JPS60133000A - グリコペプチド系生物学的変換産物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は、新規なグリコペプチド系抗生物質類、並びに
アクチノプラネス・ミソウリエンソス（Ａｃｔハ卯国些
ジ叫９ψ回ｅｎｓ−ｉｓ−）の２個の新しい菌株である
ＣＵＣＯＩＩＩ株またはＣＳ　Ｖ　５５８株のいずれか
一方を用いてアクタプラニン因子類を生物学的に変換す
ることにより、これらの抗生物質類を製造する方法に関
するものである。

褒呼へＩ旬−核其（ト）（１逸 本発明の、生物学的変換法によって製造される化合物群
は、ニ般式（１） ［式中、Ｗは、式（２） で示される共通構造を持ったアクタプラニンＡ１Ｂ１、
Ｂ２、Ｂ３、Ｃ１ａ、Ｃ２ａ、Ｃ３、ＤＩ。

Ｂ２、Ｅｌ、Ｇ、に、Ｌ、ＭｌＮ、Ｏおよびプソイド（
ψ）アグリコンの中から選択されるグリコペプチド系抗
生物質の残部を表す］ て示されろ。

式（１）で示される化合物群およびその塩、特に薬学的
に許容し得ろ塩類は有用な新規抗生物質である。それら
はダラム陽性菌にたいして有効であると共に、動物にお
ける飼料利用効率を増大し、反鈴動物にお（１ろ乳牛産
性を高めろ。

Ａ、ミソウリエンノスのＣＵＣＯＩ４１朱およびＣｓ　
ｖ　５５８株は、Ｎｏｒｔｈｅｒｎ　Ｒｅｇｉｏｎａｌ
　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　Ｃｅｎｔｅｒ、Ａｇｒｉｃａｌｔ
ｕｒａｌ　ｒｅｓｅａｒｃｈ、Ｎｏｒｔｈ　Ｃｅｎｔｒ
ａｌ　Ｒｅｇｉ。

ｎ、１８１５　Ｎｏｒｔｈ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　５
ｔｒｅｅｔ、Ｐｅｏｒｉａ、１ｌｌｉｎ。

ｉｓ　６１６０４に寄託され、そのストック・カルチャ
ーコレクションの一部となっており、寄託番号ＮＲＲ１
，，＋５６４６（ＣＳ　Ｖ　５５８）およびＮ　ＲＲＬ
　１５６４７（ＣＵＣＯＩ４）の下、誰ても入手できる
。

本発明の方法で製造されるグリコペプチド系抗生物質は
、式（１） で示される。各化合物に関して式中の各記号は次の様に
定義される。

番号　化合物　Ｒ１Ｒ９Ｒ３ Ｉａ　ＣＵＣ／Ｃ３Ｖマンノンルークルコシルマンノン
ルマンノンルｉｌ′１１３．／Ｃ３Ｖ　ラノ、ノンルー
グルー１ツルマンノツルマンノノルＩｃ　Ｂｚ／Ｃ３Ｖ
　グルコツル　マンノンルマンノンルｂｌ　Ｂ３／Ｃ３
Ｖ　マンノンルーグルコツルマンノノル　ｌ−１１ｅ　
Ｃ＋ａ／Ｃ８Ｖラムノンル−グルコツルマンノノル　１
１Ｉｆ　Ｃ，／Ｃ３Ｖ　ＩＩ　マンノノルマンノノル１
ｇＣ５／Ｃ８ｖクルコンルｌ−１マノノノルＩｌｌ　Ｄ
Ｉ／Ｃ３Ｖ　Ｈマン）ノルｌｌ１ｉ　Ｄ２／Ｃ３Ｖ　Ｉ
−Ｔ　Ｉ−１マンノノルｌｊ　Ｇ／Ｃ３Ｖ　グルコツル
　マンノノル　ｌ−１１ｋ　Ｋ／Ｃ３Ｖ　マンノンルー
グルコツル　Ｈマンノノル１ｍ　ｌ／Ｃ３〜１　ラムノ
ンルーグルコツル　Ｌｌ　マンノノルＩｎ　Ｍ／ＣＳＶ
　７：／ノノルークルコンル　ＨＨｌｐ　Ｎ／Ｃ３Ｖ　
−）１Ｊ　ノルークルコンル１−ＩＩ］Ｉｑ　０／Ｃ３
Ｖ　グルｓノルＩＩ　ＩＴｌｒ　ψ／Ｃ３ｖＩｔ　ＩＩ
　０ 式（１）中、Ｒは各化合物に関して１７−リストサミニ
ルを表す。

本発明者らは、ＣＵＣＯ１４培養物またはＣ５Ｖ５５８
培養物のいずれか一方を使用し、アクタプラニンへ因子
を生物学的に変換ずろことによって抗生物質ＣＵ　Ｃ／
ＣＳ　Ｖを製造オることができること、しかも、その他
のアクタブラニン因子類も同一方法で、同様に修飾され
た生産物、即ち式（１）の化合物群、に生物学的に変換
され得ろことを見出だした。

また本発明は、式（１）で示されろ化合物またはその薬
学的に許容し得ろ塩を適当な担体と共に用いて、ある種
の感染症を治療する方法、飼１３１刊用効率を増大する
方法、乳生産性反鈴動物のミルク生産性を改善する方法
、および式（１）で示されろ化合物またｉｌｌその薬学
的に許容し得る塩を適当な担体と共に含有ずろ医薬組成
物に関ずろ６のである。

新規な、改良された抗生物質に対する需要は絶えること
がない。ヒトの疾患を治療するのに有用な抗生物質に加
えて、家畜の分野でもより優れた抗生物質が必要とされ
ている。増大された淋在能力、拡張された抗菌スペクト
ル、増大された生体内効果、並びに改善された薬剤学的
特性（経口投り時の吸収増大、より高い血中および組織
内濃度、より長い生体内！１６減期、さらにはより好都
合なυ１泄速度および排Ａ１１経路、！ｌｆｉびに代謝
速度および代謝影態等である）は、改良された抗生物質
の目指す１１標である。　抗生物質Ｃ［ＪＣ／Ｃ３Ｖは
塩、特に酸付加塩を形成する。これらの酸付加塩もまた
抗生物質として（ｆ用であり、本発明に含まれろ。

また、その（呆な塩類は、例えば本発明の誘導体の分離
や精製時の中間体としてらｆＩ−用である。

好適な塩気〔１の代表的な乙のは、（ｊ′機お、）ユび
無機酸の両者、例えば硫酸、塩酸、りん酸、酢酸、コハ
ク酸、クエン酸、乳酸、マレイン酸、フマル酸、バルミ
チン酸、コール酸、パモイノク酸（ｐａｍｏｉｃａｃｉ
ｄ）、ムヂン酸、Ｄ−グルタミン酸、（１−カンファー
酸（ｒｌ　−ｃａｍｐｈｏｒｉｃ　ａｃｉｄ）、グルタ
ル酸、ゲルコール酸、フタル酸、洒石酸、ギ酸、ラウリ
ン酸、ステアリン酸、ザリヂル酸、メタンスルホン酸、
ヘンゼンスルホン酸、ソルビン酸、ピクリン酸、安息香
酸、ケイ皮酸、等の酸類との標準的な反応で形成されろ
。

薬学的に許容し得る酸ト１加塩が特に好ましい塩類であ
る。

本発明方法に於いて、抗生物質ＣＵＣ／Ｃ９Ｖまたは式
（＋）で示される化合物は、対応するアクタプラニン因
子を、Ａ、ミソウリエンシスの菌株であるＣ　Ｓ　Ｖ　
５５ｇ株（Ｎ　ＲＲＬ　１５６４６）またはＣＵＣ０１
４株（Ｎ　ＲＲＬＩ５６／１７）のいずれか一方を用い
て、液中好気的条件下、適当な培地中で、所望の生産物
への実質的な変化が起こるまで、生物学的に変換させる
ことに、ｈす、製造されろ。

アクタプラニンへ因子はアメリカ特許第４，１１５゜５
５２号、アクタプラニン因子類Ｂ５、Ｂ２、Ｂ３、Ｃ１
ａ１Ｃ３、およびＥ、ｌｌアメリカ特許第４．３２２，
４０６号に記載の方法に従って得ろことかできろ。アク
タプラニン・プソイドアグリコンは、アメリカ特許第４
．０２９，７６９号に記載の方法によって得ることがで
きる。アクタプラニンＧ因子は、ヨーロッパ特許明細書
５５０７号に記載の方法により、得ることができろ。そ
して、アクタブラニン因子１’ｔ　、Ｃ、ａ、　Ｄ　＋
、Ｂ２、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎおよび０は、ヨーロッパ特許出
前公開番号、第８４３０２７７９．８号に記載の方法に
より得ろことができる。

当業者゛にとっては理Ｍ！　Ｌ　？＋７ろことたが、Ａ
、ミソウリエンシスの生物学的変換型菌株を増殖させろ
た島に用いる培地は、数多の培地のうちのどれであって
らにい（たとえば、アメリカ特許第４．：（２２゜ｌ１
０６号参照。これには、親株のミソウリエンシスＡＴ　
Ｃ０３１６１１３＋１ｉにとって？’０Ｉ］な種々の培
地が記載されている。）生物学的な変換を行う場合には
、適当な基質を増ηＩ′Ｉ中の発酵物に加えてもよく、
滅菌後の培地中に含有させ、その後に接種してもよい。

生物学的な変換は、実施例１．Ｄ、項に記載されている
様に、ブロス試料を薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）
で分析することにより、発酵期間を通じて追跡すること
ができる。

液中好気的発酵条件下で生産さＵた後、抗生物質ＣＵＣ
／Ｃ８Ｖまたは式（＋）の化合物を、発酵培地から、当
業者周知の方法、たとえば吸着と抽出操作、により回収
することができる。

あるいは、培地成分および菌糸体を含む培養固型物を、
抽出や分離を行うことなく（ただし、水は除去しておく
ことが好ましい）、抗生物質ＣＵＣ／ＣＳ　Ｖまたは式
（１）の化合物の供給源として用いることもできる。例
えば、抗生物質ＣＵＣ／Ｃ８Ｖを生産した後、全発酵ブ
ロスを、凍結乾燥法、ドラム乾燥法または共沸蒸留と乾
燥、等の方法で乾燥させ、次いで、この乾燥した全ブロ
スを、そのまま飼料プレミックス中に混合することがで
きろ。

襄服例力】− 抗生物質ＣＵＣ／Ｃ９Ｖおよび式（１）の化合物群は、
病原性を有する細菌類、特にダラム陽性閑の生長を阻止
する。標準的な寒天希釈法でめたＣ　Ｕ　Ｃ／ＣＳ　Ｖ
の、いくつかの微生物に関する最少阻止濃度（ＭＩＣ）
を表１にまとめた。

表１：生物学的変換産物のインヒドロ活性稗（り準　Ｍ
匹（ｍり乙ｍｊ） Ｃ！四／ｑＳｖ、朋ノ用屯物 ５３ａｐ！！ｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａＬｌｒｅｌｌｓ　
ＮＲＲｌ、　Ｂ５１３　８　４Ｓｊ−ａｐｌＬｙｌｏｃ
ｏｃ、ｃｐｓ、　、４ｕｒ、ｃｕｓ　Ｖ４１　８　８Ｓ
ｉａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｃｕｓ　Ｘ４００
　１６　１６Ｓｔ−ａｐｈｙｌｏｃｏｑｃｕｐ　ａｕｒ
、ｅｕ、ｓ　５１３Ｒ８４Ｓｔａｐｈｙｌｑｃ−ｏｃｃ
ｕｓ　ｅｐｉ４ｅｒｍｉｄＶｓ　ＩｐＨ１６１６旺す１
咀東９９９す９ｐ稙吐１（１す２２２　Ｂ　２ｑ−１ｒ
−９倶ｏｃｏ、ｃｃｕｓ−ｐｙｏｇｅｎｅｓ、　Ｃ２０
３ａ　１ＳＬｒｅｐＬｏｑｏｑｃｕｓ　ｐｎｅ＋Ｈｍｏ
ｎ−ｊａｅ　Ｐａｒｋ　ｌ　０．５　１Ｓｔｒｑｐｔｏ
ｃｏｃｃｔ４ｓ　ｆａｅｃ−ｉ−ｕｍ、　ＡＴＣＣ９７
９０４４Ｓｔｒｅｐ、、ｊｏｃｏｃｃｕｓＳ、ｐ、、ｇ
ｒｏｕｐ　Ｄ　９９６０　４　４ａ）試験０１゛ 抗生物質ＣＵＣ／Ｃ９Ｖは鎌気性菌の成長をも阻＋ｌＺ
する。種々の嫌気性単離体のＣＵ　Ｃ／ＣＳ’Ｖに対す
る感受１１を表■にまとめた。

友■−唾気性菌単離体のＣ１ＪＣ／Ｃ８Ｖに対する感受
性 Ｂａｃｉｅｒｏｉｄｅｓ　ｍｅｌａｎｉｎｏｇｅｎｉｃ
ｕｓ　２７３６　＋６障旦収等（無す−名足り旦１２］
１　＞１２８１３ａｃＬｅｒｏｉｄｅｓ　ｃｏｒｒｏｄ
ｅｎｓ　１８７４　＞１２８Ｐｕｓｏｈａｃｔｑｒｉｕ
ｍ　ｓｙｍｈｉｏｓ１＋ｎ３　１４１０　＞１２８Ｆｕ
ｓｑｈａｃ４ｅＨｒｊｕ−ｎｅｃｒｐｐｊｏｒ−ｕｍ　
６（１５４八　２ａ）＋Ｍ　Ｔ　Ｃ値は寒天希釈法でめ
た。終末点は、インキュベーションの２４時間後に読み
取った。

また、ＣＵＣ／ＣＳＶは実験的に誘発した細菌感染症に
対し、インビボにおいて抗微生物活性を示した。感染症
マウスに２用量の被検化合物を投句化だ後、観察された
活ヤ１をＥｌ）　、。値［被検動物の５０％を保護する
のに有効な投！ｊ量（ｍｇ／ｋｇ）：Ｗａｒｒｅｎ　Ｗ
ｉｃｋ呟、１−じ−ａｑＬｙｅ！川ｊ、　８用、２３３
−２３５（＋９６１）参照］として測定した。Ｃ１ＪＣ
／Ｃ８Ｖに関して観察されたー’：ｒ）５Ｇ値を表■に
示す。

表組。マウスにおけるＣＵＣ／Ｃ９ＶのＥｌ）５゜値 感す敬歩物−１〕朋胛（吠ひｇ”！＞＝＞−３ｔａｐｈ
％ｃｏｃｃｕｓ　ａ、、ｕｒ、ｅｕｓ、　１．５９江」
用へ氾曽智１旦■９酊狙明　１・０９β（Ｖ−曽９匹朋
旦Ｐ些叩兇ハｅ　０．８４ａ）、感染の１および４時間
後に皮下投与した。

本発明はまた、細菌性感染症の制御方法に関するもので
ある。本発明方法の実施に際しては、有効量の式（’ｌ
）の化合物を、感染した、または感染しやすい温血動物
に非経［１または経口的に投与する。この化合物は、吹
入れ法（吸入法）によって投与することもできる。即ち
、薬剤処理を施した微粉末状の該化合物を、動物または
家禽類を入れた密閉空間、あるいは密室内に吹込むこと
によって投与する。動物または家禽は、空気中の薬剤化
微粉末を吸込む。またこの薬剤化微粉末は両眼からち体
内に取り込まれる（眼内注入と呼ばれる方法）。

感染症の制御に有効な用量は、動物の感染症の重篤度、
年令、体重および情況によって変化する。

しかしながら、非経口的に保護するのに必要な総用量は
一般に約０１〜約１ＧＯ＋ｎｇ／ｋｇの範囲内、好まし
くは約０．５〜約５０Ｄ／ｋｇの範囲内であろう。また
、経［ニ１投勺において要求されろ用量は、一般に１〜
約３００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは約１−約１００ｍｇ／
ｋｇの範囲内であろう。好適な投り計画をたてろことが
できる。　これらの化合物の疫りにおいて最も実用的な
方法は、しばしば、飼料供給物、または飲用水中に処方
することである。通常の乾燥飼料、液体飼料、およびペ
レット状飼料を含む種々の飼料を利１ｂすることができ
ろ。

また、本発明は細菌感染症の制御に有用な組成物に関す
る乙のである。それらの組成物は、式（１）の化合物を
適当な賦形剤と」（に含（ｉする。本発明の組成物は、
製薬業者にと−・て周知の方法により、非経口また（Ｊ
経口投句用に製剤化することができる。

こイ１らの化合物を含有する有効な注射用組成物は、懸
濁液または溶液のいずれの形であってもよい。好適な製
剤を製造する際には、通常、酸付加塩の方が遊離の塩基
類よりも水に対する溶解性か大きい、ということかわか
るであろう。同様に、塩基類は、中性または塩基性溶液
よりも、希釈した酸、あるいは酸性溶液に、より良く溶
ける。

溶液形の場合には、該化合物を生理的に許容し得る賦形
剤に溶かず。その様な賦形剤は、適当な溶媒、要すれば
ベンンルアルコールのごとき防腐剤、および緩衝剤を含
む。有用な溶媒には、例えば、水および水性アルコール
類、グリコール類および炭酸ジエチルのごとき炭酸エス
テル類が含まれる。その様な水性溶液中には、通常、容
量比５０％以上の有機溶媒が含まれることはない。

注射用懸濁液は補助剤を含んだ、または含まない！！濁
用の液体媒質を賦形剤として必要とする。

懸濁化媒質としては、例えば水性ポリビニルピロリドン
、植物油や高度に精製した鉱物油のごとき不活性油、あ
るいは水性カルボキシメチルセルロースが挙げられる。

好適な、生理学的に許容し得ろ補助剤は、化合物を、懸
濁組成物中に！！！澗させておくのに必要である。補助
剤は、カルボキシメチルセルロース、ポリビニルピロリ
ドン、ゼラチンおよびアルギネート類などのソツクナー
の中から選択されろ。多くの界面活性剤もまた！！澗化
剤として有用である。

レシチン、アルギルフェノール・ポリエチレンオギン１
ｚ付加物、ナフタレンスルホネート類、およびポリオギ
ンエチレン・ソルヒタジエステル類は有用な懸剖化剤で
ある。

液状懸濁化媒質の親水性、密度、および表面張力に影響
する様な多くの物質か、個々の場合に応じて注射用懸濁
液の作成に役立ち？１１る。例えば、ノリコーン消泡剤
、ソルビトールおよび糖類は、有用なせ蜀化剤である６ さらに別の＠揉において、本発明（」家禽、豚、羊およ
び牛の飼ＩＩ利用効率を増大する方法、成長速度を増進
４゛ろ方法、４１２ぴに乳牛産性の反物動物でのミルク
の生産性を高めろ方法に関するものである。飼料利用効
率を増大し、成長を増進するために（」式（１）で示さ
れろ化合物を適当な飼料中に、全飼１’ｌ　Ｉ　＋・ン
当たり、約２〜２００ｇの割合で加えて経口没り、する
。乳生産性反縄動物にお（→ろミルクの生産性を高める
ためには、１日当たりの経口投’ｊ、ｆｆｔ、を約００
１〜約１０ｍｇ／ｋｇ（体重）（または約１００〜約１
６００Ｂ／反鈴動物／１］）とすることが提案される。

薬物を動物の飼料中に処方する方法はよく知られている
。濃厚な薬物添加プレミックスを調製し、次いでこれを
、薬剤処理飼料の調製に用いるのが好ましい。典型的な
プレミックスは、プレミックス１ボンド当たり、薬物を
約１〜約２００ｇ含有することになろう。プレミックス
は液体または固型製剤のいずれてあってもにい。

動物または薬物の虫に対する飼料の最終的な処方は投与
すべき薬物の量に依存する。飼料の処方、混合、並びに
ペレット化に関する通常の方法を、式（１）の化合物を
含有する飼料の調製に用いろことができる。

以下に実施例を挙げ、本発明の具体例を示す。

アクチノプラネス・ミソウリエンノスのＣＵＣ０１４菌
株（Ｎ　Ｒｒｔ　Ｌ　１５６４７）、もしくはＣＳ　Ｖ
　５５８菌株（Ｎ　ＲＲＬ１５６４６）の凍結乾燥ぺし
・ソトを滅菌水１−２ｍ！に溶かす。この懸濁液を用い
て、次の組成の寒天斜面培地に接種する。

成−分　量（％） ｉｉｉｉ調理しにオートミール　６０ 酵（１０，２５ に、ＨＰＯ４０，１ ツアペツクのミネラルストックａ）０５寒　天１．）　
２．５ 脱イオン水　通電を加えて１００％ とする 未調節時のａｌｌ−６，２；５Ｎ　Ｎａ０ＩＩによりｐ
ＬＩ＝７３に調節、滅菌後のｐＨ−６，７ ａ）ツアペックのミネラルストックは以下の組成を有す
る Ｕ−刷 ＫＣ克　１００ Ｍ［！８Ｑ４・７Ｈ２０１０，０ Ｆ　ｅＳ　Ｏ４・７１−１２０　０．２（釦克の濃塩酸
に溶解） 脱イオン水　適量を加えて１００％ とする ｂ）Ｄｉｆｃｏ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｓｅ接種した斜
面培地を３０℃で約８〜１０日間インキュベートする。

熟成した斜面培地を滅菌した白金耳（ループ）の鋸歯状
になった端縁て削って菌糸体マ・ソトを浸漬し、はくす
。はぐしたマットの約１／４を以下の組成の増殖用培地
５０ｍ１に接種するのに用Ｌ）た。

【】　鳳（％） グルコース　２０ トリプトンａ）０５ 酵母エキス　０５ 水道水　適量を加えて１００％ とする 滅菌前のｐＨ＝６．５、調節時のＩ）ｔｌ　＝　７．２
’（５Ｎ−ＮａＯＨによる）、滅菌後のｐＨ＝６．９ ａ）ＩｌａｃｔｏＴｒｙｐｔｏｎｅ、Ｄｉｒｃ。

接種した増ｒ／ｌｌ′（用培地を２５０ｎ１．のエーレ
ンマイヤーフラス＝１中、回転振帰器（動径２インチ、
回転ｖｉ２５Ｏｒｐｍ）　ｌ二で振Ｕ、、　Ｕながら３
０°Ｃて約７２時間インギ：１ヘートＡ゛ろ。

増殖型培従は、寒天−斜面培養物、この培養物の用１♀
占中２燥ペレソｔ・（２５０ｍｆｌのフラスコ中、５０
ｍ夕の培地について１個の凍結乾燥物を用いる）および
液体窒素中に保存した培養物（接種物０８％）を用いて
開始することができる。

インキコヘートした増殖用培地（５％、Ｖ／Ｖ）を次の
組成の製造用培地５０ｍ　１１に接種する。

成−看−単ρリー グルコース　２５ ＝ｊ−ン・スターチ　３５ 糖蜜を割ったうＪ・混合酒　１５ グリセリン　１５ 酵母　２．０ に、ＩＩＩ”０４０．０５ （ＮＩ＋４）２３０．　０．０２５ ＣａＣＯｓ　０　、２ 水道水　ａ量を加えて１００％とする 滅菌前のｐＨ＝６．５、調節時のｐＴ−１＝６．８、滅
菌後のｐＨ＝６．５゜ 接種した製造用培地を２５０ｍ１のエーレンマイヤーフ
ラスコ中、回転振公器（動径２インチ、回転数２５ＯＲ
ＰＭ）上て３０°Ｃにおいて７２時間インキュベートす
る。

Ｂ、　生物学的変換 アクタプラニンΔ因子（１００ｍｇ’）を水に溶かし、
濾過して滅菌し、５０令のＡ　ミソウリエンンスＣ８Ｖ
　５５８（Ｎ　ＲＲＬ　１５６４６）の変換型培養物の
発酵物１！に加えろ（終濃度０　、３ｍｇ／ｍ　ｚ　）
。この発酵産物を更に４８時間インキュベートする。全
ソロスのｐＨを水酸化ナトリウムて１０．５に調節する
。このプロスを遠心し、遠心物（セントレー１・）　Ｈ
Ｃ、ｉて中和オろ。

ｃ、　＜２±−９−乙−（ン４ミー−■−〇２）ｊ″ニ
ーｌｉ！ｉｊＢ述へた方法に従−１て生物・を的変換を
行−た。

ブロスを濾過して除き、菌糸体を水（ｐＨ１０，５）て
抽ｆｌｉ１ｙた。この抽出物（５５０ｍ、ｅ）を、ｌｏ
ｏｍｊｌｊのｌ１Ｙ）−２０を充填したカラノ・で精製
し、水洗し、次いでＭｏ０１−１水からＭｅＯＩ−１ま
でのクラノエント溶離を行った。分画を集め、凍結乾燥
して相製生成物（１９０ｍｇ）をマワだ。この生成物の
一部（１００ｍｇ）を、ｐＨ３６の５Ｊ、のＣ１Ｉ３ｃ
　Ｎ　：ｐｙｒＯΔｃ（３６：６４）に溶かし、Ｌ　１
ｃｈｒｏｐｒｔ〕ｐＲ１’　８樹脂（２５−４０７１ｍ
）を充填した３００−ｍ！のガラスカラムに適用した。

このカラノ、を、ｐｌ＋３６のＣＩｌ、ＣＮ：０．０５
％ｒｌｙｒ０へｃ（１：４）て、流速８ｔＪ、７分て溶
離した生成物を、２８０ｎｍにお１ノろＵＶ吸収、Ｂ　
ザブヂリスによろバイオアッセイ、および分析的Ｉｔ　
ＰＬ　Ｃで検出した。所望の活性を有する分画を合わ且
、Ｎ−Ｎａ０ＩＩでｐＨを６５に調節し、次いで濃縮し
てＣＩｌ、ＣＮを除去した。得られた水溶液（５０ｍｊ
ｕ）を、水中に入れた１、１１１−Ｃ１８樹脂１２ｍｊ
ｌ！、を満たした４０ｍ！のカラ１、に適用した（アメ
リカ特許第４，２９３．ｌ１８２号、実施例７参照）。

カラムを水（１００ｍＪ２．）で洗浄して塩を除き、活
性物質をＣ１１３ＣＮｌＩ１２０（７：３）で溶離した
。溶出液を濃縮して凍結乾燥することにより、純化抗生
物質ＣＩＪＣ／Ｃ９ＶｌＯｍｇを得た。

Ｄ　抗性物質ＣＵ−ｑ−メｑ−トーＹ−９分析−全ソロ
ス（ｐＨｌｏ、５に調節）を遠心する。−ヒ清をｐｌ、
＋７．０に調節する。この様にして調製した試別をバチ
ラス・サブヂリス平板分析、並びに、ンリカケルプレ−
１−（Ｍ　ｅｒｃ’にのプレ・コ−１・・プラスヂッタ
ノ−１・、シリカゲル６０、蛍光性指示薬を含まない）
と、アセトン水アンモニア（１６ｆ］：４０：Ｉ）溶媒
系とを用いろ薄層クロマトグラフィーによって分析する
。検出（」、最少増殖培地中で、Ｂ　ザブチリスを用い
て、平板を３７°Ｃで約１８時間インキュベートするこ
とからなる、バイオオートグラフィー（生物学的自己描
写法）で行う。

ＣＵＣ／Ｃ８Ｖの特性値を次に示す。

茫許外Ｆ　（Ｃ９ｏ　Ｉ−１９ＲＮ　７０４　＋　・Ｉ
　２１−１２０　）Ｃ−９０４９，４６４９，２Ｐｊ ＋１−９８　５．６３’　４３５ Ｎ−７Ｌｌ１９　．４．５５ ０−４１　３８．８　：（９，ｌ’１２（差による）Ｃ
，９−１１，６２２，００ 木；Ｖｊ辣収る企り−上−ノ１（メタノール中）λｍａ
Ｘ２７８ｎｍ、酸性（ε−１７、０００）λｍａｘ　２
７７ｎｍ、３６１ｎｍ、中性（ε−１８，０００，９，
０００）λｍａ×２９５ｎｍ、３４０ｎｍ、アルカリ（
’ｌ（ε−２１，０００，１４，５００） 分子ｉｉｉの。ｌ９値ｔｌ　＋　、　２００てＪうろ。

この化合物（」２３Ｏｎｍにｌ＃、ｉ吸収を小４−０ 溶解性 ノメヂルスルポギノト、ツメチルホルムアミド、アセＩ
・ニトリル水混合物じよひアルコール水混合物に可溶で
ある。

ア−ス−：−不−ペター１−ｙ、ｃｌルメートリー（高
速原子衝撃１．′オン化方式、ｌ’ＡＢ　ＭＳ） ＦへＲ−ＭＳによる分子用は１９６８てある。

冊□≧−Ｐ１−〕≦への：ｌ；　’＄１４　’：ｆ：　
Ｉｆ’す萼ηし杉へ−に−木に２］３≧ヨＣｌジμ闇ｙ
１測 ＣＳ　Ｖ　５５ｇ培養物の代わりにＣ［Ｊ　Ｃ０１４（
Ｎ　ＲＲＬＩ５６４７）培養物を用いろこと以外（ｊ実
施例３の方法に従い、アクタプラニンへ因子を抗生物質
ＣＬＪＣ／ＣＳ　Ｖに変換した。

実−１イ瞑６へ］−宇一　埃生生勿τテーリＪ　ｑ／Ｃ
３ＶＯノッ仝す！９？−５分析的ＨＰ　Ｌ　Ｃシスチン
、 カラＡ　：４．６−ｘ２５０−ｍｍ７．テンレス鋼ツ゛
ノ充填物５ｈａｎｄｏｎ　ＯＤＳ　ｌ１ｙｐｅｒｓｉｌ
−５ミクロン 溶媒（ｊ（３ＣＮ：０．０５ＭＫＩ（２Ｐ０．（Ｈ３Ｐ
０４でｐＨ３，２に調節されている）の（２１ニア９）
混合物 流速１０＋＋１．／分 検出ｔＪ　Ｖ　（２２０ｎｍ） 作図速度（チャー１・・スピ−１・）：２０ｃｍ／時保
持時間９３分 実施りｌ　４−　Ａ、　４．．６！Ｊ６膣ｐ−東鼻企恢
（世代物−４−りの製造 実施例１の方法を用いてアクタプラニン（Ａ　４６９６
）Ｂ、因子（２００Ｄ）を増η１（中のＡ　ミソウリエ
ンノスＣＳ　Ｖ　５５８変換用培養物に加えた。生物学
的変換をＴ　Ｌ　Ｃで分（バした。この生物学的変換が
完了した時点でブ〔Ｊスをシ濾過して分離した。分離し
て得た菌糸体をＮａ０１１でｐＨ１０，５に、ＪＡ］節
した水で袖山した。この抽出物を、実施例Ｉて述へたご
と＜、ｔ１１〕−２０樹脂（１８５ｍＪ２．）を充所し
たカラ！、て生成し、／１＋　４’Ｉ乾燥した生産物３
１３ｍ１！を丙た、１この生産物の一部（１６０ｍｇ）
をとり、１７０ＪのＦｒａｃｔｏｇｅｌ　ＴｓＫ　ＩＩ
Ｗ−４Ｏ８樹脂（３２６３ミク〔１ン、ＩＬｋｌｅｒｃ
ｋ、ＤａｒｍａｓｔａｄＬ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を充填し
たカラスカラノ・に適用し、：’１．３ｊ２゜の水、次
いて７００ｍ、ｅの１ｖｌＮ０１１　水（１１）を用い
て流速３ｍ！／分て流した。１．記生産物ｔＪ’、Ｍｅ
ｏ　Ｈ：ｌｌｐＯ分画にあった。こＡ１らの分画を濃縮
し、凍結乾燥した後、同様に処理して製造しノソ１産物
と一緒に１．た。この−緒にした生産物を上記と同し樹
脂を使用し、以Ｆの比率、および吊のＭｅＯｔｌ水混液
を用いて行う傾斜溶出法でクロマトグラフした：（１：
　３　）１５０ｍＪｕ、（２：３）３５０Ｊ、（３：　
２　）５５０Ｊ、（４：　Ｉ　）４７０ｍｊｕ。フラク
ションを分析的１−ｊ　Ｐ　Ｌ　Ｃてモニターｊ７、所
望の生産物を含む分画を合わせて濃縮し、Ｎｉ　ｉ、＋
１乾燥オろことに、］−〇、２０．３ｍ１ｉのＡ４６９
６Ｒ，生物学的変換産物をｔｌｌた。

四Ｊ篤（例−φ−７＼−４＋３９６−ｔ≧ユ呻耳閥し呼
へ７Ｆ、Ｑ多重（イ１１ず）１裟り↓リー９興蔗 実施例Ｉと類似した方法を用いてアクタプラニンＣ１ａ
因子（２４０ｍｇ）を、増植中の△、ミソウリエンノス
ＣＳ　Ｖ　５５ｇ変換用培養物に加えた。生物学的変換
が完丁した後、ブ［Ｊスをシ濾過し、分離した菌糸体を
Ｎａ０１−１でｐ＋−１１０，５に調節した水で抽出し
た。

この抽出物６５０Ｊを実施例１に記載のごと＜　１００
ｍ！のｌ−Ｉ　Ｐ　−２０樹脂を充填しへカラムにかけ
て精製し、ＩＰｉ７ｍｇの凍結乾燥した生産物を吉だ。

この生産物（１８５ｍｇ）を、８ｍ！のＭｅＯＩＩ水（
７３）に溶かし、濾過してＰａｃＬｏｇ（！ｌ　’Ｉ”
ＳＩ（ＴＩＷ−４Ｏ３樹脂を充填した１７［１ｍ４のカ
ラスカラムに適用した。

このカラムを、ＭｅＯＩｌ水（２３）により流速２Ｊ／
分で流した。フラクションを、Ｂ　ザブヂリスの−１−
に押付けるバイオアッセイと、分析的Ｉ−１Ｐ　ＬＣと
てモニターした。所望の産物を含む分画を集めてＬｉｃ
ｈｒｏｐｒ（！ｐ旧）−８樹脂（２５−ｌ１０ミタ〔ｌ
ン）を充ｔｉ１−た３００＋Ｊ、のカラノ、に適用１２
、ｐＬＩ３．５にｉ＋節したＣＩＬＣＮ：０．０５％ｐ
ｙｒ０△Ｃ水溶１（ｋ（１：４）て流した。フラクショ
ンを分析的１−１　Ｉ）　Ｌ　Ｃでモニターシ、生産物
を含むフラクションを合イっＵて川６５に」Ａ１節し、
濃縮した。この水溶液を６０ｍ　ｌのｔｌ　＋−’　−
２０樹脂を充１眞したカラムに適用し、このカラノ、を
水洗して塩を除いた。活性物質をＣＩｌ、、ＣＮ水（４
１）で溶離し、溶１１１液を濃縮して凍に＋’；乾燥し
、５９ｍｇのΔ４６９６ＣＩ　ａｑ換産物をｉ４）た。

特許出願人イーライ・リリー・アンド・カンパニー 代　理　人弁理士　ｒｌｌｌｌ　葆　（１，Ｊが１名）
第１頁の続き ■Ｉｎｔ、ＣＩ　、’　識別記号　庁内整理ｉｏ発明者
　マリエ・雇す−ゼ・ア　アメリカ台架［ンダーソン　
ス、アプト・１ ｏ発　明　者　カール・）１インツ・ミ　アメリカ台架
［ツチェル　ス、アプト・２ １インデイアナ４６２２７、インディアナポリ３、イー
・トンプソン・ロード６１幡

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、式（１）・ ［式中、Ｗは、式（２）： で示される、アクタプラニンＡ、Ｂｌ、Ｂ２、Ｂ３、Ｃ
   ｌａｓ　ＣｐａＳＣ！ｌ、Ｄｌ、Ｄ３、Ｅ３、Ｇ、に、
   Ｌ。 Ｍ、Ｎおよび０の各因子類、並びにアクタプラニン・プ
   ソイドアグリコンの中から選択されるグリコペプチド系
   抗生物質の残部を表す］ で示される化合物の製造方法であって、対応する式（２
   ）のアクタブラニン因子を、アクチノプラネス・ミソウ
   リエンンスＮ　ＲＲＬ　１５６４６またはＮＲＲＬ　１
   ５６４７を用いて生物学的に変極することからなる方法
   。 ２式（２）のアクタプラニン因子が、アクタプラニンＡ
   ＳＢ、、Ｂ７、Ｂ３、Ｃ＋ａ、Ｃ３およびＥ、の各因子
   、並びにアクタブラニン・プソイドアグリコンの中から
   選ばれたものである第１項に記載の方法。 ３式（１） ［式中、Ｗは、式（２）。 で示される、アクタプラニンＡ１Ｂ、、Ｂ９、Ｂ３、Ｃ
   ，ａ、Ｃ２ａＳｃ３、Ｄｌ、Ｂ７、Ｅｌ、Ｇ、に、Ｌ。 Ｍ、Ｎおよび０の各因子、並びにアクタプラニン・プソ
   イドアグリコンの中から選択されるグリコペプチド系抗
   生物質の残部を表す］ で示される化合物、またはその塩。 ４ＷがアクタプラニンＢ１、Ｂ２、Ｂ３、Ｃ１ａ　％　
   Ｃ３、およびＥｌの各因子、並びにアクタプラニン・プ
   ソイドアグリコンの中から選択されるグリコペプチド系
   抗生物質の残部である第３項に記載の化合物。 ５、ＷがアクタプラニンＢ２因千Ｃｌａ因子またはＧ因
   子、あるいはアクタプラニン・プソイドアクリコンの内
   のいずれかの残部である第１項に記載の化合物。 ６、第３項または第４項に記載の化合物またはその薬学
   的に許容し得る塩を、薬学的に適当な賦形剤と共に含有
   する医薬組成物。 ７、動物の飼料利用効率を増大するための飼料組成物で
   あって、１）有効量の第３項または第４項に記載の化合
   物またはその薬学的に許容し得る塩と、２）標準的な飼
   料供給物、とを含有する組成物。 ８動物の飼料利用効率を増大する方法であって、有効量
   の第７項に記載の組成物を該動物に投与することからな
   る方法。 ９、乳生産性反賀動物でのミルクの生産性を改良オろた
   めの飼Ｉｔ組成物であって、１）有効量の第３項または
   第４項に記載の化合物またはその薬学的に許容し得ろ塩
   と、２）標桑的な飼料（ｊ（拾物、とを含有する組成物
   。 １０４乳生産性反鈴動物でのミルクの生産性を改良する
   方法であって、有効量の第９項に記載の組成物を、該反
   物動物に軽口投与ずろことからなる方法。