JPS58129972A - 菌体内セリン分解酵素活性の抑制法 - Google Patents
菌体内セリン分解酵素活性の抑制法Info
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- JPS58129972A JPS58129972A JP57010912A JP1091282A JPS58129972A JP S58129972 A JPS58129972 A JP S58129972A JP 57010912 A JP57010912 A JP 57010912A JP 1091282 A JP1091282 A JP 1091282A JP S58129972 A JPS58129972 A JP S58129972A
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- Japan
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- serine
- tryptophan
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- escherichia coli
- synthetase
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- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/52—Improvements relating to the production of bulk chemicals using catalysts, e.g. selective catalysts
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- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、トリプトファン・シンセターゼ（インドール
とＬ−セリンとがらＬ−）リプトファンを合成するメ応
を触媒する酵素）を含有す分間処理することによって菌
体内に含まれるトリプトファン・シンセターゼの活性を
低下させることなく副反応であるセリン分解酵素活性だ
けを抑制する菌体内セリン分解酵素活性の抑制方法に明
するものである。
とＬ−セリンとがらＬ−）リプトファンを合成するメ応
を触媒する酵素）を含有す分間処理することによって菌
体内に含まれるトリプトファン・シンセターゼの活性を
低下させることなく副反応であるセリン分解酵素活性だ
けを抑制する菌体内セリン分解酵素活性の抑制方法に明
するものである。
近年、ｌ、）ＩＪブトファンは医薬用のみならず飼料用
としての効果が世の注目を集めるに至り、工業的規模に
よる安価な生産の期待が高まって六ている。Ｌ−）リプ
トファンを製造する方法の中で非常に有望視されている
方法の１つにインドールとＬ−セリンとからＬ−１リプ
トフアンを製造する酵素的生産方法がある。該反応を触
媒する酵素がトリプトファン・シンセターゼであり、主
として遺伝的に改良されたエッシエリヒア属に嘱する微
生物の菌体内に大量に生産される。本酵素は菌体内に生
産されるので菌体そのものを酵素源として利用するのが
工業的に有利であるが、該菌体はトリプトファナーゼ、
セリン働デヒドラターゼ、スレオニン−デヒドラターゼ
などのＬ−セリンを分解する１孝素をも含んでいるので
トリプトファン合昨反応中に基質で、あるＩ、−七リン
が同時に分解され、対セリン収率が低下するという大き
な問題があった。
としての効果が世の注目を集めるに至り、工業的規模に
よる安価な生産の期待が高まって六ている。Ｌ−）リプ
トファンを製造する方法の中で非常に有望視されている
方法の１つにインドールとＬ−セリンとからＬ−１リプ
トフアンを製造する酵素的生産方法がある。該反応を触
媒する酵素がトリプトファン・シンセターゼであり、主
として遺伝的に改良されたエッシエリヒア属に嘱する微
生物の菌体内に大量に生産される。本酵素は菌体内に生
産されるので菌体そのものを酵素源として利用するのが
工業的に有利であるが、該菌体はトリプトファナーゼ、
セリン働デヒドラターゼ、スレオニン−デヒドラターゼ
などのＬ−セリンを分解する１孝素をも含んでいるので
トリプトファン合昨反応中に基質で、あるＩ、−七リン
が同時に分解され、対セリン収率が低下するという大き
な問題があった。
従来、トリプトファン合成反応液中のし一セリンの分解
を抑制する方法として（佳、酵素源としてトリプトファ
ナーゼ欠損賓異株を用いる方法又は反応液中にアンモニ
ウムイオンを添加するガ去が知られている。トリプトフ
ァナーゼ欠損変異株を用いる方法はトリプトファナーゼ
によるセリンの分解は防止することができるが、その仙
、のセリン分解酵素即ちセリン・デヒドラターゼやスレ
オニン・デヒドラターゼなどＫようセリンの分解は防止
することかで茂ず充分なセリン分解抑制方法とば声い難
い。又、トリプトファン合伐反応液中にアンモニウムイ
オンを添加する方法は反応終了後の精製工程に負荷がか
かるという欠へを有しており、実用的により有利な方法
が望まれていた。
を抑制する方法として（佳、酵素源としてトリプトファ
ナーゼ欠損賓異株を用いる方法又は反応液中にアンモニ
ウムイオンを添加するガ去が知られている。トリプトフ
ァナーゼ欠損変異株を用いる方法はトリプトファナーゼ
によるセリンの分解は防止することができるが、その仙
、のセリン分解酵素即ちセリン・デヒドラターゼやスレ
オニン・デヒドラターゼなどＫようセリンの分解は防止
することかで茂ず充分なセリン分解抑制方法とば声い難
い。又、トリプトファン合伐反応液中にアンモニウムイ
オンを添加する方法は反応終了後の精製工程に負荷がか
かるという欠へを有しており、実用的により有利な方法
が望まれていた。
本発明者らは、反応液中に化学物質を添加することｔｃ
＜、）リプトファン・シンセターゼ含有菌体を物理的に
処理することにより、七の酵素活性の低下がなくてセリ
ン分解酵素活性のみを低下させる方法を鍾々検討した幼
果、咳菌体培養液又は集菌して得られる湿菌体を４０〜
６０°Ｇで加熱処理した場合、トリプトファン・シンセ
ターゼの活性を保持したままセリン分解酵素活性を著し
く低下させ得ることを９２出し、本発明を完成した。
＜、）リプトファン・シンセターゼ含有菌体を物理的に
処理することにより、七の酵素活性の低下がなくてセリ
ン分解酵素活性のみを低下させる方法を鍾々検討した幼
果、咳菌体培養液又は集菌して得られる湿菌体を４０〜
６０°Ｇで加熱処理した場合、トリプトファン・シンセ
ターゼの活性を保持したままセリン分解酵素活性を著し
く低下させ得ることを９２出し、本発明を完成した。
本、９明に使用するトリプトファン−シンセターゼを菌
体内ＩＦ多贅に生産する微生′吻としてはエッシエリヒ
ア・コリに閾する微生物、例えばエツシエリヒア・コリ
ＭＴ−１０２３２（ＦＥＲＭ ＢＰ −１９）、エッ
シエリヒア・コリＭＴ−１１０２４２（ＦＥＲ’ ＢＰ
−２０）などが用いられる。加熱朝、理に供する菌体は
、菌体培養液でも良いし、集菌して得られる湿菌体を緩
衝液に懸遭させたものでも白いし、更に湿菌体そのもの
でも白い。加熱処理時のＰＨは特に制限はないが４〜１
ｏの範囲が好ましい。加熱時間は４０〜６０’Ｃで通常
５〜３０分間、好ましくは１０〜３０分間、更に好まし
くけ５０〜６０℃で５〜１５分間程変である。
体内ＩＦ多贅に生産する微生′吻としてはエッシエリヒ
ア・コリに閾する微生物、例えばエツシエリヒア・コリ
ＭＴ−１０２３２（ＦＥＲＭ ＢＰ −１９）、エッ
シエリヒア・コリＭＴ−１１０２４２（ＦＥＲ’ ＢＰ
−２０）などが用いられる。加熱朝、理に供する菌体は
、菌体培養液でも良いし、集菌して得られる湿菌体を緩
衝液に懸遭させたものでも白いし、更に湿菌体そのもの
でも白い。加熱処理時のＰＨは特に制限はないが４〜１
ｏの範囲が好ましい。加熱時間は４０〜６０’Ｃで通常
５〜３０分間、好ましくは１０〜３０分間、更に好まし
くけ５０〜６０℃で５〜１５分間程変である。
如熱処理温麻と時間の関係は、処理温昨が高けねば短時
間で処理し、逆に処理温度が低くければ長時間処理する
ことが好ましい。何故ならばセリン分解酵素活性は処理
温度が高ければ高いほど、処理時間が長ければ畏い程失
活し易いがトリプトファン・シンセターゼも又同様の傾
向を示すからで力、る。
間で処理し、逆に処理温度が低くければ長時間処理する
ことが好ましい。何故ならばセリン分解酵素活性は処理
温度が高ければ高いほど、処理時間が長ければ畏い程失
活し易いがトリプトファン・シンセターゼも又同様の傾
向を示すからで力、る。
本発明の方法によれば、菌体内に含まれるトリ１ブトフ
アン・シンセターゼの活性を低下させろことなく、セリ
ン分解酵素活性のみを以下させ得るので、本発明の方法
による菌体をトリプトファンの合成に使用すれば、反応
液中に化学物質を添加することなくセリンに対する反応
収率を向上させることができるので、本発明はトリプト
ファン・シンセターゼ１ＣよるＬ−４リプトフアンの工
業的生産に大いに貢献し得る。
アン・シンセターゼの活性を低下させろことなく、セリ
ン分解酵素活性のみを以下させ得るので、本発明の方法
による菌体をトリプトファンの合成に使用すれば、反応
液中に化学物質を添加することなくセリンに対する反応
収率を向上させることができるので、本発明はトリプト
ファン・シンセターゼ１ＣよるＬ−４リプトフアンの工
業的生産に大いに貢献し得る。
以下、実施例により本発明を更に詳細に説明する。
実施例１
トリプトファン・シンセターゼ生産菌であるエッシエリ
ヒア・コリＭＴ−１０２３２（ＦＢＲＭ ＢＰ１９）
を５００ｔｎ１．の坂ロフラスコ中の埴１表に示す組成
の培地１００ｔｎｌＫ接種し、３０’（”、で２４時間
据盪しながら培養した。培養終了後、遠心分離機で隼菌
し、乾燥菌体濃度が４０り／ｌになるように培養Ｐ液で
希釈した。この菌体懸塊液を第４表に示す処理温度、処
理時間で熱処理した祷遠心集菌して該加熱処理菌体のＬ
−セリン分解能およびトリプトファン−シンセターゼ活
性を測定した。Ｌ−セ、リン分解能は第２表に示した反
応組牒液４０−を３０℃、２４時間振′量させた後の残
し−セリン量を測定すること１７よって求め、トリプト
ファン・シンセターゼ活性測定は第３表に示した活性ｃ
ｉｌ１１定…反応液を３５℃で１時間反１ζさせ、生岬
されたＬ −） ＩＪブトファンの叶を液体クロマトグ
ラフ−イーでｌ′１Ｉｌｌ宋し、尋素活性は単位時間、
単酢菌体量当りのＬ−トリプトファン生成量で表示した
。得られた結手を対照である未処理区と共に第４表に示
した。
ヒア・コリＭＴ−１０２３２（ＦＢＲＭ ＢＰ１９）
を５００ｔｎ１．の坂ロフラスコ中の埴１表に示す組成
の培地１００ｔｎｌＫ接種し、３０’（”、で２４時間
据盪しながら培養した。培養終了後、遠心分離機で隼菌
し、乾燥菌体濃度が４０り／ｌになるように培養Ｐ液で
希釈した。この菌体懸塊液を第４表に示す処理温度、処
理時間で熱処理した祷遠心集菌して該加熱処理菌体のＬ
−セリン分解能およびトリプトファン−シンセターゼ活
性を測定した。Ｌ−セ、リン分解能は第２表に示した反
応組牒液４０−を３０℃、２４時間振′量させた後の残
し−セリン量を測定すること１７よって求め、トリプト
ファン・シンセターゼ活性測定は第３表に示した活性ｃ
ｉｌ１１定…反応液を３５℃で１時間反１ζさせ、生岬
されたＬ −） ＩＪブトファンの叶を液体クロマトグ
ラフ−イーでｌ′１Ｉｌｌ宋し、尋素活性は単位時間、
単酢菌体量当りのＬ−トリプトファン生成量で表示した
。得られた結手を対照である未処理区と共に第４表に示
した。
第 １ 表
エールリッヒ肉エキス １０ ９ポリペプトン
１０ り １’Ｊａ（Ｊ ５ ９蒸溜水で
１１Ｋ、％釈して使用（ＰＨ６，８）埴 ２ 表 Ｌ−セリン ６０ ９ピリドキサール
リン酸 ｏ 、 ｏ、 ｉり菌体量（乾燥菌
体１枦眸） ８゜５ｑ蒸留水で１１Ｋ希釈して使
ｌ＋１（ＰＨ８，５）インドール ２
％Ｌ−セリン １．８
％トリトンＸ−１００５％ 菌体量（乾燥菌体換算） ０．０２ ％Ｐ
Ｈ８，５ 第 ４ 表 〔註］上表中の※印は比較例を示す。
１０ り １’Ｊａ（Ｊ ５ ９蒸溜水で
１１Ｋ、％釈して使用（ＰＨ６，８）埴 ２ 表 Ｌ−セリン ６０ ９ピリドキサール
リン酸 ｏ 、 ｏ、 ｉり菌体量（乾燥菌
体１枦眸） ８゜５ｑ蒸留水で１１Ｋ希釈して使
ｌ＋１（ＰＨ８，５）インドール ２
％Ｌ−セリン １．８
％トリトンＸ−１００５％ 菌体量（乾燥菌体換算） ０．０２ ％Ｐ
Ｈ８，５ 第 ４ 表 〔註］上表中の※印は比較例を示す。
実施例２
トリプトファン・シンセターゼ生産菌であるエツシエリ
ヒア・コリＭＴ−１０２４２（ＦＥＲＭＢＰ−２０）を
甲いて、実施例１と同様の操作を行なった。得られた結
果を第５表に示した。
ヒア・コリＭＴ−１０２４２（ＦＥＲＭＢＰ−２０）を
甲いて、実施例１と同様の操作を行なった。得られた結
果を第５表に示した。
第５表
Claims (1)
- トリプトファン拳シン七ターゼを含有スるエツシエリヒ
ア・コリに属する微生物菌体を４０〜６０℃で加熱処理
することを特徴とする菌体内セリン分解酵素活性の抑制
法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57010912A JPS58129972A (ja) | 1982-01-28 | 1982-01-28 | 菌体内セリン分解酵素活性の抑制法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57010912A JPS58129972A (ja) | 1982-01-28 | 1982-01-28 | 菌体内セリン分解酵素活性の抑制法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58129972A true JPS58129972A (ja) | 1983-08-03 |
| JPH0455669B2 JPH0455669B2 (ja) | 1992-09-04 |
Family
ID=11763482
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP57010912A Granted JPS58129972A (ja) | 1982-01-28 | 1982-01-28 | 菌体内セリン分解酵素活性の抑制法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS58129972A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH01132380A (ja) * | 1987-11-17 | 1989-05-24 | Mitsui Toatsu Chem Inc | 菌体の熱処理方法 |
| JPH03172176A (ja) * | 1989-10-30 | 1991-07-25 | Mitsui Toatsu Chem Inc | 菌体内セリン分解酵素活性の抑制方法 |
| WO2011108473A1 (ja) * | 2010-03-01 | 2011-09-09 | 三井化学株式会社 | １，５－ペンタメチレンジアミンの製造方法、１，５－ペンタメチレンジアミン、１，５－ペンタメチレンジイソシアネート、１，５－ペンタメチレンジイソシアネートの製造方法、ポリイソシアネート組成物、および、ポリウレタン樹脂 |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5756319A (en) | 1995-07-18 | 1998-05-26 | Mitsui Toatsu Chemicals, Inc. | Production process of S-phenyl-L-cysteine |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS565098A (en) * | 1979-06-26 | 1981-01-20 | Mitsui Toatsu Chem Inc | Production of l-triptophane by use of enzyme |
-
1982
- 1982-01-28 JP JP57010912A patent/JPS58129972A/ja active Granted
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS565098A (en) * | 1979-06-26 | 1981-01-20 | Mitsui Toatsu Chem Inc | Production of l-triptophane by use of enzyme |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH01132380A (ja) * | 1987-11-17 | 1989-05-24 | Mitsui Toatsu Chem Inc | 菌体の熱処理方法 |
| JPH03172176A (ja) * | 1989-10-30 | 1991-07-25 | Mitsui Toatsu Chem Inc | 菌体内セリン分解酵素活性の抑制方法 |
| JP2801689B2 (ja) * | 1989-10-30 | 1998-09-21 | 三井化学株式会社 | 菌体内セリン分解酵素活性の抑制方法 |
| WO2011108473A1 (ja) * | 2010-03-01 | 2011-09-09 | 三井化学株式会社 | １，５－ペンタメチレンジアミンの製造方法、１，５－ペンタメチレンジアミン、１，５－ペンタメチレンジイソシアネート、１，５－ペンタメチレンジイソシアネートの製造方法、ポリイソシアネート組成物、および、ポリウレタン樹脂 |
| JP5700575B2 (ja) * | 2010-03-01 | 2015-04-15 | 三井化学株式会社 | １，５−ペンタメチレンジイソシアネートの製造方法 |
| US9404132B2 (en) | 2010-03-01 | 2016-08-02 | Mitsui Chemicals, Inc. | Method for producing 1,5-pentamethylenediamine, 1,5-pentamethylenediamine, 1,5-pentamethylene diisocyanate, method for producing 1,5-pentamethylene diisocyanate, polyisocyanate composition, and polyurethane resin |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0455669B2 (ja) | 1992-09-04 |
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