JPH11514654A - 外傷による脳損傷の治療方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 式（Ｉ）の化合物５-(２- エチル -２Ｈ- テトラゾール -５- イル)-１，２，３，６- テトラヒドロ -１- メチルピリジンは、外傷による脳損傷モデルで認識行動の改善及び損傷により減少されるコリン作動性ニューロン低下を弱め、外傷による脳損傷の治療のための薬剤の製造に有用である。

Description

【発明の詳細な説明】 外傷による脳損傷の治療方法 発明の分野 本発明は、外傷による脳損傷（ＴＢＩ）の治療用薬剤を製造するために、５-( ２ -エチル -２Ｈ- テトラゾール -５- イル)-１，２，３，６- テトラヒドロ - １- メチルピリジンを使用する方法に関する。 発明の背景 ヨーロッパ特許公開第０２９６７２１号公報には、ピペリジン又は５員成ヘテ ロ環状基を有する、５位が置換された１，２，３，６−テトラヒドロピリジン化 これらの化合物が、中枢コリン作動性レセプターに対して高い親和性、特に中枢 ムスカリン様Ｍ₁レセプターに対して高い親和性を有すると記載されており、し たがってこれらの化合物は、アルツハイマー疾患、老人性痴呆及び損傷された学 習及び記憶機能の治療に有用である。 このサブクラスの構造と活性の関係は Moltzen等、J．Med．Chem．１９４４， 、３７，４０８５−４０９９に記載されている。これらの化合物のうちの１つ、 すなわち５-(２- エチル -２Ｈ- テトラゾール -５- イル)-１，２，３，６- テ トラヒドロ -１- メチルピリジンはＭ₂及びＭ₃レセプターよりもＭ₁に対する数 倍高い親和性を有するムスカリン様レセプターに選択的であることが報告されて いる(Subtypes of Muscarinic Receptors，The Sixth International Symposium ，Nov．9-12，1994，Fort Lauderdale)．機能的に、これはＭ₁レセプターで部分 的作動剤として及びＭ₂及びＭ₃レセプターで拮抗剤として作用することが開示さ れている。更に、報告された唯一の優れた生体内作用は、若い及び老いたラット 夫々に於て空間記憶習得に有効である。 物理的又は神経的条件又は種々の疾患によって引き起こされるＴＢＩに対して 人々の間でその重要性が増加しており、したがってこの様な障害及びその後遺症 の治療に有効かつ安全な医薬に対して大きな要望がある。 驚くべきことに、本発明者は化合物１，２，３，６- テトラヒドロ -１- メチ ルピリジンがＴＢＩ及びその後遺症の治療に有益な作用を示すことを見い出した 。 発明の要旨 したがって、本発明は５-(２- エチル -２Ｈ- テトラゾール -５- イル)-１， ２，３，６- テトラヒドロ -１- メチルピリジン又はその薬学的に容認された酸 付加塩 を、外傷による脳損傷治療用薬剤を製造するために使用する方法に関する。 外傷による脳損傷（ＴＢＩ）なる表現はこの明細書中で脳又は脊椎索への外傷 に関連するすべての状態、たとえば頭蓋骨又は脊椎柱に作用する物理的力、虚血 、発作、呼吸停止、心臓停止、大脳血栓症又は塞栓症によって引き起こされる外 傷によるＡＩＤＳ、大脳出血、脳脊髄症、水頭症、術後結果、大脳感染、振とう 又は高められた頭蓋内圧によって引き起こされる神症症によって引き起こされる すべての状態を意味する。 本発明の酸付加塩は、非毒性の有機又は無機酸との薬学的に妥当な塩である。 この様な有機塩の例は、マレイン酸、フマール酸、安息香酸、アスコルビン酸、 エンボン酸、コハク酸、シュウ酸、ビス- メチレンサリチル酸、メタンジスルホ ン酸、エタンジスルホン酸、酢酸、プロピオン酸、酒石酸、サリチル酸、クエン 酸、グルコン酸、酪酸、リンゴ酸、マンデリン酸、ケイヒ酸、シトラコン酸、ア スパラギン酸、ステアリン酸、パルミチン酸、イタコン酸、グリコール酸、ｐ- アミノ- 安息香酸、グルタミン酸、ベンゼンスルホン酸及びテオフイリン酢酸、 並びに８- ハロテオフイリン、たとえば８- ブロモ- テオフイリンとの塩である 。この様な無機塩の例は、塩酸、臭化水素酸、硫酸、スルフアミン酸、リン酸及 び硝酸との塩である。 本発明により使用される化合物は、ＴＢＩの処理に有用であることが見い出さ れた。したがってたとえば外傷による脳損傷を和らげた後に、認識行動を改善し 、コリン作動性神経の傷害により減少された低下を弱める。更に臨床的に適切で あると信じられていた薬用量で有害な心臓作用又は他の副作用を引き起こさない ことが見い出された。 他の観点からいえば、本発明は、治療上有効な量の５-(２- エチル- ２Ｈ- テ トラゾール -５- イル)-１，２，３，６- テトラヒドロ -１- メチルピリジン又 はその酸付加塩をこれを必要とする患者に投与する工程から成る、ＴＢＩの予防 又は治療方法を提供する。 本発明により使用される化合物及びその薬学的に容認された酸付加塩は、すべ ての適する方法で、たとえば経口的に又は非経口的に投与され、この化合物はこ の様な投与にすべての適する形で、たとえば錠剤、カプセル、粉末、シロップ又 は注射用溶液又は分散液の形で存在していてよい。 本発明による化合物又はその薬学的に容認された塩の有効一日薬用量は１０μ ｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは２５μｇ／日／ｋｇ体重〜１．０ｍ ｇ／日／ｋｇ体重である。したがって適する一日薬用量は５００μｇ〜６００ｍ ｇ／日、好ましくは１．０ｍｇ〜１００ｍｇである。 本発明により使用される化合物は、ヨーロッパ特許公開第０２９６７２１号公 報に記載されている様に得ることができ、その酸付加塩は従来公知の方法で容易 に製造される。 薬理学 本発明により使用される化合物を、次の十分に認められかつ信頼できる方法に よって試験する： ＴＢＩの後の認識機能 ラットを Dixox，C.E.，等、J．Neurosurgery,６７（１９８７）１１０−１１ ９中に記載されている様に、中枢の液体衝撃によって外傷による脳損傷とする。 負傷した動物に、負傷して２４時間後から始めて負傷後１−１５日目に食塩水又 は５-(２- エチル -２Ｈ- テトラゾール -５- イル)-１，２，３，６- テトラヒ ドロ -１- メチルピリジン、３．６μｍｏｌ／ｋｇ又は１５μｍｏｌ／ｋｇを筋 肉内注射する。 ＴＢＩ後のリラックス抑制を正すことを、Dixon 等、１９８７，Supra の方法 によって測定する。 体重を負傷前に及び負傷後１−５日目に記録し、Hamm，R.J.等、J．Neurotrau ma，１１（１９９４）１８７−１９６の方法に従って負傷後１−５日目にロタロ ド(rotarod)行為を測定する。ロタロドテストを、ＴＢＩ後の運動行為を測るの に使用する。 最後に、モリス(Morris)ウオーター迷路中で目標のプラットホームを見い出す 平均潜伏期（＋Ｓ．Ｅ．Ｍ．）を、負傷後１１−１５日目に測定する。その結果 をＡＮＯＵＡによって分析する。ウオーター迷路テストの間、すべての動物にウ オーター迷路の評価１０分前に注射する。 比較のために、みせかけの負傷をした動物（負傷のために準備されているが液 体パルスを加えられない）を、比較のために含める。 ＴＢＩの後のＣｈＡＴニューロンの適性 ラットに中心液体衝撃ＴＢＩを与え、上述の様に処置する。ラットに食塩水（ ｎ＝５）又はテスト化合物（５-(２- エチル -２Ｈ- テトラゾール -５- イル)- １，２，３，６- テトラヒドロ -１- メチルピリジン、１５μｍｏｌ／ｋｇ）（ ｎ＝５）を筋肉注射する。みせかけの負傷をしたラットに食塩水（ｎ＝４）又は テスト化合物１５μｍｏｌ／ｋｇを注射する。 リラックス抑制を正すことを、上述の様に測定する。 ＴＢＩ後のコリン作動性ニューロンのあり得る損失を、基底前脳中でコリンア セチルトランスフエラーゼ（ＣｈＡＴ）免疫活性ニューロンの適性によって測定 する。負傷後１５日目に（最後の注射後２−４時間）、すべての動物をペントバ ルビタール（９０ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）で麻酔をかけ、等張食塩水２００−２５ ０ｍｌで、次いで０．１Ｍリン酸塩緩衝液中で４．０％パラホルムアルデヒド１ ０．２％ピクリン酸５００ｍｌで５００ｍｌ／３０分の速度及び室温で潅流する 。 潅流の後に、脳を２つのブロックに切り分け、２４時間１０℃で同一溶液中に 固定化する。冠状の４０μｍセクションを前脳核をビブラトーム(vibratom)上で 集め、すべての第五セクションをＣｈＡＴ免疫活性について調べる。対応するセ クションを、基底前脳核中のすべての可能な作動性及び非- コリン作動性ニュー ロン損失の定量的算定のために、クレシルヴァイオレットで Nissi物質に関して 染める。 自由に流動する前脳セクションを、０．１％トリメンＸ- １００を含有する０ ．０１Ｍリン酸塩緩衝された食塩水（ＰＢＳ）中で０．１μｇ／ｍｌの最終Ｃｈ ＡＴ抗体濃度（１：５０）でインキュベートする。前脳セクションを切り分け、 培養トレー（４セクション／３００μＬ／well）で、室温で２４時間第一抗体中 でイキュベートする。 ＰＢＳ中で４回洗滌後、セクションを第二抗体（馬抗マウスＩｇＧ；ベクター ラボラトリーズ、Burlingame，CA）中で１時間３７℃でインキュベートする。Ｐ ＢＳ中で３回洗滌後、セクションをマウスアビジン- ビオチン- パーオキシダー ゼ複合体（ＡＢＣ）（ベクター）法（Hsu 等、J．Histochem．Cytochem．２９， １９８１，５７７−５８０）で２時間、３７℃でインキュベートする。ＰＢＳで ３回洗滌し、０．１Ｍトリス- 緩衝された食塩水（ＴＢＳ）中で１回洗滌した後 、自由に流動するセクションを、Shu 等、Neurosci．Lett．８５ １９８８，１ ６９−１７１に記載されたグルコースオキシダーゼ- ジアミノベンジン- ニッケ ル法によって処理する。反応を、セクションのＴＢＳへの移行によって停止する 。セクションをゼラチン- クロムミョウバン被覆されたガラススライド上にのせ 、室温で一晩乾燥させ、エタノール及びキシレンの上昇する濃度中で脱水し、次 いでパーマント(Permount)でカバーガラスする。 内側中隔核（ＭＳＮ）中のＣｈＡＴ免疫活性ニューロン、対角線バンド（ＶＤ Ｂ）の垂直手足核（ＶＤＢ）及び核基底大形細胞（ＮＭＢ）を、マイクロコンピ ューターイメージングディバイスシステム（ＭＣＩＤ）によってカウントする（ Imaging Research Inc.,オンタリオ、カナダ）ＭＳＮとＶＤＢの間の境界を、前 方の接合部として定義する。ＮＭＢを、内部カプセル淡蒼球及び内部カプセルに 隣接する部分に位置する免疫標識されたニューロンとして定義する。細胞総量を 、前脳核を経て０．２ｍｍ間隔で得られる夫々の動物から作成する。細胞数を、 各前脳核に関して１０，０００μｍ²あたりのグループ平均として報告する。 クレシルヴァイオレットで着色された対応するセクションからのＭＳＮ、ＶＤ Ｂ及びＮＭＢのニューロンも、ＭＣＩＤでカウントする。これらの範囲にわたっ てクレシルヴァイオレットに染った多数のコリン作動性及び非コリン作動性ニュ ーロン全体のゆえに、ニューロンの両方向性サンプルを夫々の核中でカウントす る。前もって測定された領域を有するグリッドを、各核、ＭＳＮ及びＶＤＢ核に 関する細胞をカウントするのに使用し、３つの２，０００μｍ²域を夫々の側で カウントする（１２，０００μｍ²の全領域は、カウントされた４つのセクショ ンの夫々で各核に関して認めされる）。ＮＭＢに対して１つの１２０００μｍ² 域は各側でカウントされる（全域＝カウントされた４つのセクションの夫々で２ ４０００μｍ²）。可視性体腔 Nissi体及び明白なニューロン性タイプ核を有す る大きい細胞（＞２０μｍ直径）のみを定量する。 結果 ＴＢＩ後、緊張緩和抑制を直すことについていかなる損傷動物の間に著しい差 異はない。これは各実験内で損傷グループが同等の重さの傷を受けたことを示す 。にせの損傷動物はいかなるＴＢＩ動物よりも明らかに早く回復する（各比較に 関してｐ＜０．０００１）。にせの損傷グループ中での回復の抑制は、損傷前に 使用されるガス麻酔のためである。 ＴＢＩの後に体重損失についていかなる損傷グループの間に著しい差異はない 。これも損傷グループ間で同等の重さの傷を示す。いかなる損傷グループの間に 損傷後１〜５日目でロタロード行為について著しい差異はない。テスト化合物を 損傷後１〜１５日目で投与した場合、このテストは損傷後この医薬が体重又はロ タロード行為に何ら作用しないことも示す。 ＡＮＯＶＡは、テスト化合物で毎日皮下注射された損傷動物が食塩水処置され た損傷動物よりもモリス水迷路中で良好に動くことを示す。テスト化合物１５μ ｍｏｌ／ｋｇで処置された損傷動物はｐ＜０．０１で行動を著しく改善される。 ＴＢＩは、食塩水及びテスト化合物夫々で処置されたラット中でのＶＤＢ及び ＮＭＢ中のＣｈＡＴ- ＩＲニューロンの数の著しい減少を引き起こす。しかし本 発明の化合物は損傷により減少されるＣｈＡＴ- ＩＲ低下を著しく弱める（ＶＤ Ｂ中で食塩水処置された損傷グループに比べて３２％減少及びＮＭＢ中で５１％ 減少）。対応するクレシルヴァイオレットで染められたセクションは、ＭＳＮ、 ＶＤＢ又はＮＭＢ中での細胞数の減少を示さず、これはＣｈＡＴ- ＩＲニューロ ンの損失が細胞の死滅に起因しないことを示す。 製剤例 本発明の薬学製剤を、従来の慣用法で製造することができる。 たとえば：錠剤を、有効成分と通常の賦形剤及び／又は希釈剤と混和し、次いで 通常の打錠機中で混和物を圧搾して、製造する。賦形剤又は希釈剤の例は、コー ンスターチ、ジャガイモでんぷん、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ゼラチ ン、乳糖、ゴム等々を含む。他の賦形剤又は添加着色剤、香料、保存剤等々を使 用することができるが、これらは有効成分と適合するものである。 注射用溶液を、有効成分及び可能な添加物を注射用溶剤の一部、好ましくは滅 菌水中に溶解し、溶液を所望の容量に調整し、溶液を滅菌し、アンプル又は小ビ ンに詰めて製造することができる。従来、通常に使用される適する添加物を加え る。たとえば色調剤、保存剤、酸化防止剤等々。 本発明の製剤に関する処方の典型的例は、次の通りである（遊離塩基として算 出された有効成分の量）： １）錠剤： ５-(２- エチル -２Ｈ- テトラゾール -５- イル)- １，２，３，６- テトラヒドロ -１- メチル- ピリジン ２０ｍｇ ラクトース ６０ｍｇ トウモロコシでんぷん ３０ｍｇ ヒドロキシプロピルセルロース ２．４ｍｇ 微晶質セルロース １９．２ｍｇ クロスカルメロースナトリウムタイプＡ ２．４ｍｇ ステアリン酸マグネシウム ０．８４ｍｇ ２）錠剤 ５-(２- エチル -２Ｈ- テトラゾール -５- イル)- １，２，３，６０テトラヒドロ -１- メチル- ピリジン １０ｍｇ ラクトース ４６．９ｍｇ トウモロコシでんぷん ２３．５ｍｇ ポビドン １．８ｍｇ 微晶質セルロース １４．４ｍｇ クロスカルメロースナトリウムタイプＡ １．８ｍｇ ステアリン酸マグネシウム ０．６３ｍｇ ３）シロップ ５-(２- エチル -２Ｈ- テトラゾール -５- イル)- １，２，３，６- テトラヒドロ -１- メチル- ピリジン ５．０ｍｇ ソルビトール ５００ｍｇ ヒドロキシプロピルセルロース １５ｍｇ グリセロール ５０ｍｇ メチル- パラベン １ｍｇ プロピル- パラベン ０．１ｍｇ エタノール ０．００５ｍｌ フレーバー ０．０５ｍｇ サッカリンナトリウム ０．５ｍｇ 水 全量 １ｍｌ ４）溶液 ５-(２- エチル -２Ｈ- テトラゾール -５- イル)- １，２，３，６- テトラヒドロ -１- メチル- ピリジン １．０ｍｇ ソルビトール ５．１ｍｇ 酢酸 ０．０８ｍｇ 注射用水 全量 １ｍｌ

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，Ｌ Ｕ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ， ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，Ｓ Ｚ，ＵＧ)，ＵＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，Ｉ Ｌ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ， ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，Ｒ Ｕ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．５-(２- エチル -２Ｈ- テトラゾール -５- イル)-１，２，３，６- テトラ ヒドロ -１- メチルピリジン 又はその薬学的に容認された酸付加塩を、外傷による脳損傷治療用薬剤を製造 するために使用する方法。 ２．製造された薬剤が５-(２- エチル -２Ｈ- テトラゾール -５- イル)-１，２ ，３，６- テトラヒドロ -１- メチルピリジン又はその薬学的に容認された酸付 加塩を単位投薬形で含有する、請求の範囲１記載の使用方法。 ３．製造された薬剤が５-(２- エチル -２Ｈ- テトラゾール -５- イル)-１，２ ，３，６- テトラヒドロ -１- メチルピリジン又はその薬学的に容認された酸付 加塩を５００μｇ〜６００ｍｇ／日、好ましくは１．０ｍｇ〜１００ｍｇ／日の 量で含有する、請求の範囲１記載の使用方法。 ４．製造された薬剤を、頭蓋骨又は脊椎柱に作用する物理的力、虚血、発作、呼 吸停止、心臓停止、大脳血栓症又は塞栓症によって引き起こされる外傷による脳 損傷、ＡＩＤＳ、大脳出血、脳脊髄症、水頭症、術後結果、大脳感染、振とう又 は高められた頭蓋内圧によって引き起こされる神症症の治療にあるいはこのよう な状態の後遺症の治療に使用する、請求の範囲１ないし３のいずれかに記載の使 用方法。