JPH0840927A - 肺炎球菌抗原の経粘膜投与方法 - Google Patents
肺炎球菌抗原の経粘膜投与方法Info
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 免疫化された宿主動物における肺炎球菌によ
るコロニー形成及び全身的感染に対する防御を誘発させ
る手段を提供する。 【構成】 全肺炎球菌殺菌物、肺炎球菌溶菌物、及び分
離精製したＰｓｐＡ並びにこのものの免疫原的断片をコ
レラ毒素Ｂサブユニットとともに経粘膜的に、中でも鼻
内的に投与する。
るコロニー形成及び全身的感染に対する防御を誘発させ
る手段を提供する。 【構成】 全肺炎球菌殺菌物、肺炎球菌溶菌物、及び分
離精製したＰｓｐＡ並びにこのものの免疫原的断片をコ
レラ毒素Ｂサブユニットとともに経粘膜的に、中でも鼻
内的に投与する。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、動物を肺炎球菌の抗原
により粘膜的に免疫化して肺炎球菌のコロニー形成と全
身感染とに対する防御を提供することに関する。
により粘膜的に免疫化して肺炎球菌のコロニー形成と全
身感染とに対する防御を提供することに関する。
【０００２】
【従来の技術】原出願は、自身が１９９１年２月１５日
付け出願の米国特許出願第０７／６５６，７７３号（現
在放棄されている）の部分継続出願である、自身が１９
９２年２月１２日付け出願の、現に出願中の米国特許出
願第０７／８３５，６９９号の部分継続出願である、自
身が１９９３年４月２０日付け出願の、現に出願中の米
国特許出願第０８／０４８，８９６号の部分継続出願で
ある、自身が１９９４年５月２０日付け出願の、現に出
願中の米国特許出願第０８／２４６，６３６号の部分継
続出願である、１９９４年９月３０日付け出願の、現に
出願中の米国特許出願第０８／３１２，９４９号の部分
継続出願である。これら関連の出願の開示はここに参考
文献として採用する。
付け出願の米国特許出願第０７／６５６，７７３号（現
在放棄されている）の部分継続出願である、自身が１９
９２年２月１２日付け出願の、現に出願中の米国特許出
願第０７／８３５，６９９号の部分継続出願である、自
身が１９９３年４月２０日付け出願の、現に出願中の米
国特許出願第０８／０４８，８９６号の部分継続出願で
ある、自身が１９９４年５月２０日付け出願の、現に出
願中の米国特許出願第０８／２４６，６３６号の部分継
続出願である、１９９４年９月３０日付け出願の、現に
出願中の米国特許出願第０８／３１２，９４９号の部分
継続出願である。これら関連の出願の開示はここに参考
文献として採用する。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃ
ｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅは他の殆どいかなる病原
体よりも致命的な感染症を世界中で引き起こしている
（本願末尾にあげる参考文献のリストの１及び２）。米
国においてはＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅによりもたらさ
れる死亡者は数においてエイズによりもたらされるそれ
と競合する（参考文献１）。米国においては最も致命的
な肺炎球菌感染症は年齢６５才以上の人々において起こ
っており、その際Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅが地域社会
に広まる肺炎の最も一般的な原因である。先進国におい
ては殆どの肺炎球菌による死亡は成人において起こって
いるか、又は鎌状血球症のそれを含む免疫欠陥性患者に
おいて起こっている。後進国では肺炎球菌感染症が５才
以下の子供における死亡原因の最も大きな１つである
（参考文献３、４、５及び６）。肺炎球菌類の間での多
重抗生物質抵抗性の頻度及び貧困国における薬剤処置の
極端に高額な費用のために肺炎球菌疾病の制御について
の現在の見通しは懐疑的である（参考文献７、８及び
９）。
ｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅは他の殆どいかなる病原
体よりも致命的な感染症を世界中で引き起こしている
（本願末尾にあげる参考文献のリストの１及び２）。米
国においてはＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅによりもたらさ
れる死亡者は数においてエイズによりもたらされるそれ
と競合する（参考文献１）。米国においては最も致命的
な肺炎球菌感染症は年齢６５才以上の人々において起こ
っており、その際Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅが地域社会
に広まる肺炎の最も一般的な原因である。先進国におい
ては殆どの肺炎球菌による死亡は成人において起こって
いるか、又は鎌状血球症のそれを含む免疫欠陥性患者に
おいて起こっている。後進国では肺炎球菌感染症が５才
以下の子供における死亡原因の最も大きな１つである
（参考文献３、４、５及び６）。肺炎球菌類の間での多
重抗生物質抵抗性の頻度及び貧困国における薬剤処置の
極端に高額な費用のために肺炎球菌疾病の制御について
の現在の見通しは懐疑的である（参考文献７、８及び
９）。
【０００４】人に感染する肺炎球菌の保菌源はまず第１
に人の鼻咽頭保菌によって維持される。人はエロゾルに
より、又は直接の感染によって肺炎球菌に感染する。若
年の子供及び成人の５０％以上がコロニー形成を有して
いる。殆どの場合にこのコロニー形成は見かけ上の感染
症をもたらさない（参考文献１０、１１及び１２）。種
々の突発菌株の研究によって、高度に劇毒性の菌株でさ
え疾病を生ずることなくコロニー形成され得ることが示
唆されている（参考文献１３、１４、１５及び１６）。
このような予想は、最近になって、個別のクローンを識
別するための分子プローブを用いて確認された（Ｍ．
Ｊ．Ｃｒａｉｎ：本発明者等の１人との個人的通信によ
る）。しかしながら若干の人々においては鼻咽頭に保持
された生物が症候性副鼻腔炎又は中耳炎を生じ得る。肺
炎球菌を肺の中へ、中でも食物の粒子や粘液とともに吸
い込んだときに、それらは肺炎を引き起こす。このよう
な部位における感染は一般に若干の肺炎球菌を血液の中
へ流入させ、ここでそれらは、中でもその最初の感染源
から多数流入し続けるときは敗血症をもたらし得る。血
液中の肺炎球菌は脳に到達することができ、ここでそれ
らは髄膜炎を起こすことがある。肺炎球菌性髄膜炎はこ
れらのバクテリアによって引き起こされる他の感染症よ
りもあまり一般的ではないけれども、これは特に破壊的
であり、約１０％の患者が死亡し、そして残余の５０％
以上が生涯の神経学的後遺症に悩まされる（参考文献１
７及び１８）。
に人の鼻咽頭保菌によって維持される。人はエロゾルに
より、又は直接の感染によって肺炎球菌に感染する。若
年の子供及び成人の５０％以上がコロニー形成を有して
いる。殆どの場合にこのコロニー形成は見かけ上の感染
症をもたらさない（参考文献１０、１１及び１２）。種
々の突発菌株の研究によって、高度に劇毒性の菌株でさ
え疾病を生ずることなくコロニー形成され得ることが示
唆されている（参考文献１３、１４、１５及び１６）。
このような予想は、最近になって、個別のクローンを識
別するための分子プローブを用いて確認された（Ｍ．
Ｊ．Ｃｒａｉｎ：本発明者等の１人との個人的通信によ
る）。しかしながら若干の人々においては鼻咽頭に保持
された生物が症候性副鼻腔炎又は中耳炎を生じ得る。肺
炎球菌を肺の中へ、中でも食物の粒子や粘液とともに吸
い込んだときに、それらは肺炎を引き起こす。このよう
な部位における感染は一般に若干の肺炎球菌を血液の中
へ流入させ、ここでそれらは、中でもその最初の感染源
から多数流入し続けるときは敗血症をもたらし得る。血
液中の肺炎球菌は脳に到達することができ、ここでそれ
らは髄膜炎を起こすことがある。肺炎球菌性髄膜炎はこ
れらのバクテリアによって引き起こされる他の感染症よ
りもあまり一般的ではないけれども、これは特に破壊的
であり、約１０％の患者が死亡し、そして残余の５０％
以上が生涯の神経学的後遺症に悩まされる（参考文献１
７及び１８）。
【０００５】成人においては、現在の２３価の莢膜性多
糖類ワクチンがそのワクチンの中に含まれている莢膜型
の各種菌株による浸潤性の肺炎球菌疾病に対して約６０
％有効である（参考文献１９及び２０）。
糖類ワクチンがそのワクチンの中に含まれている莢膜型
の各種菌株による浸潤性の肺炎球菌疾病に対して約６０
％有効である（参考文献１９及び２０）。
【０００６】この２３価ワクチンは２才以下の子供に
は、これが殆どの多糖類に対して適当な応答をする能力
がないために無効である（参考文献２１及び２２）。肺
炎球菌類による浸潤性の感染に対して子供及び成人を防
御することのできる改善されたワクチン類はこの疾病の
最も有害な状態を若干軽減させるのに役立つであろう。
しかしながら疾病に対する防御をもたらしたけれども肺
炎球菌保菌率を低下させなかったワクチンは免疫折衷さ
れた人（参考文献２０）及び免疫化されていない人にお
ける疾病をコントロールするとは予想されないであろ
う。そのようなワクチンはまた、適当な抗ワクチン応答
の発現の前の、免疫化された子供における感染率に影響
を及ぼすことも予想されないであろう。
は、これが殆どの多糖類に対して適当な応答をする能力
がないために無効である（参考文献２１及び２２）。肺
炎球菌類による浸潤性の感染に対して子供及び成人を防
御することのできる改善されたワクチン類はこの疾病の
最も有害な状態を若干軽減させるのに役立つであろう。
しかしながら疾病に対する防御をもたらしたけれども肺
炎球菌保菌率を低下させなかったワクチンは免疫折衷さ
れた人（参考文献２０）及び免疫化されていない人にお
ける疾病をコントロールするとは予想されないであろ
う。そのようなワクチンはまた、適当な抗ワクチン応答
の発現の前の、免疫化された子供における感染率に影響
を及ぼすことも予想されないであろう。
【０００７】全てのこのような人々の感染を制御できる
方法は、肺炎球菌の保菌、また従って伝染を防止した
か、又は大きく低下させた免疫のいずれかの形であろう
と考えられる。Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅ
ｎｚａｅのグループｂの多糖類−蛋白質抱合体による若
年の子供の免疫化の場合には、保菌率が約４４％から１
％以下まで低下したことが観測されており（参考文献２
３）、これは付随的な硬免疫の可能な説明であろう（参
考文献２４）。或るワクチンが肺炎球菌によるコロニー
形成を防止することができたとするならば、このような
ワクチンは免疫化された患者において全ての肺炎球菌性
感染症を事実上防止することが予想されるであろう。免
疫化されていない患者でさえも他から肺炎球菌に感染す
るのであるから、保菌を低減させたワクチンは免疫折衷
された、及び免疫されていない患者における感染症を軽
減させるはずである。実際に、積極的な免疫化プログラ
ムは実際に示される保菌者の抗生物質による処置と組み
合わせて人における保菌源を大きく除くことができるで
あろう。しかしながら肺炎球菌を全面的に除くことか不
可能であると考えられ、というのはそれらは実験用齧歯
類において見出されたという多数の報告が存在するから
である（参考文献２５）。これらの肺炎球菌類が人に対
して感染性であるか、人に容易に伝染可能であるか、或
いは野生の齧歯類においてさえ病原性であるかどうかは
知られていない。Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅは環境条件
において自由に生存しない。
方法は、肺炎球菌の保菌、また従って伝染を防止した
か、又は大きく低下させた免疫のいずれかの形であろう
と考えられる。Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅ
ｎｚａｅのグループｂの多糖類−蛋白質抱合体による若
年の子供の免疫化の場合には、保菌率が約４４％から１
％以下まで低下したことが観測されており（参考文献２
３）、これは付随的な硬免疫の可能な説明であろう（参
考文献２４）。或るワクチンが肺炎球菌によるコロニー
形成を防止することができたとするならば、このような
ワクチンは免疫化された患者において全ての肺炎球菌性
感染症を事実上防止することが予想されるであろう。免
疫化されていない患者でさえも他から肺炎球菌に感染す
るのであるから、保菌を低減させたワクチンは免疫折衷
された、及び免疫されていない患者における感染症を軽
減させるはずである。実際に、積極的な免疫化プログラ
ムは実際に示される保菌者の抗生物質による処置と組み
合わせて人における保菌源を大きく除くことができるで
あろう。しかしながら肺炎球菌を全面的に除くことか不
可能であると考えられ、というのはそれらは実験用齧歯
類において見出されたという多数の報告が存在するから
である（参考文献２５）。これらの肺炎球菌類が人に対
して感染性であるか、人に容易に伝染可能であるか、或
いは野生の齧歯類においてさえ病原性であるかどうかは
知られていない。Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅは環境条件
において自由に生存しない。
【０００８】莢膜性多糖類ワクチンによる筋肉内免疫化
は成人における肺炎球菌性敗血症の発病の低下に有効で
あった（参考文献２０）けれども、５４か月までの年齢
の子供における肺炎球菌保菌率に影響を及ぼすという報
告はまだ存在しない。抱合体ワクチンが子供における保
菌率を低下させるかどうかは知られていない。すなわ
ち、鼻咽頭の保菌率を低下させることのできるワクチン
についての研究は非莢膜性の抗原類の検討を含まなけれ
ばならない。保菌に対する免疫はその粘膜表面において
働くことが予想されるので、保菌に対する各種ワクチン
のための抗原を特定するいかなる試みも粘膜免疫応答を
誘発するように設計された免疫化を含むべきである。こ
のような理由から、この明細書の開示は種々の多糖類−
蛋白質抱合体の評価に加えて、肺炎球菌の蛋白質による
鼻内免疫化を対象とする。
は成人における肺炎球菌性敗血症の発病の低下に有効で
あった（参考文献２０）けれども、５４か月までの年齢
の子供における肺炎球菌保菌率に影響を及ぼすという報
告はまだ存在しない。抱合体ワクチンが子供における保
菌率を低下させるかどうかは知られていない。すなわ
ち、鼻咽頭の保菌率を低下させることのできるワクチン
についての研究は非莢膜性の抗原類の検討を含まなけれ
ばならない。保菌に対する免疫はその粘膜表面において
働くことが予想されるので、保菌に対する各種ワクチン
のための抗原を特定するいかなる試みも粘膜免疫応答を
誘発するように設計された免疫化を含むべきである。こ
のような理由から、この明細書の開示は種々の多糖類−
蛋白質抱合体の評価に加えて、肺炎球菌の蛋白質による
鼻内免疫化を対象とする。
【０００９】
【課題を解決するための手段】本発明者等は、本発明に
従い、肺炎球菌表面蛋白質Ａ（ＰｓｐＡ）又はこのもの
の免疫原性断片を経粘膜投与すること、中でも鼻内投与
することにより、肺炎球菌のミロニー形成及び全身感染
に対して宿主が防御されることを見出した。
従い、肺炎球菌表面蛋白質Ａ（ＰｓｐＡ）又はこのもの
の免疫原性断片を経粘膜投与すること、中でも鼻内投与
することにより、肺炎球菌のミロニー形成及び全身感染
に対して宿主が防御されることを見出した。
【００１０】従って、本発明はその１つのアスペクトに
おいて、少なくとも１つの防御誘因性エピトープを含む
少なくとも１つの肺炎球菌表面蛋白質Ａ及び／又はこの
ものの免疫原性断片の有効量を宿主、中でも宿主として
の人に経粘膜的に投与、特に鼻内的に投与することによ
り、肺炎球菌によるコロニー形成及び全身感染に対して
その宿主を防御する方法を提供するものである。
おいて、少なくとも１つの防御誘因性エピトープを含む
少なくとも１つの肺炎球菌表面蛋白質Ａ及び／又はこの
ものの免疫原性断片の有効量を宿主、中でも宿主として
の人に経粘膜的に投与、特に鼻内的に投与することによ
り、肺炎球菌によるコロニー形成及び全身感染に対して
その宿主を防御する方法を提供するものである。
【００１１】ＰｓｐＡは全Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅの
殺菌物又は全Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅの溶菌物の形で
あることができる。これと異なって、そのＰｓｐＡは分
離精製した蛋白質又はそのものの断片であることもでき
る。このような精製分離した蛋白質又はその断片は、細
菌分離物から得ることができるか、又は組換え的に形成
させることができる。本発明の好ましいアスペクトの１
つにおいて、そのＰｓｐＡは免疫アジュバントとしての
コレラ毒素Ｂとともに投与される。
殺菌物又は全Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅの溶菌物の形で
あることができる。これと異なって、そのＰｓｐＡは分
離精製した蛋白質又はそのものの断片であることもでき
る。このような精製分離した蛋白質又はその断片は、細
菌分離物から得ることができるか、又は組換え的に形成
させることができる。本発明の好ましいアスペクトの１
つにおいて、そのＰｓｐＡは免疫アジュバントとしての
コレラ毒素Ｂとともに投与される。
【００１２】経粘膜投与は好ましくは宿主を肺炎球菌の
コロニー形成及び全身感染の両方に対して防御するよう
に鼻内的に行われる。この鼻内投与はまた、その宿主を
肺感染症に対し、また或る肺感染症として出発する感染
症に対しても防御することができる。
コロニー形成及び全身感染の両方に対して防御するよう
に鼻内的に行われる。この鼻内投与はまた、その宿主を
肺感染症に対し、また或る肺感染症として出発する感染
症に対しても防御することができる。
【００１３】本発明の特別なアスペクトの１つにおい
て、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅによる鼻咽頭におけるコ
ロニー形成に対して宿主を防御する方法が提供され、こ
れは全肺炎球菌殺菌物、肺炎球菌の溶菌物、或いは免疫
化量の肺炎球菌表面蛋白質（ＰｓｐＡ）、又は分離した
ＰｓｐＡ又はこのものの免疫原性断片の形で、免疫化量
のＰｓｐＡを宿主に鼻内的に投与することよりなる。
て、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅによる鼻咽頭におけるコ
ロニー形成に対して宿主を防御する方法が提供され、こ
れは全肺炎球菌殺菌物、肺炎球菌の溶菌物、或いは免疫
化量の肺炎球菌表面蛋白質（ＰｓｐＡ）、又は分離した
ＰｓｐＡ又はこのものの免疫原性断片の形で、免疫化量
のＰｓｐＡを宿主に鼻内的に投与することよりなる。
【００１４】本発明は更に、鼻咽頭におけるＳ．ｐｎｅ
ｕｍｏｎｉａｅによるコロニー形成に対して宿主を防御
するための鼻内投与用ワクチン組成物において、全肺炎
球菌殺菌物、肺炎球菌の溶菌物、又は少なくとも１つの
防御誘発性エピトープを含む、分離して精製した肺炎球
菌の表面蛋白質Ａ（ＰｓｐＡ）或いはこのものの免疫原
性断片の形のＰｓｐＡの有効量と、コレラ毒素のＢサブ
ユニットの免疫助成的量と、及びそれらの調剤的担体と
を含む、上記ワクチン組成物をも提供する。
ｕｍｏｎｉａｅによるコロニー形成に対して宿主を防御
するための鼻内投与用ワクチン組成物において、全肺炎
球菌殺菌物、肺炎球菌の溶菌物、又は少なくとも１つの
防御誘発性エピトープを含む、分離して精製した肺炎球
菌の表面蛋白質Ａ（ＰｓｐＡ）或いはこのものの免疫原
性断片の形のＰｓｐＡの有効量と、コレラ毒素のＢサブ
ユニットの免疫助成的量と、及びそれらの調剤的担体と
を含む、上記ワクチン組成物をも提供する。
【００１５】公開国際特許出願ＷＯ９２／１４４８８に
は、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ Ｒｘ１からのＰｓｐＡ
遺伝子のＤＮＡ配列、遺伝子工学によるＰｓｐＡの截断
型の製造、及びそのようなＰｓｐＡ截断型のものがマウ
スにおいて、生きている肺炎球菌による感作試験に対し
て防御を与えることが記述されている。
は、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ Ｒｘ１からのＰｓｐＡ
遺伝子のＤＮＡ配列、遺伝子工学によるＰｓｐＡの截断
型の製造、及びそのようなＰｓｐＡ截断型のものがマウ
スにおいて、生きている肺炎球菌による感作試験に対し
て防御を与えることが記述されている。
【００１６】このＰｓｐＡ遺伝子の配列から、ＰｓｐＡ
の種々の蛋白質が大きさにおいて可変であることが示さ
れている（おおまかに７０ｋＤａ）。その分子のＣ−末
端の３７％は主として、その肺炎球菌のリポテイコ酸の
ホスホコリン残基にＰｓｐＡが取りつくのを許容する結
合部位を形成する２０アミノ酸繰返し配列よりなってい
る。ＰｓｐＡの中央領域は蛋白質に富んでおり、そして
細胞壁を通過する分子部分であると推定される。この分
子のＮ−末端の８０％の配列は主としてα−螺旋状分子
であり、そして敗血症に対して防御性の種々の抗体を誘
発することのできるＰｓｐＡの領域を含む。各ＰｓｐＡ
は殆ど常に互いに少なくとも僅かだけ異なっているけれ
ども、１つのＰｓｐＡに対する各抗体が全ての肺炎球菌
の上の各ＰｓｐＡを検出するのに充分なそれらの間の交
叉反応性が存在する。１つのＰｓｐＡによる免疫化は実
際上全ての異なった感作試験株による死亡に対して防御
を与えることができるか、又は死亡を遅延させることが
できる。従って僅かな数のＰｓｐＡの混合物が殆どの肺
炎球菌に対して有効な免疫性を誘発させることができる
であろう。
の種々の蛋白質が大きさにおいて可変であることが示さ
れている（おおまかに７０ｋＤａ）。その分子のＣ−末
端の３７％は主として、その肺炎球菌のリポテイコ酸の
ホスホコリン残基にＰｓｐＡが取りつくのを許容する結
合部位を形成する２０アミノ酸繰返し配列よりなってい
る。ＰｓｐＡの中央領域は蛋白質に富んでおり、そして
細胞壁を通過する分子部分であると推定される。この分
子のＮ−末端の８０％の配列は主としてα−螺旋状分子
であり、そして敗血症に対して防御性の種々の抗体を誘
発することのできるＰｓｐＡの領域を含む。各ＰｓｐＡ
は殆ど常に互いに少なくとも僅かだけ異なっているけれ
ども、１つのＰｓｐＡに対する各抗体が全ての肺炎球菌
の上の各ＰｓｐＡを検出するのに充分なそれらの間の交
叉反応性が存在する。１つのＰｓｐＡによる免疫化は実
際上全ての異なった感作試験株による死亡に対して防御
を与えることができるか、又は死亡を遅延させることが
できる。従って僅かな数のＰｓｐＡの混合物が殆どの肺
炎球菌に対して有効な免疫性を誘発させることができる
であろう。
【００１７】国際特許出願ＷＯ９２／１４４８８に記述
されている免疫防御性の截断されたＰｓｐＡ類は経粘膜
投与のための上述したＰｓｐＡ断片として本発明におい
て使用することができる。
されている免疫防御性の截断されたＰｓｐＡ類は経粘膜
投与のための上述したＰｓｐＡ断片として本発明におい
て使用することができる。
【００１８】ここに提供されるワクチンの肺炎球菌のコ
ロニー形成に対する防御能力は、免疫された宿主のみな
らず、免疫された人において保菌を排除することによっ
て、それが引き起こす種々の病因、また従っていかなる
疾病もその集団から全体として除くことができることを
意味する。
ロニー形成に対する防御能力は、免疫された宿主のみな
らず、免疫された人において保菌を排除することによっ
て、それが引き起こす種々の病因、また従っていかなる
疾病もその集団から全体として除くことができることを
意味する。
【００１９】ここに提示した各データにおいて、肺炎球
菌の気管内摂取からもたらされる敗血症をも鼻内投与に
よって防止できることが示されており、従ってそのワク
チンは肺炎球菌のコロニー形成及び敗血症の両方に対し
て防御をもたらすことができる。
菌の気管内摂取からもたらされる敗血症をも鼻内投与に
よって防止できることが示されており、従ってそのワク
チンは肺炎球菌のコロニー形成及び敗血症の両方に対し
て防御をもたらすことができる。
【００２０】粘膜表面における特異的な免疫の主要な決
定基は分泌性ＩｇＡ（Ｓ−ＩｇＡ）であり、このものは
生理学的及び機能的に循環免疫系の各成分と分離してい
る。Ｓ−ＩｇＡ抗体応答は或る特別な粘膜部位への適当
な免疫原の適用によって局部的に誘発させることができ
る。しかしながら粘膜性Ｓ−ＩｇＡ応答の大部分は、粘
膜と組み合わされた全体としてリンパ球様組織（ＭＡＬ
Ｔ）と呼ばれる特異化されたリンパ上皮構造により種々
の免疫原が取り込まれる一般的な粘膜性免疫系（ＣＭＩ
Ｓ）（参考文献２８）によって作り出される免疫の結果
である。最もよく研究されている免疫学的リンパ上皮構
造は腸管パイエル氏板のようないわゆる腸管付属リンパ
組織（ＧＡＬＴ）である。しかしながら今や気道のそれ
を含む他の粘膜表面において構造的及び機能的に類似し
た他のリンパ球濾胞が生ずることが明らかである（参考
文献２９）。
定基は分泌性ＩｇＡ（Ｓ−ＩｇＡ）であり、このものは
生理学的及び機能的に循環免疫系の各成分と分離してい
る。Ｓ−ＩｇＡ抗体応答は或る特別な粘膜部位への適当
な免疫原の適用によって局部的に誘発させることができ
る。しかしながら粘膜性Ｓ−ＩｇＡ応答の大部分は、粘
膜と組み合わされた全体としてリンパ球様組織（ＭＡＬ
Ｔ）と呼ばれる特異化されたリンパ上皮構造により種々
の免疫原が取り込まれる一般的な粘膜性免疫系（ＣＭＩ
Ｓ）（参考文献２８）によって作り出される免疫の結果
である。最もよく研究されている免疫学的リンパ上皮構
造は腸管パイエル氏板のようないわゆる腸管付属リンパ
組織（ＧＡＬＴ）である。しかしながら今や気道のそれ
を含む他の粘膜表面において構造的及び機能的に類似し
た他のリンパ球濾胞が生ずることが明らかである（参考
文献２９）。
【００２１】気管支付属リンパ球様組織（ＢＡＬＴ）は
Ｂｉｅｎｅｓｔｏｃｋにより種々の実験動物において記
述されている（参考文献３０及び３１）が、これは感染
していない人の気管支においては明らかに存在していな
い（参考文献３２）。しかしながら人の上気道には扁桃
腺やアデノイドのＷａｌｄｅｙｅｒ氏環が備わってい
る。齧歯類においてはこれらの機能的等価物は鼻腔付属
リンパ球様組織（ＮＡＬＴ）よりなり、これは鼻腔通路
の基部における、上にかぶさっているＭ−状の上皮細胞
を含むリンパ球様組織の両側帯状部である（参考文献３
３）。
Ｂｉｅｎｅｓｔｏｃｋにより種々の実験動物において記
述されている（参考文献３０及び３１）が、これは感染
していない人の気管支においては明らかに存在していな
い（参考文献３２）。しかしながら人の上気道には扁桃
腺やアデノイドのＷａｌｄｅｙｅｒ氏環が備わってい
る。齧歯類においてはこれらの機能的等価物は鼻腔付属
リンパ球様組織（ＮＡＬＴ）よりなり、これは鼻腔通路
の基部における、上にかぶさっているＭ−状の上皮細胞
を含むリンパ球様組織の両側帯状部である（参考文献３
３）。
【００２２】以下の諸実施例にあげた実験結果におい
て、マウスがバクテリア蛋白質免疫原の鼻内滴下によっ
て、中でもコレラ毒素（ＣＴ）又はそのＢサブユニット
（ＣＴＢ）に抱合されるか、又はこれと混合されたとき
に、効果的に免疫化できることが示されている。鼻内免
疫化のために免疫アジュバントとしてＣＴＢが用いられ
た場合には、腸管、気道及び性器管の、並びに腸管固有
膜及び唾液腺の中の主としてＩｇＡ抗体を分泌する細胞
の分泌液の中で種々の特異的ＩｇＡ抗体が誘発される。
血清中のＩｇＧ及びＩｇＡ抗体及び脾臓中のＩｇＧ及び
ＩｇＡ抗体分泌細胞によって強い循環系免疫応答も誘発
される。ＣＴＢとともに種々の抗原の鼻内投与により引
き出された循環系の（又は全身的な）免疫応答は胃内的
（経口的）経路による同様な免疫原の投与によって誘発
されるものと匹敵するか、又はそれよりも更に強くさえ
ある（参考文献３４及び３５）。従って、鼻内免疫化は
一般的な粘膜応答並びに循環系抗体応答を刺激するため
の効果的な経路であって胃内免疫化よりも僅かな抗原し
か必要としない。
て、マウスがバクテリア蛋白質免疫原の鼻内滴下によっ
て、中でもコレラ毒素（ＣＴ）又はそのＢサブユニット
（ＣＴＢ）に抱合されるか、又はこれと混合されたとき
に、効果的に免疫化できることが示されている。鼻内免
疫化のために免疫アジュバントとしてＣＴＢが用いられ
た場合には、腸管、気道及び性器管の、並びに腸管固有
膜及び唾液腺の中の主としてＩｇＡ抗体を分泌する細胞
の分泌液の中で種々の特異的ＩｇＡ抗体が誘発される。
血清中のＩｇＧ及びＩｇＡ抗体及び脾臓中のＩｇＧ及び
ＩｇＡ抗体分泌細胞によって強い循環系免疫応答も誘発
される。ＣＴＢとともに種々の抗原の鼻内投与により引
き出された循環系の（又は全身的な）免疫応答は胃内的
（経口的）経路による同様な免疫原の投与によって誘発
されるものと匹敵するか、又はそれよりも更に強くさえ
ある（参考文献３４及び３５）。従って、鼻内免疫化は
一般的な粘膜応答並びに循環系抗体応答を刺激するため
の効果的な経路であって胃内免疫化よりも僅かな抗原し
か必要としない。
【００２３】殆どの可溶性、又は非複製性の抗原は、中
でも経口的経路によるときは貧弱な粘膜免疫原であり、
これはおそらくはそれらが消化酵素類によって分解さ
れ、そしてＧＡＬＴに対して僅かしか、又は全く指向性
を持たないからであろうと考えられる。注目すべき例外
はＣＴであり、これは強力な粘膜免疫原であって（参考
文献３６）、これはおそらくはその結合用サブユニット
であるＣＴＢのＧM1ガングリオシド結合性によるものと
考えられ、これはパイエル氏板のＭ細胞によって取り込
まれて、その下に存在する免疫担当細胞へ送り込まれる
のを可能にする。ＣＴは、良好な粘膜免疫原であること
に加えて、強力な免疫アジュバントである（参考文献３
７、３８及び３９）。μｇのオーダーの投与量で投与し
た場合にはＣＴはそれと一緒に投与された他の種々の可
溶性抗原の粘膜免疫原性を大きく高める。
でも経口的経路によるときは貧弱な粘膜免疫原であり、
これはおそらくはそれらが消化酵素類によって分解さ
れ、そしてＧＡＬＴに対して僅かしか、又は全く指向性
を持たないからであろうと考えられる。注目すべき例外
はＣＴであり、これは強力な粘膜免疫原であって（参考
文献３６）、これはおそらくはその結合用サブユニット
であるＣＴＢのＧM1ガングリオシド結合性によるものと
考えられ、これはパイエル氏板のＭ細胞によって取り込
まれて、その下に存在する免疫担当細胞へ送り込まれる
のを可能にする。ＣＴは、良好な粘膜免疫原であること
に加えて、強力な免疫アジュバントである（参考文献３
７、３８及び３９）。μｇのオーダーの投与量で投与し
た場合にはＣＴはそれと一緒に投与された他の種々の可
溶性抗原の粘膜免疫原性を大きく高める。
【００２４】以下にあげる諸例に含まれている実験結果
においてＣＴＢがマウスに肺炎球菌蛋白質、すなわちＰ
ｓｐＡとともに鼻内的に投与されたときに強力なアジュ
バントであることが示されている。本発明者等はこれら
の研究において僅かな量のＣＴの役割を完全に無視する
ことはできないけれども、ＣＴは投与されたＣＴＢの５
μｇの投与量０．１％以下であった。すなわち鼻内投与
した場合にＣＴＢは強力なアジュバントであって、これ
は胃内投与された場合よりもＣＴとより独立的に作用す
るものであろう。例えば経口的又は胃内的に投与した場
合にＣＴＢはなんら直接的なアジュバント効果を持たな
いけれども、ＣＴと相乗効果的に作用することができる
（参考文献４０）。
においてＣＴＢがマウスに肺炎球菌蛋白質、すなわちＰ
ｓｐＡとともに鼻内的に投与されたときに強力なアジュ
バントであることが示されている。本発明者等はこれら
の研究において僅かな量のＣＴの役割を完全に無視する
ことはできないけれども、ＣＴは投与されたＣＴＢの５
μｇの投与量０．１％以下であった。すなわち鼻内投与
した場合にＣＴＢは強力なアジュバントであって、これ
は胃内投与された場合よりもＣＴとより独立的に作用す
るものであろう。例えば経口的又は胃内的に投与した場
合にＣＴＢはなんら直接的なアジュバント効果を持たな
いけれども、ＣＴと相乗効果的に作用することができる
（参考文献４０）。
【００２５】ＣＴとＣＴＢとがアジュバントとして作用
する機構は完全には理解されていないけれども、それら
は確かに複雑であり、そして１）Ａ１サブユニットのＡ
ＤＰ−リボシル化性と組み合わされた毒素活性（参考文
献４１）と、２）高められた粘膜透過性（参考文献４２
及び４３）と、３）高められた抗原提示細胞機能（高め
られたＩＬ−１水準とともに）（参考文献４４及び４
５）と、及び４）Ｔ細胞及びＢ細胞の活性の直接的な刺
激（参考文献４６、４７、４８及び４９）とを含むいく
つかの因子に依存するもののようである。しかしながら
この最後の点は矛盾的であって、というのはＴ細胞及び
Ｂ細胞に対するＣＴ又はＣＴＢの試験管内での作用が一
般に、刺激性であるよりは拮抗性である（参考文献５
０、５１及び５２）からである。しかしながら多くの報
告は種々の抗原に結合したＣＴ及びＣＴＢの生体内にお
ける粘膜免疫促進効果を証明している（参考文献３８、
３９、５３、５４、５５及び５６）。
する機構は完全には理解されていないけれども、それら
は確かに複雑であり、そして１）Ａ１サブユニットのＡ
ＤＰ−リボシル化性と組み合わされた毒素活性（参考文
献４１）と、２）高められた粘膜透過性（参考文献４２
及び４３）と、３）高められた抗原提示細胞機能（高め
られたＩＬ−１水準とともに）（参考文献４４及び４
５）と、及び４）Ｔ細胞及びＢ細胞の活性の直接的な刺
激（参考文献４６、４７、４８及び４９）とを含むいく
つかの因子に依存するもののようである。しかしながら
この最後の点は矛盾的であって、というのはＴ細胞及び
Ｂ細胞に対するＣＴ又はＣＴＢの試験管内での作用が一
般に、刺激性であるよりは拮抗性である（参考文献５
０、５１及び５２）からである。しかしながら多くの報
告は種々の抗原に結合したＣＴ及びＣＴＢの生体内にお
ける粘膜免疫促進効果を証明している（参考文献３８、
３９、５３、５４、５５及び５６）。
【００２６】肺炎球菌の保菌は非常に若年齢者及び成年
者において長期間にわたり維持され得るけれども、これ
は一般に永久的な状態ではない。高年齢の子供及び若年
成人においては保菌はあまり一般的ではない（参考文献
１０、１１、１２、５７及び５８）。このような発見の
１つの説明は、保菌が肺炎球菌に対する免疫（おそらく
は粘膜免疫）によって妨害されるであろうということで
ある（参考文献１１及び５９）。本発明者等は殆どの人
の唾液が２３型莢膜性多糖類及びホスホコリン〔肺炎球
菌細胞膜のテイコ酸の免疫主決定基である（賛仰文献６
０）〕に対する種々のＩｇＡ抗体を有していることを示
した。従って人の血清も他の種々の肺炎球菌抗原に対す
る抗体を含んでいるであろうということはありそうであ
る。グループＡのストレプトコッカス類の場合には各種
Ｍ蛋白質はラットにおけるコロニー形成のために必要で
あることが示されており、そして各Ｍ蛋白質に対する抗
体は喉のコロニー形成に対して防御することができる
（参考文献６１及び６２）。マウスにおいて、本発明者
等はここに、ＰｓｐＡに対する抗体がＳ．ｐｎｅｕｍｏ
ｎｉａｅの保菌を防止できることを示した。
者において長期間にわたり維持され得るけれども、これ
は一般に永久的な状態ではない。高年齢の子供及び若年
成人においては保菌はあまり一般的ではない（参考文献
１０、１１、１２、５７及び５８）。このような発見の
１つの説明は、保菌が肺炎球菌に対する免疫（おそらく
は粘膜免疫）によって妨害されるであろうということで
ある（参考文献１１及び５９）。本発明者等は殆どの人
の唾液が２３型莢膜性多糖類及びホスホコリン〔肺炎球
菌細胞膜のテイコ酸の免疫主決定基である（賛仰文献６
０）〕に対する種々のＩｇＡ抗体を有していることを示
した。従って人の血清も他の種々の肺炎球菌抗原に対す
る抗体を含んでいるであろうということはありそうであ
る。グループＡのストレプトコッカス類の場合には各種
Ｍ蛋白質はラットにおけるコロニー形成のために必要で
あることが示されており、そして各Ｍ蛋白質に対する抗
体は喉のコロニー形成に対して防御することができる
（参考文献６１及び６２）。マウスにおいて、本発明者
等はここに、ＰｓｐＡに対する抗体がＳ．ｐｎｅｕｍｏ
ｎｉａｅの保菌を防止できることを示した。
【００２７】種々の抗体は２通りの形式で保菌に対して
効果的であることができ、すなわち１）それらは肺炎球
菌をオプソン化することによってその粘膜表面において
作用して付着や表面侵入を防止するか、又は２）それら
はオプソノ貧食及び殺菌を介して作用することが考えら
れる。この後者の機構は鼻咽頭の保菌が鼻腔粘膜表面の
最小限の侵入に依存する場合には特に重要であると考え
られる。補体固定抗体類は侵入を防止できると考えら
れ、そして部分的に侵入したいかなる肺炎球菌の殺菌を
も促進すると考えられる。これと別に、補体固定抗体類
は炎症が充分な補体、食細胞及びおそらくは血清抗体の
充分な放出をももたらすときは、その粘膜表面に作用で
きるであろう。
効果的であることができ、すなわち１）それらは肺炎球
菌をオプソン化することによってその粘膜表面において
作用して付着や表面侵入を防止するか、又は２）それら
はオプソノ貧食及び殺菌を介して作用することが考えら
れる。この後者の機構は鼻咽頭の保菌が鼻腔粘膜表面の
最小限の侵入に依存する場合には特に重要であると考え
られる。補体固定抗体類は侵入を防止できると考えら
れ、そして部分的に侵入したいかなる肺炎球菌の殺菌を
も促進すると考えられる。これと別に、補体固定抗体類
は炎症が充分な補体、食細胞及びおそらくは血清抗体の
充分な放出をももたらすときは、その粘膜表面に作用で
きるであろう。
【００２８】これら種々の機構の１つが、Ｈ．ｉｎｆｌ
ｕｅｎｚａｅの保菌を筋肉内ワクチンによって防止でき
るという観察（参考文献２３）において或る役割を演じ
ているのであろう。最近になって、Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎ
ｚａｅの多糖類特異性ＩｇＧ及びＩｇＡの重大な水準が
グループＢの多糖類抱合体ワクチンを用いた免疫化に引
き続いての子供の分泌液の中に検出されることが報告さ
れた（参考文献２４及び６３）。
ｕｅｎｚａｅの保菌を筋肉内ワクチンによって防止でき
るという観察（参考文献２３）において或る役割を演じ
ているのであろう。最近になって、Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎ
ｚａｅの多糖類特異性ＩｇＧ及びＩｇＡの重大な水準が
グループＢの多糖類抱合体ワクチンを用いた免疫化に引
き続いての子供の分泌液の中に検出されることが報告さ
れた（参考文献２４及び６３）。
【００２９】殆どの場合に明確な比較はまだなされてい
ないけれども、存在しているマウスについての防御のデ
ータ（参考文献６４、６５、６６及び６７）は肺炎球菌
類をオプソン化できる抗体類が一般に毒素類の活性をブ
ロックするもの（例えばニューモリシン）又は種々の酵
素類（例えば自己消化酵素又はノイロミニダーゼ）より
も敗血症に対してより防御性があることを示唆してい
る。しかしながら粘膜表面においては毒素類や酵素類を
失活させる抗体類によって演じられる役割がオプソン性
抗体類によって演じられるものよりも大きいであろう。
このように考えられる理由は、オプソン性抗体類がその
抗菌作用を発揮するためには補体及び食細胞が必要であ
ることである。職細胞類は通常の鼻咽頭組織の表面上で
はまれであり、そしてもし存在したとしても、それら食
細胞は脾臓や細網内皮系の濾過作用を有してオプソン化
されたバクテリアと相互作用する機会を増大させること
はない。ニューモリシン及び肺炎球菌性酵素の劇毒性増
強作用をブロックする抗体類は食細胞が存在しているか
又は存在していないのと同じ有効性でそれらの抗原類と
結合できる必要がある。
ないけれども、存在しているマウスについての防御のデ
ータ（参考文献６４、６５、６６及び６７）は肺炎球菌
類をオプソン化できる抗体類が一般に毒素類の活性をブ
ロックするもの（例えばニューモリシン）又は種々の酵
素類（例えば自己消化酵素又はノイロミニダーゼ）より
も敗血症に対してより防御性があることを示唆してい
る。しかしながら粘膜表面においては毒素類や酵素類を
失活させる抗体類によって演じられる役割がオプソン性
抗体類によって演じられるものよりも大きいであろう。
このように考えられる理由は、オプソン性抗体類がその
抗菌作用を発揮するためには補体及び食細胞が必要であ
ることである。職細胞類は通常の鼻咽頭組織の表面上で
はまれであり、そしてもし存在したとしても、それら食
細胞は脾臓や細網内皮系の濾過作用を有してオプソン化
されたバクテリアと相互作用する機会を増大させること
はない。ニューモリシン及び肺炎球菌性酵素の劇毒性増
強作用をブロックする抗体類は食細胞が存在しているか
又は存在していないのと同じ有効性でそれらの抗原類と
結合できる必要がある。
【００３０】ここで得られた結果は加熱殺菌された肺炎
球菌類、肺炎球菌溶菌物及び精製されたＰｓｐＡによる
鼻内免疫化が鼻咽頭の保菌に対してマウスを防御できる
こと示している。前に述べたように、或るワクチンのコ
ロニー形成に対する防御能力とは、その免疫化された宿
主において疾病に対して防御するばかりでなく、免疫化
された各固体の保菌を除くことによって病原体、また従
ってそれが引き起こすいかなる疾病をもその集団から全
体として除去できることを意味する。
球菌類、肺炎球菌溶菌物及び精製されたＰｓｐＡによる
鼻内免疫化が鼻咽頭の保菌に対してマウスを防御できる
こと示している。前に述べたように、或るワクチンのコ
ロニー形成に対する防御能力とは、その免疫化された宿
主において疾病に対して防御するばかりでなく、免疫化
された各固体の保菌を除くことによって病原体、また従
ってそれが引き起こすいかなる疾病をもその集団から全
体として除去できることを意味する。
【００３１】ここで提供される鼻内投与されるワクチン
組成物はいかなる好都合な態様ででも調製することがで
き、そして投与及び防御性応答の誘発の態様に合致した
投与用調剤として作ることができる。投与される抗原の
量は免疫化される対象及びその抗原の形に依存する。投
与されるべき抗原の正確な量及び形態は医者の判断に任
せられる。しかしながら好適な投与量の範囲は当業者が
容易に決定することができ、そしてμｇからｍｇまでの
オーダーであることができる。初期投与及び追加投与の
ための好適な基準も可変であるが、しかしながら初期投
与に引き続いて以降のいくつかの投与を含むことができ
る。
組成物はいかなる好都合な態様ででも調製することがで
き、そして投与及び防御性応答の誘発の態様に合致した
投与用調剤として作ることができる。投与される抗原の
量は免疫化される対象及びその抗原の形に依存する。投
与されるべき抗原の正確な量及び形態は医者の判断に任
せられる。しかしながら好適な投与量の範囲は当業者が
容易に決定することができ、そしてμｇからｍｇまでの
オーダーであることができる。初期投与及び追加投与の
ための好適な基準も可変であるが、しかしながら初期投
与に引き続いて以降のいくつかの投与を含むことができ
る。
【００３２】
【実施例】例１ この例はマウスにおける肺炎球菌保菌のモデルの提供を
示す。
示す。
【００３３】Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅの７つの異なっ
た株をＣＢＡ／Ｎ ＸＩＤマウスの鼻孔の中に２０μｌ
のＰｉｐｅｔｍａｎからゆっくりと送り出すことによっ
て数分間にわたり１０μｌの容積の対数相培養液を接種
した。６ないし７日後にそれらのマウスを屠殺してそれ
らの気管を喉頭の直下において切り開いた。５０μｌの
滅菌した塩水を滴下し、そして鼻孔を通して洗い出し
た。その洗浄した領域は咽頭及び鼻腔組織である。それ
らの株のうちの６種類は敗血症やバクテリア血を引き起
こすことなく保菌を確立することができた。それら７種
類の株（Ａ６６、劇毒性莢膜型３の株）の１つは鼻内感
染させたＣＢＡ／Ｎの全４匹のマウスを３日以内に死亡
させた。結果を下記表１に示す。
た株をＣＢＡ／Ｎ ＸＩＤマウスの鼻孔の中に２０μｌ
のＰｉｐｅｔｍａｎからゆっくりと送り出すことによっ
て数分間にわたり１０μｌの容積の対数相培養液を接種
した。６ないし７日後にそれらのマウスを屠殺してそれ
らの気管を喉頭の直下において切り開いた。５０μｌの
滅菌した塩水を滴下し、そして鼻孔を通して洗い出し
た。その洗浄した領域は咽頭及び鼻腔組織である。それ
らの株のうちの６種類は敗血症やバクテリア血を引き起
こすことなく保菌を確立することができた。それら７種
類の株（Ａ６６、劇毒性莢膜型３の株）の１つは鼻内感
染させたＣＢＡ／Ｎの全４匹のマウスを３日以内に死亡
させた。結果を下記表１に示す。
【００３４】
【表１】 例２ ＢＡＲＢ／Ｂｙマウスの鼻腔に用いた３株の肺炎球菌分
離物の２株を接種させることにより例１の操作を繰り返
した。全ての３株についてバクテリア血や敗血症を起こ
すことなく保菌が観測された。結果は下記表２に示す。
離物の２株を接種させることにより例１の操作を繰り返
した。全ての３株についてバクテリア血や敗血症を起こ
すことなく保菌が観測された。結果は下記表２に示す。
【００３５】
【表２】 例３ この例は肺の感染症に対する鼻内接種の効果を示す。
【００３６】例１における保菌のために試験した各株の
３種類を用いて屠殺時における肺の中の肺炎球菌の数を
調べた。得られた結果を下記表３に示す。
３種類を用いて屠殺時における肺の中の肺炎球菌の数を
調べた。得られた結果を下記表３に示す。
【００３７】
【表３】 この表３に示したデータは、その保菌された肺炎球菌が
一般に検出できるバクテリア血や敗血症を引き起こさな
いけれども、それらは少なくとも僅かな数だけ肺にまで
広がり得ることを示している。Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａ
ｅの鼻咽頭から肺まで広がる能力は上気道内におけるワ
クチン阻止保菌の重要性を強調するものである。例４ この例はコロニー形成能力に対する鼻内接種の効果を示
す。
一般に検出できるバクテリア血や敗血症を引き起こさな
いけれども、それらは少なくとも僅かな数だけ肺にまで
広がり得ることを示している。Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａ
ｅの鼻咽頭から肺まで広がる能力は上気道内におけるワ
クチン阻止保菌の重要性を強調するものである。例４ この例はコロニー形成能力に対する鼻内接種の効果を示
す。
【００３８】コロニー形成は下記表４の結果が示すよう
に、少なくとも１９日間にわたって存在し、そして少な
くとも６日間にわたり安定であるように現われた。
に、少なくとも１９日間にわたって存在し、そして少な
くとも６日間にわたり安定であるように現われた。
【００３９】
【表４】 例１ないし４に報告した実験における鼻腔洗浄液からの
肺炎球菌を同定するために、それらをゲンタミシン板の
上に塗布したが、これはゲンタミシンが肺炎球菌は殺菌
しないけれども鼻腔からの他の殆どのバクテリアを殺菌
するからである（参考文献６８）。各鼻腔洗浄液からの
個々のコロニーを取り出してオプトヒンデイスクを用い
て再び塗布してそれらが肺炎球菌であることを確認し
た。若干の場合に、そのバクテリアはマウスに接種した
と同じバクテリアが実際に接種されたことを確かめるた
めに莢膜型にされた。バクテリアを接種しなかったコン
トロール群のマウスは０．０２％ゲンタミシンの上で成
長してオプトヒンに対して感受性のバクテリアをもたら
さなかった。引き続く実験によってコロニー形成性の２
×１０7 単位（ＣＦＵ）での試験接種も全てのマウスに
おいて保菌をもたらすことが示された。１０3 ＣＦＵま
での低い投与量によっては殆どのマウスにおいて匹敵す
る保菌をもたらすけれども、１／４ないし１／３のマウ
スは１週間後になんらの肺炎球菌をも保菌することに成
功しない。これらの実験は理想的な投与量が多分Ｌ８１
９０５の１０7 ＣＦＵと１０4 ＣＦＵとの間であること
を示している。例５ この例は加熱殺菌した肺炎球菌及び肺炎球菌の溶菌物を
用いる免疫化によって保菌に対する防御を誘発すること
を説明する。
肺炎球菌を同定するために、それらをゲンタミシン板の
上に塗布したが、これはゲンタミシンが肺炎球菌は殺菌
しないけれども鼻腔からの他の殆どのバクテリアを殺菌
するからである（参考文献６８）。各鼻腔洗浄液からの
個々のコロニーを取り出してオプトヒンデイスクを用い
て再び塗布してそれらが肺炎球菌であることを確認し
た。若干の場合に、そのバクテリアはマウスに接種した
と同じバクテリアが実際に接種されたことを確かめるた
めに莢膜型にされた。バクテリアを接種しなかったコン
トロール群のマウスは０．０２％ゲンタミシンの上で成
長してオプトヒンに対して感受性のバクテリアをもたら
さなかった。引き続く実験によってコロニー形成性の２
×１０7 単位（ＣＦＵ）での試験接種も全てのマウスに
おいて保菌をもたらすことが示された。１０3 ＣＦＵま
での低い投与量によっては殆どのマウスにおいて匹敵す
る保菌をもたらすけれども、１／４ないし１／３のマウ
スは１週間後になんらの肺炎球菌をも保菌することに成
功しない。これらの実験は理想的な投与量が多分Ｌ８１
９０５の１０7 ＣＦＵと１０4 ＣＦＵとの間であること
を示している。例５ この例は加熱殺菌した肺炎球菌及び肺炎球菌の溶菌物を
用いる免疫化によって保菌に対する防御を誘発すること
を説明する。
【００４０】ＣＢＡ／Ｎマウスを２×１０7 個の加熱殺
菌（６０℃）したＬ８２０１６又は同数のＬ８２０１６
の溶菌物で鼻内的に免疫化した。それらのマウスにそれ
ぞれ１０日間隔てて３回鼻内免疫化を施した。最初の２
回の注射は５μｇのＣＴＢを用いて行なった。最後の注
射の２週間後にそれらのマウスに生きたＬ８２０１６の
１０6 ＣＦＵを試験接種した。得られた結果を下記表５
に示す。
菌（６０℃）したＬ８２０１６又は同数のＬ８２０１６
の溶菌物で鼻内的に免疫化した。それらのマウスにそれ
ぞれ１０日間隔てて３回鼻内免疫化を施した。最初の２
回の注射は５μｇのＣＴＢを用いて行なった。最後の注
射の２週間後にそれらのマウスに生きたＬ８２０１６の
１０6 ＣＦＵを試験接種した。得られた結果を下記表５
に示す。
【００４１】
【表５】 例６ この例は分離精製ＰｓｐＡを用いた免疫化による保菌に
対する防御を示す。
対する防御を示す。
【００４２】第１０週齢のＣＢＡ／Ｎマウスを、コリン
−セファロースカラムを通過させて２％コリンクロリド
で溶離させることにより精製したＰｓｐＡで鼻内的に免
疫化した。カラムを通した物質は０．０３％のエタノー
ルアミン及び０．０００，００２％を越えないコリンク
ロリドを含む特定的培地（Ｒｉｊｎ等：“Ｉｎｆｅｃ
ｔ．Ｉｍｍｕｎ．”１９９０，２７，４４４−４４８）
の中で後期対数相まで成育させた肺炎球菌培養物からの
清澄化した培地である。この培地の中で肺炎球菌を成育
させた時にその細胞表面からそのＰｓｐＡの約半分が放
出され、そしてこの培地の中に回収することができる。
殆どの肺炎球菌はこの培地の中では成育することができ
ず、そしてそれらは順に低いコリン濃度のＣＤＭの中で
成育させる個とにより適合化させなければならない。そ
のカラムから溶離されたＰｓｐＡは少なくとも９９％の
溶離された蛋白質を含む。
−セファロースカラムを通過させて２％コリンクロリド
で溶離させることにより精製したＰｓｐＡで鼻内的に免
疫化した。カラムを通した物質は０．０３％のエタノー
ルアミン及び０．０００，００２％を越えないコリンク
ロリドを含む特定的培地（Ｒｉｊｎ等：“Ｉｎｆｅｃ
ｔ．Ｉｍｍｕｎ．”１９９０，２７，４４４−４４８）
の中で後期対数相まで成育させた肺炎球菌培養物からの
清澄化した培地である。この培地の中で肺炎球菌を成育
させた時にその細胞表面からそのＰｓｐＡの約半分が放
出され、そしてこの培地の中に回収することができる。
殆どの肺炎球菌はこの培地の中では成育することができ
ず、そしてそれらは順に低いコリン濃度のＣＤＭの中で
成育させる個とにより適合化させなければならない。そ
のカラムから溶離されたＰｓｐＡは少なくとも９９％の
溶離された蛋白質を含む。
【００４３】それらのＣＢＡ／ＮマウスはＬ８２０１６
株からの≧９９．９％純度のＰｓｐＡの１５０ｎｇで鼻
内的に、又は１μｇでｓ．ｃ．で免疫化させた。１０日
間の感覚で３回の鼻内的免疫化を施した。最初の２回の
注射とともに、≧９９．９％純度の市販で入手された
（ＯＴＢ）（カナダ国キャンベルのＬｉｓｔ Ｂｉｏｃ
ｈｅｍｉｃａｌ Ｌａｂｓ， Ｉｎｃ．）の５μｇを投
与した。ｓ．ｃ．免疫化の場合には、最初の注射はＦｒ
ｅｕｎｄの完全アジュバントの中のＰｓｐＡを用いて行
ない、そして２週間後に塩水中のＰｓｐＡの第２注射を
行なった。最後の注射の２週間後に、各マウスにＬ８２
０１６の１０7 ＣＦＵを鼻内接種した。７日後に各マウ
スを屠殺し、放血させ、そして鼻咽頭における保菌につ
いて評価した。得られた結果を下記表６に示す。
株からの≧９９．９％純度のＰｓｐＡの１５０ｎｇで鼻
内的に、又は１μｇでｓ．ｃ．で免疫化させた。１０日
間の感覚で３回の鼻内的免疫化を施した。最初の２回の
注射とともに、≧９９．９％純度の市販で入手された
（ＯＴＢ）（カナダ国キャンベルのＬｉｓｔ Ｂｉｏｃ
ｈｅｍｉｃａｌ Ｌａｂｓ， Ｉｎｃ．）の５μｇを投
与した。ｓ．ｃ．免疫化の場合には、最初の注射はＦｒ
ｅｕｎｄの完全アジュバントの中のＰｓｐＡを用いて行
ない、そして２週間後に塩水中のＰｓｐＡの第２注射を
行なった。最後の注射の２週間後に、各マウスにＬ８２
０１６の１０7 ＣＦＵを鼻内接種した。７日後に各マウ
スを屠殺し、放血させ、そして鼻咽頭における保菌につ
いて評価した。得られた結果を下記表６に示す。
【００４４】
【表６】 マウスはいずれも評価の時点においてその血液中に検出
可能な肺炎球菌を示さなかった。ひょう６に見られるよ
うに、ＰｓｐＡとＣＴＢとで鼻内的に免疫化させた４匹
の群を除いて全てのマウスにおいて保菌が見られた。Ｃ
ＴＢ又はＰｓｐＡのいずれかで免疫化したコントロール
群のマウスはなほ保菌を示した。
可能な肺炎球菌を示さなかった。ひょう６に見られるよ
うに、ＰｓｐＡとＣＴＢとで鼻内的に免疫化させた４匹
の群を除いて全てのマウスにおいて保菌が見られた。Ｃ
ＴＢ又はＰｓｐＡのいずれかで免疫化したコントロール
群のマウスはなほ保菌を示した。
【００４５】もう１つの実験において１０倍の投与量
（１０8 ＣＦＵ）で鼻内感染させ、そしてＰｓｐＡ＋Ｃ
ＴＢでの免疫化はなお肺炎球菌の保菌に対して防御した
（下記表７参照）。この実験においてコントロール群の
マウスにはＣＴＢと、及びＰｓｐＡに用いたと同じ精製
操作により作ったＷＧ４４．１のＰｓｐＡ株からの匹敵
する調剤とを注射した。各マウスを、分離したＰｓｐＡ
のそれと匹敵するＷＧ４４．１の物質の希釈により免疫
化した。これらのコントロール群のマウスが保菌に対し
て防護するのに失敗したことは分離したＰｓｐＡにより
発現される防護がＰｓｐＡによるものであって、Ｐｓｐ
Ａと一緒に分離された未検出の雑菌によるものではない
ことを明らかにしている。
（１０8 ＣＦＵ）で鼻内感染させ、そしてＰｓｐＡ＋Ｃ
ＴＢでの免疫化はなお肺炎球菌の保菌に対して防御した
（下記表７参照）。この実験においてコントロール群の
マウスにはＣＴＢと、及びＰｓｐＡに用いたと同じ精製
操作により作ったＷＧ４４．１のＰｓｐＡ株からの匹敵
する調剤とを注射した。各マウスを、分離したＰｓｐＡ
のそれと匹敵するＷＧ４４．１の物質の希釈により免疫
化した。これらのコントロール群のマウスが保菌に対し
て防護するのに失敗したことは分離したＰｓｐＡにより
発現される防護がＰｓｐＡによるものであって、Ｐｓｐ
Ａと一緒に分離された未検出の雑菌によるものではない
ことを明らかにしている。
【００４６】マウスをｓ．ｃ．で免疫化した場合には、
それらはＰｓｐＡに対する液性抗体を産生したけれど
も、それらはなお保菌を示した。
それらはＰｓｐＡに対する液性抗体を産生したけれど
も、それらはなお保菌を示した。
【００４７】
【表７】 例７ この例はＰｓｐＡでの鼻内免疫化による分泌応答及び全
身免疫応答の発現を示す。
身免疫応答の発現を示す。
【００４８】例６の免疫手順を用いて更にいくつかの免
疫化実験を行い、そして各マウスを免疫化処置の１０日
後に放血した。分泌及び全身的抗体応答を測定し、そし
てその結果は下記表８の通りである。
疫化実験を行い、そして各マウスを免疫化処置の１０日
後に放血した。分泌及び全身的抗体応答を測定し、そし
てその結果は下記表８の通りである。
【００４９】
【表８】 この表から見られるように、免疫化は検出可能な唾液Ｉ
ｇＧ及びＩｇＡ抗体応答を誘発させた。ＣＴＢ、ＣＦＡ
又はＷＧ４４．１のＰｓｐＡ株から分離したＰｓｐＡ分
画によるコントロール群の免疫化はＰｓｐＡに対する抗
体を誘発させなかった。ｉ．ｎ．（鼻内）免疫化のため
にアジュバントとしてＣＴＢを用いなかった場合には抗
体は検出されなかった。ＰｓｐＡに対する抗体の評価は
分離したＰｓｐＡを塗布したＥＬＩＳＡ板を用いて行な
った。例８ この例はＲ３６Ａの免疫化ＰｓｐＡのそれと異なったＰ
ｓｐＡの株による保菌に対しての交叉防御の誘発を示
す。
ｇＧ及びＩｇＡ抗体応答を誘発させた。ＣＴＢ、ＣＦＡ
又はＷＧ４４．１のＰｓｐＡ株から分離したＰｓｐＡ分
画によるコントロール群の免疫化はＰｓｐＡに対する抗
体を誘発させなかった。ｉ．ｎ．（鼻内）免疫化のため
にアジュバントとしてＣＴＢを用いなかった場合には抗
体は検出されなかった。ＰｓｐＡに対する抗体の評価は
分離したＰｓｐＡを塗布したＥＬＩＳＡ板を用いて行な
った。例８ この例はＲ３６Ａの免疫化ＰｓｐＡのそれと異なったＰ
ｓｐＡの株による保菌に対しての交叉防御の誘発を示
す。
【００５０】Ｒ３６ＡのＰｓｐＡの０．１５μｇでの３
回の鼻内免疫化処理によりマウスを免疫化した。最初２
回の注射において免疫化は精製したＣＴＢの４μｇを用
いて行なった。１０日間を隔てて各注射を行ない、そし
て最後の免疫化処理の２週間後にマウスに試験感作用接
種を行なった。コントロール群のマウスには２回のＣＴ
Ｂによる免疫化を施し、そして第３回目の注射には塩水
だけで「免疫化」処理を行なった。これらのマウスの多
くは、異なった莢膜型及び異なったＰｓｐＡ型の２つの
異なった試験感作用の株ＢＧ７３２２及びＢＧ８８２６
での試験感作用の保菌から防御されていた。両者とも免
疫化に用いた抗原型２５ＰｓｐＡと異なった型のＰｓｐ
Ａを有する。Ｒ３６ＡのＰｓｐＡによる免疫化は莢膜型
２のＤ３９株の非カプセル化突然変異体であるＲ３６Ａ
株に由来するものであった。免疫化ＰｓｐＡを提供する
各株の莢膜型も又はそのＰｓｐＡ型も試験感作用株と同
じではなかった。各群の中のマウス数が少なかったため
に個別の株による結果は非常に重要であるという訳では
なかった。しかしながらそれらのデータの蓄積はＰｓｐ
Ａが、免疫化ＰｓｐＡと異なるＰｓｐＡを含む試験感作
用肺炎球菌に対して防御を誘発させることができること
の大いに重大なデモンストレーションに導いた。それら
のデータを下記表９にあげる。
回の鼻内免疫化処理によりマウスを免疫化した。最初２
回の注射において免疫化は精製したＣＴＢの４μｇを用
いて行なった。１０日間を隔てて各注射を行ない、そし
て最後の免疫化処理の２週間後にマウスに試験感作用接
種を行なった。コントロール群のマウスには２回のＣＴ
Ｂによる免疫化を施し、そして第３回目の注射には塩水
だけで「免疫化」処理を行なった。これらのマウスの多
くは、異なった莢膜型及び異なったＰｓｐＡ型の２つの
異なった試験感作用の株ＢＧ７３２２及びＢＧ８８２６
での試験感作用の保菌から防御されていた。両者とも免
疫化に用いた抗原型２５ＰｓｐＡと異なった型のＰｓｐ
Ａを有する。Ｒ３６ＡのＰｓｐＡによる免疫化は莢膜型
２のＤ３９株の非カプセル化突然変異体であるＲ３６Ａ
株に由来するものであった。免疫化ＰｓｐＡを提供する
各株の莢膜型も又はそのＰｓｐＡ型も試験感作用株と同
じではなかった。各群の中のマウス数が少なかったため
に個別の株による結果は非常に重要であるという訳では
なかった。しかしながらそれらのデータの蓄積はＰｓｐ
Ａが、免疫化ＰｓｐＡと異なるＰｓｐＡを含む試験感作
用肺炎球菌に対して防御を誘発させることができること
の大いに重大なデモンストレーションに導いた。それら
のデータを下記表９にあげる。
【００５１】
【表９】 例９ この例はＰｓｐＡでの鼻内免疫化によって気管内（ｉ．
ｔ．）試験感作用接種に対する防御が誘発されることを
示す。
ｔ．）試験感作用接種に対する防御が誘発されることを
示す。
【００５２】Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅＲ３６Ａ株（こ
れはＲｘ１株と同じＰｓｐＡを提供する）から全長Ｐｓ
ｐＡを回収した。この株を、培地が０．０３％のコリン
クロリドを含むことを除いて化学的に明確化れた培地
（Ｒｉｊｎ等：“Ｉｎｆｅｃｔ．＆Ｉｍｍｕｎ．”，１
９９０， Ｖｏｌ．２７，ｐｐ４４４−４４８）の１０
０μｌの中で成育させた。後期対数相においてそのバク
テリアを収穫（約５×１０7 ＣＦＵ／ｍｌ）し、そして
塩水２０ｍｌで５回洗浄し、そして２０００Ｇにおいて
１０分間遠心分離した。各洗浄とともにバクテリアを分
離して上澄液を捨てた。次にこの洗浄した細胞を２％コ
リンクロリドの５ｍｌで溶離させ、そしてその溶離した
物質はモノクローナル抗体ＸｉＲ２７８を用いてドット
ブロットによりＰｓｐＡを含むことが示された。
れはＲｘ１株と同じＰｓｐＡを提供する）から全長Ｐｓ
ｐＡを回収した。この株を、培地が０．０３％のコリン
クロリドを含むことを除いて化学的に明確化れた培地
（Ｒｉｊｎ等：“Ｉｎｆｅｃｔ．＆Ｉｍｍｕｎ．”，１
９９０， Ｖｏｌ．２７，ｐｐ４４４−４４８）の１０
０μｌの中で成育させた。後期対数相においてそのバク
テリアを収穫（約５×１０7 ＣＦＵ／ｍｌ）し、そして
塩水２０ｍｌで５回洗浄し、そして２０００Ｇにおいて
１０分間遠心分離した。各洗浄とともにバクテリアを分
離して上澄液を捨てた。次にこの洗浄した細胞を２％コ
リンクロリドの５ｍｌで溶離させ、そしてその溶離した
物質はモノクローナル抗体ＸｉＲ２７８を用いてドット
ブロットによりＰｓｐＡを含むことが示された。
【００５３】ＰｓｐＡ遺伝子の上流部位の欠落のために
ＰｓｐＡを産生しないＷＧ４４．１株のＳ．ｐｎｅｕｍ
ｏｎｉａｅ〔ＭｃＤａｎｉｅｌ等（ＩＩＩ）〕について
同じ操作を実施した。この物質はＲ３６Ａからの抽出物
の中に存在すると考えられる同じ一般的不純物を含むコ
ントロール群を与えた。２％コリンクロリドにより溶離
させることによりその洗浄したＷＧ４４．１細胞から回
収した物質は、予想されたとおり、ドットブロットによ
って検出可能なＰｓｐＡを含まなかった。投与のために
このＲ３６ＡからのＰｓｐＡ調剤を１：２に希釈した。
この溶液１２μｌはアジュバントとして添加したコレラ
毒素Ｂサブユニット（ＣＴＢ）の５μｇを含んだが、こ
れを各ＢＡＬＢ．ｃＪマウスの鼻孔の中に滴下した。３
２日又は４２日の後、免疫化わ同じ方法で繰り返した。
コントロール群として何匹かのマウスをＷＧ４４．１
Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ株からの同じ調剤により免疫
化させた。最後の群は免疫化させないままに残した。第
３回目の投与の７日後にそれら免疫化されたマウスにＡ
６６ Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅの２×１０6 ＣＦＵ
（１００×ＬＤ50）を気管内接種した。
ＰｓｐＡを産生しないＷＧ４４．１株のＳ．ｐｎｅｕｍ
ｏｎｉａｅ〔ＭｃＤａｎｉｅｌ等（ＩＩＩ）〕について
同じ操作を実施した。この物質はＲ３６Ａからの抽出物
の中に存在すると考えられる同じ一般的不純物を含むコ
ントロール群を与えた。２％コリンクロリドにより溶離
させることによりその洗浄したＷＧ４４．１細胞から回
収した物質は、予想されたとおり、ドットブロットによ
って検出可能なＰｓｐＡを含まなかった。投与のために
このＲ３６ＡからのＰｓｐＡ調剤を１：２に希釈した。
この溶液１２μｌはアジュバントとして添加したコレラ
毒素Ｂサブユニット（ＣＴＢ）の５μｇを含んだが、こ
れを各ＢＡＬＢ．ｃＪマウスの鼻孔の中に滴下した。３
２日又は４２日の後、免疫化わ同じ方法で繰り返した。
コントロール群として何匹かのマウスをＷＧ４４．１
Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ株からの同じ調剤により免疫
化させた。最後の群は免疫化させないままに残した。第
３回目の投与の７日後にそれら免疫化されたマウスにＡ
６６ Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅの２×１０6 ＣＦＵ
（１００×ＬＤ50）を気管内接種した。
【００５４】上に記述したとほとんど同じ手順で免疫化
させたマウスの別ないくつかの群について第３回目の免
疫化処理の７日後に得られた血清について活性の評価を
も実施した。
させたマウスの別ないくつかの群について第３回目の免
疫化処理の７日後に得られた血清について活性の評価を
も実施した。
【００５５】得られた結果を下記表１０及び１１に示
す。
す。
【００５６】
【表１０】
【００５７】
【表１１】 表１０に見られるように、注射の２４時間後に免疫化マ
ウス及び模擬免疫化マウスはそれらの血液の中に高い水
準の肺炎球菌を有していた。これらのマウスは全て試験
感作接種の３日後に死亡した。ＰｓｐＡで免疫化したマ
ウスは第３日目になんら検出し得る肺炎球菌を示さず、
そして全て感染に生き残った。これらのデータはＰｓｐ
Ａにより鼻内免疫化処理することによって肺の感作試験
に対して防御することができることを明らかに示してい
るけれども、用いたＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅの各株は
血中でよく生存し、そしてマウスに静脈内注射したとき
は迅速な致死をもたらす（ＬＤ50＜１０2 ）。すなわ
ち、死亡に対する防御は敗血症によるものであったと考
えられ、そして肺の感染の防御が肺において誘発され
た。例１０ Ｒ３６ＡのＰｓｐＡを用いる経粘膜免疫化は莢膜型３の
Ａ６６のＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅによる気管内（ｉ．
ｔ．）及び全身的（ｉ．ｖ．）試験感作処理に対して防
御をもたらすことができる。
ウス及び模擬免疫化マウスはそれらの血液の中に高い水
準の肺炎球菌を有していた。これらのマウスは全て試験
感作接種の３日後に死亡した。ＰｓｐＡで免疫化したマ
ウスは第３日目になんら検出し得る肺炎球菌を示さず、
そして全て感染に生き残った。これらのデータはＰｓｐ
Ａにより鼻内免疫化処理することによって肺の感作試験
に対して防御することができることを明らかに示してい
るけれども、用いたＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅの各株は
血中でよく生存し、そしてマウスに静脈内注射したとき
は迅速な致死をもたらす（ＬＤ50＜１０2 ）。すなわ
ち、死亡に対する防御は敗血症によるものであったと考
えられ、そして肺の感染の防御が肺において誘発され
た。例１０ Ｒ３６ＡのＰｓｐＡを用いる経粘膜免疫化は莢膜型３の
Ａ６６のＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅによる気管内（ｉ．
ｔ．）及び全身的（ｉ．ｖ．）試験感作処理に対して防
御をもたらすことができる。
【００５８】ＢＡＬＢマウスを１０日間の間隔で１５０
ｎｇのＰｓｐＡにより鼻内的に３回免疫化処理した。各
注射とともにそれらは精製した５μｇのＣＴＢをも受け
取った。最後の免疫化処理は塩水中で与えた。コントロ
ール群のマウスは２回のＣＴＢ注射を受けたが、Ｐｓｐ
Ａは投与されなかった。最後の注射の４週間後に各マウ
スにＡ６６の３型のＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ株をｉ．
ｔ．又はｉ．ｖ．経路で表１２に示した投与量で試験感
作接種した。本発明者等は鼻内免疫化処理が試験感作の
ｉ．ｔ．経路及びｉ．ｖ．経路の両方による全身的感染
に対する防護をもたらし得たことを観測した。ｉ．ｔ．
経路の場合には免疫化は肺感染症及び、おそらくは敗血
症の致命的作用に対して防御をもたらした。肺炎球菌が
血液中に直接注射される静脈内感染の場合には免疫化処
理は敗血症に対する防御をもたらした。
ｎｇのＰｓｐＡにより鼻内的に３回免疫化処理した。各
注射とともにそれらは精製した５μｇのＣＴＢをも受け
取った。最後の免疫化処理は塩水中で与えた。コントロ
ール群のマウスは２回のＣＴＢ注射を受けたが、Ｐｓｐ
Ａは投与されなかった。最後の注射の４週間後に各マウ
スにＡ６６の３型のＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ株をｉ．
ｔ．又はｉ．ｖ．経路で表１２に示した投与量で試験感
作接種した。本発明者等は鼻内免疫化処理が試験感作の
ｉ．ｔ．経路及びｉ．ｖ．経路の両方による全身的感染
に対する防護をもたらし得たことを観測した。ｉ．ｔ．
経路の場合には免疫化は肺感染症及び、おそらくは敗血
症の致命的作用に対して防御をもたらした。肺炎球菌が
血液中に直接注射される静脈内感染の場合には免疫化処
理は敗血症に対する防御をもたらした。
【００５９】
【表１２】 本明細書の開示を要約すれば、本発明は、宿主における
肺炎球菌のコロニー形成を防止し、そして肺炎球菌によ
る全身感染に対して種々の形のＰｓｐＡを経粘膜投与、
中でも鼻内（鼻咽頭内）投与することによって防御する
ための方法を提供するものである。本発明の技術的範囲
内で種々の就職が可能である。
肺炎球菌のコロニー形成を防止し、そして肺炎球菌によ
る全身感染に対して種々の形のＰｓｐＡを経粘膜投与、
中でも鼻内（鼻咽頭内）投与することによって防御する
ための方法を提供するものである。本発明の技術的範囲
内で種々の就職が可能である。
【００６０】参考文献
【００６１】
【表１３】
【００６２】
【表１４】
【００６３】
【表１５】
【００６４】
【表１６】
【００６５】
【表１７】
【００６６】
【表１８】
【００６７】
【表１９】
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ６１Ｋ 35/74 Ｂ 7431−4Ｃ 39/09 39/39 (72)発明者 ホン−ジン ウー アメリカ合衆国 35216 アラバマ州 バ ーミンガム、ホワイティング ロード 2191
Claims (12)
- 【請求項１】 肺炎球菌への感染に対して宿主を免疫化
する方法に用いるための経粘膜投与剤において、この経
粘膜投与剤が肺炎球菌の表面蛋白質Ａ（ＰｓｐＡ）、又
は少なくとも１つの防御誘発性エピトープを含むそのよ
うなＰｓｐＡの少なくとも１つの断片を含み、そして上
記方法が上記投与剤の免疫形成量を宿主に鼻内的に投与
することよりなる、上記経粘膜投与剤。 - 【請求項２】 上記ＰｓｐＡが全肺炎球菌殺菌物又は肺
炎球菌の溶菌物の形である、免疫化方法に用いるための
請求項１の投与剤。 - 【請求項３】 上記ＰｓｐＡが分離して精製したＰｓｐ
Ａ又はこのものの免疫原性断片の形である、免疫化方法
に用いるための請求項１の投与剤。 - 【請求項４】 上記ＰｓｐＡを免疫アジュバントと組み
合わせて投与する、免疫化方法に用いるための請求項１
の投与剤。 - 【請求項５】 免疫アジュバントがコレラ毒素のＢサブ
ユニットである、免疫化方法に用いるための請求項４の
投与剤。 - 【請求項６】 上記経粘膜投与を鼻内的に行なって肺炎
球菌のコロニー形成と全身感染との両方に対する宿主の
防御をもたらす、免疫化方法に用いるための請求項１の
投与剤。 - 【請求項７】 上記経粘膜投与を鼻内的に行なって肺感
染に対する宿主の防御をもたらす、免疫化方法に用いる
ための請求項１の投与剤。 - 【請求項８】 上記経粘膜投与を鼻内的に行なって、肺
感染として開始される感染に対する宿主の防御をもたら
す、免疫化方法に用いるための請求項１の投与剤。 - 【請求項９】 鼻咽頭におけるＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａ
ｅによるコロニー形成に対して宿主を免疫化する方法に
用いるための経粘膜投与剤において、この経粘膜投与剤
が全肺炎球菌殺菌物、肺炎球菌の溶菌物、又は分離して
精製した肺炎球菌の表面蛋白質Ａ（ＰｓｐＡ）或いはこ
のものの免疫原性断片の形でＰｓｐＡを含み、そして上
記方法が上記投与剤の免疫形成量を宿主に鼻内的に投与
することよりなる、上記経粘膜投与剤。 - 【請求項１０】 上記ＰｓｐＡを免疫助成的量のコレラ
毒素のＢサブユニット（ＣＴＢ）と組み合わせて鼻内的
に投与する、免疫化方法に用いるための請求項９の投与
剤。 - 【請求項１１】 肺炎球菌の運搬及び肺炎球菌性疾病を
防止するための、免疫化方法に用いるための請求項９の
投与剤。 - 【請求項１２】 鼻咽頭におけるＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉ
ａｅによるコロニー形成に対して宿主を防御するための
鼻内投与用ワクチン組成物において、 全肺炎球菌殺菌物、肺炎球菌の溶菌物、又は少なくとも
１つの防御誘発性エピトープを含む、分離して精製した
肺炎球菌の表面蛋白質Ａ（ＰｓｐＡ）或いはこのものの
免疫原性断片の形のＰｓｐＡの有効量と、 コレラ毒素のＢサブユニットの免疫助成的量と、及びそ
れらの調剤的担体とを含む、上記ワクチン組成物。
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
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