JPH11508356A

JPH11508356A - 分子的にインプリントされた物質、これらの製造方法およびこのような物質を用いる装置

Info

Publication number: JPH11508356A
Application number: JP9502165A
Authority: JP
Inventors: ミンディヤン; ジョンエフダブリューキーナ; マーティンエヌウイボーン; クリストフジェイピーセヴレイン
Original assignee: オレゴン州; アドヴァンスドマイクロバイオティックスコーポレイション
Priority date: 1995-06-07
Filing date: 1996-06-07
Publication date: 1999-07-21
Also published as: US5587273A; AU6170896A; WO1996041235A1; EP0830639A1

Abstract

(57)【要約】分子的にインプリントされた基体及び、検体の存在又は不存在を検出するためにこのインプリントされた基体を用いるセンサを開示する。本発明の一例では、初めに、溶媒及び（ａ）ニトレンとの付加反応を起し得る重合体物質、（ｂ）架橋剤、（ｃ）機能性化モノマー及び（ｄ）インプリンティング分子を含有する溶液を作製することからなる。シリコンウェハを、この溶液を用いてスピンコーティングする。溶媒を蒸発させて、シリコンウェハ上にフィルムを形成する。このフィルムをエネルギー源に曝し、基体を架橋させ、更に次いで、そのインプリンティング分子をフィルムから抜き取る。本発明は、フィルムを形成し、次いで反応エネルギーに曝して、架橋基体を形成することにより、検体を検出するのに用いることができる。このインプリンティング分子を架橋された基体から抜き取る。このフィルムを、インプリンティング分子がフィルムと結合するのに十分な時間、１つ以上のインプリンティング分子に曝す。次いで、この分子の存在を検出する。本発明は、更に分子的にインプリントされた重合体物質及び分子的にインプリントされた重合体物質を用いるセンサを提供する。

Description

【発明の詳細な説明】分子的にインプリントされた物質、これらの製造方法およびこのような物質を用いる装置発明の分野本発明は、分子的にインプリントされた(imprinted)物質、特に有機ポリマー、このような物質の製造方法およびこれから製造された装置に関する。発明の背景ポリマー物質の表面は、予め変性される。例えばBraybrook 等らによる、Prog ．Polym．Sci．15 :715-734(1990)参照。前の研究は主に新規の組成物［Baum等らによる、Chem ．Mater．3:714-720(1991)］、バイオセンサー［Pantano 等らによる、J ．Am．Chem．Soc．113 :1832-1833(1991)］および生体材料［Allcock 等らによる、Chem ．Mater．3:450-454(1991)］の開発を目的としていた。表面変性はまた、フォトリソグラフィーと組み合わされて、ペプチドまたはオリゴヌクレオチドの合成、Fodor 等らによる、Science 251 :767-773(1991)およびKiederowsk i による、Angew ．Chem．Int．Ed．Eng．30 :822-823(1991)並びに生体高分子化合物の固定化、Rozsnyai等らによる、Angew ．Chem．Int．Ed．Eng．31 :759-761 (1992)を目的とした。業界で知られている表面変性方法のほとんどは、化学試薬Id での表面の連続的処理を含み、このような研究のいくつかのみがアジドを表面変性試薬として用いることを伴う。Breslow，in Scriven(ed.)による、Azides a nd Nitrenes ，第10章、Academic Press，米国ニューヨーク(1984);Harmer、Lang mur 7:2010-2012(1991)。ポリマーフィルムを変性する従来の方法の例には、ポリスチレンのスルホン化、Gibson等らによる、Macromolecules 13 :34(1980)、ポリ（アリールオキシ）ホスファゼンのスルホン化、Allcock 等らによる、Chem ．Mater．3:1120(1991) 、ポリエステルのプラズマ処理、Porta 等らによる、Chem ．Mater．3:293(1991) 、ポリイミドの塩基加水分解、Lee 等らによる、Macromolecules 23 :2097(1990 )、ポリホスファゼンの塩基加水分解、Allcock 等らによる、Chem ．Mater．3:14 41 (1991)およびポリ（ビニリデンフルオリド）の塩基処理、Dias等らによる、Macr omolecules 17 :2529(1984)が含まれる。ポリマーを変性する他の従来方法は、ポリエチレン等の炭化水素ポリマーの表面をガス相で発生したニトレンまたはカルベン中間体に暴露することを含む。Br eslow，in Scriven(ed.)による、Azides and Nitrenes，第10章、Academic Pres s，米国ニューヨーク(1984)。また、溶液中に発生したジフルオロカルベンは、１，４−ポリブタジエンに変性されることが報告された。Siddiqui等らによる、Macromolecules 19 :595(1986)。ペルフルオロフェニルアジド（ＰＦＰＡｓ）は、ＰＦＰＡｓをシクロヘキサンまたはトルエン等の炭化水素溶媒中で光分解すると、非フッ素化類似体よりもＣＨ挿入効率が優れていることが示された。Keana 等らによる、Fluorine Chem ．4 3 :151(1989); Keana 等らによる、J ．Org．Chem．55:3640(1990); Leyva等らによる、J ．Org．Chem．54:5938(1989)およびSoundararajan 等らによる、J ．Org ．Chem．55 :2034(1990)。ＰＦＰＡｓは最初は効率的光標識試薬として開発された。Cai 等らによる、Bioconjugate Chem ．2:38(1991); Pinney 等らによる、J ．Org ．Chm ．56:3125(1991)およびCrocker 等らによる、Bioconjugate Chem ．1: 419(1990)。最近、ビス（ＰＦＰＡ）は、ポリスチレン、Cai 等らによる、Chem ．Mater.2 :631(1990)、およびポリ（３−オクチルチオフェン）、Cai 等らによる、J ．Molec．Electron．7 :63(1991)の架橋剤として効率的であることが示された。分子インプリンティング方法もまた知られている。例えばMolecular Imprinti ng ，Macromol．Chem．187:687(1981)参照。分子インプリンティングによりポリマー有機物質等の物質中に特定の認識部位が発生する。既知の分子インプリンティング手法は、官能性モノマーまたはモノマーの混合物の存在下で架橋物質を含む。インプリンティング分子は、共有結合または他の相互作用、例えばイオン性、疎水性または水素結合により、官能性モノマーの相補的部分と反応し、インプリンティング分子への認識部位が基体物質に提供される。次に、インプリンティング分子を基体から除去して、認識部位を残す。これらのインプリンティング方法のいくつかは特許された。例えばMosbach の米国特許第5,110,883 号明細書には、分子インプリンティング手法による合成酵素および合成抗体の製造が記載されている。従来の方法は、センサを製造するのに用いることができる、分子的にインプリントされた薄いほとんど欠陥のないフィルムを提供しなかった。ほとんどの既知の手法は、インプリンティング工程中に重合したモノマー物質で開始する。これらの既知の方法によっては、受け入れられる程度に薄いフィルムの製造を制御することは事実上不可能であることが明らかになった。表面上医学的用途に設計されたセンサは、現在大いに注目されている。このようなセンサーで検体を検出するのに用いられる方法は多く、種々である。例えば Janata等、Anal．Chem．66:207(1994)参照。分子インプリンティングは最近、ある特定の物質の存在を感知するのに有用な手段であることが示された。Mosbach 、Trends Biochem．Sci.，19:9(1994)。しかし、フィルムの厚さにおける制限および既知の方法により生じた欠陥は、このような物質を、単一のセンサを用いた複数の検体の検出に用いる可能性をほとんど制限している。発明の要約本発明は、新規な、分子的にインプリントされたポリマーおよび該ポリマーの製造方法を提供する。インプリントされた分子は、シリコンウェハの表面の如き表面上に配置された薄いフィルムの製造を許容する。本発明は、公知技術に関連した多くの問題を解決する。本発明の一つの態様は、分子を分子的にインプリントする方法を含んでなる。この方法は、溶剤および（ａ）ニトレンとの付加反応を受けることのできるポリマー物質、（ｂ）架橋剤、（ｃ）官能性モノマーおよび（ｄ）インプリンティング分子を含んでなる溶液を形成することを含んでなる。この溶液は、例えばシリコンウェハ上に溶液のフィルムをスピンコートすることにより、基体上に設けられる。次いで、溶剤が十分に輝発性である場合、例えば該溶剤を蒸発することによりその溶剤を除去する。次いで残留物をエネルギー源に暴露するが、そのエネルギー源は、制限されることなく、エネルギーを付与された電子、エネルギーを付与されたイオン、光子および熱等に紫外線又は電子ビームから成る群から選ばれる。暴露工程は、架橋されたポリマー基体を形成する。次いでインプリンティング分子を、例えば共有結合を開裂させることにより又は架橋された基体から抽出法により除去する。架橋剤は、必ずしもそうではないが、典型的には、次式：（式中、Ｘはハロゲンであり、そしてＲは低級アルキル、低級アルケニル又は低級アルキニルである）を満足する。官能性モノマーは、必ずしもそうではないが、一般的には次式：（式中、Ｘはハロゲンであり、そしてＹは−ＯＨ，−ＲＯＨ，−ＳＨ，−ＲＳＨ，−ＣＨＯ，−ＣＯＯＨ，−ＣＯＯＲ，−ＮＯ₂，−ＮＨ₃，−ＮＨＲ₁および− ＮＲ₁Ｒ₂から成る群から選ばれる）を満足する。本発明の実施の典型例は、インプリンティング分子としてテオフィリンを用いて達成された。本発明方法は又、ポリマー物質上の予め選定された領域をエネルギー源に暴露することを含んでなる。これにより、非官能化領域に対する表面上に官能化された領域のパターンが作成される。検体に対する認識部位を有する物質を形成するための本発明の好ましい態様は、溶剤並びに（ａ）ニトレンとの付加反応を受けることのできるポリマー物質（このポリマー物質は、飽和ポリオレフィン、アクリル樹脂、ポリスチレン、ポリスチレン類似体、不飽和ポリオレフィン、ポリイミド、ポリエステル、共役ポリマー、導電性ポリマー、無機ポリマー、有機金属ポリマーおよび多糖類から選ばれる）、（ｂ）次式：（式中、Ｒは低級アルキル基、低級アルケニル基、又は低級アルキニル基である）で表わされる架橋剤、（ｃ）次式：（式中、Ｙは−ＯＨ，−ＲＯＨ，−ＳＨ，−ＲＳＨ，−ＣＨＯ，−ＣＯＯＨ，− ＣＯＯＲ，−ＮＯ₂，−ＮＨ₃，−ＮＨＲ₁および−ＮＲ₁Ｒ₂から成る群から選ばれる）で表わされる官能性モノマー、およびインプリンティング分子を含んでなる溶液を最初に形成することを含んでなる。次いで、シリコンウェハを溶液を用いてスピンコートする。溶剤を蒸発させ、これによりシリコンウェハ上にフィルムを形成する。フィルムを、エネルギーを付与された電子、エネルギーを付与されたイオン、光子および熱から成る群から選ばれたエネルギー源に暴露し基体を架橋させる。次いでインプリンティング分子を、フィルムから除去する。本発明は又、検体を検出する方法を提供する。この方法は、（ａ）ニトレンとの付加反応を受けることのできる基体、（ｂ）次式：（式中、Ｒは低級アルキル基、低級アルケニル基、又は低級アルキニル基であり、そしてＸはハロゲンである）で表わされる架橋剤、（ｃ）次式：（式中、Ｘはハロゲンであり、そしてＹは−ＯＨ，−ＲＯＨ，−ＳＨ，−ＲＳＨ，−ＣＨＯ，−ＣＯＯＨ，−ＣＯＯＲ，−ＮＯ₂，−ＮＨ₃，−ＮＨＲ₁および− ＮＲ₁Ｒ₂から成る群から選ばれる）で表わされる官能性モノマー、および（ｄ）インプリンティング分子を含んでなる溶液を形成することを含んでなる。溶剤を蒸発させてフィルムを形成し、次いでこれを反応エネルギーに暴露して架橋された基体を形成する。インプリンティング分子を架橋された基体から抽出する。フィルムにインプリンティング分子を結合させるのに十分な時間、該フィルムを１種又はそれ以上のインプリンティング分子に暴露する。次いで、分子の存在を検出する。インプリンティング分子を検出する工程は、暴露工程後フィルムのキャパシタンスを測定し、フィルムの光特性を測定するか、又はフィルムを分光学的に分析することを含むことができる。本発明は又、前記の如く分子的にインプリントされたポリマー分子を提供する。本発明のフィルムは、センサ、例えば治療法又は監用薬物を検出するためのセンサーを形成するために用いられる。インプリントされたフィルムをシリコンウェハ上にスピンコートし、コンデンサーの陽極板と陰極板の間に設けられるインプリントされたポリマー物質を得る。コンデンサーの変化は、インプリントされたフィルムに検体を結合させることによって検出される。図面の簡単な説明図１は、インプリントされた基体によってシリコン・ウェハをスピン・コートする本発明の一方法を示す概略図である。図２は、本発明に係るストリップ・キャパシタ及びインプリントされたフィルムの概略図である。図３は、フィルムに対しインプリンティング分子を共有結合させる合成チャートの１例を示す。図４は、インプリントされた分子を有するフィルムと有さないフィルムとに対するキャパシタンスとバイアス電圧との関係データを示す図表である。図５は、本発明で用いるインタデジタル電極を備えたキャパシタンを示す概略図である。図６ａは、基体内部の検体がインプリントされた欠損個所に検体分子が結合していることを示す概略図である。図６ｂは、基準−センサー・キャパシタ／インプリントされたフィルムを示す概略図である。好ましい実施態様の詳細な説明本発明は、重合体物質を分子的にインプリントする方法及びこのようにしてインプリントされた分子から形成されるセンサに関する。ここで使用しているように、「分子的にインプリントする」とは、分子をまず共有結合あるいは水素結合等の他の相互反応のいずれかにより物質に取り込み、次にこれを除去して構造的かつ反応可能な認識部位を物質中に付与する方法をいう。限定するものではないが、例えば、重合体基体を架橋する際に検体を可逆的に基体に対して結合させて構造的認識部位を付与しても良い。また、構造的認識部位は一般には検体と共有結合あるいは他の手段によって相互に反応する成分を含む。その後、検体は基体から除去されて基体中に検体認識部位を付与し、この検体認識部位は、該認識部位に効果的近傍に近づいた検体分子と反応可能となっている。検体は、該認識部位と互いに反応するものである。この反応は、例えば、静電容量の変化あるいはスペクトルの性質が変化することによって検知できる。本発明は、実質的に数が制限されない検体から形成される実質的に数が制限されない認識部位を用いる上記物質を製造する方法を提供する。本発明は、特に、スペーサによって離間された少なくとも２つのアジド基を含む架橋剤の存在下に有機重合体基体を架橋する方法に関する。重合体物質のモノマー前駆体と異なり、共有結合あるいは他の非共有結合手段のいずれかによってインプリンティングする分子と結合することができる機能性モノマーの存在下にアゾ化合物を使用して重合体物質を架橋することができる。また、機能性モノマーは、例えば、挿入反応等によって高分子材料と結合して重合体基体を結合して固定化することが可能なアゾ化合物あるいはポリアゾ化合物を含むことが好ましい。インプリンティング分子を機能性モノマーに結合している共有結合を切断するか、あるいは機能性モノマーをインプリンティング分子に結合している非共有結合性相互反応を妨げることによって該インプリンティング分子が除去されるまで、インプリンティング分子は一時的に機能性モノマーによって適当な部位に保持される。以下に、基体、特に有機重合体物質；架橋剤；共有結合化合物及び非共有化合物機能的モノマーを含む機能性モノマー；及びインプリンティングト分子を含め、本発明を実施する為に用いる物質について詳細に論議する。また、種々の検体を基体に組み込みその後、検体を除去して認識部位を形成する方法についても以下に詳細に記載する。さらに、これらの材料を用いるセンサについても説明をおこなう。Ｉ．定義この出願において使用したある用語は見慣れないものであるかもしれないので、これらの用語の定義を以下に説明する。これらの定義は、これらの用語を与えられている特定の定義に限定するものであると解すべきではなく；むしろ、これらの定義は各用語に関する代表的な意味を説明するものであると解すべきである。「基体」とは、本発明によって機能性化することができる物質である。基体は、分子（例えば、熱可塑性重合体分子）、熱硬化性分子の網状組織（例えば、交差結合した重合体分子）、またはあるガラスおよび結晶中に見い出されるような他の原子または分子の結合体を含有することができる。「表面分子」とは、基体表面上にその少なくとも一部分が存在している基体分子である。「重合体基体」とは、重合体分子または重合体分子の網状組織を含有する基体である。「重合体分子」とは、「単量体」と呼ばれる比較的小さい分子を分子配列中に共有結合させることにより生成する分子である。重合体分子中に存在する単量体は同じ分子でも、異なる分子でもよい。重合体分子は、セルロース、デン粉、タンパク質、および核酸（しかし、これらに限定されるものではない）のような天然のものでも、ナイロンおよびポリエチレン（しかし、これらに限定されるものではない）のような合成のものでもよい。基体中で、重合体分子は、非共有交差結合した網状組織（熱可塑性樹脂として）または共有交差結合した網状組織（熱硬化性樹脂として）を包含するいくつかの方法で、互いに結合することができる。「機能性化した基体」とは、１個または２個以上の官能基が、本発明に従って、一般的に共有結合している基体である。「官能基」とは、所望の化学的性質を備えるように組織された方法で、一体に結合された１個または２個以上の原子の基である。本発明においては、機能性化剤の官能基は、本発明に従って基体表面に共有結合させた場合に、類似の官能基またはタイプの異なる官能基のいずれかとの１種または２種以上の結合反応に関与することができる。このような結合反応によって、（ａ）種々の追加の官能基のうちの複数の官能基への結合；または（ｂ）機能性化した基体分子の相互の結合（交差結合）が生じることがある。「機能性化した重合体」とは、機能性化した重合体基体または機能性化した重合体分子のいずれに対しても、適用することができる。「機能性化剤」とは、本発明に従って機能性にする物質に適合した反応剤である。機能性化剤の分子は、第２官能基に結合する少なくとも１個のニトレン含有基(nitrenogenic grerup)（第１官能基として）を有するニトレン含有基は、該ニトレン含有基と官能基との間の機能性化剤の分子構造によって拘束されているのが好ましい。ニトレン含有基は、基体表面を機能性化反応条件下手、反応することができる。機能性化剤における「ニトレン含有基」は、反応エネルギー源に曝された際にニトレン基になる化学的部分(chemical moiety)である。「ニトレン基」（または、一般的に「ニトレン」または「ニトレン中間体」と呼ばれる）とは、構造：ＲＮによってシングレットとして、また構造：Ｒ−Ｎによってトリプレットとして記載することができる特殊な形態の窒素である。ニトレンは、当業者によってカルベンの同族体であると見做されている。カルベンと同様に、ニトレンは一般的に中間体と見做されている。ニトレンは反応性が高く、普通の条件下では一般的に単離不能である。しかし、本発明に従う反応のようなある化合反応は、ニトレンの存在を仮定することなしに、既知の反応機構では説明できない。重要なニトレン反応は下記のように要約することができる：（ａ）ニトレンは、アリールニトレンを含めて、−ＣＨ部位および−ＮＨ部位において付加反応を受ける；例えばＡｒ−Ｎ＋Ｒ₃ Ｃ−Ｈ→Ａｒ−ＮＨＣＲ₃ Ａｒ−Ｎ＋Ｒ₂ Ｎ−Ｈ→Ａｒ−ＮＨＮＲ₂ （ｂ）また、ニトレンは−Ｃ−Ｃ−結合および−Ｃ＝Ｃ−結合において付加を受ける：Ｒ−Ｎ＋Ｒ₂ Ｃ＝ＣＲ₂ → ここに使用するように、「付加反応」とは、機能性化剤ニトレン基と表面分子との反応の説明に使用する場合には、一般的に、ニトレンが基体表面上の分子によって受けることがある種々の付加反応および挿入反応のことである。機能性化反応は、ニトレン含有基を有する機能性化剤が、ニトレン含有基をニトレン中間体に転化させる反応エネルギー源に曝された場合に、生起する。機能性化反応は、ニトレン中間体と基体表面との反応によって進行する。「反応エネルギー源」とは、特に機能性化剤分子におけるニトレン含有基を基体表面と反応するニトレンに転化することにより、本発明に従って機能性化反応を進めるエネルギー源である。適当な反応エネルギー源としては（以下のものに限定されるものではないが：光子（紫外（ＵＶ）光、ディープＵＶ光、レーザー光、Ｘ線、および赤外放射の形態の熱または導電加熱）、付勢された電子（例えば、電子ビーム）、および付勢イオン（例えば、イオンビーム）がある。これらの反応エネルギー源は、従来、リトグラフィー、走査顕微鏡、およびＵＶ光および可視光の光子の場合には光化学反応および蛍光分子の励起の実施のような仕事に使用される。「機能性化反応」とは、基体表面および本発明に従って機能性になる反応である。機能性化反応は、１つまたは２つ以上の段階から構成することができる。少なくとも１つの段階は、反応エネルギー源の存在下に、基体表面とニトレン含有基を有する機能性化剤の分子との反応を伴う。II ．物質Ａ．基体一般に、インプリンティング分子用の認識部位を生成する為に用いる原料は、ニトレンと反応し得る重合体物質である。インプリンティング分子の基体生成に有用な重合体物質は、次のようなものがあるが、これ等に限定されるものではない。（ａ）ポリエチレン、塩化ポリビニル、ポリテトラフルオロ−エチレン、ポリプロピレン、ポリブテン及びこれ等のコポリマー等により例示される飽和ポリオレフィン。（ｂ）アクリル酸、メタクリル酸〔ポリ（メチルメタクリレート）、ポリ（ヘキシルメタクリレート）〕及びアクリロニトリル等のポリマー及びコポリマーのようなアクリル樹脂。（ｃ）ポリ（ｐ−クロロスチレン）及びポリ（ｐ−ヒドロキシスチレン）等のポリスチレン及びその類似体。（ｄ）ポリ（イソプレン）及びポリ（ブタジエン）等の不飽和ポリオレフィン。（ｅ）ポリイミド（ベンゾフェノン）テトラカルボン酸二無水塩／テトラエチルメチレン−ジアニリン等のポリイミド。（ｆ）ポリ（トリメチレンアジペート）及びポリ（ヘキシメチレンセバケート）等のポリエステル。（ｇ）ポリ（３−アルキルチオフェン）、ポリ（３−アルキルピロール）及びポリアニリン等の共役伝導性ポリマー。（ｈ）ポリ（アリールオキシホスファゼン）、ポリ〔ビス（トリフルオロエトキシ）ホスファゼン〕、ポリシラン、ポリカルボシラン、シロキサンポリマー及び他の珪素含有ポリマー等の無機ポリマー。（ｉ）１９９２年８月３１日刊行のＣｈｅｍｉｃａｌａｎｄＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＮｅｗｓ第８頁に記載されたようなポリクロコナイン及びポリスクアレン等の有機金属（即ち、金属特性を有する有機ポリマー）。（ｊ）パラジウムポリーイン及びフェロセン含有ポリアミド等の有機金属ポリマー。（ｋ）セルロース繊維，キチン及び澱粉等の多糖類。Ｂ．架橋剤前述した基体は官能性モノマー及びインプリンティング分子の存在下で、架橋剤を用いて架橋される。代表的な架橋剤はスペーサーにより分離されている２又は３以上のニトレン含有基中心を有する。スペーサーは本質的には順次の諸反応に不活性な全ての有機化合物であって良く、基体を効果的に架橋するようにニトレン含有基間の所要の距離を提供し得るものである。特に好適な架橋剤は、次の構造式Ｉで示されるアルキレン１，２−ビス（４− アジドテトラハロベンゾエート）に基づくものである。式Ｉ中のＲは低級アルキル基、低級アルケニル基又は低級アルキニル基から成る群から選択したもの、特に低級アルキル基を示し、「低級」とは炭素原子数１０又は９以下の直鎖及び分枝鎖状の炭素鎖の何れの炭素鎖の場合も包含する。Ｘはハロゲンから成る群から選択したものであり、フッ素が特に好適なハロゲンである。式Ｉはカルボン酸基に対してパラ位置にあるアジド基を示す。このことは単に説明の為のものであり、一個又は複数のアジド基は環の他の位置に存在し得ることが理解されるべきである。架橋剤として現在好適な化合物は、次の構造式IIに示すエチレン１，２−ビス（４−アジド−２，３，５，６−テトラフルオロベンゼン）である。Ｃ．官能性モノマー官能性モノマーとしては殆んど無限の数の化合物を用い得るが、好適な化合物はアジド生成用のニトレン含有基中心を有する。特に好適な化合物は、次の構造式IIIに示すハロフェニルアジドである。式III中のＹは通常、ヒドロキシル（ＯＨ）、低級アルキルアルコール（−ＲＯＨ）、スルフィドリル（ＳＨ）、低級アルキルチオール（−ＲＳＨ）、ニトロ（ＮＯ₂）、アミン（−ＮＨ₃、−ＮＨＲ₁、−ＮＲ₁Ｒ₂）、アルデヒド（−ＣＨＯ）、カルボン酸（−ＣＯＯＨ）及びエステル（ＣＯＯＲ）から成る群から選択したものであるが、必ずしもこれ等に限定するものではない。Ｙの選択はインプリンティング分子を考慮し、架橋反応中にインプリンティング分子が基体中に保持されるようにインプリンティング分子がＹ基と共有的又は非共有的に反応する能力を考慮することにより、最良に決定される。このことはインプリンティング分子上に存在する官能基を考慮し、次いでインプリンティング分子上に存在する官能基と共有的又は非共有的に反応し得る官能基を有する官能性モノマーを選択することにより、最良に決定される。次の表Ｉに本発明の実施に用い得る官能性モノマーの特定の例を示すが、本発明の実施に用い得る官能性モノマーはこれ等のみに限定されるものではない。Ｄ．インプリンティング分子上述した機能性単量体は、インプリンティング分子と共有的に、または非共有的に相互作用するように選択される。たとえば、加工用プロトタイプのインプリントされた重合体物質は、インプリンティング分子としてテオフィリンを用いた。テオフィリンは、恐らく水素結合により重合体物質と連結される。テオフィリンの分子構造は下記の式４として示される。しかし、当業者は、機能性単量体の適当な選択により本発明を実施するのにあらゆるインプリンティング分子を実際使用し得ることがわかる。インプリンティング分子として本発明の実施に使用し得る化合物の追加例を表２に制限なしに列挙する。かかる追加例の化合物を、たとえばメルクインデックス（最新版）およびフィジシャンデスクレファレンス（最新版）で見出すことができる。表２は機能性分子として使用し得る治療剤を示す。また、表３は機能性分子として使用し得る監用薬品を示す。基体を上述したもののような機能性単量体およびインプリンティング分子の両者の存在下で交差結合すると、インプリンティング分子が次に基体から除去される。当業者は、インプリンティング分子の除去方法がインプリンティング分子と機能性単量体との相互作用の性質に左右されることが分かる。相互作用が共有性の場合、共有結合を破壊する必要がある。非共有タイプの相互作用の一例として相互作用が水素結合に基づく場合、インプリンティング分子を交差結合した基体から抽出することができる。加工用プロトタイプにおいては、ポリスチレン重合体物質で明らかに水素結合したテオフィリンが交差結合した基体からアルコール／酢酸混合物で抽出された。例１本例では、インプリンティング分子としてテオフィリンを使用した、分子的にインプリントされた材料を生成させることについて述べる。最初に、下記の表４に示す材料を含有する溶液を、約２．０ｍｌのキシレン中に各薬剤を溶解させることによって生成させ、表４には材料の量を示した。この製造プロセスを図１に示す。表４に列記した各成分を含有する溶液を、シリコンウエハー上に４０００ＲＰＭでスピンコートした。これによって、約２０ｎｍの厚さを有する薄膜が生成した。次いでこの膜を６０℃で３０分間焼成し、この後、２５４ｎｍで５分間照射して、重合性基質を架橋反応させた。次いで、約０．１ｃｍ²の面積を有する薄い金層を、図２に図示したようなフォトマスクを使用したフィルム上に蒸着させた。次いで、前記フィルムを９：１メタノール／酢酸の溶液で約２分間抽出することによって、このインプリントされた分子を基体から除去し、テオフィリン認識部位を有する、分子的にインプリントされたフィルムを得た。例１に記載したのと同様の方法において、インプリンティング分子は、前記基体へと共有結合させることもできる。前記基体を架橋させるための光分解の間、官能性単量体は、重合体網目構造に対して共有的に結合し始める。次いで、この共有的に結合したインプリント分子は、架橋した基体から化学的に開裂し、架橋した基体中に検体の認識部位を残す。例えば、官能性単量体は、限定はされないが、エステル、ケタールまたはイミンを生成させることによって、架橋基体中に含有させることができる。こうした化合物の生成は、本分野に習熟した者には知られている。例２インプリンティング分子を基体に対して共有結合させる方法を、図３に示す。図３に示すように、１，５−ジアミノナフタレン（図３に示す化合物５）のようなインプリンティング分子が、４−アジドテトラフルオロフェニルアルデヒドヘと共有結合し、イミン加工物６を生成している。次いで、ポリスチレン、エチレン、１，２−ビス（４−アジド−２，３，５，６−テトラフルオロベンゾエート）およびイミン化合物６の溶液を、シリコンウエハーのような材料上へとスピンコートする。このスピンコートに続いて残った残留物を、光分解に供し、架橋フィルム７を生成させ、これはポリスチレンに共有結合したインプリント分子を備えている。次いで、このイミン化合物を希塩酸を用いることによって、加水分解できる。この酸がイミンを開裂させ、インプリント分子である１，５−ジアミノナフタレンを解放する。また図３で示すように、ジアミノナフタレンに対する認識部位が、このようにして重合体基体中へと含有される。従って、この共有結合した分子インプリントされた基体は、アミンフィルム９の可逆的な生成によって、ジアミノナフタレンを共有結合させることができる。このようにして、インプリント分子を、基体の中に可逆的に含有させ、このインプリント分子として使用した分子に対応する基体中の認識部位を生成させることができる。Ｅ．インプリントされた物質を用いて、検体の存在を検出する例１および／または２において上で例示したように、いったんインプリントされたフィルムを製造すると、このフィルムを使用して、インプリンティング分子の存在を検出できる。いったん分子的にインプリントされた物質へと検体を接触させれば、検体の存在を検出するための方法は多数存在する。例えば、制限するものではないが、インプリント分子と相互作用する際のフィルムのキャパシタンスの変化を監視すること：例えばＩＲ、ＵＶ、ＮＭＲまたはＸ線光電子分光器によって、インプリントされた基体に結合したインプリンティング分子を含有する基体を分光学的に評価すること：および放射線標識された検体を検出することによって、検体を検出できる。例１において上述したようにして製造したインプリントされた基体を試験し、検体との相互作用に際して生ずるキャパシタンスの変化によって、その存在を検出できるかどうかを測定した。これを例３で後述する。例３例１で上述したようにして、インプリントされたフィルムを製造した。次いで、このインプリントされた物質を、９９：１のアセトニトリル／酢酸中にテオフィリンを含有する溶液中に、約１０分間、図１に示したようにして収容した。次いで、このフィルムのキャパシタンスを、フィルムに対してインプリンティング分子が結合していないフィルムと共に、キャパシタ板としてシリコンウエハおよび金被覆層を使用して、測定した。これらのキャパシタンス実験から集めたデータを、図４に示す。図４には、幾つかの曲線が含まれている。曲線ａは、テオフィリンが結合していないフィルムについてのキャパシタンスの曲線を示す。曲線ｂは、テオフィリン溶液でインキュベートした後のフィルムのキャパシタンスを示す。図４に明らかに示されているように、分子的にインプリントされたフィルムの認識部位へとテオフィリンが結合すると、フィルムのキャパシタンスは劇的に変化する。従って、上述したようにフィルムをインプリンティングすることによって、検体の検出用のフィルムを生成させることができる。検出フィルムの作業用の原型を作製し、いったんフィルムが検体と相互作用すると、フィルムのキャパシタンスの変化によって検体の存在を検出できるようにした。図４における曲線ｃは、検体との相互作用後のフィルムのキャパシタンスである。次いで、この検体を上述したようにしてメタノールおよび酢酸を用いて抽出した。曲線ｃにおけるキャパシタンスは、曲線ｂにおけるものよりも低いが、曲線ａよりも高い。これは本プロセスが完全には可逆的ではないことを示し得るけれども、図４の結果は、フィルムのキャパシタンスの変化によって検体を検出できることを、明らかに示している。このプロセスは、インプリントされたフィルムによって被覆された、インターディジタル構造の電極から製造された複数の小領域を有するキャパシタを使用して、達成することもできる。これについて図５に図示する。これらの電極を標準ＥＢまたはＵＶリソグラフィー法によって描画し、熱蒸着法およびリフトオフ法によって作製した。この電極間隔、厚さおよび長さは、所望の絶対キャパシタンスが得られるように設計できる。少なくとも約１μｍ²の小さいキャパシタを使用して本発明を実施できる。キャパシタンスの変化によって検体を検出するのに使用できる装置を作製するために、インプリントされた重合体を電極装置上へとスピンコートし、図６ａに図示するようなキャパシタ誘電体を作製できる。これによって、重合体の露出面上で、インプリント分子の導入または除去を実施するための化学的方法が可能となる。電極間のキャパシタンスを、第二の参照インターディジタル電極キャパシタに対して、ただし選択した検体用の認識部位を有していないことをのぞけば、前記と同じ重合体によって被覆された同じ物理基体上で測定する。これを図６ｂに図示する。ＵＶまたはＥＢ反応エネルギー源を使用して電極領域中の重合体を架橋させて、二つの隣接するキャパシタ上の異なる重合体被膜を導入することかできる。架橋反応していない物質は、適当な溶媒によって除去できる。第二のキャパシタを、第二の重合体フィルムを用いて前記プロセスを繰り返すことで被覆する。インプリンティング分子に対応する検体に対して物質を暴露した後に、この物質上で感知実験を実施した。２．６×１０^-3μｍ²のキャパシタ面積および２０ｎｍの誘電体厚さに対しては、前記変化を実行させるのに必要な分子数は６．５×１０⁸分子であると、現在考えられる。これは約０．２ｐｇのテオフィリンに対応する。言い換えると、インプリントされたフィルムは、ごく微量の検体を検出するのに使用できる。この小さなキャパシタの絶対キャパシタンスは約１００ｐＦであろうから、１−１０％の変化を、標準的技術によって容易に検出できる。この装置に対する応答時間は、非常に速く、約５０ｍｓのオーダー上である。キャパシタンス測定のための上述の方法に類似した方法においては、検体の存在を、キャパシタンス以外の手段、例えば上掲した分光学的検出方法によって検出することもできる。例えば、分子的にインプリントされたフィルムを生成でき、インプリンティング分子を除去できる。次いで、インプリントされた基体を、インプリンティング分子として使用した検体と結合させることができる。次いで、この検体と、インプリントされたフィルムとの間の相互作用を、このフィルムを分光分析、例えば、制限するものではないが、フーリエ変換ＩＲ分析に供することによって、測定できる。次いで、複数の検体を検出するセンサを、上述したインプリントされたフィルムを使用して製造できる。このセンサは、ほぼ間違いなく、複数の検体に対する複数の認識部位を有するフィルムを使用して、構成されるであろう。例えば、重合体フィルムは、制限するものではないが、表２および表３に列記した検体のような多様な検体に対する各認識部位を有するように、生成させ得る。このインプリントされたフィルムは、いったん検体が認識部位に結合すると検体の存在を検出する手段と、組み合わされる。例えば、インターディジタルキャパシタンスセンサを、図５および図６に示したようにして形成できる。各認識部位が適当な検体に対して結合すると、このフィルムのキャパシタンスが変化する。このキャパシタンスの変化は、既知の技術を使用して検出できる。また、このセンサでは、本発明のインプリントされたフィルムと組み合わせて、他の既知の検体検出手段を採用できる。そして、フィルムが可逆的に検体に結合し得るようにセンサを製造することができ、あるいは、フィルムが検体と非可逆的に結合するようにセンサを形成することができる。この場合には、本センサはおそらく廃棄可能な装置となるであろうし、あるいは本装置のインプリントされたフィルムの部分が、装置を最初に使用した後に、新しいインプリントされたフィルムと交換できるであろう。または、本装置は、プラグインモジュールを備えていてよく、各モジュールは、特定の検体を検出するのに特に有効であり、あるいは、複数の検体の特定の組み合わせを検出するのに特に有効である。本発明を、好適な実施形態に従って記載してきた。しかし、続く請求の範囲の原理および範囲から離れることなく、好適な実施形態に対して置換や変更が可能であることが理解される。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＵＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者キーナジョンエフダブリューアメリカ合衆国オレゴン州 97405 ユージンオニキスストリート 3854 (72)発明者ウイボーンマーティンエヌアメリカ合衆国オレゴン州 97405 ユージンアレンデイルレイン 1676 (72)発明者セヴレインクリストフジェイピーアメリカ合衆国ワシントン州 98642 リッジフィールドエヌダブリューイレヴンスアヴェニュー 21418

Claims

【特許請求の範囲】１．物質を分子的にインプリントするに当り、溶媒のほかに、ニトレンを付加反応することができる重合体物質、（ａ）架橋剤、（ｃ）機能性化する単量体、及び（ｄ）インプリンティング分子を含有する溶液を形成し：前記溶媒を蒸発させて残留物を残し；前記残留物をエネルギー源に暴露させて、架橋した重合体基体を形成し；前記架橋した重合体基体から前記インプリンティング分子を抽出する；ことを特徴とする物質を分子的にインプリントする方法。２．前記架橋剤は、次式：（式中のＸはハロゲン原子を示し、Ｒは低級アルキル基を示す）で表われる、ことを特徴とする請求項１記載の方法。３．Ｘはフッ素原子を示すことを特徴とする請求項２記載の方法。４．前記機能性化する単量体は、次式：（式中のＸはハロゲン原子を示し、Ｙは−ＯＨ、−ＲＯＨ、−ＳＨ、−ＲＳＨ、−ＣＨＯ、−ＣＯＯＨ、ＣＯＯＲ、ＮＯ₂、−ＮＨ₃、−ＮＨＲ₁及び−ＮＲ₁Ｒ₂ からなる群から選択した基を示す）で表わされることを特徴とする請求項１記載の方法。５．Ｘはフッ素原子を示すことを特徴とする請求項４記載の方法。６．Ｙせ−ＣＯＯＨ基を示すことを特徴とする請求項５記載の方法。７．前記インプリンティング分子は、次式：で表わされる、ことを特徴とする請求項１記載の方法。８．前記蒸発工程では、さらに、シリコンウェハの表面に前記溶液をスピンコーティングすることを特徴とする請求項１記載の方法。９．前記暴露工程では、前記残留物を紫外光または電子ビームに暴露させることを特徴とする請求項１記載の方法。 10．物質を分子的にインプリントするに当たり、溶媒のほかに、（ａ）ニトレンと付加反応することができる重合体物質、（ｂ）次式：（式中のＲは低級アルキル基を示し、Ｘはハロゲン原子を示す）で表わされる架橋剤、（ｃ）次式：（式中のＸはハロゲン原子を示し、Ｙは−ＯＨ、−ＳＨ、−ＣＨＯ、−ＣＯＯＨ、−ＮＨ₃、−ＮＨＲ₁及び−ＮＲ₁Ｒ₂からなる群から選択した基を示す）で表わされる機能性化する単量体、及び（ｄ）インプリンティング分子を含有する溶液を形成し；前記溶媒を蒸発させて残留物を残し；前記残留物をエネルギー源に暴露させて、架橋した重合体基体を形成し；前記架橋した重合体基体から前記インプリンティング分子を抽出する；ことを特徴とする物質を分子的にインプリントする方法。 11．前記重合体基体が、−ＣＨ、−ＮＨ、−ＯＨ、−Ｃ−Ｃ−、−Ｃ＝Ｃ−、ＳｉＯ−Ｈ、Ｓｉ−ＯＨ及びＳｉ−ＯＳｉ部分からなる群から選択した化学的部分を有することを特徴とする請求項１０記載の方法。 12．前記重合体物質は、飽和ポリオレフィン、アクリル樹脂、ポリスチレン、ポリスチレン同族体、不飽和ポリオレフィン、ポリイミド、ポリエステル、共役重合体、導電性重合体、無機重合体、有機金属、有機金属重合体、及び多糖類からなる群から選択した重合体物質であることを特徴とする請求項１０記載の方法。 13．前記架橋剤を表わす式中のＸは、フッ素原子であることを特徴とする請求項１０記載の方法。 14．前記架橋剤は、エチレン１，２−ビス（４−アジド−２，３，５，６−テトラフルオロベンゾエート）であることを特徴とする請求項１０記載の方法。 15．前記機能性化する単量体を表わす式中のＸは、フッ素原子であることを特徴とする請求項１０記載の方法。 16．前記機能性化する単量体は、４−アジド−２，３，５，６−テトラフルオロ安息香酸であるであることを特徴とする請求項１０記載の方法。 17．前記インプリンティング分子は、次式：で表わされる、ことを特徴とする請求項１０記載の方法。 18．前記溶媒を蒸発させる工程では、シリコンウェハに前記溶液をスピンコーティングしてフィルムを形成し、前記暴露工程では前記フィルムをエネルギー源に暴露させる、ことを特徴とする請求項１０記載の方法。 19．前記エネルギー源は、付勢された電子、付勢されたイオン、光子及び熱からなる群から選択したエネルギー源である、ことを特徴とする請求項１０記載の方法。 20．前記暴露工程では、前記重合体物質上の予め選択した領域を前記エネルギー源に暴露させて、その表面上に機能性化領域のパターンを非機能性化領域に対して生成することを特徴とする請求項１０記載の方法。 21．前記エネルギー源は光子である、ことを特徴とする請求項１０記載の方法。 22．前記エネルギー源は紫外光である、ことを特徴とする請求項１０記載の方法。 23．物質を分子的にインプリントするに当たり、溶媒のほかに、（ａ）ニトレンと付加反応することができる重合体物質、（ｂ）次式：（式中のＲは低級アルキル基を示し、Ｘはハロゲン原子を示す）で表わされる架橋剤、（ｃ）次式：（式中のＸはハロゲン原子を示し、Ｙは−ＯＨ、−ＳＨ、−ＣＨＯ、−ＣＯＯＨ、−ＮＨ₃、−ＮＨＲ₁及び−ＮＲ₁Ｒ₂からなる群から選択した基を示す）で表わされる機能性化する単量体、及び（ｄ）インプリンティング分子を含有する溶液を形成し；シリコンウェハに前記溶液をコーティングし；前記溶媒を蒸発させて前記シリコンウェハ上にフィルムを形成し；前記フィルムをエネルギー源に暴露させ、前記フィルムから前記インプリンティング分子を抽出する；ことを特徴とする物質を分子的にインプリントする方法。 24．前記重合体物質は、飽和ポリオレフィン、アクリル樹脂、ポリスチレン、ポリスチレン同族体、不飽和ポリオレフィン、ポリイミド、ポリエステル、共役重合体、導電性重合体、無機重合体、有機金属、有機金属重合体、及び多糖類からなる群から選択した重合体物質である、ことを特徴とする請求項２３記載の方法。 25．前記架橋剤は、エチレン１，２−ビス（４−アジド−２，３，５，６−テトラフルオロベンゾエート）であることを特徴とする請求項２３記載の方法。 26．前記機能性化する単量体は、４−アジド−２，３，５，６−テトラフルオロ安息香酸であるである、ことを特徴とする請求項２３記載の方法。 27．前記インプリンティング分子は、次式：で表わされる、ことを特徴とする請求項２３記載の方法。 28．物質を分子的にインプレントするに当たり、溶媒のほかに、（ａ）ニトレンと付加反応することができ、飽和ポリオレフィン、アクリル樹脂、ポリスチレン、ポリスチレン同族体、不飽和ポリオレフィン、ポリイミド、ポリエステル、共役重合体、導電性重合体、無機重合体、有機金属、有機金属重合体、及び多糖類からなる群から選択した重合体物質、（ｂ）次式：（式中のＲは低級アルキル基を示す）で表わされる架橋剤、（ｃ）次式：（式中のＹは−ＯＨ、−ＳＨ、−ＣＨＯ、−ＣＯＯＨ、−ＮＨ₃、−ＮＨＲ₁及び−ＮＲ₁Ｒ₂からなる群から選択した基を示す）で表わされる機能性化する単量体、及び（ｄ）インプリンティング分子を含有する溶液を形成し；シリコンウェハに前記溶液をコーティングし；前記溶媒を蒸発させて前記シリコンウェハ上にフィルムを形成し；前記フィルムを、付勢した電子、付勢したイオン、光子及び熱からなる群から選定したエネルギー源に暴露させ；前記フィルムから前記インプリンティング分子を抽出する；ことを特徴とする物質を分子的にインプリントする方法。 29．前記架橋剤は、エチレン１，２−ビス（４−アジド−２，３，５，６−テトラフルオロベンゾエート）であることを特徴とする請求項２８記載の方法。 30．前記機能性化する単量体は、４−アジド−２，３，５，６−テトラフルオロ安息香酸であるである、ことを特徴とする請求項２８記載の方法。 31．前記インプリンティング分子は、次式：で表わされる、ことを特徴とする請求項２８記載の方法。 32．検体を検出するに当たり、（ａ）ニトレンと付加反応することができる基体、（ｂ）次式：（式中のＲは低級アルキル基を示し、Ｘはハロゲン原子を示す）で表わされる架橋剤、（ｃ）次式：（式中のＸはハロゲン原子を示し、Ｙは−ＯＨ、−ＳＨ、−ＣＨＯ、−ＣＯＯＨ、−ＮＨ₃、−ＮＨＲ₁及び−ＮＲ₁Ｒ₂からなる群から選択した基を示す）で表わされる機能性化する単量体、及び（ｄ）インプリンティング分子を含有する溶液を形成し；前記溶媒を蒸発させてフィルムを形成し；前記フィルムを反応エネルギーに暴露して架橋した基体を形成し；前記架橋した重合体から前記インプリンティング分子を抽出し；前記フィルムを前記インプリンティング分子の１種または２種以上に、該インプリンティング分子を前記フィルムに結合させるのに十分な時間の間暴露させ；次いで、前記インプリンティング分子の存在を検出する；ことを特徴とする検体を検出する方法。 33．前記インプリンティング分子を検出する工程では、暴露工程後に前記フィルムのキャパシタンスを測定する、ことを特徴とする請求項３２記載の方法。 34．前記インプリンティング分子を検出する工程では、前記フィルムの光特性を測定する、ことを特徴とする請求項３２記載の方法。 35．分子的にインプリントされた物質において、インプリンティング分子の存在下に、次式：で表わされる架橋剤によって架橋させた重合体基体、及び、さらに、次式：で表わされる機能性化する単量体を含有する、ことを特徴とする分子的にインプレントされた重合体物質。 36．前記重合体物質は、飽和ポリオレフィン、アクリル樹脂、ポリスチレン、ポリスチレン同族体、不飽和ポリオレフィン、ポリイミド、ポリエステル、共役重合体、導電性重合体、無機重合体、有機金属、有機金属重合体、及び多糖類からなる群から選択した重合体物質であることを特徴とする請求項３５記載の方法。 37．前記架橋剤を表わす式中のＸは、フッ素原子であることを特徴とする請求項３５記載の方法。 38．前記架橋剤は、エチレン１，２−ビス（４−アジド−２，３，５，６−テトラフルオロベンゾエート）であることを特微とする請求項３５記載の方法。 39．前記機能性化する単量体を表わす式中のＸは、フッ素原子であることを特徴とする請求項３５記載の方法。 40．前記機能性化する単量体は、４−アジド−２，３，５，６−テトラフルオロ安息香酸であるであることを特徴とする請求項３５記載の方法。 41．請求項３５記載の分子的にインプリントされた物質を使用している、ことを特徴とするセンサ。