ。囚−ｆ Ｃに冨むフーンクシ］ン２８−、５２
を東め、減Ｉｔ ｈ （’ り０ ０ ７７β 【こ
′ａ 編 し ｌこ 。 同様の精製を２回（１なって冑ｌご濃縮液を合口（−過
し、予め水Ｃ平衡化した１００杼のダイアイＡン目Ｐ
−２０（耐１１１１を入れたカラムに１０虐λ ５）の
速度で光填した。塩化銀沈Ｊ１２法により塩素か洗液中
に検出されイ１くなるまで・ノｊフムを水（２Ｉ２）で
洗浄１７だ。次いＣ水とアセトニトリルの混液１乏で−
、１５πβ，′分の速度で゛溶出を（−ｉ １．；″）
だ。溶出液を減圧下でａＩＩｉｌｉシ、凍結乾燥づると
囚γ０に富んた混合物２．７！′）０が得られた。この
混合物１．２５Ｑを水；アセトニ１〜リル：ジノｆルｌ
ノミン＜８０： ２０ ： （１．０３Ｍ、リン酸（ｐ
ｔ１７．８に調節したもの）からなる溶媒？（、 、、
ｚに、溶液にイするまＣ・テトノブ天ル水酸化アンし一
１′ツムを加えることにより溶解した。試１１を、２！
′）〜４０ミク［１ンのｌ ｉ Ｃ ｈｒｏｐｒｅｐ
Ｒ Ｐ − ８を光填した２、８×５９ＣＩＩｌのＭ
ｉｃｈｅｌ−Ｍｉ ｌ ｌｅｒカウスカノカラ１１人し
、ＦＭＩポンプを用い、試料の溶解（４−使用しｔこも
のと同じ溶媒で、４戴／分の速度ｅ溶出した。溶出液は
ＩＳＣＯモｆルｊＪ Ａ＝ ５ ｔＪ Ｖ検出器を用い
て２５４ｎ■でモニターした。集めた２ ８ｙｚ１２の
７ラクシコンにつき、１０ミクロンのＮｕｃｌｅｏｓｉ
ｌ Ｃｍ （市販の逆相シリカゲル、Ｒ ａｉｎｉｎ
Ｉ ｎｓｔｒｕｉｅｎｔ Ｃ Ｏ 、、 Ｉ ｎｃ，
、Ｗｏｂｕｒｎ，Ｍ Ａ０１８０１）を本発呻；者ら
の研究室において充填した４．６Ｘ１５０−一のステン
レススチー１しカラムを用いた分析用ＨＰＩＣにより、
因子Ｃの存（［を追跡した。試料はレオダインｔデル７
１２０インジＪクシ］ンバルブを用いて注入した。ミル
トン・ロイ・ジＬ’ｆレックス・ミニポンプを用いで、
永ニアセトニトリル：酢酸ナトリウム（８１！：１Ｑ
： ２ （１／１２ ）からなり氷酢酸で０１６に調節
しｌ、溶媒を１鱈／′分で供給した。因子ＣをＩｓｃＯ
ｔｆル１８００可変波艮ＬＪ Ｖ検出器を用いて２２艷
） ｎｍぐ検出した。囚ＰＣに冨んだ４，２℃〜５。 １２の溶出液を減圧下で５００戴に濃縮した。 同様の精製を３回行なって得た濃縮物を合１ＩＣ溶解し
、リン酸を＋ｎ＋えて ＩＩＬＩ １ 、 ７ ＋−
Ｔ Ｌ，た。塩化ノトリウム（ １ ｍ（１・戯）をイ
４ンンーｈ−とＬ （加えｌ，：。この試料を、ｊ；め
水で中衛化しＩ、、 ｌ ００戴ダイ／イＡン１１−２
０８１脂を入れたカラム（２．８Ｘ２２ｃｏ＋）に２
０；Ｗβ，・分の割合（光填した。カラムを、塩化銀検
出法によ【〕洗液中に塩素が検出され％ くなるま（・
、ｐ目２．５）の′８Ｍ水溶液（ ３ ０ ０ １β）
で洗浄した。次いで水と〆し１・−ｌ〜リル（（′１：
４）の混液１乏で、３０戚 分の逓反Ｃ溶出した。溶出
液を集め、減１１Ｆで濃縮し凍結乾燥づるど、ある稈度
粘製されＩＪ囚因子、０。 ８７りが１【Ｉられた。この生成物を水；アレ］・−Ｉ
・リル：シｆチルアミン＜８０ ：２０ ： ０．０３
Ｍ、リン酸で １１ ７ 、 ８にｗ４節したもの）か
ら＜（る溶媒２０〃βに、溶液となるよぐテトラ／チル
水酸化７ン七ニウ１１庖加えることによし〕溶解した。 この試料を、前ｇｅ． （’） ２ ５ 〜４ ０ ミ
ツ１−１ンのｌ− ｉ Ｃ， ｆｉｒ。 ｐｒｅｐ Ｒ ｆ）−８を光填した２．８Ｘ５９ｃｍ
のＭ ｉｃｈｅｌ Ｍ ｉｌｌｅｒガラスカラムに入れ
てり＋＋ｚｉーグラノイーしＩζ。２．４５乏から３．
２０乏の浴出液を減圧下で濃縮して５００πβとした。 同様の精製を２回行なって得た濃縮物を合せ、既述した
ようにダイアイオンＨＰ −２０樹脂を含イ１するｈ５
ムで脱塩した。溶出液を減圧下で濃縮して凍結乾燥する
と因子０６８８Ｉ（］が得られた。 この生成物６７８１１（＋を水とアセトニトリル（６：
４）の混？８ｉ６０１１βに加熱溶解した。この溶液を
冷ＩＪ１シ、冷凍すると因子Ｃが沈澱した１、この沈澱
物庖繍取し、アセトンで洗浄し減圧ド（・乾燥すると因
子Ｃ４２Ｂ＋ａｇが得られた。 抗生物質Ａ４１０３０因子Ｃは白色固体であつ（、以上
のおおよその元素分析値を右ＩＪる：炭素／１８．８７
％、水素４．３９％、窒素６．１６％、１）１１桑６．
９６％、酸素３３．８１％。６６％のジヌＪルホルムア
ミド水溶液中で因子Ｃを電気滴定（、た結巣、約５．５
および７．１のｐＫａ（ｉを持、 ｌ： ２個の滴定可
能基の存在づ゛ることが解った（さらにｐＫａ値が１０
以上のものが存在する司ｆｉｔ：竹がある、初期ｐ）１
６．．６）。高速原子衝撃ンススベクトルによる観察さ
れた分子慟は約１３９３ぐあ・）だ。九Ａづ）４１ｉお
よび分子艶に基づく因子Ｃの実験式はＣよや［１□Ｃｌ
３ Ｎ ｙ ＯＺ！である。 Ｋ Ｒｒ法により測疋した抗生物質Ａ ４１０３０因子
Ｃの赤外吸収スペクトルを第３図に承り。以下の顕著な
吸収極大が１！整された：３／Ｉ４８〜３２２６（強、
ブ［１−ド）、１６５３（強）、１６１０（中）、１Ｆ
ｉ８７ （弱）、１５０４ （強）、１４８１（弱）、
１／１２９（中）、１２２ｏ（強）、１’１３６（強）
、１０６４（弱）、１ｏ５３（中）、および１０（”）
５（強）ｃｍｌ。 中ｆ１、酸性および塩基性のメタノールと水の混１（１
：１）中Ｃ′ｆｆｉす定した紫外線吸収極大を表１）に
示す。 抗１物賀へ４１（’）３０囚子ＣｔＪ、因子Ａ トｆ？
Ｉ Ｉ；溶媒に可溶である。 観察された物理化学的データーに基づくＡ４１０３０因
子Ｃの構造を［ス下に示す： 因子Ｃ Ｈ メこＬ例り石− △’ｌ １０３０囚了（）の甲−Ａ４
１０３（’）複合体６．０（］を水：ノ’Ｉ２＋−！・
リル：塩化ノ］〜リウム（８３：１７：２Ｌ乏）からな
る溶媒２００ ＋Ｊβに溶解し、得られｌご溶液を１過
した。この濾液を、実施例３に記載したＩ】法により本
発明者らの研究室で調製し／、： １０・〜２０ミリミ
ク［］ンのＩＰ−１／Ｃ，逆相シリカゲル４℃を充填し
た８ ｘ １００ Ｃ−のスｊンレススｆ−ルｈラムに
入れＩコ。ＣｈｒＯＩａｔＯ３Ｉ）ａＣＰｒｅｐ −１
１つ０−１−ツトの部品ぐあるこのカラムを、試料の調
製に使用し、ｋものと同じ溶媒ｒ、６０ｗｅ 、７分の
速醜で溶出し、４８０戴のフラクシ−」ンを集めた。溶
出液はｌ５ＣＯモデルＩＪ Ａ −５１Ｊ Ｖ検出器を
用い（−２５４＋１ｍ’Ｃｔ ニターした。ｉ メタ−
７）’／ シ３ ンにつき、２５−４０ミクロンのｌ
ｉ ＣｈｒＯｐｒｅｌｌ Ｒト）−８を充填した０、８
ｘ３０ｃｍのＭｉｃｈｃ１Ｍｉｌｌｅｒガ）スノｊ−）
ムを用いた分析用１１ Ｆ）ｌ ト月−Ｃにまり因子［
）の存在を分析した。［〜１１ポンｌを用いて水二）’
ｔ？ｌ−ニトリル：ＩＭ化すトリウム（８４：１６：２
リ／！！、）からなる溶媒を４ノｉｉ：）の速度で供
給した。因子りはｌ５ＣＯモデルＬＪへ一５ＵＶ検出器
を用いて２５４ ｎｌｌで検出した。 フラウン」ン１〜３４は捨てた。因子りに富んだノラク
ション３５〜５３を集め、減圧下で約５００、ｖＩ２に
なるまで濃縮しｔこ。 同様の精製を２回行なって得た濃縮物を集め、水ぐ３ｉ
！、に希釈し、予め水で平衡化した１００πβのダイア
イオント（Ｐ−２０樹脂をカラム（２，８：＜２２ＣＩ
）に充填したものに、８〜１０戴／分のｉ！度で入れた
。このカラムを、塩化銀沈澱法によ番）塩素が洗液中に
検出されなくなるまで水（３００妊）で洗浄した。次い
で水とアセ１ヘニトリル＜ ６ ： ４ ）の混液から
なる溶媒１乏で、８〜１０２、′カの速度（−溶出した
。溶出液を減圧下で濃縮（２、凍結乾燥すると因子りに
冨んだ因子群混合物！、３３（ｌが得られた。 この混合物１．１５ｇを水ニアヒトニトリル：２； ７Ｆルアミン（８０： ２０ ： Ｏ，（’）３Ｍ、リ
ン＋ｉ０ （−ｐＨ７、８に調節したもの）からなる溶
媒２”）Ｉだに、溶液となるまでテトラブチル水酸化ア
ンし−ラムを加えることに」、り溶解した。この試寧４
を、２５−、４０ミク［１ンのｌ−ｉ ＣｈｒｏＢｅｐ
ＲＰ８を充填した２ 、 ８ Ｘ ５９ ｃ＋ａｆ７
）Ｍ ｉｃｈｅｌ−Ｍ １ｌｌｅｒカラス７Ｊツムに充
填し、試料を溶解するの（ご用（、ＸＩＪものと同じ溶
媒で、ＩＩＭＩポン１を使−） ’Ｃ５Ｈλ／分の速度
で溶出した。溶出液をｌ ３ （’、 ０ シデルｊｌ
Ａ−５Ｕ Ｖ検出器を用いて２５４ ＋１１−ｔ？
ｔニターした。集めた２５顧のフラウン」ンにつ３．１
０ミ／７１１７）ｌ ｉ にｈｒｏｐｒｅｐ ＲＰ−１
８（市販の逆相シ１．）カゲル、［、Ｍ ｆ４ｒＣｋ
（Ｄ ａｒｍｓＩａｄｔ、 Ｇ ｅｒｍａｎｙ） ）を
充填し／；：４ 、６Ｘ ２５．＋ｕ＋のステンレスス
Ｌ−ルカラムを用いた分析用ｔ＋ ｐ ｌ−ｃ ｔ、二
上り因子［）の存在を分析した。試１はしＡダイン［デ
ル７″１２０インシＩクションバルブを使−〕Ｃｉ１人
した。水；アレト二１−リル：ジブチル７ミンｌＯ：２
０：０．０．’１Ｍ）からなり、リン酸で １１１１２
゜５】に調節しｔ、：溶媒をミルｌ〜ン・［１１′・シ
Ｌブレ゛ノクス・ミニポンプを用いＵ ０ 、７５，７
１７′分の速ＩＧで供給した。因子りはｌ５ＣＯモ丁゛
ル１８００可変波長Ｕ Ｖ検出器を用い（２２５ｎｍで
検出した、。 ）、６２から３．４にの、因子りに冨んだ溶出液′＝減
圧十て３００πβまで濃縮した。 同様の精製を３回行なって得た濃縮物を集め、；ｊン酸
を加えて溶解し、ｐｔ−１７，７とした。塩化Ｊトリウ
ム（１１（＋／πβ）をイオンマーカーとして１）ＩＩ
えた。この試料を予め水で平衡化した１００戯のダイア
イオンＩ Ｐ −２０樹脂をカラム（２，８Ｘ ２２
Ｃ１１）に充填したものに２０戚／分の割合い（・充填
した。このカラムを蟻酸水溶液でｐＨ２゜５に調節した
水３００紙で、塩化銀沈澱法により４λ液中に塩素が検
出されなくなるまで洗浄した。 次いて水およびアセトニトリル（６：４）の混液１２を
用いて、３０戴／分の速度で溶出した。溶出液を減圧下
で・濃縮し凍結乾燥するとかなり精製された因子Ｄ０．
６３（ｌが得られた。この生成物４、水ニアセトニトリ
ル：ジブチルアミン（８０：、・（３：０．０３Ｍ、リ
ン酸でｐＨ７，８に調節しＩｂの）からなる溶媒１５戴
に、溶液になるよでｌトラブチル水酸化アンモニウムを
加えることに１、←）溶解した。この溶液を、既述した
ように、２゜８ Ｘ ！−） ９ ｃ：ｍのＭ ｉｃｈ
ｅｉＭ ｉ ｌ ｌｃｒ力゛ラスカラム中の２ ！：）
−ＩＩ Ｏミツ１１ンのｌ−ｉ ０ｈｒｏｐｒｅｐ Ｒ
Ｐ −Ｅ″ｌζ゛りＬ１ン］−グシノイーした。２．５
２〜３．ｏｅの溶出波を減Ｊｔ ’Ｉ−Ｃ約２００ ｎ
ｉま（’１縮しＩ、。このｒＩＡ輸液を既述したように
、ダイアイオン）ＩＰ ２０樹脂をａ４１するカラムＣ
脱塩した８、溶出液を減圧Ｆ −（＝ ｍ縮し、凍結乾
燥ケろとか／（０精製されＩご因子Ｄ １９３ ｒｎ（
ＪｈＸｍらねＩＪ。 同様の操作を（コなって得た粗大子Ｄ２ｈ９ｕを。 水：Ｉし１〜二１−リル： ２ＬｉＭ竹リン酸フトリウ
ム（８２： １８：Ｇ、０３Ｍ、リン酸て゛ ＋＋ｌ！
７．８に調節したもの）から＜Ｃる溶１６．ｈβに溶解
し、５ＮＮａＯｌ−１水溶液を加えてｐＨ１（’）に調
節しＩＪ。 この溶油４．２５〜４０のｌ、 ｉ Ｃｈｒｏｐｒｅｐ
ＲＰ８を充填した２、８Ｘ５９ｃｇｌのｆｖｌ １ｃ
ｈｅｌ−ｆｖｌ １ｌｌｃｒカラスカラムに入れ、Ｆ−
１ｖＩ Ｉポンプを用いて、試料を溶解づるのに用いた
ものと同じ溶媒で、４戚／分の速度で溶出した。溶出液
はｌ５Ｏ（’）七１−ルＵ Ａ −５Ｕ Ｖ検出器を用
いて２５４ ｎ１Ｉｌで七−ターしＩＪｏ集めた２７妊
のノラクシ］ンを、１０ミタ１１ンのＮｕｃｌｅｏｓｉ
ｌ Ｃｍを充填した４、６Ｘ１５ｉ １１１１のステ
ンレススチールカラムを用いた分析用ＩＩ Ｐ Ｌ、
Ｃにより、因子りの存在を分析した。試料はレオゲイン
モデル７１２０インジエクシヨンバルブを使っＵ ｉ１
人した。ブレパラ−Ｔイブ溶出液に１東用したのと同じ
溶媒を、ミルｌ〜ン・ロイ・シュｌ゛レックス・ミニポ
ンプを用いて０．６ｆｆｆｆｉ／分ｅ供給した。因子り
は、ｌ５ＣＯモデル１８００可斐波長ＵＶ検出器により
２２５ｎｌｌで検出した。４０５〜１１３４ｍの溶出液
を減圧下で５００厭ま（゛濃縮し、既述したように、ダ
イアイオン）−ＩＰ−；ｒｏｓＩ脂を含有するカラムぐ
脱塩した。溶出液を、１１ｆｌｆｆ下で濃縮し凍結乾燥
すると因子Ｄ１２０１１１（ｌが１９られた。 抗生物質Ａ４１０３０因子りは白色の無晶形固ｉ４．
（’あり、おおよその元素分析値は以上の通りでしする
：炭素５４．４６％、水素４．３５％、窒素７．５８％
、塩素４．２７％、ＩＮ素２９．３４％（差から）。６
６％ジメチル小ルノォアミド水溶液中Ｃ因子［）を電気
滴定した結果、約５．５および７．６のｐＫａｔｆｆｉ
を（１！ｌる２−）の滴定１ｑ能ｕ カ／／イｆケるこ
とが解った（さらに１０以（のいＫ １１偵を右りるも
のが存在づる可能性がある、初期ｐ［＋６．８３）、高
速原子衝撃ンススベクトルに１、る分子量は約１３２６
であった。 Ｋ ［１ｒ法により測定した抗生物質Δ／ｌ ’１０３
０因ｆＯのみ外吸収スペクトルを第４図にホす。以上の
顕茗な吸収輸入が観察された：３４４ε３・・３２２６
（強、Ｉロード）、２９５９（弱）、１６６１（強）、
１５９２（強）、１５１１（強）、１４２９（弱）、１
２９０（弱）、１２２７（弱）、１２１２（中）、１１
６３（弱）、１１４３（弱）、１（’）５３（中）、お
よび１０１０（強）ＣＩｌｌ＋。 中性、酸性および＠基竹のメタノール：水（１：１）混
液中で測定した紫外線吸収極人碩を表５１に承り。 抗でＬ物質Ａ４１０３０囚子りは囚ｆΔと同じ溶媒に可
溶（゛ある。 観察された物理化学的ｆ−タにＩＪづ＜ Ａ ／Ｉ １
（１；０囚了りの構造を以下に示づ： ｎ目 １１またはイれ以上のｎ−ブチル基 支加り作Ｖフー △／Ｉ ’Ｉ ０３０因子Ｆ−の甲岨
Ａ ４１０３０〜合体０，３ｇを水：〕′シ］・ニトリ
ル：塩化ノｌ〜リウム（８５： １５ ： ２ （１，
’２〉からなる溶媒３０緘に溶解し、２５）〜４０ミク
［」ンのｉ ｉ Ｃｈｒｏｐｒｃｔｌ ＲＰ −８を本
発明名らの夙先至で充填した２、８ｘ５９ｃｍのＭ １
ｃｈｅｌｆｖｌ １ｌｌｅｒカラスカラムに充填した。 ＦＭｌポン／゛を用い（、試Ｆ１を溶解づるのに用いた
ものと回し溶媒系で、１２戴／分（８ｈ＋ｌ５ｉ）ｃ溶
出し、２４ ｙｘｉ（の７ノクシ」ンを集めた。溶出液
はＩ Ｓ ＣＯモｆルＵΔ−５ＵＶ検出器を用い、２５
４ ｎ１ｌｌで［ニターした。 ノックジョン１〜５４は捨てた。因子ｎ（二冨んＩごフ
ラツジ」ン５ Ｆｉ〜１２２を合口、減ｎトて・５０鱈
ま−Ｃ濃縮した。同様の精製を１３回４ｊなってｉ！Ｉ
だ濃縮液を水−（・希釈して１．５２とし、１；め水Ｃ
平衡化したノックｌｚ （２，８ｘ２２ｃ１１１）中の
１００鱈のダイアイオンＨＰ−２０樹脂に５ｒｉｉ・分
の速曳ぐ入れＩこ。塩化銀沈澱法によ１）洗液中に層系
が検出されなくなるまく一水９０′０戚て”）Ｊ’＞ム
を洗浄した。次いて水とメタノール（１：１）の混液（
゛、（０鱈／′分の速度で溶出し、３００戚のワラクシ
１ンを集めた。フラクションはＢ ａｃｉ ｌ ｌｕｓ
５ｕｂ−１１ｉｓに対ツる活性について分析した。フ
ラクシ」ン１〜８を集め、減圧下で濃縮し、凍結乾燥４
ると因子［に富んだ図１群混合物１．Ｃ）ＩＶＪが得ら
れた。この混合物０．５ａを、水ニアセトニ］−リル：
ＦＡ化ｔトリウム（８４：１４ ： ２ ｇ／Ｉ！、
）からなル１（１！１ＯＮＩ！ニ溶解シ、２５ ”−４
０ミ’ｙ ｔｌンのり、 ｉ Ｃｈｒｏｐｒｅｐ ＲＰ
−８を充填した２、８×ｈ９ｃｍのＭ ｉｃｈｅｌ−
Ｍｉｌｌｅｒガラスカラムに充填しｋＯＦ’ＭＩポンプ
を用いて、試料を溶解するのに使用したものと同じ溶媒
で、５戴／分の速度ぐ溶出を行な−い、２５鱈のフラク
ションを集めた。溶出液ハ、ｌ５ＣＯｔデルＵＡ−５１
ＪＶ検出器を用いて２５４＋＋ｍ″ｃｆニターした。集
めたフラクションに゛つき、５ミクロンのＯＤ Ｓ −
ｔｌ Ｖｌ）ｅｒｓｐｂｅｒｅｓ（Ｓ ｈａｎｄｏｎ
５ｏｕｔｈｅｒｎ Ｐｒ’ｏｄｃｔｓ、 Ｌ
ｔｄ、、Ｃｈｅ−！ＩＩＢｒａ、 Ｆ ｎｇｌａｎ
ｄ）を本発明者らの研究室で充填し／・１．６ｘ１５０
＋ｕｅのステンレススチールカラム４用いた分析用ＨＰ
Ｌ Ｃにより因子Ｆの存在を分析した。試料（ＪしＡ
ダインモデル７１２０インシ１クシ」ンハルｆを用いで
注入した。水： ／’ 廿ｆ−二トリル：Ｆ１１酸丈ト
リウＡ（８１：１９：２ リ２）からなる、氷ｍ酸で
Ｄ）４６ Ｋニ調節しｊこ溶媒をミルトン・１］イ・
シュ／レックス・ミーポンＩを用いＴＯ，６５戯７′分
て注入した。因子［−はｌ ＳＣＯ七）：′ル１８００
可変波肢ｊＪ Ｖ検出器をｆψ）（２２５ｎｍで検出し
た。１５２（’）＋ｚ６から１７８０ ｄの溶出液を減
圧トで５０１βにｉｌ縮した。 同様のＭ製を３回（１なって得ｋ１ｍ輸液を合Ｕ、水Ｃ
１乏に希釈し、予め水でψ換）化しｔニカフム（２，８
Ｘ２２ｃｎ＋）中の１００紙のゲイメイＡン１−１ ）
） −２０樹１指に、１０７Ｉｉ／′分のｉ８度で入れ
た。 このカラムを、蟻酸水溶液でｐＨ２、５３に′Ｊ４節し
ｌこ水２００臆Ｃ，塩化銀沈澱法により洗液中に塩水が
検出されむくなるまで洗浄した。次いで水とアヒトニト
リル（６： ４ ）の混Ｎ０．５乏を用い、１５戚／分
の速庶′Ｃ′溶出した。溶出液を減ＦモＦで濃縮し凍結
乾燥（Ｊるとかなり精製されｌご因子［２０２，２１１
１０が得られた。これを水：）′セト−１・１ｊル：塩
化ｊトリウム（８６：１４：２（＋／乏）からなる溶媒
４厭に溶解し、既述した２５〜４０ミクロンのＬ ｉ
ＣｈｒｏｐｒｅｐＲＰ −８を充填した２゜８×５９Ｃ
ＩｌのＭ ｉｃｈｅｉＭ １ｌｌｅｒガラスｈラムｒ４
ｄ７′分の割合いでクロマトグラフィーした。因子（に
富んだ２０６０厭から２４８ｎｚｘの溶出液を減圧下で
５Ｑ、ｖｆに濃縮した。同様の精製を３回行）１って得
た濃縮液を合せ、既述したように、カラ１１に入れた１
００ｄのダイアイオンＨＰ−２０樹１１ｎにまり脱塩し
た。溶出液を減圧下で濃縮し凍結乾燥すると因子Ｅ２４
２１（ｌが得られた。 抗生物質Δ４１０３０因子Ｅは白色固体Ｃあり、Ｉｌ’
Ｆに示１おおよその元素分析値を有する：１ｌｊ２索ｌ
ＩＦ５．０６％、水素４．０６％、窒素８．５３％、１
、：４ｇ３．５０％、Ｉｆ素２７．８５％（差から）。 Ｄ６％のジメチルホルムアミド水溶液中で因子トー！−
電気滴定した結果、約５．８および７．７の＋＋Ｋａ顧
を１′ｉする２つの滴定可能基があることが解った（ざ
らに１０以−ＦのｐＫａｉａを有するもの、・Ｉ Ｉ’
ｊ存する可能性がある、初期ｐＨ６，５７）。 高速隙了物＠−ノススペクトルにより観察された分子鯖
は約１１６３である。因子［の実験八番Ｊ Ｃ，ｇト１
４ｔ４ ＣＩ Ｎ ７０ ｓａ ”ある。 抗生物質Ａ４１０３．０囚子Ｅ ｆ Ｋ ［３ｒ法に、
ふり測定した赤外吸収スペクトルを第５図に承り。以上
のｗ４帖へ吸収極大が観察された：３４！１８・−コ）
２２６（強、ブし−１−ド）、１６５３（強）、１ｆ５
００（中）、１５０４（強）、１４２９＜弱）、１２９
０ （弱）、１１９８（中）、１１３６（弱）、１０６
４（弱）および１０．１０（強）Ｃ１゜中性、酸性およ
び塩基性のメタノール：水（１：１）混液中のＡ４１０
３（”）因子Ｆの紫外線吸収極大愉を表５に示ケ。 抗生物質Ａ４１０３（１囚子Ｅは、因子△の場合と同じ
溶媒に可溶である。 観察された物理化学的データーにＶづくＡ４１０３０囚
子Ｅの構造式は以下の通りぐある：因子Ｅ ＯＨ 支ｉ九毘 △４１０３０因了Ｆの単− Ａ４１ （’）３０両合体９．０９を水：ノ′Ｌ！１〜
−トリル：塩化Ｊ［−リウム（８３：１７：２ リ 、
２）からなる溶’Ｓ ２００ａｉに溶解し、得られｌＪ
溶液を濾過した。この濾液を、実施例３の７’Ｊ法（゛
木発明石らの研究室（こａ３い（Ｉ製しｒこ１０へ・２
０ミク［ｌンの １−１〕−１ＣＩ８逆相シリカゲル４
２を充填し１．：、 Ｂ Ｘ １００ｃｉ１のステンレ
スストールカラムに入れた。Ｃｈｒｏｍａｔｏｓｐａｃ
Ｐｒｅｌ） −１０（’ｌ −１ニノｌ−の部品であ
るこのカラムを、試１’ｌを溶解するのに使用したもの
と同じ溶媒系を用い、６０１１１−カ（溶出して４８０
ｆｆｆｆｌのフラウン」ンを集めＩζ。溶出液はｌ ３
００ シＹルＵ Ａ−５Ｕ Ｖ検出器を１（１い（２Ｆ
ｉ ４ ｎｍて・セニターした。集めたフラウン」ンに
つさ、２５−４０ミクロンのＬ ｉ Ｃｈｒｏｐｒｅｐ
１１１）−８を充填した ０．８ｘ３Ｑｃｍの〜４
ｉｃｌ＋ｅＩＭｉｌｌｅｒカラスカラムを用いた分析用
Ｈ１）ｌｒ’ＩＣにより氏子［の存在を分析した。水；
）′セ［・二１−リル：塩化ノトリウム（８４：１６：
２ ９．１２）がらへる溶媒をＦＭＩポンプにより４
ｙｉｒｌ 、’分の割合いで注入した。因子Ｆはｌ５Ｃ
ＯモデルｔＪＡ−５ＵＶ検出器を用いて２５４ ｎｍで
検出した。フラクション１〜２５は捨て、因子Ｆに富ん
だフラウン」ン２６へ・３６を集めて減圧下で約５００
戴まで濃縮した。 同様の精製を３回行なって得た濃縮液を集めて濾過し、
この濾液を、予め水で平衡化したダイアイオンＨＰ−２
０樹脂１００−を入れたカラム（２゜８Ｘ２２ＣＩ）に
１０鱈／分の割合いで充填した。このカラムを塩化銀沈
澱法により洗液中にＦＡ素が検出されなくなるまで水９
００顧で洗浄した。次いで水とアセトニトリル（６：４
）の混液１℃を用い１５戴／分の速度で溶出を行なった
。 溶出液を減圧下で濃縮して凍結乾燥するとかなり精製さ
れた因子Ｆ２．６Ｑが得られた。この生成物５００ｆｌ
１ｇを水ニアセトニトリル：塩化ナトリウム（８４：１
６：２ Ω／ｊ）からなる溶媒１０戴に、水酸化ナトリ
ウム水溶液でｐＨ７，０に調節しながら溶解した。この
ＷＩＨを、２５〜４０ミク１１ンのｌ ｉ Ｃｈｒｏｐ
ｒｅｐ ＲＰ−８を充填した４、７Ｘ ４５ ｃｍのＭ
ｉｃｈｅｌＭ １ｌｌｅｒ ガ°ノスノＪ ’７ムに
（１人した。１〜１１ボンｌを使っ（、試料を溶解４る
のニ用イたものどＩｉＪ］じ溶ｔＢ？″′、６ｙｉ（（
、−分の速厩（−ｉｌｌ出をｈ’ ＜Ｎい、２４πβの
フラツジ」ンを集めた。？／ｉ出液をｌ Ｓ ００ Ｌ
ｊ−ルＵ Ａ−ｈ ｊｌ Ｖ 検出器ヲＩｆｌ イで
２５４ ｎｍでモーターした。集めたフラツジ」ンに′
〕さ、既述した分析用ＨＰ １． ｒ）１． Ｃ系を用
い（因子１丁の存ｎを分析した。因ｆ １１．二冨んｌ
ど１９４Ｑ１１〜２５２０ｔｐｂＯ）溶出液を減／「）
？−約３００ ＴＡ２まで・濃縮し／＝ 、同様の精
製を２同（ｊな）で１８だ濃縮液を含Ｕ、水（ｐめ平衡
化した、カうム（２８Ｘ２２Ｃｍ）中の１００誠のタイ
アイＡンＨＰ −２０樹脂に、１０鱈、７分の割合い（
゛充填した。／Ｊプラム、！Ｌ化銀沈澱法により洗液中
に塩素が検出されなく ’ｔ＞るよて・、蟻酸てｐＨ２
，５に調節しＩ、−水（３００１β）で洗浄し１５０次
い（−水と〆ｔｅ＋・−１〜リル（６： ’ｌ ）の混
液０．７５ｆｆｉで溶出を７！イシ−＞／Ｊ、溶出液を
減Ｊｆ： Ｔ ’（−濃縮し、凍結乾燥４ろど因子ｒ−
２＜） ９ ｉ＋ｇが１ｊＩられ／＝ ０抗９−物質Ａ
１１１ （’） ３０因子Ｆは白色の固体であリ、以
下に示すおおよその元素分析値を有づる：炭素５１．３
９％、水素３．９６％、塩素６．４５％、窒素６．４５
％、酸素２８．６５％。６６％のジメチルホルムアミド
水溶液中、因子Ｆを電気滴定した結果的５．４および７
．１のｐＫａｌを有する２つの滴定可能基の存在が確認
されたくさらに１０以上のｐＫａ値を有するものが存在
する可能性がある、初期ｐＨ５，９３）。高速原子衝撃
マススペクトルを使って観察された分子量は約１５５５
であった。因子Ｆの仮実験式はＣ７６８４、ｚｃＩ ３
Ｎ ７０鵡である。 この分子量から、因子Ｆは因子Ａと２個の糖部分が付加
している点で異っており、分子量が奇数であることから
７ミノ糖が存在していないことが解る。 ＫＢｒ法で測定した抗生物質Ａ４１０３０囚了Ｆの赤外
吸収スペクトルを第６図に示す。以上の顕著な吸収極大
が観察された： ３４４８〜３２２６（強、ブロード）
、１６５３（強）、１６００（中）、１５０４ （強＞
、１４２９（弱）、１２５８（弱＞、１２２７（強）、
１１３６（強）、１０７５（強）、’ＩＯ’５３（強）
、および１０１０（強）ｃｍｌ。 中ｆ’ｌ 、酸性および塩基性のメタノール；水（１：
１）混液中のＡ４１０３０因子Ｆの紫外吸収極人顧を表
５に示俳。 抗／を物ｇ−ｆ Ａ ４１０３０囚子Ｆは因子△と同じ
々Ｉ媒に１１Ｔ溶で・ある。 観察された物理化学的データーに基づくΔ４１０３０囚
了「の％＞ｈ式は以下の通りである：因子Ｆ ２ τ［１９−Ａ４１０３０囚子Ｇの甲離 実施例２（ｉ４〕Ｉ、：Δ４１０３０１Ｅ１合体８９４
−水：ノ′ヒｌ−ニトリル：塩化ナトリウム（８４：
’ｌ ｆ５ ：２（Ｊ／Ｊｌ）からなる溶Ｑｌ ２０
Ｑ ｔｔｒｉ ニ溶解しく１ｌＪｌ過した。この濾液を
、実施例３に記載したｈ払（本発明省らの研究所ぐ調製
した１０〜２０ミク１１ンのＬ Ｐ −１、′’Ｃｆｌ
逆相シリカゲル４乏を充填しにステンレススチールカラ
ム（８Ｘ １００ｃｍ）に充填した。このカラムはＣ１
１ｒｏｍａｔｏｓｐａｃ Ｐ Ｉ’ｅｌ １００ユ
ニツトの部品である（実施例３を照）。ノ」ラムを、水
ニアしトニトリル：塩化−） ｌ−リウム（８４：１６
：２ ａ／Ｉｌ＞（１）Ｎｍで、６０ 就’ ５’ｊの
速度で溶出し、４８０叡のフラクションを集めた。溶出
液は実施例３に記載したように２ ｈ ７１＋＋ｔｎて
モニターした。集めたフラクションにつさ、既）小しＩ
ζ＾ζ波速り【］ン］−グラフィー（Ｈ））＋（’、）
分析法により因子Ｇの存在を分析した。 因子Ｇ Ｋ富むフラツジ」ン２２〜３ｂを東め減７ｔド
で５００塾にａ縮した。同様の精製を、１ ＋１１１
＋’ｊなってｙｌに濃縮液を合せ、水酸化Ｊ１−リ・”
ノｌｚ水溶液でｐＨ８，５に講節し濾過した。この濾液
を、予め水で平衡化したカラム（２，８Ｘ２２ｃｍ）中
のダイアイオンＨＰ−２０樹脂１００戴に１０戴／分の
速度で充填した。塩化銀沈澱法により洗液中に塩素が検
出されなくなるまで水（４００，ｍ、蟻１１１ｒ １）
Ｈ２，５に調節したもの）でカラムを洗浄した。次いで
水ニアセトニトリル（６：４）の混液を用い１５戴／分
の速度で溶出し、１にのフラクションを集めた。このフ
ラクションの３ａ−ｃｉｌｌｕｓ ５ｕｂｔｉｌｉｓに
対する活性を分析した。活性をａするフラクションを集
め、減圧下で濃縮し凍結乾燥すると生成物２．８５ｇが
得られた。 この生成物０．５ｏを水ニアセトニトリル：ジブチルア
ミン（８０： ２０ ： ０．０３Ｍ、リン酸−ｅ１１
１−１７．８に調節したもの）からなる溶！１１１０／
１βに、溶液となるまでジブチルアミンを加えることに
より溶解した（最終ｐＨ８，２）。この溶液を、２５〜
４０ミクロンのＬ ｉ Ｃｈｒｏｐｒｅｐ ＲＰ −Ｂ
（ＭＣ／Ｂ Ｍａｉｕｆａｃｔｕｒｉｎｏ Ｃｈ
ｅｍｉｓｔｓ、Ｉｎｃ。 、 Ｃ１ｎｃｉｎｎａｔｉ、ＯＨ）を充填した２、８Ｘ
５９ｃｇ＋のＭｉｃｈｅｌ Ｍｉｌｌｅｒ （ＨＰＩ
ＰＩ Ｃ）力゛ノスカラムに充填しｌＪ。 ＦＭＩボンｌを用い、試料を溶解するの（二１史］ｋも
のと同じ溶媒で４戴、７７分の速度Ｃ溶出を（＋ １．
ｔ−）／、１゜溶出液１．ｌ ｌ ＳＣＯＥ７’／ｌ／
ＩＪΔ−５１ｉ Ｖ 検出器を使って２５４ ｎｍて゛
七ニターした。ｉｋめた１０７１℃の一ノラクシ」ンｔ
こつさ、既述した１Ｈ）ｌｃ分柘法により因−ｒ Ｇの
存在を分析した。 因子Ｇに菖んだ一ノラタシコン５）１１−７４を、同様
の精製を（ｊなつで１りたクラクシ１ンと合１４．Ｉｓ
め水Ｃ平衡化しにカラム（２，８Ｘ２２ｃ＋＋＋＞中の
ダイアイオンＩ Ｐ −２０樹脂１００鱈に１０ｄ分の
速厖（充填した。蟻酸でｒｌｌ１２．５に調節した水３
００戚で、塩化銀沈澱法ｔこよシ）洗液中ば聴衆が検出
されなくなるまでカラムを洗浄しＩご。水ニア廿トニト
リル（６：４）の混成Ｏ７５〕乏（゛ンｄ出を行なつＩ
Ｊ０溶出液を減Ｉｆトぐ濃縮し凍結乾燥すると因子Ｇ
９６０ ｍ（］が得られた。 抗〈１物質Ａ１１１０３０囚子Ｇは白色の固体（あり以
トにホ１おおよその元拳分相偵をイｊ４る：炭素５０．
０２％、水素４，６１％、塩素４．７１％、窒素６．１
１％、酸素３０．７０％。６６°ｌ。 のジメチルホルムアミド水溶液中で因子Ｇを電気滴定し
た結果、約５．４および７．０のｐＫａＭｔを有する滴
定可能基が存在することが解つｔこ（さらに１０．５以
上のｐＫａ値を有づるものの（ｆ（Ｉする可能性がある
、初期ｐ）−１６，３２）。高速ｊｉｊ＋子衝撃マスス
ペクトルにより観察された分子Ｉｉｉ ｔＪ約１６８４
であった。 ＫＢｒ法により測定した抗生物質Ａ ４１０３０因子Ｇ
の赤外吸収スペクトルを第７図に示づ。以下の顕著な吸
収極大が観察された：３３２０（強、極めてブロード）
、２９７５（弱、シャープ゛）。 ２９２０（弱、シャープ＞、１６５９（強、ノーマル）
、１５９４（強、ブロード）、１５１２（強、シャープ
）、１４９２（肩）、１４３０（弱、シャープ）、１３
８６（弱、ブロード）、１３３７（弱、ブロード）、１
３０８（弱、シー・−プ）、１２６４（弱、シャープ）
、１２３０（中、ブロード）、１１４５（中、ブロード
）、１（）７７（１，シ１／−））、１０６２（中、シ
ト−）） 、１ （’） １４ （中、シャー−７）、
ａ’；よび８４６（中、ゾ【１−１〜）ｃｌｌｌｌ。 中性、酸性および塩基性のメタノール：＄＜１：１）の
混液中のＡ４１０３０囚イＧの紫外吸収惨人を表５にｉ
ｊＸす。 抗生物質Ａ ／Ｉ １０３ （’）因Ｆ Ｃ，は、因子
Ａと同し溶媒１こ可溶である。 Ａ４１０３０倫合体の因子Ａ、Ｂ、Ｃ，Ｄ、ｌ、Ｆお１
ひ０は、シリアＪゲル薄層り１１７トグラノｒ−Ｉ’Ｔ
ＩＣ）およびペーパーク１１ントグノノイーにより、シ
フいに分離し区別することがＣさる。ハイＡ４−トゲラ
フイーに使用づる微生物は、バ１ルス・スブチリス（Ｒ
，ｓｕｂ口１ｉｓ）であった。Ａ４１０３０囚了Ａの移
動紡を１ 、００とした１ｌｉｌ＋の移ＩＩＩ率（Ｒ×
）を表−６に示ゴ。 表６ Ａ系 ペーパー：ワットマンＮ１１（非処理）溶媒：水飽和ブ
タノール：メタノール（ｉ：１）Ｂ系 吸着剤：メルク・ダルムシュタットシリカゲル６゜溶媒
：アセトニトリル：エタ／−４：水（８：１：１．５） １０ｆノのリフ［］１１ルｆ （ｌ １ｃｈｒｏｓａｒ
ｂ ） Ｒ１）１８を充填しｊこステンレスカラムおよ
び蟻酸Ｃ゛１１１１２．５に調節した水： ？ｔ？トニ
］・リル：シＩデルアミン（８２：１８ ：０．０３Ｍ
）から／、Ｓる溶媒を用いｒ、Ａ４１０３０囚子△ない
しＧの＾速液体り［１マドグラフイー（ＨＰ ｉ Ｃ）
保持８）間を測定した。溶媒は０．７５戴７分の流速１
１１人しｌＪ。溶出ｉ１．Ｌ２２５ｔ＋＋ｎにお＋ｊる
ｔＪ Ｖ吸収により七−ターしＩこ。Ａ４１０３０囚了
Ａに対りる各因子の保持時間の比、即ら、相対的保持鎮
を表 ７に示１．。 表７ 抗住物質Δ４１０３０の因子群は両性、即ら、アミノ基
とカルボキシル基の両者を含んでいるので、適当なｍお
よび塩基と塩類を形成することができる。このような塩
類、特に薬学的に許容し得る塩類も本発明に包含される
。［薬学的に許容し得る」塩類とは、温自動物の化学療
法に使用し得る塩類を６う。Ａ４１０３０因了Ａ、Ｂ、
Ｃ，Ｄ、Ｅ、ＦおよびＧの代表的な、かつ好適な塩類と
しては、例えば１ｉＫｌｉｌｌ、りん酸、塩酸、酢酸、
琥珀醸、くえん酸、乳酸、マレイン酸、フマル酸、バル
ミチン酸、−１−ル酸、パモイック酸、ムチン酸、１）
−グルタミン酸、ｄ−樟脳酸、グルタル酸、グリコール
酸、フタール酸、酒石酸、ラウリン酸、ステアリン酸、
サルチル酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、
ソルビン酸、・ピクリン酸、安息香酸、けいひ酸、等の
有機および無ＩＩｔａとの標準的な反応によって形成さ
れる酸付加塩、Ｊ３よび水酸化ナトリウム、炭酸ナトリ
ウム、炭酸カリウム、水酸化ノコルシウム、水酸化カリ
ウム、トリメチルアミン、水酸化アンモニウム、ジエタ
ノールＩミン等の塩基とカルボキシル基との反応によっ
て生成する塩類等をあげることができる。 抗生物質Ａ４１０３０複合体およびその因子群は、スタ
フィロコッカスおよびストレプトコッカス種を包含する
グラム陽性微生物に対して活性を有する。またこれらの
抗生物質は、家禽、豚および牛の成長促進および飼料利
用効率の改善にも有効ｅある。Ａ／１１０３０複合体お
よびその個々の因子群の活性を以下の実施例群において
示す。 ’ｆｆ １０ 生物検定用飼料の調製および乾燥
全１０ス中のＡ４１０３０因子Ａの定量分析全ブロス１
２を２００．ｔｇまで濃縮し凍結乾燥すると乾燥全ブロ
ス３１．５ＣＩが得・られた。この乾燥全ブロス４００
量ＱをＤＨ８，５の水１０戴で３回抽出した。抽出液を
合わせ、１０戴まで濃縮し、この濃縮物を生物検定に使
用した。Ｎ、Ｒ。 Ｋｕ７ｅｌおよびＦ、 Ｗ、 ＫａｖａｎａｕｏｈＬＪ
、 Ｐｈａｒ −Ｉｌａｃｅｕｔ、 、 ３ｃｉ、 ６
０ （５） 、 ７６４および７６７頁、１９７１年）
の半自動システム（Ａｕｔｏ−＋ｕｒｂ＠Ｍ ｉｃｒｏ
ｂｉｏｌｏｇｉｃａ１分析システム、Ｅ １ａｎｃｏ
）により濁度分析を１１なった。Ａ ４１０３０複合体
の試験では、以下の試験パラメーターを用いた：スタフ
ィロコッカス・アウレウス△ＴＣＣ９１４４（栄養ブロ
ス培地（ｐＨ７）、３７°Ｃで４時間インキュベート）
。被験試料および標品をメタノールと水（１：１）の混
液に溶解した。標品、Ａ／１１（’）３０囚子Ａ’Ｅ：
０．４．０．６．０．９．１゜２および１ 、５ ｍｃ
ｇ／ｓｉｒの濃度でＡｕｔＯｔｕｒｂ ”同転体（ｃａ
ｒｏｕｓｅｌ ）に入れた。 上記の濃縮物１戴を、ＨＰＬＣ分析に使用される以下の
手法で精製した。 （ａ ）Ｃ−１８ＳＥＰ−ＰＡＫ＠カートリッジ（シリ
カゲルカートリッジ、Ｗ ａｔｅｒＳ Ａ ５ＳＯｃ
ｉａｔｅｓ、 Ｉ ｎｃ、 、 Ｍｉｌｆｏｒｄ、
ｆｖｌａｓｓ 、）を当！ｆｌにはよく知られている１
ｕｅｒフイツテイングを備えた１０戴のシリンジを使っ
て、メタノール１０叡で洗浄した。 （ｂ）同じカートリッジを水１０戴で洗浄する。 （Ｃ）約１７１β／分で、カートリッジで上記の濃縮物
１７Ｉβを適用する。 （ｄ ）水１猷でカートリッジを洗浄し、吹いてｈ −
トリッジを乾燥する。 （ｅ）ｊトラヒドロフランと水（１：１溶液）１戴でカ
ートリッジを約０．５ｄ／分で溶出する。 （ｆ）溶出液から減圧あるいは窒素雰囲気下Ｃｊトラヒ
ドロフランを除・去し、ぞの溶出物に水を如えて１厭と
する。 （０）この溶液を既述したＨＰＬＣ法により分析する。 全ブロスの１１Ｐ Ｌ Ｃ分析および生物活性の検定の
結果を表−８に示す。 寒天希釈分析法 ＭＩＣＩを測定するためにＩ ｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａ
ｌｔ’、 ｏｌｌａｂｏｒａｔｉｖｅ ３ ｔｕｄｙ
（Ｉ ＣＳ ＞グループによ）Ｃ＆！載された寒天希
釈分析法を使用した。 寒天希釈分析法による抗生物質△４１０３０因＋’Ａに
ついての試験結果を表−９に示す。 表９ Ａ４１０３０因子Ａの活性 × ベンジルペニシリン感受性 ×× ベンジルペニシリン耐性 一イスクプレー ８ 被験微生物とともにインキ１べ−１〜した寒天平板を使
用した；６１Ｉｌｌの１″イスク（Ｑ、０２戴容１）を
抗生物質溶液の１０ｇ２希釈液で飽和した。ラーイスク
含−は使用した溶液濃度の１，１５または１″５０であ
った。即ら、５００ｚ、／戴ｍ度の溶液からディスク含
１１００１０または１０−９を１３だ。個々のディスク
含けにおけるＡ ４１０３０囚子Ａ抗住物穎による阻Ｉ
Ｆ帯のサイズを表−１０（こホす。 表１０ Ａ４１０３０因子Ａの活性 Ｘ ベンジルペニシリン感受性 ＸＸ ベンジルペニシリン耐性 ××※ ベンジルペニシリン耐性、メチシリン耐性抗生
物質Ａ／Ｉ １０３０囚子Ａは、寒天稀釈法によりへモ
ノイルス・インフル１ンリ゛Ｕ （ｔｌ ｅｉ。 ｐｈｉｌｕｓ ｉｒ汀１ｕｅｎｚａｅ）の多くの株に
灼して粘性を有することがわがった。試験結果を表 １
１にホす。 抗生物質Ａ＝１１０３０因子Ａは、寒天に釈？ｌ、＃二
よりネイセリャ・Ｔス・ビー（Ｎ ｅｉｓｓｃｒｉａ
ｓｐ、 ）に対しＣ活性を有することがねがった。試
験結電を表−１２に承り。 抗１１物質Ａ４１０３０因子Ａ Ｇ、ｔ、寒天Ｍ 釈？
／、により、各種の細菌に対して活性を有する（表 １
３参照）。 Ａ４１０３０抗生物質群、因子Ａ、 ＩＩＪＩＪ、ヒｃ
はバクＴ １．ｊ Ｊイデス−ニス・ビー（Ｂ ａｃｔ
ｅｒｏｉｄｅｓＳｊｌ、 ）と命名される婚気性細菌族
に対しＣ活性を有する。寒天稀釈法による２４時間のＭ
Ｔ ＣＶｉを表−１４に承り。 表１１ Ｈｅｍｏｐｈｉｌｕｓ １ｎｆｌｕｅｎｚａｅ株に対す
るＡ４１０３０因子Ａの活性 表１２ Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｓｐ、に対する Ａ４１０３０因子Ａの活性 表１３ 種々の細菌に対する Ａ４１０３０因子Ａの活性 表１３つつき × ペニシリン耐性 ×× ペニシリン、メチシリンおよびエリスロマイシン
耐性 表１４ Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｓｐ、に対するＡ４１０３０
因子群の活性 抗り物質△／Ｉ １０３０因子Δ、Ｂおよび０はまた、
プロピオニバクテリウム・アクネス（ｔ′）ｒｏｐｉｏ
ｎｉｂａｃｌｃｒｉｕｍ ａｃｎｅｓ ）と命名され
る帰一（性細菌群にｆ、ｌ Ｌ／ （粘性を有すること
がわが・）た１゜２ ／Ｉ １１．１間の屡゛大稀釈へ
によるＭ Ｉ Ｃ１ｌｆｌを人−１１）に示す１、 抗生物質Ａ４１０３０因子Ａ、Ｂ、（Ｅ、Ｉ’）、［。 Ｆ Ａ３よＵ Ｇ ｌ、Ｌ、多く）＠気性細菌に（４Ｌ
、 （活１４４杓４ることかわがっ〕、−ｏ寒天橘釈結
にｊ、）（測’ｒｆしたＭ［Ｃ値を人−１６に承り。 抗！ｊ物賀Ａ ４１０３０囚子Ａ、ＢＪＬＬび０はべ−
１ｌ−：＋ ツｈ ス（Ｆ）ｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ＞
ａ；よひベプｌ−ストレプト］ツカス（Ｐ ｅｐｔＯ３
ｔｒｅｐｔ０１ｃｃｌＩｓ ）と呼ばれる２つの属の各
種の嫌気性球菌１．’：対しく活性を石４る。寒天稀釈
法により測定したｌｖｌ ＋ に ｌめ４人１７に示４
．． 。 Ａ４１０３０抗生物質因子Ａ、ｓ、ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆおよ
びＧはまた、クロストリディウム・ディフイシレ（ＣＩ
ｏｓｔｒｉｄｉｕｓ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ ）の多く
の株に対して活性を有する。寒天稀釈法により試験した
結果を表−１８に示す。 抗生物質Ａ４１０３０因子Ａ、Ｂ、Ｃ１Ｄ、Ｅ、Ｅおよ
びＧの種々の好気性細菌に対するインビトロにおける活
性を標準的な寒天稀釈法により測定した。２４時間後の
終点の読みの結果を表−１９に示す。 抗生物質Ａ４１０３０因子ＡおよびＢのストレプトコッ
カス・１ス・ビー（Ｓ ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓＳＯ
，）・グループＤを含む代表的な好気性ダラム陽性菌に
対する活性を標準的な寒天稀釈法により測定した。２４
時間後の終点の読みの結果を表−２０に示す。 抗生物質Ａ４１０３０複合体の多くの動物病原体に対す
る活性を、標準的なインビトロにおける抗微生物ブロス
微ｉ漬定試験により測定しｒこ。結果を表−２１に示す
。 表２０ 好気性細菌に対する Ａ４１０３０因子ＡおよびＢの活性 表２０つづき 表２１ 動物病原菌に対する Ａ４１０３０複合体の活性 試験し／、：Ａ４１０３０因子群はすへ（、実験的細ｉ
ｈＪ染に対し、インビボにおい（抗倣′１物ＩＡ ｔｉ
を示し／、＝。代表的な感染症のマウスに、２投’−ｉ
１’ｌＹの試験化合物を皮下ｔｉ制し、観察されに結
束を、ＦＩＴ）５０給（゛表わした（ＥＤ５ ｏ蛤は被
験動物の５０％を保護する鱒をＨ／Ｍｌで表わしたもの
（・ル）る。ワレンヴ（”ｌり（Ｗ ａｒｒｅｎｗｉｃ
ｋ ）ら１、」。 Ｆ３ａｔ；ｔｅｒｉｏｌ、 、 ８１ 、 ２３３
〜．２３５ Ａ、１０６１年参照）。Ａ４１０３０囚子
Ａ１Ｒ，Ｇ、１）、Ｅおよび［のＥ ［−１５０値を表
−２２に示す。 抗９物賀△＝１１０３ （’ｌ因Ｆｌ＼、１３．およ（
）ｆ；ｉハ急＋１４市↑１を、マウス（調・＼ｌＪとこ
ろ、腹Ｗν内ＩＱ ’Ｊ ｉ・へおいＣ３（’ｌ □
ｍす、′１以Ｉ、（゛あ′）ｌＪ（＋抗′１物質△４１
０３０囚子△、１３Ｊ５よひ０のＩＤ ｈ ｊ５１１１
：ｌを７ウスにおいＣ調べｌこと、二））、町ｌ−ト内
（捷 Ｌ） （ご お い Ｃ３（’ｌ （）ｍ
リ ’ｋＱＬス Ｂ あ Ｉ ＩＪｌ）抗’
ｌ Ｔｈ！１ｌＡ４ ＋ ０３０囚ｆＡ、１もオ」、＋
７’ Ｃ〕（ｈ インし小にお（する絆（−１７占ゼ１
を、マウス（こお（ｊろ１ス・バ（Ａ ’／ネスについ
（調べたところ、１００ｎし１にり×２以１−（あった
。 本ブで明はＡ ４１０３０ｈ’ｉＱ物ｔ−コ抜合体、ｉ
／、：はぞの因ｊ′あるいはぞの薬学的に許容しくす
う塩類の化学療法的な４＋効品１例えば約２ ：）ｍ
ｇ・・約２００（）＋ｎｇを渇面動ν〕ｉこ役ＬＪ−ツ
ることがらｈる該Ｖ〕物の感染ＩＩＩの治療７Ｕ ？ｌ
、を提供づる６の（（ｂろ。 因子ｌ＼また１３Ｌぞの薬学的にｉｉ’ｌ ’？ｆ シ
得る塩はヒトの感染も１の治療にｉもｆＬＪＩｌｌｌづ
ることか（さるが、般（、一本発明の複合Ｉ４および他
の囚ｉ’ ＲＹあるいは℃の塩類はヒト以外の瀉血動物
の感染ｔ１１舎？ｌ；捺（Ｊるのに最す適しくいる。 ヒｉ〜の感染１を治療するには、この抗１物貿因Ｙ、好
ましくは因子Δを非軽［１投句、例えば筋肉内注射また
（、未静脈内注入により投与することがＣさる。？、１
射４る場合は、この抗イ［物質またはその薬学的に冶金
し得る塩を所ψのａ瓜で薬学的にδ１賓し得る希釈剤に
溶解しで投りりる。好適’ｔＺ希釈剤としで【、１珪射
用水、０．９％食塩水、５％デー１、＜１−Ｉ−１−ス
、リンゲル液、あるいはぞの他の通富使用される希釈剤
があげられる。静脈注入するに（，１、抗９物質または
その塩を適当な濃度の′１即的液体あるい【、１薄い栄
養液の溶液にづることか（さ−く）。例えば約５％およ
び約１０％の溶液どじＣゆ）くりと２１人する。あるい
は口の杭／ｌ：物貿ｔまピ１−一 バック（ＦｌｉＱｇ
Ｖ −ｂａｃｋ）法により投与しくムＬい。 個々の因子群、ぞれらの組み合ぜ物または囚ｒ群の４１
＼（の複合体４５よびそれらの薬学的にへ′１容し得る
塩類【３Ｌ、蜜月バイＶル、滅菌しｌこ一１１１栓ｔ１
き゛バイヤルまたはプラスチック袋内の投与ＩＩ （Ｃ
／製ｎすに調製ｑることができる。このような単（＜／
投り製剤には、抗酸化剤、安定化剤、分倣剤 籾妙＋１
１１１青の賦形剤を、′？まけることが（さる。この」
、う＜＝投イノｊｕ ｌｅＩ製剤はゴノ、（ｆチルｆ’
ｌ＞）ｒ栓をＬ・Ｉ−ハイ−ノル中に因ｊ″−Ａまたは
その薬学的に訂ン； ｔ、 Ｉ！ｊる塩１００ｍｇをＦ
Ｊ４ＪしＵいる。Ｊした、別の１２ ’Ｊ中旬製剤（ま
藏菌が１１→ハ（Ｓフル１１コ、因子△、１ｋ（１ε（
ノコ１鋺２Ｆ＋□ｍｇを含有しくいる。静脈ｉｔ人１１
４の甲（１”ｌ投与製剤ト１因ｆ△よＩこは薬学的１５
−直打ｔ、 １するｉ品！）りをノ゛ノスｆツク貸中に
ａイｊしくいるしの（ある。 Ａ ／１１０３０枚合体または八４１０３０囚１′４抗
菌剤としく使用する場合（、↓、粁ｌ］まＬはＪ１軒１
１投！ＪすることかＣきる。当業名にとつＣは周知のこ
とＣ・あるが、△４コ０３ （’）複１’ｉ １本よＩ
、１．ｔ（の囚ｒは通常兼学的（こ、′１谷し１９る中
休まｌこは希釈剤とどしに投ｒ〕される。Ａ７′１１０
３０複合体まＬ（１囚１′の役！）ｆｊＭ Ｉｔ個々の
感染症の性質よＩごは弔篤１すのよ）イ「＋１ト々の囚
了にしむじてゆわる。、ＩＱ’ノのｌ、めの適当／、に
段′Ｊ範囲および まＩごは甲（１７投り艶は、〜ｌｌ
Ｃｌ山お上ひＦ Ｉ’） ｊｌｏ（ｌ自および市ｎ Ｕ
−ターイにらひＧ’−１人１？′ｉあるいＬＬ宿１４ｊ
らぴに１悠染黴′１物の神ｌン／７）因子に応じて決め
ることが（−きる。 へ４１０３（１抗生物質群は特に、スタフィロ−」・ツ
ノ）ス、ストレプト］ツ）Ｊス、およびプロピオ−ハリ
ｆリウム・アクネス微１物群の増殖を抑制り・、〉のに
ｈ用（あり、従つ（例えば、座癒の治療に１・ｊ４ Ｉ
ｌｌ することがで゛さる。Ａ４１０３０の個々の囚１
′訂あるい１．（イれらの混合物（よ精製した状態（、
ｆソ／ＩＪピル／ルＪ−ルのような薬学的にｈ′Ｆ￥ｖ
し１゛する希釈剤とともに製剤化し、皮膚に適用するこ
Ｊが（−きる。このようｆｅｉ溶液の抗」物質ｍ石は、
約１−・、約１５小ケア／′容φ％とすることができる
。 あるいｔ、ｔ ：した これらの抗／ｌ物質群は皮膚用
のクリームまたｔま１］−シコンの形に製剤化すること
も（きる。 Ａ４１０３０抗体物質群はまた、腸内においＣ己模↑１
１ 入１１１Ａｉ４（Ｐｓｅｕｄｏｍｅｍｂｒａ＋＋
ｏｕｓ ｃｏｌｉｔｉｓ）＋／’Ｉ原囚となるり（
１ストディリウム・フイノイリイ’Ｌ、（Ｃ，１ｏｓｔ
ｒｉｄｉｕ＋ ｄｉｆｒｉｃｉｌｅ ）微１物群の増
殖５抑υ１するのにイｊ用である。Ａ ４１０３０因了
ま／、＋、１その混合物、あるいはそれらの薬学的に計
容″しｉｓｉる塩のｈ動産を薬・′ｉ°的ｋＴｉ’をン
Ｆ シｌ！？る）ＱｌＪ形仏；に調製（１、これを＃￥
１１投りづる（二どに」、すｗｌ ｌＩ＊ Ｉ’１人陽
炎の治療に使用４ることか（さる。このＪ゛）イＣ用途
にはこの抗ノ１物ｕ ＃！Ｙ１．ｔ Ｕ ／ ）ンノＪ
Ｉ １．； ル：したは液状懸濁液の形て役〜するこ
とが（きる１、本発明に係る抗で１物ｖ１群はまた、動
物用ト薬としく家畜ａ＞ Ｊ、ひ農呆用動物の感染症の
治療（−便月１りることか（さるｉｌ ’−れらの抗’
４ ’／ｌ＋ ｕ Ｒ￥ １．ＬさＩ−、に！ＩＩ物農
菓の分野（、例λ（Ｌ肉′１およびぞの曲の反都仙物の
成長を（１ｒ進４るのに使用りろこと（〕（・さる２３
本発明の抗′１物質群の特に価賄あろ用途（（、九′１
のミルク！■産を増大さＵる１１ヒノノを４１・１６点
Ｉ５−ある。１′ｌ］・に計速するこれらの用途す本発
明の部’Ｊ ＜１：’Ｊもの（ある。 Ａ ４１０３０複合体【、（インビｌ １１ （こおい
（＝１０ｎｉ ｃす・′αｉの瀾１ら（゛感染Ｐ１尺肝
炎ウィルスにλ・＋ １． ＜活性をｉｌづ。まＩ、−
Ａ４′１０３０〜４′１０３０〜ンＩ：’ ｔ・１１（
Ｊおい（，２０ｌＩｌｃｇ、−’ 、ｔｒｉ２の１ｌｌ
ａ（’偽５１大病に女・１しく活ｆ１を小し１．、：ｏ
−ｈＡ４１０３０Ａ４１０３０因了でｉ−ｎにｄりい（
，２０ｍ ｃｇ 、ｔｉのｉｌｌ ｆｆｌ （偽５１
大病に対して活性を示した。 抗生物質Ａ４１０３０複合体は、ひよこの成長促進剤と
しての活性を有する。これについての試験は以下のごと
くして行なった。 試験１ この試験では８日令のペンノブスコツトブロイ’！ −
（ｐｅｎｏｂｓｃｏｔ ｂｒｏｉｄｅｒｓ）のひよこ
を使用した。全部で５６０羽のひよこを使用しこれを７
羽ずつのグループに分けた。３５群を対照群として使用
し、５群には抗生物質Ａ４１０３０複合体２０ｇを飼料
１トンに添加した標準的なひよこ用飼料で処置した。飼
料および水は２１日間自由に摂取させた。２回の反復試
験を行なった。活性の評価基準は以下の通りである：１
回または２回の反復試験において３％の体重増加および
／または飼料利用効率の２％の改善をみたもの。結果を
表−２３に示す。 従って本発明はまた、飼料１トン当り抗９．物質Ａ４１
０３０因子またはＡ４１０３０抗生物質複合体あるいは
それらの薬学的に許容し得る塩約２０〜約３０ａを混入
して得た飼料をひよこに投与することからなる、ひよこ
の成長促進法を提供するものである。抗生物質因子また
は複合体は薬学的に許容し得る非毒性塩の形でひよこの
飲”用水に入れて投与することもできる。 抗生物質Ａ４１０３０はまた、離乳した豚に投与しても
成長促進剤として作用する。この抗生物質を、種々の投
与口で若い豚に投与して試験した。 試験２ 抗生物質Ａ４１０３０複合体を、体重約２１ボンドの豚
（５〜７週令）のえさに５．２０．５０および１ｏ ｏ
ｐｐｉの濃度となるように混入し、試験した。この実
験は豚小屋中金網の床を持）た空ｇｌｒＡ育設備中にお
いて行なった。処置ごとに５回の反復実験を行ない、２
７日間の反復試験ごとに５匹の豚を使用した。実験の結
果を表−２４に示す。 この実験において、５ｐｐ−および１ｏｏｐｐ−の投与
量における結果が示しているように、離乳した豚の成長
は投与量に応じて改善された。 試験３ 抗生物質Ａ４１０３０複合体はまた、離乳した豚（１７
ボンド、４〜６週令）に、２５．５０、および１００ｇ
／トン（飼料）の割合で３５日間投与した。処置ごとに
６匹の豚を使用し４回反復試験を行なった。 抗生物質Ａ４１０３０複合体を上記の割合で離乳した豚
に投与したところ、それぞれ５．６％、８．５％、７．
０％の体重増加を示した。また飼料に２５．５０および
１００ｏ／トンの割合で混入したとき、飼料変換効率を
それぞれ６．６％、９．２％、３．１％改善した。これ
らの結果を表−２５に示す。 従って本発明はまた、Ａ４１０３０抗生物￥４ ｈ合体
またはＡ４１０３０抗生物質因子あるいＧ、Ｌぞの薬学
的に許容し得る非毒性塩を約５〜約１００１１１１ｍの
割合で餌料に混合して豚に投与することからなる離乳し
た豚の成長促進法、およびΔ４１０３０抗生物質複合体
またはその薬学的にｉ打し得る非毒性塩を飼料１トン当
り約２５〜約１００ｇの割合で混入して豚に投与するこ
とからなる離乳した豚の成長促進法を提供するものであ
る１、１１°Ｆ ／１物質Ａ４１０３０複合体は薬学的
に許容し得る非毒性塩の形で飲用水に入れて豚に投与づ
ることしできる。 Ａ４１０３０抗生物質群はまた、反為動物の飼料利用効
率を増大させるにの有用である。艮禍初物における炭水
化物の利用効率は、反榔動物の前胃菌相を刺激してアセ
テートまたはブチレート化合物よりプロピオネート化合
物の生産を促進４るような処置を講することにより増大
することが知られている（ Ｃｈｕｒｃｈら、″［）ｉ
ｇｅｓｔｉｖｅ Ｐｂｙｓｉｏｌｏａｙ ａｎｄ
Ｎ ｕｔｒｉｔｉｏｎ ｏｆ Ｒｕｉｉｎａｎｔ
ｓ″第２４．６２２〜・６２５）Ｑ （１’：’＋ ７
１１ ｉ ＆照゛）前胃４Ｊ ｄｉ イ（’！’ ｅ（
ｃ３れる押゛介す〕Ｉ ｔｌｉｉ ＩＩ／＋ ＭのＩＬ
４ ＋！’７金づる抗１１物負へ４ ’Ｉ ０３０〜
合体（１）、Ｊ、ひ八／Ｉ ｌ０Ｊ３０因ｒＡのイｒ
効ｔ／ｌ ｉｔ、１１ トに−小’Ｉ ｉ’ シシｉ
＋１（の試験（こ１゛）Ｃノ〒、される。 試験４ 外ｌＩ ｆ山（こｊり前冑中に開（１している′＋λ秋
高１１′を備えｌこ層らトから前胃液を冑ｌこ。この層
１は以１・の紺ｊＪｌｉ ’ａ （ｉ”Ｊ ６ ｔＱ類
に畠んだＩ！ＩＩｌ １Ｎ （ｆｉａｌ ｆｔ シ／、
：相杓砕１−“ノし［ド］シ ６ ！１ 、
０：’＋ ”ｉ。 粉砕トつＬ１１１シ穂軸 １０％１人Ωミール（
市白質５０％） ８％ ツノ ル ノ 、・ ル ノ 、・ ミ − ル
Ｆ’ｌ ９＋’＋糖
輩 ５％１Ａ
ぐ 木
Ｏ、（） ％す／し酸−ノｊルシウム
０．５）も；炭酸ノノルシウｌい ０
．５ｆｊ。 食 塩 ０３（ｊ、、、じタ
ミン／＼お」−ひ ０．０７９Ｆ。 １）ｚ７’レミックス ビタミンＦプレミックス ０．０５％痕跡のミネ
ラルプレミックス ０．０３％前胃液試料を４層のチ
ーズクロスでこし、濾液を真空びんに集めた。チーズク
ロスに残った粒状物質をもとの前胃液の量になるまで生
理緩衝液に再懸濁し、この懸濁液を再びチーズクロスで
こした。使用した緩衝液は以下の通りである：Ｎａ ２
ＨＰＯａ ０．３１６Ｑ ／１２Ｋ）−＋
２ ＰＯａ Ｏ，１５２０／ｉ。 Ｎａ ＨＣＯａ ２．２６００ ／ｌＫＣ
ｌ！、 ０．３７５Ｑ ／ＩＮａ Ｃ
ｆｆ１ ０．３７５ｇ／ｚＭｇＳＯａ
０．１１２０ ／１２Ｃａ Ｃ１ｔ２
０．０３８（１／ＩＦｅ ＳＯａ ・７Ｈ２
００，００８０／ｌＭｎ５Ｏａ ０１０
０４ｇ／Ａ７ｎＳＯｔ ・７Ｈ２００，００４Ｑ ／乏
Ｃｕ ＳＯａ ・５Ｈ２００，００２（Ｊ ／ＩＣｏ
ＣＩ！、２ ０．００１（１／ｋＣｈｅｎ
ｏら、Ｊ、 Ｄａｉｒｙ ３ｃｉ、 、 ３８
． １２２５ （１９５５１）参照。 ２つの濾液を分液１１−１・に東め、ｌｉｔ私物？′４
か表面に浮かぶま（” Ｍｔ冒した。澄明な層を分−１
し、同じ緩衝液（−１： １に希釈し、ｐＨ７，０に調
節（。 ｌこ。 この希釈した前胃液１０辰を前置の組成をイ１りる細か
く粉砕した飼料９０ｍｕを入れた２ Ｆ＋ ｋｉのフラ
ス−］に入れた。試験しよ）とする化合物を。］す、１
記の適当な溶媒に溶解した。この溶液をそれぞれの試験
フラスコ中の微粉砕飼料の１が６入れ乾燥した。 ４個の未処理灼照ノラス］２レッＩ−を用点しＩ、。 ４個の未処理対照フラスコ】の１セツトは試験用ノンス
」とともに３８℃（・１６時間インキ１１＼−１〜した
。もう〜ｈの４個の未処理対照−７７−ス：ｌ］ １．
Ｌ （１時間対照とし、フラスコを調整した泊１９に２
５）％メタ燐酸２脈を加λて１１１１Ｍを停止１さ口ｌ
Ｊ０イン１１へ−１−シた試験用ｄ５よび対照用ノノス
：目１コの醗酵は、２５％メタ燐＠ ２ ｘｉを１６助
間後に加えて停止１さυた。 すべての試料を静置しその上澄液をカス′／ｊ１ントグ
ラフィー法により、アセテート、プロじＡネートおよび
フチレートについて分析した。 未処理対照群および試験用フラスコの分析舶からＯ時間
対照群の揮発性脂肪酸の分析値を引いＩＪ５得られた値
は１６時間のｌｌｉｌ期間中に生産されｌこそれぞれの
揮発性脂肪酸の量を表わしＣいる。 以下に示す表−２６のデーターは、未処叩対照フラスコ
中で生産された揮発性脂肪酸にえｊづる処置フラスコ中
で生産された揮発性脂肪酸の比を表わしている。このデ
ーター表示法は、本発明に係る飼料利用効率改善法によ
ってもたらされる前冑中の化学的な変化の結果を最も明
瞭に表わしくいる。また、表−２６のデーターは、本発
明に係る抗生物質群が前胃におけるプロピオネート牛Ｈ
を増大するのに有効であることを示している。。 この方法に有用な抗生物質化合物を投与することにより
、飼料利用効率を改善するとともにケト−ジスを予防お
よび治療することができる。ケト−ジスがおこる機構は
、プロピオネート化合物の生産が不足する点にある。現
在推奨されている治療法はプロピオン酸あるいは優先的
にプロピオネートを生産する飼料を与えることである。 本明細占に開示された方法は、明らかに、通常の飼料か
らプロピオネート生産を増大させ、ケト−ジスの発生を
減少させるものである。 本発明者らは、プロピオネートを増大させるに有効な口
の本発明抗生物質を投与すると反ｎｏ物において飼料利
用効率が増大することを見出した。 この抗生物質群は、個々の成分であるいは全複合体の形
で、あるいは経済的には、精製度の低い全複合体の形で
動物用飼料に混入して好適に投与することができる。し
かしこの抗生物質化合物はその他の方法でも投与するこ
とができる。例えば錠剤、トレンチ、剤、巨丸剤、カプ
セル剤等に混入して初物に投与することができる。本発
明の抗生物質化合物をこの上″）な役１ノ杉態に１剤化
する方法は動物学分野においＣよく知られ（いろ。個々
び）１Ｇ ’ノ甲（１′／Ｉ：田、Ｌ、処置しようとづ
る初物にとって適当な１日量に＆−１接関連４る繰の飼
卑゛１利用Ｑｊ＋凶沃化合物が含まれ（いへければなら
ない。 あらゆる形態の所望の抗Ｚｔ、物質をゼー２−１ンカｌ
レルに光頃することにより、容易番ご力ｌＬル剤を製造
４ることがぐきる。所望により、この抗′１物質は不活
竹粉末希釈剤、例えば庶糖、゛（゛ん粉あろいは精製し
た結晶セル［１−スで希釈し、ＩＪ ＩＬル（こ光＠す
るに都合のよい容轍とづるＳとがＣ゛きる。 この抗９物質の錠剤は、通常の薬学的なＩＪ ＞Ａ （
・製造することができる。錠剤の製造法（、Ｌよく知ら
れＣおり非単に発達した技術で・ある。錠１’ｉｌｌ
Ｍ ｆよｊ山常活性成分の他に基剤、崩壊剤、吸収剤、
結ｆ）剤おＪ、び滑沢剤などが含まれている。代表的＜
ｔＮ剤は乳糖、粉砂糖、塩化ナトリウム、でん粉および
ンンーット４ｃどて・ある、、Ｃん粉（ま７ルＶン酸と
としに良好な崩壊剤て・もある。まＩＪ、戸′ノリルＭ
１酸リトリウ１１お、ｌ、びスルホコハク酸ジオクｆル
ノトリウムなどの界面活性剤も使用することが（・する
−通常使用される吸収剤はでん粉および乳糖であり、ま
た炭酸マグネシウムは油状物質にも有用（・ある。 よく使用される結合剤はゼラチン、ガム、て・ん粉、デ
キストリン、および種々のセルロース誘導体である。通
常使用される滑沢剤はステアリン酸マグネシウム、タル
ク、パラフィンワックス、種々の金属石けん、およびポ
リエチレングリコールなどである。 本発明に係る抗生物質化合物は、徐放性巨丸剤の形で投
与することもできる。このような［丸剤は、抗生物質の
溶解を遅らせる手段を除いては錠剤と同様にして製造さ
れる。巨丸剤は長期間放出を保つように製造される。水
に溶解しにくい抗生物質を選択することによりその溶解
を遅らせることができる。巨丸剤の密度をあげ、前胃の
底に安定に保持するために鉄充填−のような物質を加え
る。 抗生物質を埋め込んだ不溶性物質からなるマトリックス
を使用することによって抗生物質の溶解を遅らＵろ、Ｌ
、？ ｂ ’ｔニーきる。例えば植物ワ・ノクス、精製
ミネラルｌノックス、ｄｉよび水不溶性φ合物質なと７
八石用Ｃある。 本発明に係る抗１１物質のドレンｆ剤Ｇ、Ｌ、水”Ｉ
ｆｌ’ｉ色の抗生物質を選ぶことにより容易に装造りろ
ことが（゛さる。へんらがの理由ぐ不溶ｆ］の抗牛物７
：１を使用したい場合にｆｌ、懸濁液の形に・Ｊること
が（−ｄる。あるいｃｒｔドレンｆ〜ＩＧよ、／＋ １
！［’学的にｎ行しくりる溶媒、例えばポリ丁チレング
リコールの１谷液の形に製剤化しくもよい。 不溶性の形の本発明に係る抗′４物質の懸濁液は、ぞの
抗／Ｉ物質の形に応じＣ、ピーフッ油、とうもろこし曲
、またはごま油のよ−）な稙物浦のごとｃ！ 、７１溶
ｌｖ、あるいはプロピレングリ−Ｊ−ルーＬＬはポリエ
チレングリコールのようなグリ」−ルチ′１、あるい（
を水を用いｃＵ４暫してもよい。 抗１１物質を懸濁さ″ぜておくために、適当イＮ／ｌ即
学的にム１容し１１る補助剤が必Ｌ（−ある。この、１
、）な補助剤とじ（（，１シツクナー、例えばカルホλ
−シメｆ ／Ｌ、 ｔル１１−ス、ポリビニルビ１］リ
ドン、しノチン、アルギネートなどを使用することがで
きる。 多くの界面活性剤は抗生物質を５ｉａｉさせるのに有用
である。例えばレシチン、アルキルフェノールポリエチ
レンオキシド付加物、ナフタレンスルホネート、アルキ
ルベンゼンスルホネート、およびポリオキシエチレンソ
ルビタンエステルなどは液状の非溶媒懸濁液を調製する
のに有用である。 さらに、場合に応じて、液体の親水性、密度および表面
張力に影響を与える物質を、懸濁液を調製するだめの補
助剤として使用することができる。 例えばシリコン消泡剤、グリコール、ソルビトールおよ
び庶糖は懸濁化剤として有用である。 懸濁可能な抗生物質は、動物飼育者に１！濁液として提
供してもよいし、また、使用前に希釈する抗生物質と補
助剤との乾燥混合物の形で提供してもよい。 本発明の抗生物質は、反舅動物の飲用水に投与づること
もできる。水可溶性の、あるいは水懸濁性の形の所望の
抗生物質を適当農水に加えることにより、飲用水への混
入を行なうことができる。 飲用水に添＋１１１４６ための抗り物質の製剤化１．１
．ルン１剤の製剤化ど同じ原理Ｃｈ ’ｆう。 本発明の抗生物質で動物を処訪する顧し大際的イ１方法
は、この化合物を飼料添１ノ１１物（、二渥へしく製剤
１に４ること（゛ある。通常の乾燥飼料、液状ｆｌ＝Ｉ
Ｆ＋およびベレット状飼利／ｉど、あらゆる’／ （
−ｆ ｔａｒ ｆ！ｇｌ料にこのＶＬ’ｌ物買を混入す
ることがて−さる８動物川飼利に薬物を入れて製剤化す
るＩＪ法ＬＬ ｉく知られ１いる。医療用餌料用の原￥
１１１７１賀ど１７（、ａ縮薬物プレミックスを調製す
るのが西通Ｃ゛あう、。 例えば曲型的む薬物プレミックスは、ｌレミックス１ポ
ンド当り約１００へ約／Ｉｏ（”ｌ（Ｉの薬物をＪ（右
している。鰻終飼利中におＩｊる希望される薬物の広い
′ａ亀範囲に応じＣ広い範囲のブレミツ′ノスが調製さ
れる。このプレミックスは液状で“あ）でも固状であ・
） −７’ ５よい。 治療にイｊ用な適切な嬶の抗生物質を含ＲＬ （いる動
物用飼料の製剤化は、１とし【泪ｃ１１Ｊ 、１、−〕
（１２、−われる。動物が摂取４６１日当りの飼Ｆ＋１
都および使用しようとりるプレミックス中の抗１１ルｉ
？１の濃度を考慮して、１匹の動物に投与したい抗体物
質の量を計算し、そして飼料中の抗生物質の適切な濃度
を計算しさえすればよい。 反異動物あるいは非反異動物の飼料技術において通常使
用される製剤化法、混合法、およびペレット化法などは
、すべてこの方法に使用し得る本発明の抗生物質を含有
する飼料を製造するのにそのまま適用することができる
； 抗生物質Ａ４１０３０複合体は食肉用の反榔動物におけ
る飼料利用効率を増大させるのみならず、発達した前胃
機能を持った授乳用動物に投らするとミルクの品質に悪
影響を及ぼすことなく、ミルク生産量に著しい改善をも
たらすことがわかった。 乳牛のような授乳用反異動物における飼料利用の必要性
および目的は、食肉用として飼育される反異動物のそれ
とは著しく異なっている。反為動物における揮発性脂肪
酸（ＶＦＡ）の生産は、イれがその動物の正常な維持、
およびその動物によって生産されるミルクの質および儲
に直接関係しているので極めて重要なことである。しか
し授乳用友祁動物Ｌ：、 ｊ目Ｘ−Ｃは、授乳のための
ｌネル髪゛−はミルクイ［Ｈにおいて最も制限された囚
ｆＣ−＋ｈる、。 ７レフー１・はミルク脂肪の合成に必要であるが、−ｈ
ブ［１じＡネートはグル１−スの（［産（ご使用され（
これはシクトースの合成に必要である）、ミルク脂肪の
１１−所にはあまりΦ東（・はない。／ル−トは脂肪形
成性とい）よりはむしろ糖形成竹てあり、イの脂肪形成
ｆ１は間接的なものＣあろ３．ミロ゛ＧらプＬレートは
、長鎖の脂肪酸合成、即Ｉ〕、ミルク脂肪の合成に利用
されるｌ１１１にま・ｒ７しＩ−ト１１位に分解され！
； ＬＪればならないからである。 従つＣ反為動物においてミル’／ ／ｉ Ａを増大さ１
４るには、ルテートおよびブチレー１への／１産をさは
ど犠打にづること％ ＜ ７１−１じ４ネートの（（４
を増大さけることが必要である。？Ｌ ｊ−ｈおＬびＩ
プレートの淵１ａがＬしく減少σろと、ミルク脂肪の含
φを極度に減少させることどなり、品質おＪ、ひ経済的
む而からミルク生産をより実能率なものにしＣしよう（
ミルクの価格は一部にはミルク脂肋含嬉によって決定さ
れる）。 ミルク生産における本発明の改良法は、脂肪含齢をさほ
ど変化させることなくミルクの蛋白質含量を増大させる
のが特徴である。この改良法は、抗生物質Ａ４１０３０
複合体のプロピオネートを増大させるに有効な量を授乳
反異動物に経口投与することからなる。 抗生物質Ａ４１０３０複合体は、反部動物に経口投与す
るのに便利な形に製剤化することができ、このような製
剤は飼料プレミックス、飼料付加物、リック（なめ物）
、水添加物などの形であってよく、所望により抗生物質
Ａ４１０３０複合体は１回の投与で長期量体々に放出す
る形の製剤とすることもできる。 プロピオネートを増大させるに有効な量の抗生物質Ａ４
１０３０？！合体を、発達した前胃機能を持った授乳用
反異動物に投与することにより、ミルク組成に悪影響を
与えることなくミルク生産を改善し得ることはインビボ
実験により確認された。 試験５ 出産したばかりのホルスタイン種の牛を使って２つの実
験を（１なつＩＪ、、最初の実験（・は、１２頭の生を
使Ｉ’ｌｌ シロ頭ずつの２つのグループに分＋ｊ ｊ
： 。 出産２週間後から、被験動物につい（１週間の予備期間
を開始し、この間すべての動物【こ［］常Ｃ７’）飼料
および水を１−ｔλ抗’ｉｔ ｖ！Ｊ質は投すしなか）
１．：。 づへての動物（こ、とうもろこしスレッジ〈斬軒１１貯
藏物）５０％、乾燥アルノ〆ルノト２０％ｄ３よび下記
に示４組成の濃縮物３０％からなる標準的へ ｌ！ｉｌ
専１ を ！ノ え Ｉこ ：濃 縮 物 成 分 パーヒント ポンド、／川・ン黄色
粉砕 ２３．５０ ４７（”）、０とうも
ろこし りん酸二ノ」ル １．５０ ３０．０シウ
ム ヒルイ＋ １．２５ ２５．（１
糖蜜（Ｄｅｌ＋ｙ ） ２．１５４３．０〜１
叶りんＭ Ｏ，１０２，０−ｊｌ−リウム 人Ω油ミール ４７．００ ９４０．（”）ビ
タミンＡ＋０３ ０．３５ ７．０プレミツク
ス（ Ｃａ −０１） Ｎ４ １） しタミンＥブレミ ０．１’０ ２．０ノク
ス（汀２） しレンブレミツ ０．０５ １．ＯシスＮ
ｆ３） 良 ｊ！ａ １．０（’） ２
０．０Ｌ１１ＶＡｉＩＪトリウム １．００
２０．０−ｐ、 １ ｌ！の乾燥 ２２．００
４／１０．０ゾルＩル（とう Ｌ）ろこし） １００．００ ２０００．０ （注１）ビタ、ミンＡおよびＤ３プレミックス１ポンド
はビタミンＡ ２００００００ＬＩＳＰψ位、ビタミ
ンｎ３ ２２５７５０ＵＳＰ単位を含んでいる。 ＜ ｔ１２ ）ビタミンＥプレミックス１ポンドはビ′
ＩミンＥ ２００００１ｔＪを含んでいる。 （注３）セレンプレミックスｌｋｏはセレンナトリ１ク
ムとしＣのし【ノン２（１０ｍｇを１（んでｄｉす。 セレンの計ｎされた分析顧は、プレミックスのみからの
もの（ある。 すべ（の牛には、休Φ（体Φｔま１過間の予備期間の開
始Ｅ１に測定した）の２．９５％のυ１合の標準的飼料
および以下に示す組成をｈ１４る１−ツノ゛ドレスと呼
ばれる製剤２ポンドを摂取さ１！／、、：：粉砕黄色
２０．００ ／１００．０どうｂろこし 粉砕−０とうｂ ３８．Ｏ（’） ’Ｖ６ｏ、
（”）ろこし穂軸 茎糖蜜 ２．５０ Ｆ＋０． Ｏ
からづ？ １１．００ ２２０．０人Ω
油ミール ２Ｆ＋、Ｏｎ ５００．０ビタミ
ンＡ＋Ｄ３ １．１０ ２２．Ｏｌプレミッ
クス Ｃ△−０１＞ （ｔ＋ １ ） 食 塩 （’）、４０
８．０１す１ｍ１ｌｌｉ
００
０ （１−−１００，００２０００，Ｃ） 叫１１）ビタミンＡおよび１１３プレミックス１１：ン
ドはビタミンＡ ２００００００ ｊＪ Ｓ Ｐ単位
へ、ビタミン０３ ２２５７５０ＬＪＳＰ甲位を含（１
している。 １週間の予備用間中、すべての牛に対照トップドレスを
与えた。処置期間の開始日から被験初物（、−、トップ
ドレスに抗生物質Ａ４１０３０？Ｓ１合体（試験化合物
）を混合したものを８週間与えた。 祠照鼾には、予１期間中のトップドレスと同じ、−物を
添加しでいないトップドレスを摂取させた。 ｌ・１照用トツ１ドレスおよび抗生物質Ａ４１０３０（
合体を含有しているトップドレスは、上記の標・１的ｒ
ｉｌ料の朝の摂食時１時間以内に、１日２ポンドの割合
で実験動物に摂取させた。処置群は抗生１々１賀を（ｉ
（１０１（＋／頭／日の割合で投与された。 Ｙ記の方法で同じ実験を繰り返し実験２とした。 実験１および実験２について平均的な１日当り１１）ミ
ルク１産、ミルク組成およびミルク生産の持続性を分析
し表−２７（こまとめ１＝ 、持較竹碩（１α賀明間中
のミルウシ１産品を、予備用間中の’Ｐ均的生産吊（・
割ったしの”（゛ある。この持続Ｈ顧は、処置開始前の
ものと比較した場合の処置後の効ψかとの程亀であるか
を示している。通常のドＩ続↑ＩＩ ｌｌｌ’１の明持
舶は約９４−・約９６％であ） ／、： 、い・ｒれの
実験にＪ＞いでも、Δ４１０３０複合体を摂敗しｌど／
［は高い枯続ｆ［稙を示しｔコ。これは処置（こよる顕
箸な反応を表わづものである（即し、処置群（は対照群
に比べ、予備用間中のミル９′１イが凸く頓持されてい
る）。 表−２７のミルク組成を分析ツると、ミルク脂肪におい
ては処置群と非処置群との間に差がないが、蛋白質＠
ｉ ４Ｊ ３．者の方が優れていることがわかる。ミル
ク蛋白質が増加することは、たとえその増加がわずかで
あっても、ミルクから製造されるチーズの縁を著しく増
大させるので゛非常に望ましいことｅある。 抗生物質Ａ４１０３０複合体および因子Ａ、Ｂ、Ｃ，Ｄ
、Ｅ、ＦおよびＧは、既述した実施例に記載の方法で分
離して動物用飼料に使用ケることができる。また、所望
ならば、Ａ４１０３０抗士物質を生産した後、全醗酵ブ
ロスを乾燥しぞの乾燥詠を直接飼料または飼料プレミッ
クスに混合しでもよい。 さらに本発明に係るＡ４１０３０抗生物質〜合体および
その因子群は、亜硫酸化フェノールホルムアルデヒド合
成タンニンである合成タンニン削（例えばＡ、Ｊ、
＆ Ｏ，Ｊ、Ｐｉｌａｒ Ｉｎｃ。 （Ｎｅｗａｒｋ 、 Ｎ、 Ｊ、 ）からＴｒｕｔａｎ
ＲＪＲｅｇｕｌａｒの商品名で発売されているもの
）と混合ｆることができる。この抗生物質と合成タンニ
ン剤との混合物、抗生物質−合成タンニン複合体は成分
に分離することなく、上記の動物用飼料補助剤に入れる
ことができる。 反ｊａｌｌｌ物のような経済的価値を有する動物には全
生涯を通じて、種々の成長促進剤、病気の予防剤・１メ
よび治療剤を投与するのが普通である。このよ）へ薬物
は組合せて使用されることが多い。本発明方法もその他
の処置と同時に行なうことができる。 既述したように、抗生物質Ａ４１０３０複合体およびＡ
４１０３０因子Ａは、前胃中のアセテート生産に比較し
てプロピオネート生産を改善さぼる。このような処置は
、盲腸で植物性の繊維物質を醗酵させる単胃動物にも適
応することができるここで甲冑動物とは、繊維性の植物
性飼料を消費し、盲腸で微生物のｓＩ醇により少なくと
もその一部を消化゛する動物を言う。ＮＷＡにおける醗
酵の化学的１０セスは前胃における醗酵のものと類似し
辷ものである。 食物の一部を６賜における醗酵（こよ−）Ｃ間化ｊする
代表的な動物は、馬、豚および兎である。このような動
物における全飼料利用効率は、プロピオネート／ラレデ
ート比を有利に変化させる本発明、 の抗生物質を経
口投与することにより改善される３馬や兎は、全消化過
程の大部分を盲腸にお１ノろ醗酵で行なう代表的な動物
であり、従って本発明の抗生物質はこれらの動物にと・
）て特に利用Ｃある。
第１図〜第７図は、ＫＢｒ法で測定したそれぞれＡ４１
０３０因子Ａ、因子Ｂ、因子Ｃ１因子［）、因子Ｅ、因
子Ｆ、および因子Ｇの赤外吸収スベク（−ルである。 特許出願人 イーライ・リリー・アンド・カンパニー代
理人 弁理士 青 山 葆 外１名第１頁の
続き 優先権主張 ＠１９８２年３月２４日＠米国（ＵＳ）■
３６１３０２ ＠１９８２年１１月２２日■米国（ＵＳ）［有］４４３
４９６ ［相］発 明 者 カール・ハインツ・ミケルアメリカ
合衆国インディアナ４６ ２０４インデイアナポリス・アブ ト２２０５イースト・ノース・スト リート２２５番 ０発 明 者 ワルター・ミツオ・ナカツカサアメリカ
合衆国インディアナ４６ ２２フインデイアナポリス・クロ スマン・ドライブ２１１８番
０３０因子Ａ、因子Ｂ、因子Ｃ１因子［）、因子Ｅ、因
子Ｆ、および因子Ｇの赤外吸収スベク（−ルである。 特許出願人 イーライ・リリー・アンド・カンパニー代
理人 弁理士 青 山 葆 外１名第１頁の
続き 優先権主張 ＠１９８２年３月２４日＠米国（ＵＳ）■
３６１３０２ ＠１９８２年１１月２２日■米国（ＵＳ）［有］４４３
４９６ ［相］発 明 者 カール・ハインツ・ミケルアメリカ
合衆国インディアナ４６ ２０４インデイアナポリス・アブ ト２２０５イースト・ノース・スト リート２２５番 ０発 明 者 ワルター・ミツオ・ナカツカサアメリカ
合衆国インディアナ４６ ２２フインデイアナポリス・クロ スマン・ドライブ２１１８番
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、 Ａ／１１０３０複合体、そのＬ４了Ａ、［３，
０、［）、Ｆ、Ｆ、および０ならび（こその塩。 ２、 以トの構造式を４ＩるＡ ４１０ご３０囚ｆ△お
よびその塩。 Ｈ ３、以■この４＃！造式を有するＡ４１０３０因子口お
よびその塩： １１ ｌｌ 、 以トの構造式をイ１ｇるＡ４１０３０ ［
ｊＪ了０およびイの珈： ０■ ５、 （ａ）おおよその元素分析顧が炭素５４゜１
６％、水系４．３５％、窒糸７．５８％、塩素１．２７
％、酸素２９．３４％（差から）であり、（１） ）高
速原子衝撃マススペク１〜ルでｖＡ寮されＬ分子ｉが約
１３２６であり、 （Ｃ）以上の区別し得る吸収仲人：３４４８−３２２６
（強、！ロード）、２９５９（弱）、１ζ）６ ’１
（強）、１５９２（強）、１５１１ （強）、１．１２
９ （弱）、１２９０（弱＞、１２２７（弱）、１２１
２（中）、１１６３（弱）、１１４３（弱）、１０５３
（中）、および１０１０（強）ＩＩをもする赤外吸収ス
ペクトルを示し、（ｄ）！ｌｌ性または中性のメタノー
ル：水（１：１）混液中の紫外線吸収スペクトルにおけ
る。吸収惨人が２７８ｎｍ（ε１０６００）？−あり、
塩基性（′ハメタノール二水（に１）混液中【゛の吸収
極大ｔ＋＜ ２９８ ｎｌ （ε１９９００）であり、
（ｅ’）６６％ジメチル小ルムＩミド水溶液中、約５．
５および７．６のｐＫａ値を示づ２個の滴′７ビ ｌｉ
ｔ ｉ 鳥４４ｒ ｂ Ｌノ 、〈ｒ＞ノ’ル１
−ルと水の混液、ジメチルスル小１シト、ジメｆルホル
ムＩミド、ラメ−１ルスル小キシ１〜と水との脱液、ジ
メチル、１−ルムアミドと水との混液、希酸水溶液、お
よび希〆ルｂり水溶液にＩＩ１溶であり、 白色無晶形固体の抗り物質Ａ４１０３０囚了ＩＪ ｄｉ
よひぞの塩。 ６、 以Ｆの構造式を有するＡ４１０３０囚子１お４上
びぞの塩： Ｈ ７、 以上の構造式を口するＡ４１ Ｃ）３０囚イ１−
およびその塩； Ｈ ８、（ａ）おおよその元木分析給が炭素５０゜０２％、
木本４．６１％、ＩｎＸ４．７／１％、窒木６．１１％
、酸素３０．７０％であり、（ｂ）高速＠ｆ衝撃マスス
ペクトルで観察した弁子畿が約１６８４であり、 （Ｃ）以下の区別し得る吸収極大：３３２０（強、非常
にブ１−］−ド＞、２９７５（弱、シャーＺ）、２９２
０＜弱、シャープ）、１６５９（強、通常）、１５９４
（強、ブロー１〜）、１５１２（強、シャープ）、１４
９２（肩＞、１４３０（弱、シャープ）、１３８６（弱
、／【」−ド）、＋３３７（弱、ブロード）、１３０８
（弱、シ１ｚ−ｆ＞、１２６４（弱、シｖ−７’） 、
１２３０（中、７ ＋１’ｌ−ド＞、１１４５（中、
ブロード）、＋０７７ （中、シｔ−７＞ 、１０６２
（巾、シト〕）、１０１４ （中、シャープ）、およ
び８４６（中、・ブロード）ｃ［１を有づる赤外吸収ス
ペクトルを示し、 （ｄ）ｉｌｌｌｆ’Ｌまたは中性のメタノール：水（１
ニーＦ）混液中の紫外線吸収スベク［・ルにおける吸収
極大／Ｊ：２７８ｎｍ（ε１５ｏ００） ′Ｌ−ｔｈす
、ｊ！、ｉ’Ｊ ｔ’１のメタノール：水（１： １）
混液中Ｃの吸収極大か２９８ｒ＋＋＋＋（ε１８０００
）−Ｃ”ｈｋ）、（Ｃ）６６％シメｆル小ルムアミド水
溶散中、杓！’＞ 、 ４ Ａ；ヨ（ｊ ７ 、０（１
）Ｄ ＫＡ顧ヲ示４２ ｔｔａｌの滴定ｌ’ｌ （ｉＦ
１．！をイｊし、 （ｆ ） 、／’ルー１−ルと水の混液、ラメ−１ルス
ル小トシ１ζ、ジメＪル小ルム／７ミド、ツメ１ルスル
ノｊ、１シ（−と水の混成、ツメ−１ル小ルムアミドと
水の混油、希酸水溶油、希フル／Ｊり性水溶液【ご司溶
（あり、 白色固ｉ４（・ある抗生？！ｌ買Ａ ４１０３０囚了Ｇ
および−ぞの塩。 ９ 、 ８ ＋ｒｅｌｌｌＯｎ＋ｙｃｅＳ ｖｉｒｇ
ｉｎｉａｅ Ｎ ＲＲｌ １５ ’Ｉ ５ ｆ３ま］、
−１、口２５２５、あるいはその△４１０３０ ’ｌ
＋植能をイｊする変種または突然変巽株を、同化し１！
Ｉる炭県諒、窒素源および、無機塩類を；）イ１する１
バ養培地中、液中りｆ気培りｓ条ｆ１トＣ培養ｆること
からイにるＡ 、１ ’１０３０抗生物質脚合体または
ｉ ＩＡＩ了Ａ、１３．０、ｌ）、［、ＦあるいはＧを
’［３３づる方法。 １０、 培養培地から該複合体を分離する工程を含む第
９項に記載の方法。 １１、 該複合体から因子Ａ、Ｂ、Ｃ，ＤＳＥ。 ＦまたはＧを分離する工程を含む第１０項に記載の方法
。 １２、 化学療法的に有効な量のＡ４１０３０複合体ま
たはその因子Ａ、Ｂ、Ｃ，Ｄ、Ｅ、ＦまたはＧ１あるい
はその塩を授乳反異動物に投与することからなる該反異
動物のミルク生産を改善する方法。 １３、 活性成分としてＡ４１０３０複合体、Ａ４１０
３０因子Ａ、Ｂ、Ｃ，Ｄ、Ｅ、ＦまたはＧ１あるいはそ
の塩を含有してなる飼料プレミックス。 １４、 化学療法的に有効な量のＡ４１０３０複合体、
因子Ａ、Ｂ％Ｃ％Ｄ、Ｅ、ＦまたはＧ、あるいはその塩
を反為動物に投与することからなる該反異動物の飼料利
用効率を増大させる方法。 １５、 化学療法的に有効な―のＡ４１０３０？Ｖ Ａ
（Ａ、Ａ ／１１０３０ ［ＡＩ ｔ’ Ａ、１３＋
、 ｃ、１）、１．１本／、、： ４．ｔ Ｇ、あるい
は（の塩を温血動物に投りりることからなる該瀉血動物
の成長を促進（Ｊる／Ｊ法。 １６、 微′１物ｓ ｌｒｅｐｌｏｍｙｃｅｓ ｖｉ
ｒｇｉｎｉａｅ ＮＲＲＩ １２ｈ２ｊｉの無菌培養。 １７ 、 ３ ｔｒｅｐｔｏ＋＋＋ｙｃｅｓ ｖｉｒ
ｇｉｎｉａｅ Ｎ ＲＲ１１２？ｉ ２ ！’ｉ。 ｌ Ｒ、Ｓ Ｉｒｃｐｔｏｍｙｃｅｓ ｖｉｒｇｉｎ
ｉａｅ Ｎ Ｆで［り１１ Ｅ′ｉ’ｉ Ｆ） ６の無
菌培養。 １９、 ５ｌｒｅ１口ｏｍｙｃａｓ ｖｉｒ
ｑｉｎｉａｅ Ｎ ＨＲ１１’ニー＞ １５６゜ ２（’）、 ｌもしくはイれ１ズ［の薬学的に＝Ｔ
’ｔ７ シ１ｈ ６担体または希釈剤とと６に活性成
分としくＡ４１０３（’）ＩＡＩ了Ａ、Ｂ、Ｃ，Ｄ、ｆ
−、Ｆｆ／、１．ｔＧ、あるいはぞの薬学的に許容しく
ｑる塩を含４−１シてイｉる医薬組成物。 ２１、 １もジノ＜はイれＬＩＩ−の薬学的に−Ｖｉし
く【Ｉる中休または希釈剤とともに活性成分としくＡ４
１０３０ 複合体、因子Ａ 、 Ｂ、Ｃ１［）、［、［
は／、： １、ＩＧ、あるい（、Ｌその薬学的にム！１
容し得るｊ−を
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US36130182A | 1982-03-24 | 1982-03-24 | |
| US361302 | 1982-03-24 | ||
| US361301 | 1982-03-24 | ||
| US443496 | 1989-11-30 |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3312353A Division JPH0771478B2 (ja) | 1982-03-24 | 1991-11-27 | Ａ４１０３０抗生物質群を産生する微生物 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58185546A true JPS58185546A (ja) | 1983-10-29 |
| JPH0429679B2 JPH0429679B2 (ja) | 1992-05-19 |
Family
ID=23421486
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP58049665A Granted JPS58185546A (ja) | 1982-03-24 | 1983-03-23 | Ａ４１０３０抗生物質群 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS58185546A (ja) |
| ZA (1) | ZA831984B (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61502335A (ja) * | 1984-06-13 | 1986-10-16 | グルポ・レペチツト・エス・ピ−・エイ | デグルコテイコプラニンのカルボン酸エステル誘導体 |
| JPS62250000A (ja) * | 1986-04-11 | 1987-10-30 | グルポ・レペチツト・エス・ピ−・エイ | 糖ペプチド抗生物質の回収方法 |
-
1983
- 1983-03-22 ZA ZA831984A patent/ZA831984B/xx unknown
- 1983-03-23 JP JP58049665A patent/JPS58185546A/ja active Granted
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61502335A (ja) * | 1984-06-13 | 1986-10-16 | グルポ・レペチツト・エス・ピ−・エイ | デグルコテイコプラニンのカルボン酸エステル誘導体 |
| JPS62250000A (ja) * | 1986-04-11 | 1987-10-30 | グルポ・レペチツト・エス・ピ−・エイ | 糖ペプチド抗生物質の回収方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ZA831984B (en) | 1984-04-25 |
| JPH0429679B2 (ja) | 1992-05-19 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR101228993B1 (ko) | 발효 및 배양 방법, 식물발효 엑기스, 식물발효 엑기스분말 및 이 식물발효 엑기스 배합물 | |
| US11319279B2 (en) | Antimicrobial compound and use thereof | |
| TW455591B (en) | Lipopeptides from actinoplanes sp. with pharmacological action, process for their production and the use thereof | |
| JPS6110589A (ja) | 新規化合物、その製法およびその用途 | |
| EP0646649B1 (en) | Method of producing iturin A and antifungal agent for profund mycosis | |
| CN106632606B (zh) | 抗菌脂肽bacaucin衍生物及其在抑制细菌感染中的应用 | |
| CN106674331B (zh) | 抗菌脂肽bacaucin及其制备方法与应用 | |
| JP4620873B2 (ja) | Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍｔｕｂａｋｉｉ由来の新規抗寄生虫薬であるセファイボール、その製造方法およびその使用 | |
| EP0888062A1 (en) | Antibacterially active marine algae extracts from the class diatomatae and methods of use | |
| JPS58185546A (ja) | Ａ４１０３０抗生物質群 | |
| JPH10503368A (ja) | 抗原生動物環状テトラペプチド | |
| JP3063930B2 (ja) | アロサミジン化合物及びその製造法 | |
| JPS5831327B2 (ja) | 動物用医薬組成物 | |
| KR102158205B1 (ko) | 항균 활성을 갖는 신규한 고리형 리포펩타이드계 화합물 및 이의 용도 | |
| CZ303552B6 (cs) | Memnopeptid, farmaceutická kompozice tento memnopeptid obsahující, zpusob prípravy tohoto memnopeptidu a jeho použití k príprave léciva | |
| JP2540292B2 (ja) | 新規な微生物 | |
| US7211417B2 (en) | Antibiotic P175-A and semisynthetic derivatives thereof | |
| KR101268170B1 (ko) | 항균 활성을 갖는 신규한 환형 펩타이드계 화합물 및 이의 용도 | |
| JPH06116159A (ja) | ネンジュモ抽出物 | |
| KR102239382B1 (ko) | 신규 마실리아 속 균주 및 그의 용도 | |
| KR100406516B1 (ko) | Mk7634물질,그제조법및mk7634물질을함유한구충제 | |
| JPS60133000A (ja) | グリコペプチド系生物学的変換産物 | |
| JP2002128619A (ja) | 抗コクシジウム剤 | |
| US6384187B1 (en) | Antiproliferative activity of microsclerodermins | |
| JPH0665246A (ja) | 新規物質ｐｆ１１０１ａ物質、ｐｆ１１０１ｂ物質、それらの製造法及び用途 |