JPH10502938A - 液体免疫グロブリン製剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 免疫グロブリン製剤、特に静脈注射用の免疫グロブリンＧの液体製剤は、ダイマー形成に対して、１個またはそれ以上の両親媒性安定化剤の添加により安定化される。好ましい両親媒性安定化剤は、ニコチン酸誘導体、特にニコチンアミドおよび自然に存在する、親油性側鎖を有するα−アミノ酸、例えばフェニルアラニン、プロリン、ロイシンおよびイソロイシンである。

Description

【発明の詳細な説明】 液体免疫グロブリン製剤 本発明は免疫グロブリンの安定製剤に関する。 免疫グロブリン製剤、特にヒト血漿のフラクション由来のＩｇＧの静脈注射可 能形(iv-IgG)について多くの製造法が既知である。静脈注射可能な製品にするた めに、抗補体活性を有し、静脈注射した場合、アナフィラキシーショックのよう な重い副作用を引き起こすことがある凝集体の形成を除きまたは避けることが必 要である。臨床上使用可能なiv-IgGの大半は貯蔵安定性を改善するために凍結乾 燥（フリーズドライ）されているが、このような製剤は希釈剤、例えば滅菌水ま たは食塩水と使用前に再構成しなければならない。この再構成工程は不便であり 、時間の浪費であり、製品の汚染の可能性が大きくなる。従って、液体（水溶液 ）形で貯蔵および使用し、このような貯蔵のために必要な程度の安定性を有する iv-IgGの医薬組成物の製造が望まれる。このような組成物は、以後iv-IgGの液体 製剤と呼ぶ。このような製剤のいくつかは既に商品として入手可能である。 静脈注射用ＩｇＧ生産物は、非常に少量の凝集体（ＩｇＧ分子のトリマーまた はポリマー）しか含まないが、例えば、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ ）で測定され得るように、相当大量のＩｇＧダイマーを含み得る。これらのダイ マーはアナフィラキシーショックを引き起こさず、一般に問題とは見なされてい ない。実際、多くの生産物明細において、モノマーおよびダイマーは共に“官能 的ＩｇＧ”のような標題の同一視されている。 Ｔankers1ey et al(Ｍolecu1ar Ｉmmunology 25, 41-48, 1988)により、Ｉｇ Ｇ製剤のダイマー含量は、ＩｇＧを得た血漿プールに、より多くの提供者が寄与 するほど、より高いことが発見された。即ち、ダイマーは一個体から得たＩｇＧ では検出されず、特異的疾病抗原で免疫化した数百から数千の提供者から得た高 免疫ＩｇＧでは比較的低いが、１０,０００またはそれ以上の提供者の提供者プ ールから製造したＩｇＧにおいては高いレベルに到達する。著者は、ＩｇＧダイ マーは、一人の提供者からの抗体が異なる提供者からの抗体の抗原結合部位を認 識し、そしてそれと結合した場合に、形成されるイディオタイプ−抗−イディオ タイプダイマーであると結論付けている。ダイマーおよびモノマーは平衡で存在 し、ダイマー含量は全免疫グロブリン濃度に伴って増加する。 同じ著者は、ダイマー形成が貯蔵時間に伴って増加することを発見した；典型 的製剤のダイマー含量は、貯蔵の第１週目は２倍になり、その後ゆっくり上昇し 得る。ＩｇＧ製剤を産生直後に凍結乾燥した場合、ダイマー形成の増加の開始が 予防される。しかしながら、製剤を液体形で貯蔵し使用することを意図した場合 、ダイマー濃度は貯蔵により増加する。 同じタイプのダイマー形成が、ＩｇＧ以外の免疫グロブリン、例えばＩｇＡ、 ＩｇＤおよびＩｇＥで起こり得る。更に、ダイマー形成はまたモノクローナル抗 体の製造でも観察されるが、ＭＡｂのダイマー形成機構はTankersley et al.に より提案されたものと異なるようである。 本発明により、ＩｇＧダイマーは、高ポリマーと異なりアナフィラキシーショ ックの原因とならないが、高ダイマー含量ＩｇＧ製剤は静脈注射で寛容性が低く 、熱、吐き気および時には低血圧を含む望ましくない副作用を引き起こすことが あるのが判明した。血圧低下副作用は、Ｂleeker et al(Ｖox Ｓanguinis 52, 2 81-290, 1987)によりラットモデルで検出されており、これはまたダイマー含量 との明らかな相関関係を示している。従って、免疫グロブリン製剤、特にiv-IgG の液体製剤について、ダイマー形成に対する安定な製剤が望まれる。 多くの添加剤が、iv-IgGを安定化し、iv注射における寛容性を改善するために 使用されている。これらは、グリシン；ジサッカライド、例えばマルトースおよ びサッカロース；糖アルコール、例えばソルビトール；ポリエチレングリコール ；または少量のPEG-20-ソルビタンモノオレエートまたはPEG-10-ノニルオキシフ ェノールのような界面活性剤を含む。しかしながら、これらの既知の安定化剤は IV-IgGの液体製剤のダイマー形成の阻害に有効でないことが判明している。 ダイマー含量がIg濃度の関数であるため、もちろん液体ＩｇＧ製剤の希釈によ りダイマー含量を減少することは可能である。しかしながら、この試みは、患者 に許容できない大量の液体を注入することが必要となるため、実用的でない。 本発明により、有効量の両親媒性安定化剤を免疫グロブリンに添加することに より、問題が解決された。 本発明で使用の両親媒性安定化剤は、強いまたは緩和な親水性領域および強い または緩和な親油性領域の分子を含むが、界面活性剤ではなく、すなわち使用す る濃度で水性溶液中でミセルを形成せず、モノマー形を維持する物質である。本 発明の両親媒性安定化剤は分子内に、カルボン酸、スルホン酸、リン酸（全て遊 離または薬学的に許容可能な塩形）、ケト−、アルデヒド、ヒドロキシ−、アミ ノ−またはアミド基からなる群から選ばれる１個またはそれ以上の基；および３ から１２炭素原子、好ましくは４から１０炭素原子を含み、所望により窒素また は硫黄の１原子を含む１個またはそれ以上の親油性基を含む。これらの基は好ま しくは直鎖または分枝鎖アルキル基、直鎖または分枝鎖アルケニル基および芳香 族、ヘテロ芳香族、脂肪族またはヘテロ脂肪族環から選択される。 窒素原子が親油性基に存在する場合、好ましくは３級形、例えばピリジン環中 である。好ましい非環状親油性基は、４から１０、好ましくは４から６炭素原子 を含む分枝鎖アルキル基である。 明らかに、iv-IgGの安定化剤として使用する化合物は、それ自体、使用する濃 度で静脈注射に薬学的に許容可能でなければならない。ＩｇＧ分子を化学的に変 化させず、pH４からpH８のｐＨ値で明白な緩衝能を有しないものが好ましい。 好ましい両親媒性安定化剤は、ニコチン酸およびその誘導体、例えばニコチン アミド、ニコチンアミドＮ−オキシドおよびＮ’−メチルニコチンアミドであり 、ニコチンアミドが特に好ましい。 両親媒性安定化剤の更に好ましいグループは、非電荷親油性側鎖を有する天然 に存在するα−アミノ酸および、カルボン酸基が式−ＣＯＮＨ₂、−ＣＯＮＨＲ 、−ＣＨ₂ＯＨまたは−ＣＯＯＲ（ここで、ＲはＣ_1-4アルキルである）で置換さ れているようなアミノ酸の誘導体である。このようなアミノ酸は、フェニルアラ ニン、メチオニン、ロイシン、イソロイシン、プロリンおよびバリンであり、う ちフェニルアラニン、プロリン、ロイシンおよびイソロイシン；特にプロリン、 ロイシンおよびイソロイシン；更に特にプロリンが好ましい。 日本特許昭和６１年公告第１９４０３５号は、１０−１００ｇ／１００mlの量 のモノサッカライド、ジサッカライドまたは糖アルコールおよび中性アミノ酸、 例えばバリン、ロイシンまたはイソロイシンまたはカルボン酸の塩である補助安 定化剤の存在下、熱処理に付される液体ガンマグロブリン製剤を記載している。 本発明は、１個またはそれ以上の、本明細書で定義の両親媒性安定化剤を、全 量で少なくとも０.２mmo1／免疫グロブリンｇおよび全濃度で少なくとも２０mmo l／リットルの液体免疫グロブリン製剤、特に静脈注射用免疫グロブリンＧの液 体製剤を提供する（ただし、製剤が１００ｇ／ｌまたはそれ以上のモノサッカラ イド、ジサッカライドまたは糖アルコールを含む場合、少なくとも一つの両親媒 性安定化剤は中性アミノ酸またはカルボン酸の塩以外であり、好ましくはニコチ ン酸およびその誘導体から選ばれる）。 好ましい安定化剤は、ニコチンアミドを１個またはそれ以上の両親媒性アミノ 酸またはその誘導体と共に含む組成物である。更に好ましい安定化組成物は、ニ コチンアミドおよびプロリンを、所望により一個またはそれ以上の両親媒性アミ ノ酸と共に含む。特に好ましい組成物は、（ａ）ニコチンアミドおよびプロリン ；（ｂ）ニコチンアミド、プロリンおよびイソロイシン；（ｃ）ニコチンアミド 、プロリン、イソロイシンおよびロイシンの混合物である。好ましくは、このよ うな組成物のニコチンアミドの全両親媒性アミノ酸に対するモル比は、１：１か ら１：４の間である。最も好ましい組成物は、ニコチンアミド、プロリンおよび イソロイシンの、好ましくは１：（０.８−２.０）：（０.８−２.０）のモル比 の混合物である。 本発明により安定化された免疫グロブリンは、ポリクローナルまたはモノクロ ーナルであれ、ヒトまたは動物血漿から単離されたものまたは他の手段、例えば ハイブリドーマまたは組換えＤＮＡ技術により製造されたものであれ、ＩｇＡ、 ＩｇＤ、ＩｇＥまたはＩｇＧの任意の製剤であり得る。好ましくは、静脈注射可 能であるように処理され、液体形で貯蔵および使用するように意図されたヒト血 漿由来のＩｇＧ製剤である。更に好ましくは、開裂されていない（例えば、高ペ プシン濃度で）および無傷Ｆｃ領域を含む７Ｓ−ＩｇＧ抗体の構造的および機能 的無傷さを維持する、多価の無傷免疫グロブリンである。好ましくは、ｐＨ４で 低濃度ペプシンでの処理を含む修飾アルコール低温沈殿による血漿フラクション から得られたものである。 液体製剤のＩｇＧ含量は、好ましくは３％から１６％の間、更に好ましくは６ ％から１２％の間である。溶液のｐＨは、好ましくはｐＨ４からｐＨ８、更に好 ましくはｐＨ５からｐＨ６、特にｐＨ５.２からｐＨ５.４である。このように比 較的酸性のｐＨで、溶液は低い緩衝能を有することが重要であり、静脈注射にお いて、受容者の血液のｐＨの著しい低下を防止する。溶液の緊張力は、例えば、 塩化ナトリウム、グリシン、シュークロース、マルトースおよびソルビトールの ような１個またはそれ以上の非緩衝物質の添加により、生理的値に調節し得る。 このような液体製剤は、例えば、０.２−１.０ｇのＩｇＧ／体重kg／日の用量で 、静脈輸液により投与し得る。 本発明の組成物に存在する両親媒性安定化剤の濃度は、０.２から６mmo1／グ ラムＩｇＧ、更に好ましくは１から３mmo1／ｇ ＩｇＧである。免疫グロブリン 製剤は、また、他のタンパク質、例えばアルブミンも含み得る。 両親媒性安定化剤を含む本発明の液体Iv-IgG製剤を２年間、２℃から２５℃の 間の温度で、許容できないレベルまでダイマー濃度を上昇させることなく貯蔵し 得る。このような製剤は、静脈注射で良い寛容性である。 凍結乾燥し、固体凍結乾燥形で溶解することを意図されるiv-IgGの溶液は、製 造および凍結乾燥中のダイマー形成を減少させるように、本発明の両親媒性安定 化剤添加により安定化し得る。 以下の実施例は本発明を説明する： Ａ．液体iv-IgG製剤の製造法 プールしたヒト血漿からアルコール分画により得た粗ＩｇＧペーストを、滅菌 水中に４℃で溶解し、濾過する。溶液をｐＨ４に酸性化し、少量のペプシンと共 にｐＨ４、３７℃でインキュベートし、次いで中和する。次いで、生産物を完全 濾過し、残ったアルコールを除去し、次いでｐＨを５.３に調節し、溶液を超濾 過により濃縮し、６％から１５％w／vの最終タンパク質濃度を得る。 生産物はまたスイス特許第６８４１６４号に記載のようにも製造し得る。 Ｂ．ダイマー含量の測定 生産物を、直径７.８×３００mmのTSK G3000SW-XLカラムを使用して、０.０４ Ｍリン酸緩衝液および０.２Ｍ塩化ナトリウム、ｐＨ７.０の移動相で、Hewlett Packard HP 1090でＨＰＬＣにより分析する。流速は０.７m1／分である。１５０ mg／ml溶液の１.３μｌのサンプルを使用して、タンパク質を２８０nmのＵＶ吸 収により検出する。凝集体（典型的保持時間８−９分）、ダイマー（９−１０. ５分）およびモノマー（１０.５−１３.５分）に対応するピーク領域を自動で測 定し、ダイマー含量を （ここで、ＡＡ、ＡＤおよびＡＭはそれぞれ凝集体、ダイマーおよびモノマーピ ークの領域である） により得る。 Ｃ．安定度試験 液体Iv-IgG製剤を、環境温度（２０−２５℃）に、密封容器中で８０−９０日 貯蔵し、ダイマー含量をこの期間の最後に測定する。実施例１ 上記Ａのように製造し、タンパク質含量１５％およびｐＨ５.３を有する標準 液体製剤１リットルに、フェニルアラニン（１５０mmo1／Ｌ、１mmol／ｇタンパ ク質）２４.７５ｇを添加する。 添加剤なしまたはグリシンのみを含む比較実施例Ａ−Ｇと共に、本発明の実施 例１および更なる実施例２−１６の安定度データを下記表１および２に示す。下 記表３は、Ｂleeker et al(Ｖox Ｓanguinis 52，281-290，1987)により記載さ れたラット低血圧モデルにおける、それぞれ１２％タンパク質を含む液体製剤の 、室温貯蔵後の試験結果を示す。本発明の製剤（実施例１７−１９）は、５−１ ８％血圧を低下させたのみであったが、非安定化製剤はほとんど５０％低下させ た。

【手続補正書】特許法第１８４条の８第１項 【提出日】１９９６年７月１１日 【補正内容】 請求の範囲 １．分子内にカルボン酸、スルホン酸、ケト−、アルデヒド、ヒドロキシ−、 アミノ−またはアミド基からなる群から選ばれる１個またはそれ以上の基；およ び３から１２炭素原子を含み、所望により窒素または硫黄の１原子を含む１個ま たはそれ以上の親油性基を含むことを特徴とする、一個またはそれ以上の非界面 活性両親媒性安定化剤を、全量で少なくとも０.２mmol／免疫グロブリンｇおよ び全濃度で少なくとも２０mmol／リットルで含み、少なくとも一つの両親媒性安 定化剤がニコチン酸またはニコチン酸誘導体である、液体免疫グロブリン製剤。 ２．静脈注射のための免疫グロブリンＧの液体製剤である、請求項１記載の製 剤。 ３．ニコチン酸誘導体がニコチンアミドである、請求項１から２のいずれかに 記載の製剤。 ４．少なくとも一つの両親媒性安定化剤が、フェニルアラニン、メチオニン、 ロィシン、イソロイシン、プロリン、バリンまたはカルボン酸基が式-ＣＯＮＨ₂ 、−ＣＯＮＨＲ、−ＣＨ₂ＯＨまたは−ＣＯＯＲ（ここで、ＲはＣ_1-4アルキルで ある）で置換されている、これらの誘導体からなる群から選択される、請求項１ から３のいずれかに記載の製剤。 ５．少なくとも一つの両親媒性安定化剤がプロリン、ロイシンおよびイソロイ ンから選択されるものである、請求項４記載の製剤。 ６．プロリンおよびニコチンアミドを含む、請求項５記載の製剤。 ７．ニコチンアミド対全両親媒性アミノ酸のモル比が１：１から１：４の間で ある、請求項６記載の製剤。 ８．ニコチンアミド、プロリンおよびイソロイシンのみを両親媒性安定化剤と して含む、請求項７記載の製剤。 ９．該安定化剤が１：（０.８−２.０）：（０.８−２.０）のモル比で存在す る、請求項８記載の製剤。 １０．ｐＨ５からｐＨ６の間のｐＨを有する、請求項２から９のいずれかに記 載の液体製剤。 １１．分子内にカルボン酸、スルホン酸、ケト−、アルデヒド、ヒドロキシ− 、アミノ−またはアミド基からなる群から選ばれる１個またはそれ以上の基；お よび３から１２炭素原子を含み、所望により窒素または硫黄の１原子を含む１個 またはそれ以上の親油性基を含むことを特徴とする、一個またはそれ以上の非界 面活性剤両親媒性安定化剤を、全量で少なくとも０.２mmol／免疫グロブリンｇ および全濃度で少なくとも２０mmo1／リットルで、製剤に添加する工程を含み、 少なくとも一つの両親媒性安定化剤がニコチン酸またはニコチン酸誘導体である 、２℃から２５℃の貯蔵においてダイマー形成に対してiv-IgGの液体製剤を安定 化する方法。 １２．５０℃以上の温度を含むいかなる熱処理工程にも製剤を付さない、請求 項１１記載の方法。 １３．請求項１１または１２に記載の方法で安定化した液体製剤を凍結乾燥す る工程を含む、低ダイマー含量を有するiv-IgG凍結乾燥製剤の製造法。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，Ｍ Ｃ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ， ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)， ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，Ｃ Ｈ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ， ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，Ｍ Ｎ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＴ， ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者 ホトラー，ゲルハルト スイス、ツェーハー−3076ヴォルプ、ファ ルプシュトラーセ11番 (72)発明者 ヴエスト，ベルナール スイス、ツェーハー−1752ヴィラル−シュ ール−グラン、シュマン・ドゥ・ラ・ルド ゥテ６番

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．分子内にカルボン酸、スルホン酸、リン酸、ケト−、アルデヒド、ヒドロ キシ−、アミノ−またはアミド基からなる群から選ばれる１個またはそれ以上の 基；および３から１２炭素原子を含み、所望により窒素または硫黄の１原子を含 む１個またはそれ以上の親油性基を含むことを特徴とする、一個またはそれ以上 の非界面活性両親媒性安定化剤を、全量で少なくとも０.２mmol／免疫グロブリ ンｇおよび全濃度で少なくとも２０mmol／リットルで含む、液体免疫グロブリン 製剤（ただし、製剤が１００ｇ／ｌまたはそれ以上のモノサッカライド、ジサッ カライドまたは糖アルコールを含む場合、少なくとも一つの両親媒性安定化剤は 中性アミノ酸またはカルボン酸の塩以外であり、好ましくはニコチン酸およびそ の誘導体から選ばれる）。 ２．両親媒性安定化剤の親油性基の窒素原子が３級形である、請求項１記載の 製剤。 ３．静脈注射のための免疫グロブリンＧの液体製剤である、請求項１記載の製 剤。 ４．両親媒性安定化剤としてニコチン酸またはニコチン酸誘導体を含む、請求 項１から３のいずれかに記載の製剤。 ５．少なくとも一つの両親媒性安定化剤が、フェニルアラニン、メチオニン、 ロイシン、イソロイシン、プロリン、バリンまたはカルボン酸基が式−ＣＯＮＨ₂ 、−ＣＯＮＨＲ、−ＣＨ₂ＯＨまたは−ＣＯＯＲ(ここで、ＲはＣ_1-4アルキルで ある)で置換されている、これらの誘導体からなる群から選択される、請求項１ から４のいずれかに記載の製剤。 ６．少なくとも一つの両親媒性安定化剤がプロリン、ロイシンおよびイソロイ ンから選択されるものである、請求項５記載の製剤。 ７．プロリンおよびニコチンアミドを含む、請求項６記載の製剤。 ８．ニコチンアミド、プロリンおよびイソロイシンのみを両親媒性安定化剤と して含む、請求項７記載の製剤。 ９．ｐＨ５からｐＨ６の間のｐＨを有する、請求項３から８のいずれかに記載 の液体製剤。 １０．分子内にカルボン酸、スルホン酸、ケト−、アルデヒド、ヒドロキシ− 、アミノ−またはアミド基からなる群から選ばれる１個またはそれ以上の基；お よび３から１２炭素原子を含み、所望により窒素または硫黄の１原子を含む１個 またはそれ以上の親油性基を含むことを特徴とする、一個またはそれ以上の非界 面活性両親媒性安定化剤を、全量で少なくとも０.２mmol／免疫グロブリンｇお よび全濃度で少なくとも２０mmol／リットルで、製剤に添加する工程を含む、２ ℃から２５℃の貯蔵においてダイマー形成に対してiv-IgGの液体製剤を安定化す る方法。 １１．５０℃以上の温度を含むいかなる熱処理工程にも製剤を付さない、請求 項１０記載の方法。 １２．請求項１０または１１に記載の方法で安定化した液体製剤を凍結乾燥す る工程を含む、低ダイマー含量を有するiv-IgG凍結乾燥製剤の製造法。