FR2805163A1

FR2805163A1 - USE OF A ZWITTERGENT TYPE DETERGENT FOR THE PREPARATION OF A PHARMACEUTICAL COMPOSITION FOR NASAL ADMINISTRATION

Info

Publication number: FR2805163A1
Application number: FR0002104A
Authority: FR
Inventors: Liliane Goestch; Nathalie Corvaia; Alain Beck; Jean Francois Haeuw
Original assignee: Pierre Fabre Medicament SA
Current assignee: Pierre Fabre Medicament SA
Priority date: 2000-02-21
Filing date: 2000-02-21
Publication date: 2001-08-24
Also published as: AU3572901A; WO2001062240A2; WO2001062240A3

Abstract

The invention concerns the use of a zwitterion-type detergent, in particular ZW 3-14 (N-tetradecyl-N, N-dimethyl-amino)-propane-1-sulphonate), for preparing a pharmaceutical composition for nasal delivery to induce or enhance immunity of a mammal to an antigen or a hapten associated therewith. The invention also concerns the use of said zwiterrion-type detergents in pharmaceutical compositions, in particular, vaccine compositions capable of further containing a carrier and adjuvant compound, for prophylactic and therapeutic treatment of infections or tumours. The invention further concerns said pharmaceutical compositions.

Description

UTILISATION D'UN DETERGENT DE TYPE ZWITTERGENT POURLA PREPARATION D'UNE COMPOSITION PHARMACEUTIQUE DESTINEE A ETRE ADMINISTREE PAR VOIENASALE La présente invention concerne l'utilisation d'un détergent de type zwittergent, notamment le ZW 3-14 (3-(N-tôtradécyl-N, N-diméthyl-amino)-propane-1-sulfonate), pour la préparation d'une composition pharmaceutique destinéeà être administrée par voie nasale pour induire ou améliorer l'immunité d'un mammifère vis-à-vis d'un antigène ou d'un haptène qui lui est associé. L'invention comprend également l'utilisation de tels zwittergents dans des compositions pharmaceutiques, notamment vaccinales pouvant contenir en outre un composé porteur et un adjuvant, pour le traitement prophylactique et thérapeutique des infections ou des tumeurs. Lesdites compositions pharmaceutiques sont également comprises dans la présente invention. USE OF <DETERGENT OF ZWITTERGENT TYPE FOR THE PREPARATION OF A PHARMACEUTICAL COMPOSITION A The present invention relates to the use of a zwittergent-type detergent, especially ZW 3-14 (3- (N-tetradecyl-N, N-dimethyl) amino) -propane-1-sulfonate), for the preparation of a pharmaceutical composition intended to be administered nasally to induce or ameliorate the immunity of a mammal vis-à-vis an antigen or hapten associated with it. The invention also comprises the use of such zwittergents in pharmaceutical compositions, in particular vaccine compositions which may also contain a carrier compound and an adjuvant, for the prophylactic and therapeutic treatment of infections or tumors. Said pharmaceutical compositions are also included in the present invention.

Les nouvelles approches vaccinales soulignent l'importance de l'utilisation de protéines sous unitaires, de peptides ou de polysaccharides pour l'immunisation. L'avantage de ces approches mettant en jeu des protéines purifiées est l'élimination de composés responsables d'effets indésirables. Par ailleurs, ces antigènes pourront être sélectionnés sur la base de l'effet immunologique recherché comme par exemple l'induction de CTL (Lymphocytes T Cytotoxiques) ou au contraire la génération d'une forte réponse de type humoral. Cependant, le désavantage de ce type de préparation est que les antigènes possèdent généralement une faible immunogénicité et qu'il est nécessaire de les mélangerà des adjuvants. New vaccine approaches emphasize the importance of using sub-unit proteins, peptides or polysaccharides for immunization. The advantage of these approaches involving purified proteins is the elimination of compounds responsible for adverse effects. Moreover, these antigens may be selected on the basis of the desired immunological effect such as for example the induction of CTL (cytotoxic T cells) or on the contrary the generation of a strong humoral type response. However, the disadvantage of this type of preparation is that the antigens generally have low immunogenicity and that it is necessary to mix them with adjuvants.

Un autre axe de recherche particulièrement étudié en matière de vaccin concerne les voies mucosales. L'immunisation par voie mucosale représente en effet un formidable enjeu dans la mesure où la majorité des pathogènes initient une infection en interagissant avec les muqueuses de l'hôte et qu'après colonisation de la muqueuse, certains micro-organismes génèrent une maladie par le biais d'une sécrétion de facteurs toxiques alors que d'autres pénètrent les tissus de l'hôte pour générer des maladies systémiques. Les défenses mucosales sont par conséquent très importantes dans le contrôle de l'infection et le déroulement de la maladie. Another area of research particularly studied in vaccine is the mucosal pathways. In fact, mucosal immunization represents a formidable challenge since the majority of pathogens initiate an infection by interacting with the mucosa of the host and after colonization of the mucosa, certain microorganisms generate a disease by the through the secretion of toxic factors while others penetrate the host tissues to generate systemic diseases. Mucosal defenses are therefore very important in the control of infection and the course of the disease.

La vaccination par voie mucosale et plus particulièrement l'immunisation par voie nasale présentent plusieurs avantages par rapportà la vaccination systémique. Tout d'abord, les immunisations par voie mucosale induisent la production d'IgA spécifiques directement au site de l'infection. Ces anticorps peuvent inhiber l'attachement des pathogènesà la muqueuse et la colonisation de celle ci. Par ailleurs, en plus de la réponse locale, une immunisation par voie muqueuse peut stimuler une réponse systémique de type IgG qui représentera une seconde barrière contre l'invasion des tissus par le micro-organisme pathogène. Enfin, d'un point de vue pratique, l'administration d'un vaccin par voie nasale est plus aisée qu'une injection par voie systémique. Mucosal vaccination and more particularly nasal immunization have several advantages over systemic vaccination . First, mucosal immunizations induce the production of specific IgA directly at the site of the infection. These antibodies can inhibit attachment of pathogens to the mucosa and colonization of mucosa. Furthermore, in addition to the local response, mucosal immunization may stimulate an IgG-like systemic response that will represent a second barrier against tissue invasion by the pathogenic microorganism. Finally, from a practical point of view, the administration of a vaccine nasally is easier than a systemic injection.

L'utilisation de vaccin par voie orale ou par voie nasale aurait une grande influence sur l'éradication de germes pathogènes. En effet, toute modification d'un vaccin lui permettant d'être utilisé avec une plus grande flexibilité (thermostabilité, distribution sans seringue,... ) aurait pour conséquence une vaccination plus efficace et plus étendue. D'autre part, l'immunisation par les voies muqueuses permet d'induire une immunité locale constituant la première baffière à l'invasion par un micro- organisme. The use of oral or nasal vaccine would have a great influence on the eradication of pathogenic germs. Indeed, any modification of a vaccine allowing it to be used with greater flexibility (thermostability, distribution without syringe, ...) would result in a more effective and more widespread vaccination. On the other hand, mucosal immunization induces local immunity constituting the first invasion of a microorganism.

Des approches de vaccination par voie nasale ontdéjà été décriîtes dans la littérature. Nasal vaccination approaches have already been reported in the literature.

Des essais ont ainsi été effectués sur des administrations mucosales de la PspA qui correspondà la protéine de surfaceA de Pneumocoque (BhIes D.E., brevet EP 0 682 950), sur les filaments d'hémaglutinine (CapronA., brevet FR 2718 750 ; Kimura A., brevet EP 0 471177 ; Shahin R.D., brevetUS 7532327), sur un fragment de la toxine tétanique (Dougan G., brevet WO 93/21950), sur la choléra toxin B (CTB). Tests have thus been carried out on mucosal administrations of PspA which corresponds to the surface protein A of Pneumococcus (BhIes DE, Patent EP 0 682 950). , on haemagglutinin filaments (Capron A., Patent FR 2 718,750; Kimura A., EP Patent 0 471 177; Shahin RD, patent US 7532327), on a fragment of tetanus toxin (Dougan G., patent WO 93/21950), on cholera toxin B (CTB).

Une protéine de la membrane externe de Neisseria meningitidis est utilisée, mélangéeà l'haptène en tant qu'adjuvant pour une immunisation par voie nasale (Van de Verg L.L., Infection and Immunity, 1996, 64:5263-5268). A protein from the outer membrane of Neisseria meningitidis is used, mixed with the hapten as an adjuvant for nasal immunization (Van de Verg LL, Infection and Immunity, 1996). 64: 5263-5268).

On peut encore citer la demande internationale de brevet déposée sous le No. PCT/FR 99/00703 le26 mars1997 décrivant l'utilisation de la protéine OmpA de Klebsiella pneumoniae pour la préparation de vaccins administrables par voie nasale, notamment pour la prévention ou le traitement des infections par le virus syncytial respiratoire (VRS). The international patent application filed under No. PCT / FR 99/00703 26 March 1997 describing the use of OmpA protein of Klebsiella pneumoniae for the preparation of nasally administrable vaccines, in particular for the prevention or treatment of respiratory syncytial virus (RSV) infections.

Cependant, une limitation du développement de vaccins sous unitaires par voie mucosale est l'absence d'adjuvants muqueux, dépourvus de toxicité et permettant la génération ou l'amplification d'une réponse immunitaire. Deux puissantes entérotoxines, la choléra toxine(CT) et la heat-labile enterotoxin (LT) d'E. coli sont connues pour être de puissants adjuvants muqueux, cependant, ils ne peuvent être introduits tels quels dans des préparations vaccinales du fait de leur toxicité. Des mutants non toxiques de ces protéines sont en cours d'étude ainsi que diverses formulations parmi lesquelles les liposomes et les microsphères. However, a limitation of the development of subunit vaccines by mucosal route is the absence of mucosal adjuvants, devoid of toxicity and allowing the generation or amplification of an immune response. Two potent enterotoxins, cholera toxin (CT) and the heat-labile enterotoxin (LT) of E. coli. coli are known to be potent mucosal adjuvants, however, they can not be introduced as such into vaccine preparations because of their toxicity. Non-toxic mutants of these proteins are being studied as well as various formulations among which liposomes and microspheres.

Il est connu que les détergents sont indispensablesà la solubilisation de nombreuses protéines, et notamment les protéines issues de membranes, et que ces complexes protéines/détergents qui forment des micelles peuvent être utilisés comme immunogènes par voie systémique dans des protocoles expérimentaux (Mukhlis et al., 1984, Vaccine 2,199-203 ; Playfair J. H. L. et al.,1986, Parasite Immunol. 8, 409-414). Il est connu que les Zwittergent peuvent potentialiser l'effet adjuvant de l'hydroxyde d'aluminium par voie systémique (Teerling T. et al.,1987, Vaccine,5 : 307-314). Un brevet européen revendique l'utilisation d'une préparation comprenant un antigène protéique ou polysaccharidique comme vaccin par voie systémique (EP 0 182 401). Mais il n'a jamais été démontré que les détergents de type Zwittergent peuvent être adjuvants des voies nasales. It is known that detergents are indispensable to the solubilization of many proteins, and in particular proteins derived from membranes, and that these protein / detergent complexes that form micelles can be used as systemic immunogens in experimental protocols (Mukhlis et al., 1984, Vaccine 2, 199-203; Playfair J. HL et al., 1986, Parasite Immunol. 8, 409-414). It is known that Zwittergent can potentiate the adjuvant effect of aluminum hydroxide systemically (Teerling T. et al., 1987, Vaccine, 5: 307-314). A European patent claims the use of a preparation comprising a protein or polysaccharide antigen as a systemic vaccine (EP 0 182 401). But it has never been shown that Zwittergent-type detergents can be adjuvants of the nasal passages.

Ainsi, il existe un grand besoin de disposer de nouveaux adjuvants, dépourvus de toxicité ou faiblement toxiques et permettant la génération ou l'amplification d'une réponse immunitaire pour la préparation de composition pharmaceutique destinéeà être administrée par voie mucosale, notamment par voie nasale. Thus, there is a great need for new adjuvants, devoid of toxicity or weakly toxic and allowing the generation or amplification of an immune response for the preparation of pharmaceutical composition intended to be administered by mucosal route, especially nasally.

Ceci est justement l'objet de la présente invention. This is precisely the object of the present invention.

La Demanderesse a mis en évidence que les détergents de type Zwittergent, tels que le ZW 3-14, ZW 3-12 ou ses dérivés et analogues, sont, de manière surprenante, capables d'induire ou d'améliorer l'immunité d'un mammifère vis-à-vis d'un antigène ou d'un haptène lorsque lesdits détergents sont administrés par voie mucosale, notamment par voie nasale. The Applicant has shown that Zwittergent-type detergents, such as ZW 3-14, ZW 3-12 or its derivatives and the like, are, surprisingly, capable of inducing or to improve the immunity of a mammal vis-à-vis an antigen or hapten when said detergents are administered mucosally, especially nasally.

Ainsi, la présente invention concerne l'utilisation d'un détergent de type Zwittergent pour la préparation d'une composition pharmaceutique destinéeà être administrée par voie mucosale, de préférence par voie nasale, pour induire ou améliorer l'immunité d'un mammifère vis-à-vis d'un antigène ou d'un haptène. Thus, the present invention relates to the use of a Zwittergent-type detergent for the preparation of a pharmaceutical composition intended to be administered mucosally, preferably nasally, to induce or ameliorate immunity of a mammal to an antigen or hapten.

Dans la présente description, on entend désigner par voie mucosale , la voie nasale , la voie orale, rectale ou vaginale. In the present description, the term "mucosal" means the nasal route, the oral, rectal or vaginal route.

Par détergent de type Zwittergent , on entend désigner dans la présente description les molécules qui de manière générale contiennentà la fois une fonction anionique et cationique. Comme exemple de détergent zwitternionique ou zwittergent, on peut citer les zwittergents indiqués dans le brevetUS No. 4,287,080 à la colonne 4, dans le brevetUS No. 4,557,853 ou encore les sources commerciales de tels détergents que l'on peut trouver dans McCutcheon's Emulsifiers and Detergents, North American Edition, 1984, MC Publishing Company. Zwittergent-type detergent is understood to mean, in the present description, molecules which generally contain at both an anionic and cationic function. As an example of zwitterionic or zwitterentic detergent, mention may be made of the zwittergents indicated in US Pat. No. 4,287,080 to column 4 in the US patent. No. 4,557,853 or the commercial sources of such detergents which can be found in McCutcheon's Emulsifiers and Detergents, North American Edition, 1984, MC Publishing Company.

Comme zwittergent, on préfère en particulier les zwittergents de formule générale(1) : Cy H2y-1-N+(CH3)2-C.H2x-SO3- où x représente un entier compris entre1 et5, ety représente un entier compris entre 2 et 20. Especially preferred are zwittergents of the general formula (1): ## STR2 ## wherein x represents an integer between 1 and 5, and y represents an integer between 2 and 20.

De manière plus préférée, ledit détergent de type zwittergent est le zwittergent ZW 3-14 (3-(N-tétradécyl-N, N-diméthyl-amino)-propane-1-suifonate), aussi appelé sulfobêtaïne SB14 ou le ZW 3-12 (3-(N-dodécyl-N, N-diméthyl-amino)-propane-1- sullfonate. More preferably, said zwittergent-type detergent is zwittergent ZW 3-14 (3- (N-tetradecyl-N, N-dimethylamino) -propane-1-sulfonate), also called sulfobetaine SB14 or ZW <B 3-12 (3- (N-dodecyl-N, N-dimethylamino) propane-1-sulfonate.

De manière générale, l'homme de l'art saura adapter la concentration dudit détergent de type Zwittergent utilisé, en fonction de sa concentration micellaire critique spécifique, de la nature et de la concentration des autres composés contenus dans la composition pharmaceutique, en particulier de la nature et de la concentration de l'antigène ou haptène choisi, et des éventuels adjuvants qui pourront être également incorporés dans ladite composition. In general, one skilled in the art will be able to adapt the concentration of said Zwittergent type detergent used, depending on its specific critical micelle concentration, the nature and concentration of the other compounds contained in the pharmaceutical composition, in particular the nature and concentration of the selected antigen or hapten, and any adjuvants which may also be incorporated into said composition.

De manière avantageuse, ledit détergent de type Zwittergent pour la préparation d'une composition pharmaceutique selon l'invention està une concentration supérieureà 0,1 fois sa concentration micellaire critique (CMC), de préférence comprise entre0,5 et 64 fois sa CMC, de manière très préféréeà une concentration entre0,5 et8 fois sa CMC. Advantageously, said Zwittergent-type detergent for the preparation of a pharmaceutical composition according to the invention is at a concentration greater than at 0.1 times its critical micelle concentration ( CMC), preferably between 0.5 and 64 times its CMC, very preferably to a concentration between 0.5 and 8 times his CMC.

La présente invention comprend également l'utilisation d'un détergent de type Zwittergent pour la préparation d'une composition pharmaceutique selon l'invention, caractérisée en ce que ladite composition pharmaceutique comprend ledit détergent de type Zwittergent mélangé audit antigène ou haptène. The present invention also comprises the use of a Zwittergent type detergent for the preparation of a pharmaceutical composition according to the invention, characterized in that said pharmaceutical composition comprises said Zwittergent type detergent mixed with said antigen or hapten.

De préférence, ledit antigène ou haptène est choisi dans le groupe comprenant les peptides, les glycopeptides, les polysaccharides, les oligosaccharides et les acides nucléiques. Preferably, said antigen or hapten is selected from the group consisting of peptides, glycopeptides, polysaccharides, oligosaccharides and nucleic acids.

Par le terme peptide , on entend également désigner une protéine ou un polypeptide, ces trois termes étant utilisés indifféremment. The term "peptide" is also intended to denote a protein or a polypeptide, these three terms being used interchangeably.

De préférence, la présente invention concerne l'utilisation d'un détergent de type Zwittergent pour la préparation d'une composition pharmaceutique selon l'invention, caractérisée en ce que ledit antigène ou haptène dérive d'un micro- organisme tel que d'un virus, d'une bactérie ou d'un parasite. L'antigène ou l'haptène selon l'invention comprendra au moins un fragment dudit micro-organisme, tel qu'un fragment connu pour contenir un épitope antigénique, ou que l'homme de l'art saura déterminer pour sa capacitéà conférer l'immunité recherchée par des techniques standards telles que celles décrites dans les exemples ci-après. Preferably, the present invention relates to the use of a Zwittergent-type detergent for the preparation of a pharmaceutical composition according to the invention, characterized in that said antigen or hapten is derived from a microorganism such as a virus, a bacterium or a parasite. The antigen or hapten according to the invention will comprise at least one fragment of said microorganism, such as a fragment known to contain an antigenic epitope, or which one skilled in the art will be able to determine for its capacity to confer the desired immunity by standard techniques such as those described in the examples below.

De préférence, ledit antigène ou haptène est de nature peptidique ou unADN codant pour un tel peptide immunogène. Preferably, said antigen or hapten is peptide in nature or a DNA coding for such an immunogenic peptide.

De préférence, la présente invention concerne l'utilisation d'un détergent de type Zwittergent pour la préparation d'une composition pharmaceutique selon l'invention, caractérisée en ce que ledit antigène ou haptène comprend au moins un peptide dérivé de micro-organisme responsable de pathologies des voies aériennes, en particulier choisi parmi le VRS, le para influenza virus (PIV), l'influenza virus, l'hantavirus, les streptocoques, les pneumocoques et les méningocoques. Preferably, the present invention relates to the use of a Zwittergent type detergent for the preparation of a pharmaceutical composition according to the invention, characterized in that said antigen or hapten comprises at least one peptide derived from a microorganism responsible for pathologies of the airways, particularly selected from RSV, para influenza virus (PIV), influenza virus, hantavirus, streptococci, pneumococci and meningococci.

De manière préférée, ledit antigène ou haptène comprend au moins un peptide dérivé du virus respiratoire syncytial (VRS) humain, de typeA ou B, ou bovin, en particulier un fragment de la protéineG du VRS, tel qu'un peptide choisi parmi ceux identifiés dans la liste des séquences SEQ ID No. 2à SEQ ID No. 74 telle que publiée de la demande internationale de brevet déposée sous le No. PCT/FR 99100703 le26 mars1997, incorporée ici par référence, de manière plus particulière les peptides G2Na et G5a de séquences SEQ ID No. 2 et SEQ ID No. 4 de la présente liste de séquences, ou les peptides présentant après alignement optimal avec l'une de l'ensemble ces séquences un pourcentage d'identité d'au moins80 %, de préférence 85 %, 90 %, 95 % et99 %. Preferably, said antigen or hapten comprises at least one peptide derived from the human respiratory respiratory syncytial virus (RSV), of the type A or B, or bovine, in particular a fragment of the protein G Of the RSV, such as a peptide selected from those identified in SEQ ID No. 2 to SEQ ID No. 74 as published in the international patent application filed under No. PCT / FR 99100703 on 26 March 1997, incorporated herein by reference, more particularly the peptides G2Na and G5a SEQ ID No. 2 and SEQ ID No. 4 of the present sequence listing, or the peptides having after optimal alignment with one of all these sequences a percentage of identity of at least 80%, preferably 85%, 90%, 95% and 99%. B>

Par pourcentage d'identité entre deux séquences d'acide nucléique ou d'acides aminés au sens de la présente invention, on entend désigner un pourcentage de nucléotides ou de résidus d'acides aminés identiques entre les deux séquencesà comparer, obtenu après le meilleur alignement, ce pourcentage étant purement statistique et les différences entre les deux séquences étant réparties au hasard et sur toute leur longueur. Les comparaisons de séquences entre deux séquences d'acide nucléique ou d'acides aminés sont traditionnellement réalisées en comparant ces séquences après les avoir alignées de manière optimale, ladite comparaison étant réalisée par segment ou par fenêtre de comparaison pour identifier et comparer les régions locales de similarité de séquence. L'alignement optimal des séquences pour la comparaison peut être réalisé, outre manuellement, au moyen de l'algorithme d'homologie locale de Smith et Waterman (1981) [Ad. App. Math. 2:482], au moyen de l'algorithme d'homologie locale de Neddleman et Wunsch (1970) [J. Moi. Biol. 48: 443], au moyen de la méthode de recherche de similarité de Pearson et Lipman (1988) [Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85 : 2444], au moyen de logiciels informatiques utilisant ces algorithmes (GAP, BESTFIT, FASTA et TFASTA dans le Wisconsin Genetics Software Package, Genetics Computer Group, 575 Science Dr., Madison, Wl, ou encore par les logiciels de comparaison BLAST N ou BLAST P). By percentage identity between two nucleic acid or amino acid sequences in the sense of the present invention, is meant to designate a percentage of nucleotides or identical amino acid residues between the two sequences to compare, obtained after the best alignment, this percentage being purely statistical and the differences between the two sequences being randomly distributed over their entire length. The sequence comparisons between two nucleic acid or amino acid sequences are traditionally performed by comparing these sequences after optimally aligning them, said comparison being made by segment or comparison window to identify and compare the local regions of the sequence. sequence similarity. The optimal alignment of the sequences for comparison can be performed, besides manually, using the local homology algorithm of Smith and Waterman (1981) [Ad. App. Math. 2: 482], using the local homology algorithm of Neddleman and Wunsch (1970) [J. Moi. Biol. 48 : 443], using the similarity search method of Pearson and Lipman (1988) [Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85: 2444], using computer software using these algorithms (GAP, BESTFIT, FASTA and TFASTA in the Wisconsin Genetics Software Package, Genetics Computer Group, 575 Science Dr ., Madison, Wl, or by comparison software BLAST N or BLAST P).

Le pourcentage d'identité entre deux séquences d'acide nucléique ou d'acides aminés est déterminé en comparant ces deux séquences alignées de manière optimale par fenêtre de comparaison dans laquelle la région de la séquence d'acide nucléique ou d'acides aminésà comparer peut comprendre des additions ou des délétions par rapportà la séquence de référence pour un alignement optimal entre ces deux séquences. Le pourcentage d'identité est calculé en déterminant le nombre de positions identiques pour lesquelles le nucléotide ou le résidu d'acide aminé est identique entre les deux séquences, en divisant ce nombre de positions identiques par le nombre total de positions dans la fenêtre de comparaison et en multipliant le résultat obtenu par100 pour obtenir le pourcentage d'identité entre ces deux séquences. The percentage identity between two nucleic acid or amino acid sequences is determined by comparing these two optimally aligned sequences by comparison window in which the region of the nucleic acid or amino acid sequence <B to compare can include additions or deletions relative to the reference sequence for optimal alignment between these two sequences. The percentage of identity is calculated by determining the number of identical positions for which the nucleotide or amino acid residue is identical between the two sequences, by dividing this number of identical positions by the total number of positions in the comparison window. and multiplying the result by 100 to get the percent identity between these two sequences.

Par exemple, on pourra utiliser le programme BLAST, BLAST 2 sequences , disponible sur le site http://www.ncbi.nlm.nih.gov/gorf/bl2.html, les paramètres utilisés étant ceux donnés par défaut (en particulier pour les paramètres open gap penaltie : 11, et extension gap penaltie : 1 ; la matrice choisie étant par exemple la matrice BLOSUM 62 proposée par le programme), le pourcentage d'identité entre les deux séquencesà comparer étant calculé directement par le programme. For example, we can use the BLAST program, BLAST 2 sequences, available on the site http://www.ncbi.nlm.nih.gov/gorf/bl2.html, the parameters used being those given by default (especially for the open gap penalty parameters : 11, and gap penalty extension : 1; the chosen matrix is, for example, the BLOSUM 62 <matrix / B> proposed by the program), the percentage of identity between the two sequences to compare being calculated directly by the program.

Sous un autre aspect, l'invention concerne aussi l'utilisation d'un détergent de type Zwittergent pour la préparation d'une composition pharmaceutique selon l'invention, caractérisée en ce que ledit antigène ou haptène dédve d'une cellule tumorale. In another aspect, the invention also relates to the use of a Zwittergent-type detergent for the preparation of a pharmaceutical composition according to the invention, characterized in that said antigen or hapten deduces from a tumor cell.

Parmi les antigènes ou haptènes dérivés d'une cellule tumorale, on préfère ceux immunogènes capables d'induire une réponse immune, de type humoral ou CTL, en particulier destinéeà inhiber ouà diminuer la croissance et/ou la prolifération desdites cellules tumorales. Among the antigens or haptens derived from a tumor cell, immunogenic ones capable of inducing an immune response, of the humoral or CTL type, in particular intended to inhibit or to to </ B, are preferred. > decrease the growth and / or proliferation of said tumor cells.

On peut citer comme exemple mais sans s'y limiter les peptides immunogènes dérivés de cellules de mélanome, du pancréas, de la prostate, de la vessie, du sein ou des poumons. L'antigène tumoral est associé ou spécifique d'une cellule tumorale.Il est notamment choisi parmi tout composé capable de diriger spécifiquement une réponse CTL contre ladite cellule tumorale. Examples include, but are not limited to, immunogenic peptides derived from melanoma cells, pancreas, prostate, bladder, breast or lungs. The tumor antigen is associated or specific to a tumor cell. It is especially selected from any compound capable of specifically directing a CTL response against said tumor cell.

Sous un autre aspect, l'invention concerne également l'utilisation d'un détergent de type Zwittergent pour la préparation d'une composition pharmaceutique selon l'invention, caractérisée en ce que ledit antigène ou haptène est associé, par mélange ou par couplage,à un composé porteur. In another aspect, the invention also relates to the use of a Zwittergent type detergent for the preparation of a pharmaceutical composition according to the invention, characterized in that said antigen or hapten is associated, by mixing or by coupling, to a carrier compound.

De préférence, ledit composé porteur est choisi dans le groupe de peptide comprenant les anatoxines, notamment le toxdide diphtérique (DT) ou le toxoïde tétanique (TT), les protéines membranaires OmpA ou OmpC (OmpA ou OmpC pour Outer membrane protein de typeA ou Outer membrane protein de type Complexe ) ou les protéines de choc thermique ( Heat Shock Protein ou HSP). Preferably, said carrier compound is selected from the group of peptide comprising toxoids, in particular diphtheria toxoid (DT) or tetanus toxoid (TT), OmpA or OmpC membrane proteins (OmpA or OmpC for Outer membrane protein type A or Outer Membrane Protein Complex type) or heat shock proteins (Heat Shock Protein or HSP).

Avantageusement, ledit composé porteur est couplé de façon covalente avec l'antigène ou l'haptène. Advantageously, said carrier compound is coupled covalently with the antigen or hapten.

Selon l'invention, il est possible d'introduire un ou plusieurs éléments de liaison, notamment des acides aminés pour faciliter les réactions de couplage entre le composé porteur et l'antigène ou l'haptène, en particulier lorsqu'ils sont de nature peptidique, le couplage covalent de l'antigène ou l'haptène pouvant être réaliséà l'extrémitéN- ou C-terminale du composé porteur. According to the invention, it is possible to introduce one or more linking elements, in particular amino acids, to facilitate the coupling reactions between the carrier compound and the antigen or hapten, in particular when they are of peptide nature. , the covalent coupling of the antigen or hapten can be carried out at the N - or C-terminal end of the carrier compound.

Les réactifs bifonctionnels permettant ce couplage seront déterminés en fonction de l'extrémité du composé porteur choisi et de la nature de l'antigène ou l'haptène à coupler. Ces techniques de couplage sont bien connues de l'homme de l'art. The bifunctional reagents allowing this coupling will be determined according to the end of the selected carrier compound and the nature of the antigen or hapten to bind. These coupling techniques are well known to those skilled in the art.

Les conjugués issus d'un couplage de peptides peuvent être également préparés par recombinaison génétique. Le peptide hybride (conjugué) peut en effet être produit par des techniquesd'ADN recombinant par insertion ou additionà la séquenced'ADN codant pour le composé porteur, d'une séquence codant pour le ou les peptides antigènes ou haptènes. Ces techniques de préparation de peptide hybride par recombinaison génétique sont bien connues de l'homme de l'art (cf. par exemple S.C. MAKRIDES, 1996, Microbiologicals Reviews, 60, 3, 512-538). Conjugates derived from peptide coupling can also be prepared by genetic recombination. The hybrid peptide (conjugate) can indeed be produced by recombinant DNA techniques by insertion or addition to the coding DNA sequence. for the carrier compound, a sequence encoding the peptide or antigens or haptens. These recombinant hybrid peptide preparation techniques are well known to those skilled in the art (see for example SC MAKRIDES, 1996, Microbiologicals Reviews, 60, 3, 512-538).

De préférence, ledit composé porteur est une protéine de membrane OmpA d'enté robacté rie, notamment de Klebsiella pneumoniae, ou l'un de ses fragments capable en particulier d'augmenter la réponse immune. Preferably, said carrier compound is an OmpA membrane protein of enteric acid, in particular Klebsiella pneumoniae, or one of its fragments capable in particular of increasing the immune response.

On préfère tout particulièrement comme composé porteur la protéine P40 de séquence SEQ ID No. 6, correspondantà l'OmpA de Klebsiella pneumoniae, ou une protéine dont la séquence présente après alignement optimal avec la séquence SEQ ID No. 6 un pourcentage d'identité d'au moins80 %. Particularly preferred as the carrier compound is the P40 protein of sequence SEQ ID No. 6, corresponding to the Klebsiella pneumoniae OmpA, or a protein whose sequence after optimal alignment with SEQ ID No 6 has an identity percentage of at least 80%.

L'invention concerne également l'utilisation d'un détergent de type Zwittergent pour la préparation d'une composition pharmaceutique selon l'invention, caractérisée en ce que ladite composition pharmaceutique comprend en outre un adjuvant. The invention also relates to the use of a Zwittergent type detergent for the preparation of a pharmaceutical composition according to the invention, characterized in that said pharmaceutical composition further comprises an adjuvant.

De préférence, ledit adjuvant est choisi dans le groupe d'adjuvant comprenant le MPL-A (Mono Phosphoryl LipideA), le Quil-A, l'ISCOM, les CpG, Lcif, laCT (toxine cholérique) ou la LT (LT pour Heat labile enterotoxin entérotoxine labileà la chaleur). Preferably, said adjuvant is selected from the group of adjuvant comprising MPL-A (Monophosphoryl lipid A), Quil-A, ISCOM, CpG, Lcif, Bb CT (cholera toxin) or LT (LT for heat labile enterotoxin enterotoxin to heat).

Sous un autre aspect, la présente invention concerne l'utilisation d'un détergent de type Zwittergent pour la préparation d'une composition pharmaceutique selon l'invention, caractérisée en ce que le mélange détergent de type Zwittergent et antigène ou haptène, éventuellement associé au composé porteur, est incorporé dans des vecteurs permettant d'assurer et/ou d'améliorer leur stabilité ou leur biodisponibilité, en particulier les vecteurs choisis dans le groupe des liposomes, des virosomes, des nanosphères ou des microsphères, ou des microcapsules. In another aspect, the present invention relates to the use of a Zwittergent-type detergent for the preparation of a pharmaceutical composition according to the invention, characterized in that the Zwittergent type detergent mixture and antigen or hapten, optionally combined with carrier compound, is incorporated in vectors to ensure and / or improve their stability or bioavailability, especially the vectors selected from the group of liposomes, virosomes, nanospheres or microspheres, or microcapsules.

La présente invention comprend également l'utilisation d'un détergent de type Zwittergent pour la préparation d'une composition pharmaceutique selon l'invention, caractérisée en ce que ladite composition pharmaceutique comprend en outre une cytokine ou un facteur de croissance, notamment afin de potentialiser la réponse immune induite par l'utilisation d'un détergent de type Zwittergent dans la préparation d'une composition pharmaceutique selon l'invention. The present invention also comprises the use of a Zwittergent-type detergent for the preparation of a pharmaceutical composition according to the invention, characterized in that the said pharmaceutical composition further comprises a cytokine or a growth factor, in particular in order to potentiate the immune response induced by the use of a Zwittergent type detergent in the preparation of a pharmaceutical composition according to the invention.

Parmi ces cytokines ou facteurs de croissance, on préfère, mais sans s'y limiter, ceux chosis parmi FIL-2, l'IL-12, l'IL-18 ou le GM-CSF. Among these cytokines or growth factors, those among the FIL-2, IL-12, IL-18 or GM-CSF are preferred, but not limited to.

La présente invention comprend aussi l'utilisation d'un détergent de type Zwittergent selon l'invention, pour la préparation d'un vaccin destiné au traitement prophylaxique ou thérapeutique des infections virales, bactériennes, ou parasitaires, ou des tumeurs. The present invention also comprises the use of a Zwittergent-type detergent according to the invention, for the preparation of a vaccine intended for the prophylactic or therapeutic treatment of viral, bacterial, or parasitic infections, or tumors.

Sous un autre aspect, la présente invention a pour objet une composition ou vaccin tel que défini précédemment dans l'une quelconque des utilisations de détergent de type Zwittergent selon la présente invention pour la préparation de composition pharmaceutique, caractérisée en ce que ladite composition pharmaceutique est sous forme solide. In another aspect, the present invention relates to a composition or vaccine as defined above in any one of the Zwittergent type detergent uses according to the present invention for the preparation of pharmaceutical composition, characterized in that said pharmaceutical composition is in solid form.

Parmi lesdites formes solides, on préfère notamment la forme de suppositoire ou d'ovule. Sous un autre aspect, l'invention concerne un dispositif adapté pour une administration par voie mucosale, notamment par voie nasale, caractérisé en ce qu'il contient une composition ou un vaccin selon la présente invention, notamment choisi parmi un dispositif aérosol comprenant ou non un agent propulseur. Among said solid forms, the form of suppository or egg is particularly preferred. In another aspect, the invention relates to a device adapted for mucosal administration, in particular via the nasal route, characterized in that it contains a composition or a vaccine according to the present invention, in particular chosen from an aerosol device comprising or not a propellant.

Les exemples qui suivent sont destinésà illustrer l'invention sans aucunement en limiter la portée. The following examples are intended to illustrate the invention without in any way limiting its scope.

Dans ces exemples, on se référera aux figures suivantes: Figures1A et 1B: Effet de concentrations croissantes de zwittergent 3-14 sur la réponse humorale svstémique anti-G2Na (figure1A) ou anti-BB (figure 1B), consécutiveà trois immunisations intra nasales (i. n.) séparées de10 jours de G2Na ou de BB, chez la souris BALB/c. In these examples, reference is made to the following figures: Figures 1A and 1B : Effect of increasing concentrations of zwittergent 3-14 on the humoral response svstemic anti-G2Na (Figure 1A) or anti-BB (Figure 1B), consecutive to three intranasal immunizations (in) separated by 10 days of G2Na or BB, in BALB / c mice.

Figure 2: Effet du zwittergent 3-14 sur la réponse humorale systémique anti-G5 consécutiveà trois immunisations i.n. séparées de10 joursà l'aide du conjugué TT- G5, chez la souris BALB/c. Figure 2 : Effect of zwittergent 3-14 on the subsequent G5 anti-G5 systemic humoral response at three i.n. separated by 10 days to using the TT-G5 conjugate, in the BALB / c mouse.

Figures3A et 3B: Effets comparés des Zwittergents 3-14 et3-12 sur la réponse humorale systémique anti-1313 (figure3A) et anti-G2Na (figure 3B) consécutiveà 3 immunisations i.n. séparées de10 jours, chez la souris BALB/c. Figures 3A and 3B : Compared effects of Zwittergents 3-14 and 3-12 on the anti-1313 systemic humoral response (Figure 3A) and anti-G2Na (Figure 3B) consecutive to 3 immunizations in separated by 10 days, in the BALB / c mouse.

EXEMPLES Exemple1 : Effet adjuvant du ZW 3-14 envers une protéine administrée par voie nasale. EXAMPLES Example 1: Adjuvant effect of ZW 3-14 on a protein administered nasally.

Les protéines choisies sont d'une part le fragment130-230 de la protéineG du VRS (G2Na de séquence SEQ ID No. 2) et d'autre part un fragment de la protéineG de streptocoque (protéine BS de liaisonà l'albumine). Ces deux protéines sont produites par voie recombinante dansE. coli et administrées respectivementà raison de 40 ou90 pg/dose, par voie intra nasale,à JO, J10 etJ20, chez des souris BALB/c (n=5), en présence de concentrations de zwittergent 3-14 variant de0,5 à 64 fois la CIVIC. The proteins chosen are, on the one hand, the 130-230 fragment of the G protein of the RSV (G2Na of sequence SEQ ID No. 2) and on the other hand a fragment of the streptococcal protein G <(BS binding protein to albumin). These two proteins are recombinantly produced in E. and <40> 90 pg, respectively. / dose, intranasally, to OJ, J10 and J20, in BALB / c mice (n = 5), in the presence concentrations of zwittergent 3-14 ranging from 0.5 to 64 times CIVIC.

La figure1A montre que l'administration de la protéine G2Na seule par voie intra nasale n'induit aucune réponse systémique de type IgG, quel que soit le nombre d'immunisations. De manière inattendue, avec des concentrations croissantes de Zwittergent 3-14 variant de0,5 à 8 fois la CMC, une faible réponse anti-G2Na est observée après trois immunisations.A une concentration de zwittergent 3-14 équivalenteà 64 fois la CIVIC une réponse anti-G2Na est détectable dès la première immunisation. Cette réponse anticorps augmente significative ment dès la seconde immunisation pour atteindre une valeur de3,8 log,() après trois immunisations. Figure 1A shows that administration of the G2Na protein alone intranasally induces no IgG-type systemic responses, regardless of the number of immunizations. Unexpectedly, with increasing concentrations of Zwittergent 3-14 varying from 0.5 to 8 times the CMC, a weak anti-G2Na response is observed after three immunizations. A a concentration of zwittergent 3-14 equivalent to 64 times the CIVIC an anti-G2Na response is detectable from the first immunization. This antibody response increases significantly from the second immunization to a value of 3.8 log, () after three immunizations.

Des résultats comparables sont observés concernant la protéine SB, protéine de liaisonà l'albumine de mammifère de Streptococcus (figure1 B). Comparable results are observed for the SB protein, the binding protein to Streptococcus mammalian albumin (Figure 1 B).

L'ensemble de ces résultats démontre que le Zwittergent 3-14 administré par voie intra nasale se comporte comme un adjuvant de la réponse anticorps systémique pour des protéines antigéniques administrées par voie intra nasale. All of these results demonstrate that Zwittergent 3-14 administered intranasally behaves as an adjuvant of the systemic antibody response for antigenic proteins administered intranasally.

Exemple 2: Effet adjuvant du ZW 3-14 envers un peptide conjuguéà une protéine porteuse et administré par voie nasale. Example 2 : Adjuvant Effect of ZW 3-14 to Conjugated Peptide to a Carrier and Nasally Administered Protein

Le peptideG5 (de séquence SEQ ID No. 4) est un épitope B pur issu de la protéineG du VRS, synthétisé chimiquement par une méthode en phase solide,à l'aide d'un synthétiseur Applied Biosystems 433A en utilisant une chimie FIVIOC/tBu. Ce peptide est coupléà la protéine porteuse TT selon la méthode préalablement décrite par Haeuw et ai.,1998 (Eur. J. Biochem., 255, 446-454). The G5 peptide (SEQ ID # 4) is a pure B epitope derived from the G protein of RSV, chemically synthesized by a Solid phase method, to using an Applied Biosystems 433A synthesizer using FIVIOC / tBu chemistry. This peptide is coupled to the carrier protein TT according to the method previously described by Haeuw et al., 1998, (Eur. J. Biochem. 255, 446-454).

Des souris BALB/c (n=5) sont immunisées3 fois,à 10 jours d'intervalle avec le conjugué TT-G5 à raison de10 pg d'équivalentG5 par souris en présence ou en absence de Zwittergent 3-14. BALB / c mice (n = 5) are immunized 3 times, at 10 days apart with the conjugate TT-G5 at because 10 pg equivalent G5 per mouse in the presence or absence of Zwittergent 3-14.

La figure 2 montre que le peptideG5 non couplé administré seul en présence ou non de zwittergent 3-14 n'induit aucune réponse anticorps ce qui est en parfait accord avec la nature du peptide. LorsqueG5 est coupléà TT, des IgG anti-G5 sont observées après 2 ou3 immunisations. L'addition de zwittergent 3-14 induit une réponse anti-G5 plus précoce, puisqu'elle apparaît dès la première immunisation, et sig n ificative ment plus élevée après 2 ou3 immunisations. Figure 2 shows that the non-coupled peptide G5 administered alone in the presence or absence of zwittergent 3-14 induces no antibody response which is in perfect agreement with the nature of the peptide. When G5 is coupled to TT, anti-G5 IgGs are observed after 2 or 3 immunizations. The addition of zwittergent 3-14 induces an earlier anti-G5 response, since it appears from the first immunization, and significantly higher after 2 or <3> immunizations.

Exemple3 : Comparaison de l'effet adjuvant des ZW 3-14 et ZW 3-12 envers deux antigènes protéiques: BB et G2Na administrés par voie nasale. Example 3: Comparison of the Adjuvant Effect of ZW 3-14 and ZW 3-12 on Two Protein Antigens : BB and G2Na Administered by nasal route.

Afin de généraliser l'observation faite avec le Zwittergent 3-14, un second détergent zwitterionique ZW 3-12 a été testé comme adjuvant avec les antigènes protéiques BB et G2Na. Pour cela, ces deux antigènes utilisés respectivement aux doses de90 et 40 pg/mI ont été mélangés avec chaque type de détergentà une concentration correspondantà 64 fois la CMC, puis ils ont été administrés par voie intra nasaleà des souris BALB/c. In order to generalize the observation made with Zwittergent 3-14, a second zwitterionic detergent ZW 3-12 was tested as adjuvant with the BB and G2Na protein antigens. For this purpose, these two antigens used respectively at the doses of 90 and 40 μg / mI were mixed with each type of detergent at a corresponding concentration at > 64 times the CMC, then they were administered intranasally to BALB / c mice.

De manière intéressante, les figures3A et 3B montrent que l'addition de ZVV 3- 14 ou de ZW 3-12 augmente significativement la réponse IgG sérique anti-BB ou anti- G2Na, lorsque ces antigènes sont administrés par voie intra nasale. Les deux détergents de type zwittergent donnent des résultats comparables et apparaissent comme des adjuvants efficaces pour leur utilisation par voie nasale.Interestingly, Figures 3A and 3B show that the addition of ZVV 3 - 14 or ZW 3-12 significantly increases response Serum IgG anti-BB or anti-G2Na, when these antigens are administered intranasally. Both zwittergent detergents give comparable results and appear as effective adjuvants for their nasal use.

Claims

CLAIMS 1. Use of a Zwittergent type detergent for the preparation of a pharmaceutical composition for to be administered mucosally to induce or enhance a mammal's immunity to an antigen or hapten. 2. The use as claimed in claim 1, wherein said Zwittergent-type detergent is a compound of the general formula Cy H2,11-N- (CH3) 2-C4H2 .- SO3 - (1) 1 where x is an integer between 1 and 5, and y represents an integer between 2 and 20 (ends of intervals included). 3. Use according to claim 1, wherein said Zwittergent-type detergent is zwittergent ZW 3-14 (3- (N-tetradecyl) -N, N-dimethylamino) -propane-1-sulfonate) or ZW B 3-12 (3- (N-dodecyl-N, N-dimethylamino) propane-1-sulfonate). 4. Use according to one of claims 1 to 3, characterized in that said pharmaceutical composition comprises said Zwittergent type detergent mixed with said antigen or hapten. 5. Use according to one of claims 1 to 4, characterized in that said antigen or hapten is selected from the group consisting of peptides, polysaccharides, oligosaccharides and nucleic acids. 6. Use according to one of claims 1 to 5, characterized in that said antigen or hapten is derived from a virus, a bacterium or a parasite . 7. Use according to one of claims 1 to 6, characterized in that said antigen or hapten comprises at least one peptide derived from microorganism responsible pathologies pathways airline. 8. Use according to claim 7, characterized in that said microorganism is selected from RSV, para influenza virus (PIV), influenza virus, Phantavirus , streptococci, pneumococci and meningococci. 9. Use according to one of claims 1 to 8, characterized in that said antigen or hapten comprises at least one peptide derived from human respiratory syncytial virus (RSV) or cattle. 10. The use according to claim 8, wherein the antigen or hapten comprises at least one fragment of the G protein. VRS. 11. The use as claimed in claim 9, wherein the antigen or hapten comprises at least one SEQ ID sequence peptide. 2 or SEQ ID No. 4 or a peptide having, after optimal alignment with one of these sequences, a percentage of identity of at least 80%. Use according to one of claims 1 to 5, characterized in that said antigen or hapten is derived from a tumor cell. 13. Use according to one of claims 1 to 12, characterized in that said antigen or hapten is associated, by mixing or coupling, to a carrier compound. 14. Use according to claim 13, characterized in that said carrier compound is chosen from the peptide group comprising the toxoids, in particular diphtheria toxoid (DT) or tetanus toxoid (TT), proteins OmpA or OmpC membrane or heat shock proteins. 15. Use according to claim 14, characterized in that said carrier compound is an enterobacterium OmpA membrane protein, in particular Klebsiella pneumoniae, or one of its fragments. 16. Use according to one of claims 1 to 15, characterized in that said pharmaceutical composition comprises an adjuvant. 17. Use according to claim 16, wherein said adjuvant is selected from the adjuvant group comprising IVIPL-A, Quil-A, VISCOM, CpGn, Lcif, CT (cholera toxin) or LT (enterotoxin labile heat). 18. Use according to one of claims 1 to 17, characterized in that the detergent mixture Zwittergent type and antigen or hapten optionally associated with the carrier compound is incorporated into vectors selected from the group of liposomes, virosomes, nanospheres or microspheres, or microcapsules. 19. Use according to one of claims 1 to 18, characterized in that said pharmaceutical composition further comprises a cytokine or a growth factor. 20. Use according to one of claims 1 to 19, for the preparation of a vaccine for the prophylactic or therapeutic treatment of viral, bacterial, or parasitic infections. 21. Use according to one of claims 1 to 19, for the preparation of a vaccine for the prophylactic or therapeutic treatment of tumors. 22. A composition or vaccine as defined in any one of claims 1 to 21 in solid form. 23. The composition or vaccine of claim 22, in the form of suppository or egg. 24. Device adapted for mucosal administration, characterized in that it contains a composition or a vaccine as defined in any one of claims 1 to 21. 25. Device according to claim 24, characterized in that it is selected from an aerosol device comprising or not a propellant.