JPH10510264A

JPH10510264A - 細胞障害性ｔ−リンパ球応答の誘導

Info

Publication number: JPH10510264A
Application number: JP51764196A
Authority: JP
Inventors: レイチョードゥリー，シャマル; ラステッター，ウィリアム・エイチ
Original assignee: アイデック・ファーマシューティカルズ・コーポレイション
Priority date: 1994-12-07
Filing date: 1995-11-29
Publication date: 1998-10-06
Also published as: EP0801656A1; RU2201253C2; IS4479A; EP0801656A4; MD970199A; EE9700100A; RO120065B1; SK71397A3; WO1996017863A1; BR9509872A; NO972521L; GEP20012556B; AP661A; FI972431A0; UA49814C2; CN1175260A; CA2204738A1; LV11866B; TW487575B; US5709860A

Abstract

(57)【要約】ヒトまたは家畜もしくは農業用動物において、細胞障害性Ｔ−リンパ球応答(ＣＴＬ)を誘導するのに有用な方法および組成物。その方法には、ＣＴＬ応答が望まれる抗原を提供する工程、および安定化界面活性剤、ミセル形成性物質、および油のうちの２つまたはそれ以上を含んでなる、これらからなる、または実質的にこれらからなる、抗原製剤を提供する工程が含まれる。この抗原製剤は、免疫刺激性ペプチド成分を有さない、またはそのような成分が、所望のＣＴＬ応答を減少させないよう、十分に低いレベルであるのが好ましい。この製剤は、安定な水中油型エマルションとして提供するのが好ましい。

Description

【発明の詳細な説明】細胞障害性Ｔ−リンパ球応答の誘導発明の背景Ｓyamal ＲaychaudhuriおよびＷilliam Ｈ．Ｒastetterの「細胞障害性Ｔ−リンパ球応答の誘導」と共に題する、１９９２年７月２４日に出願された係属中の米国特許出願番号第０８／９１９,７８７号；および１９９１年７月２５日に出願された米国特許出願番号第０７／７３５,０６９号(現在、放棄されている)に記載されている内容は全て、本出願の一部をなす。本発明は、ヒトおよび家畜または農業用動物において細胞障害性Ｔ−細胞により媒介される応答を誘導するのに有用な方法および組成物に関する。細胞障害性Ｔ−リンパ球(ＣＴＬ)は、様々なウイルス感染および新生物性増殖または癌性増殖に応答する、主要な宿主防御機構であると考えられている。これらの細胞は、感染した細胞または形質転換した細胞上の様々な分子(クラスＩＭＨＣ分子と名付けられた)と共に、抗原フラグメントを認識することにより、感染した細胞または形質転換した細胞を排除する。ＣＴＬは、特定の細胞内でのある可溶性抗原の細胞質ローディングにより、実験的に誘導することができる。可溶性抗原単独での免疫化は、通例、特異的な細胞障害性Ｔ−リンパ球誘導には不十分である。ＣＴＬ応答を誘導することができる方法の１つは、問題となる抗原の重要な成分を良性感染物質のゲノム内へ取り込むための、組換え操作技術の利用を必要とする。そのような方法の目的は、宿主を緩和な自己限定的な感染にかけることにより、所望のエピトープに対して抗原に特異的な細胞障害性Ｔ−リンパ球応答を起こすことである。ワクシニア、ポリオ、アデノウイルスおよびレトロウイルス、さらにはまた、リステリア属およびＢＣＧといったような細菌を使用するキメラベクターが記載されている。例えば、Ｔakahashiら、８５Ｐroc．Ｎatl．Ａca d. Ｓci.、ＵＳＡ、３１０５、１９８８は、細胞障害性Ｔ−リンパ球の誘導のための可能性のある手段として、ＨＩＶ gp１６０エンベロープ遺伝子を発現する組換えワクシニアウイルスの使用を記載している。細胞により媒介される応答を誘導することができる第２の方法は、アジュバントの使用を必要とする。文献(art)は、アジュバントの使用に関する論議で十分に満たされているように思われるが、そのような文献では、細胞により媒介される免疫が誘導されたかどうか、またそのような細胞により媒介される免疫に細胞障害性Ｔ−リンパ球応答が含まれているかどうかは明らかではない。以下のものは、しかし、この分野における様々な刊行物の代表的なものである。Ｓtoverら、３５１Ｎature ４５６、１９９１(これは、本出願に対する先行技術であるとは認められない)は、β−ガラクトシダーゼ遺伝子を含む組換えＢＣＧを使用しての、β−ガラクトシダーゼに対するＣＴＬ応答を記載している。不完全フロイントアジュバントおよびβ−ガラクトシダーゼを使用しても、そのような応答は全く検出されなかった。Ｍitchellら、８Ｊ．Ｃlinical Ｏncology ８５６、１９９０(これは、本発明に対する先行技術であるとは認められない)は、「ＤＥＴＯＸ」と名付けられたアジュバントおよび同種異系黒色腫ライゼートを６週間にわたり５回投与する、転移性黒色腫患者の処置を記載している。一部の患者では、細胞溶解性Ｔ−細胞の増加が観察された。その著者らは、細胞障害性Ｔ−リンパ球の産生レベルを高める必要性を記載しており、またアジュバントのインターロイキン−２との組合わせ療法、さらにはまた、存在するであろう腫瘍に特異的なＴ−サプレッサー細胞のレベルを減少させるための、シクロホスファミドでの前処置を提唱している。ＤＥＴＯＸには、Ｓalmonella minnesotaから得られる解毒したエンドトキシン(モノホスホリルリピドＡ)、Ｍycobacterium phleiの細胞壁スケルトン、スクアレン油および乳化剤が含まれる。ＡllisonおよびＧregoriadis、１１Ｉmmunology Ｔoday ４２７、１９９０( これは、本発明に対する先行技術であるとは認められない)は、ヒトワクチンにおいて「使用を認可されている」唯一のアジュバントが、細胞により媒介される応答を一貫して誘起しないアルミニウム塩(ミョウバン)であることを述べている。ＡllisonおよびＧregoriadisは、「従って、フロイントの完全アジュバントの有効性を有するが、肉芽腫のような、その様々な副作用は有していないアジュバントを開発する必要性がある」と述べている。彼らは続けて、可能性のある方法が３つ存在する、例えば、リポソームの使用；ウマに対するインフルエンザワクチンにおいて使用を認可されている、免疫刺激性複合体(ＩＳＣＯＭ、これには、サポニンまたはクィル(Ｑuil)Ａ(２つの炭化水素鎖を有するトリテルペノイド) 、コレステロール、およびホスファチジルコリンが含まれる)と名付けられたアジュバントの使用(Ｍoreinら、Ｉmmunological Ａdjuvants and Ｖaccines、Ｐl enum Ｐress、１５３)；並びにスクアレンまたはスクアラン(Ｓqualane)(プルロニック剤を含む、または含んでいない)およびムラミルジペプチド(ＭＤＰ)のエマルション(ＳＡＦ)の使用が存在することを述べている。「サブユニット抗原は、細胞障害性Ｔ−細胞(ＣＴＬ)応答を誘起することができないと長い間考えられてきた」が、ＳＡＦは、マウスにおいて細胞により媒介される免疫を誘起すると言われている。Ｔakahashiら、３４４Ｎature ８７３、１９９０は、マウスにおける単回の皮下免疫化でのＩＳＣＯＭの使用による、クラスII 制限ヘルパーおよび細胞障害性Ｔ−リンパ球の誘導を記載している。彼らは、フロイントアジュバント、不完全フロイントアジュバント、およびリン酸塩緩衝化生理食塩水が、彼らが興味を持った標的に対して、細胞障害性Ｔ−リンパ球活性を誘導しなかったことを述べている。彼らは、他の型の外因性の可溶性タンパク質抗原での結果とは対照的に、彼らが、ＩＳＣＯＭを使用しての、外因性の完全なタンパク質での免疫化により、抗原に特異的なＭＨＣクラスＩ制限ＣＤ８⁺ＣＤ４^-ＣＴＬを開始することが可能であることを示したことを述べている。彼らはまた、記載した実験が、ＨＩＶタンパク質を含むＩＳＣＯＭを使用することにより、ヒトＣＴＬを誘起することが可能であり得ること、またＩＳＣＯＭをベースとするワクチンが、精製したタンパク質の使用により、長い間探し求められてきた目標である、ＣＴＬおよび抗体の両方の誘導を達成し得ることを示唆することも述べている。ＢyarsおよびＡllison、５Ｖaccines ２２３、１９８７は、ムラミルジペプチドを含む、または含んでいないＴＷＥＥＮ８０、ＰＬＵＲＯＮＩＣＬ１２１、およびスクアレンまたはスクアランが含まれるＳＡＦ−１の使用を記載しており、また彼らのデータは、ムラミルジペプチドを含む製剤が、ヒトおよび動物ワクチンに有用であろうことを示すことを示唆している。アジュバントの追加免疫注射をムラミルジペプチドなしで与えた。ムラミルジペプチドは、ムラミルジペプチドを含んでいないアジュバントの使用以上に、顕著に抗体産生を増加すると言われている。細胞により媒介される免疫は、Ｔ−ヘルパー細胞誘導を測定するための皮膚試験により、遅延型過敏性として測定された。そのような過敏性は、アジュバント中にムラミルジペプチドを与えた場合、より強く、またより持続した。同様なアジュバントは、Ａllisonら、米国特許第４,７７０,８７４号(ムラミルジペプチドおよびプルロニックポリオールの組合わせが、卵アルブミンに対する、強力な、細胞により媒介される応答、および体液性応答を誘起するために必須であることが述べられている)；Ａllisonら、米国特許第４,７７２,４６６号；Ｍurphy−Ｃorbら、２４６Ｓcience １２９３、１９８９(ムラミルジペプチドとの組合わせアジュバントの使用が、免疫応答の体液性部門および細胞性部門の両方の誘導を高めるであろうことが述べられている)；ＡllisonおよびＢyar s、８７Ｖaccines ５６、１９８７(細胞により媒介される免疫が、遅延型過敏性により、抗原に対するＴ−細胞の増殖性応答により、インターロイキン−２の産生により、また免疫化抗原を有する標的細胞の、特異的な、遺伝的に制限された溶解により示されるようなＳＡＦ(ムラミルジペプチドを含む)により誘起されることが述べられている)；ＡllisonおよびＢyars、Ｉmmunopharmacology of Ｉ nfectious Ｄiseases：Ｖaccine Ａdjuvants and Ｍodulators of Ｎon−Ｓpeci fic Ｒesistance 、１９１−２０１、１９８７；Ｍorganら、２９Ｊ．Ｍedical Ｖirology ７４、１９８９；Ｋenneyら、１２１Ｊ．Ｉmmunological Ｍethods １５７、１９８９；ＡllisonおよびＢyars、９５Ｊ．Ｉmmunological Ｍethods １５７、１９８６(アルミニウム塩および鉱油のエマルションは、抗体生産を増加するが、細胞により媒介される免疫は増加しないことが示され；またムラミルジペプチド製剤は、細胞により媒介される免疫を誘起することが示されている) ；Ｂyarsら、８Ｖaccine ４９、１９９０(本出願に対する先行技術であるとは認められず、それらのアジュバント製剤が、インフルエンザ赤血球凝集素抗原に対して、体液性応答を著しく増加し、また細胞により媒介される反応をより低い程度で高めることが述べられている)；ＡllisonおよびＢyars、２８Ｍolecular Ｉmmunology ２７９、１９９１(本出願に対する先行技術であるとは認められず；これは、ムラミルジペプチドの機能が、サイトカインの発現を誘導して、主要な組織適合性 (ＭＨＣ)遺伝子の発現を増加させることであること、また他のアジュバントを用いるより、良好な抗体および細胞応答が得られたこと、また同様な方法がヒトにおいて有効性があるかどうかを確かめることが望まれることを述べている)；Ａl lisonおよびＢyars、Ｔechnology Ａdvances in Ｖaccine Ｄevelopment ４０１、１９８８(これは、ＳＡＦを使用しての、細胞により媒介される免疫を記載している)；Ｅpsteinら、４Ａdvance Ｄrug Ｄelivery Ｒeviews ２２３、１９９０(これは、ワクチンの製剤に使用される、様々なアジュバントの概説を提供している)；ＡllisonおよびＢyars、９５Ｊ．Ｉmmunological Ｍethods １５７、１９８６(これは、ムラミルジペプチドのアジュバントへの添加が、モノクローナル免疫グロブリンおよびウイルス抗原を含め、様々な抗原に対する、細胞により媒介される応答を著しく増大することを述べている)；およびＭorganら、２９Ｊ．Ｍedical Ｖirology ７４、１９８９(これは、エプスタイン−バールウイルスに対するワクチンの製造のためのＳＡＦ−１の使用を記載している)により記載されている。Ｋwakら、Ｉdiotype Ｎetworks in Ｂiology and Ｍedicine、Ｅlsevier Ｓci ence Ｐublishers、１６３頁、１９９０(本出願に対する先行技術であるとは認められない)は、ヒトにおけるＢ−細胞リンパ腫イディオタイプに対するアジュバントとしての、ムラミルジペプチドを含んでいないＳＡＦの使用を記載している。具体的には、リン酸塩緩衝化生理食塩水中の、プルロニックＬ１２１、スクアラン、および０.４％ＴＷＥＥＮ−８０のエマルションを、そのイディオタイプと共に投与した。彼らは、「アジュバントの添加が、体液性応答・・・をさらに増大するであろうし、細胞応答の誘導もまた促進し得る」と述べている。他の免疫学的製剤には、リポソーム(Ａllisonら、米国特許第４,０５３,５８５号および同第４,１１７,１１３号)；環状ペプチド(Ｄreesmanら、米国特許第４,７７８,７８４号)；フロイント完全アジュバント(Ａshersonら、２２Ｉmmun ology ４６５、１９７２：Ｂermanら、２Ｉnternational Ｊ．Ｃancer ５３９、１９６７；Ａllison、１８Ｉmmunopotentiation ７３、１９７３；およびＡl lison、Ｎon−Ｓpecific Ｆactors Ｉnfluencing Ｈost Ｒesistance ２４７、１９７３)；ＩＳＣＯＭ(Ｌetvinら、８７Ｖaccines ２０９、１９８７)：鉱油、界面活性剤およびＴＷＥＥＮ８０で形成された非イオン性ブロックポリマー物質を含むアジュバント(ＨunterおよびＢennett、１３３Ｊ．Ｉmmunology ３１６７、１９８４：およびＨunterら、１２７Ｊ．Ｉmmunology １２４４、１９８１)；殺菌したマイコバクテリアを含む、または含んでいない、鉱油および乳化剤からなるアジュバント(Ｓanchez−Ｐescadorら、１４１Ｊ．Ｉmmunology １７２０、１９８８)；およびムラミルトリペプチドの親油性誘導体、および組換えタンパク質(同上)に、共有結合的にコンジュゲートしたムラミルジペプチドといったような、他のアジュバントが含まれる。発明の要約出願人は、ＣＴＬ応答をヒトおよび家畜または農業用に重要な動物において誘導することができる、安全かつ有利な方法および組成物を発見した。その方法は、動物に対する毒性がほとんど、または全くなく、またその存在が所望の細胞応答を減少させるであろう免疫刺激性ペプチド(例えば、ムラミルジペプチド)を有さない抗原製剤の使用を必要とする。さらに、その方法論は、利用するのが簡単であり、また存在する細胞を組換えＤＮＡ技術により変化させて、それらをより抗原性とするための、広範囲にわたるインビボにおける作業を必要としない。この発見は、そのようなＣＴＬ応答が、免疫刺激性ペプチドまたはそれらの等価物を有さない、そのような抗原製剤の使用により誘導され得ることは予期されなかったことから、驚くべきものである。出願人の発見は、そのような抗原製剤の、広範囲の疾患状態においての、または予防薬としての使用を可能とする。例えば、そのような抗原製剤投与は、ＣＴＬ応答が重要であるウイルス性疾患の処置に、例えば、ＨＩＶ感染またはインフルエンザの処置において利用することができ；それはまた、細菌感染、癌、寄生生物感染等の処置における使用にまで拡張することができる。予防薬として、適当な抗原と組合わせた抗原製剤は、前述のウイルス性疾患の原因であるウイルスによる感染の予防、特にＨＩＶ感染の予防において、また例えば、原発性腫瘍切除後の、癌の危険のある患者の予防にも有用である。従って、第１の態様では、本発明は、ヒトまたは家畜(例えば、猫もしくは犬) または農業用に重要な動物(例えば、馬、雌牛もしくは豚)において、Ｂ−細胞リンパ腫抗原または卵アルブミン以外の抗原に対するＣＴＬ応答を誘導する方法を特徴とする。その方法には、ＣＴＬ応答が望まれる抗原を提供する工程、および安定化界面活性剤、ミセル形成性物質、および生分解性および生物適合性のある油を含んでなる、これらからなる、または実質的にこれらからなる、非毒性の抗原製剤を提供する工程が含まれる。この抗原製剤は、いずれの免疫刺激性ペプチド成分も有さず、またはそのような成分が、所望の細胞応答を減少させないよう、十分に低いレベルであるのが好ましい。この製剤は、安定な水中油型エマルションとして提供するのが好ましい。すなわち、様々な成分は各々、エマルションが、少なくとも１カ月間、また好ましくは１年以上、相分離することなくエマルション状態のままであるよう選択される。この方法では、抗原および抗原製剤を一緒に混合して、(好ましくは、マイクロ流動化により)混合物を形成し、その混合物を、動物においてＣＴＬ応答を誘導するのに十分な量で動物に投与する。そのような投与は、一度だけ必要とされる。「安定化界面活性剤」とは、エマルションの成分が、安定なエマルションとしてのままであることを可能にする界面活性剤を意味する。そのような界面活性剤には、ポリソルベート，８０(ＴＷＥＥＮ)(ソルビタン−モノ−９−オクタデセノエート−ポリ(オキシ−１,２−エタンジイル；ＩＣＩＡmericas、Ｗilmingto n、ＤＥにより製造される)、ＴＷＥＥＮ４０、ＴＷＥＥＮ２０、ＴＷＥＥＮ６０、Ｚwittergent ３−１２、ＴＥＥＰＯＬＨＢ７、およびＳＰＡＮ８５が含まれる。これらの界面活性剤は、通常、約０.０５〜０.５％の量で、好ましくは約０.２％で用いる。「ミセル形成性物質」とは、他の成分と共に形成されたエマルションを、ミセル様構造を形成するよう、安定化することができる物質を意味する。そのような物質は、マクロファージを補充(recruit)して、細胞応答を高めるために、注射部位で刺激を幾らか引き起こすのが好ましい。そのような物質の例には、ＢＡＳＦＷyandotte publication、例えば、Ｓchmolka、５４Ｊ．Ａm．Ｏil．Ｃhem. Ｓoc. １１０、１９７７、およびＨunterら、１２９Ｊ．Ｉmmunol １２４４、１９８１(この両方に記載されている内容は、本発明の一部をなす)により記載されているポリマー界面活性剤、ＰＬＵＲＯＮＩＣＬ６２ＬＦ、Ｌ１０１、およびＬ６４、ＰＥＧ１０００、並びにＴＥＴＲＯＮＩＣ１５０１、１５０Ｒ１、７０１、９０１、１３０１、および１３０Ｒ１が含まれる。そのような物質の化学構造は、当業界で周知である。好ましくは、その物質は、ＨunterおよびＢenn ett、１３３Ｊournal of Ｉmmunology ３１６７、１９８４により定義された親水性−親油性バランス(ＨＬＢ)が０〜２の間であるよう選択する。その試薬は、０.５〜１０％の間の量で、最も好ましくは１.２５〜５％の間の量で用いるのが好ましい。油は、水中油型エマルション中での抗原の保持を促進するよう、すなわち、所望の抗原に対するビヒクルを与えるよう選択し、またエマルションが室温(約２０℃〜２５℃)で形成されるか、またはエマルションの温度を一度室温まで下げると形成されるよう、融解温度が６５℃未満であるのが好ましい。そのような油の例には、スクアレン、スクアラン、ＥＩＣＯＳＡＮＥ、テトラテトラコンタン、グリセロール、およびピーナッツ油または他の植物油が含まれる。その油は、１〜１０％の間、最も好ましくは２.５〜５％の間の量で用いるのが好ましい。身体が油を時間を経て分解できるよう、またその油の使用によって、肉芽腫のような悪影響が全く生じないよう、その油は生分解性かつ生物適合性であることが重要である。先の製剤においては、ペプチド成分、特にムラミルジペプチド(ＭＤＰ)を有さないことが重要である。そのようなペプチドは、正常なヒト製剤投与当たり約２０μg以上の量で用いるなら、ＣＴＬ応答の誘導を妨げるであろう。そのようなペプチドは、免疫系の体液性区分の明らかな刺激にもかかわらず、抗原製剤には全くないことが好ましい。すなわち、出願人は、そのようなペプチドは体液性応答を高めることができるが、細胞障害性Ｔ−リンパ球応答が望まれる場合には不利であることを見い出した。他の関連した態様では、その抗原製剤を先の３成分のうちの２つだけから形成し、卵アルブミン(または他のアルブミン、例えば、ＨＳＡ、ＢＳＡおよびオボアルブミン)を除く、所望の抗原(この用語には、免疫原性であるタンパク質、ポリペプチド、およびそのフラグメントが含まれる)と共に使用して、先の動物およびヒトにおけるＣＴＬ応答を誘導する。出願人は、先の製剤が、ヒトでの使用に関して、かつての製剤(ＩＳＣＯＭ、ＤＥＴＯＸ、およびＳＡＦが含まれる)以上に顕著に有利であると考えている。そのような製剤とは違って、本製剤には、ミセル形成性物質が含まれ、またペプチド、細胞壁スケルトン、または細菌細胞成分を含まない。本製剤はまた、かつての製剤では起こらないか、またはそれらの製剤と比較して顕著に高められたＣＴＬ応答を誘導する。「非毒性の」により、抗原製剤の副作用が、処置した動物またはヒトにおいて、ほとんど、または全く観察されないことを意味する。医療技術または動物医療技術の当業者は、この用語が広い意味を有することを認識するであろう。例えば、実質的に健康な動物またはヒトでは、僅かな毒性しか許容され得ないが、切迫した疾患を患っているヒトでは、実質的にさらに強い毒性も許容され得る。好ましい態様では、その抗原製剤は、実質的には、界面活性剤、薬剤、および油のうちの２つまたは３つからなり；その方法は、実質的には、ヒトまたは動物への混合物(抗原＋抗原製剤)の単回の投与からなり；そのヒトまたは動物は、ウイルスに感染して、ウイルスが原因となる感染の１つまたはそれ以上の症状(通例、関連分野の医師により定義されるような)を患っており；またその抗原製剤は、ヒトまたは動物に対して非毒性である。他の好ましい態様では、その抗原は、ＨＩＶ抗原：gp１６０、gag、pol、Ｎef 、Ｔat、およびＲev；マラリア抗原：ＣＳタンパク質およびスポロゾイト表面タンパク質２；Ｂ型肝炎表面抗原：Ｐre−Ｓ１、Ｐre−Ｓ２、ＨＢc Ａg、およびＨＢe Ａg；インフルエンザ抗原：ＨＡ、ＮＰおよびＮＡ；Ａ型肝炎表面抗原；ヘルペスウイルス抗原：ＥＢＶ gp３４０、ＥＢＶ gp８５、ＨＳＶ gＢ、ＨＳＶ gＤ、ＨＳＶ gＨ、ＨＳＶ初期タンパク質産物、ヒトパピローマウイルス抗原( 例えば、Ｌ１、Ｅ４、Ｅ６、Ｅ７抗原といったようなＨＰＶ抗原、特に、子宮頸癌と関連のある２つの最も一般的なＨＰＶ型、ＨＰＶ１６および１８から得られるＥ６およびＥ７抗原、尖圭コンジロームと関連のある２つの最も一般的なＨＰＶ型、ＨＰＶ６およびＨＰＶ１１から得られるＥ４およびＬ１；前立腺に特異的な抗原(ＰＳＡ)、サイトメガロウイルス gＢ、サイトメガロウイルス gＨ、およびＩＥタンパク質 gp７２；呼吸器シンシチアウイルス抗原：Ｆタンパク質、Ｇタンパク質、およびＮタンパク質；並びに腫瘍抗原：癌ＣＥＡ、癌に関連のあるムチン、癌Ｐ２１、癌Ｐ５３、黒色腫ＭＰＧ、黒色腫 p９７、および癌Ｎ eu 腫瘍遺伝子産物、癌 p５３遺伝子産物、ＭＡＧＥと呼ばれる黒色腫抗原、および様々な悪性腫瘍において現れる変異したp２１ rasタンパク質の抗原性部分から選択される。関連した態様では、本発明は、上記の抗原製剤と混合した抗原を含んでなる、これからなる、または実質的にこれらからなる組成物を特徴とし、またその抗原は、先に挙げた抗原性部分から選択される。他の関連した態様では、本発明は、先の抗原製剤のうちの１つと混合した適当な抗原(例えば、先に挙げた抗原から選択される)が含まれる組成物を投与することにより、ＨＩＶウイルスに感染した患者、マラリアを患っている患者、インフルエンザを患っている患者、肝炎を患っている患者、癌を患っている患者、ヘルペスウイルスに感染した患者、頸癌を患っている患者、尖圭コンジローム(性器いぼ)を患っている患者、または呼吸器シンシチアウイルスに感染した患者を処置する方法を特徴とする。これらの抗原および処置は、対象となる抗原製剤において使用することができる例示的な抗原というだけである。本発明の特徴および利点は、その好ましい態様の以下の記載から、また請求の範囲から明らかであろう。好ましい態様の説明まず最初に、図面を簡単に説明する。図面第１Ａ図−第１Ｃ図および第４Ａ図−第４Ｃ図は、様々なオボアルブミン製剤によるＣＴＬ誘導を比較するデータのグラフ表示である。全図面において、Ｅ：Ｔはエフェクター：標的の比率を示し；第２Ａ図および第２Ｂ図は、様々なβ−ガラクトシダーゼ製剤によるＣＴＬ誘導を比較するデータのグラフ表示であり；第３図は、リポソーム中の、および抗原製剤中のオボアルブミンによるＣＴＬ誘導を比較するデータのグラフ表示であり：第５図および第６図は、ＣＴＬ誘導に対するＣＤ４およびＣＤ８細胞減損の効果を示すデータのグラフ表示であり；第７図は、gp１２０によるＣＴＬ誘導を示すデータのグラフ表示であり；第８図は、プルロニックおよびＴＷＥＥＮおよび抗原の混合物によるＣＴＬ誘導を示すデータのグラフ表示であり；第９図は、スクアランおよびプルロニックおよび抗原の混合物でのＣＴＬ誘導を示すデータのグラフ表示であり；第１０図は、スクアランおよびプルロニックおよび抗原の混合物によるＣＴＬ誘導を示すデータのグラフ表示であり；第１１図は、ＣＴＬ応答に対する、様々な抗原製剤でのＯＶＡの効果のグラフ表示であり；第１２図は、様々な抗原製剤での、サルにおける抗−gp１２０IIIｂ抗体の誘導のグラフ表示であり；第１３図は、アジュバント中の可溶性Ｅ７タンパク質で単回免疫化してから１０日後の、ＨＯＰＥ２細胞の抗腫瘍活性を示し；および第１４図は、アジュバンド中の可溶性Ｅ７タンパク質で２回免疫化してから１０日後、１９日後の、ＨＯＰＥ２細胞の抗腫瘍活性を示す。抗原製剤本発明において有用な抗原製剤を一般的に先に記載した。当業者は、均等な製剤が容易に製造され、またＣＴＬ応答の誘導において均等な特性を有すると予期することができることを認識するであろう。そのような製剤を、以下の実施例に記載した技術に均等な技術を利用して、それらの特性に関して試験する。リン酸塩緩衝化生理食塩水中、約２.５％スクアラン、５％プルロニック酸、およびＴＷＥＥＮ８０からなる抗原製剤(ＡＦ)を使用しての、本発明の実施例を以下に記載する。具体的には、ＡＦのエマルションには、水１ml当たりスクアラン１５mg、ポロキサマー４０１(ＰＬＵＲＯＮＩＣＬ１２１)３７.５mg、ポリソルベート８０(ＴＷＥＥＮ８０)６mg、塩化カリウム０.１８４mg、一塩基性リン酸カリウム０.５５２mg、塩化ナトリウム７.３６mg、二塩基性リン酸ナトリウム(無水)３.３mg、pＨ７.４が含まれていた。このエマルションを、１１ −１４,０００psiの後方圧モジュールでの標準的な技術(Ｍicrofluidics Ｍ１１０Ｆ型)を利用して、常圧まで段階的に戻し、冷却して、湿潤氷中に閉じ込めながら、マイクロ流動化した。他の例では、抗原を、マイクロ流動化したスクアラン(Ｓ)、プルロニック(Ｐ) およびＴＷＥＥＮ８０(Ｔ)混合物と混合して、各々、０.２％ＴＷＥＥＮ８０、１.２５％プルロニック、および５％スクアランの最終濃度を得た。抗原に特異的な免疫応答誘導に必要な副成分を決定するために、スクアラン−ＴＷＥＥＮ８０、プルロニック−ＴＷＥＥＮ８０、またはスクアラン−プルロニックを、３成分混合物に関しての濃度と同じ濃度で調製した。プルロニック、スクアランまたはＴＷＥＥＮ８０をまた個々に調製して、ＣＴＬ誘導に対する個々の成分の効果も測定した。ＴＷＥＥＮ８０をまた、ＴＷＥＥＮ２０、ＴＷＥＥＮ４０、またはＺwittergentに置換して、ova系におけるＣＴＬ誘導に対する、様々なＴＷＥＥＮ誘導体の効果を測定した。３成分製剤中のスクアランをＥicoson e またはＴriacontoneで置換し、また同じ３成分製剤中のコポリマープルロニックをＰＥＧ１０００、プルロニックＬ６２ＬＦ、およびＴetronics １５０１および１５０Ｒ１で置換した。２成分製剤として、様々な組合わせで様々なアナログを混合して、ovaに特異的なＣＴＬ誘導を試験した。それらは、コレステロール−ＴＷＥＥＮ８０、スクアラン−ＴＷＥＥＮ２０、Ｐristane−ＴＷＥＥＮ８０またはオリーブ油−ＴＷＥＥＮ８０の混合物である。安定化の研究用に、スクアラン−ＴＷＥＥＮ８０のマイクロ流動化混合物をデキストロースと混合して、最終濃度を５％とした。全ての場合において、賦形剤の組合わせをマイクロ流動化装置中で混合して、安定なエマルションとした。幾つかの実験では、ＣＴＬ応答および体液性応答の誘導のために、２成分製剤を様々な濃度のＭＤＰと混合した。表１は、この研究に使用した様々な製剤の広範囲にわたるリストを記載する。シンテックスアジュバント製剤(マイクロ流動化した；ＳＡＦm)は、アジュバントの対照として使用され、また２つの部分からなる。部分Ｉは、最終濃度の５％スクアラン、１.２５％プルロニック、および０.２％ＴＷＥＥＮ８０(ビヒクルまたはＩ−ＳＡＦ)を含むリン酸塩緩衝化生理食塩水からなる。部分IIは、Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−トレオニル−Ｄ−イソグルタミン(Ｔhr−ＭＤＰ) 、マイコバクテリウム属の細胞壁成分の誘導体からなる。免疫化を目的として、抗原を、マイクロ流動化したビヒクル(部分Ｉ)と混合して、均質なエマルションを得る。ＭＤＰを加えてＳＡＦmとして、軽く掻き交ぜる。その混合物中のＭＤＰ濃度をいろいろ変えて、ＣＴＬ誘導のための最適濃度があるかどうかを測定した。アジュバントの対照として、マウスもまた、製造業者のマニュアル(Ｐierce Ｃhemical、Ｒockford、ＩＬ)に従って、ミョウバンと混合した可溶性抗原で免疫するか、または完全フロイントアジュバント(ＣＦＡ)で免疫した。この抗原製剤を、マウスにおける細胞障害性Ｔ−リンパ球応答の誘導に使用する。当業者は、均等な実験または処置が、ヒト、家畜、または農業用動物における細胞障害性Ｔ−リンパ球応答を同様に誘導するであろうことを認識するであろう。所望の細胞応答を引き起こすのに有用な抗原製剤および抗原の量は、過度の実験なしに、当業者に周知の標準的な方法により、実験的に決定することができる。従って、そのような混合物での処置の副作用を最小限とすることが望まれるなら、当業者は、ＣＴＬ応答を誘起し、またそれによって、所望の抗原に対する免疫を誘導するために、ヒト、家畜、または農業用動物に対する投与のため、そのような混合物の最小レベルを決定し得る。通常の使用では、そのような混合物を、多くの標準的な方法のうちのいずれか１つにより注射されるであろうが、エマルションが、数日間または数週間、安定な形のままであることを可能にするであろう位置での筋肉内注射が特に好ましい。方法以下の実施例では、特にことわらない限り、以下の物質および方法を使用した。マウス雌のＣ５７ＢＬ／６(Ｈ−２^b)およびＢＡＬＢ／ｃ(Ｈ−２^d)マウスを、Ｈarle n Ｓprague(Ｓan Ｄiego、Ｃalifornia)から購入した。抗原オボアルブミン(ova、グレードVII；Ｓigma Ｃhemical Ｃo.、Ｓt．Ｌouis、ＭＯ)を天然型で使用した。β−ガラクトシダーゼ(β−gal、グレードVIII；ＢＲＬ)を天然型で使用して、１ＭＮaＯＨ中で２分間煮沸した後、アルカリ消化物を得た。組換えgp１２０を、Ａmerican Ｂiotechnologyから購入した。腫瘍細胞およびトランスフェクタント使用した腫瘍細胞は、Ｉa^-系ＥＬ４(Ｃ５７ＢＬ／６、Ｈ−２^b胸腺腫)およびＰ８１５(ＤＡＢ／２、Ｈ−２^d、肥満細胞腫)であった。ovaを産生するＥＬ４トランスフェクタント、ＥＧ７−ovaの誘導は、以前に、Ｍooreら、５４Ｃell７７７、１９８８により記載されている。β−galを産生するトランスフェクタント、Ｐ１３.１は、リン酸塩緩衝化生理食塩水(ＰＢＳ)１ml中、１０⁷個のＰ８１５細胞を、ＰstＩで線形化したpＣＨ１１０(Ｐharmacia ＬＫＢＢiotechnology ｌnc.、Ｐiscataway、ＮＪ)１０mgおよびＰvuＩで線形化したpＳＶ neo(Ｓouth ernら、１Ｊ．Ｍol．Ａppl．Ｇenet. ３２７、１９８２)１mgと共にエレクトロポレーションした後、４００μg／mlの抗生物質Ｇ４１８中で選択することにより誘導した。Ｃ３−４トランスフェクタントは、ＩgＭＨ鎖の第３エクソンおよび第４エクソンに融合した、β−gal遺伝子をコードするプラスミドでトランスフェクトすることにより、ＢＡＬＢ／ｃハイブリドーマＩgm６６２から誘導した(Ｒammenseeら、３０Ｉmmunogenetics ２９６、１９８９)。３Ｔ３線維芽細胞、１５−１２を発現するgp１６０IIIｂは、ＮＩＨ(Ｂethesda、ＭＤ)のＧer main博士により提供された。Ｋ^bでトランスフェクトしたＬ細胞系は、オーストラリア、Ｍonash大学、Ｃarbone博士により提供された。Ｄ^dおよびＬ^dでトランスフェクトしたＬ細胞系は、セントルイス、ワシントン大学、Ｔed Ｈensen博士により提供された。免疫化マウスを、Ｍooreら(上記)、およびＣarboneら、Ｊ．Ｅxp．Ｍed. １６９：６０３、１９８９により記載されているように細胞質ローディングした後、静脈内注射により、２５×１０⁶個の脾細胞の懸濁液２００μlで免疫した。ova−抗原製剤またはβ−gal−抗原製剤での免疫化に関しては、マウス当たり各々のタンパク質抗原３０μgを足パッド(footpad)および尾基底(tailbase)に皮下注射した。各々の注射は、最終体積２００μl中、マイクロ流動化抗原製剤(標準的な方法に従って製造される)６７μlおよびタンパク質抗原３０μgからなる。その最終容積は、ＨＢＳＳで満たされる(Ｗhittakerマニュアル(Ｗelkersville、ＭＤ)を参照)。ＭＤＰは、０〜３００μgの間の濃度で与えた。記述する場合には、マウスを、総容積２００μlのＣＦＡまたはミョウバン中の可溶性抗原で免疫した。エフェクター集団のインビトロにおける刺激正常なマウス、または少なくとも１４日前に感作した免疫化マウスから得られた脾細胞(３０×１０⁶)を、２４ウェルのプレートにおいて、ova応答に関しては１.５×１０⁶個のＥＧ７−ova(２０,０００ラドで照射した)、またはβ−gal応答に関しては１.５×１０⁶個のＣ３−４細胞(２０,０００ラドで照射した)と共に、７％ＣＯ₂／空気中、３７℃でインキュベートした。組織培養は全て、１０％ウシ胎児血清(ＦＣＳ)、２mＭグルタミン、ゲンタマイシンおよび２×１０^- ⁵ Ｍ２−メルカプトエタノールを補った、ＩＭＤＭ培地(Ｗhittaker Ｍanual(Ｗ elkersville、ＭＤ)を参照)からなる完全培地中で行った。インビトロにおける減損実験に関しては、インビボにおいて感作した脾細胞、またはインビトロにおいて刺激した脾細胞を、ＣＤ４⁺またはＣＤ８⁺Ｔ細胞の除去のために、モノクロナール抗体(mＡbs)ＲＬ.１７２(抗−ＣＤ４)またはmＡbs ３.１６８(抗−ＣＤ８ )で処理した(Ｓarmientoら、１２５Ｊ．Ｉmmunol. ２６６５、１９８０、およびＣeredigら、３１４Ｎature ９８、１９８５)。そのmＡb ＲＬ.１７２および mＡb ３.１６８は、Ｓcripps Ｃlinic and Ｒesearch Ｆoundation、Ｌa Ｊolla 、ＣＡのＪonathan Ｓprent博士から得た。正常なマウス、または少なくとも２１日前に感作した免疫化マウスから得られた脾細胞(３０×１０⁶)を、予めスクリーニングしておいた１０％ＦＣＳ(ＩＣＮＦlow；ＩＣＮＢiochemicals,Ｉnc.、Ｃosta Ｍesa、ＣＡ)、２mＭグルタミン、ゲンタマイシンおよび２×１０^-5Ｍ２−メルカプトエタノールを含む完全ＩＭＤＭ培地(Ｉrvine Ｓcientific、Ｓanta Ａna、ＣＡ)中、１.５×１０⁶個の１５−１２細胞(１０⁸個の細胞当たり、マイトマイシンＣ２００ugで４５分間処理した)と共に、またはＢalb／ｃマウスにおける優勢なＣＴＬエピトープを含む１８IIIｂペプチド５００μgと共にインキュベートした。ペプチドでのインビトロにおける刺激に関しては、脾細胞を、５％ＣonＡ上清を含む完全ＩＭＤＭ中で培養した。減損実験に関しては、インビボにおいて感作した脾細胞、またはインビトロにおいて刺激した脾細胞を、ＣＤ４⁺またはＣＤ８⁺細胞(２２、２３)の除去のために、低毒性ウサギ補体(Ｃederlane Ｌaboratories,Ｌtd.、Ｈornby Ｏntario、カナダ)の存在下、mＡbs ＲＬ.１７２(抗−ＣＤ４)またはmＡbs ３.１６８(抗− ＣＤ８)で処理した。そのmＡb ＲＬ.１７２およびmＡb ３.１６８は、Ｓcripps Ｃlinic and Ｒesearch Ｆoundation、Ｌa Ｊolla、ＣＡのＪonathan Ｓprent博士からの贈与物である。細胞障害性アッセイ標的細胞(１×１０⁶個)を、１１０μＣiの[⁵¹Ｃr] クロム酸ナトリウムで６０分間標識した。ペプチドパルス標的に関しては、ＨＢＳＳ中の１mg／ml ペプチド溶液５０μlを、標的を⁵¹Ｃrで標識している間に加えた。洗浄後、１０⁴個の標識化標的およびエフェクター細胞の連続希釈物を、ＲＰ１０２００μl中、３７℃で４時間インキュベートした。上清１００μlを集めて、特異的な溶解を、以下のように測定した：特異的な溶解(％)＝１００×{(ＣＴＬによる解離(relea se)−自然解離)／(最大解離−自然解離)}。細胞障害性Ｔ−リンパ球(ＣＴＬ)の不存在下における自然解離は、全ての実験における界面活性剤による最大解離の２５％未満であった。マウスおよびサルにおける抗体応答の測定９６ウェルのＵ底プレート(Ｃostar、Ｃambridge、ＭＡ)の各々のウェルを、ＨＢＳＳ５０ul中のovaまたはgp１２０１５０ngで被覆して、４℃で一晩インキュベートした。マウスにおける抗−gp１２０および抗−ova抗体応答の測定のために、プレートを１％ＢＳＡで１時間ブロックした。連続的に希釈した血清を、各々のウェル当たり２５μl体積で加えて、２時間インキュベートした。プレートを洗浄して、ウェル当たり、１％ＢＳＡ中の、ＨＲＰＯ(ＳＢＴ、Ａlabama) にコンジュゲートしたヤギ抗−マウスＩgＧの１：１０００希釈物５０μlを加えた。１時間インキュベーションした後、プレートを洗って、ウェル当たり、基質１００μlを加えた。ＯＤ₄₀₅を１０分〜１５分後に測った。サル抗−gp１２０抗体応答の測定に関しては、プレートをブロックすること、および血清の希釈を、ハンクスの平衡化塩類溶液中の５％正常なヤギ血清で行うことを除き、その工程は全て同じである。ペプチド合成オボアルブミンのアミノ酸配列２５３−２７６(ova ２５３−２７６)(配列番号１：；ここでは、標準的な１文字コードを使用して、各々のアミノ酸を表す)に対応する合成ペプチド、ミエリン塩基性タンパク質のアミノ酸配列８４−１０２(ＭＢＰ８４−１０２)(配列番号２： )に対応する合成ペプチド、およびgp１２０IIIｂのアミノ酸配列３０８−３２２ (１８IIIｂ配列)に対応する合成ペプチドを、Ａpplied Ｂiosystems ４３０Ａ合成装置を使用して、固相ペプチド合成により構築した。ヒドロキシベンゾトリアゾールエステルとして結合したアスパラギン、グルタミンおよびアルギニンを除き、アミノ酸を、予め形成しておいた対称無水物によって結合した。カップリング効率を、Ｋaiserら、３４Ａnal．Ｂiochem. ５９５、１９７０の方法に従って、ニンヒドリン反応によりモニターした。ペプチドを、Ｔamら、２１Ｊ．Ａm . Ｃhem．Ｓoc. ６４４２、１９８３により記載されている「ロウ−ハイ」法に従って、ＨＦで担体から解離させて、そのペプチドを樹脂から１０％酢酸で抽出した。凍結乾燥後、ペプチドをＳephadex Ｇ−２５カラムで脱塩した後、ペプチドの試料をＶydac分取Ｃ−１８カラムでの逆相クロマトグラフィーによりＨＰＬＣ精製した。精製したペプチド(９８％)をＨＢＳＳ中に最終濃度１０mg／mlで可溶化して、完全培地中、所望の濃度まで希釈した。ＣＮＢr消化タンパク質の試料(例えば、β−ガラクトシダーゼ)を、１００mＭトリフルオロ酢酸溶液中の、１００倍モル過剰の臭化シアンで処理した。循環させながら、反応を室温(約２０℃)で１８時間進行させた。指示した反応時間後、ＳＥＰ−ＰＡＫＣ−１８装置(Ｗaters)を利用して、ペプチドフラグメントを反応物から分離し、９５％アセトニトリルで溶出して、凍結乾燥させた。アルカリ消化タンパク質試料(例えば、β−ガラクトシダーゼ)をＩＮＮaＯＨで処理して、２分間煮沸し、Ｃ−１８ＳＥＰ−ＰＡＫ装置(Ｗaters)を利用して、その結果得られたペプチドフラグメントを反応物から分離し、９５％アセトニトリルで溶出して、凍結乾燥させた。実施例１：クラスＩ制限ＣＴＬ初回免疫Ｍooreら、１１３ＵＣＬＡＳymp．Ｍol．Ｃell．Ｂiol. １９８９、並びにＣarboneおよびＢevan、１７１Ｊ．Ｅxp．Ｍedicine ３７７、１９９０は、可溶性ovaを細胞質にロードした脾細胞で免疫したマウスが、ovaに特異的なクラスＩ制限ＣＴＬ応答に関して感作されたこと示している。ovaを発現するＥＬ４トランスフェクタントＥＧ７−ovaを、インビボにおいて感作した脾リンパ球のインビトロにおける刺激に使用し、またovaに特異的なＣＴＬにより媒介される殺菌の標的としても使用した。この研究はまた、ＥＧ７−ovaトランスフェクタントにより、またはovaを細胞質にロードした脾細胞により誘導されるＣＤ８⁺エフェクターが、Ｈ−２Ｋ^b、溶解ＥＧ７−ovaと関連のあるペプチドova ２５８−２７６によりマップされる決定因子を認識し、またova ２５８−２７６で被覆したＥＬ４細胞も殺菌することも示した。従って、内因性クラスＩ制限ＣＤ８⁺Ｔ細胞経路を可溶性抗原により誘導できるかどうかを評価するために、先の系を使用して、ある抗原製剤が可溶性抗原をクラスＩ制限経路にもたらし得るかどうかを測定した。ａ）ova Ｃ５７ＢＬ／６マウスを、様々な量の、抗原製剤を含む、または含んでいない ova(マウス当り３０μg−１mg)で１回免疫した。マウスは、尾基底に皮下注射した。免疫化してから少なくとも２週間後に、免疫したマウスから脾細胞を摘出して、ＥＧ７−ovaトランスフェクタントでインビトロにおいて刺激した。３０μg という低いova濃度が、１mg用量と同じぐらい有効であった。従って、ＣＴＬ研究は、３０μgのovaで感作したマウスから得られた脾細胞で常套的に行った。ＥＧ７−ovaと共にインビトロにおいて培養してから５日後に、初回免疫を、ＥＧ７−ovaを溶解することができる、ovaに特異的なエフェクターの存在により評価した。１mgという高いＨＢＳＳ中の可溶性ovaを注射したマウスは、ＣＴＬ初回免疫の証拠を全く示さなかった(第１Ａ図)。しかし、前記抗原製剤(図面中、ＡＦとして示す)中の３０μgのovaで免疫したマウスは、顕著なトランスフェクタントに特異的なＣＴＬ応答を示した(第１Ｃ図)。さらにまた、ova−ＡＦで免疫した脾細胞により殺されるＥＧ７−ovaの程度は、ovaをロードした脾細胞で免疫したマウスのものと同等であった(第１Ｂ図)。インビボにおけるＣＴＬ初回免疫の特異性が抗原に特異的であることは、ＥＧ７−ovaで刺激した場合に、β−ガラクトシダーゼで免疫したマウスから得られた脾細胞が、インビトロにおける二次ＣＴＬ応答を明らかに示さなかったことにより示された。ovaに特異的なＣＴＬ誘導は、全く観察されなかった。ｂ）β−ガラクトシダーゼ別の可溶性タンパク質抗原、β−galを使用しても、同様な結果が得られた。 β−galに特異的なＣＴＬ応答を評価することに関して、使用した標的は、ＢＡＬＢ／ｃを誘導する、β−galを発現するＣ３−４トランスフェクタントであった。可溶性β−galでのＢＡＬＢ／ｃマウスの免疫化は、バックグラウンドＣＴＬ応答を与えた。従って、特異的なＣＴＬ応答の測定に関しては、取り出しを少なくとも８週間延期した後、脾リンパ球を取り出して、照射したＣ３−４トランスフェクタントの存在下に５日間培養した。第２Ｂ図は、ＡＦ中のβ−ガラクトシダーゼ３０μgが、トランスフェクタントに対する、強力な特異的なＣＴＬ応答を誘導したことを示す。エフェクター：標的(Ｅ：Ｔ)比が３：１では、β−gal−ＡＦで免疫したマウスが、特異的なＣ３−４殺作用の約８０％を示した。しかし、同じＥ：Ｔ比で、ＨＢＳＳ中のβ− galで免疫したマウスから単離したエフェクターでは、同じ標的の２０％の殺作用しか得られなかった(第２Ａ図)。ＥＬ４もＰ８１５もクラスII ＭＨＣ遺伝子産物を発現せず、またその溶解が同遺伝子型の制限を示すことから、これらのov aおよびβ−galに特異的なエフェクターは、クラスＩＭＨＣ制限される。抗原製剤の有用性を示すために、マウスを、２種のリポソームに封入した可溶性ovaで免疫したが、このうちの１つは、pＨ感受性リポソームであった。１週間後、脾細胞を、前記のように、インビトロにおいて刺激して、⁵¹Ｃr−標識化ＥＧ７−ovaまたはＥＬ４に対して試験した。第３図は、リポソーム中のovaが、実質的なＣＴＬ誘導に関してマウスを感作することができなかったことを示す典型的な結果を示す。同様な結果は、ovaをミョウバン中で免疫した場合にも観察された。実施例２：ＣＴＬによるエピトープの認識ＣarboneおよびＢevan(上記)は、Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおいてＥＧ７−ova トランスフェクタントにより、また細胞質にovaをロードした脾細胞により誘導されたＣＴＬが、ペプチドova ２５８−２７６で被覆されたＥＬ４細胞を認識することを示した。ＡＦ中の可溶性オボアルブミンが、同様のＣＴＬ応答を誘導するかどうかを測定するために、脾細胞を免疫化マウスから調製して、ＥＧ７−ov aでインビトロにおいて刺激した。エフェクターを、ペプチドova ２５３−２７６で被覆した、またはミエリン塩基性タンパク質(ＭＢＰ８４−１０２)から誘導した対照ペプチドで被覆したＥＬ４細胞に対して試験した。その結果は、ova −ＡＦが、トランスフェクタントにより、または細胞質にロードしたovaにより感作されるものと同様の特異性で、ＣＴＬを感作したことを示す(第１Ａ図、第１Ｂ図および第１Ｃ図)。ova−ＡＦで感作したエフェクター細胞は、ＥＧ７−ov a、および１０⁸個の細胞当たり５０μgのovaペプチドで被覆した、トランスフェクトされていないＥＬ４細胞を有効に溶解したが、１０⁸個の細胞当たり５０μg のＭＢＰペプチドで被覆したＥＬ４細胞は溶解しなかった。 β−ガラクトシダーゼ系では、ＣarboneおよびＢevan(上記)は、β−galを発現するトランスフェクタント、および可溶性β−ガラクトシダーゼを細胞質にロードした脾細胞が、β−galを発現するトランスフェクタント、およびアルカリ消化されたβ−ガラクトシダーゼで被覆された非トランスフェクタントを溶解するＣＴＬを誘導したことを示した。可溶性β−ガラクトシダーゼは、ＡＦ中で免疫した場合にも同様の特異性を有するＣＴＬを誘導する(第２図)。実施例３：ＣＴＬエフェクターはＣＤ８⁺Ｔ細胞であるＡＦ中の可溶性タンパク質抗原がＣＤ８⁺エフェクターＴ細胞を誘導することは、以下のように示された。免疫化マウスから得られた脾細胞を、照射したトランスフェクタントと共にインビトロにおいて５日間培養した。その後、細胞を取り出し、モノクロナール抗−ＣＤ４または抗−ＣＤ８抗体＋補体を使用して、ＣＤ４⁺またはＣＤ８⁺Ｔ細胞を減損させた。次いで、減損した集団を、ova系における⁵¹Ｃr−ＥＧ７−ova、またはβ−gal系における⁵¹Ｃr−Ｐ１３.１に対して試験した。第４図に示すデータは、ova系において、ＣＤ８⁺Ｔ細胞の減損が、エフェクター細胞集団全体により与えられる細胞溶解活性を撤廃したことを示す。しかし、ＣＤ４⁺Ｔ細胞集団の減損には、ＥＧ７−ovaの溶解に対して何の効果もなかった。同様に、β−gal系において、ＣＤ８⁺Ｔ細胞の減損は、β−gal−抗原製剤で免疫した脾細胞の細胞溶解活性を撤廃した。実施例４：ＡＦ中の可溶性ovaはＣＤ８⁺Ｔ細胞を感作する ova−ＡＦがインビボにおいてＣＤ８⁺Ｔ細胞集団を感作し、またインビトロにおける二次応答に重要であることを示すために、ＣＤ４⁺およびＣＤ８⁺集団を、 ova−ＡＦで免疫したマウスの脾臓から、また純粋なマウスから減損させた。次いで、これらの処理した集団を、ＥＧ７−ova単独で、またはova−ＡＦで免疫したマウスから得られたＣＤ４⁺およびＣＤ８⁺Ｔ細胞の組合わせで、またはova− ＡＦで免疫したマウスから得られたＣＤ４⁺もしくはＣＤ８⁺Ｔ細胞の、純粋なマウスから得られたＣＤ４⁺もしくはＣＤ８⁺細胞との様々な組合わせで、インビトロにおいて刺激した。第５図は、感作したＣＤ８⁺細胞が、インビトロにおける二次ＣＴＬ応答の発生に必須であることを示す。これらのデータはまた、インビトロにおける有効な二次ＣＴＬ応答に関して、ＣＤ４⁺Ｔ細胞が必要であることも示す。ＣＤ４⁺細胞は、初回免疫には必要とされない。同様に、ＣＤ８⁺Ｔ細胞は、インビトロにおける、β−galに特異的な二次ＣＴＬ応答の発生に必要であった。先の実施例は、可溶性タンパク質抗原に対する、クラスＩ制限ＣＴＬ応答の誘導に及ぼす抗原製剤の影響を示す。その抗原製剤は、可溶性抗原で誘導したＣＴＬ初回免疫を媒介し、またトランスフェクタントにより、また可溶性ovaまたはβ−galを細胞質にロードした脾細胞により誘導されるものと同様に活性である。オボアルブミン系において、ＥＧ７−ova、細胞質にロードしたova脾細胞、およびova−ＡＦは、（ａ）クラスＩ制限ＣＤ８⁺ＣＴＬ；（ｂ）ova２５３− ２７６合成ペプチドで感作した標的を認識するＣＴＬ；および（ｃ）ただ一回免疫化した後の長寿命のＣＴＬを誘導した。β−ガラクトシダーゼ系において、β −gal−ＡＦは、β−galを発現するトランスフェクタントＣ３−４、およびアルカリ消化されたβ−galで感作した、トランスフェクトされていないＰ８１５細胞もまた認識するＣＴＬを誘導した。これは、β−ガラクトシダーゼを細胞質にロードした脾細胞での免疫化により誘導されるＣＴＬで観察されたことに類似している。pＨ感受性リポソームに、またはミョウバンに封入したovaはいずれも、インビボにおいてＣＴＬ初回免疫を誘導することができなかったので、抗原製剤による、ovaに特異的なＣＴＬの誘導は独特である。これらの実施例は、先に使用した抗原製剤、およびその均等物が、ヒトの治療において、また様々な癌およびウイルス性疾患におけるＣＴＬ誘導のためのワクチン開発において有用であることを示す。実施例５：これは、ＨＩＶから得られた可溶性gp１２０により、クラスＩ制限ＣＴＬ初回免疫を引き起こすことに関して、先のＡＦの使用を示すための具体的な実施例である。 gp１６０IIIＢを発現する細胞系(１５−１２)を、Ｂalb／ｃ線維芽細胞を誘導する３Ｔ３細胞系に産生した。それは、Ｒon Ｇermain博士およびＪay Ｂerzofs ky博士、Ｎational Ｉnstitute of Ｈealth、Ｂethesda、Ｍ.Ｄ.から得た。gp１６０を発現する細胞系を、インビボにおいて感作した脾リンパ球のインビトロにおける刺激に使用し、またgp１６０に特異的なＣＴＬ誘導に対する標的としても使用した。Ｂalb／ｃマウスを、マウス当たり、ＡＦを含む、または含んでいないgp１６０１０μgで一回免疫した。マウスは、足パッドおよび尾基底に皮下注射した。免疫化してから２週間後に、免疫したマウスから脾細胞を摘出して、照射したgp１６０トランスフェクタントでインビトロにおいて刺激した。インビトロにおいて培養してから５日後に、初回免疫を、gp１６０トランスフェクタントは溶解することができるが、トランスフェクトされていない細胞系は溶解することができない、特異的なエフェクターの存在により評価した。その結果を第７図に示し、ここでは、ＣＴＬ応答がＡＦおよびgp１２０で可能とされる。次の実施例は、１成分または２成分のみを使用しての、本発明の抗原製剤の使用を示す。これらの実施例は、ＣＴＬ−応答を、先の３成分のうちの２つのみでも誘導することができることを示す。実施例６：ＣＴＬ誘導に必要な重要成分の決定上述の成分が全て、抗原に特異的なＣＴＬ誘導に必要であるかどうかを決定するために、マウスを、先のＡＦ中に存在する２成分または３成分の様々な組合わせの、マイクロ流動化した製剤中のオボアルブミンで免疫した。使用した２成分の組合わせは、以下の通りであった：ＰＢＳ中のスクアラン／ＴＷＥＥＮ、ＰＢＳ中のスクアラン／プルロニック、またはＰＢＳ中のプルロニック／ＴＷＥＥＮ。別の組のグループをインキュベートしたが、ここでは、マウスを、１成分系中に製剤化したova、すなわち、ＰＢＳ中のスクアラン、ＰＢＳ中のプルロニック、またはＰＢＳ中のＴＷＥＥＮのみで免疫した。先の３成分抗原製剤を改変して、一回に１成分を除外し、それに代わってＰＢＳを構成した。先の抗原製剤は：ＴＷＥＥＮ８０(Ａldrich、ＷＩ)０.３００ｇ、プルロニックＬ１２１(ＢＡＳＦ、ＮＪ)１.８７５ｇ、およびスクアラン(Ａldrich、ＷＩ) ７.５ｇからなり、ＰＢＳで５０mlとした。２成分製剤は：スクアラン／ＴＷＥＥＮ：ＴＷＥＥＮ８００.３００ｇ、およびスクアラン７. ５ｇであり、ＰＢＳで５０mlとした。プルロニック／ＴＷＥＥＮ：プルロニックＬ１２１１.８７５ｇ、およびＴＷＥＥＮ８００.３００ｇであり、ＰＢＳで５０mlとした。プルロニック／スクアラン：プルロニックＬ１２１１.８７５ｇ、およびスクアラン７.５ｇであり、ＰＢＳで５０mlとした。次いで、試料を、マイクロ流動化装置、１１０Ｔ型、Ｍicrofluidics Ｃorpで処理し、ビンに入れて、使用するまで４℃で保存した。オボアルブミン(Ｓigma、ＭＯ)を秤量して、０.３mg／mlのＨＢＳＳ溶液とした(Ｗhittaker、上記)。その０.３mg／mlの保存溶液を、２成分製剤と、以下の量で混合した：オボアルブミンの０.３mg／ml溶液５部、２成分製剤３.３部、およびＨＢＳＳ１.７部。製剤を掻き混ぜて、注射するまで氷上に保った。溶液は全て、注射する直前に混合した。各々のマウスに、ＯＶＡ３０μlを含む１製剤２００μlを、両方の後足パッドに注射することにより与えて、残りの溶液はいずれも、尾基底に皮下注射した。脾臓を取り出す前に、マウスを２〜４週間休養させた。免疫化してから２週間後、脾細胞を調製して、照射したＥＧ７−ＯＶＡでインビトロにおいて刺激した。培養してから５日後に、４時間の⁵¹Ｃr解離アッセイにおいて、⁵¹Ｃr−ＥＧ７−ＯＶＡまたは⁵¹Ｃr−ＥＬ４に対して試験することにより、ＯＶＡに特異的なＣＴＬの存在を測定した。第８図−第１０図に示すデータは、マイクロ流動化した２成分系中に製剤化したオボアルブミンが、ＯＶＡに特異的なＣＴＬをインビボにおいて感作することができることを示す。我々はさらに、タンパク質抗原と混合した場合に、それらがＣＴＬを誘導する能力に関する、個々の成分の相対的寄与を評価した。免疫化を目的として、抗原をマイクロ流動化した賦形剤と混合して、粒径が２５０−３００nmの範囲である、安定な均質エマルションを得た。ＣＴＬ誘導の原因であるスクアラン−ＴＷＥＥＮ８０−プルロニック(ＳＴＰ)製剤の成分をさらに限定するために、我々は、マウスを、スクアラン−ＴＷＥＥＮ８０(ＳＴ)混合物、プルロニック−ＴＷＥＥＮ８０(ＰＴ)混合物、またはスクアラン−プルロニック(ＳＰ)混合物中の、また対照として、スクアラン(Ｓ)、ＴＷＥＥＮ８０(Ｔ)、またはプルロニック(Ｐ)中のovaで免疫した。マウスをまた、アジュバント対照として、ova−ＳＡＦm(ＭＤＰ７０μgを含む)またはova−ミョウバンでも免疫した。正の対照に関しては、マウスを、可溶性ovaを細胞質にロードした脾細胞で免疫した。他の組合わせ、および置換物もまた使用して、その結果を表１に提示する。ＣＴＬ初回免疫研究の検出に関しては、マウスを一回免疫した。免疫化してから２週間後、脾細胞を、照射したＥＧ７−ova(ovaを発現するＥＬ４細胞)と５日間混合して、⁵¹Ｃr−ＥＧ７−ovaまたは⁵¹Ｃr−ＥＬ４細胞に対して試験した。その結果(第１１図)は、ＳＴＰまたはＳＴと組合わせたova３０μgが、マウスにおけるクラスＩ制限ＣＴＬ応答を感作することを示す。ＳＴＰ中のovaによる、またはＳＴ中のovaによる、ovaに特異的なＣＴＬの初回免疫は、可溶性ovaを細胞質にロードした脾細胞により誘導されるものより優れているらしい。ＰＴ中、またはＳＰ中のovaは、マウスにおける、ovaに特異的なＣＴＬ応答を誘導することができたが、矛盾しており、また不十分であった。ＳＡＦmとは違って、ＭＤＰのＳＴ製剤への添加は、マウスにおける、ovaに特異的なＣＴＬ誘導を危うくしなかった(表２)。マウスを、個々の成分、Ｓ、ＰもしくはＴと混合したovaで免疫した場合にも、またはマウスを、ova−ＳＡＦmもしくはova−ミョウバンで免疫した場合にも、ovaに特異的なＣＴＬ誘導は起こらなかった。（ａ）ＨＢＳＳ中の、（ｂ）ＳＡＦm中の、または（ｃ）ミョウバンに吸着させた、１mgという多い量のovaで免疫したマウスは、ovaに特異的なＣＴＬを感作しなかった。実施例７：ovaに特異的な抗体産生に必要な成分マウスを、ＨＢＳＳ、ＳＴＰ、ＳＴ、ＰＴまたはＳＰ中のova３０μgで、２週間おきに３回免疫した。ＳＡＦmは強力な抗体応答を誘導することが知られているので、正の対照として、マウスをまた、ova−ＳＡＦmでも免疫した。２回目および３回目に免疫化してから７日後、マウスから採血して、その血清を、ovaに特異的な抗体応答に関して試験した。その結果を表３に示す。それらは、ＳＴＰ、ＳＴ中の、またはＳＡＦm中のovaで免疫したマウスが、２回免疫化した後に、同様の抗−ova応答を示すことを示す。実施例８：ＨＩＶ gp１２０に特異的なＣＴＬ誘導ＨＩＶ gp１２０ IIIＢを二次抗原系として使用して、ＳＴＰ、ＳＴにおける、またはＭＰ−ＴにおけるＣＴＬ誘導を測定した。マウスを、ＨＢＳＳ、ＳＴＰ、ＰＴ中の、またはＳＴ中のgp１２０ IIIｂ１μgで免疫化した。対照として、マウスを、ＳＡＦmもしくはＣＦＡ(完全フロイントアジュバント)中の、ＭＰＬ( モノホスホリルリピドＡ)およびＴＤＭ(トレハロースジミコライト)を含むＲＩＢＩアジュバント系中のgp１２０IIIｂ１μgで免疫化した。免疫化してから３週間後、脾細胞を調製して、マイトマイシンで処理したトランスフェクタント細胞１５−１２で、または１８IIIｂペプチドで、インビトロにおいて刺激した。培養してから５日後、その結果得られたエフェクター細胞を、標的として、ワクシニア：gp１６０IIIＢ、または親のワクシニアで感染したＰ８１５細胞に対して試験した。その結果は、マウスにおけるgp１２０に特異的なＣＴＬ応答を、gp １２０−スクアレン−ＴＷＥＥＮ８０製剤が誘導し、またgp１２０−スクアレン−ＴＷＥＥＮ８０プルロニック製剤またはgp１２０−ＨＢＳＳは誘導しなかったことを示す(表４)。実施例９：マウスにおけるgp１２０に特異的な体液性応答の誘導 gp１２０に特異的な体液性応答の誘導に関しては、マウスを、gp１２０IIIｂ１μgで、２週間おきに３回免疫した。マウスから採血し、固相ＥＬＩＳＡアッセイにおいて、gp１２０IIIｂを検出するＩgＧ抗体の存在に関して試験した。その結果は、gp１２０−ＳＴが、gp１２０−ＨＢＳＳ、gp１２０ＳＡＦm(表５)、またはgp１２０−ＳＴＰより優れていることを示す。実施例１０：サルにおけるgp１２０に特異的な抗体応答サル(グループ当たり２匹)を、gp１２０−ＳＡＦm、gp１２０−ＳＴＰ、gp１２０−ＳＴ、またはgp１２０−ＨＢＳＳで免疫した。対照として、１グループのサルを、gp１６０IIIｂを含む組換えワクシニアで免疫した。サルを２週間おきに免疫して、２回目に免疫化してから２週間および３週間後、採血した。各々のサルから得られた免疫前血清および免疫血清を連続的に希釈し、材料および方法において記載したようなＥＬＩＳＡにおいて、抗−gp１２０活性に関してアッセイした。そのデータ(第１２図)は、gp１２０−ＳＴＰまたはgp１２０−ＳＡＦm で免疫したサルが、サルにおいて同様の応答を誘導したことを示す。gp１２０− ＳＴで免疫した１匹のサルは、gp１２０−ＳＡＦmまたはgp１２０−ＳＴＰで免疫したグループと同様の抗−gp１２０応答を誘導した。gp１２０−ＳＴで免疫した１匹のサルは、２回目に免疫化した後でも、強力な抗−gp１２０応答を誘導しなかった。実施例１１：ＨＰＶ１６Ｅ７と組合わせたＡＦのインビボにおける活性１．免疫化のための組換えＨＰＶ１６Ｅ７タンパク質の生成ａ）Ｅ７遺伝子のＰＣＲおよびクローニングＨＰＶ１６Ｅ７遺伝子を、癌細胞系ＣaＳkiから誘導される、Ｅ７遺伝子をコードする、Ｋaren Ｖousden博士(Ｌudwig Ｉnstitute)から得られるプラスミドからクローン化した。コード領域を、Ｂam ＨＩおよびＳal Ｉクローニング部位に隣接した遺伝子の５'および３'末端をコードするプライマーを使用して、ＰＣＲにより増幅した。Ｅ７ＰＣＲ産物をpＧＥＸ−４Ｔ−１発現ベクター(Ｐhar macia Ｂiotech)にライゲートして、pＧＥＸ.Ｅ７発現プラスミドを得た。Ｅ．c oli株ＸＬ１−ブルー(stratagene)を、pＧＥＸ.Ｅ７発現プラスミドと共にトランスフェクトした。Ｅ７の配列を、その結果得られたコロニーのプラスミドから得たが、ＣaＳki細胞から得られるＥ７配列と同一であった。ｂ）細菌により発現されるＥ７の精製の産生 pＧＥＸ.Ｅ７細菌発現プラスミドは、アミノ末端のＧＳＴ、トロンビンプロテアーゼ切断部位、およびカルボキシ末端のＥ７タンパク質からなる、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ(ＧＳＴ)融合タンパク質をコードする。Ｅ７タンパク質を産生して、pＧＥＸ−４Ｔ−１ベクターの製造業者(Ｐharmacia Ｂiotech) からの産物情報文献に記載されているように精製した。簡単に言えば、pＧＥＸ. Ｅ７細菌発現プラスミドを含む細菌を誘導して、培地へのイソプロピルｂ−Ｄ −チオガラクトシダーゼの添加により、融合タンパク質を発現させた。細胞を取り出して、緩やかな音波処理により溶解した。ライゼートをＧlutathione Ｓeph arose ４Ｂ(Ｐharmacia Ｂiotech)に適用した。その融合タンパク質がマトリックスに結合した後、樹脂を洗浄して、非特異的に結合したタンパク質を取り除いた。その結合した融合タンパク質をトロンビンで消化して、ＧＳＴ融合パートナーからＥ７タンパク質を解離させた。Ｅ７タンパク質調製物をＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分析して、Ｅ７タンパク質濃度をＢradford分析(ＢioＲad)により測定した。細菌培養のリットル当たり、９m gの可溶性Ｅ７タンパク質を得た。２．Ｘ２１Ｅ７トランスフェクタントの生成ＨＰＶ１６Ｅ７タンパク質のコード配列(上記参照)は、ＩＤＥＣ所有の真核性発現プラスミドＩＮＰＥ４に挿入されている。このベクター内では、Ｅ７発現が、サイトメガロウイルスのプロモーター／エンハンサー転写要素により調節される。さらに、Ｅ７コード配列の最初の３つのヌクレオチドが取り除かれており、またすぐ上流、およびＥ７コード領域を含むフレームに置かれている免疫グロブリンの軽鎖リーダー配列で置換されている。マウス細胞系Ｘ２１にトランスフェクションした後、個々のＧ４１８耐性クローンを、Ｅ７メッセージ産生に関してノーザンブロット分析により試験した。いずれのクローンも、検出可能なＥ７メッセージを示した。次いで、それらのクローンのうちの２つ、４Ｅ７および１Ｃ７から得られた細胞ライゼート(各々、ＨＯＰＥ１およびＨＯＰＥ２)のウェスタンブロット分析を行って、Ｅ７タンパク質産生を示した。３．Ｅ７／ＡＦ可溶性抗原の免疫化のインビボにおける活性これらの研究には、Ｃ３Ｈバックバラウンドの雌のマウス(Ｈ２^k/k、Ｈarlan Ｓprague Ｄawley)を使用した。「Ｇuide for the Ｃare and Ｕse of Ｌaborat ory Ａnimals」（ＤＨＨＳ公開番号第ＮＩＨ８６−２３号、Ｂethesda、ＭＤ：ＮＩＨ、１９８５）に従って、マウスを保ち、食物および水を無制限に与えた。これらの研究には、Ｅ７トランスフェクタント細胞系(ＨＯＰＥ２Ｈ２^k/k)を使用した。腫瘍細胞系をインビトロにおける連続継代により保った。この細胞系は、ウェスタンブロット分析により検出されるように、Ｅ７細胞質抗原発現を保つことが示されており、続いて、インビトロにおける継代を繰り返した。１５０,０００個のインビトロにおいて継代した細胞を皮下注射することにより、同遺伝子型のＣ３Ｈマウスにおいて腫瘍が発生した。腫瘍を、２つの垂直方向で、１週間おきに測定した。以下の式に従って、腫瘍体積(Ｖ)を計算した：Ｖ(mm³) ＝ (Ｌ×Ｗ²)÷２［ここで、Ｌ＝最も長い軸の長さ(単位mm) Ｗ＝垂直軸(mm)］。表６のデータは、腫瘍マウス(腫瘍を有する動物の数／注射した動物の総数)を表す。第１３図および第１４図のデータは、各々の処置グループまたは対照グループの腫瘍の大きさ(mm³)の中央値を表す。各々の処置グループを、治療を施していない対照グループと比較した。大部分の腫瘍が明瞭である(約５０−７５mm³ )場合には、ＨＯＰＥ２細胞を接種してから１０日後に、治療を開始した。マウスを、ＡＦまたはミョウバンアジュバント中の可溶性Ｅ７タンパク質で免疫化する(総体積０.２mlを皮下注射する)ことにより、治療を開始した。０.２ml中のＥ７タンパク質３０ugまたは９０ugのいずれかが各々のマウスに与えられるよう、免疫化する直前に、ＡＦを、ハンクスの平衡化塩類溶液(ＨＢＳＳ)中のＥ７タンパク質と６０秒間混合した。マウス当たり、０.２ml中のＥ７タンパク質９０ug が各々のマウスに与えられるよう、製造業者による指示に従って、ミョウバン( Ｐierce Ｃhemical Ｃo.)をＥ７タンパク質と混合した。９日後(腫瘍細胞を接種してから１９日後)、２回目の処置グループにおけるマウスに２回目の免疫化を施した。先に記載したように、接種する直前に、ブースター免疫化の準備をした。この実施例(表６：Ｘp ２３３番)では、腫瘍細胞を接種してから４１日後、ＡＦ中の可溶性Ｅ７(各々、３０ugまたは９０ug)の単回の注射を施したマウスの４／８および５／８のみに、測定可能な腫瘍があった。対照的に、ミョウバン中のＥ７タンパク質で免疫したマウスには全て(８／８)、活発に増殖している腫瘍があった。加えて、第１３図に示すように、腫瘍増殖の顕著な阻害は、対照(未処置)グループまたはミョウバン処置グループと比較して、ＡＦ中のＥ７タンパク質で免疫した処置グループにおいてのみ観察された。腫瘍増殖の阻害(第１３図) または腫瘍退縮率の増加(表６)は、ミョウバン中のＥ７の単回の注射を施したマウスにおいては観察されなかった。腫瘍増殖の妨害が幾らかは、ミョウバン中のＥ７の２回注射を施したマウスで観察されたが、同様の結果がまた、腫瘍に挑んでから１０日後および１９日後に、２回の免疫化を施した処置グループを使用しても観察された。その結果は、腫瘍を有するマウスの数の減少、および腫瘍増殖の阻害により測定されるような、顕著な抗腫瘍活性が、ＡＦ中の可溶性Ｅ７の免疫化後に観察されたことを示す。対照的に、ミョウバン中の可溶性Ｅ７タンパク質の単回の注射または二回の注射のいずれかで免疫したマウスには全て、増殖している腫瘍があった。要約すると、ＡＦ中の可溶性Ｅ７タンパク質での免疫化は、ミョウバン中の可溶性Ｅ７の免疫化を利用してでは観察されなかった、腫瘍細胞増殖の顕著な阻害を起こした。他の態様は、以下の請求の範囲内である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号ＦＩＡ６１Ｋ 39/145 ＡＤＹＡ６１Ｋ 39/245 ＡＤＵ 39/245 ＡＤＵ 39/29 ＡＣＳ 39/29 ＡＣＳ 37/02 ＡＣＶ (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者ラステッター，ウィリアム・エイチアメリカ合衆国92067カリフォルニア州ランチョ・サンタ・フェ、プエルタ・デル・ソル16067番

Claims

【特許請求の範囲】１．（ａ）安定化界面活性剤、（ｂ）ミセル形成性物質、および（ｃ）生分解性および生物適合性のある油を含んでなるマイクロ流動化した抗原製剤と混合された、抗原を含んでなる組成物であって、該抗原製剤は、安定な水中油型エマルションとして製剤化されており、免疫刺激性ペプチドを実質的に含んでおらず、該組成物を、ヒト、家畜および農業用動物よりなる群から選択される動物に投与すると、組成物中に含まれる抗原に対して、特異的な細胞障害性Ｔ−リンパ球応答を誘導することができる組成物。２．該抗原が、ＨＩＶ抗原：gp１６０、gag、pol、Ｎef、Ｔat、およびＲev；マラリア抗原：ＣＳタンパク質およびスポロゾイト表面タンパク質２；Ｂ型肝炎表面抗原：Ｐre−Ｓ１、Ｐre−Ｓ２、ＨＢc Ａg、およびＨＢe Ａg；インフルエンザ抗原：ＨＡ、ＮＰおよびＮＡ；Ａ型肝炎表面抗原；ヘルペスウイルス抗原：ＥＢＶ gp３４０、ＥＢＶ gp８５、ＨＳＶ gＢ、ＨＳＶ gＤ、ＨＳＶ gＨ、ＨＳＶ初期タンパク質産物、サイトメガロウイルス gＢ、サイトメガロウイルス g Ｈ、およびＩＥタンパク質 gp７２；呼吸器シンシチアウイルス抗原：Ｆタンパク質、Ｇタンパク質、およびＮタンパク質；並びに腫瘍抗原：癌ＣＥＡ、癌に関連のあるムチン、癌Ｐ２１、癌Ｐ５３、黒色腫ＭＰＧ、黒色腫 p９７、癌Ｎeu 腫瘍遺伝子産物、癌 p５３遺伝子産物、および変異したp２１ rasタンパク質の抗原性部分から選択される、請求項１に記載の組成物。３．（ａ）安定化界面活性剤、（ｂ）ミセル形成性物質、および（ｃ）生分解性および生物適合性のある油を含んでなるマイクロ流動化した抗原製剤と混合された、抗原を含んでなる組成物であって、該抗原製剤は、安定な水中油型エマルションとして製剤化されており、免疫刺激性ペプチドを有さず、該組成物を、ヒト、家畜および農業用動物よりなる群から選択される動物に投与すると、組成物中に含まれる抗原に対して、特異的な細胞障害性Ｔ−リンパ球応答を誘導することができる組成物。４．該抗原製剤が、界面活性剤、物質、および油から実質的になる、請求項３に記載の組成物。５．該抗原製剤が、ヒトまたは家畜もしくは農業用動物に対して非毒性である、請求項３に記載の組成物。６．該抗原が、ＨＩＶ抗原：gp１６０、gag、pol、Ｎef、Ｔat、およびＲev；マラリア抗原：ＣＳタンパク質およびスポロゾイト表面タンパク質２；Ｂ型肝炎表面抗原：Ｐre−Ｓ１、Ｐre−Ｓ２、ＨＢc Ａg、およびＨＢe Ａg；インフルエンザ抗原：ＨＡ、ＮＰおよびＮＡ；Ａ型肝炎表面抗原；ヘルペスウイルス抗原：ＥＢＶ gp３４０、ＥＢＶ gp８５、ＨＳＶ gＢ、ＨＳＶ gＤ、ＨＳＶ gＨ、ＨＳＶ初期タンパク質産物、サイトメガロウイルス gＢ、サイトメガロウイルス g Ｈ、およびＩＥタンパク質 gp７２；呼吸器シンシチアウイルス抗原：Ｆタンパク質、Ｇタンパク質、およびＮタンパク質；並びに腫瘍抗原：癌ＣＥＡ、癌に関連のあるムチン、癌Ｐ２１、癌Ｐ５３、黒色腫ＭＰＧ、黒色腫 p９７、癌Ｎeu 腫瘍遺伝子産物、癌 p５３遺伝子産物、ヒトパピローマウイルス抗原、前立腺に特異的な抗原(ＰＳＡ)、および変異したp２１ rasタンパク質から選択される、請求項３に記載の組成物。７．ヒト、家畜および農業用動物よりなる群から選択される動物において、細胞障害性Ｔ−リンパ球応答を誘導する方法であって、その方法は、抗原と、マイクロ流動化した抗原製剤を含んでなる混合物を該動物に投与することを含んでなり、該抗原製剤は、（ａ）安定化界面活性剤、（ｂ）ミセル形成性物質、および（ｃ）生分解性および生物適合性のある油を含んでなり、免疫刺激性ペプチド成分を有さず、安定な水中油型エマルションとして製剤化されており、該方法においては、該混合物を、該混合物中に含まれる抗原に特異的である、該動物における細胞障害性Ｔ−リンパ球応答を誘導するのに十分な量で該動物に投与する方法。８．該抗原製剤が、界面活性剤、物質、および油から実質的になる、請求項７に記載の方法。９．該方法が、該ヒトまたは該動物への該混合物の単回の投与から実質的になる、請求項７に記載の方法。１０．該ヒトまたは該動物が、ウイルスに感染している、または該ウイルスが原因となる感染の１つまたはそれ以上の症状を患っている、請求項７に記載の方法。１１．該抗原製剤が、該ヒトまたは該動物に対して非毒性である、請求項７に記載の方法。１２．該抗原が、ＨＩＶ抗原：gp１６０、gag、pol、Ｎef、Ｔat、およびＲev ；マラリア抗原：ＣＳタンパク質およびスポロゾイト表面タンパク質２；Ｂ型肝炎表面抗原：Ｐre−Ｓ１、Ｐre−Ｓ２、ＨＢc Ａg、およびＨＢe Ａg；インフルエンザ抗原：ＨＡ、ＮＰおよびＮＡ；Ａ型肝炎表面抗原；ヘルペスウイルス抗原：ＥＢＶ gp３４０、ＥＢＶ gp８５、ＨＳＶ gＢ、ＨＳＶ gＤ、ＨＳＶ gＨ、ＨＳＶ初期タンパク質産物、サイトメガロウイルス gＢ、サイトメガロウイルス gＨ、およびＩＥタンパク質 gp７２；呼吸器シンシチアウイルス抗原：Ｆタンパク質、Ｇタンパク質、およびＮタンパク質；並びに腫瘍抗原：癌ＣＥＡ、癌に関連のあるムチン、癌Ｐ２１、癌Ｐ５３、黒色腫ＭＰＧ、黒色腫 p９７、および癌Ｎeu 腫瘍遺伝子産物、癌 p５３遺伝子産物、および変異したp２１ r asタンパク質から選択される、請求項７に記載の方法。１３．ＨＩＶウイルスに感染した患者を治療する方法であって、その方法は、（ａ）安定化界面活性剤、（ｂ）ミセル形成性物質、および（ｃ）生分解性および生物適合性のある油を含んでなるマイクロ流動化した抗原製剤と混合された、ＨＩＶ抗原を含んでなる組成物を投与することを含んでなり、該抗原製剤は、免疫刺激性ペプチド成分を有さず、安定な水中油型エマルションとして製剤化されており、該方法においては、該組成物を、該患者における細胞障害性Ｔ−リンパ球応答を誘導するのに十分な量で該患者に投与する方法。１４．該ＨＩＶ抗原が、gp１６０、gag、pol、Ｎef、Ｔat、およびＲevから選択される、請求項１３に記載の方法。１５．マラリアを患っている患者を治療する方法であって、（ａ）安定化界面活性剤、（ｂ）ミセル形成性物質、および（ｃ）生分解性および生物適合性のある油を含んでなる抗原製剤と混合された、マラリアに関連のある抗原を含んでなる、マイクロ流動化した組成物を投与することを含んでなり、該抗原製剤は、免疫刺激性ペプチド成分を有さず、安定な水中油型エマルションとして製剤化されており、該方法においては、該組成物を、該患者における細胞障害性Ｔ−リンパ球応答を誘導するのに十分な量で該患者に投与する方法。１６．該マラリアに関連のある抗原が、ＣＳタンパク質、およびスポロゾイト表面タンパク質２から選択される、請求項１５に記載の方法。１７．インフルエンザを患っている患者を治療する方法であって、（ａ）安定化界面活性剤、（ｂ）ミセル形成性物質、および（ｃ）生分解性および生物適合性のある油を含んでなるマイクロ流動化した抗原製剤と混合された、インフルエンザに関連のある抗原を含んでなる組成物を投与することを含んでなり、該抗原製剤は、免疫刺激性ペプチド成分を有さず、安定な水中油型エマルションとして製剤化されており、該方法においては、該組成物を、該患者における細胞障害性Ｔ−リンパ球応答を誘導するのに十分な量で該患者に投与する方法。１８．該インフルエンザに関連のある抗原が、ＨＡ、ＮＰおよびＮＡから選択される、請求項１７に記載の方法。１９．肝炎を患っている患者を治療する方法であって、（ａ）安定化界面活性剤、（ｂ）ミセル形成性物質、および（ｃ）生分解性および生物適合性のある油を含んでなるマイクロ流動化した抗原製剤と混合された、肝炎に関連のある抗原を含んでなる組成物を投与することを含んでなり、該抗原製剤は、免疫刺激性ペプチド成分を有さず、安定な水中油型エマルションとして製剤化されており、該方法においては、該組成物を、該患者における細胞障害性Ｔ−リンパ球応答を誘導するのに十分な量で該患者に投与する方法。２０．該肝炎に関連のある抗原が、Ａ型肝炎表面抗原、Ｐre−Ｓ１、Ｐre−Ｓ２、ＨＢc Ａg、およびＨＢe Ａgから選択される、請求項１９に記載の方法。２１．癌を患っている患者を治療する方法であって、（ａ）安定化界面活性剤、（ｂ）ミセル形成性物質、および（ｃ）生分解性および生物適合性のある油を含んでなるマイクロ流動化した抗原製剤と混合された、癌に関連のある抗原を含んでなる組成物を投与することを含んでなり、該抗原製剤は、免疫刺激性ペプチド成分を有さず、安定な水中油型エマルションとして製剤化されており、該方法においては、該組成物を、該患者における細胞障害性Ｔ−リンパ球応答を誘導するのに十分な量で該患者に投与する方法。２２．該癌に関連のある抗原が、癌ＣＥＡ、癌に関連のあるムチン、Ｐ２１、癌Ｐ５３、黒色腫ＭＰＧ、黒色腫 p９７、および癌Ｎeu 腫瘍遺伝子産物、癌 p５３遺伝子産物、および変異したp２１ rasタンパク質から選択される、請求項２１に記載の方法。２３．ヘルペスウイルスに感染した患者を治療する方法であって、（ａ）安定化界面活性剤、（ｂ）ミセル形成性物質、および（ｃ）生分解性および生物適合性のある油を含んでなるマイクロ流動化した抗原製剤と混合された、ヘルペスウイルス抗原を含んでなる組成物を投与することを含んでなり、該抗原製剤は、免疫刺激性ペプチド成分を有さず、安定な水中油型エマルションとして製剤化されており、該方法においては、該組成物を、該患者における細胞障害性Ｔ−リンパ球応答を誘導するのに十分な量で該患者に投与する方法。２４．該ヘルペスウイルス抗原が、ＥＢＶ gp３４０、ＥＢＶ gp８５、ＨＳＶ gＢ、ＨＳＶ gＤ、ＨＳＶ gＨ、ＨＳＶ初期タンパク質産物、サイトメガロウイルス gＢ、サイトメガロウイルス gＨ、およびＩＥタンパク質 gp７２から選択される、請求項２３に記載の方法。２５．呼吸器シンシチアウイルスに感染した患者を治療する方法であって、（ａ）安定化界面活性剤、（ｂ）ミセル形成性物質、および（ｃ）生分解性および生物適合性のある油を含んでなるマイクロ流動化した抗原製剤と混合された、呼吸器シンシチア抗原を含んでなる組成物を投与することを含んでなり、該抗原製剤は、免疫刺激性ペプチド成分を有さず、安定な水中油型エマルションとして製剤化されており、該方法においては、該組成物を、該患者における細胞障害性Ｔ−リンパ球応答を誘導するのに十分な量で該患者に投与する方法。２６．該呼吸器シンシチアウイルス抗原が、Ｆタンパク質、Ｇタンパク質、およびＮタンパク質から選択される、請求項２５に記載の方法。２７．ヒトまたは家畜もしくは農業用動物において、細胞障害性Ｔ−リンパ球応答を誘導する方法であって、（ａ）安定化界面活性剤、（ｂ）ミセル形成性物質、および（ｃ）生分解性および生物適合性のある油のうちの２つから実質的になるマイクロ流動化した抗原製剤と混合された、抗原の混合物を投与する工程を含んでなり、該抗原製剤は、安定な水中油型エマルションとして製剤化されており、該方法においては、該混合物を、該ヒトまたは動物における細胞障害性Ｔ−リンパ球応答を誘導するのに十分な量で該ヒトまたは動物に投与する方法。２８．該ヒトまたは家畜もしくは農業用動物が、ウイルスに感染している、または該ウイルスが原因となる感染の１つまたはそれ以上の症状を患っている、請求項２７に記載の方法。２９．該抗原製剤が、該ヒトまたは家畜もしくは農業用動物に対して非毒性である、請求項２７に記載の方法。３０．該抗原が、ＨＩＶ抗原：gp１６０、gag、pol、Ｎef、Ｔat、およびＲev ；マラリア抗原：ＣＳタンパク質およびスポロゾイト表面タンパク質２；Ｂ型肝炎表面抗原：Ｐre−Ｓ１、Ｐre−Ｓ２、ＨＢc Ａg、およびＨＢe Ａg；インフルエンザ抗原：ＨＡ、ＮＰおよびＮＡ；Ａ型肝炎表面抗原；ヘルペスウイルス抗原：ＥＢＶ gp３４０、ＥＢＶ gp８５、ＨＳＶ gＢ、ＨＳＶ gＤ、ＨＳＶ gＨ、ＨＳＶ初期タンパク質産物、サイトメガロウイルス gＢ、サイトメガロウイルス gＨ、およびＩＥタンパク質 gp７２；呼吸器シンシチアウイルス抗原：Ｆタンパク質、Ｇタンパク質、およびＮタンパク質；並びに腫瘍抗原：癌ＣＥＡ、癌に関連のあるムチン、癌Ｐ２１、癌Ｐ５３、黒色腫ＭＰＧ、黒色腫 p９７、および癌Ｎeu 腫瘍遺伝子産物、癌 p５３遺伝子産物、および変異したp２１ r asタンパク質の抗原性部分から選択される、請求項２７に記載の方法。３１．ＨＩＶウイルスに感染した患者を治療する方法であって、（ａ）安定化界面活性剤、（ｂ）ミセル形成性物質、および（ｃ）生分解性および生物適合性のある油のうちの２つから実質的になるマイクロ流動化した抗原製剤と混合された、ＨＩＶ抗原を含んでなる組成物を投与することを含んでなり、該抗原製剤は、安定な水中油型エマルションとして製剤化されており、該方法においては、該組成物を、該患者における細胞障害性Ｔ−リンパ球応答を誘導するのに十分な量で該患者に投与する方法。３２．該ＨＩＶ抗原が、gp１６０、gag、pol、Ｎef、Ｔat、およびＲevから選択される、請求項３１に記載の方法。３３．マラリアを患っている患者を治療する方法であって、（ａ）安定化界面活性剤、（ｂ）ミセル形成性物質、および（ｃ）生分解性および生物適合性のある油のうちの２つから実質的になるマイクロ流動化した抗原製剤と混合された、マラリアに関連のある抗原を含んでなる組成物を投与することを含んでなり、該抗原製剤は、安定な水中油型エマルションとして製剤化されており、該方法においては、該組成物を、該患者における細胞障害性Ｔ−リンパ球応答を誘導するのに十分な量で該患者に投与する方法。３４．該マラリアに関連のある抗原が、ＣＳタンパク質、およびスポロゾイト表面タンパク質２から選択される、請求項３３に記載の方法。３５．インフルエンザを患っている患者を治療する方法であって、（ａ）安定化界面活性剤、（ｂ）ミセル形成性物質、および（ｃ）生分解性および生物適合性のある油のうちの２つから実質的になるマイクロ流動化した抗原製剤と混合された、インフルエンザに関連のある抗原を含んでなる組成物を投与することを含んでなり、該抗原製剤は、安定な水中油型エマルションとして製剤化されており、該方法においては、該組成物を、該患者における細胞障害性Ｔ−リンパ球応答を誘導するのに十分な量で該患者に投与する方法。３６．該インフルエンザに関連のある抗原が、ＨＡ、ＮＰおよびＮＡから選択される、請求項３５に記載の方法。３７．肝炎を患っている患者を治療する方法であって、（ａ）安定化界面活性剤、（ｂ）ミセル形成性物質、および（ｃ）生分解性および生物適合性のある油のうちの２つから実質的になるマイクロ流動化した抗原製剤と混合された、肝炎に関連のある抗原を含んでなる組成物を投与することを含んでなり、該抗原製剤は、安定な水中油型エマルションとして製剤化されており、該方法においては、該組成物を、該患者における細胞障害性Ｔ−リンパ球応答を誘導するのに十分な量で該患者に投与する方法。３８．該肝炎に関連のある抗原が、Ａ型肝炎表面抗原、Ｐre−Ｓ１、Ｐre−Ｓ２、ＨＢc Ａg、およびＨＢe Ａgから選択される、請求項３７に記載の方法。３９．癌を患っている患者を治療する方法であって、（ａ）安定化界面活性剤、（ｂ）ミセル形成性物質、および（ｃ）生分解性および生物適合性のある油のうちの２つから実質的になるマイクロ流動化した抗原製剤と混合された、癌に関連のある抗原を含んでなる組成物を投与することを含んでなり、該抗原製剤は、安定な水中油型エマルションとして製剤化されており、該方法においては、該組成物を、該患者における細胞障害性Ｔ−リンパ球応答を誘導するのに十分な量で該患者に投与する方法。４０．該癌に関連のある抗原が、癌ＣＥＡ、癌に関連のあるムチン、Ｐ２１、癌Ｐ５３、黒色腫ＭＰＧ、黒色腫 p９７、および癌Ｎeu 腫瘍遺伝子産物、癌 p５３遺伝子産物、および変異したp２１ rasタンパク質から選択される、請求項３９に記載の方法。４１．ヘルペスウイルスに感染した患者を治療する方法であって、（ａ）安定化界面活性剤、（ｂ）ミセル形成性物質、および（ｃ）生分解性および生物適合性のある油のうちの２つから実質的になるマイクロ流動化した抗原製剤と混合された、ヘルペスウイルス抗原を含んでなる組成物を投与することを含んでなり、該抗原製剤は、安定な水中油型エマルションとして製剤化されており、該方法においては、該組成物を、該患者における細胞障害性Ｔ−リンパ球応答を誘導するのに十分な量で該患者に投与する方法。４２．該ヘルペスウイルス抗原が、ＥＢＶ gp３４０、ＥＢＶ gp８５、ＨＳＶ gＢ、ＨＳＶ gＤ、ＨＳＶ gＨ、ＨＳＶ初期タンパク質産物、サイトメガロウイルス gＢ、サイトメガロウイルス gＨ、およびＩＥタンパク質 gp７２から選択される、請求項４１に記載の方法。４３．呼吸器シンシチアウイルスに感染した患者を治療する方法であって、（ａ）安定化界面活性剤、（ｂ）ミセル形成性物質、および（ｃ）生分解性および生物適合性のある油のうちの２つから実質的になるマイクロ流動化した抗原製剤と混合された、呼吸器シンシチア抗原を含んでなる組成物を投与することを含んでなり、該抗原製剤は、安定な水中油型エマルションとして製剤化されており、該方法においては、該組成物を、該患者における細胞障害性Ｔ−リンパ球応答を誘導するのに十分な量で該患者に投与する方法。４４．該呼吸器シンシチアウイルス抗原が、Ｆタンパク質、Ｇタンパク質、およびＮタンパク質から選択される、請求項４３に記載の方法。４５．該抗原製剤が、該界面活性剤および該ミセル形成性物質から実質的になる、請求項２５−４４のいずれかに記載の方法。４６．該抗原製剤が、該界面活性剤および該油から実質的になる、請求項２５ −４４のいずれかに記載の方法。４７．該抗原製剤が、該油および該ミセル形成性物質から実質的になる、請求項２５−４４のいずれかに記載の方法。４８．該パピローマウイルス抗原が、ＨＰＶ１６Ｅ６抗原、ＨＰＶ１６Ｅ７抗原、ＨＰＶ１８Ｅ６抗原、ＨＰＶ１８Ｅ７抗原、ＨＰＶ６Ｅ４抗原、ＨＰＶ６Ｌ１抗原、ＨＰＶ１１Ｅ４抗原、およびＨＰＶ１ＩＬ１抗原よりなる群から選択される、請求項６に記載の組成物。４９．頸癌を治療する方法であって、請求項４８に記載のヒトパピローマウイルス抗原製剤の有効量を投与することを含んでなる方法。５０．尖圭コンジロームを治療する方法であって、請求項４８に記載のパピローマウイルス抗原製剤の有効量を投与することを含んでなる方法。５１．前立腺を治療する方法であって、抗原が前立腺に特異的な抗原である、請求項６に記載の組成物を投与することを含んでなる方法。５２．安定化界面活性剤が、ポリソルベート８０、ＴＷＥＥＮ２０、ＴＷＥＥＮ４０、ＴＷＥＥＮ６０、Ｚwittergent ３−１２、Ｔeepol ＨＢ７、およびＳpan ８５よりなる群から選択される、請求項１に記載の組成物。５３．該界面活性剤が約０.０５〜０.５％の範囲の量で与えられる、請求項１に記載の組成物。５４．該界面活性剤の量が約０.２％である、請求項５３に記載の組成物。５５．該ミセル形成性物質が０〜２の間の親水性−親油性バランスを含んでなる、請求項１に記載の組成物。５６．該ミセル形成性物質が、ポロキサマー４０１、プルロニックＬ６２ＬＦ、プルロニックＬ１０１、プルロニックＬ６４、ＰＥＧ１０００、テトロニック１５０１、テトロニック１５０Ｒ１、テトロニック７０１、テトロニック９０１、テトロニック１３０１、およびテトロニック１３０Ｒ１よりなる群から選択される、請求項１に記載の組成物。５７．該ミセル形成性物質の量が０.５〜１０％の範囲である、請求項１に記載の組成物。５８．該ミセル形成性物質の量が１.２５〜５％の範囲である、請求項５７に記載の組成物。５９．油が６０℃未満の融解温度を示す、請求項１に記載の組成物。６０．油が、スクアレン、スクアラン、エイコサン、テトラテトラコンタン、プリスタン、グリセロール、および植物油よりなる群から選択される、請求項５９に記載の組成物。６１．油の量が１〜１０％の間の範囲である、請求項１に記載の組成物。６２．油の量が２.５〜５％の間の範囲である、請求項６１に記載の組成物。６３．ムラミルジペプチドを２０μg未満含んでなる、請求項１に記載の組成物。６４．ムラミルジペプチドを全く含まない、請求項６３に記載の組成物。６５．界面活性剤がポリソルベート８０であって、ミセル形成性物質がポロキサマー４０１である、請求項１に記載の組成物。６６．油がスクアランである、請求項６５に記載の組成物。６７．界面活性剤が、ＴＷＥＥＮ２０、ＴＷＥＥＮ４０、およびＴＷＥＥＮ８０よりなる群から選択され；油が、スクアラン、エイコサン、およびプリスタンよりなる群から選択され、またミセル形成性物質が、プルロニックＬ６２ＬＦおよびポロキサマー４０１よりなる群から選択される、請求項１に記載の組成物。６８．界面活性剤が、ポリソルベート８０、Ｔween ２０、Ｔween ４０、Ｔw een ６０、Ｚwittergent ３−１２、Ｔeepol ＨＢ７、およびＳpan ８５よりなる群から選択される、請求項７に記載の方法。６９．該界面活性剤が約０.０５〜０.５％の範囲の量で与えられる、請求項７に記載の方法。７０．界面活性剤の量が約０.２％である、請求項６９に記載の方法。７１．該ミセル形成性物質が０〜２の間の親水性−親油性バランスを含んでなる、請求項７に記載の方法。７２．該ミセル形成性物質が、ポロキサマー４０１、プルロニックＬ６２ＬＦ、プルロニックＬ１０１、プルロニックＬ６４、ＰＥＧ１０００、テトロニック１５０１、テトロニック１５０Ｒ１、テトロニック７０１、テトロニック９０１、テトロニック１３０１、およびテトロニック１３０Ｒ１よりなる群から選択される、請求項７に記載の方法。７３．該ミセル形成性物質の量が０.５〜１０％の範囲である、請求項７に記載の方法。７４．該ミセル形成性物質の量が１.２５〜５％の範囲である、請求項７１に記載の方法。７５．油が６０℃未満の融解温度を示す、請求項７に記載の方法。７６．油が、スクアレン、エイコサン、テトラテトラコンタン、グリセロール、プリスタン、および植物油よりなる群から選択される、請求項７に記載の方法。７７．油の量が１〜１０％の間の範囲である、請求項７に記載の方法。７８．油の量が２.５〜５％の間の範囲である、請求項７７に記載の方法。７９．混合物がムラミルジペプチドを２０μg未満含んでなる、請求項７に記載の方法。８０．混合物がムラミルジペプチドを全く含まない、請求項７に記載の方法。８１．界面活性剤がポリソルベート８０であって、ミセル形成性物質がポロキサマー４０１である、請求項７に記載の方法。８２．油がスクアランである、請求項８１に記載の方法。８３．界面活性剤が、ＴＷＥＥＮ２０、ＴＷＥＥＮ４０、およびＴＷＥＥＮ８０よりなる群から選択され、油が、スクアラン、エイコサン、オリーブ油、およびプリスタンよりなる群から選択され、またミセル形成性物質が、ポロキサマー４０１およびプルロニックＬ６２ＬＦよりなる群から選択される、請求項７に記載の方法。８４．混合物中の粒径が２５０〜３００nmの範囲である、請求項７に記載の方法。８５．組成物中の粒径が２５０〜３００nmの範囲である、請求項１に記載の組成物。