JPS58113197A - 抗生物質ａ−３２７２４およびその製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 としての活性を有し，かつまたある種の酵素の阻害剤で
もある新規抗生物質Ａ−３２７．２１１に関する。

この群に属する抗生物質はすべて抗高血圧剤として活性
である。

文献的には＋　Ｋｕｒｎａｇａｉ等［Ｊ．　Ａｎｔ，ｉ
ｂｉｏｌ．、　＋　、２作僻ざ７０−１７５（／９７／
）］が、ストレプトマイセスによって製造される酵素阻
害剤パノシアリン（ｐａｎｏ−一　／　ｌ　− ダーゼ，酸フオスファターゼおよびポリガラクトウロナ
ーセを阻害するパノシアリンがｊ−アルキルベンゼン−
１３−ジサルフエメートの混合物”’ｃあることを示し
ている。その３種の主成分の構造ハ，！；ーイソペンタ
テシルベンゼンーに３−ジサルフエート，！；ｎーペン
タテシルベンセン−４３−ジサルフエートおよびｊ−イ
ソへキサデシルベンゼン−１３−ジサルフエ−１・であ
る。パノシアリンの生物活性，単離および定性はＡ（１
．）ｌａｇ　ｉ等［Ｊ．　Ａｎｔ，ｉｌ＋ｉｏｔ．　２
ｔＢＨ）＋ざ乙θ一ｇ６ワ（／９７／）　］によって報
告されている。

さらに文献上，　Ｙａｇｉｎｕｍａ等［Ｊ，　Ａｒ１ｔ
ｉ　ｂｉ　Ｏも．　＋　３　３（３）、３３７〜３グ／
（／９ｆθ）］は、ケトメラ・ラフイゲラ（Ｃｈａｅｔ
ｏｍｅｌｌａ　ｒａｐｈｉｇｅｒａ　）Ｍ＆ざｔｇによ
って生産される２種の水溶性で酸性の含イオウ物質，Ｍ
グざｊゲー■およびＭｇざｊグー■の単離，物理化学的
性質および生物学的特性を報告している。これらの物質
は，種々のβーラクタマーゼに対して酵素阻害活性を有
することが証明されている。

苛回，抗生物質Ａー３２７２４１因子Ａ，ＢおよびＣを
含む抗生物質Ａー３２７．２グ混合物，抗生物質Ａ−３
．２７２’ｌ因子Ａ，抗生物質Ａー３コ７２グ因子Ｂお
よび抗生物質Ａー３２７２’ｌ因子Ｃを含む抗生物質Ａ
ー３２７２１１群が発見された。この抗生物質混合物は
，ケ！・メラ・ラフィゲラ・スウィフト（Ｃｌ１ａｅｔ
ｏｍｅｌｌａ　ｒａｐｂｉｇｅｒａ　Ｓｗｉｆｔ　）　
ＮＲＲＬ　／２３３／　（Ａ　−３２７、：ｌ’ｌ−株
とも言う）なる新規菌株を培養することによって製造さ
れる。これらの抗生物質Ａ　−３、２７．２’ｌはある
種の酵素を阻害し，抗高血圧作用を示す。

発酵技術で用いられ，本明細書でも使用している「混合
物」という用語は，同時に産生される各抗生物質因子の
混合物を意味する。発酵法による抗生物質生産に精通し
ている当業者に知られているように，抗生物質混合物中
に含まれる個々の因子の種類およびその比率は，使用し
た菌株と培養条件によって異る。

Ａ−３２７２１１因子Ａ，ＢおよびＣの赤外吸収スヘク
トルは図面に示されている。

一／．乙一 第１図　Ａ−３２７２１１因子Ａ（Ｋｂｒペレット）第
２図　ｈ−３２７２．４Ｌ因子Ｂ　（　Ｋｌ＋ｒ　ヘＬ
／　ツｔ＝　）第３図　Ａ−３２７２１１因子Ｃ（Ｋｂ
ｒペレット）微生物Ａ−３２７２’ｌ−の諸性状。

Ａ−３２７２ｌｌＬは，粉胞子器期また不完全期におけ
る鑑別によれば，不完全菌類，スフエロプシグ目。

ケトメラ属の一種である。完全期は知られていない。ケ
トメラ属に常に見られる二つの特徴によってこの属はア
メロスポリウム（Ａｍｅｒｏｓｐｏｒｉｕｍ）属と識別
される。ケトメラ属においては，分生胞子（ｃｏｎｉｄ
ｉａ　）はガラス質であり，粉胞子器（　ｐｙｃｎｉｄ
ｉｕｍ）は、上部粉胞子器壁に沿った厚壁性暗褐色細胞
によって境界づけられた薄壁性細胞の縦線である縫る。

さらに成熟した粉胞子器では，粉胞子器壁の黒化のため
，緯線の判別は容易でなく，緯線は暗色の隆起線となる
。アメロスポリウム属では，縞線ハなく，分生胞子は緑
色のシェードの中にある。

Ａ−３２７２’ｌ−菌は，その直接観察とその性状を下
記文献に記載されているケトメラ・オブロンガ（Ｃ，ｏ
ｂｌｏｎｇａ　）＋ケ１−メラ・サージ／セラ（Ｃ，ｃ
ｉｒ−ｃｉｎｏｓｔ出【）、ケトメラ・ラフイゲラ（Ｃ
ｌｒａｇ山ｉｇｃｒａ）およびケｌ−メラ・７クチセタ
（Ｃ６ａｃｕｌ、１ｓｅｔａ　）の性状と比較して、ケ
（・メラ・ラフイゲラ・スウイフトの一菌株に分類され
た。

（１，）Ａ、　Ｃ０Ｓむｏｌｋ、　　ｔｔ　Ｔｂｃ　　
Ｇｅｎｕｓ　　Ｃｈａｅｔｏｍｅｌ　Ｉａ　Ｐｏｃｋ−
ｅｌ　ｔｔ　　。

ＴｒａｎｓａｃＬｉｏｎｓ　ｏｒｔｈｅ　Ｂｒ１ｔｉｓ
ｈ　Ｍｙｃｏｌｏｇｉｃａｌ’　５ｏｃｉｅｔｙ。

ｌ乙（３）、グθり〜１１．２３ｃ／９乙３）（２）Ｂ
、Ｃ０５ｕｔもｏｎ　　ｅｔ　　ａｌ　、ｔｔ　Ｒｅｖ
ｉｓｉｏｎ　　ｏｆ　Ｃｈａｅｔｏｍｅ　］　Ｉａ　　
。

ａｎＪ　Ｃｏ＋ｒｒｎｅｎＬｓ　ｕｐｏｎ　Ｖｅｒｍｉ
ｃｕｌａｒｉｏｐｓｉａ　ａｎｄ　Ｔｈｙ　−ｒｉｏｃ
ｂ）Ｌｅｌ、ｕｍ　ｔｔ　　、Ｔｒａｎｓａｃｔ、１ｏ
ｎｓ　　ｏｆ　　ｔｈｅ　　ＢｒｉｔｉｓｈＭｙｃｏｌ
ｏｇｉｃａｌ　５ｏｃｉｅｔｙ　、６乙（２）、２９７
〜３θ３（／９７に） 麦芽エキス寒天上で培養したＡ−３２７２，’ｌは、／
２゜日間で直径夕０１に達するコロニーを形成し、その
コロニーは帯状紋様を有するビロード状で、ベージュ色
ないし灰色のマットとなる。粉胞子器は無秩序に散在す
るか１時には帯状となる。

粉胞子器は、短い繊維状の菌柄（ｓｌ、１ｐｅｓ）上に
１３− 表面的に存在し、亜球状ないし肺内球状または腎臓形で
ある。粉胞子器は乾燥するとつぶれる。初めは透明であ
るが、後に褐色ないし黒色となる。

菌柄は束状体様（ｓｙｎｎｅｍａＬｏｕｓ　）または繊
維束（１’１ｂｒｏｕｓ　ｂｕｎ（１］ｃ　）として発
生し、後ニ末端カフ〈うんで粉胞子器の形になる。粉胞
子器は明らかに区別できる三重の細胞層からなる。外層
は放射性かつ繊維状でガラス様である。偽柔組織（ｐｓ
ｅｕｄｏ　−ｐａｒｅｎｃｈｙｍａ　）の中間層は、生
育するに伴って褐色、ないし黒色となる。カラス様の偽
柔組織である内層からは１分生胞子柄（ｃｏｎｉｄｉｏ
ｐｈｏｒｅｓ　）が発生する、各粉胞子器の外面は、無
秩序に散在する柄（ｓｅＬａｅ　）を有している。成熟
した粉胞子器は、側面から見ると、長さ７ざ７ないし３
３３μ、巾／クサ゛ないし２３ｑμであり、平均サイズ
は２乙乙×７ざグμである。

分生胞子柄は毛状で、不規則に分枝し、ガラス様であり
、長さざ０μに達する屈曲した糸状体を形成する。分生
胞子原細胞（ｃｏｎｉｄｉｏｇｅｎｏｕｓ　ｃｅｌｌｓ
　　　　　　　１）は、単検子性で９個別的（ｄｉｓｃ
ｒｅｔｅ　）　、限定的（（Ｉ　ＣＬｃｒｍ　１ｎａｎ
１．　）であり、不規則に分布するが、しばしば対立し
ている。分生胞子は検子から末端部に形成され、ガラス
様であり、しばしば水滴状（ｇｕＬＬｕｌａｔｅ　）で
あり、隔膜を欠き（ａｓｅｐＬａＬｅ　）　、紡錘形な
いし＼ソー士−ジ形あるいは舟形である。分生胞子は、
長さｊゲないし７／μ、巾／乙ないし２、θμ、平均の
サイズは乙θ×／７μである。分生胞子はクリーム色の
粘液性７トリツクスで裂開（ｄｅｂｉｓｅｅ　）　ｌ、
　テイル。

Ａ−３２７，２’ｌにおいては、柄は２種類見られる。

その一方は直線的で（タイプ■）、他方は先端が鉤状で
ある（タイプ■）。タイプ■の柄は、ケトメラ属のレク
ｌ〜タイプであるケトメラ・オブロンガ・フッケルを引
用して、オブロンガ・タイプとして文献に記載されてい
る（上記５ｕｔＬｏｎ　ｅＬ　ａｌ　）。

ｋ−３２７２’ｌ培養菌では、一部の柄は直線的で。

クラブの形状をとっており、ふくらんだ末端細胞は半透
明である。偽柔組織に埋もれた基底細胞は不規則にふく
らみ、しばしば変化したフ＼ット・セｋ　（ｍｃｘｌｉ
ｒｉｅｄ　ｆｏｏｔ−ｃｅｌｌ　）として観察される。

基ｌ　６− 底細胞は粉胞子器の表面で巾約ま７３μ、中間細胞は巾
約３ｑμ、頂部細胞は巾約ｊ３μである。

頂部細胞は一般に丸味を帯びているが２時に尖鋭である
、頂部細胞の長さはｔｌＡｊμないし乙乙乙μ、平均ｊ
／乙μである。

Ａ−３２７２４を菌における柄の第二の形は頂部が鉤状
を呈するが、１回以上巻くことはない。その先端は丸味
を帯びているが１時に尖鋭である。基底細胞は、タイプ
■の柄の場合と同様である。しがし。

この柄のタイプ■における隔膜の形成は、柄のタイプエ
の場合に比して遅い。柄のタイプ■における色素産生ハ
、柄のタイプ■の場合と同様である。柄のタイプ■の長
さは、３と２μないし９２μ渾均７７１１μである。

Ａ−３２７２１Ａ培養菌では、二次分生胞子の付着構造
、スポロドチウム（ｓｐｏｒｏｄｏｃｈｉｕｍ　）は、
しばしば中心に圧縮されている菌糸の束状体（ｓ）ｒｎ
ｎｅｍａｔｏｕｓｂｕｎｄｌｅ　）から発生し、繊維状
のくびれのある菌柄となる。分生胞子は粉胞子器のそれ
に似ており、クリーム色で、生育につれて黒化するスラ
イム中に生じる。スポロドチウムはしばしば柄を有する
。

（ｓｅＬａｃｅｏｕｓ）。

オートミル寒天上でＡ−３２７２グは、１２日間で直径
乙ｊ鶴のコロニーを形成する。コロニーは不規則な扇形
に分かれ、放射状のひだを形成し。

それに沿って最初に粉胞子器が見られる。コロニーが生
育するにつれて粉胞子器は全体の表面に不規則に単独で
あるいはかたまって生じる。コロニー表面は初期には白
色で、やがてベージュ色となり、平担でビロード状であ
る。粉胞子器は、生育が事実上停止したとき、極めて豊
富であり、菌体表面の変化によって強調される。その表
面は圧着され、遊離した菌糸は殆んどなくなる。周縁は
不規則な鈍鋸歯状を呈するかまたは裂は目がある。

コロニーの裏面は黄白色であり、生育につれて明褐色と
なる。

粉子器は菌柄を持ち（５ｔｉｐｉＬａｔｅ　）　、細球
形ないし腎臓形であり、柄を有しく　５ｃＬａｃｅｎｏ
ｕｓ　）　、黒色である。それは当初無色であるが、後
に褐色ないし黒色のシェードを持つ。幼若期の無色ない
し明褐色の粉胞子器では縦方向の綿線が極めて容易に見
　ｌ　９− 分けられる。そこでは、緯線細胞の薄壁性の無色の線が
、厚壁性の暗褐色細胞によって縁取られている。

成熟期の黒色粉胞子器では、綿線は、上部粉胞子器表面
を横切る鋭い連続した縦方向の隆起となる。乾燥し、成
熟した粉胞子器の壁はしばしばつぶれて、側面の腎臓形
外観が目立つようになる。

オートミル寒天上の粉胞子器は、長さ２３３ないし３／
９μであり、巾／ｊ乙ないしユ１７μであり、平均サイ
ズ２７２×／７９μである。麦芽エキス寒天の場合と同
様に、柄は明褐色、２〜６個の細胞からなり、２．種類
のタイプがある。両タイプは、麦芽エキス寒天の場合に
ついて記載したとおれである。タイプ■は長さりりない
し３５μ。

平均３／μである。その粉胞子器表面における巾はｊμ
、中間部での巾３グμ、頂部のクラブ形の部分の巾ｊμ
である。頂部で鉤状になった柄のタイプ■は、長さ＆、
２ないし７ｔμ、　平均ｊθμ、ｌ］し、タイプ■の柄
は麦芽エキス寒天の場合よりや５短いが、大きさは文献
に記載されている範囲内に入る。

ポテト−テキスローズ寒天上、Ａ−３２７２’ｌ−は／
２日間で直径オθＵとなる。気中菌糸は、コロニー中心
部分の凡そ３θ７１ｆｆ＋に主として発生する。

菌体のこの部分は平担でビロード状であり、初期には白
色であるが、生育するにつれて明灰色となる。コロニー
は扇形に分れ、不規則な裂目を生じる。この外観は、褐
色ないし黒色の粉胞子器およびそれより多いスポロドチ
ウムの形成によって強調される。裂目間の菌体域は圧着
され、事実上粉胞子器を欠き、僅かなスポロドチウムが
存在する。

菌体の巾３ｕの外縁部は培地表面下にある（　ｓｕｂ−
ｍｅｒｇｅｄ　）。

ポテト＼−テキスローズ寒天上の粉胞子器の特性は、麦
芽エキス寒天およびオートミル寒天の場合について述べ
たのと同様である。この培地における粉胞子器の形成率
は、寒天が乾燥するに従って増大する。この粉胞子器は
、長さ２／ｆないし一２θ− ２ざざμ、巾ｌグθないし２１Ｏμ、平均２６ｆＸ／ｌ
θμである。クラブ状の柄の長さは、３ｆないしょ２μ
、平均グ２μであり、鉤状の柄の長さは、を乙ないし７
θμ、平均５ｇμである。各タイプの直径は、麦芽エキ
ス寒天およびオートミル寒天について記載したものと一
致する。オートミル寒天およびポテト−テキストローズ
寒天上における分生胞子柄、検子および芳性胞子の形態
および大きさは麦芽エキス寒天上の場合と同様である。

スポロドチウムは上記３種の培地すべてにおいて同様に
形成され・その形成は過剰の湿気によって増強される。

このため、麦芽エキス寒天およびオートミル寒天より湿
気に富むポテト−デキストローズ寒天上では、粉胞子器
よりスポロドチウムノ方が多く形成される。スポロドチ
ウムは、これら３種のすべての培地上で、それぞれ大き
さが大巾に相違する。分生胞子を持っている表面の周縁
にはクラブ形の柄は常に存在する。分生胞子は粉胞子器
のそれに等しい。ケトメラ属の典型的なアナモルフィッ
クの形態ではあるが、スポロドチウムは種の決定上重要
な要素ではない。

）、−３！、７２’ＡはタイプＩとタイプ■の両方の柄
を有するので、タイプＩの柄だけ有するケトメラ・オブ
ロンカとは異なる。Ｃ６サーシノセタは２種のタイプの
柄を有し、その一方は頂部で／ないしグ巻きの明らかな
ラセン形をしており、鋭い（ａｃｃｕ−１旧ｎａＬｃ）
先端を有するので、に−３２７２グの柄はＣ，サーシノ
セタのそれとは異る。Ｃ，サーシノセタの柄は、１２個
にも達する隔膜を有し、長さは９θ０μにも及ぶ。Ｃ，
サーシノセタの両タイプの柄は、Ａ−３２７２１１の柄
より道かに長く、複雑である。さらにＣ，サーシノセタ
の分生胞子の長さは。

１’、−３２７，２１１の分生胞子の長さの約２倍であ
る。

柄および分生胞子は、に−３２７２’ｌをケトメラ属の
他の種と区別するのに有用である。

Ａ−３，２７，２１１培養菌の３種の培地における粉胞
子器およびその種の成分（柄１分生胞子原細胞および粉
胞子器胞子）の形態は相互に一致し、かつ前記文献の記
載と一致した。

抗生物質Ａ−３２７２’ｌの産生に有用なケトメラ１３
− ・ラフイゲラ・スウィフト菌は、オランダ領アンチル諸
島りラカオで収集した土壌標本から最初に分離され、　
Ｎｏｒもｈｅｒｎ　Ｒｃｇｉｏｎａｌ　Ｒｅ５ｅａｒｃ
ｂ　Ｃｅｎ１．ｅｒ　、　Ｕ。

Ｓ、　Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　　ｏｒＡｇｒｉｃｕｌ　
Ｌｕｒｅ　　、　　ＡｇｒｉｃｕｌｔｕＩ７１１　　Ｒ
ｅ５ｅａｒｃｌ＋５ｅｒｖｉｃｅ　、　Ｐｅｏｒｉａ　
、　ｌ１ｌｉｎｏｉｓ　、乙ｌ乙０１１　、Ｕ、Ｓ、Ａ
、に寄託されてその蒐集菌に加えられており、ＮＲＲＬ
Ｎα１．２３３／の番号で一般に利用可能になっている
。

他の微生物の場合と同様に、Ａ−３２７２’を生産菌で
あるケトメラ・ラフイゲラ・スウイフトＮＲＲＬＮα／
、２３３／は変異し得る。例えば、自然変異株。

自然もしくは人工突然変異株、導入接合株（ｔｒａｎｓ
−ｃｏｎ　ｊｕｇａｎｔ　）　、組換え株（組換えＤＮ
Ａまたはプラスミドを含む）などがＮＲＲＬＮα／２３
３／株から得られるが１本発明で利用するには抗生物＄
−３２７，２ｔｔを産生しなければならない。

Ａ−３２７２’ｌ混合物はいくつかの個々の因子を含む
。これまでに単離された因子は、Ａ−３，２７２ゲ因子
Ａ、ＢおよびＣと命名されている。有用性の記載などに
おいて用いる〃抗生物質Ａ−３２７２４ｔｔｔ　　　　
　　！という用語は、簡潔化のために用いるものであり
一２グ一 つて、Ａ−３２７２グ混合物、Ａ−３２７２グ因子Ａ。

ＢおよびＣからなる群の物質のいずれかを意味する。

本発明のＡ−３２７２１１の各因子は互いに構造的に関
連している。培養培地から少なくとも３種の抗生物質因
子が抽出され、それらは混合物すなわち、　Ａ−３２７
２’ｌ−混合物として取得される。Ａ　−３２７２’ｌ
混合物における各因子の比率は、用いられた培養条件に
よって変化する。

以下に、これまでに得られたＡ−３２７１を因子の物理
的、光学的特性を説明する。

抗生物質Ａ−３２７２’ｌ−因子Ａは白色無晶形粉末で
あって、融点約１７オ〜１７乙”Ｃ（分解）を示す。

核磁気共鳴スペクトル（ＮＭＲ）、硫酸エステルの定量
および電界脱離電子衝撃賞量分析による各データを総合
して決定した分子量は約７３ｇ・実験式はＣ３３ＨＪｔ
Ｏ／　／”２Ｎａ、２である。

Ａ−３２７２グ因子Ａの試料を、０２モル塩化アンモニ
ウム溶液により電界脱離質量分析に付した。

この条件下で、因子Ａは、６９ｔ（遊離酸）。

乙／ＩＩ（遊離酸−５Ｏ３）、オ９７（遊離酸−５ｏ３
゜−Ｈ，２０，＋Ｈ＋’）　、　！；　／　７　（遊離
酸−，２ＳＯ３，−Ｈ，！Ｏ，＋Ｈ＋）、グｊ乙のピー
クを与えた。

Ａ−３，２７２１１−因子Ａの赤外吸収スペクトル（臭
化カリウムペレット）は、第１図に示すとおりであって
、顕著な極大吸収は次のとおりである。

３グ２乙（強）、、２９２３（強）　、２１３−２Ｃ強
）、／７３乙（巾）。

１７２θ（中）、／乙ｌ乙（中）、／！；９θ（中）、
ｌグｊざ（中）。

１３１３（肩）　、　／３７！；（相関）、Ｉ’、２１
Ａ／（極強’）、／／１３（弱）、１０乙♂（強）、９
１／（強）、♂ざグ（弱）、ざ乙ｊ（弱）ざθ３（中）
、７７／（相間）、７２．２（弱）、乙ざｊ（弱）、乙
２ｊ（弱）、３１／（弱）ｃｎ＋　　０ 水中における抗生物質Ａ−３２７２１１因子Ａの紫外吸
収スペクトルは、酸または塩基の添加によって変化せず
５表工に示す極大吸収を与える。

表　　　ｌ 抗生物質Ａ−３２７２１１因子Ａの紫外吸収スペクトル
λｆｎａＸ　”　（ε） ２乙３ｎｍ　　（３３３） 、２７／ｎｍ　（ｓｈ　）　（２３，りｓｂ−眉 抗生物質Ａ−３２７２１１−因子ＡのＮＭＲスペクトル
（ＴＭＳを内部標準として使用し、　ＤＭＳＯ−ｄ、を
溶媒とし、１００ＭＨｚで測定）は下記表２に示すとお
りである。

表　　λ 共鳴状態　　化学シフト、δ、　ｐＰｍ　　　　プロＩ
・ン数三重線　　　　　乙ざθ　　　　　　　ｌ三重線
　　　　　４７グ　　　　　　ノ多重線　　　　　４ｔ
、乙７　　　　　　ｌ三重線　　　　　久乙０　　　　
　　　／（交換用）多重線　　　　　３．４ｔθ　　　
　　　ｌ三重線　　　　〜ユｊ　　　　　　　溶媒と重
複−重線　　　　　／９７　　　　　３ 三重線　　　　　θｆグ　　　　　　３抗生物質Ａ−３
２７２グ因子Ａの　Ｃ−ＮＭＲスペクトル（ＴＭＳを内
部標準とし、溶媒としてＤＭＳＯ−ｄ。

を用いて測定）はいくつかの特徴を示す。その化−，２
７− 表　　　３ １　　　　　　　　　　　　　ノア００２　　　　　　
　　　　　　　／３３．グ′３　　　　　　　　　　　
　　　　ｌグ２７グ　　　　　　　　　　　　／／まｌ
′！；　　　　　　　　　　　　　　　　／１０グ乙　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　７ｊ
ｇ７　　　　　　　　　　　　　　　７Ｑｇｇ　　　　
　　　　　　　　　　　　　３鳳９　　　　　　　　　
　　　　　　　３Ｑ、２１θ　　　　　　　　　　　　
　　　　　３／２／／　　　　　　　　　　　　　　　
　　　３θ９／２　　　　　　　　　　　　　　　　．
２５！３ノ３　　　　　　　　　　２９．θ７ ／グ　　　　　　　　　　　　　２Ｉｒ７３／　５　　
　　　　　　　　　　　　　　２ｆ３ノ乙　　　　　　
　　　　　２３．／ ／７　　　　　　　　　　　　　　　　２３．θ２ｇ− ／Ｉｆ　　　　　　　　　　　　　　　　２２．／／ワ
　　　　　　　　　２θ！ ユθ　　　　　　　　　　　　　　　／３．９１２個の
炭素原子を表わし、芳香環を通してのユ重の対称軸を示
す ２　炭化水素鎖のいくつかの炭素原子（その数は不明）
を表オつす。

３７個以上の炭素原子を表わすと推定される。

上記の物理化学的テークの組合せに基いて、抗生物質Ａ
−３２７２１１因子Ａは下記の構造式を有するものと考
えられる。

（以下余白） 抗生物質Ａ−３２７２’ｌ因子Ｂは白色無晶形粉末であ
って、融点約／乙０〜／乙２°Ｃ（分解）を示す。

ＮＭＲスペクトル、硫酸エステルの定量および電界脱離
電子衝撃質量分析によるテークを総合して決定した分子
量は約７３ざ、実験式はＣ３３Ｈ，，０７７Ｓ、２Ｎａ
　、２である。

Ａ−３２７２１１因子Ｂの試料を、０２モル塩化アンモ
ニウム溶液により電界脱離質量分析に付した。

この条件で、因子Ｂは同一条件下で測定した因子Ａで観
察されたのと同じピークを示す。

Ａ−３２７２’ｌ因子Ｂの赤外吸収スペクトル（臭化カ
リウムペレット）は、第２図に示すとおりであって、顕
著な極大吸収は次のとおりである。３グθ２（強）、３
弘３２（強）　、　２９２３Ｃ強）、２ざｊ３（強）、
／７３３（中）、／乙／乙（中）、／３９／（相関）。

／’ｌ−３３Ｃ中）、／３７６Ｃ弱）、／２μ２（極強
）、／／２≠（弱）、／θ乙乙（強）、／θ３２（肩）
、９♂θ（強）。

９０３；（弱）　、　７９．！；（中）、７乙７（相関
）、７２／（弱）。

乙ざｌｌ（弱）、乙７θ（肩）、６乙２（肩）、乙／７
（稍弓９゜３７９Ｃ中）ｃｍｏ 中性水溶液で測定した紫外Ｘ吸収スペクトルは表グに示
す極大吸収を与える。

表ψ 抗生物質に一３２７２’ｌ因子Ｂの紫外吸収スペクトル
λｍａｘ”（ε） ２乙！；ｎｍ（３２／） ２７／　ｎｍ　（ｓｈ′）（２’ｉ’？）’Ｂｂ−肩 抗生物質Ａ−３２７２≠因子ＢのＮＭＲスペクトル（Ｔ
ＭＳを内部標準とし、　ＤＭＳＯ−ｄ、を溶媒として使
用し、／θθ■ｈで測定）は下記表ｊに示すとおりであ
る。

（以下余白） 表５ 共鳴状態　　　　化学シフト、δ、ｐｐｍ　　　プロト
ン数三重線　　　　　　　乙、７と　　　　　　　／二
重線　　　　　　　乙７３　　　　　　２多重線　　　
　　　　’Ａ９３　　　　　　　　／多重線　　　　　
　　ｌＡθと　　　　　　　／三重線　　　　　　　〜
２．３　　　　　　　溶媒と重複−重線　　　　　　　
１９１　　　　　　３三重線　　　　　　　Ｏｆ！；　
　　　　　　　３抗生物質Ａ−３２７２，’ｌ因子Ｂの
　Ｃ−蘭スベクトル（ＴＭＳを内部標準とし、　ＤＭＳ
Ｏ−ｄ該溶媒として使用）はし枢つかの特徴を示す。そ
の化学シフト（ｐｐｍ）は表乙に示すとおりである。

表６ 番号　　　　ｐｐｍ ／　　　　／乙９ど ２　　　　　　／、ｆ３．ｌｌ・　　　　　　゛・３　
　　　／グ２７ ３７− ｇ　　　　　　　　　　　　／／３１’！；　　　　　
　　　　　　　　　　／１０３乙　　　　　　　　　　
　　　　　７ｉ？７　　　　　　　　　　　　　　　７
ＱＩざ　　　　　　　　　　　　　　　乙２９９　　　
　　　　　　　　　　　　　’Ａｌ／１０　　　　　　
　　　　　　　　ψ０２／　／　　　　　　　　　　　
　　　　３９．’１／２　　　　　　　　　　　　　　
３３Ｊ／３　　　　　　　　　　　　　　　３７７／グ
　　　　　　　　　　　　　　３ｊ２／　、ｆｆ　　　
　　　　　　　　　　　　３１２゜／乙　　　　　　　
　　　３０１ ／７　　　　　　　　　　　　　　．２９９／ざ　　　
　　　　　　　　２９θ２ ／９　　　　　　　　　　　　　２りθ２θ　　　　　
　　　　　　　　　２グｊ、２／　　　　　　　　　　
　　　　　　２２．０２２　　　　　　　　　　　　　
’　　　２０７２３　　　　　　　　　　　　　　　　
／３．９２グ　　　　　　　　　　　　　　　　００３
２− ７２個の炭素原子を表わし、芳香ｉを通しての二重の対
称軸を示す。

２炭化水素鎖のし枢つかの（数は不明）炭素原子を表わ
す。

ＮＭＲスペクトルのシフトから見て、因子Ｂは２個のメ
チン基に関する立体構造に関して因子Ａと異り、さらに
両因子はアセチル基の位置に関して相違する。

抗生物質入−３２７２’ｌ因子Ｃは白色結晶物質であっ
て、融点約／♂ｊ〜／ざ乙°Ｃを示す。

Ａ−３，２，７２３因子Ｃの赤外吸収スペクトル（臭化
カリウムペレット）は第３図に示すとおりであり。

次に示す顕著な極大吸収を与える。３’１９ｇ（中）。

３１１−！；２（中）、２９２２Ｃ強）、２１３／（強
）　、　／７３３（強）、　／７２４１（強）、／乙乙
２（強）、／乙／６（中）。

／！；９／（中）、／グ乙ｊ（中）、／グｊｊ（中）、
／グθ９（弱）、１３７ｇ（中）、／２３７（極強）、
／／３２（弱）。

／θ乙乙（強）　、　１０！；’ＩＣ肩）　、　１０２
．３；Ｃ弱）、９１／（強）、了ざθ（弱）、＃Ｊ（弱
）、７９３；（中’）、７２／（弱）、６乙ＩＩ（弱）
、乙３７（弱）、６２θ（弱）、３？グ（弱）、Ｊ７θ
（弱）、ｊ乙３（弱）、グざ／（弱）礪　。

抗生物質Ａ−３２７２１１因子ＣのＮＭＲスペクトル（
ＴＭＳを内部標準とし、　ＤＭＳＯ−ｄ、を溶媒として
使用し、／θθ■ｈで測定）は表７に示すとおりである
。

表７ 共鳴状態　　　化学シフト、δ、ｐｐｍ　　　プロ１−
ン数三重線　　　　　　　乙♂０　　　　　　　／二重
線　　　　　　　乙、７３　　　　　２多重線　　　　
　　　ｌＡ９０　　　　　　２三重線　　　　　　　〜
１．５　　　　　　溶媒と重複−重線　　　　　　　ユ
θ２３ 三重線　　　　　　　０ｇ３３ 水中の抗生物質Ａ−３２７２’ｌ因子Ｃの紫外吸収スペ
ク１、ＪＬ／は、　ＵＶｍａｘ　＝　２乙、：ｌｎｍ　
、　Ｅ’％−３，３／を示Ｃｍ す。

因子Ｃは因子Ａと密接な関係を有し、暫時メタノール中
で放置するか、加熱すると因子Ａに変換３５− される。

ト記各因子はすべて水およびメタノールに可溶である。

ｋ−３２７２’ｌ混合物の因子Ａ、ＢおよびＣは、シリ
カゲル薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）およびペーパ
ークロマトグラフィーによって相互に分離され１区別さ
れ得る。スタフイロコ・ソカス・アウレウスをバイオオ
ートグラフィーの検出菌として用いた。因子Ａ、Ｂおよ
びＣのおよそのＭ値は表にに示されている。

表ざ ビ値 八　　　〇ｇ’Ｉ　　　０３９　　　θ７９　　θ乙／
Ｂ　　　θｇ／　　　０３！；　　　Ｏ’１７　　　θ
３乙Ｃ０７９０グ／　　θｊ９　　θ２／ ／ペーパー系 Ｐ　紙：ワツトマン階／（未処理） 溶　媒二Ａ−メタノール：０／ＮＨＣＡ（３：／）Ｂ　
＝　ｎ−ブタノール：酢酸：水（３：／：／）Ｃ−酢酸
エチル：酢酸：水（３：／：／）２薄層系 媒　体：メルク、ダルムスタットーシリカゲル乙θ溶　
媒：Ｄ−アセトン；水（／？：／）因子Ａ、ＢおよびＣ
の各因子の電気滴定はいずれも３より少ないｐＫａを示
す。この値は、各因子類 がアルカリ金属およびアルカリ土謹属ばかりでななく、
アンモニウムおよび置換アンモニウムイオンと塩を形成
することを示唆する。

抗生物質因子Ａ、ＢおよびＣを含む抗生物質Ａ−３２７
２’ｌ混合物、抗生物質Ａ−３２７２弘因子Ａ。

抗生物質Ａ−３２７２’ｌ因子Ｂならびに抗生物質Ａ　
−３２７２’ｌ因子Ｃからなる群から選＼ばれた抗生物
質Ａ−３２７２’ｌの製造方法も今回見出された。該製
造方法は。

ａ）ケトメラ・ラフイゲラ・スウイフトＮＲＲＬ　ＮＩ
Ｌ／２３３／またはそのに一３２７２弘生産性変異株（
ｍｕ　Ｌａｎｔ　ａｎｄ　ｖａｒｉａｎｔ）を、資化可
能な炭素源、窒素源および無機塩を含む培地中、深部通
気培養条件　ｊ　６− 下に、実質量の抗生物質活性が得られるまで培養し。

ｂ）必要に応じて培養培地から抗生物質Ａ−３２７２’
１混合物を分離し。

Ｃ）必要に応じて抗生物質Ａ−３２７２’ｌ−因子Ａ、
ＢまたはＣを単離する ことからなる。

実質量の抗生物質活性が培養微生物によって生産された
とき、抗生物質活性の大部分は一般に培地中に見出され
るが、少量の抗生物質活性は菌体中にも存在する。抗生
物質に一３２７２１１ｔ混合物は。

濾過助剤を用いて濾過することにより、その大部分が容
易に発酵混合物から分離される。濾過助剤と菌体からな
るケーキは保存しておく。発酵ろ液はそのま＼のｐＴ（
で等容積の適当な溶媒２例えばｎ−ブタノールで抽出し
、粗大−３２７２’ｌ混合物を含む抽出液を小容積まで
濃縮する。前に保存しておいたケーキはメタノールで抽
出する。抽出液を濃縮して残留する水相を、水を飽和さ
せたｎ−ブタノールで抽出し、水層を捨てる。

菌体からのメタノール抽出物および培地からのブタノー
ル抽出物を、それぞれ油状物まで濃縮してメタノールに
溶かし、大量のイソプロピルアルコールに注加する。形
成された活性沈澱物を枦取する。菌体および培養炉液か
ら得られた粗製のＡ−３２７２１１は、クロマトグラフ
ィー法によって。

さらに個々の因子に分離され、そして精製され得る。

ケトメラ・ラフイゲス・スウイフトＮＲＲＬ　Ｎ［Ｌ／
、２３３／でＡ−３２７２’ｌ−混合物を製造するため
には。

多くの種類の培地が用いられる。しかしながら。

生産経済、最大収率および精製の簡易性のために。

ある種の培地が好まれる。例えば、好ましい炭素源は、
クルコース、シュクロース、テキストローズ、マルト−
スおよびグリセロールである。炭素源の至適濃度は約２
ないし約６重量％である。好、　　ましい窒素源には、
ペプトンおよび酵素水解カゼインが含まれる。

本微生物の生育に必要な微量要素は、培地の他の成分中
に、微生物の生育と生合成に必要とされナトリウム、カ
リウム、マグネシウム、カルシウム、アンモニウム、塩
素、炭酸、リン酸、硫酸。

硝酸などのイオンを与える可溶性栄養無機塩を加えるの
が望ましい。

抗生物質Ａ−３２７２’ｌ−混合物の実質量を製造する
ためには、タンク中での深部通気培養が好ましい。

しかしながら、抗生物質Ａ−３２７２４を混合物の少量
は振掃フラスコ培養によっても得られる。タンク培養の
ためには０種培養菌を用いるのがよい。種培養菌は、小
容積の培地に微生物の胞子、菌糸切片または凍結乾燥ペ
レットを用いて接種し、新鮮かつ旺盛に生育している培
養菌を得ることによっで調製される。これを大容積タン
クに移し、適当時間培養を続けると抗生物質１’、−３
２７１’ｌ混合物が最高の収率で得られる。

抗生物質Ａ−３２７２’ｌ混合物の最高収率は、温度約
２５°Ｃにおいて得られる。

深部好気的培養において通常行われるように、　　　　
　、培地中に無菌空気を拡散させる。微生物を効果的　
　　　　１に生育させるためにタンク培養において使用
する空気の量は、／θθないしＳθθｒｐｍで攪拌して
いるとき、０／ないし１．５容積（空気）／容積（培地
）７分（７７７７ｍ）である。もし発泡が問題になるな
ら、大規模発酵培地に１例えばポリプロピレングリコー
ルのような消泡剤の少量（θ２耐／β）を添加する必要
がある。

抗生物質活性は、一般に培養時間２’１時間後に現われ
、少くともグ日間は存在し続ける。抗生物質生産のピー
クは２ないしｔ日間の培養期間で得られる。

Ａ−３２７２’ｌ混合物の生産は１発酵中、寒天拡散法
または濁度法によってモニターされ得る。このための使
用に適する検定用菌はスタフィロコッカス・アウレウス
またはミクロコツカス・ルテウスである。

抗生物質Ａ−３２７２１１混合物は常法によって培養培
地から回収される。抗生物質Ａ−３２．７２１１−混合
物の主要部は発酵培地中に存在する。従って、抗生物質
Ａ−３２７２ＩＩ−混合物の良好な回収は、先ず濾過に
より菌体を除くことによって行オ〕れる。除去した菌は
保存しておく。炉液は種々の方法によって処理して抗生
物質Ａ−３２７２’ｌ混合物を精製する。

好ましい方法によれば、培養Ｐ液を培地ｐＨで適当な溶
媒（例えばｎ−ブタノール）で抽出する。この抽出液を
濃縮して溶媒を除去し、油状物を得る。

この油状物を適当な溶媒（例えばメタノール）に溶かし
、減圧下にメタノールを留去する操作を数回行って油状
残渣を得る。この油状残渣を適当な溶媒（例えばメタノ
ール）に溶解し、この溶液を大量の、抗生物質Ａ−３２
７２’ｌを溶かさない溶媒（例えばイソプロピルアルコ
ール）に注加し、形成された析出物を戸数すれば、Ａ−
３２７２Ｉｌ混合物を得る。

菌体戸数固型物はメタノールで抽出し、抽出液を濃縮し
てメタノールを除去する。残留する水相を、水を飽和さ
せたブタノールで抽出し、抽出液を濃縮して油状残渣を
得る。この油状残渣を、上記の培養炉液からの油状物と
同様に処理して、八−３２，７２ダ混合物を得る。

この培地あるいは菌体から得られたＡ−３２７，ＩＩ混
合物からのＡ−３２７２，’ｌ各因子の分離は、さらに
吸着および溶出操作を行うことによって行われる。

例えばシリカゲルなどの吸着剤が有利に使用され得る。

抗菌性あるいは抗かび性製剤は、活性成分としての抗生
物質に一３２７２’ｌを、／またはそれ以上の担体もし
くは賦形剤と混合することによって製造される。抗生物
質Ａ−３，２７２’／−＋よ１種々の微生物の生育を阻
害する。すなわち、抗生物質Ａ−３２７２’１は、標準
的な抗生物質ディスク検定法で検定すると、プラム陽性
およびプラム陰性菌ばかりでなく。

ある種のカビに対しても有効である。その結果は表ｇに
示すとおりである。

（以下余白） 一グ３− 表ざ Ａ−３２７２１１ｔの各因子の抗菌スペクトル適用比 因子ダ／ｍｌ　／　２３グｊ　乙 Ａ　　　　３／θ　／／　　／２　　／３　　／３　−
−Ｂ　　　　３　　　／／　　／３　−　２０　２θ　
−ｃ　　　　５／θ　／２　　／２　　／７　　／ざ　
／ｊ／　＝　５ｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅ
ｕｓ　ＡＴＣＣ乙、！；３１Ｐ（Ｇ＋）、ｌ　＝　Ｍｉ
ｃｒｏｃｏｃｃｕｓ　Ｉｕｔｅｕｇ　ＡＴＣＣ９３４ｔ
／　（Ｇ＋　）３　＝　ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｇ　
　ｃｅｒａｖｉｓｉａｅ　ＡＴＣＣ２３乙乙（Ｆｕｎｇ
ｕｓ）１７　＝　５ｅｒｒａｔｉａ　ｍａｒＬｌｅｓｃ
ｅｎｓ　ＮＲＲＬ　Ｂ　、１ｇＩＧ−）３　＝：　Ｂａ
ｃｉｌｌｕｓ　５ｕｂｔｉｌｉｓ　ＡＴＣＣ６乙３３　
（Ｇ　−１−）　、ｇｒｏｗｎｏｎ　ａ　ｍ１ｎｅｒａ
ｌ　　５ａｌｔｓ　ｍｅｄｉｕｍ乙＝　Ｅｓｃｈｅｒｉ
ｃｈｉａ　ｃｏｌｉ　ＡＴＣＣＩＬｔ／３；７（Ｇ−）
　、　ｇｒｏｗｎｏｎ　ａ　ｍ１ｎｅｒａｌ　　５ａｌ
ｔｓ　ｍｅｄｉｕｍさらに、生理学的有効量の抗生物質
Ａ−３２７２１１を高血圧症の浦乳動物に投与して、高
血圧症哺乳動物の血圧を低下させる方法が見出された。

このための医薬組成物は、活性成分としての抗生物質Ａ
−３２７２１１を７種またはそれ以上の製薬上許容さｔ
ｔ− れる担体または賦形剤と共に含む。

Ａ−３２７２グの各因子は、すべて約２２！；ｎ＃／に
９（７）ＬＤ、ｏ値（マウス、Ｌｐ、）を示す。

Ａ−３２７２’ｌ因子Ａ、ＢおよびＣは抗高血圧症活性
を有する。例えば、因子Ａは、自然発生高血圧症のラッ
トに対し、２３ダ／ｋＱの用量で腹腔内注射を行うと、
その血圧を約７５％低下させる。因子ＢおよびＣは、自
然発生高血圧症のラットに対し、３０１１ｇ、／ｋｑの
用量で腹腔内注射を行うと、その血圧を約５０％低下さ
せる。Ａ’−３２７２’ｌ因子Ａ。

ＢおよびＣは、また酵素阻害作用を有する。例えば、因
子Ａ、ＢおよびＣのグリコジルトランスフェラーゼに対
する阻害作用■、ｏ値は、それぞれ７３　ｐｇ／ｖｒｌ
　、　９θｐｇ　／　ｍｌおよびＩ／ｐｇ／ｍｌである
。

本発明の操作をより完全に説明するために、以下に実施
例を示す。

実施例／ 第１次種培養物の調製と抗生物質に一３２７２’ｌ混合
物 ケトメラ・ラフイゲラ・スウィフトＮＲＲＬ　ＮＩＬ／
２３３／の寒天斜面培養用の培地を調製した。

グルコース　　　　　　　　　　１０θペプトン　　　
　　　　　　　　ｊθ 酵母エキス　　　　　　　　　　　３θ麦芽エキス　　
　　　　　　　　　３θＭｇ５Ｏ，−７に２０　　　　
　　　　　０　！；ＫＣ７ＩＯ，！ Ｆｅ５０．’７Ｈ，Ｏｏθθ２ 寒天　　　　　２０θ 脱イオン水　　　　　　　全量を／ｌとする適量培地の
ｐＨは６θであった。

上記成分で調製した栄養寒天斜面にケトメラ・ラフイゲ
ラ・スウィフトＮＲＲＬ　ｍ／１３３／の胞子を接種し
、この接種斜面を約２！°ｃで約７日間培養した。成熟
した寒天斜面を無菌蒸留水で覆い、滅菌器具でこすって
胞子および菌糸を遊離させた。

こうして得た胞子懸濁液／ゴを用いて種培地ｊθ耐に接
種した。種培養用の種菌の他の調製法として、水性胞子
懸濁液の代りに凍結乾燥ペレットを用いた。凍結乾燥の
ための胞子懸油液の調製は。

無菌蒸留水の代りに無菌牛血清を用いた点を除いて水性
胞子懸濁液の調製と同じであった。凍結乾燥ペレットは
既知方法によって調製した。種培養用培地の組成は次の
とおりであった。

シュクローズ　　　　　　　　　２．３．０糖蜜　　　
　　　　　　　　　　３乙θコーンスチーフ゛リカー　
　　　　　　　　　乙、θ麦芽エキス　　　　　　　　
　　　１０θ酵素水解カセイン　　　　　　　／θθに
、２ＨＰＯ，ユθ 脱イオン水　　　　　　　全量を／ｌとする適量’　　
Ｎ−Ｚ−Ｃａａｅ　（Ｈｕｍｋｏ　５ｈｅｒｆｉｅｌｄ
　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、　。

Ｍｅｍｐｈｉｓ、　Ｔｅｎｎｅｓｓｅａ）オートクレー
ブで滅菌後の培地のｐＨは６ｊであった。この培地を２
３０ｍ１の広ロエルレンマイヤーフラスコに入れ、約２
３　’Ｃで約ｇ、ｒ時間、ｉ径２インチの皿上を２ｊθ
ｒｐｍで振動するロータリーシェーカーで振盪しながら
培養した。得られた一グアー 培養物は小型培養器−＼の接種（培養器培地に対して約
／容爪％の種培地を用いる）または大量培養のための第
二炭種培地（上記と同一組成）への種接に用いる。

培養済第二次培地（ざθθｍｌ）を用いて、下記組成の
滅菌生産培地１０θＡに接種した。

シリコーン消泡剤′　　　　　　　θユマルトーズ　　
　　　　　　　　　２ｊθグリセロール　　　　　　　
　　２０θコーンスチープリカー　　　　　　　　　ス
θ酵素氷解カゼイン−２５θ グルタミン酸モノナトリウム　　　　　１００Ｍｇ５Ｏ
□・７　Ｈ，２００，３ ＫＨ，２Ｐ　Ｏ、ｉθ 水道水　　　　　　　　全量を／θｏｎとする適量’　
　Ｄｏｗ−Ｃｏｒｎｉｎｇ　Ａｎｔｉｆｏａｍ　’に２
Ｎ−Ｚ−Ａｍｉｎｅ　Ａ　（Ｈｕｍｋｏ　５ｈｅｆｆｉ
ｅｌｄ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、　。

Ｍａｍｌ＞ｈｉｓ、　Ｔｅｎｎｅｓｓｅｅ　　　　　　
　　　　　　　　　　　　’この培地のｐＨは滅菌前で
６．３．滅菌後で６．！；でＩＩ　　Ｊ’ あった。

接種後の生庁培地は、／乙３１の発酵タンク中。

２　ｊ　’Ｃで乙６時間発酵させた。発酵培地には、滅
菌空気を、０３ｖ／ｖ／ｍの比で通気し１通常の攪拌機
を用い、３θ０ｒｐｍで攪拌した。

実施例ス 抗生物質Ａ−３２７２グの分離 実施例／に記載した操作で得られた全発酵グロス（／６
θ７１）を、３％の濾過助剤（Ｈｙｆｌｏ　５ｕｐｅｒ
ｃｅｌ　。

ａ　　ｄｉａｔｏｍａｃｅｏｕｓ　　ｅａｒｔｈ、　　
Ｊｏｈｎｓ−Ｍａｎｖｉｌｌｅ　　Ｐｒｏｄｕｃｔｓ　
　Ｃｏｒｐｏ−ｒａｔｉｏｎ　）を用い、フィルタプレ
スで涙過し、菌体固形物は別にとっておく。濾過ブロス
を等容積のｎ−ブタノールで抽出し、水層は廃棄した。

ｎ　−ブタノール抽出液は約／βまで濃縮し、メタノー
ルｊθθ１Ｉｌｔで希釈し、イソプロピルアルコール２
ｊ１（２θ倍容）に注加した。析出した活性物質を戸数
し、アセトンで洗浄し、真空乾燥した。重量９／ｊ■。

菌体固形物（先にとっておいたもの）を／ｊ倍容のメタ
ノールで２回抽出し、抽出液を合併し。

−Ｉｆ−６− 濃縮してメタノールを除去した。残留する水相を等容積
の水飽和ｎ−ブタノールで２回抽出し、水層を廃棄した
。ｎ−ブタノール抽出液を合併し。

減圧下に約／Ｅの油状物を得るまで濃縮した。この油状
物をメタノールｊθθｍｌに溶かし、よく攪拌し、濾過
し、Ｐ液を再び減圧下に濃縮し、得られた油状物をメタ
ノール、２３０ｙｎｌに溶かし、濾過した。炉液をイソ
プロピルアルコール３ｋ（２θ倍容）に注加して沈澱を
形成させた。析出物を沖取し、アセトンで洗浄し、真空
で乾燥させた。重量２９３ｆ。

Ａ−３２７２’ｌ混合物の精製と各因子の分離は、シリ
カゲルカラムを用いて行った。カラムは、グレード６２
のシリカゲル（Ｇｒｉｃｅ）をアセトンでスラリー化し
て調製した。このシリカゲルをカラム（／３×７３θｍ
、容積／θ７りに充填し、アセトンで洗浄した。上記の
ようにして得られた抗生物質Ａ−３２７２４を混合物ｊ
ｊｇを水からグレード乙ユのシリカゲルに吸着乾燥させ
、先に調製したシリカゲルカラムの上に加えた。このカ
ラムを３θθ〜弘θθｍｌ／ｈｒの流速で、アセトンに
より溶出した。７θθ〜ざθθｙｓｌずつの分画を２時
間ごとに集めた。各分画を、バニリン／硫酸スプレーを
用いる薄層クロマトグラフィーで検定した。このスプレ
ーは、抗生物質Ａ−３２７２’ｌのいくつかの因子で明
赤色のスポットを生ずる。このスポット検定に基いて１
分画／〜／乙を廃棄した。分画／７〜ノ２は合併し、因
子ＡおよびＢを含むものと決定した。これを放置しある
いは処理して、因子ＡおよびＢに対応する脱硫酸化合物
（融点約ｓｇ′ｃ）が得られた。さらに、因子Ａおよび
Ｂに対応する脱硫酸脱アセチル化合物（融点約９９°Ｃ
）も得られた。

分画２３〜３’ｌは純粋な因子Ｂを与えた。分画３５〜
／／’Ｉは分解産物であった。分画／／ｊ〜２２乙は廃
棄した。分画２．２７〜２３ｇは純粋な因子Ａを与えた
。分画２３９〜２１１−９は因子Ｃであった。

溶出液を７％水含有アセトンに変えて、純粋な因子Ｃを
得た。

−ｊ／一 実施例３ 因子ＡおよびＢの単離 因子ＡおよびＢの改良された単離法は次のようにして行
う。実施例／で得た乾燥粒抗生物質混合物１１３．３１
をおよそ２θ■／ｙｎｌの濃度でメタノールに溶かし、
−夜還流した。次いで濾過し、Ｐ液を減圧下に蒸発乾固
した。粗抗生物質混合物をメタノール中で還流するこの
操作は、因子Ｃを因子Ａに変換するものである。得られ
た固形物をアセトンおよびベンゼンで洗浄し、真空乾燥
した。乾燥後の固形物の重量は’７２乙ｆであった。

この固形物／ｆを水約、５πｔに溶かし、これをグレー
ド乙２のシリカゲル約／θ〜／３ｙに吸着させ、真空乾
燥した。これを、酢酸エチルを用いてグレード乙２のシ
リカゲルを充填した３θθｃｃＯカラムの上に加えた。

酢酸エチルにメタノールを加えた段階的濃度勾配をこの
カラムに適用する。

因子Ａは、３％メタノール−酢酸エチルによって溶出さ
れる。次いで、溶出溶媒の組成を変えると。

因子Ｂが７０％メタノール−酢酸エチルで溶出さ−ぐツ
ー れる。分画中の各因子は、バニリン／硫酸スプレーを用
いる薄層クロマトグラフィーによりその存在が検出され
得る。因子Ａは、メタノール−クロロホルム（２：／）
によるシリカゲルクロマトグラフィーにおいて因子Ｂよ
り早く移動することで因子Ｂと区別することができる。

実施例を 因子Ｃの単離 抗生物質Ａ−３２７．２’ｌ混合物（上記実施例ユで得
たもの）７０ｇを水に溶かした。この溶液のｐＨをざｊ
とし、ポリアミド（Ｐｏｌｙａｍｉｄｏ　Ｗｏｅ　１ｍ
　ｆｏｒ　ｃｏｌｕｍｎｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ
）　（４ｔ、　７　Ｘ　ｌ　ｊ；　ｃｍ　、容積／ｌ’
）でクロマトグラフした。／θθｖｔｌずつの分画を集
め。

各分画はその色調およびスタフィロコッカス・アウレウ
スに対する活性でモニターした。初期分画は１着色して
いてＳ、アウレウスに対し不活性であった。分画／〜２
０は廃棄した。その後の分画（２／〜、２９）は１着色
していてＳ、アウレウスに対して活性であった。最後の
分画（３θ〜グθ）は着色がなく、Ｓ、アウレウスに対
して活性であった。

分画２７〜２９を合併し、減圧濃縮して油状物を得た。

これを水に溶かし＼ユθ倍容Ｏ７タノールに注加した。

析出した沈澱を戸数し、廃棄した。

Ｐ液を減圧下に濃縮し、油状残留物を水に溶かし。

この水溶液を３倍のｎ−プロパツールに加えた。

析出した沈澱を戸数し、廃棄した。涙液を減圧下に濃縮
し、残留する油状物を温エタノール（約グθ°Ｃ）に溶
かし、暫時室温に放置した。析出した結晶を戸数した。

融点／ざｊ〜／ｇ乙°Ｃ０重量２θ／η。水晶は、ＮＭ
ＲｌＩＲおよびＵＶにより、因子Ｃと同定された。

分画３θ〜グθも同様に処理し、融点／ざグ〜／ｇ乙°
Ｃの製品２１０ｑを得た。水晶も、　ＮＭＲ。

ＩＲおよびＵＶにより、因子Ｃと同定された。

【図面の簡単な説明】

第１図は、Ａ−３２７，２％因子Ａの赤外吸収スペクト
ルを表わす。 第２図は、Ａ−３２７２１Ａ因子Ｂの赤外吸収スペクト
ルを表わす。 第３図は、Ａ−３２７２１１因子Ｃの赤外吸収スペクト
ルを表わす。 特許出願人　　　イーライ・リリー・アンド・カンパニ
ー５５−

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 ／下記（１）〜（４）よりなる群から選ばれた抗生物質
   Ａ−３２．７２グ。 （１）抗生物質物Ａ−３２７１’Ａ因子Ａ、ＢおよびＣ
   を含む抗生物質Ａ−３２７２１１混合物。 （２）抗生物質Ａ−３２７ユゲ因子Ａ。 （３）抗生物質Ａ−３２７２グ因子Ｂ。 （４）抗生物質に−３，２７，！ゲ因子Ｃ８２、抗生物
   質Ａ−３２７２グ因子Ａ、ＢおよびＣを含む特許請求の
   範囲／記載の抗生物質Ａ−３２７２１ｉｔ混合物。 ３下記（１）〜（８）の物理化学的性状を有する特許請
   求の範囲／記載の抗生物質Ａ−３２７２’ｌ因子八〇（
   １）融点：約１７ｊ〜／７乙°Ｃ（ｄ　ｅｃ、、　）。 （２）分子量ニア３ざ（核磁気共鳴スペクトル。 硫酸エステルの定量、電界脱離電子衝撃質量スペクトル
   による）。 一７−−８６７− （３）水溶液中における紫外吸収スペクトルの極大吸収
   ：　２Ａ３ｎｍ（ｔ＝３３３　）、２７／ｎｍ（肩）（
   ε＝２３２）。 （４）臭化カリウムペレット法による赤外吸収スペクト
   ル（第１図）の特性極大吸収： ３弘２６（強）、２９２３（強）、２乙−（強）。 ／７３６（中）、／７２０（中）、／乙／乙（中）。 ／３９θ（中）、／グｊざ（中）、／３１３（肩）。 ／３７！；（稍弱）、７２グ／（極強）、／／２３（弱
   ）。 ／θ乙ｇ（強）、９ざ／（強）、わ等（弱）、ど乙ｊ（
   弱）、ざθ３（中）、７７／（稍弱）、７２２（弱）。 乙ざ５（弱）、乙２ｊ（弱）、ｊとバ弱）ｍ−′。 （５）フロトン核磁気共鳴スペクトル（／θθ■（ｚ　
   、　ＴＮｉＳ内部標準、　ＤＭＳＯ−ｄ、中）：共鳴状
   態　化学シフト、δ、７ｍ　　プロトン数三重線　　　
   　ｇ、ｊｒθ　　　　／ 二重線　　　　４７グ　　　　ユ 多重線　　　　ｌＡ乙７　　　７ 二重線　　　　弘乙０　　　　／（交換可）多重線　　
   　　３．　’Ｉθ　　　　／−ノー 三重線　　　〜λ１．５　　　　　溶媒と重複−重線　
   　　　／９７　　　　　３ 多重線　　　〜ｌｊ　　　　Ｎグユ ー重線（［１］広）　１２３ 三重線　　　　０ざグ　　　　　　３ （６）′３Ｃ核磁気共鳴スペクトル（ＴＭＳ内部標準。 ＤＭＳＯ−６中）： 番　　号　　　　　　化学シフト、− ／　　　　　　　　　／７θθ ２　　　　　　　　１！；３、ｔ ３　　　　　　　　／グ２７ グ　　　　　　　　／　／３．／ ３　　　　　　　　　／／θグ 乙　　　　　　　　　７１５’ ７　　　　　　　　７θｇ ざ　　　　　　　　　３！ｊ２ ９　　　　　　　　　３２．２ １θ　　　　　　　　　３／、２ ／／　　　　　　　　　　　　　　３０９３− ／　３　　　　　　　　　　２９．０ ／４ｔ　　　　　　　　　　２と７ １．５′、２．ざｊ ｌ乙　　　　　　　２３．ｌ ／７　　　　　　　　　２！；、θ ｌざ　　　　　　　　　　２２．　／ ／９　　　　　　　　　２θざ ２θ　　　　　　　　　　／３．９ （７）溶媒に対する溶解性：水およびメタノールに可溶
   。 （８）物質の色調および外観二白色無晶形粉末。 久下記（１）〜（８）の物理化学的性状を有する特許請
   求の範囲／記載の抗生物質Ａ−３２７２’ｌ因子Ｂ０（
   １）融点：約ｌ乙θ〜／乙２°Ｃ（ｄｅｃ　）。 （２）分子量ニア３ＦＣ核磁気共鳴スペクトル。 硫酸エステルの定量、電界脱離電子衝撃質量スペクトル
   による）。 （３）水溶液中における紫外吸収スペクトルの極大吸収
   ：　−ＺＡ３ｎｒＡ（ε＝３２／　）　、２７／ｎｍ（
   肩）−グー （ε−ニゲ９）。 （４）臭化カリウムペレット法による赤外吸収スペクト
   ル（第２図）の特性極大吸収：３グ乙ざ（強）、３１１
   ３２Ｃ強）、、２９２３（強）　、　２７３−３　（強
   ）　。 ／７３３（中）、ｌ乙ｌ乙（中）、／！；／９（相関）
   。 ｌグｊ３（中）、／３７乙（弱）、１２グ２（極強）。 ｌ１２グ（弱）、ｌθ乙ざ（強）、／θ３２（肩）、９
   ざθ（強）、９θｊ（弱）、７９Ｊ−（中）、７乙７（
   相関）。 ７．２／（弱）、乙、ｒｇ（弱）、乙７θ（肩）、６乙
   ２（肩）。 乙／７（相関）、３７９（巾）ｃｔｎ　　。 （５）プロトン核磁気共鳴スペクトル（ｌθＱＷｆＨｚ
   。 ＴＭＳ内部標準、　ＤＭＳＯ−ｄ、中）：共鳴状態　化
   学シフト、δ、１９１１　　　　プロトン数三重線　　
   　　６．７ざ　　　　　ｌ 二重線　　　　乙、７３　　　　２ 多重線　　　　′Ａ９ｊ　　　　　　／多重線　　　　
   ｌＡＯざ　　　　　ｌ 三重線　　　　〜２．３　　　　　　溶媒と重複−重線
   　　　　１９Ｉｒ３ 三重線　　　　０ざ５３ （６）　／　ＪＣ核磁気共鳴スペクトル（ＴＭＳ内部標
   準。 ＤＭＳＯ−ｄ　、中）： ２　　　　　　　　　　　　１３３グ ３　　　　　　　　　　　　　／’Ｉ−２．７ＩＩ　　
   　　　　　　　　　　　　　／／３．／３　　　　　　
   　　　　　　　　／／θ３乙　　　　　　　　　　　　
   　　　　　　　　７！Ｌ９７　　　　　　　　　　　　
   ７２、ざ ざ　　　　　　　　　　　乙ノ、ワ ９　　　　　　　　　　　　　　４ｔ／／ｌθ　　　　
   　　　　　　　　　　ｌθ２１１　　　　　　　　　　
   　　　３５！グ／２　　　　　　　　　　　　　　３３
   ．！；／３　　　　　　　　　　　　　　３７７／　４
   ｔ　　　　　　　　　　　　　　３３．２／　３　　　
   　　　　　　　　　　　３１２／乙　　　　　　　　　
   　３ａｇ ／７　　　　　　　　　　２９．９ ／ｆ　　　　　　　　　　　２９．Ｃ １９２３，０ スθ　　　　　　　　　　２’１．３ ユｌ　　　　　　　　　　２２０ ２２　　　　　　　　　２θ７ ２３　　　　　　　　　　　／３．９ ２グ　　　　　　　　　　　θθ （７）溶媒に対する溶解性：水およびメタノールに可溶
   。 （８）物質の色調および外観：白色無晶形粉末。 左下記（１）〜（８）の物理化学的性状を有する特許請
   求の範囲／記載の抗生物質Ａ−３．２７２１１因子Ｃ３
   （１）融点：約ｌに３−／ざ乙°Ｃ （２）中性水溶液中における紫外吸収スペクトルの極大
   吸収：２１ｓ２ｎｍ（Ｅ’％−３３））。 ０ＩＬ （３）臭素カリウムペレット法による赤外吸収スペク！
   ・ル（第３図）の特性極大吸収：３グ９ざ（［１１）、
   ３グ、５２（巾）、、２９２２（強）。 −り− ｌ乙ｊ２（強）、ｌ乙ｌ乙（中）、／３９／Ｃ中）。 ／ｇ乙ｊ（中）　、　ｌｔｉ、！；３　（中）、／！θ
   ９（弱）。 １３７ｇ（中）、ｌス３７（極強）、／／３２（弱）。 ｌθ乙！ｃ強）、１０オｌ肩）、／θ、２５（弱）。 ９＆’／（強）、ＩｆＯ（弱）、Ｊ’、＜、ｔ（弱）、
   ７９Ｋ（中）、７２バ弱）、６４ｇ（弱）、乙３７（弱
   ）。 乙２θ（弱）、ｊ９グ（弱）、ｊざθ（弱）、ｊ乙３・
   （弱）、グざへ弱）Ｃ１ｎ’。 （４）プロトン核磁気共鳴スペクトル（／θθ■几。 ＴＭＳ内部標準、　ＤＭＳＯ−ｄ、中）：共鳴状態　化
   学シフト、δ＋ＰＰ”　　　　プロトン数三重線　　　
   　乙、ＫＯ／ 二重線　　　　６．７３　　　　２ 多重線　　　　ｌＡ９θ　　　　　２ 三重線　　　〜ス、ｊ　　　　　　溶媒と重複−重線　
   　　　２θ２３ 三重線　　　　θ、ｒｓ　　　　　　３（５）スタフィ
   ロコッカス・アウレウスを検出閑とするペーパークロマ
   トグラフィーによる凡そのＲ１’値： 溶媒系　　　　　　　　　　　　　Ｒｒ値メタノール：
   θ／ＮＨＣＩ（３：／）　　　０７９ｒ１−ブタノール
   ：酢酸：水（３：／：／）　　θグ／酢酸エチル：酢酸
   ：水（３：／：／）　　　Ｃ５９（６）スタフィロコッ
   カス・アウレウスを検出菌とする薄層タロマドグラフィ
   ーによる凡そのＲ１’値：溶媒系　　　　　　　　　　
   　　　Ｒ１′値ア士トン：水（／９：／）　　　　　Ｃ
   ２１（７）溶媒に対する溶解性：水およびメタノールに
   可溶。 （８）物質の色調および外観：白色結晶性物質。 乙ケトメラ属に属する抗生物質Ａ−３，２７２４を産生
   菌を培地に培養し、培養物から（１）抗生物質Ａ　−３
   ，２７２１１−因子Ａ、ＢおよびＣを含む抗生物質Ａ　
   −３，２７２’ｌ混合物あるいは（２）抗生物質Ａ−３
   ２７．２ゲ因子Ａ、抗生物質Ａ〜３．２７２グ因子Ｂお
   よび／または抗生物質Ａ−３２７２１１因子Ｃを得るこ
   とを特〜ｌ− 徴とする抗生物質Ａ−３２７，２’ｌの製造方法。 ７ａ）　ケトメラ・ラフィゲラ・スウィ’７）ＮＲＲＬ
   ／２３３／またはその抗生物質Ａ−３２７２１１産生変
   異株を、資化可能な炭素源、窒素源および無機塩類を含
   む培地中で深部通気条件下に、実質量の抗生物質活性が
   得られるまで培養し、■〕）必要に応じて培養物から抗
   生物質Ａ−３２７２１１混合物を採取し、（Ｃ）さらに
   必要に応じて抗生物質Ａ−３２７．２１１因子Ａ、Ｂま
   たはＣを単離する特許請求の範囲乙記載の方法。 と抗生物質Ａ−３２７２’ｌ混合物を得る特許請求の範
   囲６．またはＺ記載の方法。 ？抗生物質Ａ−３２７２ゲ因子Ａを得る特許請求の範囲
   ６．またはＺ記載の方法。 １０抗生物質Ａ−３２７２’！因子Ｂを得る特許請求の
   範囲６．または７記載の方法。 ｌ／抗生物質Ａ−３２７２ｇ因子Ｃを因子時許請求の範
   囲６゜または７記載の方法。 ／２．抗生物質１’、−３，２７２，グ混合物、抗生物
   質Ａ−３２７２４１因子Ａ、抗生物質Ａ−３２７２グ因
   子Ｂまたは抗生物質Ａ−３２７２’ｌ−因子Ｃと製薬上
   許容される担体もしくは賦形剤からなる医薬組成物。 １３抗生物質人−３２７２１Ａ混合物、抗生物質Ａ−３
   ２７２グ因子人、抗生物質に−３２７，２グ因子Ｂまた
   は抗生物質Ａ−３．２７，２１１−因子Ｃと担体もしく
   は賦形剤からなる抗かび性組成物。 ／ｌ／ｌ、抗生物質Ａ−３２７２グ混合物、抗生物質Ａ
   −投与することを特徴とする高血圧症哺乳類の血圧を低
   下させる方法。