FR2805163A1

FR2805163A1 - Utilisation d'un detergent de type zwittergent pour la preparation d'une composition pharmaceutique destinee a etre administree par voie nasale

Info

Publication number: FR2805163A1
Application number: FR0002104A
Authority: FR
Inventors: Liliane Goestch; Nathalie Corvaia; Alain Beck; Jean Francois Haeuw
Original assignee: Pierre Fabre Medicament SA
Current assignee: Pierre Fabre Medicament SA
Priority date: 2000-02-21
Filing date: 2000-02-21
Publication date: 2001-08-24
Also published as: AU3572901A; WO2001062240A2; WO2001062240A3

Abstract

L'invention concerne l'utilisation d'un détergent de type zwittergent, notamment le ZW 3-14 (3-(N-tétradécyl-N, N-diméthyl-amino) -propane-1-sulfonate), pour la préparation d'une composition pharmaceutique destinée à être administrée par voie nasale pour induire ou améliorer l'immunité d'un mammifère vis-à-vis d'un antigène ou d'un haptène qui lui est associé. L'invention comprend également l'utilisation de tels zwittergents dans des compositions pharmaceutiques, notamment vaccinales, pouvant contenir en outre un composé porteur et un adjuvant, pour le traitement prophylactique et thérapeutique des infections ou des tumeurs. Lesdites compositions pharmaceutiques sont également comprises dans la présente invention.

Description

UTILISATION D'UN DETERGENT DE TYPE ZWITTERGENT POURLA PREPARATION D'UNE COMPOSITION PHARMACEUTIQUE DESTINEE A ETRE ADMINISTREE PAR VOIENASALE La présente invention concerne l'utilisation d'un détergent de type zwittergent, notamment le ZW 3-14 (3-(N-tôtradécyl-N, N-diméthyl-amino)-propane-1-sulfonate), pour la préparation d'une composition pharmaceutique destinéeà être administrée par voie nasale pour induire ou améliorer l'immunité d'un mammifère vis-à-vis d'un antigène ou d'un haptène qui lui est associé. L'invention comprend également l'utilisation de tels zwittergents dans des compositions pharmaceutiques, notamment vaccinales pouvant contenir en outre un composé porteur et un adjuvant, pour le traitement prophylactique et thérapeutique des infections ou des tumeurs. Lesdites compositions pharmaceutiques sont également comprises dans la présente invention.

Les nouvelles approches vaccinales soulignent l'importance de l'utilisation de protéines sous unitaires, de peptides ou de polysaccharides pour l'immunisation. L'avantage de ces approches mettant en jeu des protéines purifiées est l'élimination de composés responsables d'effets indésirables. Par ailleurs, ces antigènes pourront être sélectionnés sur la base de l'effet immunologique recherché comme par exemple l'induction de CTL (Lymphocytes T Cytotoxiques) ou au contraire la génération d'une forte réponse de type humoral. Cependant, le désavantage de ce type de préparation est que les antigènes possèdent généralement une faible immunogénicité et qu'il est nécessaire de les mélangerà des adjuvants.

Un autre axe de recherche particulièrement étudié en matière de vaccin concerne les voies mucosales. L'immunisation par voie mucosale représente en effet un formidable enjeu dans la mesure où la majorité des pathogènes initient une infection en interagissant avec les muqueuses de l'hôte et qu'après colonisation de la muqueuse, certains micro-organismes génèrent une maladie par le biais d'une sécrétion de facteurs toxiques alors que d'autres pénètrent les tissus de l'hôte pour générer des maladies systémiques. Les défenses mucosales sont par conséquent très importantes dans le contrôle de l'infection et le déroulement de la maladie.

La vaccination par voie mucosale et plus particulièrement l'immunisation par voie nasale présentent plusieurs avantages par rapportà la vaccination systémique. Tout d'abord, les immunisations par voie mucosale induisent la production d'IgA spécifiques directement au site de l'infection. Ces anticorps peuvent inhiber l'attachement des pathogènesà la muqueuse et la colonisation de celle ci. Par ailleurs, en plus de la réponse locale, une immunisation par voie muqueuse peut stimuler une réponse systémique de type IgG qui représentera une seconde barrière contre l'invasion des tissus par le micro-organisme pathogène. Enfin, d'un point de vue pratique, l'administration d'un vaccin par voie nasale est plus aisée qu'une injection par voie systémique.

L'utilisation de vaccin par voie orale ou par voie nasale aurait une grande influence sur l'éradication de germes pathogènes. En effet, toute modification d'un vaccin lui permettant d'être utilisé avec une plus grande flexibilité (thermostabilité, distribution sans seringue,... ) aurait pour conséquence une vaccination plus efficace et plus étendue. D'autre part, l'immunisation par les voies muqueuses permet d'induire une immunité locale constituant la première baffière à l'invasion par un micro- organisme.

Des approches de vaccination par voie nasale ontdéjà été décriîtes dans la littérature.

Des essais ont ainsi été effectués sur des administrations mucosales de la PspA qui correspondà la protéine de surfaceA de Pneumocoque (BhIes D.E., brevet EP 0 682 950), sur les filaments d'hémaglutinine (CapronA., brevet FR 2718 750 ; Kimura A., brevet EP 0 471177 ; Shahin R.D., brevetUS 7532327), sur un fragment de la toxine tétanique (Dougan G., brevet WO 93/21950), sur la choléra toxin B (CTB).

Une protéine de la membrane externe de Neisseria meningitidis est utilisée, mélangéeà l'haptène en tant qu'adjuvant pour une immunisation par voie nasale (Van de Verg L.L., Infection and Immunity, 1996, 64:5263-5268).

On peut encore citer la demande internationale de brevet déposée sous le No. PCT/FR 99/00703 le26 mars1997 décrivant l'utilisation de la protéine OmpA de Klebsiella pneumoniae pour la préparation de vaccins administrables par voie nasale, notamment pour la prévention ou le traitement des infections par le virus syncytial respiratoire (VRS).

Cependant, une limitation du développement de vaccins sous unitaires par voie mucosale est l'absence d'adjuvants muqueux, dépourvus de toxicité et permettant la génération ou l'amplification d'une réponse immunitaire. Deux puissantes entérotoxines, la choléra toxine(CT) et la heat-labile enterotoxin (LT) d'E. coli sont connues pour être de puissants adjuvants muqueux, cependant, ils ne peuvent être introduits tels quels dans des préparations vaccinales du fait de leur toxicité. Des mutants non toxiques de ces protéines sont en cours d'étude ainsi que diverses formulations parmi lesquelles les liposomes et les microsphères.

Il est connu que les détergents sont indispensablesà la solubilisation de nombreuses protéines, et notamment les protéines issues de membranes, et que ces complexes protéines/détergents qui forment des micelles peuvent être utilisés comme immunogènes par voie systémique dans des protocoles expérimentaux (Mukhlis et al., 1984, Vaccine 2,199-203 ; Playfair J. H. L. et al.,1986, Parasite Immunol. 8, 409-414). Il est connu que les Zwittergent peuvent potentialiser l'effet adjuvant de l'hydroxyde d'aluminium par voie systémique (Teerling T. et al.,1987, Vaccine,5 : 307-314). Un brevet européen revendique l'utilisation d'une préparation comprenant un antigène protéique ou polysaccharidique comme vaccin par voie systémique (EP 0 182 401). Mais il n'a jamais été démontré que les détergents de type Zwittergent peuvent être adjuvants des voies nasales.

Ainsi, il existe un grand besoin de disposer de nouveaux adjuvants, dépourvus de toxicité ou faiblement toxiques et permettant la génération ou l'amplification d'une réponse immunitaire pour la préparation de composition pharmaceutique destinéeà être administrée par voie mucosale, notamment par voie nasale.

Ceci est justement l'objet de la présente invention.

La Demanderesse a mis en évidence que les détergents de type Zwittergent, tels que le ZW 3-14, ZW 3-12 ou ses dérivés et analogues, sont, de manière surprenante, capables d'induire ou d'améliorer l'immunité d'un mammifère vis-à-vis d'un antigène ou d'un haptène lorsque lesdits détergents sont administrés par voie mucosale, notamment par voie nasale.

Ainsi, la présente invention concerne l'utilisation d'un détergent de type Zwittergent pour la préparation d'une composition pharmaceutique destinéeà être administrée par voie mucosale, de préférence par voie nasale, pour induire ou améliorer l'immunité d'un mammifère vis-à-vis d'un antigène ou d'un haptène.

Dans la présente description, on entend désigner par voie mucosale , la voie nasale , la voie orale, rectale ou vaginale.

Par détergent de type Zwittergent , on entend désigner dans la présente description les molécules qui de manière générale contiennentà la fois une fonction anionique et cationique. Comme exemple de détergent zwitternionique ou zwittergent, on peut citer les zwittergents indiqués dans le brevetUS No. 4,287,080 à la colonne 4, dans le brevetUS No. 4,557,853 ou encore les sources commerciales de tels détergents que l'on peut trouver dans McCutcheon's Emulsifiers and Detergents, North American Edition, 1984, MC Publishing Company.

Comme zwittergent, on préfère en particulier les zwittergents de formule générale(1) : Cy H2y-1-N+(CH3)2-C.H2x-SO3- où x représente un entier compris entre1 et5, ety représente un entier compris entre 2 et 20.

De manière plus préférée, ledit détergent de type zwittergent est le zwittergent ZW 3-14 (3-(N-tétradécyl-N, N-diméthyl-amino)-propane-1-suifonate), aussi appelé sulfobêtaïne SB14 ou le ZW 3-12 (3-(N-dodécyl-N, N-diméthyl-amino)-propane-1- sullfonate.

De manière générale, l'homme de l'art saura adapter la concentration dudit détergent de type Zwittergent utilisé, en fonction de sa concentration micellaire critique spécifique, de la nature et de la concentration des autres composés contenus dans la composition pharmaceutique, en particulier de la nature et de la concentration de l'antigène ou haptène choisi, et des éventuels adjuvants qui pourront être également incorporés dans ladite composition.

De manière avantageuse, ledit détergent de type Zwittergent pour la préparation d'une composition pharmaceutique selon l'invention està une concentration supérieureà 0,1 fois sa concentration micellaire critique (CMC), de préférence comprise entre0,5 et 64 fois sa CMC, de manière très préféréeà une concentration entre0,5 et8 fois sa CMC.

La présente invention comprend également l'utilisation d'un détergent de type Zwittergent pour la préparation d'une composition pharmaceutique selon l'invention, caractérisée en ce que ladite composition pharmaceutique comprend ledit détergent de type Zwittergent mélangé audit antigène ou haptène.

De préférence, ledit antigène ou haptène est choisi dans le groupe comprenant les peptides, les glycopeptides, les polysaccharides, les oligosaccharides et les acides nucléiques.

Par le terme peptide , on entend également désigner une protéine ou un polypeptide, ces trois termes étant utilisés indifféremment.

De préférence, la présente invention concerne l'utilisation d'un détergent de type Zwittergent pour la préparation d'une composition pharmaceutique selon l'invention, caractérisée en ce que ledit antigène ou haptène dérive d'un micro- organisme tel que d'un virus, d'une bactérie ou d'un parasite. L'antigène ou l'haptène selon l'invention comprendra au moins un fragment dudit micro-organisme, tel qu'un fragment connu pour contenir un épitope antigénique, ou que l'homme de l'art saura déterminer pour sa capacitéà conférer l'immunité recherchée par des techniques standards telles que celles décrites dans les exemples ci-après.

De préférence, ledit antigène ou haptène est de nature peptidique ou unADN codant pour un tel peptide immunogène.

De préférence, la présente invention concerne l'utilisation d'un détergent de type Zwittergent pour la préparation d'une composition pharmaceutique selon l'invention, caractérisée en ce que ledit antigène ou haptène comprend au moins un peptide dérivé de micro-organisme responsable de pathologies des voies aériennes, en particulier choisi parmi le VRS, le para influenza virus (PIV), l'influenza virus, l'hantavirus, les streptocoques, les pneumocoques et les méningocoques.

De manière préférée, ledit antigène ou haptène comprend au moins un peptide dérivé du virus respiratoire syncytial (VRS) humain, de typeA ou B, ou bovin, en particulier un fragment de la protéineG du VRS, tel qu'un peptide choisi parmi ceux identifiés dans la liste des séquences SEQ ID No. 2à SEQ ID No. 74 telle que publiée de la demande internationale de brevet déposée sous le No. PCT/FR 99100703 le26 mars1997, incorporée ici par référence, de manière plus particulière les peptides G2Na et G5a de séquences SEQ ID No. 2 et SEQ ID No. 4 de la présente liste de séquences, ou les peptides présentant après alignement optimal avec l'une de l'ensemble ces séquences un pourcentage d'identité d'au moins80 %, de préférence 85 %, 90 %, 95 % et99 %.

Par pourcentage d'identité entre deux séquences d'acide nucléique ou d'acides aminés au sens de la présente invention, on entend désigner un pourcentage de nucléotides ou de résidus d'acides aminés identiques entre les deux séquencesà comparer, obtenu après le meilleur alignement, ce pourcentage étant purement statistique et les différences entre les deux séquences étant réparties au hasard et sur toute leur longueur. Les comparaisons de séquences entre deux séquences d'acide nucléique ou d'acides aminés sont traditionnellement réalisées en comparant ces séquences après les avoir alignées de manière optimale, ladite comparaison étant réalisée par segment ou par fenêtre de comparaison pour identifier et comparer les régions locales de similarité de séquence. L'alignement optimal des séquences pour la comparaison peut être réalisé, outre manuellement, au moyen de l'algorithme d'homologie locale de Smith et Waterman (1981) [Ad. App. Math. 2:482], au moyen de l'algorithme d'homologie locale de Neddleman et Wunsch (1970) [J. Moi. Biol. 48: 443], au moyen de la méthode de recherche de similarité de Pearson et Lipman (1988) [Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85 : 2444], au moyen de logiciels informatiques utilisant ces algorithmes (GAP, BESTFIT, FASTA et TFASTA dans le Wisconsin Genetics Software Package, Genetics Computer Group, 575 Science Dr., Madison, Wl, ou encore par les logiciels de comparaison BLAST N ou BLAST P).

Le pourcentage d'identité entre deux séquences d'acide nucléique ou d'acides aminés est déterminé en comparant ces deux séquences alignées de manière optimale par fenêtre de comparaison dans laquelle la région de la séquence d'acide nucléique ou d'acides aminésà comparer peut comprendre des additions ou des délétions par rapportà la séquence de référence pour un alignement optimal entre ces deux séquences. Le pourcentage d'identité est calculé en déterminant le nombre de positions identiques pour lesquelles le nucléotide ou le résidu d'acide aminé est identique entre les deux séquences, en divisant ce nombre de positions identiques par le nombre total de positions dans la fenêtre de comparaison et en multipliant le résultat obtenu par100 pour obtenir le pourcentage d'identité entre ces deux séquences.

Par exemple, on pourra utiliser le programme BLAST, BLAST 2 sequences , disponible sur le site http://www.ncbi.nlm.nih.gov/gorf/bl2.html, les paramètres utilisés étant ceux donnés par défaut (en particulier pour les paramètres open gap penaltie : 11, et extension gap penaltie : 1 ; la matrice choisie étant par exemple la matrice BLOSUM 62 proposée par le programme), le pourcentage d'identité entre les deux séquencesà comparer étant calculé directement par le programme.

Sous un autre aspect, l'invention concerne aussi l'utilisation d'un détergent de type Zwittergent pour la préparation d'une composition pharmaceutique selon l'invention, caractérisée en ce que ledit antigène ou haptène dédve d'une cellule tumorale.

Parmi les antigènes ou haptènes dérivés d'une cellule tumorale, on préfère ceux immunogènes capables d'induire une réponse immune, de type humoral ou CTL, en particulier destinéeà inhiber ouà diminuer la croissance et/ou la prolifération desdites cellules tumorales.

On peut citer comme exemple mais sans s'y limiter les peptides immunogènes dérivés de cellules de mélanome, du pancréas, de la prostate, de la vessie, du sein ou des poumons. L'antigène tumoral est associé ou spécifique d'une cellule tumorale.Il est notamment choisi parmi tout composé capable de diriger spécifiquement une réponse CTL contre ladite cellule tumorale.

Sous un autre aspect, l'invention concerne également l'utilisation d'un détergent de type Zwittergent pour la préparation d'une composition pharmaceutique selon l'invention, caractérisée en ce que ledit antigène ou haptène est associé, par mélange ou par couplage,à un composé porteur.

De préférence, ledit composé porteur est choisi dans le groupe de peptide comprenant les anatoxines, notamment le toxdide diphtérique (DT) ou le toxoïde tétanique (TT), les protéines membranaires OmpA ou OmpC (OmpA ou OmpC pour Outer membrane protein de typeA ou Outer membrane protein de type Complexe ) ou les protéines de choc thermique ( Heat Shock Protein ou HSP).

Avantageusement, ledit composé porteur est couplé de façon covalente avec l'antigène ou l'haptène.

Selon l'invention, il est possible d'introduire un ou plusieurs éléments de liaison, notamment des acides aminés pour faciliter les réactions de couplage entre le composé porteur et l'antigène ou l'haptène, en particulier lorsqu'ils sont de nature peptidique, le couplage covalent de l'antigène ou l'haptène pouvant être réaliséà l'extrémitéN- ou C-terminale du composé porteur.

Les réactifs bifonctionnels permettant ce couplage seront déterminés en fonction de l'extrémité du composé porteur choisi et de la nature de l'antigène ou l'haptène à coupler. Ces techniques de couplage sont bien connues de l'homme de l'art.

Les conjugués issus d'un couplage de peptides peuvent être également préparés par recombinaison génétique. Le peptide hybride (conjugué) peut en effet être produit par des techniquesd'ADN recombinant par insertion ou additionà la séquenced'ADN codant pour le composé porteur, d'une séquence codant pour le ou les peptides antigènes ou haptènes. Ces techniques de préparation de peptide hybride par recombinaison génétique sont bien connues de l'homme de l'art (cf. par exemple S.C. MAKRIDES, 1996, Microbiologicals Reviews, 60, 3, 512-538).

De préférence, ledit composé porteur est une protéine de membrane OmpA d'enté robacté rie, notamment de Klebsiella pneumoniae, ou l'un de ses fragments capable en particulier d'augmenter la réponse immune.

On préfère tout particulièrement comme composé porteur la protéine P40 de séquence SEQ ID No. 6, correspondantà l'OmpA de Klebsiella pneumoniae, ou une protéine dont la séquence présente après alignement optimal avec la séquence SEQ ID No. 6 un pourcentage d'identité d'au moins80 %.

L'invention concerne également l'utilisation d'un détergent de type Zwittergent pour la préparation d'une composition pharmaceutique selon l'invention, caractérisée en ce que ladite composition pharmaceutique comprend en outre un adjuvant.

De préférence, ledit adjuvant est choisi dans le groupe d'adjuvant comprenant le MPL-A (Mono Phosphoryl LipideA), le Quil-A, l'ISCOM, les CpG, Lcif, laCT (toxine cholérique) ou la LT (LT pour Heat labile enterotoxin entérotoxine labileà la chaleur).

Sous un autre aspect, la présente invention concerne l'utilisation d'un détergent de type Zwittergent pour la préparation d'une composition pharmaceutique selon l'invention, caractérisée en ce que le mélange détergent de type Zwittergent et antigène ou haptène, éventuellement associé au composé porteur, est incorporé dans des vecteurs permettant d'assurer et/ou d'améliorer leur stabilité ou leur biodisponibilité, en particulier les vecteurs choisis dans le groupe des liposomes, des virosomes, des nanosphères ou des microsphères, ou des microcapsules.

La présente invention comprend également l'utilisation d'un détergent de type Zwittergent pour la préparation d'une composition pharmaceutique selon l'invention, caractérisée en ce que ladite composition pharmaceutique comprend en outre une cytokine ou un facteur de croissance, notamment afin de potentialiser la réponse immune induite par l'utilisation d'un détergent de type Zwittergent dans la préparation d'une composition pharmaceutique selon l'invention.

Parmi ces cytokines ou facteurs de croissance, on préfère, mais sans s'y limiter, ceux chosis parmi FIL-2, l'IL-12, l'IL-18 ou le GM-CSF.

La présente invention comprend aussi l'utilisation d'un détergent de type Zwittergent selon l'invention, pour la préparation d'un vaccin destiné au traitement prophylaxique ou thérapeutique des infections virales, bactériennes, ou parasitaires, ou des tumeurs.

Sous un autre aspect, la présente invention a pour objet une composition ou vaccin tel que défini précédemment dans l'une quelconque des utilisations de détergent de type Zwittergent selon la présente invention pour la préparation de composition pharmaceutique, caractérisée en ce que ladite composition pharmaceutique est sous forme solide.

Parmi lesdites formes solides, on préfère notamment la forme de suppositoire ou d'ovule. Sous un autre aspect, l'invention concerne un dispositif adapté pour une administration par voie mucosale, notamment par voie nasale, caractérisé en ce qu'il contient une composition ou un vaccin selon la présente invention, notamment choisi parmi un dispositif aérosol comprenant ou non un agent propulseur.

Les exemples qui suivent sont destinésà illustrer l'invention sans aucunement en limiter la portée.

Dans ces exemples, on se référera aux figures suivantes: Figures1A et 1B: Effet de concentrations croissantes de zwittergent 3-14 sur la réponse humorale svstémique anti-G2Na (figure1A) ou anti-BB (figure 1B), consécutiveà trois immunisations intra nasales (i. n.) séparées de10 jours de G2Na ou de BB, chez la souris BALB/c.

Figure 2: Effet du zwittergent 3-14 sur la réponse humorale systémique anti-G5 consécutiveà trois immunisations i.n. séparées de10 joursà l'aide du conjugué TT- G5, chez la souris BALB/c.

Figures3A et 3B: Effets comparés des Zwittergents 3-14 et3-12 sur la réponse humorale systémique anti-1313 (figure3A) et anti-G2Na (figure 3B) consécutiveà 3 immunisations i.n. séparées de10 jours, chez la souris BALB/c.

EXEMPLES Exemple1 : Effet adjuvant du ZW 3-14 envers une protéine administrée par voie nasale.

Les protéines choisies sont d'une part le fragment130-230 de la protéineG du VRS (G2Na de séquence SEQ ID No. 2) et d'autre part un fragment de la protéineG de streptocoque (protéine BS de liaisonà l'albumine). Ces deux protéines sont produites par voie recombinante dansE. coli et administrées respectivementà raison de 40 ou90 pg/dose, par voie intra nasale,à JO, J10 etJ20, chez des souris BALB/c (n=5), en présence de concentrations de zwittergent 3-14 variant de0,5 à 64 fois la CIVIC.

La figure1A montre que l'administration de la protéine G2Na seule par voie intra nasale n'induit aucune réponse systémique de type IgG, quel que soit le nombre d'immunisations. De manière inattendue, avec des concentrations croissantes de Zwittergent 3-14 variant de0,5 à 8 fois la CMC, une faible réponse anti-G2Na est observée après trois immunisations.A une concentration de zwittergent 3-14 équivalenteà 64 fois la CIVIC une réponse anti-G2Na est détectable dès la première immunisation. Cette réponse anticorps augmente significative ment dès la seconde immunisation pour atteindre une valeur de3,8 log,() après trois immunisations.

Des résultats comparables sont observés concernant la protéine SB, protéine de liaisonà l'albumine de mammifère de Streptococcus (figure1 B).

L'ensemble de ces résultats démontre que le Zwittergent 3-14 administré par voie intra nasale se comporte comme un adjuvant de la réponse anticorps systémique pour des protéines antigéniques administrées par voie intra nasale.

Exemple 2: Effet adjuvant du ZW 3-14 envers un peptide conjuguéà une protéine porteuse et administré par voie nasale.

Le peptideG5 (de séquence SEQ ID No. 4) est un épitope B pur issu de la protéineG du VRS, synthétisé chimiquement par une méthode en phase solide,à l'aide d'un synthétiseur Applied Biosystems 433A en utilisant une chimie FIVIOC/tBu. Ce peptide est coupléà la protéine porteuse TT selon la méthode préalablement décrite par Haeuw et ai.,1998 (Eur. J. Biochem., 255, 446-454).

Des souris BALB/c (n=5) sont immunisées3 fois,à 10 jours d'intervalle avec le conjugué TT-G5 à raison de10 pg d'équivalentG5 par souris en présence ou en absence de Zwittergent 3-14.

La figure 2 montre que le peptideG5 non couplé administré seul en présence ou non de zwittergent 3-14 n'induit aucune réponse anticorps ce qui est en parfait accord avec la nature du peptide. LorsqueG5 est coupléà TT, des IgG anti-G5 sont observées après 2 ou3 immunisations. L'addition de zwittergent 3-14 induit une réponse anti-G5 plus précoce, puisqu'elle apparaît dès la première immunisation, et sig n ificative ment plus élevée après 2 ou3 immunisations.

Exemple3 : Comparaison de l'effet adjuvant des ZW 3-14 et ZW 3-12 envers deux antigènes protéiques: BB et G2Na administrés par voie nasale.

Afin de généraliser l'observation faite avec le Zwittergent 3-14, un second détergent zwitterionique ZW 3-12 a été testé comme adjuvant avec les antigènes protéiques BB et G2Na. Pour cela, ces deux antigènes utilisés respectivement aux doses de90 et 40 pg/mI ont été mélangés avec chaque type de détergentà une concentration correspondantà 64 fois la CMC, puis ils ont été administrés par voie intra nasaleà des souris BALB/c.

De manière intéressante, les figures3A et 3B montrent que l'addition de ZVV 3- 14 ou de ZW 3-12 augmente significativement la réponse IgG sérique anti-BB ou anti- G2Na, lorsque ces antigènes sont administrés par voie intra nasale. Les deux détergents de type zwittergent donnent des résultats comparables et apparaissent comme des adjuvants efficaces pour leur utilisation par voie nasale.

Claims

REVENDICATIONS 1 . Utilisation d'un détergent de type Zwittergent pour la préparation d'une composition pharmaceutique destinéeà être administrée par voie mucosale pour induire ou améliorer l'immunité d'un mammifère vis-à-vis d'un antigène ou d'un haptène. 2. Utilisation selon la revendication1, caractérisée en ce que ledit détergent de type Zwittergent est un composé de formule générale Cy H2,11-N-(CH3)2-C,,H2.,-SO3- (1) 1 où x représente un entier compris entre1 et5, ety représente un entier compris entre 2 et 20 (extrémités des intervalles comprises). 3. Utilisation selon la revendication1 ou 2, caractérisée en ce que ledit détergent de type Zwittergent est le zwittergent ZW 3-14 (3-(N-tétradécyl-N, N- diméthyl-amino)-propane-1-sulfonate) ou le ZW 3-12 (3-(N-dodécyl-N, N-diméthyl- amino)-propane-1-sullfonate). 4. Utilisation selon l'une des revendications1 à 3, caractérisée en ce que ladite composition pharmaceutique comprend ledit détergent de type Zwittergent mélangé audit antigène ou haptène. 5. Utilisation selon l'une des revendications1 à 4, caractérisée en ce que ledit antigène ou haptène est choisi dans le groupe comprenant les peptides, les polysaccharides, les oligosaccharides et les acides nucléiques. 6. Utilisation selon l'une des revendications1 à 5, caractérisée en ce que ledit antigène ou haptène dérive d'un virus, d'une bactérie ou d'un parasite. 7. Utilisation selon l'une des revendications1 à 6, caractérisée en ce que ledit antigène ou haptène comprend au moins un peptide dérivé de micro-organisme responsable de pathologies des voies aériennes. 8. Utilisation selon la revendication7, caractérisée en ce que ledit micro- organisme est choisi parmi le VRS, le para influenza virus (PIV), l'influenza virus, Phantavirus, les streptocoques, les pneumocoques et les méningocoques. 9. Utilisation selon l'une des revendications1 à 8, caractérisée en ce que ledit antigène ou haptène comprend au moins un peptide dérivé du virus respiratoire syncytial (VRS) humain ou bovin. 10. Utilisation selon la revendication8, caractérisée en ce que J'antigène ou l'haptène comprend au moins un fragment de la protéineG du VRS. 11. Utilisation selon la revendication9, caractérisée en ce que l'antigène ou l'haptène comprend au moins un peptide de séquence SEQ ID No. 2 ou SEQ ID No. 4 ou un peptide présentant après alignement optimal avec l'une de ces séquences un pourcentage d'identité d'au moins80 %. 12. Utilisation selon l'une des revendications1 à 5, caractérisée en ce que ledit antigène ou haptène dérive d'une cellule tumorale. 13. Utilisation selon l'une des revendications1 à 12, caractérisée en ce que ledit antigène ou haptène est associé, par mélange ou par couplage,à un composé porteur. 14. Utilisation selon la revendication13, caractérisée en ce que ledit composé porteur est choisi dans le groupe de peptide comprenant les anatoxines, notamment le toxoïde diphtérique (DT) ou le toxoïde tétanique (TT), les protéines membranaires OmpA ou OmpC ou les protéines de choc thermique. 15. Utilisation selon la revendication 14, caractérisée en ce que ledit composé porteur est une protéine de membrane OmpA d'entérobactérie, notamment de Klebsiella pneumoniae, ou l'un de ses fragments. 16. Utilisation selon l'une des revendications1 à 15, caractérisée en ce que ladite composition pharmaceutique comprend un adjuvant. 17. Utilisation selon la revendication16, caractérisée en ce que ledit adjuvant est choisi dans le groupe d'adjuvant comprenant le IVIPL-A, le Quil-A, VISCOM, les CpGn, Lcif, laCT (choléra toxine) ou la LT (entérotoxine chaleur labile). 18. Utilisation selon l'une des revendications1 à 17, caractérisée en ce que le mélange détergent de type Zwittergent et antigène ou haptène éventuellement associé au composé porteur est incorporé dans des vecteurs choisis dans le groupe des liposomes, des virosomes, des nanosphères ou des microsphères, ou des microcapsules. 19. Utilisation selon l'une des revendications1 à 18, caractérisée en ce que ladite composition pharmaceutique comprend en outre une cytokine ou un facteur de croissance. 20. Utilisation selon l'une des revendications1 à 19, pour la préparation d'un vaccin destiné au traitement prophylaxique ou thérapeutique des infections virales, bactériennes, ou parasitaires. 21. Utilisation selon l'une des revendications1 à 19, pour la préparation d'un vaccin destiné au traitement prophylaxique ou thérapeutique des tumeurs. 22. Composition ou vaccin tel que défini dans l'une quelconque des revendications1 à 21 sous forme solide. 23. Composition ou vaccin selon la revendication 22, sous forme de suppositoire ou d'ovule. 24. Dispositif adapté pour une administration par voie mucosale, caractérisé en ce qu'il contient une composition ou un vaccin tel que défini dans l'une quelconque des revendications1 à 21. 25. Dispositif selon la revendication 24, caractérisé en ce qu'il est choisi parmi un dispositif aérosol comprenant ou non un agent propulseur.