CN112449684A - 用于诊断肝病的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及用于在哺乳动物中诊断肝病的方法，其包括以下步骤：确定所述哺乳动物的生物流体样品中由NOG基因编码的产物的量，并且如果所述哺乳动物的样品中由NOG基因编码的产物的量与健康哺乳动物样品中确定的由NOG基因编码的产物的量不同，则诊断为肝病。

Description

用于诊断肝病的方法
技术领域
本发明涉及通过测量生物标志物检测肝组织的病理变化。
技术背景
肝病如脂肪肝病(FLD)是普通人群中非常常见的病理。值得注意的是，在西方人群中，营养不良是非酒精性脂肪肝病(NAFLD)最常见的原因，例如，据估计发病率为15％至20％，并且呈现出其发展风险因素的患者数量不断增加(Bedogni等,42(2005):44–52；Amarapurkar等,Ann Hepatol 6(2007):161–163)。营养不良和肥胖相关的NAFLD是一种多因素疾病，与高甘油三酯血症、肥胖和胰岛素抵抗有关，如在患有代谢综合征的患者中观察到的(Higuchi和Gores,CurrMol Med 3(2003):483–490)。
例如，尽管FLD是一种如此广泛的疾病，但是其非侵入性诊断仍未满足医疗需求。大多数患者仍然必须进行痛苦的活检，因为目前这仍然是NAFLD诊断和分期的金标准。然而，这是一种侵入性程序，并且即使由病理学专家进行，也受到采样误差、高成本、与程序相关的并发症和观察者变化性的限制。磁共振成像质子密度脂肪分数(MRI-PDFF)和磁共振弹性成像(MRE)已经成为定量脂肪变性的精确工具，但是非常昂贵，并且不是所有患者能获得。它们在检测炎症方面也存在严重问题，这是评估SS向NASH进展的一个非常重要的因素，这对于患者分层和治疗决策至关重要。因此，迫切需要在体液如血液中测量的非侵入性肝病生物标志物，特别是NAFLD生物标志物以解决上述问题。
因此，本发明的目的是提供允许使用非侵入性或微创方法诊断肝病和监测肝病进展的方法和手段。
发明内容
本发明涉及用于在哺乳动物中诊断肝病的方法，其包括以下步骤：确定所述哺乳动物的生物流体样品中由NOG基因编码的产物的量，并且如果所述哺乳动物的样品中由NOG基因编码的产物的量与相同物种的健康哺乳动物样品中确定的由NOG基因编码的产物的量不同，则诊断为肝病。
令人惊讶地发现，生物流体样品中由NOG基因，优选由头蛋白编码的产物的水平表明了从中获得了所述样品的哺乳动物是否患有肝病。本发明方法的主要优点之一是可以在生物体液样品中测量由NOG基因编码的产物，从而不再需要进行肝活检或任何其他侵入性方法以获得生物样品。
本发明还涉及用于诊断肝病的非侵入性或微创方法，如脂肪肝病(FLD)，尤其是非酒精性脂肪肝病(NAFLD)或酒精性脂肪肝病(AFLD)。
本发明的方法还允许区分单纯性脂肪变性(SS)和非酒精性脂肪性肝炎(NASH)。已发现在从患有单纯性脂肪变性的哺乳动物(尤其是人)获得的样品中NOG基因编码的产物的量比来自患有非酒精性脂肪性肝炎的相同物种的哺乳动物的样品中的量显著更低。与来自患有非酒精性脂肪性肝炎的相同物种的哺乳动物的样品相比，在从患有单纯性脂肪变性的哺乳动物获得的样品中由NOG基因编码的产物的量低至少20％，优选至少25％。如果样品中由NOG基因编码的产物的量为3至7pmol/l，优选4至6pmol/l，则可以在哺乳动物(尤其是人)中诊断为单纯性脂肪变性。如果样品中由NOG基因编码的产物的量为7.5至11pmol/l，优选8至10pmol/l，则可以在哺乳动物中诊断为非酒精性脂肪性肝炎。
本发明的另一方面涉及用于在哺乳动物中监测肝病的进展或肝病的治疗的方法，其包括确定所述哺乳动物的生物液体样品中由NOG基因编码的产物的量的步骤。。
由于在哺乳动物的生物流体样品中由NOG基因编码的产物的水平受肝健康状况的影响，故所述NOG基因产物的浓度可以直接用于监测肝病的进展或其治疗。
附图说明
图1A示出了具有SS、NASH的患者和对照患者的血清头蛋白水平(平均值±平均值的标准误差)。SS和NASH患者的血清头蛋白水平比对照低得多(趋势检验p＝0.040)，SS和NASH患者之间无差异。*：与对照组相比，p<0.05
图1B示出了随机分配给维生素E单药治疗或螺内酯与维生素E联合治疗的NAFLD患者的血清log(头蛋白水平)(平均值±平均值的标准误差)。两组的头蛋白水平在第2个月都相似地增加，此后保持稳定到研究结束。*：与基线头蛋白水平相比，p<0.05
具体实施方式
如本文所用，“诊断”是指本领域技术人员可以通过其估计和确定哺乳动物是否患有给定疾病或病症的方法。该诊断是基于生物标志物进行的，其量(包括存在或不存在)指示病症的存在、严重性或不存在。
如本文所用，“肝病”是指影响其功能的肝脏的任何病理状况。
如本文所用，“由NOG基因编码的产物”是指从NOG基因的编码区转录或翻译的mRNA分子、肽、多肽、蛋白质及其片段。
“NOG基因”编码一种称为头蛋白的蛋白质(UniProtKB-Q13253)，它参与许多身体组织的发育，包括神经组织、肌肉和骨。已知头蛋白与称为骨形态发生蛋白(BMP)的蛋白质组相互作用。BMP有助于控制骨和其他组织的发育。
头蛋白是一种分泌的同二聚体糖蛋白，是骨形态发生蛋白(BMP)的拮抗剂。人头蛋白cDNA编码232个氨基酸(aa)前体蛋白(UniProtKB-Q13253；SEQ ID No.1)；27aa信号肽的裂解生成205aa成熟蛋白，其包含N-末端酸性区、中央碱性肝素结合片段和C-末端半胱氨酸结结构。迄今为止，头蛋白在肿瘤细胞向骨的扩散、强直性脊柱炎或肺动脉高压(PAH)领域被研究，但没有任何肝的病理。令人惊讶地，本发明人发现与非常常见的肝病形式有很强的关系。
SEQ ID No.1(UniProtKB-Q13253)：
MERCPSLGVTLYALVVVLGLRATPAGGQHYLHIRPAPSDNLPLVDLIEHPDPIFDPKEKDLNETLLRSLLGGHYDPGFMATSPPEDRPGGGGGAAGGAEDLAELDQLLRQRPSGAMPSEIKGLEFSEGLAQGKKQRLSKKLRRKLQMWLWSQTFCPVLYAWNDLGSRFWPRYVKVGSCFSKRSCSVPEGMVCKPSKSVHLTVLRWRCQRRGGQRCGWIPIQYPIISECKCSC
如本文所用，“健康哺乳动物的样品”是指通过在至少一个，优选至少两个，更优选至少五个，更优选至少十个，更优选至少二十个的哺乳动物中测量由NOG基因编码的产物的量而获得的参考样品，这些哺乳动物未患有任何由于头蛋白水平的失衡而导致的疾病，包括肿瘤、强直性脊柱炎、肺动脉高压(PAH)、肝病和任何其他疾病。“健康哺乳动物”未显示出任何有证明文件的肝组织病理学。健康哺乳动物样品与进行肝病相关检验的哺乳动物的生物体液样品来源相同(例如血液、血清)并且起源相同(例如人、狗、猫、马)。
根据本发明的一个优选实施方案，当与健康哺乳动物样品中确定的由NOG基因编码的产物的量相比，所述哺乳动物的样品中由NOG基因编码的产物的量显著更低或更高，优选低或高至少20％，优选至少25％，优选至少30％，更优选至少40％，最优选更低时，诊断为肝病。
如果在哺乳动物样品中由NOG基因编码的产物的量与在健康哺乳动物样品中由NOG基因编码的产物的量不同，则诊断为肝病。事实证明，相差至少25％表示存在肝病。
根据本发明的另一个优选的实施方案，当所述哺乳动物(尤其是人)的样品中由NOG基因编码的产物的量低于12pmol/l，优选低于11pmol/l，更优选低于10pmol/l，更优选低于9pmol/l时，诊断为肝病。本发明的方法允许诊断任何肝病或监测肝病的治疗和/或进展。然而，在本发明的一个特别优选的实施方案中，肝病是肝脂肪变性(脂肪肝病，FLD)。
肝脂肪变性(脂肪肝)的特征在于脂质在细胞内积累，随后在肝细胞质中形成脂质滴(LD1)，这与肝的肿大(肝肿大)有关。当肝的脂肪变性还伴有炎症时，该病症称为脂肪性肝炎。如果可以排除酒精作为主要病因，则这两种病理状况都归入非酒精性脂肪肝病(NAFLD)术语。因此，NAFLD是指脂肪变性及其进行性阶段(即脂肪性肝炎)。非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD)包括单纯性脂肪变性(SS)和非酒精性脂肪性肝炎(NASH)，这可能发展为肝硬化和肝细胞癌。
根据本发明的一个优选实施方案，肝脂肪变性选自非酒精性脂肪肝病(NAFLD)，优选非酒精性脂肪性肝炎(NASH)或单纯性脂肪变性(SS)。
根据本发明的另一个优选实施方案，由NOG基因编码的产物是头蛋白(UniProtKB-Q13253)。
可以使用本领域众所周知的方法确定和/或定量编码这些分子的蛋白质、多肽和mRNA/cDNA。根据本发明的一个优选实施方案，由NOG基因编码的产物的量通过免疫测定、配体-受体测定、蛋白质微阵列、质谱法、生物传感器或液相色谱法确定。
特别优选涉及能够与由NOG基因编码的产物特异性结合的抗体或其片段的方法。因此，免疫测定优选选自荧光免疫测定(FIA)，具有显色或发光检测的酶联免疫吸附测定(ELISA)和放射免疫测定(RIA)。
特别优选的免疫测定使用荧光标记的抗体。为了增强此类免疫测定的灵敏度，这些测定可以基于金属增强的荧光，例如在WO 2017/046320中描述的。
根据本发明的一个优选实施方案，生物流体样品是血液、血清、血浆、尿液或唾液样品。
根据本发明的另一个优选实施方案，哺乳动物是人受试者、小鼠、大鼠、牛、马、猫或犬受试者。
本发明的另一方面涉及用于确定生物流体样品中由NOG基因编码的产物的量的试剂盒的用途，其用于在哺乳动物中诊断肝病或用于在哺乳动物中监测肝病的进展或肝病的治疗。
优选的试剂盒可以包含与由NOG基因编码的产物结合的抗体或其片段，所述抗体或其片段任选地固定在固体支持物上；以及与由NOG基因编码的产物结合的荧光标记的抗体或其片段。
为了提高检测方法的灵敏度，固体支持物优选至少部分地覆盖有金属，优选地银。特别优选的固体支持物在WO 2017/046320中公开。
本发明的试剂盒还可以包含至少一种含有特定量的头蛋白的校准物、至少一种具有预定量的头蛋白的对照和/或至少一种用于稀释高读数样品的缓冲液、酶或荧光团标记的头蛋白特异性检测抗体制备物以及涂覆有头蛋白特异性捕获抗体的微孔板。
涂覆有头蛋白特异性捕获抗体的微孔板包括结构表面并且至少部分地覆盖有金属涂层，如WO 2017/046320中描述的。
实施例
本发明还通过以下实施例来说明，然而不限于此。
实施例：
材料和方法
患者和研究设计
NAFLD(“非酒精性脂肪肝病”)患者的纳入标准为：1)年龄>18岁；2)肝活检前至少6个月的超声成像显示脂肪肝和肝功能检查异常；和3)患者同意肝活检。招募年龄、性别和身体质量指数(BMI)匹配的个体作为对照组，包括接受定期专业检查的健康个体。对照的纳入标准为：1)年龄>18岁；2)无肝超声成像异常或肝功能检查异常史；3)当前肝超声成像正常，并且肝功能检查正常。患者和对照的排除标准相同，旨在排除脂肪肝的继发原因，包括可能影响NAFLD的药物或补品(Polyzos S等Ann Hepatol.2013；12(5):749-757)。
该研究是一个52周的单中心、开放标签RCT(随机对照试验)，其中有活动对照组。RCT包括筛查访视、基线访视以及治疗阶段的三个额外访视(访视2：第8周；访视3：第26周；和访视4：第52周)。
合格的NAFLD患者随机接受口服维生素E(两次相等剂量，400IU/天；第1组)或螺内酯(每天一次25mg)和维生素E(两次相等剂量，400IU/天；第2组)持续52周。使用Excel(Microsoft Corp.)进行随机化，并如Polyzos SA等描述的(Diabetes ObesMetab.2017；19(12):1805-1809)进行治疗分配。
分析方法
记录人体测量(体重、身高、腰围)数据，并在所有访视时收集晨起空腹(上午8至9点)血清样品。如前所述，采用标准方法使用自动分析仪对肝功能(即天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)、γ-谷氨酰转移酶(GGT))和葡萄糖代谢(即葡萄糖、胰岛素)进行实验室测试(参见Polyzos SA等Diabetes ObesMetab.2017；19(12):1805-1809；和Polyzos S等Ann Hepatol.2013；12(5):749-757)。
使用基于等离子微量滴定板(FluoBoltTM-头蛋白；Fianostics GmbH，奥地利)的高灵敏度荧光免疫测定测量了头蛋白的血清浓度，其使荧光染料的信号增加了数百倍，如Hawa G等描述的(Anal Biochem.2018 05.15；549:39-44)。该测定检测不与BMP结合的游离的具有生物活性的人头蛋白。简而言之，测定方案包括：在50mM磷酸盐缓冲液(PBS)/150mMNaCl pH 7.4中吸附包被捕获抗体，在4℃下过夜，然后用含有0.1％Triton X-100的PBS洗涤。使用含有合成聚合物和巯基化合物的FIANOSTICS专有解决方案实现对非特异性结合的阻断。在另一个洗涤步骤后，将20μl标准品/样品(血清)与25μl经AlexaFluor680标记的抗人头蛋白抗体一起在室温下在黑暗中孵育过夜。使用标准的荧光微板读数器进行测量。读数高于100pmol/l头蛋白的样品用测定缓冲液稀释，然后重新运行以检查信号的线性。批间变异系数(CV)为2％-7％，批内变异系数为4％-10％。
所有NAFLD患者均在计算机体层摄影术指导下进行肝活检，并根据非酒精性脂肪性肝炎(NASH)临床研究网络的标准进行解释(Kleiner DE等Hepatology.2005；41(6):1313-1321)。
如先前所述，计算了体重指数(BMI)、评估IR稳态模型(HOMA-IR)、NAFLD肝脂肪评分和AST与血小板比率指数(APRI)(参见Polyzos SA等Diabetes ObesMetab.2017；19(12):1805-1809)。先前已分别从四个肝脂肪变性非侵入性指标和五个肝纤维化非侵入性指标中选择了NAFLD肝脂肪评分和APRI，因为它们最适合基线的各个组织学结果，特别是对于该RCT。
统计分析
连续数据表示为平均值±平均值的标准误差(SEΜ)。Kolmogorov-Smirnov检验用于检查连续变量分布的正态性。在案例对照部分，卡方检验或Fischer精确检验用于分类变量之间的比较。Spearman系数(rs)用于双变量相关。独立样品的T检验或Mann-Whitney检验用于两组连续变量之间的比较。单向方差分析(ANOVA)或Kruskal-Wallis检验用于比较多于两组的连续变量。协方差的单向分析(ANCOVA)用于调整潜在的混杂因素。多元线性回归分析用于研究头蛋白的独立关联。
在RCT部分中，双向ANOVA用于鉴定在受试者中、受试者之间以及在可变*时间交互作用中的潜在混杂因素未经调整或经调整(双向ANCOVA)的差异趋势。使用Mauchly的球形度检验检验了球形度的假设。如果需要的话，使用Bonferroni校正进行多成对比较。使用意向性治疗分析分析RCT的数据。
未正态分布的变量在进入需要正态分布假设的检验之前被对数转换。显著性设定为p<0.05(双尾)。使用Macintosh的SPSS 21.0(IBM Corp.,Armonk,纽约)进行统计分析。
结果
病例-对照部分
该部分包括31例患有组织学证实为NAFLD的患者(15例SS，16例缘性和确定性NASH)和24例对照。根据具体选择，在性别、年龄、BMI和腰围上组之间差异不存在。AST、ALT、GGT、葡萄糖、胰岛素和HOMA-IR在组之间存在统计学差异，而NASH组的趋势更高。
在整个NAFLD组(n＝31；7.4±1.5pmol/l)中，头蛋白水平低于对照组(n＝24；13.7±2.7pmol/l；p＝0016)。同样，在SS(5.8±1.5pmol/l)和NASH(8.7±2.4pmol/l)患者中头蛋白水平低于对照组(13.7±2.7pmol/l；趋势检验p＝0.040)(参见图1A)。在依次对年龄(模型1)；年龄和性别(模型2)；年龄、性别和log(ALT)(模型3)；年龄、性别、log(ALT)和腰围(模型4)；年龄、性别、log(ALT)、腰围和log(HOMA-IR)(模型5)调整后，组之间的log(头蛋白)仍显著不同(表1)。
表1.患有SS、边缘性和确定性NASH的患者与对照之间的未经调整和调整的比较数据。
Figure BDA0002906981370000081
Figure BDA0002906981370000091
数据表示为未经调整值的平均值±平均值的标准误差(SEM)，以及调
整值的估计边际平均值±平均值的标准误差(SEM)。
a：与对照组相比，p<0.05(Bonferroni事后调整)
模式1：对年龄调整；模式2：对年龄和性别调整；模式3：对年龄、
性别和log(ALT)调整；模式4：对年龄、性别、log(ALT)和腰围调整；
模型5：对年龄、性别、log(ALT)、腰围和log(HOMA-IR)调整。
缩写：ALT，丙氨酸转氨酶；HOMA-IR，稳态模型评估胰岛素抵抗；
NASH，非酒精性脂肪性肝炎；SS，单纯性脂肪变性；
在患者中(n＝31)，不同程度的脂肪变性、门脉和小叶炎症、球囊扩张和纤维化的组之间的头蛋白水平没有差异。
RCT部分
31例NAFLD患者(15例SS和16例NASH)随机分配到第1组(n＝17；11名妇女)或第2组(n＝14；12名妇女)。在基线处，两组的所有参数均相似，并且治疗期间不良事件无差异。
两组的Log(头蛋白)水平在治疗后均相似增加(第1组；基线：0.66±0.13；第2个月：0.98±0.09；第6个月：1.03±0.07；第12个月：1.02±0.07pmol/l，以及第2组；基线0.58±0.13；第2个月：0.82±0.10；第6个月：0.82±0.11；第12个月：0.83±0.11pmol/l；图1B)。更具体地，Log(头蛋白)在各组之间无差异(p＝0.20)，但随着时间推移在各组内增加(p<0.001)。组*时间交互作用无显著差异(p＝0.62)。多次比较校正后，Log(头蛋白)在第2个月显著增加(与基线相比，p＝0.008)，并且在第6个月(与基线相比，p＝0.005)和第12个月(与基线相比，p＝0.001)保持稳定，而没有进一步增加(参见图1B)。
讨论
较低的头蛋白水平在NAFLD(SS和NASH)中首次显示。维生素E单一疗法或螺内酯和维生素E组合治疗2个月后，头蛋白水平相似地增加，可能是由于维生素E的作用。
由于NAFLD的发病机理是多因素的，故通过同时靶向多于一种致病因子，组合治疗而不是单一疗法可能更有效。然而，在维生素E中添加螺内酯没有进一步增加头蛋白。尽管头蛋白因维生素E而增加，但是其变化与肝脂肪变性指数和指数的变化无关，这意味着维生素E不影响它们。
总而言之，在NAFLD患者中观察到头蛋白水平低于对照，并且在NAFLD患者中在组合低剂量螺内酯加维生素E或维生素E单一疗法后，头蛋白水平相似地增加。
序列表
<110> 菲亚诺斯蒂克斯有限责任公司
<120> 用于诊断肝病的方法
<130> 25772-WO
<150> AT A 50781/2018
<151> 2018-09-12
<160> 1
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 232
<212> PRT
<213> 智人
<400> 1
Met Glu Arg Cys Pro Ser Leu Gly Val Thr Leu Tyr Ala Leu Val Val
1 5 10 15
Val Leu Gly Leu Arg Ala Thr Pro Ala Gly Gly Gln His Tyr Leu His
20 25 30
Ile Arg Pro Ala Pro Ser Asp Asn Leu Pro Leu Val Asp Leu Ile Glu
35 40 45
His Pro Asp Pro Ile Phe Asp Pro Lys Glu Lys Asp Leu Asn Glu Thr
50 55 60
Leu Leu Arg Ser Leu Leu Gly Gly His Tyr Asp Pro Gly Phe Met Ala
65 70 75 80
Thr Ser Pro Pro Glu Asp Arg Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ala Ala Gly
85 90 95
Gly Ala Glu Asp Leu Ala Glu Leu Asp Gln Leu Leu Arg Gln Arg Pro
100 105 110
Ser Gly Ala Met Pro Ser Glu Ile Lys Gly Leu Glu Phe Ser Glu Gly
115 120 125
Leu Ala Gln Gly Lys Lys Gln Arg Leu Ser Lys Lys Leu Arg Arg Lys
130 135 140
Leu Gln Met Trp Leu Trp Ser Gln Thr Phe Cys Pro Val Leu Tyr Ala
145 150 155 160
Trp Asn Asp Leu Gly Ser Arg Phe Trp Pro Arg Tyr Val Lys Val Gly
165 170 175
Ser Cys Phe Ser Lys Arg Ser Cys Ser Val Pro Glu Gly Met Val Cys
180 185 190
Lys Pro Ser Lys Ser Val His Leu Thr Val Leu Arg Trp Arg Cys Gln
195 200 205
Arg Arg Gly Gly Gln Arg Cys Gly Trp Ile Pro Ile Gln Tyr Pro Ile
210 215 220
Ile Ser Glu Cys Lys Cys Ser Cys
225 230

Claims (16)

1.用于在哺乳动物中诊断肝病的方法，其包括以下步骤：确定所述哺乳动物的生物流体样品中由NOG基因编码的产物的量，并且如果所述哺乳动物的样品中由NOG基因编码的产物的量与健康哺乳动物样品中确定的由NOG基因编码的产物的量不同，则诊断为肝病。
2.根据权利要求1所述的方法，其中，当与健康哺乳动物样品中确定的由NOG基因编码的产物的量相比，所述哺乳动物的样品中由NOG基因编码的产物的量显著更低或更高，优选低或高至少20％，优选至少30％，更优选至少40％时，诊断为肝病。
3.根据权利要求1所述的方法，其中，当哺乳动物样品，优选人样品中由NOG基因编码的产物的量低于12pmol/l，优选低于11pmol/l，更优选低于10pmol/l，更优选低于9pmol/l时，诊断为肝病。
4.用于在哺乳动物中监测肝病的进展或肝病的治疗的方法，其包括确定所述哺乳动物的生物流体样品中由NOG基因编码的产物的量的步骤。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述肝病是肝脂肪变性(脂肪肝病，FLD)。
6.根据权利要求5所述的方法，其中所述肝脂肪变性选自非酒精性脂肪肝病(NAFLD)，优选非酒精性脂肪性肝炎(NASH)或单纯性脂肪变性(SS)。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中由NOG基因编码的产物是头蛋白。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中由NOG基因编码的产物的量通过免疫测定、配体-受体测定、蛋白质微阵列、质谱法、生物传感器或液相色谱法确定。
9.根据权利要求8所述的方法，其中所述免疫测定选自荧光免疫测定(FIA)、具有显色或发光检测的酶联免疫吸附测定(ELISA)和放射免疫测定(RIA)。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其中，所述生物流体样品是血液、血清、血浆、尿液或唾液样品。
11.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其中所述哺乳动物是人受试者、小鼠、大鼠、牛、马、猫或犬受试者。
12.用于确定生物流体样品中由NOG基因编码的产物的量的试剂盒的用途，其用于在哺乳动物中诊断肝病或用于在哺乳动物中监测肝病的进展或肝病的治疗。
13.根据权利要求12所述的用途，其中所述试剂盒包含与由NOG基因编码的产物结合的抗体或其片段，所述抗体或其片段任选地固定在固体支持物上；以及与由NOG基因编码的产物结合的荧光标记的抗体或其片段。
14.根据权利要求13所述的用途，其中所述固体支持物至少部分地覆盖有金属，优选地银。
15.根据权利要求12至14中任一项所述的用途，其中所述试剂盒还包含至少一种含有特定量的头蛋白的校准物、至少一种具有预定量的头蛋白的对照和/或至少一种用于稀释高读数样品的缓冲液、酶或荧光团标记的头蛋白特异性检测抗体制备物以及涂覆有头蛋白特异性捕获抗体的微孔板。
16.根据权利要求12至15中任一项所述的用途，其中，涂覆有头蛋白特异性捕获抗体的微孔板包括结构表面并且至少部分地覆盖有金属涂层。
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