JP2000502070A - ヘリコバクター・ピロリによる感染の治療および診断 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、ヘリコバクター・ピロリ由来のウレアーゼを検出するための作用物質、ならびに、ヘリコバクター・ピロリによる感染（症）の治療または診断に用いられる作用物質およびエピトープを提供し、さらに、それらに用いられる診断テストおよび診断キット、ならびに薬剤の製造において該作用物質およびエピト−プを使用することに関する。

Description

【発明の詳細な説明】 ヘリコバクター・ピロリによる感染の治療および診断 本発明は、ヘリコバクター・ピロリ（Helicobacter pylori）による感染（症 ）の予防、治療および診断に関する。 ヘリコバクター・ピロリは、最近、胃潰瘍、十二指腸潰瘍、胃癌および萎縮性 胃炎の原因になると報告されている(Lee、A 他、1993，Infect．Immun.，61：16 01-1610)。これに関連する臨床学上の問題は、以下のとおりである。 １． 侵入性のバイオプシー（生検）を必要とせずに診断することが困難であり 、そのため、血清学的テストにおいて多数の手法が試みられているが、どれが最 良であるかということに関して見解は一致していない（Weiss，J．他、1994，J ．Clin．Microbiol.， 32：1663-1668）。 ２．従来の抗微生物化学療法では治療が困難であり（Nagata他、1992，Infect.I mmun.，60：4826-4831）、このため、ビスマス（Bismuth）のような抗潰瘍薬と 組み合わせることが行われている(Peterson，W．L.，1991，New England J．Med .，324：1043-1048)。しかしながら、潰瘍は再発しがちである。 （キー抗原の１つである）ウレアーゼに対する抗体が感染のマーカーであるこ とが示され(Nagata他、1992，Infect．Immun.，60：4826-4831)、ウレアーゼを 接種することによりある程度の防御が得られている（Lee，A 他、上述、および Blachard，T．G．他、1995，Infect．Immun.，63：1394-1399）。 ヘリコバクター・ピロリのウレアーゼ遺伝子が単離され配列決定され（Wwiss, J．他、上述）、さらに、該遺伝子によってコードされたタンパク質の配列決定 も行われたが、キーエピトープは未だ明らかにされていない。 本発明は、ヘリコバクター・ピロリからウレアーゼを検出するための作用物質 (agent)、ならびに、ヘリコバクター・ピロリによる感染（症）を治療または診 断するために用いられる作用物質(agents)およびエピトープを提供し、さらに、 そのための診断テストおよび診断キットならびに薬剤の製造において該作用物質 およびエピトープを使用することに関する。 本発明に従えば、ureA由来のＬＴＰＫＥＬＤ(SEQ ID NO:3(配列番号：３))、 な らびにureB由来のＦＩＳＰ（SEQ ID NO:6(配列番号：６)）、ＰＴＡＦ(SEQ ID N O:13(配列番号：１３))、ＥＶＧＫＶＡ(SEQ ID NO:11(配列番号：11))およびＳ ＩＰから成る群より選ばれるエピトープに特異的に結合する作用物質を用いて、 ヘリコバクター・ピロリからウレアーゼを検出する方法、またはヘリコバクター ・ピロリによる感染を治療または診断する方法が提供される。 エピトープとは、そのアナログ（同じエピトープを発現する分子）も指称する ものとする。そのような分子としては、例えば、当該エピトープのミモトープ（ mimotope）(Geysen，H．M．他、1987，Journal of Immunological Methods,102 : 259-274)が挙げられる。 作用物質としては、ウレアーゼの（触媒）活性を抑制するものが挙げられる。 作用物質としては、抗体、または抗原結合生のある断片（フラグメント）が挙 げられる。 該抗体は、全抗体またはその抗原結合性フラグメントのいずれでもよく、一般 に、いずれの免疫グロブリンクラスに属していてもよい。すなわち、例えば、免 疫グロブリンＭ抗体または免疫グロブリンＧ抗体である。該抗体またはそのフラ グメントは、例えば、動物性のもの、例えば、哺乳動物由来、例えば、マウス、 ラット、ヒツジまたはヒト由来のものである。また、天然の抗体またはそのフラ グメントであってもよく、さらに、所望に応じて、組換え抗体フラグメント、す なわち、組換えＤＮＡ技術を用いて産生された抗体または抗体フラグメントでも よい。 組換えによる抗体または抗体フラグメントとしては、(1)抗原結合性部位の少 なくとも一部が異種の抗体由来のもの、例えば、１つの抗体の超可変または相補 性決定領域が第２の別異の抗体の可変フレームワーク領域にグラフト結合された 抗体（例えば、ヨーロッパ特許明細書第２３９４００号に記載されたもの）；(2 )非Fv配列が他の異なる抗体の非Fv配列によって置換されている組換え抗体また はフラグメント（例えば、ヨーロッパ特許明細書第１７１４６９号、１７３４９ ４号および１９４２７６号に記載されているもの）；または(3)組換えによる抗 体またはフラグメントであり実質的に天然の免疫グロブリン構造を保有している が、ヒンジ領域はその天然免疫グロブリンに見出されるのとは異なる数のシステ イン残基を有しながら、組換え抗体またはフラグメントの表面ポケットにある１ つまた はそれ以上のシステイン残基が天然の免疫グロブリンに存在する他のアミノ酸残 基を置換しているもの（例えば、国際特許出願ＰＣＴ／ＧＢ８８／００７３０お よびＰＣＴ／ＧＢ８８／００７２９に記載されているもの）が挙げられる。 抗体または抗体フラグメントは、ポリクローナル源でもよくモノクローナル源 でもよい。それらは、少なくとも１つのエピトープに特異性を有するものである 。 抗原結合性の抗体フラグメントとしては、例えば、Ｆ（ａｂ´）₂、Ｆａｂ´ またはＦａｂフラグメントのような全抗体をタンパク分解酵素で切断したもの、 あるいは、Fvフラグメントのような組換えＤＮＡ技術で得られたフラグメント（ 例えば、国際特許出願ＰＣＴ／ＧＢ８８／１７４７に記載されたもの）が挙げら れる。 本発明に従う抗体は、感染中に発現されたタンパク質を抗原として用いる周知 の免疫学的手法により調製することができる。すなわち、例えば、任意の適当な ホスト（宿主）に該タンパク質を注入し、適当な精製および／または濃縮（例え ば、アフィニティ媒体として固定化タンパクを用いるアフィニティクロマトグラ フィによる）の後、血清を集めることにより所望のポリクローナル抗体が得られ る。別の方法として、タンパク質注入ホストから牌臓細胞またはリンパ球を回収 し、例えばKohler等の方法（1976，Eur．J．Immunol.，６：511)を用いて不死化 し、得られた細胞を分離することによりモノクローナル抗体を産生する単一の遺 伝子系を得ることができる。抗体フラグメントの製造には慣用技術、例えばペプ シンやパパインによる酵素分解を用いることができる。本発明に従い組換え抗体 を産生することが所望される場合には、例えば、ヨーロッパ特許明細書１７１４ ６９、１７３４９４、１９４２７６および２３９４００号に記載されている方法 を用いて該抗体を産生することができる。 本発明に従う抗体は、検出可能なラベルで標識することができ、あるいはエフ ェクター分子（作動分子）、例えば、抗菌剤のような薬剤またはトキシンまたは 酵素と結合させることもでき、本発明はそのような標識化抗体または抗体結合体 も包含する。 本発明に従えば、さらに、ヘリコバクター・ピロリ感染由来のウレアーゼの診 断テストが提供され、該テストは、 ｉ）被検サンプルを本発明に従う少なくとも１つの作用物質と反応させる工程； ii）結合反応を検出する工程；さらに iii)該結合反応の検出結果をヘリコバクター・ピロリ由来のウレアーゼの存在と 相関させる工程； を含む。 このテストは患者からのサンプルについてヘリコバクター・ピロリの感染を調 べるのに用いることができる。この診断テストの本質は、エピトープ、すなわち ウレアーゼタンパク質がホスト生体に存在しているか否かを判定することにある 。該テストは、一般に、ホスト由来の体液を本発明に従う作用物質と接触させ、 複合物質を検出することによって実施される。 かくして、作用物質が抗体から成る場合、ヘリコバクター・ピロリの診断テス ト法は、 ｉ）患者の血清サンプルを本発明に従う少なくとも１つの作用物質と反応させる 工程； ii）結合反応を検出する工程；さらに iii)該結合反応の検出結果をヘリコバクター・ピロリの感染と相関させる工程； を含む。 本発明のテストは、ureAに特異的に結合する少なくとも１つの作用物質および ureBに特異的に結合する少なくとも１つの作用物質を使用することができる。診 断テストとして適当な方式は周知のものであり、例えば、間接ＥＬＩＳＡ、ラジ オイムオアッセイおよびラテックス凝集アッセイが挙げられる。 さらに、本発明に従えば、本発明の診断テストを実施するためのキットが提供 される。 本発明は、さらに、ヘリコバクター・ピロリによる感染を治療するための薬剤 の製造に本発明の作用物質を使用することに関する。治療とは、勿論、事後的治 療および／または予防を指称する。 治療のために用いられる場合、本発明の作用物質は、薬剤的に許容できる担体 （キャリア）、稀釈剤および賦形剤とともに使用することができる（例えば、米 国ペンシルバニア州EastonのMack出版社の「レミングトンの薬剤学と米国薬局方 (Remington's Pharmaceutical Scienses and US Pharmacopoeia （1984）参照） 。 別の用途として、本発明に従う作用物質は、慣用技術を用いて、ヘリコバクタ ー・ピロリの感染（症）治療用の活性抑制物質を得るためのスクリーニングに採 用することもできる。 本発明に従えば、さらに、ヘリコバクター・ピロリ由来のウレアーゼを検出し 、またはヘリコバクター・ピロリによる感染（症）を治療もしくは診断するため の方法であって、ureA 由来のＬＴＰＫＥＬＤ（配列番号：３）、ならびにureB 由来のＦＩＳＰ（配列番号：６）、ＰＴＡＦ（配列番号：13）、ＥＶＧＫＶＡ（ 配列番号：11）およびＳＩＰから成る群より選ばれるエピトープに特異的に結合 する作用物質を用いることから成る方法が提供される。 本発明は、別の視点として、ヘリコバクター・ピロリ由来のウレアーゼの検出 方法、またはヘリコバクター・ピロリによる感染（症）の治療または診断方法に おいて、ureA由来のＬＴＰＫＥＬＤ（配列番号：３）、ならびにureB由来のＦＩ ＳＰ（配列番号：６）、ＰＴＡＦ（配列番号：13）、ＥＶＧＫＶＡ（配列番号： 11）およびＳＩＰから成る群より選ばれるエピトープを使用することを提供する 。 これらのエピトープは、免疫原またはワクシンとして使用することができ、そ して、アジバントとともに使用することができる。 本発明に従えば、さらに、ヘリコバクター感染の診断テストであって、 ｉ）患者からの血清を本発明に従う少なくとも１つのエピトープと反応させる工 程； ii）抗体−抗原結合反応を検出する工程；さらに iii)該抗体−抗原結合反応の検出結果をヘリコバクター・ピロリによる感染と相 関させる工程、 を含む診断テストが提供される。 患者血清は、例えば、該血清のＩｇＭ画分またはＩｇＡ画分である。 該テストに用いられるエピトープとしては、ureA由来の少なくとも１つのエピ トープとureB由来の少なくとも１つのエピトープとから成るものが挙げられる。 該診断テストは、例えば、ＥＬＩＳＡテスト、ラジオイムノアッセイ、または ラテックス凝集アッセイである。 本発明に従えば、本発明の診断テストを実施するためのキットも提供される。 さらに、本発明は、ヘリコバクター・ピロリによる感染（症）治療用の薬剤を 製造するに当たって、本発明に従うエピトープを使用することに関する。 治療のために用いられる場合、本発明のエピトープは、薬剤的に許容できる担 体（キャリア）、稀釈とともに使用することができる。 別の用途として、本発明に従うエピトープは、従来の技術を用いて、ヘリコバ クター・ピロリの感染（症）治療用の活性抑制物質を得るためのスクリーニング に採用することもできる。 本発明に従えば、さらに、ヘリコバクター・ピロリ由来のウレアーゼを検出し 、またはヘリコバクター・ピロリによる感染（症）を治療もしくは診断するため の方法であって、ureA由来のＬＴＰＫＥＬＤ（配列番号：３）、ならびにureB由 来のＦＩＳＰ（配列番号：６）、ＰＴＡＦ（配列番号：13）、ＥＶＧＫＶＡ（配 列番号：11）およびＳＩＰから成る群より選ばれるエピトープを用いることから 成る方法が提供される。 本明細書において検討している引用文献のそれぞれは、その全内容を参考にし ているものとする。 本発明の特徴は、以下の説明および図面からさらに明らかになるであろう。図 面の説明は次のとおりである。 図１は、ureAの正味のＥＬＩＳＡ示数であり、２ＳＤを用いた場合のカットオ フ点より上のエピトープ（３〜９）を示すものである。カットオフ点＝平均＋２ ＳＤ＝1.034。 図２は、ウレアーゼタンパク質のureBの正味のＥＬＩＳＡ示数であり、陽性患 者から対照患者の平均値を差し引いたものである。カットオフ点＝平均＋２ＳＤ ＝1.133。 実施例 イムノブロッティング 抗原の調製：ヘリコバクター・ピロリ菌株ＮＣＴＣ１１６３７をChocolate 寒 天培地（Oxoid製）上で37℃において３〜４日間、ミクロ好気性雰囲気下に培養 した。細胞をハーベストし、蒸留水で３回洗浄した。40O0g で10分間、遠心分離 を行い、上清をすてた。得られたサンプルをXpress（スウェーデンのBrommaのＬ ＫＢ製）内で圧力2O0mPa、−20℃において３回破砕した。この破砕細胞を４℃に おいて30分間、12,000で遠心分離した。上清を−20℃で保存した。血清 グループ１：バイオプシーと培養、該バイオプシーに対する陽性ウレアーゼテス トおよびヘリコバクター・ピロリの31または62Kda 抗原に対する抗 体を用いるイムノブロットでヘリコバクター・ピロリの保有が確認 された患者からの血清。 グループ２：バイオプシーと培養、および該バイオプシーに対する陰性ウレアー ゼテストにより陰性であった患者からの血清。 ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびイムノブロッティング： 文献に詳述されている（Burnie，J．P．他、1988，J．Med．Microbiol.，27： 153 〜 159）ようにイムノブロットを調製した。略述すれば、0.05Ｍのトリス／ 塩酸(ｐＨ6.8)に溶かしたＳＤＳ（硫酸ドデシルナトリウム）2.6%、２−メルカ プトエタノール1.3%、ブロモフェノールブル−O.2%の25μｌおよび殺菌した蒸留 水15μｌ中で、５分間、10μｌのヘリコバクター・ピロリ抗原を煮沸し、10％ア クリロアミドゲルに入れた。これを非連続緩衝液中で４時間流した。ＬＫＢトラ ンスブロッター（スウェーデンBrommaのＬＫＢ製）でニトロセルロース膜に転写 した。該緩衝液は、メタノール20％、25ｍＭのトリスと l92ｍＭのグリシン(ｐ Ｈ8.3)を含有するものであり、転写は25℃において45分間かけて行われるように した。また、ニトロセルロース紙は、緩衝塩溶液（saline）(塩化ナリウム0.9% 、および10ｍＭトリス、ｐＨ7.4)に溶かしたウシ血清アルブミン３％中で、４℃ において一晩ブロックしたものである。 次に、ウシ血清アルブミン（３％）およびTween 20(0.05%)を含有する緩衝塩 溶液で10倍に稀釈した患者血清を用いて、ニトロセルロースを25℃で２時間イン キュベートした。塩溶液(0.5%)およびTween 20(O.05%)中で30分間洗浄した後、 アルカリホスファターゼ結合ヒツジ抗ヒトＩｇＧ抗体（緩衝塩溶液に溶かしたウ シ血清アルブミン３％で1000倍に稀釈）を用いてニトロセルロースのストリップ を25℃で１時間インキュベートした。再び上述のように洗浄を行った後、660μ ｌのＮＢＴ（Nitro blue tetrazolium）(N,N−ジメチルホルムアミド70％に溶か したＮＢＴ50mg/ml)および330 μｌの５−ブロモ−４−クロロ−３イノソリルホ スフェート（ＢＣＩＰ）(N,N−ジメチルホルムアミド70％に溶かしたＢＣＩＰ50 mg/ml)から成る混合液を含有する1O0ml の緩衝液（lO0ml とトリス−ＨＣｌ、 ｐＨ9.5、l0OmＭのＮａＣｌ、５ｍＭのＭｇＣｌ₂)を用いて該膜を25℃で５〜15 分間インキュベートした。水中で洗浄することにより反応を停止させた。反射デ ンシオメトリー(Chromoscan ３；Joyce Loebl)による抗体応答が50mmよりも大き いイムノブロットを陽性とした。 エピトープマッピング： エピトープスキャンニングキット（英国Cambridge のCambridge Research Bio chemicals 社製）を用いて、ureAおよびureBの誘導アミノ酸配列を含む一連の互 いに重複するノナペプチドを合成した。メーカーの指示どおりに実施した。ピン 結合した合成ペプチドの各患者抗血清（200倍稀釈）に対する反応性を測定して ＥＬＩＳＡによるＩｇＧを調べた。30分間のインキュベーション後にA405におけ るデータを求めた。調べた血清は、ケース１〜10（グループ１）およびケース１ 〜５（グループ２）である。 間接ＥＬＩＳＡテスト： エピトープマッピングにより明らかにされたエピトープのうちの２つをペプチ ドとして合成した。ペプチド１（LTPKELDKLM LHYAG）（配列番号：１）はureA由 来であり、ペプチド２（VGSVEVGKVA DLVLW）（配列番号：２）はureB由来である 。各ペプチドを50ｍＭのリン酸緩衝塩溶液(ｐＨ7.O)に溶解して10μｇ／ｍｌと した。該稀釈ペプチドの100 μｌをＥＬＩＳＡプレートの各ウエルに添加して、 ４℃で一晩インキュベートした。プレートをＰＢＳ Tween 20 0.05％）で10分間 洗浄（４回）した。各血清をスーパーカクテル〔オバルブミン10ｇ／１、ウシ血 清アルブミン10ｇ／１、ＰＢＳ(ｐＨ7.2)中〕で200倍に稀釈し、その100μｌを ３ケのウエルに入れ、37℃で２時間インキュベートした。洗浄を繰り返し、100 μｌの二次抗体〔セイヨウワサビペルオキシダーゼを結合したＩｇＭまたはＩｇ Ｇ（Sigma製）、適当な作用倍率に稀釈したもの〕を各ウエルに添加した。これ を37℃で１時間インキュベートした。洗浄後、150 μｌのＡＢＴＳ〔アミノ−ジ −３−エチルベンズアゾール−６−スルホネート（Sigma 製）を、0.03％過酸水 素含有クエン酸緩衝液(ｐＨ4.0)に溶かして0.5ｍｇ／ｍｌとしたもの〕を添加し た。30分後、A405において測定した光学密度としてデータを求めた。結果 グループ１の血清を免疫ブロッティングすることにより、それらは全て、31Ｋ Ｄａのバンドおよび62ＫＤａのバンドの一方または両方に対するＩｇＧを有して いることが示された。グループ２においては、患者の１人が31ＫＤａに対する抗 体、また、４人が62ＫＤａに対する抗体を有していた。この事実および通常のテ ストの結果に基づき、10ヶの血清（患者１〜10、表１）を全ての判定基準による 陽性とし、５ヶの血清を全ての判定基準による陰性とした（患者１〜５、表２） 。 これらについてureAおよびureBに対するエピトープスキャンニングを行うと、 ＥＬＩＳＡの示数（読み）は、陰性血清については、0.240から0.527の範囲で変 化し、また、陽性血清については、0.491から2.654の範囲で変化した。全ての陰 性血清の平均示数を全ての陽性血清の平均示数から差し引くことにより正味のＥ ＬＩＳＡ示数を求めた。この正味のＥＬＩＳＡ示数は、陽性と対照との間に明ら かに差異が存するようなタンパク質領域を示すことになる（表１および表２）。 各サブユニットについてカットオフ点を算出した。これは、(ureA に対する陰 性患者については0.830 、また、ureBに対する陰性患者については0.929という 値を差し引いた）正味のＥＬＩＳＡ示数の全部の値についての平均値に１標準偏 差を加えることによって求めた。また、エピトープは、少なくとも３ヶのアミノ 酸且つ多くても９ケのアミノ酸に相当する長さを有するものとして求めた。ureA は４ヶのエピトープを有し、ureBは11ヶのエピトープを有した（表３）。平均値 に２標準偏差を加えたものをカットオフ点として計算を繰り返した場合、エピト ープ１（ureA）およびエピトープ５、６、12および15（ureB）は依然として残存 していた。 エピトープ１を表すものとしてペプチド１を合成し、エピトープ12を表すもの としてペプチド２を合成した。当初の血清およびその他の症例について間接ＥＬ ＩＳＡにより、それらのペプチドを評価した（表１および表２）。グループ１は 活性なヘリコバクター・ピロリ感染を示し、グループ２は対照患者を示すものと し、また、光学密度の好適なカットオフが0.6であるとすれば、ペプチド１また はペプチド２のいずれかに対するＩｇＭの検出は高い特異性を有していたが感度 は低かった（表３）。陰性患者および陽性患者のいずれにおいてもＩｇＧの出現 の方が多かった。最も効率的なテスト（69.6％）は、該ペプチドの一方または両 方に対するＩｇＭの検出であった。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｇ０１Ｎ 33/569 Ｇ０１Ｎ 33/569 Ｆ 33/573 33/573 Ａ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，Ｌ Ｕ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ， ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，Ｓ Ｚ，ＵＧ)，ＵＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，Ｉ Ｌ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ， ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，Ｒ Ｕ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １． ヘリコバクター・ピロリ由来のウレアーゼの検出方法、またはヘリコバク ター・ピロリによる感染の治療もしくは診断方法における、ureA由来のＬＴＰＫ ＥＬＤ（配列番号：３）、ならびにureB由来のＦＩＳＰ（配列番号：６）、ＰＴ ＡＦ（配列番号：13）、ＥＶＧＫＶＡ（配列番号：11）およびＳＩＰから成る群 より選ばれるエピトープに特異的に結合する作用物質の使用。 ２． 作用物質がウレアーゼの活性を抑制することを特徴とする請求項１に従う 作用物質の使用。 ３． 作用物質が抗体またはその抗原結合性フラグメントから成ることを特徴と する請求項１または２に従う作用物質の使用。 ４． ヘリコバクター・ピロリ感染由来のウレアーゼの診断テストであって、 ｉ）被検サンプルを請求項１〜３のいずれかに従う少なくとも１つの作用物質 と反応させる工程； ii）結合反応を検出する工程；さらに iii)該結合反応の検出結果をヘリコバクター・ピロリ由来のウレアーゼの存在 と相関させる工程； を含むことを特徴とする方法。 ５． テストがヘリコバクター・ピロリ感染を調べるためのものであり、サンプ ルが患者からの血清であることを特徴とする請求項４に従う診断テスト。 ６． 作用物質が、ureAに特異的に結合する少なくとも１つの作用物質およびur eBに特異的に結合する少なくとも１つの作用物質から成ることを特徴とする請求 項４または５に従う診断テスト。 ７． 間接ＥＬＩＳＡ、ラジオイムノアッセイおよびラテックス凝集アッセイか ら成る群より選ばれることを特等とする請求項４〜６のいずれかに従う診断テス ト。 ８． 請求項４〜７のいずれかに従う診断テストを実施するためのキット。 ９． ヘリコバクター・ピロリによる感染を治療するための薬剤の製造における 、請求項１〜３のいずれかに従う作用物質の使用。 10. ヘリコバクター・ピロリ由来のウレアーゼを検出し、またはヘリコバクタ ー・ピロリによる感染を治療もしくは診断するための方法であって、ureA由来の ＬＴＰＫＥＬＤ（配列番号：３）、ならびにureB由来のＦＩＳＰ（配列番号：６ ）、ＰＴＡＦ（配列番号：13）、ＥＶＧＫＶＡ（配列番号：11）およびＳＩＰか ら成る群より選ばれるエピトープに特異的に結合する作用物質を用いることを特 徴とする方法。 11. ヘリコバクター・ピロリ由来のウレアーゼの検出方法、またはヘリコバク ター・ピロリによる感染の治療もしくは診断方法における、ureA由来のＬＴＰＫ ＥＬＤ（配列番号：３）、ならびにureB由来のＦＩＳＰ（配列番号：６）、ＰＴ ＡＦ（配列番号：13）、ＥＶＧＫＶＡ（配列番号：11）およびＳＩＰから成る群 より選ばれるエピトープの使用。 12. 免疫原またはワクチンとしての請求項11に従うエピトープの使用。 13. アジュバントとともに使用される請求項12に従うエピトープの使用。 14. ヘリコバクター感染の診断テストであって、 ｉ）患者からの血清を請求 項11に従う少なくとも１つのエピトープと反応させる工程； ii）抗体−抗原結合反応を検出する工程；さらに iii)該抗体−抗原結合反応の検出結果をヘリコバクター・ピロリによる感染と 相関させる工程、 を含むことを特徴とする診断テスト。 15. 患者血清が、患者血清のＩｇＭまたはＩｇＡ画分を含むことを特徴とする 請求項14に従う診断テスト。 16. エピトープが、ureA由来の少なくとも１つのエピトープとureB由来の少な くとも１つのエピトープを含むことを特徴とする請求項14または15のいずれかに 従う診断テスト。 17. 請求項14〜16のいずれかに従う診断テストを実施するためのキット。 18. ヘリコバクター・ピロリによる感染を治療するための薬剤の製造における 、請求項10〜12のいずれかに従うエピトープの使用。 19. ヘリコバクター・ピロリ由来のウレアーゼを検出し、またはヘリコバク ター・ピロリによる感染の治療もしくは診断するための方法であってureA由来の ＬＴＰＫＥＬＤ（配列番号：３）、ならびにureB由来のＦＩＳＰ（配列番号：６ ）、 ＰＴＡＦ（配列番号：13）、ＥＶＧＫＶＡ（配列番号：11）およびＳＩＰから成 る群より選ばれるエピトープに特異的に結合する作用物質を用いることを特徴と する方法。