JPH11512525A - 体液中のアポリポタンパク質ｄレベルの測定による前立腺ガンのスクリーニング方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、前立腺ガンの存在の可能性をスクリーニングするための方法に関する。この方法は、血清などの体液中におけるアポリポタンパク質Ｄ「ＡｐｏＤ」レベルをアッセイすることを必要とする。ＡｐｏＤについてのアッセイは、診断においてのみならず、予知においても利用可能である。

Description

【発明の詳細な説明】 体液中のアポリポタンパク質Ｄレベルの測定による前立腺ガンの スクリーニング方法 発明の分野 本発明は、対象における前立腺ガンの可能性を判定する方法に関する。より詳 しくは、本発明はスクリーニング方法に関し、その方法によって、対象の体液サ ンプルが、アポリポタンパク質Ｄ（ＡｐｏＤ）レベルをアッセイするためにテス トされる。その際、高レベル(elevated levels)のＡｐｏＤは、該対象における 前立腺ガンの可能性を示す。 発明の背景 アポリポタンパク質は小さいタンパク質分子であり、イン・ヴィヴォではリン 脂質や中性脂質も含有するミセル構造の複合体としてみられるものである。例え ば、参考文献として本出願にその内容が合体される、バーティス（Ｂurtis）お よびアッシュウッド（Ａshwood）,ed.,Ｔietz Ｔextbook of Ｃlinical Ｃhemis try ,(2nd ed,1994),p1019-1058を参照されたい。 アポリポタンパク質Ｄ、即ち「ＡｐｏＤ」はアポリポタンパク質の一種である 。前記Ｔietz textbookの1023ページによると、「ＡｐｏＤの合成又は異化に関 して実質的に何も分かっていない」と記載されている。事実、前記Ｔietzの、様 々なリポタンパク質血症に関する参考文献によって提供される資料には、Ａｐｏ Ｄに関するものは何もない。 バルビン（Ｂalbin）他,Ｊ.Ｂiochem 271:803-807(1990)は、「グロス嚢胞性 疾患嚢胞液(gross cystic disease fluid)」と称される物質はＡｐｏＤと同一で ある、と判定した。この分子は、グロス嚢胞性疾患嚢胞液、特に、グロス嚢胞性 疾患を患う女性の乳房嚢胞液などにおいて、高濃度（１０−５０ｍｇ／ｍｌ）で みられる。この分子の存在理由については知られていない。 ＡｐｏＤに対する遺伝子は、ドレイナ（Ｄrayna）他,Ｊ.Ｂiol.Ｃhem 261:165 35-16539(1986)によって単離、クローニング、および発現がなされた。他のアポ リポタンパク質との比較では、これらの分子とのホモロジーは示されていないが 、血漿 レチノール結合タンパク質に対しては、かなりのホモロジーを有する。 ＡｐｏＤの発現は、アンドロゲンおよびインターロイキン−１によって刺激さ れるが、エストロゲンによってはダウンレギュレートされる。乳ガン患者の腫瘍 において測定された細胞質ゾルのＡｐｏＤ含量は、結節陽性の疾病を有し、従っ て予後不良であるガン患者と、統計的に有意な相関を示すことも判っている。 参考文献として本出願にその内容が合体される、マゾウジアン（Ｍazoujian） 他，Ａnn ＮＹ Ａcad Ｓci,586:188-197(1990)は、免疫組織化学的研究を行い、 内皮組織、卵巣組織、および前立腺組織、等のガン組織においてＡｐｏＤが存在 することを示した。正常組織に対する比較はなされておらず、ＡｐｏＤに対する 相関は導かれていないし、導くことはできなかった。 参考文献として本出願にその内容全体を合体させる、アスピナル（Ａspinall ）およびティレイ（Ｔilley）他,Ｊ.Ｕrol 154:622-628(1995)は、正常な、同年 齢の対照と比較して、悪性の前立腺組織ではＡｐｏＤの発現が有意に上昇してい ることを示した。 前立腺ガンは、特に４０歳以上の男性の関心の的であることはよく知られてい る。その発生率は増加しており、この病気をできる限り早期に同定するための、 診断およびスクリーニング方法が必要とされ続けている。また、これを達成しう る診断試薬も常に必要とされている。 前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）は、前立腺ガンの標準的な「マーカー」である。 ＰＳＡの定性的および定量的な判定は、腫瘍診断学の領域において診断上の重要 な役割を果たしてきた。今日では、ＰＳＡの血清学的判定は、前立腺ガンの早期 の徴候を判定する、唯一の現在受け入れられている非侵襲性の方法である。 しかしながら、ＰＳＡの測定は有用性において限られたものである。というの は、それは診断するためのものであって、予知するためのものではないからであ る。従って、前立腺ガンの予知および診断の両方に使用できるアッセイを提供す ることによる、当該技術を強化および進歩させるような方法が必要とされている 。 今回、驚くべきことに、ＡｐｏＤが前立腺ガンのスクリーニング「マーカー」 として役立つことが明らかとなった。この知見が本出願の核心となるものであり 、以下の記載において詳細に述べる。 好適実施例の詳細説明 例１ フレンダースメディカルセンター(Ｆlenders Ｍedical Ｃenter，Ｂedford Ｐ ark,Ｓouth Ａustralia)において、男性対象の同齢集団から血清サンプルを採取 した。血清ＰＳＡレベルは市販のＰＳＡ用のサンドイッチイムノアッセイ(Ｈybr itech Ｔandem^TMkit; 参考文献として本出願にその内容を合体させる、米国特許 第４，３７６，１１０号も参照されたい）を使用して測定した。ＰＳＡレベルを 測定した後、サンプルを３つのグループに群分けした。第１グループはＰＳＡレ ベルが４ｎｇ／ｍｌより低い全てのサンプルを含む。第２グループはＰＳＡレベ ルが４ｎｇ／ｍｌから１０ｎｇ／ｍｌの範囲である全てのサンプルを含む。第３ グループはＰＳＡレベルが１０ｎｇ／ｍｌより高い全てのサンプルを含む。これ らのグループはそれぞれ、正常レベル、境界域／疑わしいレベル、そして、明ら かに前立腺ガンであるレベル、を表す。 次に、これらのサンプルをシグネット研究所(Ｓignet Ｌaboratories)によっ て開発された、ＡｐｏＤ用の固相サンドイッチＥＬＩＳＡによってＡｐｏＤにつ いてテストした。以前に、アルバース（Ａlbers）他，Ａtherosclerosis 39:395 -409(1981)は、ＡｐｏＤの平均血清濃度は５５μｇ／ｍｌであると判定した。 全ての血清サンプルを通常、３０００倍またはそれ以上にアッセイバッファー で希釈し、ＡｐｏＤの濃度が標準アッセイ曲線の範囲、すなわち、５．０−８０ μｇ／ｍｌの範囲内におさまるようにした。アッセイは、製造業者の指示に従っ て行った。 希釈を考慮するために補正を行った。その結果を以下の表１に示す。 例２ 表１に示すデータが得られたので、グループにおける差の有意性を判定するた めに、スチューデント式テスト（２サンプル）を用いて統計分析を行った。分析 は以下の表２，３，４に示す。 これらのグループの統計分析は、９９％以上の確実性で、前立腺ガンである可能 性があると予想される患者におけるＡｐｏＤレベルは、前立腺ガンを患っていな い者と比べて高いということができることを示している。 以上の記載は、前立腺ガンの存在の可能性をスクリーニングする方法について 述べるものであり、その方法とはＡｐｏＤのレベルを測定し、正常のレベルと比 較することからなる。ＡｐｏＤ濃度の上昇は、対象における前立腺ガンの可能性 を示す。所望であればＡｐｏＤアッセイの前または後に、ＰＳＡアッセイを確認 のために行うことができるが、この第２のアッセイは本発明の一部として必要と されるものではない。 ここで使用した体液サンプルという用語は、全血、血漿、血清、尿、唾液、等 のような物質を指す。全血、血漿、そして最も好ましくは血清、といった血液ベ ースのサンプルが特に好ましいサンプルである。 ＡｐｏＤはＥＬＩＳＡによって測定することができるが、あらゆる形態のイム ノアッセイも使用可能である。例えば、ラジオイムノアッセイ(ＲＩＡ)、免疫蛍 光測定法(ＩＦＡ)、等が使用できる。比濁分析アッセイ、比重分析(gravitometr ic)アッセイ、および他の均質なアッセイも可能であるし、参考文献として本出 願にその内容を合体させる、バーティス（Burtis）他，前出、1055ページの表13 .19に記載されているもののような非免疫原性の方法も可能である。 ここで使用した対象という用語は、前立腺ガンのリスクがあると考えられるあ らゆる個体を指す。前述したように、４０歳以上の男性が最も前立腺ガンにかか りやすいが、ガンは病気のいかなる「ルール」にも従わないということは明らか であると考えられており、従って対象という用語は、このようなアッセイを必要 とするすべてのヒトまたは動物の対象を指す。 先に示したように、ＡｐｏＤの正常レベルは標準的方法を使用して観察できる ので、ＡｐｏＤアッセイは前立腺ガンを予知するものであるといえる。従って、 前立腺ガンのリスク増加またはおそらく薬物療法後の緩解を判定するために、Ａ ｐｏＤレベルの上昇または低下について、対象をモニターすることができる。こ れに対して、例えばＰＳＡアッセイではそのようなモニターをおこなうことは不 可能である。 本発明のその他の態様は、当業者にとって明らかであろう、従って、ここでは 繰り返す必要はない。 使用した用語および表現は、限定ではなく記載の用語として使用されたもので あって、このような用語および表現を使用するに当たって、図示および記載され た特徴構成又はその一部のいかなる均等物も除外する意図は無く、本発明の範囲 内に於いて様々な改変が可能であると理解される。

【手続補正書】特許法第１８４条の８第１項 【提出日】１９９７年８月２１日 【補正内容】 請求の範囲 １．対象の体液サンプルを、アポリポタンパク質Ｄについてアッセイする工程を 有し、前記体液サンプル中のアポリポタンパク質Ｄのレベルの上昇(elevated le vel)が前立腺ガンの可能性があることを示す、対象における前立腺ガンの可能性 のスクリーニング方法。 ２．前記体液サンプルが血清である、請求項１の方法。 ３．前記体液をイムノアッセイにおいてアッセイする工程を有する、請求項１の 方法。 ４．前記イムノアッセイが固相酵素免疫検定法である、請求項３の方法。 ５．アポリポタンパク質Ｄを得るために対象から採取した体液サンプル中のＡｐ ｏＤレベルを測定する工程と、前記サンプル中の複数のＡｐｏＤレベルを測定す る工程とを有し、正常レベルと比較して前記サンプル中のアポリポタンパク質の レベルの上昇(elevated level)が前立腺ガンになる可能性の増加を示す、対象に おける前立腺ガンになるリスクの増加を判定する方法。 ６．前記レベルの上昇(elevated level)が、少なくとも５０μｇ／ｍｇである、 請求項１の方法。 ７．前記レベルの上昇(elevated level)が、少なくとも５０μｇ／ｍｇである、 請求項５による方法。 ８．前立腺ガンであると診断された患者における疾病の経過をモニターする方法 であって、前記患者から得た体液サンプル中のＡｐｏＤレベルの変化を判定する ために、ある期間にわたって前記患者から得た体液サンプル中のＡｐｏＤレベル を測定する工程を有し、ＡｐｏＤレベルの変化が病状の変化と相関している、前 立腺ガンであると診断された患者における疾病の経過をモニターする方法。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，Ｌ Ｕ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ， ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，Ｓ Ｚ，ＵＧ)，ＵＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ ，ＢＲ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＥＥ，ＦＩ，ＧＥ， ＨＵ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＬＫ，ＬＲ，Ｌ Ｔ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＲ， ＴＴ，ＵＡ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．対象の体液サンプルを、アポリポタンパク質Ｄについてアッセイする工程を 有し、前記体液サンプル中のアポリポタンパク質Ｄのレベルの上昇(elevated le vel)が前立腺ガンの可能性があることを示す、対象における前立腺ガンの可能性 のスクリーニング方法。 ２．前記体液サンプルが血清である、請求項１の方法。 ３．前記体液ＮＲＡ(body ＮＲＡ)をイムノアッセイでアッセイする工程を有す る、請求項１の方法。 ４．前記イムノアッセイが固相酵素免疫検定法である、請求項３の方法。