SK58198A3

SK58198A3 - Treatment of traumatic brain injury

Info

Publication number: SK58198A3
Application number: SK581-98A
Authority: SK
Inventors: Brian R Pike
Original assignee: Lundbeck & Co As H
Priority date: 1995-11-06
Filing date: 1996-11-05
Publication date: 1998-10-07
Also published as: CA2234824A1; ZA969320B; JPH11514654A; EA000531B1; PL326490A1; BR9611396A; EP0866706A1; EA199800434A1; AU706594B2; NZ321546A; CZ138998A3; HUP9901051A2; NO982036D0; WO1997017074A1; MX9803432A; TR199800801T2; NO982036L; IS4726A; CZ287441B6; BG63150B1

Description

EP-A1 0 296 721 opisuje triedu piperidínových alebo 1,2,3,6-tetrahydropyridínových zlúčenín substituovaných v pozícii 5 päťčlennou heterocyklickou skupinou vrátane podtriedy voliteľne substituovaných 5-tetrazolyl-1,2,3,6tetrahydro-pyridínových zlúčenín. Zistilo sa, že zlúčeniny majú vysokú afinitu k centrálnym cholinergným receptorom, najmä vysokú afinitu k centrálnym muskarínovým Mi receptorom, a preto sú vhodné na liečbu Alzheimerovej choroby, stareckej demencie a znížených edukačných a pamäťových schopností.

Vzťah štruktúry a účinku tejto podtriedy opísali Moltzen et al., J. Med. Chem., 1994, 37, 4085-4099. Jedna zo zlúčenín, t.j. 5-(2-etyl-2H-tetrazol-5-yl)-1,2,3,6tetrahydro-1-metylpyridín sa ukázala ako selektívna pre muskarínové receptory s niekoľkonásobne vyššou afinitou voči Mi receptorom v porovnaní s M₂ a M3 receptormi (Subtypy muskarínových receptorov, 6. Medzinárodné sympózium, Nov. 9-12,1994, Fort Lauderdale). Z hľadiska mechanizmu účinku sa zistilo, že sa správa ako parciálny agonista na Mi receptoroch a ako antagonista na M₂ a M3 receptoroch. Okrem toho, jediným významným zisteným in vivo účinkom bol účinok na získavanie priestorovej pamäti u mladých a starých potkanov.

ÚPM zapríčinené fýzickými alebo neurologickými poškodeniami alebo inými ochoreniami nadobúda v populácii zvýšenú dôležitosť a existuje veľká potreba účinných a bezpečných liečiv na liečbu takýchto stavov a ich následkov

V súčasnosti sa prekvapujúco zistilo, že zlúčenina 5-(2-etyl-2H-tetrazol-5-yl)1,2,3,6-tetrahydro-1-metylpyridínu vykazuje dobré účinky pri liečbe ÚPM a jeho následkov.

-2Podstata vynálezu

Predkladaný vynález sa týka použitia 5-(2-etyl-2H-tetrazol-5-yl)-1,2,3,6tetrahydro-1-metylpyridínu všeobecného vzorca I

(I) alebo jeho kyslej adičnej soli na výrobu liečiva na liečbu úrazového poškodenia mozgu (ÚPM) alebo jeho následkov.

Termín úrazové poškodenie mozgu (ÚPM) v tejto špecifikácii zahŕňa všetky chorobné stavy súvisiace s úrazom mozgu alebo miechy, napr. prostredníctvom účinku fyzikálnych síl na skeleton hlavy alebo kanál miechy, ischémiou, mŕtvicou, zástavou dýchania, zástavou srdca, mozgovou trombózou alebo embolizmom, neurologickými problémami zapríčinenými AIDS, mozgovým krvácaním, encefalomyelitídou, hydrocefalom, pooperačnými stavmi, mozgovými infekciami, otrasmi alebo vnútrolebečným tlakom.

Farmaceutický prijateľnými kyslými adičnými soľami zlúčenín použitých vo vynáleze sú soli tvorené s netoxickými organickými alebo anorganickými kyselinami. Príkladmi takýchto organických solí sú soli odvodené od kyseliny maleínovej, fumarovej, benzoovej, askorbovej, pamoovej, jantárovej, šťavelovej, bis-metylénsalicylovej, metánsulfónovej, etándisulfónovej, octovej, propiónovej, vínnej, mandlovej, škoricovej, citrakonovej, asparagovej, steárovej, palmitovej, itakonovej, glykolovej, p-aminobenzoovej, glutámovej, benzénsulfónovej a teofýlínoctovej, ako aj 8-haloteofýlíny, napríklad 8-brómteofýlín. Príkladmi takýchto anorganických solí sú soli s kyselinou chlorovodíkovou, bromovodíkovou, sírovou, sulfamidovou, fosforečnou a dusičnou.

-3U zlúčeniny podľa vynálezu sa zistilo, že je vhodná na liečbu ÚPM. Takže, napríklad zlepšuje kognitívnu výkonnosť po miernom úrazovom poškodení mozgu a oslabuje poškodením navodené zníženie cholinergných neurónov. Ďalej sa zistilo, že v dávkach považovaných za klinicky účinné, nemá vedľajšie účinky na srdce, ani iné vedľajšie účinky.

Z ďalšieho pohľadu predkladaný vynález poskytuje spôsob prevencie alebo liečby ÚPM u človeka, pomocou podávania terapeuticky účinného množstva 5-(2etyl-2H-tetrazol-5-yl)-1,2,3,6-tetrahydro-1-metylpyridínu alebo jeho kyslej adičnej soli pacientovi s indikáciou.

Zlúčeninu použitú podľa vynálezu a jej farmaceutický prijateľné kyslé adičné soli možno podávať akýmkoľvek vhodným spôsobom, t. j. perorálne alebo parenterálne a zlúčeniny môžu byť v akejkoľvej vhodnej liekovej forme pre takéto podávanie, napr. ako tablety, kapsle, prášky, sirupy alebo roztoky alebo ako disperzie pre injekčné prípravky.

Účinnú dennú dávku zlúčeniny podľa vynálezu alebo jej farmaceutický prijateľnej soli predstavuje 10 pg/kg až 10 mg/kg telesnej hmotnosti, výhodne 25 pg/deň/kg telesnej hmotnosti až 1,0 mg/deň/kg telesnej hmotnosti. Podľa toho je vhodná denná dávka 500 pg až 600 mg/deň, výhodne 1,0 mg až 100 mg.

Zlúčeninu podľa vynálezu možno získať tak, ako to uvádza EP-A1 0 296 721 a jej kyslé adičné soli možno jednoducho vyrobiť spôsobmi odborníkom dobre známymi.

Farmakológia

Zlúčenina podľa vynálezu bola testovaná nasledovnou uznávanou a spoľahlivou metódou:

Kognitívna schopnosť po ÚPM

Potkany boli podrobené poškodeniu mozgu rýchlym injikovaním objemu tekutiny do kraniálnej dutiny, ako to uvádza Dixon, C. E. et al., J. Neurosurgery, 67 (1987), 110-119. Poškodené zvieratá boli 1. až 15. deň po úraze s. c. liečené alebo fyziologickým roztokom alebo 5(2-etyl-2H-tetrazol-5-yl)-1,2,3,6-tetrahydro-1-metyl-4pyridínom so začiatkom liečby 24 hodín po úraze v dávke 3,6 μΐηοΙ/kg alebo 15pmol/kg.

Potlačenie reflexu vzpriameného postoja bolo stanovené podľa Dixona et al., 1987, ako je uvedené vyššie.

Telesná hmotnosť bola zaznamenaná pred úrazom a na 1. až 5. deň po úraze a výkon v otočnom teste bol stanovený 1. až 5. deň po úraze podľa Hamma, R. J. et al., J. Neurotrauma, 11, (1994), 187-196. Otočný test bol použitý na meranie motorickej schopnosti po ÚPM.

Nakoniec sa merala priemerná doba (+ S.E.M.), kým potkany dosiahli cieľovú plošinu v Morrisovom bludišti s vodou, na 11. až 15. deň po úraze. Výsledky sa analyzovali pomocou ANOVA. Počas testovania vo vodnom bludišti boli všetky zvieratá injikované 10 minút pred hodnotením v bludišti.

Zvieratá so simulovaným poškodením (zvieratá pripravené na úraz, ale bez injikovania objemu tekutiny do kraniálnej dutiny) boli zahrnuté pre porovnanie.

Kvantifikácia ChAT neurónov po ÚPM

Potkany boli podrobené úrazovému poškodeniu mozgu injikovaním objemu tekutiny do kraniálnej dutiny a boli liečené, ako je uvedené vyššie. Boli s. c. injikované fyziologickým roztokom alebo testovanou zlúčeninou (5-(2-etyl-2Htetrazol-5-yl)-1,2,3,6-tetrahydro-1-metylpyridínom , 15 μιτιοΙ/kg) (n = 5). Zvieratá so simulovaným poškodením boli injikované (s. c.) fýziologickým roztokom (n=4) alebo testovanou zlúčeninou, 15 μιτιοΙ/kg) (n = 4).

Potlačenie reflexu vzpriamenia bolo stanovené, ako je uvedené vyššie. Možná strata cholinergných neurónov následkom ÚPM sa určila kvantifikáciou cholínacetyltransferázových (ChAT) imunoreaktívnych neurónov v bazálnom prednom mozgu. Na 15. deň po úraze (2 až 4 hodiny po poslednej injekcii) boli všetky zvieratá anestetizované pentobarbitálom (90 mg/kg, i. p.) a boli transaortikálne perfundované 200 až 250 ml izotonického fyziologického roztoku a následne 500 ml 4,0 % paraformaldehydu/0,2 % kyseliny pikrovej v 0,1 M fosfátovom pufri pri rýchlosti 500 ml/30 minút pri izbovej teplote. Po perfúzii boli mozgy rozdelené na 2 časti a 24 hodín boli uchovávané v tom istom roztoku pri 10 °C. Koronálne 40μ rezy boli poukladané na vibratom cez nukleá predného mozgu a

-5každý 5. rez sa hodnotil na ChAT imunoreaktivitu. Paralelné rezy boli sfarbené kvôli Nissi substancii krezylovou violetou pre kvantitatívne stanovenie akýchkoľvek možných strát cholinergných a necholinergných neurónov v bazálnych nukleách predného mozgu.

Voľne plávajúce rezy predného mozgu boli inkubované pri konečnej koncentrácii ChAT protilátok (1:50) 1,0 pg/ml v 0,01 M fosfátom pufrovanom fýziologickom roztoku (PBS)s obsahom 0,1 % tritonu X-100. Rezy predného mozgu boli rozdelené a inkubované v primárnej protilátke 24 hodín pri izbovej teplote na kultivačných platniach (4 rezy/300 μΙ/jamka).

Po 4 premytiach v PBS boli rezy inkubované v sekundárnej protilátke (konský antimyšací IgG; Vector Laboratories, Burlingame, CA) 1 hodinu pri 37 °C. Po 3 premytiach v PBS boli rezy inkubované technikou myšaceho avidín-biotínperoxydázového komplexu (ABC) (Vector), plávajúce rezy boli spracované glukózooxidázo-diaminobenzidín-niklovou metódou opísanou Shu et al., Neurosci. Lett., 85, 1988, 169-171. Reakcia bola ukončená prenesením rezov do TBS. Rezy boli nanesené na želatino-chróm-hlinikom obalené sklenené sklíčka a nechali sa cez noc vysušiť pri izbovej teplote, boli dehydratované zvyšujúcimi sa koncentráciami etanolu a xylénu a potom boli prekryté Permountom.

ChAT imunoreaktívne neuróny v strednom septálnomi nukleu (MSN), vo vertikálnom limbálnom nukleu diagonálneho zväzku (VDB) a v nukleu basalis magnocellularis (NMB) boli spočítané pomocou mikropočítačového zobrazovacieho systému (MCID) (Imaging Research Inc., Ontario, Kanada). Hranice medzi MSN a VDB boli definované ako predná spojka. NMB bol definovaný ako imunoznačené neuróny lokalizované vglobulus pallidus a v susednej časti vnútornej kapsuly. Počty buniek sa určili u každého zvieraťa, boli získané v 0,2 mm vzdialenosti v nukleoch predného mozgu. Počty buniek sú vyjadrené ako skupinové priemery na 10 000 pm² pre každý nukleus predného mozgu.

Neuróny MSN, VDB a NMB z paralelných rezov boli farbené krezylovou violetou a tiež boli spočítané na MCID. Vzhľadom na veľký počet celkových cholinergných a necholinergných neurónov, ktoré sa farbia v týchto oblastiach krezylovou violetou, v každom nulkeu sa spočítala bilaterálna vzorka neurónov v každom nukleu. Na spočítanie buniek pre každý nukleus sa použila mriežka

-6s predznačenými oblasťami. Pre MSN a VDB nukleá sa nakaždej strane spočítali tri 2 000 μπι² oblasti (t. j. celková plocha pre každý nukleus predstavovala 12 000 pm² pre každý zo štyroch počítaných rezov). Pre NMB sa na každej strane spočítala jedna 12 000 pm² oblasť (celková plocha = 24 000 pm² v každom zo štyroch počítaných rezov). Kvantifikovali sa iba veľké bunky (> 24 000 pm²priemer) s viditeľnými somatickými Nissi telieskami a s jasným neuronálnym typom jadra.

Výsledky

Nie sú žiadne významné rozdiely medzi jednotlivými poranenými zvieratami v supresii reflexu vzpriamenia po ÚPM. Toto naznačuje, že v každom experimente bola v skupinách zvierat závažnosť poranenia rovnaká. Zdanlivo poranené zvieratá sa vzpriamili rýchlejšie ako ktorékoľvek zvieratá po ÚPM (p < 0,0001 pre každé porovnanie). Supresia vzpriamenia u skupiny zdanlivo poranených zvierat je spôsobená inhalačnou anestézou použitou pred poranením.

Nebol žiadny významný rozdiel medzi ktorýmikoľvek poranenými skupinami vzhľadom na zníženie telesnej hmotnosti po ÚPM, čo opäť naznačuje rovnakú závažnosť poranenia medzi poranenými skupinami.

Medzi poranenými skupinami neboli žiadne významné rozdiely vo výkone v otočnom teste na 1.-5. deň po poranení. Nakoľko testovaná látka bola podávaná na 1. až 15. deň po poranení, tieto testy tiež naznačujú, že liečivo nemalo žiadny účinok telesnú hmotnosť alebo výkon v otočnom teste po úraze.

Anova test naznačil, že poranené zvieratá injikované testovanou zlúčeninou (s. c. ) denne mali lepší výkon v Morrisovom teste v bludisku s vodou ako poranené zvieratá, ktorým sa podával fyziologický roztok. Poranené zvieratá liečené testovanou zlúčeninou v dávke 15 pmolov/kg mali výkonnosť významne zlepšenú s p < 0,01.

ÚPM spôsobili významné zníženie počtu Chat-IR neurónov vo VDB a NMB u potkanov liečených fyziologickým roztokom a testovanou zlúčeninou. Avšak, zlúčenina podľa vynálezu významne oslabovala zníženie Chat-IR znížené po úraze

-7(32% redukcia v porovnaní so skupinou liečenou po úraze fyziologickým roztokom vo VDB a 51% v NMB). Paralelné rezy farbené krezylovou violetou nevykazovali žiadne zníženie počtu buniek v MSN, VDB alebo NMB, čo naznačuje, že strata Chat-IR neurónov nie je výsledkom smrti buniek.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Príklady prípravkov

Farmaceutické prípravky podľa vynálezu možno vyrobiť bežnými známymi postupmi.

Napríklad tablety možno vyrobiť zmiešaním účinnej zložky s bežnými pomocnými látkami a/alebo riedidlami a následne stlačením zmesi v tabletovacom zariadení. Príkladmi pomocných látok alebo riedidiel sú: obilný škrob, laktóza, mastenec, magnéziumstearát, želatína, laktóza, živice, a pod. Možno použiť akékoľvek ďalšie pomocné alebo aditívne farbivá, ochucovadlá, konzervačné látky, atď., za podmienky, že sú s účinnými zložkami kompatibilné.

Roztoky pre injekcie možno vyrobiť rozpustením účinnej zložky a možných aditív v časti vehikula, výhodne sterilnej vody, upravením roztoku na požadovaný objem, sterilizáciou roztoku a naplnením do vhodných ampuliek alebo liekoviek. Možno pridať akékoľvek vhodné bežne používané aditíva, ako ionizujúce činidlá, konzervačné látky, antioxidanty, a pod.

Typické príklady receptúr pre prípravky podľa vynálezu sú uvedené ďalej (množstvá účinnej zložky sú prepočítané na voľnú bázu):

1) Tablety:

(5-(2-ety I-2 H-tetrazo l-5-y l)-1,2,3,6-tetrahydro-1 -
metylpyridín	20 mg
laktóza	60 mg
kukuričný škrob	30 mg
hydroxypropylcelulóza	2,4mg
mikrokryštalická celulóza	19,2 mg

- 8sodná soľ kroskarmelózy typu A magnéziumstearát

2) Tablety:

(5-(2-etyl-2H-tetrazol-5-yl)-1,2,3,6-tetrahydro-lmetylpyridín laktóza kukuričný škrob povidon • mikrokryštalická celulóza sodná soľ kroskarmelózy typu A magnéziumstearát

3) sirup:

(5-(2-ety 1-2 H-tetrazol-5-y l)-1,2,3,6-tetrahydro-l metylpyridín sorbitol hydroxypropylcelulóza glycerol metylparabén propylparabén etanol ochucovadlo sodná soľ sacharínu voda

4) roztok:

(5-(2-etyl-2H-tetrazol-5-yl)-1,2,3,6-tetrahydro-l metylpyridín sorbitol kyselina octová aqua pro injectione

2,4 mg 0,84 mg mg 46,9 mg 23,5 mg

1.8 mg 14,4 mg

1.8 mg 0,63 mg

5,0 mg 500 mg mg 50 mg mg 0,1 mg 0,005 ml 0,05 mg 0,5 mg ad 1 ml

1,0 mg 5,1 mg 0,08 mg ad 1 ml

Claims

1. Použitie 5-(2-etyl-2H-tetrazol-5-yl)-1,2,3,6-tetrahydro-1-metylpyridínu alebo jeho farmaceutický prijateľnej kyslej adičnej soli na výrobu liečiva na liečenie úrazového poškodenia mozgu .

2. Použitie podľa nároku 1, v y z n a č u j ú c e sa t ý m, že liečivo obsahuje 5-(2-etyl-2H-tetrazol-5-yl)-1,2,3,6-tetrahydro-1-metylpyridín alebo jeho farmaceutický prijateľnú kyslú adičnú soľ v jednodávkovej forme.

3. Použitie podľa nároku 1,vyznačujúce sa tým, že liečivo obsahuje 5-(2-etyl-2H-tetrazol-5-yl)-1,2,3,6-tetrahydro-1-metylpyridín alebo jeho farmaceutický prijateľnú kyslú adičnú soľ v množstve 500 pg až 600 mg/deň, výhodne 1,0 mg až 100 mg/deň.

4. Použitie podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 3, vyznačujúce sa t ý m, že liečivo je určené na liečbu úrazového poškodenia mozgu spôsobeného prostredníctvom účinku fyzikálnych síl na skeleton hlavy alebo kanál miechy, ischémiou, mŕtvicou, zástavou dýchania, zástavou srdca, mozgovou trombózou alebo embolizmom, neurologickými problémami zapríčinenými AIDS, mozgovým krvácaním, encefalomyelitídou, hydrocefalom, pooperačnými javmi, mozgovými infekciami, otrasmi alebo vnútrolebečným tlakom, a/alebo na liečbu následkov takéhoto stavu.