JPH10509795A - 胃ガンのリスクのスクリーニング方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本体部領域または幽門洞領域の萎縮、または、全胃の粘膜の萎縮、更に、原因となるヘリコバクター ピロリ感染を検出するために、血清からの血清ペプシノーゲンＩとガストリン−１７との測定と、これらの測定をサポートするためのヘリコバクター ピロリ抗体の測定とを組み合わせて使用し、これによって、胃ガンのリスクを評価し、必要な胃鏡検査と追跡調査を計画することが可能な、胃ガンのリスクのスクリーニング方法。

Description

【発明の詳細な説明】 胃ガンのリスクのスクリーニング方法 発明の背景 以下に、主として血液サンプルからのペプシノーゲンＩとガストリン−１７の 測定を用いて、胃ガンのリスクをスクリーニングする方法に関する背景情報が提 供される。 近年、胃ガンの新たな発症例は減少してはいるが、胃ガンは、まだ、最も一般 的な悪性疾患の１つである。フィンランドでは、年間１００万人当りほぼ２５０ 〜３００の新規発症例が登録されている。５０歳以上の年齢集団においては、胃 ガンの発症例は２３５０と推定されていて、これは、この年齢集団の約３／１０ ００の割合である（Ｆｉｎｎｉｓｈ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｇｉｓｔｒｙ−Ｔｈｅ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｆｏｒ Ｓｔａｔｉｓ−ｔｉｃａｌ ａｎｄ Ｅｐｉｄ ｅｍｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １９９３）。フィ ンランドの他にも、アイスランド、南アメリカ、そして特に日本において胃ガン の発症率が高い。 特定の処置方法がないので、胃ガンの予知は、通常、不満足なものである。現 在、胃ガンをうまく処理する唯 一可能な方法は、その早期検出と完全摘出外科手術である。 胃ガンは、その初期段階において、必ずしも、なんらかの症状を示すものでは ない。症状が現れるのが遅ければ、当然、その患者が治療を受けることが遅れる 。他方、胃ガンの初期段階における臨床的発見方法は、非特定的であることが多 い。胃ガンの一次検診方法は、現在では、胃鏡検査と生体組織検査、およびこれ らに関連する、細胞および組織などを吸引したものの細胞学（ａｓｐｉ−ｒａｔ ｉｏｎ ｃｙｔｏｌｏｇｙ）である。上腹部の痛みや胃腸管の出血などの症状を 調べるために通常の胃鏡検査を行ったとしても、このような方法によって発見さ れる症状を伴う胃ガンは、既にあまりにも進行しており、従って手術することが 出来ないことが多い。更に、各種免疫学的方法によって一次検診を改善する試み が行われているが、十分に特定的な免疫学的方法の開発はまだ成功していない。 一般大衆中において、初期段階の胃ガンを患っている可能性のある無症状の人 を容易にかつ適度のコストで判定することが可能な手段を見つけ出すことが、主 要な課 題である。判定後、これらの人々は、即座に、胃鏡検査によって検査されるべき である。同時に、追跡調査の必要がある前悪性の胃の変化を示す人々を見つけ出 すことが可能であろう。 胃ガンに先だって、慢性萎縮性胃炎、悪性貧血症（ｐｅｒｎｉｃｉｏｕｓ ａ ｎａｅｍｉａ），胃潰瘍（ｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ ｕｌｃｅｒ），胃ポリープ 、及びメネトリエ（Ｍｅｎｅｔｒｉｅｒ）病（巨大肥大性胃炎（ｇｉａｎｔ ｈ ｙｐｅｒｔｒｏｐｈｉｃ ｇａｓｔｒｉｔｉｓ））等の様々な胃の疾患または状 態（いわゆる、前癌状態）が発生する可能性がある。粘膜の明らかに識別できる 変化は、形成異常症と腺腫である。これらの状態は、一般人と比較して、約４〜 ５倍の癌のリスクと関連している。ほとんどすべての疾患において、そのリスク は慢性萎縮性胃炎によって仲介されることが確証されている。 慢性胃炎とは、胃粘膜の長引く炎症状態を意味する。この病気は、大きく、い わゆる皮相状のものと萎縮状のものとに分けることが出来る。皮相状胃炎におい て、炎症性細胞浸潤は、表面上皮の下部に集中している。炎症 が進行し、特定の胃分泌腺の間に拡散したとき、これを慢性萎縮性胃炎と呼ぶ。 この場合、胃粘膜の正常な腺組織の少なくとも一部が、変質形成（ｍｅｔａｐｌ ａｓｔｉｃ）によって置換されている。 胃の本体部に萎縮性胃炎を患う患者における胃ガンの相対的リスクは、フィン ランドの癌統計からの算出で、健全な粘膜を有する人と比較して、約４〜５倍で あると推定されている。更に、内生因子欠乏症およびビタミンＢ１２吸収障害と によって、悪性貧血症を発病するリスクもある。幽門洞領域の重度の萎縮の場合 には、そのリスクは１８倍にもなる。もしも萎縮変化が幽門洞領域と本体領域と の両方に現れている場合（全領域の胃炎（ｐａｎｇａｓｔｒｉｔｉｓ））、リス クは更に９０倍にもなりうる（シッポネン（Ｓｉｐｐｏｎｅｎ），ケッキ（Ｋｅ ｋｋｉ），ハーパコスキー（Ｈａａｐａｋｏｓｋｉ）， （Ｓｉｕｒａｌａ） １９８５）。 血清中のペプシノーゲンとガストリン−１７とを測定することによる前段階の胃 ガンのスクリーニング 胃ペプシノーゲン 電気泳動によって、ヒトの胃粘膜から７種類のペプシノーゲンを識別すること が可能である（サムロフ（Ｓａｍｌｏｆｆ） １９６９）。これらの内、泳動度 の早い（ｆａｓｔｅｓｔ）５つのものが、免疫学的に均質なペプシノーゲンＩの グループを形成する。他の２つは、ペプシノーゲンＩＩグループを形成する。前 記グループＩペプシノーゲンは、胃の本体領域の主細胞と粘膜分泌細胞とにおい てのみ合成される。これに対して、グループＩＩペプシノーゲンは、全胃領域に わたって腺中で、更に、或る程度、十二指腸の上部においてブルンナー腺（十二 指腸腺）で形成される（サムロフ（Ｓａｍｌｏｆｆ）およびリープマン（Ｌｉｅ ｂｍａｎ）１９７３： ウェインスタイン（Ｗｅｉｎｓｔｅｉｎ），レチャンゴ （Ｌｅｃｈａｎｇｏ），サムロフ（Ｓａｍｌｏｆｆ）他、１９７７）。健全な人 の血清中において、ペプシノーゲンＩの濃度は、ペプシノーゲンＩＩの濃度の約 ６倍である（サムロフ（Ｓａｍｌｏｆｆ） １９８２）。胃の本体領域の萎縮性 胃炎の場合には、血清ペプシノーゲンＩ濃度は低下し、これに対して、血清ペプ シノーゲンＩＩ濃度は前のレベルのままである。従って、血清ペプシノーゲンＩ 濃度は、胃の本体領域のペ プシノーゲン分泌細胞の数と、その状態とをかなり良好に反映している。胃の本 体領域の萎縮性胃炎が深刻であればある程、血清ペプシノーゲンＩ濃度は低い（ タム（Ｔａｍｍ），ヴィラコ（Ｖｉｌｌａｋｏ），ハルコー １９８４； ケッキ（Ｋｅｋｋｉ），サムロフ（Ｓａｍｌｏｆｆ），ヴァリス（ Ｖａｒｉｓ）およびイ シノーゲンＩ濃度が低いということは、９０％以上の感度で、ほとんど１００％ の特定性で重度の萎縮性本体胃炎を示す（ヴァリス（Ｖａｒｉｓ），ケッキ（Ｋ ｅｋｋｉ）， （Ｓｉｐｐｏｎｅｎ）およびサムロフ（Ｓａｍｌｏｆｆ） １９９１）。 無症状の５０歳以上の喫煙男性を、低血清ペプシノーゲンＩ濃度に基づいて胃 鏡検査のためにスクリーニングしたフィンランドにおける研究（ヴァリス（Ｖａ ｒｉｓ）， （Ｈｅｉｎｏｎｅｎ），未公開）において、胃鏡検査を受けた者の内、４．７％ （萎縮性胃炎を患う患者の内の ５．８％）に腫瘍性（ｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ）変化が観察され、１％において無 症状前癌状態（表１及び表２）が観察された。この研究において、前記低血清ペ プシノーゲンＩテスト結果に基づき、多数の、即座の外科手術を必要とする胃ガ ンの発症例と、後の胃鏡検査を必要とする前癌状態（形成異常）とを判定するこ とができた。同時に、悪性貧血症を発病するリスクを有し、従って、将来、その 血液値をモニタするべきグループを見つけることも出来た。 疫学研究は、胃ガン患者の内の約２５％のみが低血清ペプシノーゲンＩレベル によって確定可能な重度の萎縮性本体胃炎を有していることを示している（シッ ポネン（Ｓｉｐｐｏｎｅｎ），ケッキ（Ｋｅｋｋｉ），ハーパコスキー（Ｈａａ ｐａｋｏｓｋｉ）； イハメキ １９８５）。約６５％において、その癌は、幽門洞領域における萎縮症によって 先行されており、従って、これはペプシノーゲンＩ測定によって確かめることが 出来ない。 幽門洞領域のガストリン ガストリンは、胃腸管において少なくとも３つの形態で分泌され、これらすべ ての形態の免疫応答活性は、血清ガストリン（全血清ガストリン）が測定される ときに測定される。ガストリンのサブタイプは、いわゆるミニガストリン（Ｇ− １４）、小ガストリン（Ｇ−１７）、そして大ガストリン（Ｇ−３４）である（ グレゴリー（Ｇｒｅｇｏｒｙ） １９７４）。生理学的に最も重要なのは、ガス トリン−１７とガストリン−３４である。塩酸の分泌に対するガストリン−１７ の効果は、ガストリン−３４の６倍である（ウォルシュ（Ｗａｌｓｈ），アイセ ンバーグ（Ｉｓｅｎｂｅｒｇ），アンスフィールド（Ａｎｓｆｉｅｌｄ）および マックスウェル（Ｍａｘｗｅｌｌ） １９７６）。ガストリンは、いわゆるＧ− 細胞から分泌され、これらの細胞は、幽門洞と十二指腸との両方に現れる。ガス トリン分泌の最も重要な促進因子は、迷走神経の緊張およびタンパク質分解生成 物である。ガストリンの分泌は、ｐＨの２．５以下の低下によって減速される（ ウォルシュ（Ｗａｌｓｈ），リチャードソン（Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ）およびフ ォードトラン（Ｆｏｒｄｔｒａｎ） １９７５）。幽門洞から分泌されるガスト リンは９０％以上がガストリン−１７ タイプであり、これに対して、十二指腸ガストリンは、主として、ガストリン− ３４タイプである（バーソン（Ｂｅｒｓｏｎ）およびヤーロウ（Ｙａｌｏｗ） １９７１）。絶食状況において、血清中には、主としてガストリン−３４が見ら れ、これに対して、食後には、血清ガストリンは、ガストリン−１７タイプのも のである（レイマース（Ｌａｍｅｒｓ），ハリソン（Ｈａｒｒｉｓｏｎ），イッ ポリティ（Ｉｐｐｏｌｉｔｉ）およびウォルシュ（Ｗａｌｓｈ） １９７９）。 ガストリン−１７の分泌は、いわゆるタンパク質刺激テストによっても調べるこ とが出来る。このようなテストにおいて、絶食後の血液サンプルを、朝に採取し 、その後、患者は、タンパク質を豊富に含有する標準的な食事をとり、血液サン プルを１５分間隔で２時間にわたって採取する。約２０分後に最大の増加が明白 となる。 萎縮性幽門洞胃炎においては、幽門洞の粘膜が萎縮され、従って、そのガスト リン−１７分泌が減少し、血清中のその濃度が低下する。従って、血清中のガス トリン−１７の濃度が低下することは、幽門洞萎縮と、この領域における癌のリ スクの増大とのインジケータとなる。幽門洞の粘膜が萎縮されている場合、前記 タンパク質刺激テストにおける反応も低下し、これは、単なる濃度測定 よりもより感度の高い萎縮のインジケータであると考えられる。 胃のヘリコバクター ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉ）感染 ヘリコバクター ピロリは、胃粘膜の表面上皮細胞の近傍と、細胞隙間の粘液 に繁殖する螺旋形状のグラム陰性バクテリアである。このバクテリアは、明らか に、１人の人間から他の人間に経口で移されるものである。このバクテリアの胃 粘膜に対する効果は、炎症反応であり、これは、強力な炎症仲介物質を放出する ことによって補体（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ）を介して仲介される。急性段階後、 炎症は慢性胃炎へと変化する。慢性胃炎を患う患者において、その７０〜９０％ において、ヘリコバクター ピロリ感染を確定することができる（カラム（Ｃａ ｌａｍ） １９９４）。ヘリコバクター ピロリ感染と胃における慢性胃炎とが 密接に関連していることから、このバクテリア感染は胃ガンの発達における原因 因子であると規定されてきた。この理由により、感染の初期段階においてヘリコ バクター ピロリ菌を根絶するこによって、慢性胃炎に関連する萎縮の発達を阻 止し、従って、癌のリスクを低下させることが出来るのではな いかという可能性がある。 血清中の、ペプシノーゲンＩ−ガストリン−１７−ヘリコバクター ピロリ−抗 体測定の組合せ使用する胃ガンのスクリーニング 前記スクリーニングのために、好ましくは、１つのマイクロプレート上におい て、血清ペプシノーゲンＩ及びガストリン−１７濃度とヘリコバクター ピロリ 抗体とが同時に測定可能な方法が使用可能である。これにより、本体胃炎、幽門 洞胃炎または全流域の胃炎（ｐａｎｇａｓｔｒｉｔｉｓ）、更に、萎縮の１原因 であるヘリコバクター ピロリ感染を診断することができる。尚、重度の萎縮性 胃炎においては、胃粘膜中にヘリコバクター ピロリ菌は見つけることは出来な い。又、血清中の抗体は標準化されたものである。 ペプシノーゲンＩ測定のために、ペプシノーゲンＩ抗原を、ヒトの胃粘膜から 精製した。これを、チオール化とタンパク質−タンパク質接合とによって、ラビ ット又は羊の赤血球細胞に結合させ、ラビット又は羊を古典的方法によって免疫 化して抗ペプシノーゲンＩ抗体を産生させた。同じ技術によって、［Ｌｅｕ¹⁵］ −ガストリン−１７（Ｓｉｇｍａ Ｓ−９１４５，［Ｌｅｕ¹⁵］−ガス トリン−Ｉ）又はガストリン−１７フラグメント１−１３（Ｓｉｇｍａ Ｇ−６ ２６１）を、ラビットの自己由来（ａｕｔｏｌｏｇｉｃａｌ）赤血球細胞に結合 させ、これらのラビットをガストリン−１７に対して特異的な抗体を産生させる べく標準方法によって免疫化することによって、ガストリン−１７に対するポリ クローナル抗体を作った。ＢＳＡ−接合体でも、古典的方法でポリクローナル抗 体を作った。マウスにおいて、キログロブリンに接合された、［Ｌｅｕ¹⁵］−ガ ストリン−１７−誘導体で、古典的方法で、モノクローナル・ガストリン−１７ 抗体を作った。これらの特異的抗体を、タンパク質Ａ−親和性クロマトグラフィ で、あるいはいくつかのケースにおいては、ペプシノーゲンＩ又はガストリン− １７親和性クロマトグラフィで精製した。 ペプシノーゲンＩ測定 １．マイクロプレートのウェルを、＋４℃で１晩インキュベートすることによっ て、ポリクローナル抗体でコーティングする。 ２．前記ウェルを空にし、洗浄液で洗浄する。 ３．サンプルを、適当な希釈で添加し、最長１時間＋３７℃でインキュベートす る。 ４．前記ウェルを洗浄する。 ５．酵素標識化モノクローナル抗体を、適当な希釈で添加し、最長１時間＋３７ ℃でインキュベートする。 ６．前記ウェルを洗浄する。 ７．基質（発色性、蛍光性、または発光性基質）を添加し、最長３０分間室温で インキュベートする。 ８．反応を停止させ、吸収（吸光度）、蛍光または発光を測定し、較正曲線と比 較する。 いわゆる１工程ＥＬＩＳＡ法のように、サンプルと酵素標識化モノクローナル 抗体とを同時にインキュベートすることによって、前記方法をスピードアップす ることが出来る。使用可能なその他の方法もある。 別方法２（競合ＥＬＩＳＡ） １．サンプルと抗体とを複数のマイクロウェル上でインキュベートし、これによ って、サンプルの抗原が前記抗体に結合する。 ２．既知量の標識化抗原を添加すると、これが遊離の抗体を求めて試料中の抗原 と競合する。 ３．前記溶液を、予め二次抗体でコーティングしておいたマイクロウェルに移し 、最長１時間インキュベートする。 ４．未結合物質を洗浄除去する。 ５．基質を添加し、最長３０分間室温でインキュベートする。 ６．反応を停止させ、その結果を較正曲線と比較することによって評価する。 別の方法として、前記複数の抗原を同時に、及び／又は、二次抗体でコーティ ングしたマイクロプレート・ウェルに直接添加することが出来るが、この場合、 この方法の感度はそれほど良好ではない。この方法において、競合を、標識化抗 体とも行うことが可能である。 ガストリン−１７測定 １．ウェルをストレプトアビジン（ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ）でコーティング する。 ２．ビオチンで標識化した過剰量のガストリン−１７誘導体を添加し、平衡が達 成されるまでインキュベートする。 ３．サンプルとモノクローナル抗体とを添加し、これによって試料中のガストリ ン−１７とビオチン標識化ガストリン−１７とが前記抗体を求めて競合する。こ の混合物を１時間＋３７℃でインキュベートする。 ４．前記ウェルを洗浄する。 ５．酵素標識化二次抗体を添加し、約１時間インキュベートする。 ６．基質（蛍光性または発光性）を添加し、約３０分間室温でインキュベートす る。 ７．反応を停止し、蛍光または発光を読み取り、較正曲線と比較する。 ヘリコバクター ピロリ測定 ヘリコバクター ピロリ抗体の測定のために、多数の市販”キット”を利用す ることができる（例えば、Ｏｒｉｏｎ Ｐｙｌｏｒｉｓｅｔ ＥＩＡ−Ｇ，Ｐｙ ｌｏｒｉｓｅｔ ＥＩＡ−Ａ，ＲｏｃｈｅのＥＩＡ２Ｇ、Ｗｈｉｔｔａｋｅｒ ＢｉｏｐｒｏｄｕｃｔｓのＰｙｌｏｒｉｓｔａｔ）。ヘリコバクター ピロリ菌 から様々な方法で抗原を作ることができ（レルワラ−グルゲ（Ｌｅｌｗａｌａ− Ｇｕｒｕｇｅ），ニールソン（Ｎｉｌｓｓｏｎ），リュング（Ｌｊｕｎｇｈ）， ワド れらは市販もされている。我々がヘリコバクター ピロリ抗体の測定に使用する 方法は、概ね公知であり、前記菌から、酸性グリシンによって抽出された抗原は 、吸着 によって、マイクロプレート中のウェルに付着される。前記二次抗体（ラビット 抗−ヒトＩｇＧ）は、酵素（アルカリ・ホスフォターゼ、又は、場合によって は、ペルオキシダーゼ）によって標識化される。リン酸ｐ−ニトロフェニール（ 吸光）又は、リン酸−ウンベリフェリル（蛍光）が酵素基質として使用され、こ れによって、その吸光度（４０５ｎｍ）又は蛍光（３６０ｎｍ／４６０ｎｍ）を 測定することができる。 測定の感度 血清ペプシノーゲンＩの測定において、萎縮性胃炎のカットオフ値は、我々の 過去の研究によれば、対象となる方法について合意されている特異性と感度とに よって、２０〜３０μｇ／ｌの範囲であり、これは、約４５０〜６９０ｐｍｏｌ ／ｌ（ヴァリス（Ｖａｒｉｓ），シッポ （Ｈｅｉｎｏｎｅｎ），未公開）に対応している。正常な状態においては、ガス トリン−１７濃度は、２〜２５ｐｍｏｌ／ｌの範囲である。従って、前記血清ガ ストリン−１７濃度は、ペプシノーゲンＩ濃度の約１／１００である。萎縮性幽 門洞胃炎においてより低い 値を測定するならば、非常に感度の高い高度な方法が要求される。幽門洞領域の 萎縮において、血清ガストリン−１７測定のカットオフ値は、０．１〜２ｐｍｏ ｌ／ｌの範囲である。酵素標識によって、例えば高感度検出システムとして発光 測定方法を使用することによって、十分に高い感度を達成することが可能である 。我々がステロイドの測定に既に利用した（ハルコーネン （Ａｄｌｅｒｃｒｅｕｔｚ）およびグローマン（Ｇｒｏｍａｎ） １９７４）い わゆる酵素リサイクル反応を行うことによって、感度を更に増大することができ る。又、この場合においても、形成される生成物は、蛍光技術または発光技術の いずれかを使用して測定可能である。ヘリコバクター ピロリ陽性に対して、カ ットオフ・タイター（力価）は、２００〜５００である。胃の様々な部分におい て粘膜の萎縮を検出するための前記組合せ方法の使用は、表３に示されている。 表３によれば、血清ペプシノーゲンＩ濃度が、前記特異性方法によって、約２ ０〜３０μｇ／ｌの範囲である前記カットオフ値よりも低いとき、萎縮は胃の本 体領域に位置する。他方、血清ガストリン−１７濃度が、前記特異性方法によっ て、０．１〜２ｐｍｏｌ／ｌの範囲である前記カットオフ値よりも近いとき、萎 縮は胃の幽門洞領域に位置する。本体領域の萎縮において、ガストリン−１７値 は、前記参照値の上限よりも高い。相応じて全領域の胃炎（ｐａｎｇａｓｔｒｉ ｔｉｓ）においては、血清ペプシノーゲンＩ濃度は、前記カットオフ値よりも低 く、これに対して、ガストリン−１７濃度は前記参照値の下限にある。萎縮の位 置は、また、血清ガストリン−１７濃度を、ベースライン状態で測定し、また、 タンパク質を豊富に含有する標準的食事後に測定するタンパク質刺激テストを使 用しても判定可能である。応答（前記ベースライン状態との比較における血清ガ ストリン−１７の増加）は、幽門洞領域のみの萎縮において大幅に低下し、全胃 領域の粘膜の萎縮においては僅かに減少する。他方、幽門洞の粘膜は健全である が、本体が萎縮している場合には、応答は正常かあるいは増加する。

【手続補正書】特許法第１８４条の８第１項 【提出日】１９９７年２月２０日 【補正内容】 請求の範囲 １． 胃の本体または幽門洞領域の萎縮、あるいは、全胃の粘膜の萎縮を検出す ることによって血清から胃ガンのリスクをスクリーニングする方法であって、前 記血清から、ペプシノーゲンＩとガストリン−１７との濃度を定量測定し、得ら れたこれらの値を、測定対象の物質のための方法特異的カットオフ値および参照 値と比較することを特徴とする方法であって前記カットオフ値より低い値は、本 体または幽門洞における重度の萎縮の位置をそれぞれ示す方法。 ２． 請求項１の方法であって、前記血清ガストリン−１７濃度は、更に、この 濃度をベースライン状態で測定し、かつ、タンパク質の豊富な標準的食事後にお いて測定することによるタンパク質刺激テストを使用しても測定されることを特 徴とする。 ３． 請求項１又は２の方法であって、組合せ免疫学的ペプシノーゲンＩ及びガ ストリン−１７法を、プラスチック、ガラス又はセルロースの支持体上で使用す ることを特徴とする。 ４． 請求項３の方法であって、前記支持体はマイクロプレート・ウェルである ことを特徴とする。 ５． 請求項１〜４のいずれかの方法であって、前記ペ プシノーゲンＩ及びガストリン−１７の測定に吸収（吸光度）、蛍光または発光 検出法を使用することを特徴とする。 ６． 請求項３〜５のいずれかの方法であって、前記ペプシノーゲンＩ濃度の測 定のために、ペプシノーゲンＩに対するポリクローナル又はモノクローナル抗体 を使用することを特徴とする。 ７． 請求項３〜６のいずれかの方法であって、前記ガストリン−１７濃度の測 定のために、ガストリン−１７に対する特異的ポリ又はモノクローナル抗体を使 用することを特徴とする。 ８． 請求項７の方法であって、ガストリン−１７に対するポリクローナル抗体 を、ラビット又は羊などの動物の、ガストリン・フラグメント１−１３，［Ｌｅ ｕ¹⁵］−ガストリン−１７による免疫化、または、豚などの動物の胃から単離さ れたガストリン−１７抗原の使用によって得ることを特徴とする。 ９． 請求項７の方法であって、モノクローナル抗体が、前記［Ｌｅｕ¹⁵］−ガ ストリン−１７抗原を使用してマウス中において産生されたものであることを特 徴とする。 １０．前記請求項のいずれかの方法であって、更に、ヘ リコバクター ピロリ抗体測定と組み合わされた方法であることを特徴とする。 １１．前記請求項のいずれかの方法であつて、前記ペプシノーゲンＩ、ガストリ ン−１７及びヘリコバクターピロリ測定方法がキット法となるように組み合わさ れ、これらの測定が、ＥＬＩＳＡ法に基づき、ポリクローナル及びモノクローナ ル抗体と、更に、ストレプトアビジン−ビオチン−相互作用、更に、吸収（吸光 ）、蛍光または発光に基づく高感度検出法を使用した方法によって、１つのマイ クロプレート・ウェル上にて同時に行われることを特徴とする。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 ＦＩ Ｇ０１Ｎ 33/573 Ｇ０１Ｎ 33/573 Ａ 33/577 33/577 Ｂ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，Ｍ Ｃ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ， ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，Ｕ Ｇ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，Ｂ Ｙ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ， ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，Ｌ Ｖ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ， ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，Ｖ Ｎ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １． 胃の本体または幽門洞領域の萎縮、あるいは、全胃領域の粘膜の萎縮を検 出することによって血清から胃ガンのリスクをスクリーニングする方法であって 、前記血清から、ペプシノーゲンＩとガストリン−１７との濃度を定量測定し、 得られたこれらの値を、測定対象物質のための方法特異的カットオフ値と比較す ることを特徴とする方法。 ２． 請求項１の方法であって、前記得られたペプシノーゲンＩとガストリン− １７との濃度値は、測定対象物質の参照値とも比較されることを特徴とする。 ３． 請求項１又は２の方法であって、前記血清ガストリン−１７濃度は、更に 、この濃度をベースライン状態で測定し、かつ、タンパク質の豊富な標準的食事 後において測定することによるタンパク質刺激テストを使用しても測定されるこ とを特徴とする。 ４． 請求項１，２又は３の方法であって、組合せ免疫学的ペプシノーゲンＩ及 びガストリン−１７法を、プラスチック、ガラス又はセルロースの支持体上で使 用することを特徴とする。 ５． 請求項４の方法であって、前記支持体はマイクロプレート・ウェルである ことを特徴とする。 ６． 請求項１〜５のいずれかの方法であって、前記ペプシノーゲンＩ及びガス トリン−１７の測定に吸収（吸光度）、蛍光または発光検出法を使用することを 特徴とする。 ７． 請求項４〜６のいずれかの方法であって、前記ペプシノーゲンＩ濃度の測 定のために、ペプシノーゲンＩに対するポリクローナル又はモノクローナル抗体 を使用することを特徴とする。 ８． 請求項４〜７のいずれかの方法であって、前記ガストリン−１７濃度の測 定のために、ガストリン−１７に対する特異的ポリ又はモノクローナル抗体を使 用することを特徴とする。 ９． 請求項８の方法であって、ガストリン−１７に対するポリクローナル抗体 を、ラビット又は羊などの動物の、ガストリン・フラグメント１−１３，［Ｌｅ ｕ¹⁵］−ガストリン−１７による免疫化、または、豚などの動物の胃から単離さ れたガストリン−１７抗原の使用によって得ることを特徴とする。 １０．請求項８の方法であって、モノクローナル抗体が、前記［Ｌｅｕ¹⁵］−ガ ストリン−１７抗原を使用してマウス中において産生されたものであることを特 徴とする。 １１．前記請求項のいずれかの方法であって、更に、ヘリコバクター ピロリ抗 体測定と組み合わされた方法であることを特徴とする。 １２．前記請求項のいずれかの方法であつて、前記ペプシノーゲンＩ、ガストリ ン−１７及びヘリコバクターピロリ測定方法がキット法となるように組み合わさ れ、これらの測定が、ＥＬＩＳＡ法に基づき、ポリクローナル及びモノクローナ ル抗体と、更に、ストレプトアビジン−ビオチン−相互作用、更に、吸収（吸光 ）、蛍光または発光に基づく高感度検出法を使用した方法によって、１つのマイ クロプレート・ウェル上にて同時に行われることを特徴とする。