JPH0771478B2 - Ａ４１０３０抗生物質群を産生する微生物 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】本発明は抗微生物活性を有する新規な化合
物を産生する、従来知られていなかったストレプトマイ
セス(Ｓtreptomyces)科の微生物に関する。これらの新
規な化合物は米国特許第４３２２３４３号および４３２
２４０６号に記載されている抗生物質に類似している。

【０００２】病原微生物の、抗生物質に対する耐性株が
発生する可能性があり常にその脅威にさらされているの
で、新規な抗生物質を開発する必要性がある。特にグラ
ム陽性菌であるスタフィロコッカス(Ｓtaphylococcus)
属およびストレプトコッカス(Ｓtreptococcus)属に属す
る病原菌は、ペニシリンやエリスロマイシンのような通
常使用される抗生物に対して耐性を有する(例えばＷ.
Ｏ.Ｆoye,Ｐrinciples of Ｍedicinal Ｃhemistry,６８
４〜６８６頁、１９７４年参照)。

【０００３】本発明者らはＡ４１０３０複合体およびそ
の因子群Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、ＦおよびＧあるいはそれ
らの薬学的に許容し得る塩類が有効な抗微生物剤である
ことを見い出した。

【０００４】これらの新規な抗生物質は従来知られてい
ない（ストレプトマイセス・ヴァージニアエ）Ｓtrepto
myces virginiae ＮＲＲＬ１２５２５またはその親株
であるＳtreptomyces virginiae ＮＲＲＬ１５１５６
を同化し得る炭素源、窒素源および無機塩類を含有する
培養培地で好気性培養することにより製造することがで
きる。これらの微生物などは因子Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、
ＦおよびＧと命名されたいくつかの抗生物質因子群から
なる抗生物質複合体(コンプレックス)を生産する。簡略
化のために、培養した微生物、Ｓtreptomyces virgini
ae ＮＲＲＬ１２５２５は本発明者らの研究室ではカル
チャーＡ４１０３０.４と命名した。Ｓtreptomyces vi
rginiae ＮＲＲＬ１５１５６は我々の研究室ではＡ４
１０３０と命名した。

【０００５】個々の因子群の赤外吸収スペクトルを添付
の図面に示す。すなわち図１はＡ４１０３０因子Ａ(Ｋ
Ｂr法)、図２はＡ４１０３０因子Ｂ(ＫＢr法)、図３は
Ａ４１０３０因子Ｃ(ＫＢr法)、図４はＡ４１０３０因
子Ｄ(ＫＢr法)、図５はＡ４１０３０因子Ｅ(ＫＢr法)、
図６はＡ４１０３０因子Ｆ(ＫＢr法)、図７はＡ４１０
３０因子Ｇ(ＫＢr法)を夫々示している。

【０００６】本明細書において、および発酵技術分野に
おいて使用される用語「複合体」は、一緒に生産された個
々の抗生物質因子の混合物を意味する。発酵による抗生
物質の生産について詳しい当業者には容易に理解される
ように、抗生物質複合体中に占める個々の因子群の割合
および量は、発酵条件および菌株に応じて変動する。

【０００７】インディアナ州、インディアナポリスで採
集された土壌サンプルから初めて単離されたＳtreptomy
ces virginiae(Ａ４１０３０)培養株から化学的に誘導
した突然変異株であるカルチャーＡ４１０３０.４は、
イリノイ州ペオリア、Ｎorthern Ｒegional Ｒesearc
h Ｃenter,Ｕ.Ｓ.Ｄepartment of Ａgriculture,Ａg
ricultural Ｒesearch Ｓerviceに寄託され、ストッ
クカルチャーコレクションの一部となっており、そこか
らＮＲＲＬ１２５２５の番号で誰でもこれを利用するこ
とができる（受託日：１９８２年９月４日）。なおこの
微生物の寄託はブダペスト条約に基づく国際寄託に移管
された（移管申請日：１９９１年１０月１８日）。本発
明に係る複合体を生産する親株、Ｓtreptomyces virgi
niae(Ａ４１０３０)もＮothern Ｒegional Ｒesearch
Ｃenterに寄託されており寄託番号ＮＲＲＬ１５１５
６の番号で誰でも利用することができる（ブダペスト条
約に基づく国際受託日：１９８２年９月２２日）。

【０００８】カルチャーＡ４１０３０.４はカルチャー
Ａ４１０３０をミトマイシンＣ、次いでＮ−メチル−
Ｎ'−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジンで処理すること
により得ることができる。

【０００９】カルチャーＡ４１０３０をその他の突然変
異誘発処理にかけることにより、Ｓtreptomyces virgi
niae ＮＲＲＬ１２５２５と同じ生合成能をもったその
他の株を生産し得ることは当業者には明らかであるはず
である。ミトマイシンＣ以外の適当な変異誘発素には、
アクリフラピン、アクリジンオレンジ、エチジウムブロ
ミドおよびその他の化学物質が含まれる。ＮＲＲＬ１２
５２５を得るために、ミトマイシンＣとともにＮ−メチ
ル−Ｎ'−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジンを使用した
が、その他の既知の変異誘発素、例えば紫外線、高周
波、放射活性物質の放射線、Ｘ線およびその他の化学物
質などを、突然変異を誘発するのに使用することができ
る。

【００１０】Ｓtreptomyces avidinii ＡＴＣＣ２７
４１９、Ｓtreptomyces columbiensis ＡＴＣＣ２７
４２５、Ｓtreptomyces goshikiensis ＡＴＣＣ２３
９１４、Ｓtreptomyces qriseolavendus ＡＴＣＣ２
５４５７、Ｓtreptomyces lavendulae ＡＴＣＣ８６
６４、Ｓtreptomyces toxytricini ＡＴＣＣ１９８１
３、およびＳtreptomyces virginiae、Ｇrundy.Ｗhitm
an.Ｐdzok.ＨanesおよびＳylvester１９５２,ＡＴＣＣ
１９８１７との同時培養に基づいて、Ａ４１０３０はＳ
treptomyces virginiaeの１株であり、カルチャーＡ４
１０３０.４はＳtreptomyces virginiaeの菌株から化
学的に誘導された突然変異株であると分類された。Ｓhi
rlingおよびＧottliebの「Ｍethods of Ｃharacteriza
tion of Ｓtreptomyces Ｓpecies」 (Ｉnt.Ｊ.Ｓys
t.Ｂacteriol.１６(３)、３１３〜３４０頁、１９６６
年)に推奨されている方法および手段、ならびに追加的
な試験を使用した。カルチャーＡ４１０３０.４は、「Ｂ
ergey's Ｍanual of Ｄeterminative Ｂacteriolog
y」 (８版、Ｒ.Ｅ.ＢuchananおよびＮ.Ｅ.Ｇibbons、Ｔ
heWilliams and Ｗilkins ＣＯ.,Ｂaltimore,Ｍaryl
and);およびＳhirlingおよびＧottlieb,「Ｃooperative
Ｄescription of Ｔype strains of Ｓtreptomyc
es」 (Ｉnt.Ｊ.Ｓyst.Ｂateriol.１８(２)、１７８頁、
１９６８年)中の上記の菌株についての記載とも比較し
た。カルチャーＡ４１０３０.４はいかなる培地中でも
気中菌糸体および胞子を生産しないので上記の全ての菌
株と異っている。

【００１１】Ａ４１０３０およびＡ４１０３０.４カル
チャーの形態学的特徴 Ａ４１０３０はよく発達した気中菌糸体および胞子柄を
作りそれらはともにコイル状であり鉤形およびループを
示す。Ａ４１０３０は、第１次形態としては、Ｐudham
ら「Ａ Ｇuide for the Ｃlassification of Ｓtr
eptomyces Ａccording to Ｓelected Ｇroups」
(Ａppl.Ｍicrobiol.６、５２〜７９頁、１９５７年)の
らせん状(s)グループに位置し、第２次形態としてはＰr
idhamらのＴetinaculum−Ａpertum(ＲＡ)グループに位
置する。Ａ４１０３０.４は気中菌糸体も胞子も産生し
ない。

【００１２】培養特性 種々の培地中でのカルチャーＡ４１０３０、Ａ４１０３
０.４およびＳ.virginiae ＡＴＣＣ１９８１７の発育
特性を表１に示す。

【表１】

【００１３】色名はＩＳＣＣ−ＮＢＳ Ｃentroid Ｃo
lor Ｃharts Ｓtandard ＳampleＮo.２１０６(Ｎati
onal Ｂureau of Ｓtandards,Ｕ.Ｓ.Ｄepartment o
fＣommerce,１９５８年)およびＣolor Ｈarmony Ｍan
ual、第４版、(ＣolorＳtandards Ｄepartment,Ｃonta
iner Ｃorporation of Ａmerica,Ｃhicago,Ｉllinoi
s,１９５８年)に従って決定した。

【００１４】カルチャーＡ４１０３０.４の生理学的性
質を標準的な手法に従って調べた。観察された性質およ
び特性値を表２に示す。

【００１５】

【表２】 Ａ４１０３０.４の生理学的性質 以下の培地でのメライド様 色素の生産: １.トリプトン酵母エキス メラノイド様色素 ブロス(ＩＳＰ ＃１) ２.ペプトン酵母エキス メラノイド様色素 鉄寒天斜面(ＩＳＰ ＃６) ３.チロシン寒天斜面 メラノイド様色素 (ＩＳＰ ＃７) なし 硝酸塩還元 反応陰性 ゼラチンの液化 反応陰性 ＮaＣl耐性 ３％ スターチの加水分解 反応陰性 スキムミルク 一部加水分解 生育温度 １０−３４℃ カルチャーＡ４１０３０、カルチャーＡ４１０３０.４
およびＳtreptomycesvirginiae ＡＴＣＣ１９８１７の
炭素利用パターンを、最終濃度が１.０％となるよう
に、濾過滅菌した炭素源を加えたＩＳＰＮo.９基礎培地
を用いて比較した。３０℃で１４日間インキュベートし
た後観察を行なった。結果を表３に示す。

【表３】 Ａ４１０３０、Ａ４１０３０.４および Ｓtreptomyces virginiae ＡＴＣＣ １９８１７の炭素利用性 炭素源 Ａ４１０３０ Ａ４１０３０.４ ATCC１９８１７ 酢酸ナトリウム − − − Ｄ−アラビノース − − − Ｌ−アラビノース − − − セロビオース ＋ ＋ ＋ Ｄ−フルクトース ± − ± Ｄ−ガラクトース ＋ ＋ − Ｄ−グルコース ＋ ＋ ＋ i−イノシトール − − − ラクトース − − − Ｄ−マルトース ＋ ＋ ＋ Ｄ−マンニトール − − − メリビオース − − − ラフイノース − − − ラムノース − − − Ｄ−リボース ＋ − ＋ サリシン ＋ ± ＋ コハク酸ナトリウム ＋ ± ＋ シユクロース − − −Ｄ−キシロース − − − 注) −＝利用性なし ＋＝利用性あり ±＝一部利用

【００１６】Ｂeckerらの方法(Ａppl.Ｍicrobiol.１
１、４２１〜４２３、１９６４年)に従って微生物の加
水分解した全細胞を用いてジアミノピメリン酸異性体を
測定した。その結果を以下に示す。

【表４】 試 験 結 果 ２,６−ジアミノピリン酸の異性体 ＬＬ−異性体

【００１７】カルチャーＡ４１０３０、カルチャーＡ４
１０３０.４およびＳtreptomycesvirginiae ＡＴＣＣ
１９８１７の類似性および相違点を表５に示す。

【００１８】

【表５】

【００１９】色名は既述したようにして決定し、形態は
前記のＰudhamらの指針によった。Ａ４１０３０複合体
は従来記載されたことのない微生物Ｓtreptomyces vir
giniae ＮＲＲＬ１５１５６、Ｓtreptomyces virgini
ae ＮＲＲＬ１２５２５またはそれらのＡ４１０３０生
産能を有する変異株を、同化し得る炭素源、窒素源およ
び無機塩類を含有する培養培地中、液中好気培養条件下
で多量の抗生物質活性が得られるまで培養することによ
り製造することができる。抗生物質活性は主としてブロ
ス中に見い出されるが、少量の抗生物質活性は菌糸体に
も存在する。Ａ４１０３０複合体は発酵混合物から、濾
過によって菌糸体、すなわちビオマスを除去することに
よって最も簡単に分離できる。菌糸体は通常捨てる。つ
いで抗生物質複合体は、好ましくは適当な吸着剤と、例
えばメタノール／水(１／１)の混合物を溶出剤として用
いたカラムクロマトグラフィーにより、濾過した発酵ブ
ロスから分離する。

【００２０】好適な吸着剤には、セファデックス樹脂、
親水性の不溶性モレキュラーシーブクロマトグラフィー
用媒質(架橋デキストランによって製造される)およびＴ
ＳＫゲルの他、炭素、アルミナ、アニオンおよびカチオ
ン交換樹脂、シリカゲル、ポリアミド、カルボキシメチ
ルセルロース、スチレンおよびジビニルベンゼンの多孔
性コポリマー、例えばダイアイオンＨＰ−２０、アンバ
ーライトＸＡＤ樹脂およびＥＳ−８６５のようなジュオ
ライト樹脂などが挙げられる。ダイアイオン樹脂は三菱
化学工業株式会社の製品である。アンバーライトＸＡＤ
樹脂はＲohm and Ｈass(フィラデルフィア、ペンシル
バニア)により製造されている。ジュオライト樹脂はＤi
amond Ｓhamrock(レッドウッド市、カリフォルニア)の
製品である。セファデックス樹脂はＰharmacia Ｆine
ＣhemicalsＡＢ(Ｕppsala、スウェーデン)で製造され
ている。ＴＳＫゲルはＥ.Ｍerck(Ｄarmstadt)およびＢi
o−Ｒad(２２００Ｗriqht Ａve.リッチモンド,カリフ
ォルニア,９４８０４)の製品である。

【００２１】このＳtreptomyces virginiae ＮＲＲＬ
１２５２５またはＳ.virginiae ＮＲＲＬ１５１５６を
発育させＡ４１０３０複合体を生産するための培養培地
は、多くの培地のいずれであってもよい。しかし経済的
な生産、最高収量、生成物の簡単な単離を達成するには
ある種の培地を使用するのが好ましい。これらの培地に
は同化し得る炭素源、窒素源および無機塩類が含まれて
いなければならない。好ましい炭素源としては例えばデ
キストリン、でんぷん、マンノース、グリセロールおよ
び綿実油などが挙げられる。炭素源の最適濃度は約２〜
３重量％である。好ましい窒素源としてはあらびき大
豆、大豆粉、ピーナツ粉、魚粉、ニクペプトン、豚血液
粉などが挙げられる。

【００２２】微生物の発育および生合成に必要な必須微
量元素は、培地中の他の成分に不純物として含まれてい
るのが普通である。しかしナトリウム、カリウム、マグ
ネシウム、カルシウム、アンモニウム、クロライド、カ
ーボネイト、ホスフェート、スルフェート、ニトレート
イオンなどを与え得る可溶性の栄養無機塩類をさらに培
養培地に入れるのが好ましい。

【００２３】発酵培地にツウィーン８０(油状の液状ポ
リオキシエチレンソルビタンモノオレイン酸エステル、
ＩＣＩ Ａmericas,Ｉnc、(Ｗilmington,Ｄel.)の製品)
を２〜４％の濃度で添加すると収量が約３００％増加す
る。しかしこの条件下ではＡ４１０３０抗生物質の単離
が難しい場合がある。振盪フラスコ培養によって少量の
Ａ４１０３０抗生物質を得ることができるが、多量のＡ
４１０３０抗生物質を生産するにはタンク中で液中好気
性培養を行なうのが好ましい。タンク培養には増殖接種
物を使用するのが好ましい。増殖接種物を製造するに
は、少量の培養培地に胞子または菌糸体フラグメントを
接種する。このようにして新鮮で活発に増殖している培
養物が得られる。ついで、この増殖接種物をより大きな
タンクに移し、適当な期間インキュベーションするとＡ
４１０３０抗生物質が最適収量で生産される。

【００２４】増殖培地用の接種物を得るためのもう１つ
の方法は、胞子の水性懸濁液の代りに凍結乾燥ペレット
を用いることである。凍結乾燥ペレットは既知の方法で
製造することができる。凍結乾燥のための胞子塩懸濁液
の製造法は、滅菌蒸留水の代りに滅菌牛血清を使用する
他は水性胞子懸濁液の調製法と同じである。

【００２５】Ａ４１０３０生産微生物は約１０〜約３４
℃の広い温度範囲で発育することができる。約３０℃の
時にＡ４１０３０抗生物質複合体の生産が最高になるよ
うである。

【００２６】好気性液中培養法においては通常のことで
あるが、滅菌空気を培養培地に分散導入する。微生物を
効率よく増殖させるためには、タンク生産に使用される
空気の容量は、１分当り、培養培地１容量当り空気約
０.１〜約０.５容量(v／v／m)であり、約１００〜約３
００rpmで撹拌するのがよい。発酵培地１００lを含有す
る１６５lの容器を用い、約２００rpmで回転する羽根車
で撹拌した場合の最適吹き込み率は約０.２５v／v／mで
ある。

【００２７】抗生物質活性は通常約４８時間後にあらわ
れ、発酵期間中少くとも１４４時間存在する。最高の抗
生物質生産は約９６時間から約１２０時間の発酵時間に
行なわれる。

【００２８】Ａ４１０３０抗生物質の生産は、発酵中、
Ｂ.subtilisを用いた寒天拡散法か、Ｓtaphylococcus
aureus ＡＴＣＣ９１１４を用いた濁度法によってモニ
ターすることができる。

【００２９】本発明に係る抗生物質複合体およびその個
々の因子は、Ｓ.virginiae ＮＲＲＬ１５１５６または
Ｓ.virginiae ＮＲＲＬ１２５２５のいずれかを用い、
等しい温度、期間および培地成分など、実質的に等しい
発酵条件下で製造される。しかしこのような条件下では
Ｓ.virginiae ＮＲＲＬ１２５２５のほうが抗生物質複
合体の生産量がいくらか多いようである。

【００３０】以下に実施例を挙げて本発明をさらに詳細
に説明するが、本発明はこれらの実施例によって限定さ
れるものではない。実施例１ 第１段階接種物の調製

【００３１】Ｓtreptomyces virginiae ＮＲＲＬ１２
５２５およびＳtreptomyces virginiae ＮＲＲＬ１５
１５６を寒天斜面培養するために使用する培地を以下に
挙げる。

【表６】 成 分 量 (g／l) デキストリン(注１) １０.０ 酵母エキス １.０ 酵素加水分解カゼイン(注２) ２.０ 牛肉エキス １.０ ＣoＣl₂・６Ｈ₂Ｏ ０.０１ 寒天 ２０.０ 脱イオン水 水を加えて１l (注１)Ｍatheson Ｃoleman ＆ Ｂell,Ｎorwood,Ｏhi
o４５２１２ (注２)Ｎ−Ｚ−Ａmine Ａ (Ｈumko Ｓheffield Ｃhem
ical Ｃo.,Ｍemphis,Ｔenn.)

【００３２】調製された培地のpＨは６.５であり、オー
トクレーブにかける前に５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を
用いて７.３に調節した。オートクレーブにかけた後の
培地のpＨは６.９であった。

【００３３】夫々の微生物の胞子を、上記の成分で調製
した寒天斜面に接種し、この斜面培地を約３０℃の温度
で約６日間インキュベートした。次いで成熟した培養物
の上に滅菌蒸留水を注ぎ、滅菌具を使って胞子および菌
糸体をはがした。得られた胞子懸濁液１mlを使って増殖
培地５mlに接種した。増殖培地用の接種物を得る別の方
法は、水性胞子懸濁液の代りに凍結乾燥ペレットを用い
ることである。ＮＲＲＬ１２５２５のための増殖培地の
組成は以下の通りであった。

【表７】 成 分 量 (g／l) グルコース ２０.０ あらびき大豆(または大豆粉) １５.０ とうもろこし浸漬液 １０.０ ＣaＣＯ₃ ２.０ 水道水 水を加えて１l

【００３４】ＮＲＲＬ１５１５６のための増殖培地の組
成は以下の通りであった。

【表８】 成 分 量 (g／l) グルコース １５.０ デキストリン ２０.０ あらびき大豆(または大豆粉) １５.０ とうもろこし浸漬液 １０.０ ＣaＣＯ₃ ２.０ 水道水 水を加えて１l

【００３５】未調節の培地pＨは５.５であり、これをオ
ートクレーブにかける前に５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液
でpＨ６.５に調節した。オートクレーブにかけた後の培
地のpＨは７.０であった。

【００３６】各増殖接種物を培地５０mlを含有する２５
０mlの広口エーレンマイヤーフラスコに入れ、直径２イ
ンチの円弧で２５０rpmで回転するシェーカー(振盪器)
上、約４８時間、約３０℃でインキュベートした。この
インキュベートした培地は、小さな発酵器(接種物は発
酵培地容量の約１％である)に接種するか、あるいは大
量の培養物を生産するための増殖培地と同じ組成の第２
段階の培地に接種するのに使用する。

【００３７】ＮＲＲＬ１５１５６の培養 生産培地５０mlに、１％(０.５ml)の上記のインキュベ
ートした増殖培地を接種した。生産培地の組成は以下の
通りである。

【表９】 成 分 量 (g／l) デキストリン(注１) ３０.０ あらびき大豆 ６.０ Ｋ₂ＨＰＯ₄ １.０ ＦeＳＯ₄・７Ｈ₂Ｏ ０.００５ ＭgＳＯ₄・７Ｈ₂Ｏ １.０ ＮaＮＯ₃ １.０ ＣaＣＯ₃ ２.０(注２) 脱イオン水 水を加えて１l (注１)デキストリンはタピオカデキストリンであって
も、ポテトデキストリンであってもよい。 (注２)ＮＲＲＬ１２５２５の発酵のためにはＣaＣＯ₃の
濃度は４.０g／lであった。Ｋ₂ＨＰＯ₄は水に溶解し、
この溶液を別に滅菌し、オートクレーブ(高圧滅菌)にか
けたその他の培地成分に添加した。

【００３８】インキュベートした発酵培地５０mlを２５
０mlのエーレンマイヤーフラスコに入れ、直径２インチ
の円弧で２５０rpmで回転する振盪器上、約４〜５日
間、約３０℃でインキュベートした。Ｓtreptomyces v
irginiae ＮＲＲＬ１２５２５は上記の生産培地を用
い、１６５リットルおよび１６００ガロンのタンクを用
いた大規模な発酵規模でインキュベートした。

【００３９】接種した生産培地は、培地１００lを含有
する１６５lの発酵タンク中、約３２℃の温度で約２１
０時間(８.７５日)発酵させた。この発酵培地には０.２
５v／v／mの割合で滅菌空気を吹込み、通常の撹拌器を
用いて約２００rpmで撹拌した。この大規模なＮＲＲＬ
１２５２５の発酵物からＡ４１０３０抗生物質を、以下
に述べる方法で分離した。

【００４０】実施例２ Ａ４１０３０抗生物質群の分離 実施例１に記載した方法で得た全発酵ブロス(４２１５
l)を、フィルタープレスに濾過助剤(ハイフロ・スーパ
ーセル、ケイソウ土、Ｊohns−Ｍanville Ｐroducts
Ｃorporation)を入れて濾過した。濾過したブロスを、
ダイアイオンＨＰ−２０(ビーズ状の多孔質スチレンジ
ビニルベンゼンコポリマー、三菱化学工業)１００lを含
有するカラムに４l／分の流速で流した。カラムに水３
００l次いでメタノールと水の混合物(１:３)を４l／分
の速さで流すことにより洗浄した。次いでメタノールと
水の混合物(１:１)を、６l／分の速さで流して溶出し、
１００lのフラクションを集めた。各フラクションの生
物活性を分析した。Ｂacillussybtilisを接種した寒天
平板上、ペーパーディクス分析によりバイオアッセイを
行なった。フラクション１は捨てた。フラクション２〜
１５を集め、減圧下で濃縮し、得られた濃縮物を凍結乾
燥すると粗抗生物質複合体２２０gが得られた。

【００４１】この複合体１１０gをメタノールと水の混
合物(１:１)５lに溶解し、水酸化ナトリウム水溶液でp
Ｈ１０に調節し濾過した。この濾液を予めメタノールと
水の混合物(１:１)で平衡化した粗セファデックスＧ−
５０(親水性の不溶性のモレキュラーシーブクロマトグ
ラフィー用媒体、架橋デキストランで製造されたもの、
Ｐharmacia Ｆine Ｃhemicals,Ｐiscataway.ＮＪ０８
８５４から販売)を入れた３０lのカラム(０.２×１m)に
５０ml／分の速さで流した。カラムをメタノールと水の
混合物(１:１)で５０ml／分の速さで溶出し、３lのフラ
クションを集めた。Ｂacilus subtilisに対して活性を
有するフラクション１３〜２４を集め、減圧下で濃縮
し、凍結乾燥するとＡ４１０３０抗生物質複合体３５.
７gが得られた。

【００４２】本発明の微生物によって生産される抗生物
質は本明細書においては便宜的にＡ４１０３０抗生物質
群と言う。このＡ４１０３０複合体はＡ４１０３０因子
Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、ＦおよびＧと命名される個々の因
子群を含んでいる。以下の記載において、その有用性を
説明するにあたり「Ａ４１０３０抗生物質」なる用語は、
Ａ４１０３０複合体のみならず、Ａ４１０３０因子Ａ、
Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、ＦおよびＧからなる群から選ばれるい
ずれかをも意味するものとする。

【００４３】発酵から７種もの抗生物質因子群が回収さ
れ、これらは混合物すなわちＡ４１０３０複合体として
得られる。Ａ４１０３０複合体中の因子群の割合いは、
発酵条件に応じて変動することは容易に理解されるであ
ろう。個々の因子群Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、ＦおよびＧ
は、以下に述べる方法で個々の化合物に分離することが
できる。Ａ４１０３０複合体は水、希酸水溶液、希塩基
水溶液、メタノールと水の混合物、エタノールと水の混
合物、ジメチルホルムアミド、ジメチルホルムアミドと
水の混合物、ジメチルスルホキシド、ジメチルスルホキ
シドと水との混合物、アセトニトリル、アセトン、酢酸
エチル、テトラヒドロフラン、メチレンクロリドなどの
溶媒に可溶である。

【００４４】以下に、Ａ４１０３０因子群の分離、これ
までに確認されたそれらの物理的性質およびスペクトル
特性を示す。

【００４５】実施例３ Ａ４１０３０因子Ａの単離 実施例２で得たＡ４１０３０複合体８gを、水:アセトニ
トリル:塩化ナトリウム(８４:１６:２g／l)からなる溶
媒２００mlに溶解して濾過した。この濾液を、米国特許
第４２９９７６３号の実施例６および７に記載されてい
る特別の方法で、本発明者らの研究所で調製した１０〜
２０ミクロンのＬＰ−１／Ｃ₁₈逆相シリカゲル４lを充
填したステンレススチールカラム(８×１００cm)に入れ
た。このカラムはＣhromatospac Ｐrep−１００ユニッ
ト(Ｊobin Ｙvon,１６−１８Ｒue du Ｃanal９１１
６０ Ｌongjumeau,Ｆrance)の一部である。カラムを水:
アセトニトリル:塩化ナトリウム(８４:１６:２g／l)の
混液で６０ml／分の速さで溶出し、４８０mlのフラクシ
ョンを集めた。溶出液はタイプ６光学単位を備えたＩＳ
ＣＯモデルＵＡ−５ＵＶモニター(Ｉnstrumentation
Ｓpecialties Ｃo.,Ｌincoln,ＮＦ６８５０５)を用い
て、２５４nmでモニターした。集めたフラクションにつ
き分析用の高速液体クロマトグラフィー(ＨＰＬＣ)(上
記の方法で本発明者らの研究室で調製した１０ミクロン
のＬＰ−１／Ｃ₁₈を充填した４.６×２５０mmのステン
レススチールカラムを使用)を用いて因子Ａの存在を分
析した。試料はレオダインモデル７１２０インジェクシ
ョンバルブ(Ｒheodyne Ｉnc.,Ｂerkeley,ＣＡ９４７１
０)を用いて注入した。水:アセトニトリル:酢酸ナトリ
ウム(８１:１９:０.０３Ｍ)からなり、氷酢酸でpＨ６に
調節した溶媒をミルトン・ロイ・ジュプレックス・ミニ
ポンプ(Ｌaboratory Ｄata Ｃontrol,Ｄivision of
Ｍilton Ｒoy Ｃo.,Ｒivera Ｂeach,ＦＬ３３４０
４)を用いて１ml／分(１２００psi)で流した。因子Ａは
ＩＳＣＯモデルＵＡ−５ＵＶ検出器を用いて２５４nmで
検出した。フラクション１〜５１は捨てた。因子Ａに富
んだフラクション５２〜７９を集め、減圧下で濃縮し容
量を５００mlとした。この濃縮液を水酸化ナトリウム水
溶液でpＨ８.２に調節し濾過した。この濾液を予め水で
平衡化した１００mlのダイアイオンＨＰ−２０樹脂を入
れたカラム(２.８×２２cm)に１５ml／分の速度で充填
した。塩化銀沈澱法により塩素が洗液中に検出されなく
なるまでカラムを水(蟻酸でpＨ２.５に調節したもの、
４００ml)で洗浄した。次いで水:アセトニトリル(８:
２)の混液で、１５ml／分の速さで溶出し、１lのフラク
ションを集めた。このフラクションのＢacillus subti
lisに対する活性を分析した。フラクション２を冷凍す
ることにより生成した結晶性因子Ａを濾取した(３８９.
６mg)。フラクション１およびフラクション２からの濾
液を夫々減圧下で濃縮し、凍結乾燥すると夫々因子Ａが
７３１.８mgおよび５１４mg得られた。

【００４６】抗生物質Ａ４１０３０因子Ａは白色の結晶
性固体である。Ａ４１０３０因子Ａのおおよその元素分
析値は以下の通りである:炭素５６.４４％、水素３.５
８％、窒素８.１１％、酸素２３.２０％、塩素８.２９
％。フィールドデソープションおよびプラズマデソープ
ション質量分析の結果、Ａ４１０３０因子Ａの分子量は
１２３１であった。元素分析および分子量に基づいて因
子Ａの実験式はＣ₅₈Ｈ₄₄Ｃl₃Ｎ₇Ｏ₁₈と決定された。６
６％ジメチルホルムアミド水溶液中で因子Ａを電気滴定
した結果、pＫa値が約５.５３、７.６０および１０.３
７である３個の滴定可能基の存在が確認された(さらに
１０.５以上のpＫa値のものが存在する可能性あり、初
期pＨ７.８３)。抗生物質Ａ４１０３０因子Ａの比旋光
度は以下の通りである:[α]²⁵Ｄ:−１９.６°(c＝９.
０、ジメチルスルホキシド中)。Ａ４１０３０因子Ａの
ＫＢr法による赤外吸収スペクトルを図１に示す。以下
に示す顕著な吸収極大が観察された:３４４８−３２２
６(強、ブロード)、１６５３(強)、１６１０(弱)、１５
８７(中)、１５１５(強)、１４８８(弱)、１４２９
(中)、１２２７(強)、１１３９(中)、１０６４(強)、お
よび１０１０(強)cm^-1。

【００４７】酸性、中性、および塩基性条件下における
メタノールと水(１:１)の混合物中でのＡ４１０３０因
子群Ａ〜Ｇの紫外線吸収スペクトルを表１０に挙げる。

【表１０】 Ａ４１０３０因子群のＵＶスペクトル 因 子 酸性または中性 塩基性 max nm (ε) max nm (ε) Ａ ２７８(１１,１００) ２９８(１７,２００) Ｂ ２７８( ９,６００) ２９８(１６,８００) Ｃ ２７８( ８,４００) ２９８(１４,０００) Ｄ ２７８(１０,６００) ２９８(１９,９００) Ｅ ２７８( ８,５００) ２９８(１５,５００) Ｆ ２７８( ９,３００) ２９８(１４,５００) Ｇ ２７８(１５,０００) ２９８(１８,０００)

【００４８】抗生物質Ａ４１０３０因子Ａは、アルコー
ルと水の混液、ジメチルスルホキシド、ジメチルホルム
アミド、ジメチルスルホキシドと水の混液、ジメチルホ
ルムアミドと水の混液、希酸水溶液および希塩基水溶液
に可溶である。

【００４９】以上の物理化学的データに基づくＡ４１０
３０因子Ａの構造式は以下に示す通りである。

【化１】

【００５０】尚、バイオアッセイおよび高速流体クロマ
トグラフィー分析の結果、因子ＡがカルチャーＡ４１０
３０.４によって生産される抗生物質因子群の約９４〜
約９６重量％を占め、因子Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、ＦおよびＧ
が残りの約４〜約６重量％を占めていることがわかっ
た。

【００５１】実施例４ Ａ４１０３０因子Ｂの単離 Ａ４１０３０複合体１.０gを、水:アセトニトリル:塩化
ナトリウム(８５:１５:２g／l)からなる溶媒３５mlに溶
解し、この溶液を、２５〜４０ミクロンのＬiＣhroprep
ＲＰ−１８(シリカゲルに化学的に結合させた炭化水素
相(Ｃ₁₈)、ＭＣ／Ｂ Ｍanufacturing Ｃhemists,Ｉn
c.,Ｃincinnati,ＯＨ)を本発明者らの研究室で充填した
４.７×４５cmのＭichel−Ｍiller高速低圧液体クロマ
トグラフィー(ＨＰＬＰＬＣ)ガラスカラム(Ａce Ｇlas
s,Ｉnc.,Ｖineland,ＮＪ０８３６０)に注入した。試料
を溶解するのに使用したのと同じ溶媒系を使って、ＦＭ
Ｉバルブレスピストンポンプ(Ｆluid Ｍetering Ｉn
c.,Ｏyster Ｂay,ＮＹ１１７７１)により、２１ml／分
(１００psi)の速度で溶出し、２１mlのフラクションを
集めた。溶出液はＩＳＣＯモデルＵＡ−５ＵＶ検出器を
用い、２８０nmでモニターした。フラクション１〜１８
３は捨てた。因子Ｂに富んだフラクション１８４〜２４
５を合せ、減圧下で２５mlまで濃縮した。同様の精製を
７回行なって得た濃縮物を合せ、水で１.４lに希釈し、
予め水で平衡化したダイアイオンＨＰ−２０樹脂１００
mlを入れたカラムに、８〜１０ml／分の速度で入れた。
塩化銀沈澱法により洗液中に塩素が検出されなくなるま
で水(６００ml)でカラムを洗浄した。水とメタノール
(１:１)の混液で、８〜１０ml／分の速度で溶出し、３
００mlのフラクションを集め、Ｂacillus subtilisに
対する活性を分析した。フラクション１〜５を合せて減
圧下で濃縮し、凍結乾燥すると粗因子Ｂ５２３mgが得ら
れた。

【００５２】２回の操作で得た粗因子Ｂ５５０mgを水:
アセトニトリル:ジブチルアミン(７５:２５:０.０３
Ｍ、リン酸でpＨ７.８に調節したもの)からなる溶媒１
０mlに、溶液になるまでテトラブチル水酸化アンモニウ
ムを加えることにより溶解した。この溶液を２５〜４０
ミクロンのＬi Ｃhroprep ＲＰ−１８(前記参照)を充
填した２.８×５９cmのＭichel−Ｍiller高速低圧液体
クロマトグラフィー(ＨＰＬＰＬＣ)ガラスカラムに注入
した。ＦＭＩポンプを使って、試料の溶解に用いたもの
と同じ溶媒系で５ml／分(３５psi)の速度で溶出した。
溶出液はＩＳＣＯモデルＵＡ−５ＵＶ検出器を用い２５
４nmでモニターした。集めた２７mlのフラクションにつ
いて、１０ミクロンのＬi Ｃhroprep ＲＰ−１８(市販
の逆相シリカゲル、Ｅ.Ｍerck(Ｄarmstadt,Ｇermany)社
製)を充填した４.６×２５０mmのステンレススチールカ
ラムを用いた分析用ＨＰＬＣで、因子Ｂの存在を分析し
た。試料はレオダインモデル７１２０インジェクション
バルブを使って注入した。水:アセトニトリル:ジブチル
アミン(８２:１８:０.０３Ｍ)からなり、リン酸でpＨ
２.５に調節した溶媒をコンスタメトリックIIIポンプ
(ＬＤＣ−Ｌaboratory Ｄata Ｃontrol,Ｄivision o
f Ｍilton Ｒoy Ｃo.,Ｒiviera Ｂeach,ＦＬ３３４
０４)を用いて１ml／分(７５０psi)で注入した。因子Ｂ
は、ＬＤＣスペクトロモニターIII可変波長ＵＶ検出器
を用いて２２５nmで検出した。ＲＰ−８カラムから溶出
した、因子Ｂに富んだ９９９ml〜１２９６mlのフラクシ
ョンを２００mlになるまで濃縮した。この濃縮物を５０
０mlまで希釈し、リン酸でpＨ２.０に調節し、イオンマ
ーカーとして塩化ナトリウム(１mg／ml)を加えた。この
溶液を、予め水で平衡化したダイアイオンＨＰ−２０樹
脂１００mlを入れたカラム(２.８×２２cm)に、２０ml
／分の割合で充填した。カラムを、塩化銀沈澱法により
塩素が検出されなくなるまで、蟻酸でpＨ２.５に調節し
た水(５００ml)で洗浄した。次いで水とアセトニトリル
(６:４)１lで、３０ml／分の速度で溶出した。溶出液を
減圧下で濃縮し、凍結乾燥すると粗因子Ｂ２９５.６mg
が得られた。

【００５３】上で得た因子Ｂ２８５mgをジメチルホルム
アミドと水(４:６)の混液３０mlに加熱溶解し、室温ま
で冷却し、次いで冷凍すると因子Ｂの沈澱が生成した。
この沈澱を濾取し、アセトンで洗浄し減圧下で乾燥する
と因子Ｂ８４mgが得られた。

【００５４】抗生物質Ａ４１０３０因子Ｂは白色の固体
であり、以下のおおよその元素分析値を有する:炭素５
８.５４％、水素４.２１％、窒素８.６３％、塩素５.９
６％、酸素２２.６６％(差から)。因子Ｂを６６％ジメ
チルホルムアミド水溶液中で電気滴定した結果、約５.
６および７.５のpＫa値を有する２個の滴定可能基の存
在が確認された(さらに１０以上のpＫa値を有するもの
の存在する可能性がある、初期pＨ６.２２)。高速原子
衝撃マススペクトルによる分子量は約１１９７であっ
た。元素分析および分子量に基づく因子Ｂの実験式はＣ
₅₈Ｈ₄₅Ｃl₂Ｎ₇Ｏ₁₈である。

【００５５】ＫＢr法による抗生物質Ａ４１０３０因子
Ｂの赤外吸収スペクトルを図２に示す。以下の顕著な吸
収極大が観察された:３４４８〜３２２６(強、ブロー
ド)、１６５３(強)、１６１０(中)、１５８７(弱)、１
５１５(強)、１４８８(弱)、１４２９(中)、１２９０
(弱)、１２２７(強)、１１３９(中)、１０６４(強)、お
よび１０１０(強)cm^-1。

【００５６】中性、酸性および塩基性のメタノールと水
の混液(１:１)中のＡ４１０３０因子Ｂの紫外線吸収極
大を表１０に示す。

【００５７】抗生物質Ａ４１０３０因子Ｂの溶解性は因
子Ａと同じである。

【００５８】観察された物理化学的データに基づくＡ４
１０３０因子Ｂの構造式は以下の通りである。

【化２】

【００５９】実施例５ Ａ４１０３０因子Ｃの単離 Ａ４１０３０複合体９.０gを水:アセトニトリル:塩化ナ
トリウム(８３:１７:２g／l)からなる溶媒２００mlに溶
解し、この溶液を濾過した。濾液を、実施例３に記載し
た方法で本発明者らの研究所で調製した１０〜２０ミク
ロンのＬＰ−１／Ｃ₁₈逆相シリカゲル４lを充填した８
×１００cmのステンレススチールカラムに充填した。Ｃ
hromatospac Ｐrep−１００ユニットの一部であるこの
カラムを、試料の溶解に使用したのと同じ溶媒系で、６
０ml／分の速度で溶出し、４８０mlのフラクションを集
めた。溶出液はＩＳＣＯモデルＵＡ−５ＵＶ検出器を用
いて２５４nmでモニターした。集めたフラクションにつ
き、２５〜４０ミクロンのＬi Ｃhroprep ＲＰ−８を充
填した０.８×３０cmのＭichel−Ｍillerガラスカラム
を用いた分析用ＨＰＬＰＬＣで因子Ｃの存在を分析し
た。ＦＭＩポンプを使って水:アセトニトリル:塩化ナト
リウム(８４:１６:２g／l)の溶媒を４ml／分で流した。
因子ＣはＩＳＣＯモデルＵＡ−５ＵＶ検出器を用いて２
５４nmで検出した。フラクション１〜２７は捨てた。因
子Ｃに富むフラクション２８〜５２を集め、減圧下で５
００mlに濃縮した。

【００６０】同様の精製を２回行なって得た濃縮液を合
せて濾過し、予め水で平衡化した１００mlのダイアイオ
ンＨＰ−２０樹脂を入れたカラムに１０ml／分の速度で
充填した。塩化銀沈澱法により塩素が洗液中に検出され
なくなるまでカラムを水(２l)で洗浄した。次いで水と
アセトニトリル(６:４)の混液１lで、１５ml／分の速度
で溶出を行なった。溶出液を減圧下で濃縮し、凍結乾燥
すると因子Ｃに富んだ混合物２.７５gが得られた。この
混合物１.２５gを水:アセトニトリル:ジブチルアミン
(８０:２０:０.０３Ｍ、リン酸でpＨ７.８に調節したも
の)からなる溶媒２５mlに、溶液になるまでテトラブチ
ル水酸化アンモニウムを加えることにより溶解した。試
料を、２５〜４０ミクロンのＬi Ｃhroprep ＲＰ−８を
充填した２.８×５９cmのＭichel−Ｍillerガラスカラ
ムに注入し、ＦＭＩポンプを用い、試料の溶解に使用し
たものと同じ溶媒で、４ml／分の速度で溶出した。溶出
液はＩＳＣＯモデルＵＡ−５ＵＶ検出器を用いて２５４
nmでモニターした。集めた２８mlのフラクションにつ
き、１０ミクロンのＮucleosil Ｃ₁₈(市販の逆相シリ
カゲル、Ｒainin Ｉnstrument Ｃo.,Ｉnc.,Ｗoburn,
ＭＡ０１８０１)を本発明者らの研究室において充填し
た４.６×１５０mmのステンレススチールカラムを用い
た分析用ＨＰＬＣにより、因子Ｃの存在を追跡した。試
料はレオダインモデル７１２０インジェクションバルブ
を用いて注入した。ミルトン・ロイ・ジュプレックス・
ミニポンプを用いて、水:アセトニトリル:酢酸ナトリウ
ム(８１:１９:２g／l)からなり氷酢酸でpＨ６に調節し
た溶媒を１ml／分で供給した。因子ＣをＩＳＣＯモデル
１８００可変波長ＵＶ検出器を用いて２２５nmで検出し
た。因子Ｃに富んだ４.２l〜５.１lの溶出液を減圧下で
５００mlに濃縮した。

【００６１】同様の精製を３回行なって得た濃縮物を合
せて溶解し、リン酸を加えてpＨ１.７にした。塩化ナト
リウム(１mg／ml)をイオンマーカーとして加えた。この
試料を、予め水で平衡化した１００mlダイアイオンＨＰ
−２０樹脂を入れたカラム(２.８×２２cm)に２０ml／
分の割合で充填した。カラムを、塩化銀検出法により洗
液中に塩素が検出されなくなるまで、pＨ２.５の希酸水
溶液(３００ml)で洗浄した。次いで水とアセトニトリル
(６:４)の混液１lで、３０ml／分の速度で溶出した。溶
出液を集め、減圧下で濃縮し凍結乾燥すると、ある程度
精製された因子Ｃ、０.８７gが得られた。この生成物を
水:アセトニトリル:ジブチルアミン(８０:２０:０.０３
Ｍ、リン酸でpＨ７.８に調節したもの)からなる溶媒２
０mlに、溶液となるまでテトラブチル水酸化アンモニウ
ムを加えることにより溶解した。この試料を、前記の２
５〜４０ミクロンのＬi Ｃhroprep ＲＰ−８を充填した
２.８×５９cmのＭichel−Ｍillerガラスカラムに入れ
てクロマトグラフィーした。２.４５lから３.２０lの溶
出液を減圧下で濃縮して５００mlとした。

【００６２】同様の精製を２回行なって得た濃縮物を合
せ、既述したようにダイアイオンＨＰ−２０樹脂を含有
するカラムで脱塩した。溶出液を減圧下で濃縮して凍結
乾燥すると因子Ｃ６８８mgが得られた。この生成物６７
８mgを水とアセトニトリル(６:４)の混液６０mlに加熱
溶解した。この溶液を冷却し、冷凍すると因子Ｃが沈澱
した。この沈澱物を濾取し、アセトンで洗浄し減圧下で
乾燥すると因子Ｃ４２８mgが得られた。

【００６３】抗生物質Ａ４１０３０因子Ｃは白色固体で
あって、以下のおおよその元素分析値を有する:炭素４
８.８７％、水素４.３９％、窒素６.１６％、塩素６.９
６％、酸素３３.８１％。６６％のジメチルホルムアミ
ド水溶液中で因子Ｃを電気滴定した結果、約５.５およ
び７.１のpＫa値を持った２個の滴定可能基の存在する
ことが解った(さらにpＫa値が１０以上のものが存在す
る可能性がある、初期pＨ６.６)。高速原子衝撃マスス
ペクトルによる観察された分子量は約１３９３であっ
た。元素分析および分子量に基づく因子Ｃの実験式はＣ
₆₄Ｈ₅₄Ｃl₃Ｎ₇Ｏ₂₃である。

【００６４】ＫＢr法により測定した抗生物質Ａ４１０
３０因子Ｃの赤外吸収スペクトルを図３に示す。以下の
顕著な吸収極大が観察された:３４４８〜３２２６(強、
ブロード)、１６５３(強)、１６１０(中)、１５８７
(弱)、１５０４(強)、１４８１(弱)、１４２９(中)、１
２２０(強)、１１３６(強)、１０６４(弱)、１０５３
(中)、および１００５(強)cm^-1。中性、酸性および塩基
性のメタノールと水の混液(１:１)中で測定した紫外線
吸収極大を表１０に示す。

【００６５】抗生物質Ａ４１０３０因子Ｃは、因子Ａと
同じ溶媒に可溶である。

【００６６】観察された物理化学的データーに基づくＡ
４１０３０因子Ｃの構造を以下に示す:

【化３】

【００６７】実施例６ Ａ４１０３０因子Ｄの単離 Ａ４１０３０複合体６.０gを水:アセトニトリル:塩化ナ
トリウム(８３:１７:２g／l)からなる溶媒２００mlに溶
解し、得られた溶液を濾過した。この濾液を、実施例３
に記載した方法により本発明者らの研究室で調製した１
０〜２０ミリミクロンのＬＰ−１／Ｃ₁₈逆相シリカゲル
４lを充填した８×１００cmのステンレススチールカラ
ムに入れた。Ｃhromatospac Ｐrep−１００ユニットの
部品であるこのカラムを、試料の調製に使用したものと
同じ溶媒で、６０ml／分の速度で溶出し、４８０mlのフ
ラクションを集めた。溶出液はＩＳＣＯモデルＵＡ−５
ＵＶ検出器を用いて２５４nmでモニターした。集めたフ
ラクションにつき、２５〜４０ミクロンのＬi Ｃhropre
p ＲＰ−８を充填した０.８×３０cmのＭichel−Ｍille
rガラスカラムを用いた分析用ＨＰＬＰＬＣにより因子
Ｄの存在を分析した。ＦＭＩポンプを用いて水:アセト
ニトリル:塩化ナトリウム(８４:１６:２g／l)からなる
溶媒を４ml／分の速度で供給した。因子ＤはＩＳＣＯモ
デルＵＡ−５ＵＶ検出器を用いて２５４nmで検出した。
フラクション１〜３４は捨てた。因子Ｄに富んだフラク
ション３５〜５３を集め、減圧下で５００mlになるまで
濃縮した。

【００６８】同様の精製を２回行なって得た濃縮物を集
め、水で３lに希釈し、予め水で平衡化した１００mlの
ダイアイオンＨＰ−２０樹脂をカラム(２.８×２２cm)
に充填したものに、８〜１０ml／分の速度で入れた。こ
のカラムを、塩化銀沈澱法により塩素が洗液中に検出さ
れなくなるまで水(３０ml)で洗浄した。次いで水とアセ
トニトリル(６:４)の混液からなる溶媒１lで、８〜１０
ml／分の速度で溶出した。溶出液を減圧下で濃縮し、凍
結乾燥すると因子Ｄに富んだ因子群混合物２.３３gが得
られた。

【００６９】この混合物１.１５gを水:アセトニトリル:
ジブチルアミン(８０:２０:０.０３Ｍ、リン酸でpＨ７.
８に調節したもの)からなる溶媒２５mlに、溶液となる
までテトラブチル水酸化アンモニウムを加えることによ
り溶解した。この試料を、２５〜４０ミクロンのＬi Ｃ
hroprep ＲＰ−８を充填した２.８×５９cmのＭichel−
Ｍillerガラスカラムに充填し、試料を溶解するのに用
いたものと同じ溶媒で、ＦＭＩポンプを使って５ml／分
の速度で溶出した。溶出液はＩＳＣＯモデルＵＡ−５Ｕ
Ｖ検出器を用いて２５４nmでモニターした。集めた２５
mlのフラクションにつき、１０ミクロンのＬi Ｃhropre
p ＲＰ−１８(市販の逆相シリカゲル、Ｅ.Ｍerck(Ｄarm
stadt,Ｇermany))を充填した４.６×２５mmのステンレ
ススチールカラムを用いた分析用ＨＰＬＣにより因子Ｄ
の存在を分析した。試料はレオダインモデル７１２０イ
ンジェクションバルブを使って注入した。水:アセトニ
トリル:ジブチルアミン(８０:２０:０.０３Ｍ)からな
り、リン酸でpＨ２.５に調節した溶媒をミルトン・ロイ
・ジュプレックス・ミニポンプを用いて０.７５ml／分
の速度で供給した。因子ＤはＩＳＣＯモデル１８００可
変波長ＵＶ検出器を用いて２２５nmで検出した。２.６l
から３.４lの、因子Ｄに富んだ溶出液を減圧下で３００
mlまで濃縮した。

【００７０】同様の精製を３回行なって得た濃縮物を集
め、リン酸を加えて溶解し、pＨ７.７とした。塩化ナト
リウム(１mg／ml)をイオンマーカーとして加えた。この
試料を予め水で平衡化した１００mlのダイアイオンＨＰ
−２０樹脂をカラム(２.８×２２cm)に充填したものに
２０ml／分の割合いで充填した。このカラムを蟻酸水溶
液でpＨ２.５に調節した水３００mlで、塩化銀沈澱法に
より洗液中に塩素が検出されなくなるまで洗浄した。次
いで水およびアセトニトリル(６:４)の混液１lを用い
て、３０ml／分の速度で溶出した。溶出液を減圧下で濃
縮し凍結乾燥するとかなり精製された因子Ｄ０.６３gが
得られた。この生成物を、水:アセトニトリル:ジブチル
アミン(８０:２０:０.０３Ｍ、リン酸でpＨ７.８に調節
したもの)からなる溶媒１５mlに、溶液になるまでテト
ラブチル水酸化アンモニウムを加えることにより溶解し
た。この溶液を、既述したように、２.８×５９cmのＭi
chel−Ｍillerガラスカラム中の２５〜４０ミクロンの
Ｌi Ｃhroprep ＲＰ−８でクロマトグラフィーした。
２.５l〜３.０lの溶出液を減圧下で約２００mlまで濃縮
した。この濃縮液を既述したように、ダイアイオンＨＰ
−２０樹脂を含有するカラムで脱塩した。溶出液を減圧
下で濃縮し、凍結乾燥するとかなり精製された因子Ｄ１
９３mgが得られた。

【００７１】同様の操作を行なって得た粗因子Ｄ２５９
mgを、水:アセトニトリル:２塩基性リン酸ナトリウム
(８２:１８:０.０３Ｍ、リン酸でpＨ７.８に調節したも
の)からなる溶媒６mlに溶解し、５ＮＮaＯＨ水溶液を加
えてpＨ１０に調節した。この溶液を、２５〜４０のＬi
Ｃhroprep ＲＰ−８を充填した２.８×５９cmのＭiche
l−Ｍillerガラスカラムに入れ、ＦＭＩポンプを用い
て、試料を溶解するのに用いたものと同じ溶媒で、４ml
／分の速度で溶出した。溶出液はＩＳＣＯモデルＵＡ−
５ＵＶ検出器を用いて２５４nmでモニターした。集めた
２７mlのフラクションを、１０ミクロンのＮucleosil
Ｃ₁₈を充填した４.６×１５０mmのステンレススチール
カラムを用いた分析用ＨＰＬＣにより、因子Ｄの存在を
分析した。試料はレオダインモデル７１２０インジェク
ションバルブを使って注入した。プレパラティブ溶出液
に使用したのと同じ溶媒を、ミルトン・ロイ・ジュプレ
ックス・ミニポンプを用いて０.６ml／分で供給した。
因子Ｄは、ＩＳＣＯモデル１８００可変波長ＵＶ検出器
により２２５nmで検出した。４０５〜１１３４mlの溶出
液を減圧下で５００mlまで濃縮し、既述したように、ダ
イアイオンＨＰ−２０樹脂を含有するカラムで脱塩し
た。溶出液を減圧下で濃縮し凍結乾燥すると因子Ｄ１２
０mgが得られた。

【００７２】抗生物質Ａ４１０３０因子Ｄは白色の無晶
形固体であり、おおよその元素分析値は以下の通りであ
る:炭素５４.４６％、水素４.３５％、窒素７.５８％、
塩素４.２７％、酸素２９.３４％(差から)。６６％ジメ
チルホルムアミド水溶液中で因子Ｄを電気滴定した結
果、約５.５および７.６のpＫa値を有する２つの滴定可
能基が存在することが解った(さらに１０以上のpＫa値
を有するものが存在する可能性がある、初期pＨ６.８
３)。高速原子衝撃マススペクトルによる分子量は約１
３２６であった。

【００７３】ＫＢr法により測定した抗生物質Ａ４１０
３０因子Ｄの赤外吸収スペクトルを図４に示す。以下の
顕著な吸収極大が観察された:３４４８〜３２２６(強、
ブロード)、２９５９(弱)、１６６１(強)、１５９２
(強)、１５１１(強)、１４２９(弱)、１２９０(弱)、１
２２７(弱)、１２１２(中)、１１６３(弱)、１１４３
(弱)、１０５３(中)、および１０１０(強)cm^-1。

【００７４】中性、酸性および塩基性のメタノール:水
(１:１)混液中で測定した紫外線吸収極大値を表１０に
示す。抗生物質Ａ４１０３０因子Ｄは因子Ａと同じ溶媒
に可溶である。

【００７５】観察された物理化学的データーに基づくＡ
４１０３０因子Ｄの構造を以下に示す:

【化４】

【００７６】実施例７ Ａ４１０３０因子Ｅの単離 Ａ４１０３０複合体０.３gを水:アセトニトリル:塩化ナ
トリウム(８５:１５:２g／l)からなる溶媒３０mlに溶解
し、２５〜４０ミクロンのＬi Ｃhroprer ＲＰ−８を本
発明者らの研究室で充填した２.８×５９cmのＭichel−
Ｍillerガラスカラムに充填した。ＦＭＩポンプを用い
て、試料を溶解するのに用いたものと同じ溶媒系で、１
２ml／分(８５psi)で溶出し、２４mlのフラクションを
集めた。溶出液はＩＳＣＯモデルＵＡ−５ＵＶ検出器を
用い、２５４nmでモニターした。フラクション１〜５４
は捨てた。因子Ｄに富んだフラクション５５〜１２２を
合せ、減圧下で５０mlまで濃縮した。同様の精製を１３
回行なって得た濃縮液を水で希釈して１.５lとし、予め
水で平衡化したカラム(２.８×２２cm)中の１００mlの
ダイアイオンＨＰ−２０樹脂に５ml／分の速度で入れ
た。塩化銀沈澱法により洗液中に塩素が検出されなくな
るまで水９００mlでカラムを洗浄した。次いで水とメタ
ノール(１:１)の混液で、１０ml／分の速度で溶出し、
３００mlのフラクションを集めた。フラクションはＢac
illus subtilisに対する活性について分析した。フラ
クション１〜８を集め、減圧下で濃縮し、凍結乾燥する
と因子Ｅに富んだ因子群混合物１.０４gが得られた。こ
の混合物０.５gを、水:アセトニトリル:塩化ナトリウム
(８４:１４:２g／l)からなる溶媒１０mlに溶解し、２５
〜４０ミクロンのＬi Ｃhroprer ＲＰ−８を充填した
２.８×５９cmのＭichel−Ｍillerガラスカラムに充填
した。ＦＭＩポンプを用いて、試料を溶解するのに使用
したものと同じ溶媒で、５ml／分の速度で溶出を行な
い、２５mlのフラクションを集めた。溶出液は、ＩＳＣ
ＯモデルＵＡ−５ＵＶ検出器を用いて２５４nmでモニタ
ーした。集めたフラクションにつき、５ミクロンのＯＤ
Ｓ−Ｈyperspheres(Ｓhandon Ｓouthern Ｐrodcts,Ｌ
td.,Ｃheshire,Ｅngland)を本発明者らの研究室で充填
した４.６×１５０mmのステンレススチールカラムを用
いた分析用ＨＰＬＣにより因子Ｅの存在を分析した。試
料はレオダインモデル７１２０インジェクションバルブ
を用いて注入した。水:アセトニトリル:酢酸ナトリウム
(８１:１９:２g／l)からなる、氷酢酸でpＨ６に調節し
た溶媒をミルトン・ロイ・ジュプレックス・ミニポンプ
を用いて０.６５ml／分で注入した。因子ＥはＩＳＣＯ
モデル１８００可変波長ＵＶ検出器を使って２２５nmで
検出した。１５２０mlから１７８０mlの溶出液を減圧下
で５０mlに濃縮した。

【００７７】同様の精製を３回行なって得た濃縮液を合
せ、水で１lに希釈し、予め水で平衡化したカラム(２.
８×２２cm)中の１００mlのダイアイオンＨＰ−２０樹
脂に、１０ml／分の速度で入れた。このカラムを、蟻酸
水溶液でpＨ２.５に調節した水２００mlで、塩化銀沈澱
法により洗液中に塩素が検出されなくなるまで洗浄し
た。次いで水とアセトニトリル(６:４)の混液０.５lを
用い、１５ml／分の速度で溶出した。溶出液を減圧下で
濃縮し凍結乾燥するかなり精製された因子Ｅ２０２.２m
gが得られた。これを水:アセトニトリル:塩化ナトリウ
ム(８６:１４:２g／l)からなる溶媒４mlに溶解し、既述
した２５〜４０ミクロンのＬi ＣhroprerＲＰ−８を充
填した２.８×５９cmのＭichel−Ｍillerガラスカラム
で４ml／分の割合いでクロマトグラフィーした。因子Ｅ
に富んだ２０６０mlから２４８０mlの溶出液を減圧下で
５０mlに濃縮した。同様の精製を３回行なって得た濃縮
液を合せ、既述したように、カラムに入れた１００mlの
ダイアイオンＨＰ−２０樹脂により脱塩した。溶出液を
減圧下で濃縮し凍結乾燥すると因子Ｅ２４２mgが得られ
た。

【００７８】抗生物質Ａ４１０３０因子Ｅは白色固体で
あり、以下に示すおおよその元素分析値を有する:炭素
５６.０６％、水素４.０６％、窒素８.５３％、塩素３.
５０％、酸素２７.８５％(差から)。６６％のジメチル
ホルムアミド水溶液中で因子Ｅを電気滴定した結果、約
５.８および７.７のpＫa値を有する２つの滴定可能基が
あることが解った(さらに１０以上のpＫa値を有するも
のが存在する可能性がある、初期pＨ６.５７)。高速原
子衝撃マススペクトルにより観察された分子量は約１１
６３である。因子Ｅの実験式はＣ₅₈Ｈ₄₆ＣlＮ₇Ｏ₁₈であ
る。抗生物質Ａ４１０３０因子ＥをＫＢr法により測定
した赤外吸収スペクトルを図５に示す。以下の顕著な吸
収極大が観察された:３４４８〜３２２６(強、ブロー
ド)、１６５３(強)、１６００(中)、１５０４(強)、１
４２９(弱)、１２９０(弱)、１１９８(中)、１１３６
(弱)、１０６４(弱)および１０１０(強)cm^-1。中性、酸
性および塩基性のメタノール:水(１:１)混液中のＡ４１
０３０因子Ｅの紫外線吸収極大値を表１０に示す。抗生
物質Ａ４１０３０因子Ｅは、因子Ａの場合と同じ溶媒に
可溶である。

【００７９】観察された物理化学的データーに基づくＡ
４１０３０因子Ｅの構造式は以下の通りである：

【化５】

【００８０】実施例８ Ａ４１０３０因子Ｆの単離 Ａ４１０３０複合体９．０gを水:アセトニトリル:塩化
ナトリウム(８３:１７:２g／l)からなる溶媒２００mlに
溶解し、得られた溶液を濾過した。この濾液を、実施例
３の方法で本発明者らの研究室において調製した１０〜
２０ミクロンのＬＰ−１／Ｃ₁₈逆相シリカゲル４lを充
填した８×１００cmのステンレススチールカラムに入れ
た。Ｃhromatospac Ｐrep−１００ユニットの部品であ
るこのカラムを、試料を溶解するのに使用したものと同
じ溶媒系を用い、６０ml／分で溶出して４８０mlのフラ
クションを集めた。溶出液はＩＳＣＯモデルＵＡ−５Ｕ
Ｖ検出器を用いて２５４nmでモニターした。集めたフラ
クションにつき、２５〜４０ミクロンのＬi Ｃhroprer
ＲＰ−８を充填した。０.８×３０cmのＭichel−Ｍille
rガラスカラムを用いた分析用ＨＰＬＰＬＣにより因子
Ｆの存在を分析した。水:アセトニトリル:塩化ナトリウ
ム(８４:１６:２g／l)からなる溶媒をＦＭＩポンプによ
り４ml／分の割合いで注入した。因子ＦはＩＳＣＯモデ
ルＵＡ−５ＵＶ検出器を用いて２５４nmで検出した。フ
ラクション１〜２５は捨て、因子Ｆに富んだフラクショ
ン２６〜３６を集めて減圧下で約５００mlまで濃縮し
た。

【００８１】同様の精製を３回行なって得た濃縮液を集
めて濾過し、この濾液を、予め水で平衡化したダイアイ
オンＨＰ−２０樹脂１００mlを入れたカラム(２.８×２
２cm)に１０ml／分の割合いで充填した。このカラムを
塩化銀沈澱法により洗液中に塩素が検出されなくなるま
で水９００mlで洗浄した。次いで水とアセトニトリル
(６:４)の混液１lを用い１５ml／分の速度で溶出を行な
った。溶出液を減圧下で濃縮して凍結乾燥するとかなり
精製された因子Ｆ２.６gが得られた。この生成物５００
mgを水:アセトニトリル:塩化ナトリウム(８４:１６:２g
／l)からなる溶媒１０mlに、水酸化ナトリウム水溶液で
pＨ７.０に調節しながら溶解した。この溶液を、２５〜
４０ミクロンのＬi Ｃhroprer ＲＰ−８を充填した４.
７×４５cmのＭichel−Ｍillerガラスカラムに注入し
た。ＦＭＩポンプを使って、試料を溶解するのに用いた
ものと同じ溶媒で、６ml／分の速度で溶出を行ない、２
４mlのフラクションを集めた。溶出液をＩＳＣＯモデル
ＵＡ−５ＵＶ検出器を用いて２５４nmでモニターした。
集めたフラクションにつき、既述した分析用ＨＰＬＰＬ
Ｃ系を用いて因子Ｆの存在を分析した。因子Ｆに富んだ
１９４０ml〜２５２０mlの溶出液を減圧下で約３００ml
まで濃縮した。同様の精製を２回行なって得た濃縮液を
合せ、水で予め平衡化した、カラム(２.８×２２cm)中
の１００mlのダイアイオンＨＰ−２０樹脂に、１０ml／
分の割合いで充填した。カラムを、塩化銀沈澱法により
洗液中に塩素が検出されなくなるまで、蟻酸でpＨ２.５
に調節した水(３００ml)で洗浄した。次いで水とアセト
ニトリル(６:４)の混液０.７５lで溶出を行なった。溶
出液を減圧下で濃縮し、凍結乾燥すると因子Ｆ２９９mg
が得られた。

【００８２】抗生物質Ａ４１０３０因子Ｆは白色の固体
であり、以下に示すおおよその元素分析値を有する:炭
素５１.３９％、水素３.９６％、塩素６.４５％、窒素
６.４５、酸素２８.６５％。６６％のジメチルホルムア
ミド水溶液中、因子Ｆを電気滴定した結果約５.４およ
び７.１のpＫa値を有する２つの滴定可能基の存在が確
認された(さらに１０以上のpＫa値を有するものが存在
する可能性がある、初期pＨ５.９３)。高速原子衝撃マ
ススペクトルを使って観察された分子量は約１５５５で
あった。因子Ｆの仮実験式はＣ₇₀Ｈ₆₄Ｃl₃Ｎ₇Ｏ₂₈であ
る。

【００８３】この分子量から、因子Ｆは因子Ａと２個の
糖部分が付加している点で異っており、分子量が奇数で
あることからアミノ糖が存在していないことが解る。

【００８４】ＫＢr法で測定した抗生物質Ａ４１０３０
因子Ｆの赤外吸収スペクトルを図６に示す。以下の顕著
な吸収極大が観察された:３４４８〜３２２６(強、ブロ
ード)、１６５３(強)、１６００(中)、１５０４(強)、
１４２９(弱)、１２５８(弱)、１２２７(強)、１１３６
(強)、１０７５(強)、１０５３(強)、および１０１０
(強)cm^-1。中性、酸性および塩基性のメタノール:水
(１:１)混液中のＡ４１０３０因子Ｆの紫外線吸収極大
値を表１０に示す。

【００８５】抗生物質Ａ４１０３０因子Ｆは因子Ａと同
じ溶媒に可溶である。

【００８６】観察された物理化学的データーに基づくＡ
４１０３０因子Ｆの構造式は以下の通りである:

【化６】

【００８７】実施例９ Ａ４１０３０因子Ｇの単離 実施例２で得たＡ４１０３０複合体８gを水:アセトニト
リル:塩化ナトリウム(８４:１６:２g／l)からなる溶媒
２００mlに溶解して濾過した。この濾液を、実施例３に
記載した方法で本発明者らの研究所で調製した１０〜２
０ミクロンのＬＰ−１／Ｃ₁₈逆相シリカゲル４lを充填
したステンレススチールカラム(８×１００cm)に充填し
た。このカラムはＣhromatospac Ｐrep−１００ユニッ
トの部品である(実施例３参照)。カラムを、水:アセト
ニトリル:塩化ナトリウム(８４:１６:２g／l)の混液
で、６０ml／分の速度で溶出し、４８０mlのフラクショ
ンを集めた。溶出液は実施例３に記載したように２５４
nmでモニターした。集めたフラクションにつき、既述し
た高速液体クロマトグラフィー(ＨＰＬＣ)分析法により
因子Ｇの存在を分析法した。

【００８８】因子Ｇに富むフラクション２２〜３５を集
め減圧下で５００mlに濃縮した。同様の精製を３回行な
って得た濃縮液を合せ、水酸化ナトリウム水溶液でpＨ
８.５に調節し濾過した。この濾液を、予め水で平衡化
したカラム(２.８×２２cm)中のダイアイオンＨＰ−２
０樹脂１００mlに１０ml／分の速度で充填した。塩化銀
沈澱法により洗液中に塩素が検出されなくなるまで水
(４００ml、蟻酸でpＨ２.５に調節したもの)でカラムを
洗浄した。次いで水:アセトニトリル(６:４)の混液を用
い１５ml／分の速度で溶出し、１lのフラクションを集
めた。このフラクションのＢacillus subtilisに対す
る活性を分析した。活性を有するフラクションを集め、
減圧下で濃縮し凍結乾燥すると生成物２.８５gが得られ
た。

【００８９】この生成物０.５gを水:アセトニトリル:ジ
ブチルアミン(８０:２０:０.０３Ｍ、リン酸でpＨ７.８
に調節したもの)からなる溶媒１０mlに、溶液となるま
でジブチルアミンを加えることにより溶解した(最終pＨ
８.２)。この溶液を、２５〜４０ミクロンのＬi Ｃhrop
rep ＲＰ−８(ＭＣ／Ｂ Ｍamufacturing Ｃhemists,
Ｉnc.,Ｃincinnati,ＯＨ)を充填した２.８×５９cmのＭ
ichel−Ｍiller(ＨＰＬＰＬＣ)ガラスカラムに充填し
た。

【００９０】ＦＭＩポンプを用い、試料を溶解するのに
使ったものと同じ溶媒で４ml／分の速度で溶出を行なっ
た。溶出液はＩＳＣＯモデルＵＡ−５ＵＶ検出器を使っ
て２５４nmでモニターした。集めた１０mlのフラクショ
ンにつき、既述したＨＰＬＣ分析法により因子Ｇの存在
を分析した。

【００９１】因子Ｇに富んだフラクション５４〜７４
を、同様の精製を行なって得たフラクションと合せ、予
め水で平衡化したカラム(２.８×２２cm)中のダイアイ
オンＨＰ−２０樹脂１００mlに１０ml／分の速度で充填
した。蟻酸でpＨ２.５に調節した水３００mlで、塩化銀
沈澱法により洗液中に塩素が検出されなくなるまでカラ
ムを洗浄した。水:アセトニトリル(６:４)の混液０.７
５lで溶出を行なった。溶出液を減圧下で濃縮し凍結乾
燥すると因子Ｇ９６０mgが得られた。

【００９２】抗生物質Ａ４１０３０因子Ｇは白色の固体
であり以下に示すおおよその元素分析値を有する:炭素
５０.０２％、水素４.６１％、塩素４.７４％、窒素６.
１１、酸素３０.７０％。６６％のジメチルホルムアミ
ド水溶液中で因子Ｇを電気滴定した結果、約５.４およ
び７.０のpＫa値を有する滴定可能基が存在することが
解った(さらに１０.５以上のpＫa値を有するものの存在
する可能性がある、初期pＨ６.３２)。高速原子衝撃マ
ススペクトルにより観察された分子量は約１６８４であ
った。

【００９３】ＫＢr法により測定した抗生物質Ａ４１０
３０因子Ｇの赤外吸収スペクトルを図７に示す。以下の
顕著な吸収極大が観察された:３３２０(強、極めてブロ
ード)、２９７５(弱、シャープ)、２９２０(弱、シャー
プ)、１６５９(強、ノーマル)、１５９４(強、ブロー
ド)、１５１２(強、シャープ)、１４９２(肩)、１４３
０(弱、シャープ)、１３８６(弱、ブロード)、１３３７
(弱、ブロード)、１３０８(弱、シャープ)、１２６４
(弱、シャープ)、１２３０(中、ブロード)、１１４５
(中、ブロード)、１０７７(中、シャープ)、１０６２
(中、シャープ)、１０１４(中、シャープ)、および８４
６(中、ブロード)cm^-1。

【００９４】中性、酸性および塩基性のメタノール:水
(１:１)の混液中のＡ４１０３０因子Ｇの紫外線吸収極
大値を表１０に示す。

【００９５】抗生物質Ａ４１０３０因子Ｇは、因子Ａと
同じ溶媒に可溶である。

【００９６】Ａ４１０３０複合体の因子Ａ、Ｂ、Ｃ、
Ｄ、Ｅ、ＦおよびＧは、シリカゲル薄層クロマトグラフ
ィー(ＴＬＣ)およびペーパークロマトグラフィーによ
り、互いに分離し区別することができる。バイオオート
グラフィーに使用する微生物は、バチルス・スブチリス
(Ｂ.subtilis)であった。Ａ４１０３０因子Ａの移動値
を１.００とした時の移動率(Ｒx)を表１１に示す。

【表１１】 Ａ系 ペーパー:ワットマンＮo.１(非処理) 溶媒:水飽和ブタノール:メタノール(１:１) Ｂ系 吸着剤:メルク・ダルムシュタット・シリカゲル６０ 溶媒:アセトニトリル:エタノール:水(８:１:１.５）

【００９７】１０μのリクロソルブ（Ｌichrosorb)ＲＰ
−１８の充填したステンレスカラムおよび蟻酸でpＨ２.
５に調節した水:アセトニトリル:ジブチルアミン(８２:
１８:０.０３Ｍ)からなる溶媒を用いて、Ａ４１０３０
因子ＡないしＧの高速液体クロマトグラフィー(ＨＰＬ
Ｃ)保持時間を測定した。溶媒は０.７５ml／分の流速で
注入した。溶出液は２２５nmにおけるＵＶ吸収によりモ
ニターした。Ａ４１０３０因子Ａに対する各因子の保持
時間の比、即ち、相対的保持値を表１２に示す。

【表１２】 因 子 cm. 分 相対的保持値 Ａ ６.４ １９.２ １.００ Ｂ ４.１ １２.３ ０.６４ Ｃ ５.４ １６.２ ０.８４ Ｄ ３.８ １１.４ ０.５９ Ｅ ２.７ ８.１ ０.４２ Ｆ ４.５ １３.５ ０.７０ Ｇ ４.５ １３.５ ０.７０

【００９８】抗生物質Ａ４１０３０の因子群は両性、即
ち、アミノ基とカルボキシル基の両者を含んでいるの
で、適当な酸および塩基と塩類を形成することができ
る。「薬学的に許容し得る」塩類とは、温血動物の化学療
法に使用し得る塩類を言う。Ａ４１０３０因子Ａ、Ｂ、
Ｃ、Ｄ、Ｅ、ＦおよびＧの代表的な、かつ好適な塩類と
しては、例えば硫酸、りん酸、塩酸、酢酸、琥珀酸、く
えん酸、乳酸、マレイン酸、フマル酸、パルミチン酸、
コール酸、パモイック酸、ムチン酸、Ｄ−グルタミン
酸、d−樟脳酸、グルタル酸、グリコール酸、フタール
酸、酒石酸、ラウリン酸、ステアリン酸、サルチル酸、
メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ソルビン酸、
ピクリン酸、安息香酸、けいひ酸、等の有機および無機
酸との標準的な反応によって形成される酸付加塩、およ
び水酸化ナトリウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、
水酸化カルシウム、水酸化カリウム、トリメチルアミ
ン、水酸化アンモニウム、ジエタノールにより濁度分析
を行なった。Ａ４１０３０複合体の試験では、以下の試
験パラメーターを用いた:スタフィロコッカス・アウレ
ウスＡＴＣＣ９１４４(栄養ブロス培地(pＨ７)、３７℃
で４時間インキュベート)。被験試料および標品をメタ
ノールと水(１:１)の混液に溶解した。標品、Ａ４１０
３０因子Ａを０.４、０.６、０.９、１.２および１.５m
cg／mlの濃度でＡutoturb^R回転体(carousel)に入れた。

【００９９】上記の濃縮物１mlを、ＨＰＬＣ分析に使用
される以下の手法で精製した。 (a)Ｃ−１８ＳＥＰ−ＰＡＫ^R，カートリッジ(シリカゲ
ルカートリッジ、Ｗaters Ａssociates,Ｉnc.,Ｍilfor
d,Ｍass.)を当業者にはよく知られているＬuerフィッテ
ィングを備えた１０mlのシリンジを使って、メタノール
１０mlで洗浄した。 (b)同じカートリッジを水１０mlで洗浄する。 (c)約１ml／分で、カートリッジで上記の濃縮物１mlを
適用する。 (d)水１mlでカートリッジを洗浄し、吹いてカートリッ
ジを乾燥する。 (e)テトラヒドロフランと水(１:１溶液)１mlでカートリ
ッジを約０.５ml／分で溶出する。 (f)溶出液から減圧あるいは窒素雰囲気下でテトラヒド
ロフランを除去し、その溶出物に水を加えて１mlとす
る。 (g)この溶液を既述したＨＰＬＣ法により分析する。

【０１００】全ブロスのＨＰＬＣ分析および生物活性の
検定の結果を表１３に示す。

【表１３】 全ブロス中のＡ４１０３０Ａの生物活性およびＨＰＬＣ分析 Ａ41031Ａ 活性物(注2) Ａ41030Ａ Ａ41030Ａ試料Ｎo. 重量 の濃度(注1) の全重量 の全重量 の％(注1) １ １０６.８kg ４.４２mg/g ４９１g ４７２g ９６.１ ２ １４６.５kg １０.８mg/g １６８５g １５８２g ９３.９ 注１) ＨＰＬＣで測定 注２) Ａ４１０３０因子Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆおよび
Ｇからなる全生物活性

【０１０１】寒天希釈分析法 ＭＩＣ値を測定するためにＩnternational Ｃollabora
tive Ｓtudy(ＩＣＳ)グループによって記載された寒天
希釈分析法を使用した。寒天希釈分析法による抗生物質
Ａ４１０３０因子Ａについての試験結果を表１４に示
す。

【表１４】 Ａ４１０３０因子Ａの活性 被 験 微 生 物 (μg／ml) Ｓtaphylococcus aureus ３０５５ ※ ＜０.５ Ｓtaphylococcus aureus ３０７４ ※※ ＜０.５ Ｓtreptococcus faecalis Ｘ６６ ＜０.５ ※ ベンジルペニシリン感受性 ※※ ベンジルペニシリン耐性

【０１０２】ディスクプレート感受性法 被験微生物とともにインキュベートした寒天平板を使用
した;６mmのディスク(０.０２ml容量)を抗生物質溶液の
log ２希釈液で飽和した。ディスク含量は使用した溶液
濃度の１／５または１／５０であった。即ち、５００mg
／ml濃度の溶液からディスク含量１００mgまたは１０mg
を得た。個々のディスク含量におけるＡ４１０３０因子
Ａ抗生物質による阻止帯のサイズを表１５に示す。

【表１５】 Ａ４１０３０因子Ａの活性 阻止帯の直径(mm) 被 験 微 生 物 (μg／ディスク) １００ １０ Ｓtaphylococcus aureus ３０５５ ※ ２０.８ １７.２ Ｓtaphylococcus aureus ３０７４ ※※ １９.８ １６.７ Ｓtaphylococcus aureus ３１３０ ※※※ ２１.４ １７.４ Ｓtreptococcus pyogenes Ｃ２０３ １５.０ １２.０ Ｓtreptococcus sp.(グループＤ)９９６０ ２０.５ １６.４ Ｓtreptococcus pneumoniae Ｐark Ｉ １７.０ １５.０ Ｅscherichia coli ＥＣ１４ ８.０ ０ ※ ベンジルペニシリン感受性 ※※ ベンジルペニシリン耐性 ※※※ ベンジルペニシリン耐性、メチシリン耐性

【０１０３】抗生物質Ａ４１０３０因子Ａは、寒天稀釈
法によりヘモフィルス・インフルエンザエ(Ｈemophilus
influenzae)の多くの株に対して活性を有することが
わかった。試験結果を表１６に示す。

【表１６】 Ｈemophilus influenzae株に対するＡ４１０３０因子Ａの活性 Ｈemophilus influenzae ＭＩＣ (μg／ml) Ｒ２５１ １６ Ｒ２５９ １６ Ｒ２７２ １６ Ｒ２７４ １６ ４８４２ ８ ７５−９０３８３ １６ Ｐ.Ｗylie １６ Ｇ.Ｎewton ３２ Ｂruno １６ ７５−１９３００ １６ Ｓ.Ｆord １６ Ａ.Ｈall １６ Ｃ.Ｓteele １６ Ｍiller １６ Ｈoward １６ ７５−３１２ ８ ７５−３１３ １６ ７５−３６４ １６ ７５−４６５ ３２

【０１０４】抗生物質Ａ４１０３０因子Ａは、寒天稀釈
法によりネイセリヤ・エス・ピー(Ｎeisseria sp.)に
対して活性を有することがわかった。試験結果を表１７
に示す。

【表１７】 Ｎeisseria sp.に対するＡ４１０３０因子Ａの活性 Ｎeisseria sp. ＭＩＣ (μg／ml) Ｌ.Ｎance ４.０ Ｗoods ４.０ Ｓchultz ８.０ Ｍitchell ４.０ Ｓanders １.０

【０１０５】抗生物質Ａ４１０３０因子Ａは、寒天稀釈
法により、各種の細菌に対して活性を有する(表１８参
照)。

【表１８】 種々の細菌に対するＡ４１０３０因子Ａの活性 細 菌 ＭＩＣ (μg／ml) Ｓtaphylococcus aureus ３０５５ ０.１３ ３０７４ ※ ＜ ０.０６ ３１３１ ※※ ＜ ０.０６ ３１３４ ※※ ＜ ０.０６ Ｈ４３ ※ ＜ ０.０６ Ｖ５７ ※ ＜ ０.０６ Ｈ２９０ ＜ ０.０６ Ｓtreptococcus pyogenes Ｃ２０３ ０.２５ ９９４３ ０.２５ １０３８９ ０.２５ １２３４４ ０.５ Ｍ−６５１７ ０.２５ Ｓtreptococcus pneumoniae Ｐark Ｉ ０.２５ Ｔype １４ ０.２５ ２７６４ ０.２５ ６３０１ ０.２５ ＢＩ−３４３ ０.２５ Ｓtaphylococcus epidermidis Ｌitton ０.１３ Ｍencher ＜ ０.０６ Ｂritton ０.１３ Ｍobley ＜ ０.０６ Ｖiridans streptococcus ＳＭ−１１３４ ０.５ ＳＳＩ−９１０ ０.２５ ＳＳＩＩ−８９５ ０.２５ Ｓtreptococcus sp.(グループＤ) ２３８ ０.２５ ２８２ ０.２５ ９９０１ ０.２５ １２２５３Ｆ ０.２５ Ｇuze ０.２５ Ｓhigella flexneri ＳＨ−３ １２８ ＳＨ−４ ６４ ※ ペニシリン耐性 ※※ ペニシリン、メチシリンおよびエリスロマイシン
耐性

【０１０６】Ａ４１０３０抗生物質群、因子Ａ、Ｂおよ
びＣはバクテリオイデス・エス・ピー(Ｂacteroides s
p.)と命名される嫌気性細菌族に対して活性を有する。
寒天稀釈法による２４時間のＭＩＣ値を表１９に示す。

【表１９】 Ｂacteroides sp.に対するＡ４１０３０因子群の活性 ＭＩＣ (μg／ml) 被 験 微 生 物 Ａ Ｂ Ｃ Ｂ.fragilis １８７７ ３２ ３２ ３２ Ｂ.fragilis １０３ ３２ ３２ ３２ Ｂ.fragilis １０４ ３２ ３２ ３２ Ｂ.fragilis １０６ ６４ ３２ ３２ Ｂ.fragilis １０７ ３２ ３２ ３２ Ｂ.fragilis １０８ ３２ ３２ ６４ Ｂ.fragilis １１０ ６４ ６４ ６４ Ｂ.fragilis １１１ ３２ ３２ ３２ Ｂ.fragilis １１２ ６４ ３２ ３２ Ｂ.fragilis １１３ ３２ ３２ ３２ Ｂ.fragilis １４５１ ６４ ６４ ６４ Ｂ.fragilis １４７０ ６４ ６４ ６４ Ｂ.fragilis ２ ６４ ３２ ３２ Ｂ.fragilis ９ ６４ ３２ ３２ Ｂ.fragilis ９０３２ ６４ ３２ ３２ Ｂ.corrodens １８７４ ３２ ３２ ３２ Ｂ.vulgatis １５６３ ３２ ３２ ３２ Ｂ.thetaiotaomicron １４３８ ６４ ３２ ３２ Ｂ.thetaiotaomicron １９００Ａ １２８ １２８ １２８

【０１０７】抗生物質Ａ４１０３０因子Ａ、ＢおよびＣ
はまた、プロピオニバクテリウム・アクネス(Ｐropioni
bacterium acnes)と命名される嫌気性細菌群に対して
活性を有することがわかった。２４時間の寒天稀釈法に
よるＭＩＣ値を表２０に示す。

【表２０】 Ｐropionibacterium acnesに対するＡ４１０３０因子群の活性 ＭＩＣ (μg／ml) Ｐ.acnes株 Ａ Ｂ Ｃ ４４ ０.１２５ ０.０６ ０.１２５ ７９ ０.１２５ ０.０６ ０.１２５ １０１ ０.１２５ ０.０６ ０.１２５ １０３ ０.１２５ ０.０６ ０.１２５ １０４ ０.２５ ０.２５ ０.２５ １０５ ０.１２５ ０.０６ ０.１２５ １０６ ０.１２５ ０.０６ ０.１２５ １０７ ０.０６ ０.０６ ０.１２５ ５２９２ ０.０６ ０.０６ ０.０６ ５１７０ ＜ ０.０３ ＜ ０.０３ ＜ ０.０３ ５１７６ ＜ ０.０３ ０.０６ ＜ ０.０３ ５１８７ ＜ ０.０３ ０.０６ ０.０６ ５１９１ ０.１２５ ０.０６ ０.１２５ ５１９７ ＜ ０.０３ ０.０６ ＜ ０.０３ ５２２６ ０.５ ０.５ ０.１２５ ５２２７ ＜ ０.０３ ０.０６ ０.０６ ５２２８ １.０ ０.５ １.０ ５２２９ ０.５ ０.２５ ０.５ ５２４６ ０.０６ ０.１２５ ０.０６

【０１０８】抗生物質Ａ４１０３０因子Ａ、Ｂ、Ｃ、
Ｄ、Ｅ、ＦおよびＧは、多くの嫌気性細菌に対して活性
を有することがわかった。寒天稀釈法によって測定した
ＭＩＣ値を表２１に示す。

【表２１】

【０１０９】抗生物質Ａ４１０３０因子Ａ、ＢおよびＣ
はヘプトコッカス(Ｐeptococcus)およびペプトストレプ
トコッカス(Ｐeptostreptococcus)と呼ばれる２つの属
の各種の嫌気性球菌に対して活性を有する。寒天稀釈法
により測定したＭＩＣ値を表２２に示す。

【表２２】

【０１１０】Ａ４１０３０抗生物質因子Ａ、Ｂ、Ｃ、
Ｄ、Ｅ、ＦおよびＧはまた、クロストリディウム・ディ
フィシレ(Ｃlostridium difficile)の多くの株に対し
て活性を有する。寒天稀釈法により試験した結果を表２
３に示す。

【表２３】

【０１１１】抗生物質Ａ４１０３０因子Ａ、Ｂ、Ｃ、
Ｄ、Ｅ、ＦおよびＧの種々の好気性細菌に対するインビ
トロにおける活性を標準的な寒天稀釈法により測定し
た。２４時間後の終点の読みの結果を表２４および２５
に示す。

【表２４】

【表２５】

【０１１２】抗生物質Ａ４１０３０因子ＡおよびＢのス
トレプトコッカス・エス・ピー(Ｓtreptococcus sp.)
・グループＤを含む代表的な好気性グラム陽性菌に対す
る活性を標準的な寒天稀釈法により測定した。２４時間
後の終点の読みの結果を表２６に示す。

【表２６】 好気性細菌に対するＡ４１０３０因子ＡおよびＢの活性 ＭＩＣ (μg／ml) 被 験 微 生 物 Ａ Ｂ Ｓtaphylococcus aureus ３０５５ ０.０６ ０.０６ Ｘ４００ ０.１２５ ０.１２５ Ｖ１３８ ０.０６ ０.０６ Ｖ１４０ ０.１２５ ０.１２５ Ｖ１０２ ０.１２５ ０.１２５ Ｓtaphylococcus epidermidis ２２２ ０.１２５ ０.１２５ ２７０ ０.０６ ０.０６ ２８５ ０.０６ ０.０３ ２１９ ０.０６ ０.０３ ２６９ ０.０６ ０.０３ Ｓtreptococcus pyrogenes Ｃ203 ０.２５ ０.１２５ Ｓtreptococcus sp.ＡＴＣＣ 10389 ０.１２５ ０.２５ Ｓtreptococcus sp.グループ Ｂ ５ １ １ １４ ０.０６ ０.１２５ Ｓtreptococcus sp.グループ Ｄ Ｘ６６ ０.２５ ０.２５ ９９６０ ０.５ ０.５ ２０４１ ０.５ ０.５ ８０４３ ０.２５ ０.２５ ９９０１ １ １ １２２５３Ｆ ０.２５ ０.５ Ｍx１６１ ０.２５ ０.２５ ２０５８ ０.５ ０.５ Ｓtreptococcus pneumoniae Ｐark Ｉ ０.１２５ ０.１２５ Ｓtreptococcus pneumoniae Ｂ1-438 ０.２５ ０.５ Ｈaemophilus parainfluenzae 7901 １６ １６ Ｈaemophilus parainfluenzae 9796 １６ １６ Ｈaemophilus influenzae Ｃ.Ｌ. ４ ８ Ｍx３６６ ２ ４ Ｍx３７１ ２ ４ ７６ ４ ４ Ｂond ２ ４ １６８３６ ４ ４ ４８４２ ２ ４ ３１２ ２ ４

【０１１３】抗生物質Ａ４１０３０複合体の多くの動物
病原体に対する活性を、標準的なインビトロにおける抗
微生物ブロス微量滴定試験により測定した。結果を表２
７に示す。

【表２７】 動物病原菌に対するＡ４１０３０複合体の活性 被 験 微 生 物 ＭＩＣ (μg／ml) Ｓtaphylococcus sp.１１３０ ＜ ０.７８ Ｓtreptococcus sp.８０ ＜ ０.７８ Ｐasteurella multocida (牛科動物) ３.１２ Ｐasteurella hemolytica ６.２５ Ｂordetella bronchiseptica (Ｓwitzer) ５０.００ Ｅscherichia coli ５０.００ Ｍycoplasma synoviae ５０.００ Ｍycoplasma hyorhinis ５０.００ Ｐseudomonas−魚 ＜ ０.７８ Ａeromonas liquefaciens ５０.００

【０１１４】試験したＡ４１０３０因子群はすべて、実
験的細菌感染に対し、インビボにおいて抗微生物活性を
示した。代表的な感染症のマウスに、２投与群の試験化
合物を皮下注射し、観察された結果を、ＥＤ₅₀値で表わ
した(ＥＤ₅₀値は被験動物の５０％を保護する量をmg／k
gで表わしたものである。ワレンヴィック(Ｗarrenwick)
ら、Ｊ.Ｂacteriol.,８１、２３３〜２３５頁、１９６
１年参照)。Ａ４１０３０因子Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅおよ
びＦのＥＤ₅₀値を表２８に示す。

【表２８】 Ｓtaph.aureus Ｓ.pyrogenes Ｓ.pneumoniae 抗生物質 ＥＤ₅₀ ＥＤ₅₀ ＥＤ₅₀ Ａ４１０３０Ａ １.４ ２.８ １.６８ Ａ４１０３０Ｂ ＜０.４３ １.４ １.４ Ａ４１０３０Ｃ ＜０.４３ １０.４ ６.７ Ａ４１０３０Ｄ ０.３３９ ３.２４ ２.２１ Ａ４１０３０Ｅ ＜０.３１ ３.５４ ３.１１ Ａ４１０３０Ｆ ＜０.３１ ＞５.０ ＞５.０

【０１１５】抗生物質Ａ４１０３０因子Ａ、Ｂ、および
Ｃの急性毒性をマウスで調べたところ、腹腔内投与にお
いて３００mg／kg以上であった。

【０１１６】抗生物質Ａ４１０３０因子Ａ、ＢおよびＣ
のＬＤ₅₀値をマウスにおいて調べたところ、腹腔内投与
において３００mg／kg以上であった。

【０１１７】抗生物質Ａ４１０３０因子Ａ、ＢおよびＣ
のインビボにおける経口活性を、マウスにおけるエス・
バイオゲネスについて調べたところ３００mg／kg×２以
上であった。

【０１１８】本発明の微生物が産生するＡ４１０３０抗
生物質複合体またはその因子あるいはその薬学的に許容
し得る塩類の化学療法的な有効量、例えば約２５mg〜約
２０００mgを温血動物に投与することにより該動物の感
染症の治療方法が提供される。

【０１１９】因子Ａまたはその薬学的に許容し得る塩は
ヒトの感染症の治療にも使用することができるが、一般
に本発明の微生物が産生する複合体および他の因子群あ
るいはその塩類はヒト以外の温血動物の感染症を治療す
るのに最も適している。

【０１２０】ヒトの感染症を治療するには、この抗生物
質因子、好ましくは因子Ａを非経口投与、例えば筋肉内
注射または静脈内注入により投与することができる。注
射する場合は、この抗生物質またはその薬学的に許容し
得る塩を所望の濃度で薬学的に許容し得る希釈剤に溶解
して投与する。好適な希釈剤としては注射用水、０.９
％食塩水、５％デキストロース、リンゲル液、あるいは
その他の通常使用される希釈剤があげられる。静脈注入
するには、抗生物質またはその塩を適当な濃度の生理的
液体あるいは薄い栄養液の溶液にすることができる。例
えば約５％および約１０％の溶液としてゆっくりと注入
する。あるいはこの抗生物質はピギー−バック(piggy−
back)法により投与してもよい。

【０１２１】個々の因子群、それらの組み合せ物または
因子群のすべての複合体およびそれらの薬学的に許容し
得る塩類は、密封バイヤル、滅菌したゴム栓付きバイヤ
ルまたはプラスチック袋内の投与単位製剤に調製するこ
とができる。このような単位投与製剤には、抗酸化剤、
安定化剤、分割剤、緩衝剤等の賦形剤を含ませることが
できる。このような投与単位製剤はゴム(ブチルゴム)で
栓をしたバイヤル中に因子Ａまたはその薬学的に許容し
得る塩１００mgを含有している。また、別の投与単位製
剤は滅菌密封バイヤル中、因子Ａまたはその塩２５０mg
を含有している。静脈注入用の単位投与製剤は因子Ａま
たは薬学的に許容し得る塩５gをプラスチック袋中に含
有しているものである。

【０１２２】Ａ４１０３０複合体またはＡ４１０３０因
子を抗菌剤として使用する場合は、経口または非経口投
与することができる。当業者にとっては周知のことであ
るが、Ａ４１０３０複合体またはその因子は通常薬学的
に許容し得る単体または希釈剤とともに投与される。Ａ
４１０３０複合体または因子の投与量は個々の感染症の
性質または重篤度のような種々の因子に応じて変わる。
投与のための適当な投与範囲および／または単位投与量
は、ＭＩＣ値およびＥＤ₅₀値および毒性データーならび
に患者あるいは宿主ならびに感染微生物の種々の因子に
応じて決めることができる。

【０１２３】Ａ４１０３０抗生物質群は特に、スタフィ
ロコッカス、ストレプトコッカス、およびプロピオニバ
クテリウム・アクネス微生物群の増殖を抑制するのに有
用であり、従って例えば、座瘡の治療に使用することが
できる。Ａ４１０３０の個々の因子群あるいはそれらの
混合物は精製した状態で、イソプロピルアルコールのよ
うな薬学的に許容し得る希釈剤とともに製剤化し、皮膚
に適用することができる。このような溶液の抗生物質濃
度は、約１〜約１５重量／容量％とすることができる。
あるいはまた、これらの抗生物質群は皮膚用のクリーム
またはローションの形に製剤化することもできる。

【０１２４】Ａ４１０３０抗生物質群はまた、腸内にお
いて偽膜性大腸炎(Ｐseudomembranous colitis)の原因
となるクロストディリウム・ディフィサイル(Ｃlostrid
iumdifficile)微生物群の増殖を抑制するのに有用であ
る。Ａ４１０３０因子またはその混合物、あるいはそれ
らの薬学的に許容し得る塩の有効量を薬学的に許容し得
る投与形態に調製し、これを経口投与することにより偽
膜性大腸炎の治療に使用することができる。このような
用途にはこの抗生物質群はゼラチンカプセルまたは液状
懸濁液の形で投与することができる。

【０１２５】本発明に係る抗生物質群はまた、動物用医
薬として家畜および農業用動物の感染症の治療に使用す
ることができる。これらの抗生物質群はさらに、動物農
業の分野で、例えば肉牛およびその他の反芻動物の成長
を促進するのに使用することもできる。本発明の微生物
が産生する抗生物質群の特に価値ある用途は、乳牛のミ
ルク生産を増大させる能力を有する点にある。以下にこ
れらの用途を詳述する。

【０１２６】Ａ４１０３０複合体はインビトロにおいて
４０mcg／mlの濃度で感染症犬肝炎ウイルスに対して活
性を示す。またＡ４１０３０複合体はインビトロにおい
て、２０mcg／mlの濃度で偽狂犬病に対して活性を示し
た。一方Ａ４１０３０因子Ａは、インビトロにおいて、
２０mcg／mlの濃度で偽狂犬病に対して活性を示した。

【０１２７】抗生物質Ａ４１０３０複合体は、ひよこの
成長促進剤としての活性を有する。これについての試験
は以下のごとくして行なった。

【０１２８】試験１ この試験では８日令のペンノブスコットブロイダー(Ｐe
nobscot broiders)のひよこを使用した。全部で５６０
羽のひよこを使用しこれを７羽ずつのグループに分け
た。３５群を対照群として使用し、５群には抗生物質Ａ
４１０３０複合体２０gを飼料１トンに添加した標準的
なひよこ用飼料で処置した。飼料および水は２１日間自
由に摂取させた。２回の反復試験を行なった。活性の評
価基準は以下の通りである:１回または２回の反復試験
において３％の体重増加および／または飼料利用効率の
２％の改善をみたもの。結果を表２９に示す。

【表２９】 濃 度 体重増加 飼料利用効率 処 置 g.／Ｔ gm. 改善(％) Ｆ／Ｇ 改善(％) 対 照 − ４３３ − １.６７１ − Ａ４１０３０ ２０ ４５１ ４.１６ １.６０１ ４.１９ 対 照 − ４５１ − １.６７３ − Ａ４１０３０ ２０ ４６４ ２.８８ １.６５１ １.３２ Ｆ／Ｇ＝全飼料消費量／全体重増加

【０１２９】従って本発明の微生物が産生する抗生物質
は、飼料１トン当り抗生物質Ａ４１０３０因子またはＡ
４１０３０抗生物質複合体あるいはそれらの薬学的に許
容し得る塩約２０〜約３０gを混入して得た飼料をひよ
こに投与することからなる、ひよこの成長促進法を提供
することができる。抗生物質因子または複合体は薬学的
に許容し得る非毒性塩の形でひよこの飲用水に入れて投
与することもできる。

【０１３０】抗生物質Ａ４１０３０はまた、離乳した豚
に投与しても成長促進剤として作用する。この抗生物質
を、種々の投与量で若い豚に投与して試験した。

【０１３１】試験２ 抗生物質Ａ４１０３０複合体を、体重約２１ポンドの豚
(５〜７週令)のえさに５、２０、５０および１００ppm
の濃度となるように混入し、試験した。この実験は豚小
屋中金網の床を持った空調飼育設備中において行なっ
た。処置ごとに５回の反復実験を行ない、２７日間の反
復試験ごとに５匹の豚を使用した。実験の結果を表３０
に示す。

【表３０】 濃度 ＡＤＧ 増加率 ＡＤＦ 増加率 改善率 処 置 ppm ポンド (％) ポンド (％) Ｆ／Ｇ (％) 基 礎 − ０.６７ １.２５ １.８７ Ａ41030 ５ ０.７０ ＋４.５ １.３３ ６.４ １.８９ −１.０Ａ 41030 ２０ ０.６７ ０.０ １.２５ ０.０ １.９３ −３.２Ａ41 030 ５０ ０.７１ ＋６.０ １.２５ ０.０ １.７８ ４.８Ａ4103 0 １００ ０.７７ ＋１４.９ １.３４ ７.２ １.７４ ７.４ Ａ ＤＧ＝１日平均体重増加量 ＡＤＦ＝１日平均飼料消費量 Ｆ／Ｇ＝飼料消費量と体重増加量の比

【０１３２】この実験において、５ppmおよび１００ppm
の投与量における結果が示しているように、離乳した豚
の成長は投与量に応じて改善された。

【０１３３】実験３ 抗生物質Ａ４１０３０複合体はまた、離乳した豚(１７
ポンド、４〜６週令)に、２５、５０、および１００g／
トン(飼料)の割合で３５日間投与した。処置ごとに６匹
の豚を使用し４回反復試験を行なった。

【０１３４】抗生物質Ａ４１０３０複合体を上記の割合
で離乳した豚に投与したところ、それぞれ５.６％、８.
５％、７.０％の体重増加を示した。また飼料に２５、
５０および１００g／トンの割合で混入したとき、飼料
変換効率をそれぞれ６.６％、９.２％、３.１％改善し
た。これらの結果を表３１に示す。

【表３１】 濃度 ＡＤＧ 増加率 ＡＤＦ 増加率 改善率 処 置 ppm ポンド (％) ポンド (％) Ｆ／Ｇ (％) 基 礎 − ０.７１ − １.３９ − １.９６ − Ａ41030 ２５ ０.７５ ５.６ １.３８ −０.７ １.８３ ６.６ Ａ41030 ５０ ０.７７ ８.５ １.３８ −０.７ １.７８ ９.２Ａ41030 100 ０.７６ ７.０ １.４４ ３.６ １.９０ ３.１

【０１３５】従って本発明の微生物が産生するＡ４１０
３０抗生物質複合体またはＡ４１０３０抗生物質因子あ
るいはその薬学的に許容し得る非毒性塩を約５〜約１０
０ppmの割合で飼料に混合して豚に投与することからな
る離乳した豚の成長促進法、およびＡ４１０３０抗生物
質複合体またはその薬学的に許容し得る非毒性塩を飼料
１トン当り約２５〜約１００gの割合で混入して豚に投
与することからなる離乳した豚の成長促進法が提供され
得る。抗生物質Ａ４１０３０複合体は薬学的に許容し得
る非毒性塩の形で飲用水に入れて豚に投与することもで
きる。

【０１３６】Ａ４１０３０抗生物質群はまた、反芻動物
の飼料利用効率を増大させるのに有用である。反芻動物
における炭水化物の利用効率は、反芻動物の前胃菌相を
刺激してアセテートまたはブチレート化合物よりプロピ
オネート化合物の生産を促進するような処置を講ずるこ
とにより増大することが知られている(Ｃhurchら、“Ｄ
igestive Ｐhysiology and Ｎutrition of Ｒumin
ants"、第２巻、６２２〜６２５頁(１９７１年)参照)。

【０１３７】前胃において生産される揮発性脂肪酸の比
を改変する抗生物質Ａ４１０３０複合体およびＡ４１０
３０因子Ａの有効性は、以下に示すインビトロでの試験
によって示される。

【０１３８】試験４ 外科手術により前胃中に開口している管状器官を備えた
屠牛から前胃液を得た。この屠牛は以下の組成を有する
穀類に富んだ飼料で飼育した。

【表３２】 粗粉砕トウモロコシ ６９.９５％ 粉砕トウモロコシ穂軸 １０％ 大豆ミール(蛋白質５０％) ８％ アルファルファミール ５％ 糖 蜜 ５％ 尿 素 ０.６％ りん酸二カルシウム ０.５％ 炭酸カルシウム ０.５％ 食 塩 ０.３％ ビタミンＡおよび ０.０７％ Ｄ₂プレミックス ビタミンＥプレミックス ０.０５％ 痕跡のミネラルプレミックス ０.０３％

【０１３９】前胃液飼料を４層のチーズクロスでこし、
濾液を真空びんに集めた。チーズクロスに残った粒状物
質をもとの前胃液の量になるまで生理緩衝液に再懸濁
し、この懸濁液を再びチーズクロスでこした。使用した
緩衝液は以下の通りである:

【表３３】 Ｎa₂ＨＰＯ₄ ０.３１６g／l ＫＨ₂ＰＯ₄ ０.１５２g／l ＮaＨＣＯ₃ ２.２６０g／l ＫＣl ０.３７５g／l ＮaＣl ０.３７５g／l ＭgＳＯ₄ ０.１１２g／l ＣaＣl₂ ０.０３８g／l ＦeＳＯ₄・７Ｈ₂Ｏ ０.００８g／l ＭnＳＯ₄ ０.００４g／l ＺnＳＯ₄・７Ｈ₂Ｏ ０.００４g／l ＣuＳＯ₄・５Ｈ₂Ｏ ０.００２g／l ＣoＣl₂ ０.００１g／l Ｃhengら、Ｊ.Ｄairy Ｓci.,３８,１２２５(１９５５
年)参照。

【０１４０】２つの濾液を分液ロートに集め、粒状物質
が表面に浮かぶまで放置した。澄明な層を分離し、同じ
緩衝液で１:１に希釈し、pＨ７.０に調節した。

【０１４１】この希釈した前胃液１０mlを前記の組成を
有する細かく粉砕した飼料９０mgを入れた２５mlのフラ
スコに入れた。試験しようとする化合物を計り、上記の
適当な溶媒に溶解した。この溶液をそれぞれの試験フラ
スコ中の微粉砕飼料の上から入れ乾燥した。

【０１４２】４個の未処理対照フラスコ２セットを用意
した。４個の未処理対照フラスコの１セットは試験用フ
ラスコとともに３８℃で１６時間インキュベートした。
もう一方の４個の未処理対照フラスコは０時間対照と
し、フラスコを調整した直後に２５％メタ燐酸２mlを加
えて醗酵を停止させた。

【０１４３】インキュベートした試験用および対照用フ
ラスコ中の醗酵は、２５％メタ燐酸２mlを１６時間後に
加えて停止させた。

【０１４４】すべての試料を静置しその上澄液をガスク
ロマトグラフィー法により、アセテート、プロピオネー
トおよびブチレートについて分析した。

【０１４５】未処理対照群および試験用フラスコの分析
値から０時間対照群の揮発性脂肪酸の分析値を引いた。
得られた値は１６時間の醗酵期間中に生産されたそれぞ
れの揮発性脂肪酸の量を表わしている。

【０１４６】以下に示す表３４のデーターは、未処理対
照フラスコ中で生産された揮発性脂肪酸に対する処置フ
ラスコ中で生産された揮発性脂肪酸の比を表わしてい
る。このデーター表示法は、本発明に係る飼料利用効率
改善法によってもたらされる前胃中の化学的な変化の結
果を最も明瞭に表わしている。また、表３０のデーター
は、本発明に係る抗生物質群が前胃におけるプロピオネ
ート生産を増大するのに有効であることを示している。

【表３４】 化 合 物 割 合 アセテート プロピオネート ブチレート Ａ４１０３０ ５mcg.／ml ０.９４ １.２３ ０.７２ Ａ４１０３０ ５mcg.／ml １.０３ １.３３ ０.５９ Ａ４１０３０ ５mcg.／ml ０.９４ １.５１ ０.５４ Ａ４１０３０Ａ ２mcg.／ml １.０３ １.３３ ０.９４Ａ４１０３０Ａ １mcg.／ml １.０１ １.３１ ０.６６

【０１４７】この方法に有用な抗生物質化合物を投与す
ることにより、飼料利用効率を改善するとともにケトー
ジスを予防および治療することができる。ケトージスが
おこる機構は、プロピオネート化合物の生産が不足する
点にある。現在推奨されている治療法は、プロピオン酸
あるいは優先的にプロピオネートを生産する飼料を与え
ることである。本明細書に開示された方法は、明らか
に、通常の飼料からプロピオネート生産を増大させ、ケ
トージスの発生を減少させるものである。

【０１４８】本発明者らは、プロピオネートを増大させ
るに有効な量の本発明に係る抗生物質を投与すると反芻
動物において飼料利用効率が増大することを見出した。
この抗生物質群は、個々の成分であるいは全複合体の形
で、あるいは経済的には、精製度の低い全複合体の形で
動物用飼料に混入して好適に投与することができる。し
かしこの抗生物質化合物はその他の方法でも投与するこ
とができる。例えば錠剤、トレンチ剤、巨丸剤、カプセ
ル剤等に混入して動物に投与することができる。本発明
に係る抗生物質化合物をこのような投与形態に製剤化す
る方法は動物学分野においてよく知られている。個々の
投与単位には、処置しようとする動物にとって適当な１
日量に直接関連する量の飼料利用効率改善化合物が含ま
れていなければならない。

【０１４９】あらゆる形態の所望の抗生物質をゼラチン
カプセルに充填することにより、容易にカプセル剤を製
造することができる。所望により、この抗生物質は不活
性粉末希釈剤、例えば庶糖、でん粉あるいは精製した結
晶セルロースで希釈し、カプセルに充填するに都合のよ
い容量とすることができる。

【０１５０】この抗生物質の錠剤は、通常の薬学的な方
法で製造することができる。錠剤の製造法はよく知られ
ており非常に発達した技術である。錠剤には通常活性成
分の他に基剤、崩壊剤、吸収剤、結合剤および滑沢剤な
どが含まれている。代表的な基剤は乳糖、粉砂糖、塩化
ナトリウム、でん粉およびマンニットなどである。でん
粉はアルギン酸とともに良好な崩壊剤でもある。また、
ラウリル硫酸ナトリウムおよびスルホコハク酸ジオクチ
ルナトリウムなどの界面活性剤も使用することができ
る。通常使用される吸収剤はでん粉および乳糖であり、
また炭酸マグネシウムは油状物質にも有用である。よく
使用される結合剤はゼラチン、ガム、でん粉、デキスト
リン、および種々のセルロース誘導体である。通常使用
される滑沢剤はステアリン酸マグネシウム、タルク、パ
ラフィンワックス、種々の金属石けん、およびポリエチ
レングリコールなどである。

【０１５１】本発明に係る抗生物質化合物は、徐放性巨
丸剤の形で投与することもできる。このような巨丸剤
は、抗生物質の溶解を遅らせる手段を除いては錠剤と同
様にして製造される。巨丸剤は長期間放出を保つように
製造される。水に溶解しにくい抗生物質を選択すること
によりその溶解を遅らせることができる。巨丸剤の密度
をあげ、前胃の底に安定に保持するために鉄充填物のよ
うな物質を加える。

【０１５２】抗生物質を埋め込んだ不溶性物質からなる
マトリックスを使用することによって抗生物質の溶解を
遅らせることもできる。例えば植物ワックス、精製ミネ
ラルワックス、および水不溶性重合物質などが有用であ
る。

【０１５３】本発明に係る抗生物質のドレンチ剤は、水
可溶性の抗生物質を選ぶことにより容易に製造すること
ができる。なんらかの理由で不溶性の抗生物質を使用し
たい場合には、懸濁液の形にすることができる。あるい
はドレンチ剤は、生理学的に許容し得る溶媒、例えばポ
リエチレングリコールの溶液の形に製剤化してもよい。

【０１５４】不溶性の形の本発明に係る抗生物質の懸濁
液は、その抗生物質の形に応じて、ピーナツ油、とうも
ろこし油、またはごま油のような植物油のごとき非溶
媒、あるいはプロピレングリコールまたはポリエチレン
グリコールのようなグリコール類、あるいは水を用いて
調製してもよい。

【０１５５】抗生物質を懸濁させておくために、適当な
生理学的に許容し得る補助剤が必要である。このような
補助剤としてはシックナー、例えばカルボキシメチルセ
ルロース、ポリビニルピロリドン、ゼラチン、アルギネ
ートなどを使用することができる。多くの界面活性剤は
抗生物質を懸濁させるのに有用である。例えばレシチ
ン、アルキルフェノールポリエチレンオキシド付加物、
ナフタレンスルホネート、アルキルベンゼンスルホネー
ト、およびポリオキシエチレンソルビタンエステルなど
は液状の非溶媒懸濁液を調製するのに有用である。

【０１５６】さらに、場合に応じて、液体の親水性、密
度および表面張力に影響を与える物質を、懸濁液を調製
するための補助剤として使用することができる。例えば
シリコン消泡剤、グリコール、ソルビトールおよび庶糖
は懸濁化剤として有用である。

【０１５７】懸濁可能な抗生物質は、動物飼育者に懸濁
液として提供してもよいし、また、使用前に希釈する抗
生物質と補助剤との乾燥混合物の形で提供してもよい。

【０１５８】本発明に係る抗生物質は、反芻動物の飲用
水に投与することもできる。水可溶性の、あるいは水懸
濁性の形の所望の抗生物質を適当量水に加えることによ
り、飲用水への混入を行なうことができる。飲用水に添
加するための抗生物質の製剤化は、ドレンチ剤の製剤化
と同じ原理で行なう。

【０１５９】本発明に係る抗生物質で動物を処置する最
も実際的な方法は、この化合物を飼料添加物に混入して
製剤化することである。通常の乾燥飼料、液状飼料およ
びペレット状飼料など、あらゆるタイブの飼料にこの抗
生物質を混入することができる。

【０１６０】動物用飼料に薬物を入れた製剤化する方法
はよく知られている。医療用飼料用の原料物質として、
濃縮薬物プレミックスを調製するのが普通である。例え
ば典型的な薬物プレミックスは、プレミックス１ポンド
当り約１００〜約４００gの薬物を含有している。最終
飼料中における希望される薬物の広い濃度範囲に応じて
広い範囲のプレミックスが調製される。このプレミック
スは液状であっても固状であってもよい。

【０１６１】治療に有用な適切な量の抗生物質を含有し
ている動物用飼料の製剤化は、主として計算により行な
われる。動物が摂取する１日当りの飼料量および使用し
ようとするプレミックス中の抗生物質の濃度を考慮し
て、１匹の動物に投与したい抗生物質の量を計算し、そ
して飼料中の抗生物質の適切な濃度を計算しさえすれば
よい。

【０１６２】反芻動物あるいは非反芻動物の飼料技術に
おいて通常使用される製剤化法、混合法、およびペレッ
ト化法などは、すべてこの方法に使用し得る本発明に係
る抗生物質を含有する飼料を製造するのにそのまま適用
することができる。

【０１６３】抗生物質Ａ４１０３０複合体は食肉用の反
芻動物における飼料利用効率を増大させるのみならず、
発達した前胃機能を持った授乳用動物に投与するとミル
クの品質に悪影響を及ぼすことなく、ミルク生産量に著
しい改善をもたらすことがわかった。

【０１６４】乳牛のような授乳用反芻動物における飼料
利用の必要性および目的は、食肉用として飼育される反
芻動物のそれとは著しく異なっている。反芻動物におけ
る揮発性脂肪酸(ＶＦＡ)の生産は、それがその動物の正
常な維持、およびその動物によって生産されるミルクの
質および量に直接関係しているので極めて重要なことで
ある。しかし授乳用反芻動物においては、授乳のための
エネルギーはミルク生産において最も制限された因子で
ある。アセテートはミルク脂肪の合成に必要であるが、
一方プロピオネートはグルコースの生産に使用され(こ
れはラクトースの合成に必要である)、ミルク脂肪の生
産にはあまり重要ではない。ブチレートは脂肪形成性と
いうよりもむしろ糖形成性であり、その脂肪形成性は間
接的なものである。なぜならブチレートは、長鎖の脂肪
酸合成、即ち、ミルク脂肪の合成に利用される前にまず
アセテート単位に分解されなければならないからであ
る。

【０１６５】従って反芻動物においてミルク生産を増大
させるには、アセテートおよびブチレートの生産をさほ
ど犠牲にすることなくプロピオネートの生産を増大させ
ることが必要である。アセテートおよびブチレートの濃
度が著しく減少すると、ミルク脂肪の含量を極度に減少
させることとなり、品質および経済的な面からミルク生
産をより非能率なものにしてしまう(ミルクの価格は一
部にはミルク脂肪含量によって決定される)。

【０１６６】ミルク生産における本発明と関連する改良
法は、脂肪含量をさほど変化させることなくミルクの蛋
白質含量を増大させるのが特徴である。この改良法は、
抗生物質Ａ４１０３０複合体のプロピオネートを増大さ
せるに有効な量を授乳反芻動物に経口投与することから
なる。

【０１６７】抗生物質Ａ４１０３０複合体は、反芻動物
に経口投与するのに便利な形に製剤化することができ、
このような製剤は飼料プレミックス、飼料付加物、リッ
ク(なめ物)、水添加物などの形であってよく、所望によ
り抗生物質Ａ４１０３０複合体は１回の投与で長期間徐
々に放出する形の製剤とすることもできる。

【０１６８】プロピオネートを増大させるに有効な量の
抗生物質Ａ４１０３０複合体を、発達した前胃機能を持
った授乳用反芻動物に投与することにより、ミルク組成
に悪影響を与えることなくミルク生産を改善し得ること
はインビボ実験により確認された。

【０１６９】試験５ 出産したばかりのホルスタイン種の牛を使って２つの実
験を行なった。最初の実験では、１２頭の牛を使用し６
頭ずつの２つのグループに分けた。

【０１７０】出産２週間後から、被験動物について１週
間の予備期間を開始し、この間すべての動物に日常の飼
料および水を与え抗生物質は投与しなかった。すべての
動物に、とうもろこしスレッジ(新鮮な貯蔵物)５０％、
乾燥アルファルファ２０％および下記に示す組成の濃縮
物３０％からなる標準的な飼料を与えた:

【０１７１】

【表３５】 濃 縮 物 成 分 パーセント ポンド／トン 黄色粉砕とうもろこし ２３.５０ ４７０.０ りん酸二カルシウム １.５０ ３０.０ ヒル石 １.２５ ２５.０ 糖蜜(Ｄehy) ２.１５ ４３.０ Ｍonりん酸ナトリウム ０.１０ ２.０ 大豆油ミール ４７.００ ９４０.０ ビタミンＡ＋Ｄ３プレミックス ０.３５ ７.０ (Ｃa−０１)(注１) ビタミンＥプレミックス(注２) ０.１０ ２.０ セレンプレミックス(注３) ０.０５ １.０ 食 塩 １.００ ２０.０ 重炭酸ナトリウム １.００ ２０.０ 蒸溜機の乾燥ソルブル ２２.００ ４４０.０ (とうもろこし) １００.００ ２０００.０ (注１)ビタミンＡおよびＤ３プレミックス１ポンドはビ
タミンＡ ２００００００ＵＳＰ単位、ビタミンＤ３
２２５７５０ＵＳＰ単位を含んでいる。 (注２)ビタミンＥプレミックス１ポンドはビタミンＥ
２００００ＩＵを含んでいる。 (注３)セレンプレミックス１kgはセレンナトリウムとし
てのセレン２００mgを含んでおり、セレンの計算された
分析値は、プレミックスのみからのものである。

【０１７２】すべての牛には、体重(体重は１週間の予
備期間の開始日に測定した)の２.９５％の割合の標準的
飼料および以下に示す組成を有するトップドレスと呼ば
れる製剤２ポンドを摂取させた:

【０１７３】

【表３６】 トップドレス 成 分 パーセント ポンド／トン 粉砕黄色とうもろこし ２０.００ ４００.０ 粉砕−Ｏ−とうもろこし穂軸 ３８.００ ７６０.０ 茎糖蜜 ２.５０ ５０.０ からす麦 １１.００ ２２０.０ 大豆油ミール ２５.００ ５００.０ ビタミンＡ＋Ｄ３プレミックス １.１０ ２２.０ (ＣＡ−０１)(注１) 食 塩 ０.４０ ８.０ 動物脂 ２.００ ４０.０ １００.００ ２０００.０ (注１)ビタミンＡおよびＤ３プレミックス１ポンドはビ
タミンＡ ２００００００ＵＳＰ単位を、ビタミンＤ３
２２５７５０ＵＳＰ単位を含有している。

【０１７４】１週間の予備期間中、すべての牛に対照ト
ップドレスを与えた。処置期間の開始日から被験動物
に、トップドレスに抗生物質Ａ４１０３０複合体(試験
化合物)を混合したものを８週間与えた。対照群には、
予備期間中のトップドレスと同じ、薬物を添加していな
いトップドレスを摂取させた。対照用トップドレスおよ
び抗生物質Ａ４１０３０複合体を含有しているトップド
レスは、上記の標準的飼料の朝の摂食時１時間以内に、
１日２ポンドの割合で実験動物に摂取させた。処置群は
抗生物質を６００mg／頭／日の割合で投与された。

【０１７５】上記の方法で同じ実験を繰り返し実験２と
した。実験１および実験２について平均的な１日当りの
ミルク生産、ミルク組成およびミルク生産の持続性を分
析し表３７にまとめた。持続性値は処置期間中のミルク
生産量を、予備期間中の平均的生産量で割ったものであ
る。この持続性値は、処置開始前のものと比較した場合
の処置後の効果がどの程度であるかを示している。通常
の持続性値の期待値は約９４〜約９６％であった。いず
れの実験においても、Ａ４１０３０複合体を摂取した牛
は高い持続性値を示した。これは処置による顕著な反応
を表わすものである(即ち、処置群では対照群に比べ、
予備期間中のミルク生産が高く維持されている)。

【表３７】 ミルク ミルク ポンド／日 持続性値 脂肪 蛋白質 固形物 処 置 n 予備期間 処置期間 ％ ％ ％ ％ 実 験１ 対 照 ６ 61.2 58.2 95.6 ^a 3.52 3.29 ^c 11.57 Ａ41030 ６ 52.0 53.3 103.9 ^a 3.50 3.36 ^b 11.63実 験２ 対 照 ７ 50.6 48.5 95.9 ^a − − − Ａ41030 ８ 54.0 52.9 98.3 ^a − − − n＝動物数 a＝持続性値は処置期間中の平均ミルク生産量を予備期
間の生産量で割ったもの。この値は個々の牛の値から計
算し、表示の数値はその平均値。 bおよびc＝これらの値には差がある(Ｐ＜０.０５)。 −＝データーなし

【０１７６】表３７のミルク組成を分析すると、ミルク
脂肪においては処置群と非処置群との間に差がないが、
蛋白質含量は前者の方が優れていることがわかる。ミル
ク蛋白質が増加することは、たとえその増加がわずかで
あっても、ミルクから製造されるチーズの量を著しく増
大させるので非常に望ましいことである。

【０１７７】抗生物質Ａ４１０３０複合体および因子
Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、ＦおよびＧは、既述した実施例に
記載の方法で分離して動物用飼料に使用することができ
る。また、所望ならば、Ａ４１０３０抗生物質を生産し
た後、全醗酵ブロスを乾燥しその乾燥物を直接飼料また
は飼料プレミックスに混合してもよい。

【０１７８】さらに本発明に係るＡ４１０３０抗生物質
複合体およびその因子群は、亜硫酸化フェノールホルム
アルデヒド合成タンニンである合成タンニン剤(例えば
Ａ.Ｊ.＆Ｏ.Ｊ.Ｐilar Ｉnc.(Ｎewark、Ｎ.Ｊ.)からＴ
rutan ＲＪ Ｒegularの商品名で発売されているもの)
と混合することができる。この抗生物質と合成タンニン
剤との混合物、抗生物質−合成タンニン複合体は成分に
分離することなく、上記の動物用飼料補助剤に入れるこ
とができる。

【０１７９】反芻動物のような経済的価値を有する動物
には、全生涯を通じて、種々の成長促進剤、病気の予防
剤および治療剤を投与するのが普通である。このような
薬物は組合せて使用されることが多い。

【０１８０】既述したように、抗生物質Ａ４１０３０複
合体およびＡ４１０３０因子Ａは、前胃中のアセテート
生産に比較してプロピオネート生産を改善させる。この
ような処置は、盲腸で植物性の繊維物質を醗酵させる単
胃動物にも適応することができる。ここで単胃動物と
は、繊維性の植物性飼料を消費し、盲腸で微生物の醗酵
により少なくともその一部を消化する動物を言う。盲腸
における醗酵の化学的プロセスは前胃における醗酵のも
のと類似したものである。

【０１８１】食物の一部を盲腸における醗酵によって消
化する代表的な動物は、馬、豚および兎である。このよ
うな動物における全飼料利用効率は、プロピオネート／
アセテート比を有利に変化させる本発明に係る抗生物質
を経口投与することにより改善される。馬や兎は、全消
化過程の大部分を盲腸における醗酵で行なう代表的な動
物であり、従って本発明の微生物が産生する抗生物質は
これらの動物にとって特に有用である。

【図面の簡単な説明】

【図１】 図１は、ＫＢr法で測定したそれぞれＡ４１
０３０因子Ａ、因子Ｂ、因子Ｃ、因子Ｄ、因子Ｅ、因子
Ｆ、および因子Ｇの赤外吸収スペクトルである。

【図２】 図２は、ＫＢr法で測定したそれぞれＡ４１
０３０因子Ａ、因子Ｂ、因子Ｃ、因子Ｄ、因子Ｅ、因子
Ｆ、および因子Ｇの赤外吸収スペクトルである。

【図３】 図３は、ＫＢr法で測定したそれぞれＡ４１
０３０因子Ａ、因子Ｂ、因子Ｃ、因子Ｄ、因子Ｅ、因子
Ｆ、および因子Ｇの赤外吸収スペクトルである。

【図４】 図４は、ＫＢr法で測定したそれぞれＡ４１
０３０因子Ａ、因子Ｂ、因子Ｃ、因子Ｄ、因子Ｅ、因子
Ｆ、および因子Ｇの赤外吸収スペクトルである。

【図５】 図５は、ＫＢr法で測定したそれぞれＡ４１
０３０因子Ａ、因子Ｂ、因子Ｃ、因子Ｄ、因子Ｅ、因子
Ｆ、および因子Ｇの赤外吸収スペクトルである。

【図６】 図６は、ＫＢr法で測定したそれぞれＡ４１
０３０因子Ａ、因子Ｂ、因子Ｃ、因子Ｄ、因子Ｅ、因子
Ｆ、および因子Ｇの赤外吸収スペクトルである。

【図７】 図７は、ＫＢr法で測定したそれぞれＡ４１
０３０因子Ａ、因子Ｂ、因子Ｃ、因子Ｄ、因子Ｅ、因子
Ｆ、および因子Ｇの赤外吸収スペクトルである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ６１Ｋ 38/00 ＡＤＡ ＡＤＺ ＡＦＣ ＡＦＦ Ｃ０７Ｋ 9/00 8318−4Ｈ Ｃ１２Ｐ 21/02 Ａ 9282−4Ｂ (Ｃ１２Ｎ 1/20 Ｃ１２Ｒ 1:465） (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:465） Ｃ０７Ｋ 99:00 Ａ６１Ｋ 37/02 ＡＦＣ ＡＦＦ (72)発明者 ワルター・ミツオ・ナカツカサ アメリカ合衆国インディアナ46227、イン ディアナポリス、クロスマン・ドライブ 2118番

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 以下の式で示される少なくとも１つの抗
   生物質を生産するストレプトマイセス・ヴァージニア
   エ： 【化７】 ［式中、Ｒは水素または塩素、Ｒ₁は水素または塩素、
   Ｒ₂は水素、ガラクトース、またはガラクトシルーガラ
   クトースを表す］。
2. 【請求項２】 ストレプトマイセス・ヴァージニアエＮ
   ＲＲＬ１２５２５である請求項１のストレプトマイセス
   ・ヴァージニアエ。
3. 【請求項３】 ストレプトマイセス・ヴァージニアエＮ
   ＲＲＬ１５１５６である請求項１のストレプトマイセス
   ・ヴァージニアエ。