JPS58107195A - 発酵法によるｌ−トリプトフアンの製造法 - Google Patents
発酵法によるｌ−トリプトフアンの製造法Info
- Publication number
- JPS58107195A JPS58107195A JP20778581A JP20778581A JPS58107195A JP S58107195 A JPS58107195 A JP S58107195A JP 20778581 A JP20778581 A JP 20778581A JP 20778581 A JP20778581 A JP 20778581A JP S58107195 A JPS58107195 A JP S58107195A
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- Japan
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- tryptophan
- producing
- azaguanine
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- genus bacillus
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- Pending
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、発酵法によるり．）！Ｊブトファン（以下、
トリプトファンと記す。）の製造法に関する。
トリプトファンと記す。）の製造法に関する。
従来ドリフトファンの製造法としては、トリプトファン
の前Ｊ 物質であるアントラニル酸、インドール或は３
−インドールピルビン酸よりトリプトファンを製造する
方法が知られている。
の前Ｊ 物質であるアントラニル酸、インドール或は３
−インドールピルビン酸よりトリプトファンを製造する
方法が知られている。
一方，直接発酵法でトリプトファンを製造する方法とし
ては、５−フロロトリプトファン等のトリプトファンア
ナログに耐性を有する微生物を用いる方法（特公昭４８
− １８８２８ 、特公昭５３ − ３９５１７ ）
、 ヒスチジン要求株を用いる方法（特公昭４７−４５
０５ ） 、アルギニン、フェニルアラニン、リジン、
ｐインンならびにプリンの要求株を用いる方法（特公昭
５３ − ３９５４７ ）等が知られている。
ては、５−フロロトリプトファン等のトリプトファンア
ナログに耐性を有する微生物を用いる方法（特公昭４８
− １８８２８ 、特公昭５３ − ３９５１７ ）
、 ヒスチジン要求株を用いる方法（特公昭４７−４５
０５ ） 、アルギニン、フェニルアラニン、リジン、
ｐインンならびにプリンの要求株を用いる方法（特公昭
５３ − ３９５４７ ）等が知られている。
本発明者らは、糖類等の炭素源からトリプトファンを直
接発酵法により安価に製造する方法を鋭意研究した結果
、上記のようなトリプトファンアナログの耐性の他に更
に核酸のアナログである８−アザグアニンに耐性を有す
るバチルス属の微生物の中に従来知られているものより
更に大量のトリプトファンを生産する能力を有する菌株
があることを見い出し本発明を完成した。
接発酵法により安価に製造する方法を鋭意研究した結果
、上記のようなトリプトファンアナログの耐性の他に更
に核酸のアナログである８−アザグアニンに耐性を有す
るバチルス属の微生物の中に従来知られているものより
更に大量のトリプトファンを生産する能力を有する菌株
があることを見い出し本発明を完成した。
−アザグアニンに耐性を有しトリプトファン生産能を有
する微生物である。更に上記変異株にプリン要求性を付
与することｅこより、より高いトリプトファン生産能を
有する微生物を造成することができる。具体的には次の
ような変異株が使用される。
する微生物である。更に上記変異株にプリン要求性を付
与することｅこより、より高いトリプトファン生産能を
有する微生物を造成することができる。具体的には次の
ような変異株が使用される。
バチルス−ズブチリス ＡＪ１１ｙ７５３ ＦＥＲ
Ｍ−Ｐ６２７０（５−Ｆ−Ｔｒｐｒ、８− ＡＧｒ） バチルス・ズブチリス ＡＪ １１７５４ ＦＥ
ＲＭ−Ｐ６２７１（５−Ｆ−Ｔｒｐｒ、 ８−ＡＧｒ、
Ｐｕｒ−）５−Ｆ−Ｔｒｆ ： ５−フロロトリプ
トファン耐性８−ＡＧｒ： Ｂ−アザグアニン耐性Ｐ
ｕｒ−プリン要求性 これら本発明で使用される８−アザグアニン耐性変異株
は従来知られているバチルス属のトリプトファン生産菌
を親株とし、これに通常の変異誘導操作、例えば紫外線
照射或はＮ−メチル−Ｎｌ−ニトローＮ−二トロングア
ニジノ、亜＆ｌ酸等の化学薬剤による変異処理を施した
後、親株が生育てきないような濃度の８−アザグアニン
を含有する寒天平板培地で培養し、該平板培地上に生育
するコロニーを分離することによって得られる。
Ｍ−Ｐ６２７０（５−Ｆ−Ｔｒｐｒ、８− ＡＧｒ） バチルス・ズブチリス ＡＪ １１７５４ ＦＥ
ＲＭ−Ｐ６２７１（５−Ｆ−Ｔｒｐｒ、 ８−ＡＧｒ、
Ｐｕｒ−）５−Ｆ−Ｔｒｆ ： ５−フロロトリプ
トファン耐性８−ＡＧｒ： Ｂ−アザグアニン耐性Ｐ
ｕｒ−プリン要求性 これら本発明で使用される８−アザグアニン耐性変異株
は従来知られているバチルス属のトリプトファン生産菌
を親株とし、これに通常の変異誘導操作、例えば紫外線
照射或はＮ−メチル−Ｎｌ−ニトローＮ−二トロングア
ニジノ、亜＆ｌ酸等の化学薬剤による変異処理を施した
後、親株が生育てきないような濃度の８−アザグアニン
を含有する寒天平板培地で培養し、該平板培地上に生育
するコロニーを分離することによって得られる。
親株としてはトリプトファンアナログ耐性のトリプトフ
ァン生産菌、例えばバチルス・ズブチリスＦＴ−１４５
ＦＥＲＭ−Ｐ １７Ｂ３ 等が使用される。その他に
本発明の変異株はバチルス属の野生株を親株とし、これ
に８−アザグアニン耐性を付与した後、トリプトファン
アナログ耐性を伺与することによっても誘導できる。一
方、プリン要求性変異株は上記変異処理を施した後、通
常の栄養要求株の採取方法によって取得できる。
ァン生産菌、例えばバチルス・ズブチリスＦＴ−１４５
ＦＥＲＭ−Ｐ １７Ｂ３ 等が使用される。その他に
本発明の変異株はバチルス属の野生株を親株とし、これ
に８−アザグアニン耐性を付与した後、トリプトファン
アナログ耐性を伺与することによっても誘導できる。一
方、プリン要求性変異株は上記変異処理を施した後、通
常の栄養要求株の採取方法によって取得できる。
以下、実験例にて本発明の８−アザグアニン耐性トリプ
トファン生産菌の８−アザグアニンに対する耐性度を示
す。
トファン生産菌の８−アザグアニンに対する耐性度を示
す。
実験例
第１表に示す組成の最少培地に８−７ザグアニンを第２
表に示す濃度となるように加え、試験管に４ｍｅ宛分注
し加熱滅菌して液体培地を作成した。
表に示す濃度となるように加え、試験管に４ｍｅ宛分注
し加熱滅菌して液体培地を作成した。
上記液体培地に８−アザグアニン無添加培地で２４時間
振盪培養したバチルス・ズブチリスＦＴ−１４５及びＡ
Ｊ１１７５３ の培養液を０．１ｍｅずつ接種し、３
０℃で２４時間振盪培養を行い、５７０ｎｍの吸光度を
測定することにより生育度を測定した。
振盪培養したバチルス・ズブチリスＦＴ−１４５及びＡ
Ｊ１１７５３ の培養液を０．１ｍｅずつ接種し、３
０℃で２４時間振盪培養を行い、５７０ｎｍの吸光度を
測定することにより生育度を測定した。
その結果を第２表に示す。
グルコース ５．０ ９７１１硫酸アン
モニウム １０ 〃 ＫＨ，１ｌＰＯ４８，６５１１ ＭｇＳＯ４・７ＨＱＯＯ，２／／ Ｆｅ５０４−７Ｈ，０１０ｍ’ｉ、＃ ＭｎＳα４ ” ４Ｈ９０］ Ｑ ／／クエン酸
ナトリウム ０．５ ｆ、＃ＫＯＨ２，１８／
／ −５− 第２表 耐性株の生育度 （相対生育度で示す）ＦＴ−
１４５（５−Ｆ−Ｔｒｐｒ） １００ １６
１２ １０相対生育度は８−アザグアニン無添加の場合
を１００とした。
モニウム １０ 〃 ＫＨ，１ｌＰＯ４８，６５１１ ＭｇＳＯ４・７ＨＱＯＯ，２／／ Ｆｅ５０４−７Ｈ，０１０ｍ’ｉ、＃ ＭｎＳα４ ” ４Ｈ９０］ Ｑ ／／クエン酸
ナトリウム ０．５ ｆ、＃ＫＯＨ２，１８／
／ −５− 第２表 耐性株の生育度 （相対生育度で示す）ＦＴ−
１４５（５−Ｆ−Ｔｒｐｒ） １００ １６
１２ １０相対生育度は８−アザグアニン無添加の場合
を１００とした。
本発明で使用する培養培地は特に制限するところはなく
、炭素源、窒素源、無機塩及び必要ならば有機微量栄養
素を含有する通常の培地である。
、炭素源、窒素源、無機塩及び必要ならば有機微量栄養
素を含有する通常の培地である。
炭素源として含水炭素（グルコース、フラクトース或は
デンプン、セルロース等の加水分解物、糖蜜等）、有機
酸（酢酸、クエン酸等）、アルコール（グリセリン、エ
タノール等）、或は炭化水素（ノルマルパラフィン等）
が使用できる。窒素源としては硫酸アンモニウム、尿素
、硝酸アンモニウム、リン酸アンモニウム、塩化アンモ
ニウム、アンモニアガス、その他を、無機塩としてはリ
ン−６− 酸塩、マグネシウム塩、カルシウム塩、鉄塩、マンガン
塩、その他微量金属塩等を必要に応じて使用する。有機
微量栄養素としては、栄養要求性のある場合には該当す
るアミノ酸、ビタミン、脂肪酸類、有機塩基物質等を適
量添加し必要に応じて更に生育促進物質としてアミノ酸
、ビタミン、味液（登録商標、大豆加水分解物）、酵母
エキス、ペプトン、カザミノ酸等を使用する。
デンプン、セルロース等の加水分解物、糖蜜等）、有機
酸（酢酸、クエン酸等）、アルコール（グリセリン、エ
タノール等）、或は炭化水素（ノルマルパラフィン等）
が使用できる。窒素源としては硫酸アンモニウム、尿素
、硝酸アンモニウム、リン酸アンモニウム、塩化アンモ
ニウム、アンモニアガス、その他を、無機塩としてはリ
ン−６− 酸塩、マグネシウム塩、カルシウム塩、鉄塩、マンガン
塩、その他微量金属塩等を必要に応じて使用する。有機
微量栄養素としては、栄養要求性のある場合には該当す
るアミノ酸、ビタミン、脂肪酸類、有機塩基物質等を適
量添加し必要に応じて更に生育促進物質としてアミノ酸
、ビタミン、味液（登録商標、大豆加水分解物）、酵母
エキス、ペプトン、カザミノ酸等を使用する。
培養条件は、通常の方法でｐＨ５ないし９、温度は２０
℃ないし４０℃で好気的条件下に２４ないし９６時間培
養すればよい。培養中にｐＨが下がる場合には、炭酸カ
ルシウムを別殺菌して加えるか又はアンモニア水、アン
モニアガス等のアルカリで中和する。又、有機酸を炭素
源とする場合はｐＨの上昇を鉱酸又は有機酸で中和する
。
℃ないし４０℃で好気的条件下に２４ないし９６時間培
養すればよい。培養中にｐＨが下がる場合には、炭酸カ
ルシウムを別殺菌して加えるか又はアンモニア水、アン
モニアガス等のアルカリで中和する。又、有機酸を炭素
源とする場合はｐＨの上昇を鉱酸又は有機酸で中和する
。
トリプトファンの単離採取は常法ｔこよって行いうる。
得られたものはペーパークロマトグラム上のＲｆ値、Ｅ
ｈｒｌｉｃｈ試薬によるトリプトファン特異反応、或は
微生物定量法による生物活性値により、トリプトファン
標品のそれらと一致することな確かめ、トリプトファン
と同定した。
ｈｒｌｉｃｈ試薬によるトリプトファン特異反応、或は
微生物定量法による生物活性値により、トリプトファン
標品のそれらと一致することな確かめ、トリプトファン
と同定した。
トリプトファンの定量はロイコノストック、メセンテロ
イデス（ＡＴＣＣ８０４２）を用いる微生物定量法に従
って行った。
イデス（ＡＴＣＣ８０４２）を用いる微生物定量法に従
って行った。
以下、実施例にて説明する。
実施例１
下記第３表に示した組成のトリプトファン生産用培地２
０ＩＩ＋ｅを５００罰容のフラスコに分注し、これに第
３表に示す微生物をそれぞれ晃スラント量植えつけ３０
℃で９６時間振盪培養した。それぞれの培養液中のトリ
プトファン生成量は第４表の如くであった。
０ＩＩ＋ｅを５００罰容のフラスコに分注し、これに第
３表に示す微生物をそれぞれ晃スラント量植えつけ３０
℃で９６時間振盪培養した。それぞれの培養液中のトリ
プトファン生成量は第４表の如くであった。
塩化アンモニウム １０ 〃
ＫＨ２Ｐ ０４ ］ ／／ＫＣ
Ｉ ２ ｕＭｎ Ｓ ０４
” ７ ＨｑＯ］ Ｏｍｇ／１１Ｆ ｅ Ｓ ０４
’ ４ ＨｑＯ］ ０ ／／カザミノ酸
４？／Ｅ ＭｇＳＯ，・７Ｈ，ＯＯ，４ｔｔ Ｆｒ−１４５（５−Ｆ−Ｔｒｐｒ）
ｔ、ｑＡＪ１１７５３ （５−Ｆ−Ｔｒｐｒ、 ８−
ＡＧｒ） ３．４− ９ −
Ｉ ２ ｕＭｎ Ｓ ０４
” ７ ＨｑＯ］ Ｏｍｇ／１１Ｆ ｅ Ｓ ０４
’ ４ ＨｑＯ］ ０ ／／カザミノ酸
４？／Ｅ ＭｇＳＯ，・７Ｈ，ＯＯ，４ｔｔ Ｆｒ−１４５（５−Ｆ−Ｔｒｐｒ）
ｔ、ｑＡＪ１１７５３ （５−Ｆ−Ｔｒｐｒ、 ８−
ＡＧｒ） ３．４− ９ −
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 Ｌｌ＋ バチルス属に属しトリプトファンアナログ及
び８−アザグアニンに耐性を有するし一トリプトファン
生産菌を液体培地中で好気的に培養してＬ−ト！Ｉブト
ファンを生成・蓄積せしめ、これを採取することを特徴
とする発酵法にょるＬ−トリプトファンの製造法。 ＋２１Ｌ−）リプトファン生産菌がトリプトファンアナ
ログ及び８−アザグアニンに耐性を有しかつプリン要求
性である特許請求範囲第１項記載のＬ−ト！＋ブトファ
ンの製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP20778581A JPS58107195A (ja) | 1981-12-22 | 1981-12-22 | 発酵法によるｌ−トリプトフアンの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP20778581A JPS58107195A (ja) | 1981-12-22 | 1981-12-22 | 発酵法によるｌ−トリプトフアンの製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58107195A true JPS58107195A (ja) | 1983-06-25 |
Family
ID=16545460
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP20778581A Pending JPS58107195A (ja) | 1981-12-22 | 1981-12-22 | 発酵法によるｌ−トリプトフアンの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS58107195A (ja) |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS575694A (en) * | 1980-06-10 | 1982-01-12 | Showa Denko Kk | Production of l-tryptophane |
-
1981
- 1981-12-22 JP JP20778581A patent/JPS58107195A/ja active Pending
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS575694A (en) * | 1980-06-10 | 1982-01-12 | Showa Denko Kk | Production of l-tryptophane |
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