JPH104955A - 植物二次代謝産物の製造方法 - Google Patents
植物二次代謝産物の製造方法Info
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- JPH104955A JPH104955A JP8162150A JP16215096A JPH104955A JP H104955 A JPH104955 A JP H104955A JP 8162150 A JP8162150 A JP 8162150A JP 16215096 A JP16215096 A JP 16215096A JP H104955 A JPH104955 A JP H104955A
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- Japan
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- culture
- plant
- group
- secondary metabolite
- acid
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- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
- Preparation Of Fruits And Vegetables (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【解決手段】 イチョウ科、メギ科、ツヅラフジ科、ウ
リ科、ニッサ科、ウコギ科、ヤマゴボウ科、アカザ科ま
たはヤマノイモ科に属する植物の組織または細胞培養に
おいて、ジャスモン酸類の存在下に培養を行い、得られ
る培養物から各親植物に含まれる二次代謝産物を回収す
ることを特徴とする植物二次代謝産物の製造方法。 【効果】 本発明方法は、イチョウ科、メギ科、ツヅラ
フジ科、ウリ科、ニッサ科、ウコギ科、ヤマゴボウ科、
アカザ科またはヤマノイモ科に属する植物に含まれる二
次代謝産物の効率的生産を可能にする。
リ科、ニッサ科、ウコギ科、ヤマゴボウ科、アカザ科ま
たはヤマノイモ科に属する植物の組織または細胞培養に
おいて、ジャスモン酸類の存在下に培養を行い、得られ
る培養物から各親植物に含まれる二次代謝産物を回収す
ることを特徴とする植物二次代謝産物の製造方法。 【効果】 本発明方法は、イチョウ科、メギ科、ツヅラ
フジ科、ウリ科、ニッサ科、ウコギ科、ヤマゴボウ科、
アカザ科またはヤマノイモ科に属する植物に含まれる二
次代謝産物の効率的生産を可能にする。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、医薬原料、化粧品
原料、食品用色素などとして有用な植物二次代謝産物を
植物組織または細胞培養を用いて製造する方法に関す
る。
原料、食品用色素などとして有用な植物二次代謝産物を
植物組織または細胞培養を用いて製造する方法に関す
る。
【０００２】
【従来の技術】現在、医薬原料、化粧品原料、食品用色
素などとして使用されている各種植物二次代謝産物は、
ほとんど栽培または野生植物から抽出されており、ムラ
サキ培養細胞による創傷治癒薬原料シコニンの生産、薬
用ニンジン培養細胞によるジンセノシド等含有エキスの
生産など少数の例を除けば、植物組織または細胞培養を
用いて工業的に生産した例は知られていない。
素などとして使用されている各種植物二次代謝産物は、
ほとんど栽培または野生植物から抽出されており、ムラ
サキ培養細胞による創傷治癒薬原料シコニンの生産、薬
用ニンジン培養細胞によるジンセノシド等含有エキスの
生産など少数の例を除けば、植物組織または細胞培養を
用いて工業的に生産した例は知られていない。
【０００３】植物組織または細胞培養によるこれら有用
二次代謝産物の生産については、２０年以上も前から、
大学、公的研究機関または企業で精力的に研究が進めら
れてきたにもかかわらず、実用化に結びついた例は極め
て少ない。その原因の一つに、培養物に含まれる二次代
謝産物の含量が低いことが挙げられる。この二次代謝産
物の含量を増加させる有力な戦略の一つに、培地組成の
最適化が挙げられるが、含量の増加に適した培地組成は
植物種および二次代謝産物ごとに異なるのが普通であ
り、また長期間の検討を要する割には、実用化に充分な
レベルにまで二次代謝産物の含量を増加させることが困
難であるケースが多かったため、効率よく実用化研究を
進める上での障害になっていた。
二次代謝産物の生産については、２０年以上も前から、
大学、公的研究機関または企業で精力的に研究が進めら
れてきたにもかかわらず、実用化に結びついた例は極め
て少ない。その原因の一つに、培養物に含まれる二次代
謝産物の含量が低いことが挙げられる。この二次代謝産
物の含量を増加させる有力な戦略の一つに、培地組成の
最適化が挙げられるが、含量の増加に適した培地組成は
植物種および二次代謝産物ごとに異なるのが普通であ
り、また長期間の検討を要する割には、実用化に充分な
レベルにまで二次代謝産物の含量を増加させることが困
難であるケースが多かったため、効率よく実用化研究を
進める上での障害になっていた。
【０００４】近年、汎用的に二次代謝産物の生産性を向
上させる一つの手段として、微生物の培養物などのエリ
シターを培養組織または細胞に添加する方法が提案され
たが、普遍的に使用できる菌種を見いだすことができ
ず、また生産性向上にも限界があったため、実用化には
至らなかった。このような背景のもと、特定の植物種で
は、上記のエリシターを処理した細胞中で、植物ホルモ
ンの一種であるジャスモン酸のレベルが高まり、これが
二次代謝産物の生産性向上に寄与することが明らかにさ
れ、この原理に基づいた植物二次代謝産物の生産促進物
質に関する特許（DE 4122208）がドイツで成立し、日本
にも出願されている（特開平5-184355号公報）。
上させる一つの手段として、微生物の培養物などのエリ
シターを培養組織または細胞に添加する方法が提案され
たが、普遍的に使用できる菌種を見いだすことができ
ず、また生産性向上にも限界があったため、実用化には
至らなかった。このような背景のもと、特定の植物種で
は、上記のエリシターを処理した細胞中で、植物ホルモ
ンの一種であるジャスモン酸のレベルが高まり、これが
二次代謝産物の生産性向上に寄与することが明らかにさ
れ、この原理に基づいた植物二次代謝産物の生産促進物
質に関する特許（DE 4122208）がドイツで成立し、日本
にも出願されている（特開平5-184355号公報）。
【０００５】前記日本特許には、ジャスモン酸が二次代
謝産物の生産性を向上させうる植物種として、マメ科、
キョウチクトウ科、アカネ科、ナス科およびショウガ科
に属する植物種が挙げられ、それらをもってジャスモン
酸が植物全般に効果を有するものとしているが、本願発
明者らが実施した結果では、ナス科に属するズボイシア
(Duboisia myoporoides)のようにジャスモン酸を作用さ
せても二次代謝産物生産量が増加しない植物種も認めら
れた。さらに、何らかの二次代謝産物の増加が認められ
る植物種においても、ジャスモン酸の作用によって生産
性が増加する二次代謝産物と全く増加を示さない二次代
謝産物が共存する場合があり、ジャスモン酸による二次
代謝産物の生産性向上は、植物全般に一様に認められる
ものではないと考えられる。
謝産物の生産性を向上させうる植物種として、マメ科、
キョウチクトウ科、アカネ科、ナス科およびショウガ科
に属する植物種が挙げられ、それらをもってジャスモン
酸が植物全般に効果を有するものとしているが、本願発
明者らが実施した結果では、ナス科に属するズボイシア
(Duboisia myoporoides)のようにジャスモン酸を作用さ
せても二次代謝産物生産量が増加しない植物種も認めら
れた。さらに、何らかの二次代謝産物の増加が認められ
る植物種においても、ジャスモン酸の作用によって生産
性が増加する二次代謝産物と全く増加を示さない二次代
謝産物が共存する場合があり、ジャスモン酸による二次
代謝産物の生産性向上は、植物全般に一様に認められる
ものではないと考えられる。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、ジャスモン
酸が有効に作用する植物種及び二次代謝産物を明らかに
し、各親植物に含まれる二次代謝産物を効率よく生産さ
せ、回収することを目的とする。
酸が有効に作用する植物種及び二次代謝産物を明らかに
し、各親植物に含まれる二次代謝産物を効率よく生産さ
せ、回収することを目的とする。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明者等は、前記特許
に記載されていない植物種について広くジャスモン酸の
効果の有無を検討し、特定の植物では前記特許に記載さ
れている以上にジャスモン酸の効果が認められ、さらに
前記特許には記載されていないジャスモン酸類の使用お
よび添加時期などの作用条件を工夫することによって、
前記特許に記載されている効果を上回る効果が得られる
ことを見出し、本発明を完成した。
に記載されていない植物種について広くジャスモン酸の
効果の有無を検討し、特定の植物では前記特許に記載さ
れている以上にジャスモン酸の効果が認められ、さらに
前記特許には記載されていないジャスモン酸類の使用お
よび添加時期などの作用条件を工夫することによって、
前記特許に記載されている効果を上回る効果が得られる
ことを見出し、本発明を完成した。
【０００８】すなわち、本発明は、イチョウ科、メギ
科、ツヅラフジ科、ウリ科、ニッサ科、ウコギ科、ヤマ
ゴボウ科、アカザ科またはヤマノイモ科に属する植物の
組織または細胞培養において、ジャスモン酸類の存在下
に培養を行い、得られる培養物から各親植物に含まれる
二次代謝産物を回収することを特徴とする植物二次代謝
産物の製造方法に関する。
科、ツヅラフジ科、ウリ科、ニッサ科、ウコギ科、ヤマ
ゴボウ科、アカザ科またはヤマノイモ科に属する植物の
組織または細胞培養において、ジャスモン酸類の存在下
に培養を行い、得られる培養物から各親植物に含まれる
二次代謝産物を回収することを特徴とする植物二次代謝
産物の製造方法に関する。
【０００９】以下、本発明を詳細に説明する。本発明の
製造方法の対象となる植物種としては、イチョウ科イチ
ョウ属のイチョウ(Ginkgo biloba)、およびメギ科植
物、好ましくはメギ(Berberis thunbergii)などを含むB
erberis属植物ならびにPodophyllum peltatumなどを含
むPodophyllum属植物、およびツヅラフジ科植物、好ま
しくはタマサキツヅラフジ(Stephania cepharantha)な
どを含むStephania属植物、およびウリ科植物、好まし
くはヘチマ(Luffa cylindrica)などを含むLuffa属植物
ならびにメロン(Cucumis melo)などを含むCucumis属植
物ならびにスイカ(Citrullus vulgaris)などを含むCitr
ullus属植物、およびニッサ科植物好ましくはキジュ(Ca
mptotheca acuminata)などを含むCamptotheca属植物、
およびウコギ科植物、好ましくはオタネニンジン(Panax
ginseng)などを含むPanax属植物、およびヤマゴボウ科
植物、特に好ましくはヨウシュヤマゴボウ(Phytolacca
americana)などを含むPhytolacca属植物、およびアカザ
科植物、好ましくはビート(Beta vulgaris)などを含むB
eta属植物、およびヤマノイモ科植物、好ましくはDiosc
orea compositaなどを含むDioscorea属植物ならびにオ
ニドコロ(Aspidistra elatior)などを含むAspidistra属
植物が例示される。
製造方法の対象となる植物種としては、イチョウ科イチ
ョウ属のイチョウ(Ginkgo biloba)、およびメギ科植
物、好ましくはメギ(Berberis thunbergii)などを含むB
erberis属植物ならびにPodophyllum peltatumなどを含
むPodophyllum属植物、およびツヅラフジ科植物、好ま
しくはタマサキツヅラフジ(Stephania cepharantha)な
どを含むStephania属植物、およびウリ科植物、好まし
くはヘチマ(Luffa cylindrica)などを含むLuffa属植物
ならびにメロン(Cucumis melo)などを含むCucumis属植
物ならびにスイカ(Citrullus vulgaris)などを含むCitr
ullus属植物、およびニッサ科植物好ましくはキジュ(Ca
mptotheca acuminata)などを含むCamptotheca属植物、
およびウコギ科植物、好ましくはオタネニンジン(Panax
ginseng)などを含むPanax属植物、およびヤマゴボウ科
植物、特に好ましくはヨウシュヤマゴボウ(Phytolacca
americana)などを含むPhytolacca属植物、およびアカザ
科植物、好ましくはビート(Beta vulgaris)などを含むB
eta属植物、およびヤマノイモ科植物、好ましくはDiosc
orea compositaなどを含むDioscorea属植物ならびにオ
ニドコロ(Aspidistra elatior)などを含むAspidistra属
植物が例示される。
【００１０】また、これらの中でも、イチョウ(Ginkgo
biloba)、Berberis属植物、Podophyllum属植物、Stepha
nia属植物、Luffa属植物、Cucumis属植物、Citrullus属
植物、Camptotheca属植物、Panax属植物、Phytolacca属
植物、Beta属植物が特に好ましい。また、本発明の製造
方法の対象となる二次代謝産物としては、前記の植物が
産生する二次代謝産物が挙げられるが、好ましくはイチ
ョウが生産するギンゴリドＡなどのギンゴリド類および
ビロバリド類、Berberis属植物などが生産するベルベリ
ンなどのイソキノリンアルカロイド類、Podophylum属植
物などが生産するポドフィロトキシンなどのフェニルテ
トラリン型リグナン類、Stephania属植物などが生産す
るアロモリン、セファランチンなどのビスベンジルイソ
キノリンアルカロイド類、Luffa属植物、Cucumis属植
物、Citrullus属植物などが生産するブリオノール酸な
どのトリテルペン類、Camptotheca属植物などが生産す
るカンプトテシンなどのキノリンアルカロイド類、Pana
x属植物などが生産するジンセノシドなどのジンセンサ
ポニン類、Phytolacca属植物、Beta属植物などが生産す
るベタニンなどのベタシアニン類、Dioscorea属植物、A
spidistra属植物などが生産するジオスゲニンなどのス
テロイド類が例示される。
biloba)、Berberis属植物、Podophyllum属植物、Stepha
nia属植物、Luffa属植物、Cucumis属植物、Citrullus属
植物、Camptotheca属植物、Panax属植物、Phytolacca属
植物、Beta属植物が特に好ましい。また、本発明の製造
方法の対象となる二次代謝産物としては、前記の植物が
産生する二次代謝産物が挙げられるが、好ましくはイチ
ョウが生産するギンゴリドＡなどのギンゴリド類および
ビロバリド類、Berberis属植物などが生産するベルベリ
ンなどのイソキノリンアルカロイド類、Podophylum属植
物などが生産するポドフィロトキシンなどのフェニルテ
トラリン型リグナン類、Stephania属植物などが生産す
るアロモリン、セファランチンなどのビスベンジルイソ
キノリンアルカロイド類、Luffa属植物、Cucumis属植
物、Citrullus属植物などが生産するブリオノール酸な
どのトリテルペン類、Camptotheca属植物などが生産す
るカンプトテシンなどのキノリンアルカロイド類、Pana
x属植物などが生産するジンセノシドなどのジンセンサ
ポニン類、Phytolacca属植物、Beta属植物などが生産す
るベタニンなどのベタシアニン類、Dioscorea属植物、A
spidistra属植物などが生産するジオスゲニンなどのス
テロイド類が例示される。
【００１１】また、これらの中でも、ギンゴリド類およ
びビロバリド類、イソキノリンアルカロイド類、フェニ
ルテトラリン型リグナン類、ビスベンジルイソキノリン
アルカロイド類、トリテルペン類、キノリンアルカロイ
ド類、ジンセンサポニン類、ベタシアニン類が特に好ま
しい。本発明で使用されるジャスモン酸類としては、ジ
ャスモン酸およびその誘導体、ククルビン酸およびその
誘導体、並びに、ツベロン酸およびその誘導体を例示す
ることができる。
びビロバリド類、イソキノリンアルカロイド類、フェニ
ルテトラリン型リグナン類、ビスベンジルイソキノリン
アルカロイド類、トリテルペン類、キノリンアルカロイ
ド類、ジンセンサポニン類、ベタシアニン類が特に好ま
しい。本発明で使用されるジャスモン酸類としては、ジ
ャスモン酸およびその誘導体、ククルビン酸およびその
誘導体、並びに、ツベロン酸およびその誘導体を例示す
ることができる。
【００１２】ジャスモン酸誘導体は、下記の一般式
（Ｉ）：
（Ｉ）：
【００１３】
【化１】
【００１４】〔式中、Ｒ1 は炭素数１〜４のアルキル基
又は次式： −（ＣＨ2 ）n −ＣＯ−Ｒ6 （式中、Ｒ6 は水酸基、ＯＭ（ここで、Ｍはアルカリ金
属原子、アルカリ土類金属原子又はＮＨ4 を表す。）、
ＮＨＲ7 （ここで、Ｒ7 は、水素原子、炭素数１〜４の
アシル基、炭素数１〜４のアルキル基又はアミノ酸残基
を表す。）又はＯＲ8 （ここで、Ｒ8 は炭素数１〜４の
アルキル基又は炭水化物残基を表す。）を表し、ｎは１
〜７の整数を表す。）で示される基を表し；Ｒ2 、
Ｒ3 、Ｒ 4、及びＲ5 は、それぞれ水素原子を表すか、
あるいはＲ2 とＲ3 、Ｒ3 とＲ 4、又はＲ 4とＲ5 は、
共同して二重結合を表してもよく、；前記５員環は、更
に水酸基で置換されていてもよく、隣接する環員炭素原
子間で二重結合を形成してもよい。〕で示すことができ
る。
又は次式： −（ＣＨ2 ）n −ＣＯ−Ｒ6 （式中、Ｒ6 は水酸基、ＯＭ（ここで、Ｍはアルカリ金
属原子、アルカリ土類金属原子又はＮＨ4 を表す。）、
ＮＨＲ7 （ここで、Ｒ7 は、水素原子、炭素数１〜４の
アシル基、炭素数１〜４のアルキル基又はアミノ酸残基
を表す。）又はＯＲ8 （ここで、Ｒ8 は炭素数１〜４の
アルキル基又は炭水化物残基を表す。）を表し、ｎは１
〜７の整数を表す。）で示される基を表し；Ｒ2 、
Ｒ3 、Ｒ 4、及びＲ5 は、それぞれ水素原子を表すか、
あるいはＲ2 とＲ3 、Ｒ3 とＲ 4、又はＲ 4とＲ5 は、
共同して二重結合を表してもよく、；前記５員環は、更
に水酸基で置換されていてもよく、隣接する環員炭素原
子間で二重結合を形成してもよい。〕で示すことができ
る。
【００１５】前記一般式（Ｉ）において、Ｒ1 、Ｒ7 又
はＲ8 で表される炭素数１〜４のアルキル基としては、
例えばメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロ
ピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、sec-ブチル基、
ｔ−ブチル基が挙げられる。Ｒ6 がＯＭである場合にお
いて、Ｍで表されるアルカリ金属原子又はアルカリ土類
金属原子としては、例えばナトリウム、カリウム、カル
シウムが挙げられる。
はＲ8 で表される炭素数１〜４のアルキル基としては、
例えばメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロ
ピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、sec-ブチル基、
ｔ−ブチル基が挙げられる。Ｒ6 がＯＭである場合にお
いて、Ｍで表されるアルカリ金属原子又はアルカリ土類
金属原子としては、例えばナトリウム、カリウム、カル
シウムが挙げられる。
【００１６】Ｒ6 がＮＨＲ7 である場合において、Ｒ7
で表される炭素数１〜４のアシル基は、直鎖、分岐鎖の
いずれでもよく、例えばホルミル基、アセチル基、プロ
ピオニル基、ブチリル基、アクリロイル基が挙げられ
る。Ｒ6 がＮＨＲ7 である場合において、Ｒ7 で表され
るアミノ酸残基とは、イソロイシル基、チロシル基、ト
リプトフィル基が挙げられる。
で表される炭素数１〜４のアシル基は、直鎖、分岐鎖の
いずれでもよく、例えばホルミル基、アセチル基、プロ
ピオニル基、ブチリル基、アクリロイル基が挙げられ
る。Ｒ6 がＮＨＲ7 である場合において、Ｒ7 で表され
るアミノ酸残基とは、イソロイシル基、チロシル基、ト
リプトフィル基が挙げられる。
【００１７】Ｒ6 がＯＲ8 である場合において、Ｒ8 で
表される炭水化物残基としては、グルコピラノシル基が
挙げられる。前記一般式（Ｉ）で示される化合物の好ま
しいものとしては、Ｒ1 が−（ＣＨ 2 ）n ＣＯＯＨ又は
−（ＣＨ2 ）n ＣＯＯＣＨ3 であり、Ｒ2 、Ｒ3 、Ｒ4
及びＲ5 が、それぞれ水素原子を表すか、あるいはＲ2
とＲ3 、Ｒ3 とＲ4 、又はＲ 4 とＲ5 が、共同して二重
結合を表す化合物が挙げられる。
表される炭水化物残基としては、グルコピラノシル基が
挙げられる。前記一般式（Ｉ）で示される化合物の好ま
しいものとしては、Ｒ1 が−（ＣＨ 2 ）n ＣＯＯＨ又は
−（ＣＨ2 ）n ＣＯＯＣＨ3 であり、Ｒ2 、Ｒ3 、Ｒ4
及びＲ5 が、それぞれ水素原子を表すか、あるいはＲ2
とＲ3 、Ｒ3 とＲ4 、又はＲ 4 とＲ5 が、共同して二重
結合を表す化合物が挙げられる。
【００１８】これらの好ましい化合物の具体例として
は、例えば、以下に示す化合物が挙げられる。 （化合物Ａ） Ｒ1 ：−（ＣＨ2 ）n ＣＯＯＨ又は−（ＣＨ2 ）n ＣＯ
ＯＣＨ3 （ｎ＝１〜３） Ｒ2 ，Ｒ3 ：Ｈ Ｒ4 ＋Ｒ5 ：二重結合 （化合物Ｂ） Ｒ1 ：−ＣＨ2 ＣＯＯＨ Ｒ2 ，Ｒ3 ，Ｒ4 ，Ｒ5 ：Ｈ また、前記一般式（Ｉ）で示される化合物は、５員環
が、更に水酸基で置換されていてもよく、隣接する環員
炭素原子間で二重結合を形成してもよい。
は、例えば、以下に示す化合物が挙げられる。 （化合物Ａ） Ｒ1 ：−（ＣＨ2 ）n ＣＯＯＨ又は−（ＣＨ2 ）n ＣＯ
ＯＣＨ3 （ｎ＝１〜３） Ｒ2 ，Ｒ3 ：Ｈ Ｒ4 ＋Ｒ5 ：二重結合 （化合物Ｂ） Ｒ1 ：−ＣＨ2 ＣＯＯＨ Ｒ2 ，Ｒ3 ，Ｒ4 ，Ｒ5 ：Ｈ また、前記一般式（Ｉ）で示される化合物は、５員環
が、更に水酸基で置換されていてもよく、隣接する環員
炭素原子間で二重結合を形成してもよい。
【００１９】５員環が、更に水酸基で置換された化合
物、又は隣接する環員炭素原子間で二重結合が形成され
た化合物の具体例としては、例えば、以下に示す化合物
が挙げられる。 （化合物Ｃ）
物、又は隣接する環員炭素原子間で二重結合が形成され
た化合物の具体例としては、例えば、以下に示す化合物
が挙げられる。 （化合物Ｃ）
【００２０】
【化２】
【００２１】（化合物Ｄ）
【００２２】
【化３】
【００２３】（化合物Ｅ）
【００２４】
【化４】
【００２５】（化合物Ｆ）
【００２６】
【化５】
【００２７】以上のジャスモン酸誘導体は、全て植物二
次代謝産物の生産性向上に効果を有するが、中でも前記
一般式（Ｉ）においてＲ1 が−ＣＨ2 ＣＯＯＨ又は−Ｃ
Ｈ2ＣＯＯＣＨ3 であり、Ｒ2 及びＲ3 が水素原子であ
り、Ｒ4 とＲ5 が共同して二重結合を形成している化合
物であるジャスモン酸又はジャスモン酸メチルが生産性
向上に対する効果の大きさの点から特に好ましい。
次代謝産物の生産性向上に効果を有するが、中でも前記
一般式（Ｉ）においてＲ1 が−ＣＨ2 ＣＯＯＨ又は−Ｃ
Ｈ2ＣＯＯＣＨ3 であり、Ｒ2 及びＲ3 が水素原子であ
り、Ｒ4 とＲ5 が共同して二重結合を形成している化合
物であるジャスモン酸又はジャスモン酸メチルが生産性
向上に対する効果の大きさの点から特に好ましい。
【００２８】ククルビン酸誘導体は、下記の一般式（I
I）：
I）：
【００２９】
【化６】
【００３０】〔式中、Ｒ1 は炭素数１〜４のアルキル基
又は次式： −（ＣＨ2 ）n −ＣＯ−Ｒ6 （式中、Ｒ6 は水酸基、ＯＭ（ここで、Ｍはアルカリ金
属原子、アルカリ土類金属原子又はＮＨ4 を表す。）、
ＮＨＲ7 （ここで、Ｒ7 は、水素原子、炭素数１〜４の
アシル基、炭素数１〜４のアルキル基又はアミノ酸残基
を表す。）又はＯＲ8 （ここで、Ｒ8 は炭素数１〜４の
アルキル基又は炭水化物残基を表す。）を表し、ｎは１
〜７の整数を表す。）で示される基を表し；Ｒ2 、
Ｒ3 、Ｒ 4、及びＲ5 は、それぞれ水素原子を表すか、
あるいはＲ2 とＲ3 、Ｒ3 とＲ 4、又はＲ 4とＲ5 は、
共同して二重結合を表してもよく、Ｒ9 は水酸基、又は
−Ｏ−炭化物残基を示し、；前記５員環は、更に水酸基
で置換されていてもよく、隣接する環員炭素原子間で二
重結合を形成してもよい。〕で示すことができる。
又は次式： −（ＣＨ2 ）n −ＣＯ−Ｒ6 （式中、Ｒ6 は水酸基、ＯＭ（ここで、Ｍはアルカリ金
属原子、アルカリ土類金属原子又はＮＨ4 を表す。）、
ＮＨＲ7 （ここで、Ｒ7 は、水素原子、炭素数１〜４の
アシル基、炭素数１〜４のアルキル基又はアミノ酸残基
を表す。）又はＯＲ8 （ここで、Ｒ8 は炭素数１〜４の
アルキル基又は炭水化物残基を表す。）を表し、ｎは１
〜７の整数を表す。）で示される基を表し；Ｒ2 、
Ｒ3 、Ｒ 4、及びＲ5 は、それぞれ水素原子を表すか、
あるいはＲ2 とＲ3 、Ｒ3 とＲ 4、又はＲ 4とＲ5 は、
共同して二重結合を表してもよく、Ｒ9 は水酸基、又は
−Ｏ−炭化物残基を示し、；前記５員環は、更に水酸基
で置換されていてもよく、隣接する環員炭素原子間で二
重結合を形成してもよい。〕で示すことができる。
【００３１】前記一般式（II）において、Ｒ1 、Ｒ7 、
又はＲ8 で表される炭素数１〜４のアルキル基として
は、例えばメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、ｉ−
プロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブ
チル基、ｔ−ブチル基を例示することができる。Ｒ6 が
ＯＭである場合において、Ｍで表されるアルカリ金属原
子又はアルカリ土類金属原子としては、例えばナトリウ
ム、カリウム、カルシウムが挙げられる。
又はＲ8 で表される炭素数１〜４のアルキル基として
は、例えばメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、ｉ−
プロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブ
チル基、ｔ−ブチル基を例示することができる。Ｒ6 が
ＯＭである場合において、Ｍで表されるアルカリ金属原
子又はアルカリ土類金属原子としては、例えばナトリウ
ム、カリウム、カルシウムが挙げられる。
【００３２】Ｒ6 がＮＨＲ7 である場合において、Ｒ7
で示される炭素数１〜４のアシル基は、直鎖、分岐鎖の
いずれでもよく、例えばホルミル基、アセチル基、プロ
ピオニル基、ブチリル基、アクリロイル基が挙げられ
る。Ｒ6 がＮＨＲ7 である場合において、Ｒ7 で示され
るアミノ酸残基とは、イソロイシル基、チロシル基、ト
リプトフィル基が挙げられる。
で示される炭素数１〜４のアシル基は、直鎖、分岐鎖の
いずれでもよく、例えばホルミル基、アセチル基、プロ
ピオニル基、ブチリル基、アクリロイル基が挙げられ
る。Ｒ6 がＮＨＲ7 である場合において、Ｒ7 で示され
るアミノ酸残基とは、イソロイシル基、チロシル基、ト
リプトフィル基が挙げられる。
【００３３】Ｒ6 がＯＲ8 である場合において、Ｒ8 で
示される炭水化物残基、及びＲ9 が−Ｏ−炭水化物残基
である場合における炭水化物残基としては、グルコピラ
ノシル基が挙げられる。また、前記一般式（II）で示さ
れる化合物は、５員環は、さらに水酸基で置換されてい
てもよく、隣接する環員炭素原子間で二重結合を形成し
てもよい。
示される炭水化物残基、及びＲ9 が−Ｏ−炭水化物残基
である場合における炭水化物残基としては、グルコピラ
ノシル基が挙げられる。また、前記一般式（II）で示さ
れる化合物は、５員環は、さらに水酸基で置換されてい
てもよく、隣接する環員炭素原子間で二重結合を形成し
てもよい。
【００３４】一般式（II）で示される化合物の具体例と
しては、以下に示す化合物が挙げられるが、中でもツベ
ロン酸、又はツベロン酸メチルが植物二次代謝産物の生
産性向上に対する大きさの点から特に好ましい。
しては、以下に示す化合物が挙げられるが、中でもツベ
ロン酸、又はツベロン酸メチルが植物二次代謝産物の生
産性向上に対する大きさの点から特に好ましい。
【００３５】
【化７】
【００３６】
【化８】
【００３７】
【化９】
【００３８】
【化１０】
【００３９】ククルビン酸誘導体は、下記の一般式（II
I）：
I）：
【００４０】
【化１１】
【００４１】〔式中、Ｒ1 は炭素数１〜４のアルキル基
又は次式： −（ＣＨ2 ）n −ＣＯ−Ｒ6 （式中、Ｒ6 は水酸基、ＯＭ（ここで、Ｍはアルカリ金
属原子、アルカリ土類金属原子又はＮＨ4 を表す。）、
ＮＨＲ7 （ここで、Ｒ7 は、水素原子、炭素数１〜４の
アシル基、炭素数１〜４のアルキル基又はアミノ酸残基
を表す。）又はＯＲ8 （ここで、Ｒ8 は炭素数１〜４の
アルキル基又は炭水化物残基を表す。）を表し、ｎは１
〜７の整数を表す。）で示される基を表し；Ｒ2 、
Ｒ3 、Ｒ 4、及びＲ5 は、それぞれ水素原子を表すか、
あるいはＲ2 とＲ3 、Ｒ3 とＲ 4、又はＲ 4とＲ5 は、
共同して二重結合を表してもよく、；前記５員環は、更
に水酸基で置換されていてもよく、隣接する環員炭素原
子間で二重結合を形成してもよい。〕で示すことができ
る。
又は次式： −（ＣＨ2 ）n −ＣＯ−Ｒ6 （式中、Ｒ6 は水酸基、ＯＭ（ここで、Ｍはアルカリ金
属原子、アルカリ土類金属原子又はＮＨ4 を表す。）、
ＮＨＲ7 （ここで、Ｒ7 は、水素原子、炭素数１〜４の
アシル基、炭素数１〜４のアルキル基又はアミノ酸残基
を表す。）又はＯＲ8 （ここで、Ｒ8 は炭素数１〜４の
アルキル基又は炭水化物残基を表す。）を表し、ｎは１
〜７の整数を表す。）で示される基を表し；Ｒ2 、
Ｒ3 、Ｒ 4、及びＲ5 は、それぞれ水素原子を表すか、
あるいはＲ2 とＲ3 、Ｒ3 とＲ 4、又はＲ 4とＲ5 は、
共同して二重結合を表してもよく、；前記５員環は、更
に水酸基で置換されていてもよく、隣接する環員炭素原
子間で二重結合を形成してもよい。〕で示すことができ
る。
【００４２】前記一般式（III）で示される化合物にお
いて、Ｒ1 、Ｒ7 、又はＲ8 で表される炭素数１〜４の
アルキル基としては、例えばメチル基、エチル基、ｎ−
プロピル基、ｉ−プロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチ
ル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔ−ブチル基を例示すること
ができる。Ｒ6 がＯＭである場合において、Ｍで表され
るアルカリ金属原子又はアルカリ土類金属原子として
は、例えばナトリウム、カリウム、カルシウムが挙げら
れる。
いて、Ｒ1 、Ｒ7 、又はＲ8 で表される炭素数１〜４の
アルキル基としては、例えばメチル基、エチル基、ｎ−
プロピル基、ｉ−プロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチ
ル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔ−ブチル基を例示すること
ができる。Ｒ6 がＯＭである場合において、Ｍで表され
るアルカリ金属原子又はアルカリ土類金属原子として
は、例えばナトリウム、カリウム、カルシウムが挙げら
れる。
【００４３】Ｒ6 がＮＨＲ7 である場合において、Ｒ7
で示される炭素数１〜４のアシル基は、直鎖、分岐鎖の
いずれでもよく、例えばホルミル基、アセチル基、プロ
ピオニル基、ブチリル基、アクリロイル基が挙げられ
る。Ｒ6 がＮＨＲ7 である場合において、Ｒ7 で示され
るアミノ酸残基とは、イソロイシル基、チロシル基、ト
リプトフィル基が挙げられる。
で示される炭素数１〜４のアシル基は、直鎖、分岐鎖の
いずれでもよく、例えばホルミル基、アセチル基、プロ
ピオニル基、ブチリル基、アクリロイル基が挙げられ
る。Ｒ6 がＮＨＲ7 である場合において、Ｒ7 で示され
るアミノ酸残基とは、イソロイシル基、チロシル基、ト
リプトフィル基が挙げられる。
【００４４】Ｒ6 がＯＲ8 である場合において、Ｒ8 で
示される炭水化物残基としては、グルコピラノシル基が
挙げられる。また、前記一般式（III）で示される化合
物は、５員環は、さらに水酸基で置換されていてもよ
く、隣接する環員炭素原子間で二重結合を形成してもよ
い。一般式（III）で示される化合物の具体例として
は、以下に示す化合物が挙げられるが、中でもククルビ
ン酸、又はククルビン酸メチルがタキサン型ジテルペン
の生産性向上に対する大きさの点から特に好ましい。
示される炭水化物残基としては、グルコピラノシル基が
挙げられる。また、前記一般式（III）で示される化合
物は、５員環は、さらに水酸基で置換されていてもよ
く、隣接する環員炭素原子間で二重結合を形成してもよ
い。一般式（III）で示される化合物の具体例として
は、以下に示す化合物が挙げられるが、中でもククルビ
ン酸、又はククルビン酸メチルがタキサン型ジテルペン
の生産性向上に対する大きさの点から特に好ましい。
【００４５】
【化１２】
【００４６】
【化１３】
【００４７】
【化１４】
【００４８】
【化１５】
【００４９】以上のジャスモン酸類は、合成により、又
は植物からの抽出等により調製される（H.Yamane et a
l. Agric. Biol. Chem., 44, 2857-2864(1980) ）。本
発明で使用されるジャスモン酸類には種々の異性体が存
在し、それぞれの異性体を単独で用いても、混合物の形
で用いてもかまわないが、シス体化合物を用いることが
特に好ましい。
は植物からの抽出等により調製される（H.Yamane et a
l. Agric. Biol. Chem., 44, 2857-2864(1980) ）。本
発明で使用されるジャスモン酸類には種々の異性体が存
在し、それぞれの異性体を単独で用いても、混合物の形
で用いてもかまわないが、シス体化合物を用いることが
特に好ましい。
【００５０】前記植物の組織または細胞培養は、本発明
によりジャスモン酸類の存在下に行うこと以外は、従来
から知られている方法によって行なうことができる。ジ
ャスモン酸類の用途としては、本願に記載の培地に添加
するなどして組織または細胞を培養し、得られる培養物
および／または培地から二次代謝産物を回収する方法の
ほか、当該植物体にジャスモン酸類を含む溶液を噴霧す
るなどして、二次代謝産物含量を増加させる方法を例示
することができる。
によりジャスモン酸類の存在下に行うこと以外は、従来
から知られている方法によって行なうことができる。ジ
ャスモン酸類の用途としては、本願に記載の培地に添加
するなどして組織または細胞を培養し、得られる培養物
および／または培地から二次代謝産物を回収する方法の
ほか、当該植物体にジャスモン酸類を含む溶液を噴霧す
るなどして、二次代謝産物含量を増加させる方法を例示
することができる。
【００５１】本発明で使用されるジャスモン酸類は、培
地における濃度が０.０１〜１０００μＭとすることが
必要であり、この中でも特にジャスモン酸類の濃度を
０.１〜５００μＭの範囲に調整することが本発明の方
法にとって好ましい。植物細胞培養物にジャスモン酸類
を添加して特定の二次代謝産物の生産が促進されること
はドイツで特許公告［DE 4122208］になっているが、本
発明に記載の各植物種に関しては、具体的な実施結果が
全く記載されていない。
地における濃度が０.０１〜１０００μＭとすることが
必要であり、この中でも特にジャスモン酸類の濃度を
０.１〜５００μＭの範囲に調整することが本発明の方
法にとって好ましい。植物細胞培養物にジャスモン酸類
を添加して特定の二次代謝産物の生産が促進されること
はドイツで特許公告［DE 4122208］になっているが、本
発明に記載の各植物種に関しては、具体的な実施結果が
全く記載されていない。
【００５２】また、本発明者らが、該ドイツ特許に基づ
いて、多くの植物種の二次代謝産物生産に対して、ジャ
スモン酸メチルの生産促進効果を調べた結果では、ジャ
スモン酸メチルの効果は植物種によって大きく異なり、
ジャスモン酸メチルの存在下に組織または細胞を培養し
ても、二次代謝産物生産が全く促進されない植物種も認
められた。
いて、多くの植物種の二次代謝産物生産に対して、ジャ
スモン酸メチルの生産促進効果を調べた結果では、ジャ
スモン酸メチルの効果は植物種によって大きく異なり、
ジャスモン酸メチルの存在下に組織または細胞を培養し
ても、二次代謝産物生産が全く促進されない植物種も認
められた。
【００５３】たとえば、ズボイシア(Duboisia myoporoi
des)の培養根は、通常、乾燥重量当たり約１％のトロパ
ンアルカロイド（ヒヨシアミン＋スコポラミン）を生産
するが、広濃度範囲のジャスモン酸メチルの存在下に培
養を行っても、トロパンアルカロイドの生産量は全く増
加しなかった。さらに、他の植物について、二次代謝産
物の生産に対するジャスモン酸メチルの効果を調べた結
果、該ドイツ特許に記載されない特定の植物種、すなわ
ちイチョウ科、メギ科、ツヅラフジ科、ウリ科、ニッサ
科、ウコギ科、ヤマゴボウ科、アカザ科、キキョウ科ま
たはヤマノイモ科に属する植物の組織または細胞培養に
おいては、該ドイツ特許に記載される効果（対照に対す
る目的二次代謝産物生産性の増加割合：２倍〜４０倍）
をはるかに上回るレベルで、各二次代謝産物の生産性向
上が認められた。これらの結果は、予想外のことであっ
た。
des)の培養根は、通常、乾燥重量当たり約１％のトロパ
ンアルカロイド（ヒヨシアミン＋スコポラミン）を生産
するが、広濃度範囲のジャスモン酸メチルの存在下に培
養を行っても、トロパンアルカロイドの生産量は全く増
加しなかった。さらに、他の植物について、二次代謝産
物の生産に対するジャスモン酸メチルの効果を調べた結
果、該ドイツ特許に記載されない特定の植物種、すなわ
ちイチョウ科、メギ科、ツヅラフジ科、ウリ科、ニッサ
科、ウコギ科、ヤマゴボウ科、アカザ科、キキョウ科ま
たはヤマノイモ科に属する植物の組織または細胞培養に
おいては、該ドイツ特許に記載される効果（対照に対す
る目的二次代謝産物生産性の増加割合：２倍〜４０倍）
をはるかに上回るレベルで、各二次代謝産物の生産性向
上が認められた。これらの結果は、予想外のことであっ
た。
【００５４】さらに、本発明者らは、ジャスモン酸メチ
ルなどの添加効果を詳しく検討する中で、培養開始後、
言い換えれば組織または細胞を新鮮培地に移植後、ジャ
スモン酸類などを特定の期間に添加することによって、
それらの二次代謝産物の生産促進作用を著しく高めうる
ことを見いだした。このことは、細胞内におけるジャス
モン酸類などの受容機構、つまりレセプターや信号伝達
機構が整うのが、特定の期間に限定されることを意味し
ており、予想外のことであった。
ルなどの添加効果を詳しく検討する中で、培養開始後、
言い換えれば組織または細胞を新鮮培地に移植後、ジャ
スモン酸類などを特定の期間に添加することによって、
それらの二次代謝産物の生産促進作用を著しく高めうる
ことを見いだした。このことは、細胞内におけるジャス
モン酸類などの受容機構、つまりレセプターや信号伝達
機構が整うのが、特定の期間に限定されることを意味し
ており、予想外のことであった。
【００５５】具体的な添加時期としては、組織または細
胞を新鮮培地に添加した後、０〜７２時間後を例示する
ことができ、特に好ましくは０〜３６時間後を例示する
ことができる。これらの時期は、細胞の増殖から見たと
きの誘導期初期にあたる。本発明の組織培養に使用され
る培地としては、従来から知られている植物の組織培養
に用いられる培地、例えばムラシゲ・スクーグ(1962年)
〔Murashige & Skoog〕の培地、リンスマイヤー・スク
ーグ(1965年)〔Linsmaier Skoog〕の培地、ウッディー
・プラント・メディウム(1981年) 〔Woody Plant Mediu
m〕の培地、ガンボルグ〔Gamborg〕のＢ−５培地、三井
のＭ−９培地等が挙げられる。
胞を新鮮培地に添加した後、０〜７２時間後を例示する
ことができ、特に好ましくは０〜３６時間後を例示する
ことができる。これらの時期は、細胞の増殖から見たと
きの誘導期初期にあたる。本発明の組織培養に使用され
る培地としては、従来から知られている植物の組織培養
に用いられる培地、例えばムラシゲ・スクーグ(1962年)
〔Murashige & Skoog〕の培地、リンスマイヤー・スク
ーグ(1965年)〔Linsmaier Skoog〕の培地、ウッディー
・プラント・メディウム(1981年) 〔Woody Plant Mediu
m〕の培地、ガンボルグ〔Gamborg〕のＢ−５培地、三井
のＭ−９培地等が挙げられる。
【００５６】これら培地に植物ホルモンを添加し、更に
必要に応じて炭素源、無機成分、ビタミン類、アミノ酸
等を添加することもできる。炭素源としては、シュクロ
ース、マルトース、ラクトース等の二糖類、グルコー
ス、フルクトース、ガラクトース等の単糖類、デンプン
あるいはこれら糖源の２種類以上を適当な比率で混合し
たものを使用できる。
必要に応じて炭素源、無機成分、ビタミン類、アミノ酸
等を添加することもできる。炭素源としては、シュクロ
ース、マルトース、ラクトース等の二糖類、グルコー
ス、フルクトース、ガラクトース等の単糖類、デンプン
あるいはこれら糖源の２種類以上を適当な比率で混合し
たものを使用できる。
【００５７】無機成分としては、例えばリン、窒素、カ
リウム、カルシウム、マグネシウム、イオウ、鉄、マン
ガン、亜鉛、ホウ素、銅、モリブデン、塩素、ナトリウ
ム、ヨウ素、コバルト等があげられ、これらの成分は例
えば硝酸カリウム、硝酸ナトリウム、硝酸カルシウム、
塩化カリウム、リン酸１水素カリウム、リン酸２水素カ
リウム、塩化カルシウム、硫酸マグネシウム、硫酸ナト
リウム、硫酸第一鉄、硫酸第二鉄、硫酸マンガン、硫酸
亜鉛、ホウ酸、硫酸銅、モリブデン酸ナトリウム、三酸
化モリブデン、ヨウ化カリウム、塩化コバルト等の化合
物として添加できる。
リウム、カルシウム、マグネシウム、イオウ、鉄、マン
ガン、亜鉛、ホウ素、銅、モリブデン、塩素、ナトリウ
ム、ヨウ素、コバルト等があげられ、これらの成分は例
えば硝酸カリウム、硝酸ナトリウム、硝酸カルシウム、
塩化カリウム、リン酸１水素カリウム、リン酸２水素カ
リウム、塩化カルシウム、硫酸マグネシウム、硫酸ナト
リウム、硫酸第一鉄、硫酸第二鉄、硫酸マンガン、硫酸
亜鉛、ホウ酸、硫酸銅、モリブデン酸ナトリウム、三酸
化モリブデン、ヨウ化カリウム、塩化コバルト等の化合
物として添加できる。
【００５８】植物ホルモンとしては、例えばインドール
酢酸(IAA)、ナフタレン酢酸(NAA)、２,４−ジクロロフ
ェノキシ酢酸(2,4-D)等のオーキシン類、カイネチン、
ゼアチン、ジヒドロゼアチン等のサイトカイニン類が用
いられる。ビタミン類としては、例えばビオチン、チア
ミン（ビタミンＢ1）、ピリドキシン（ビタミンＢ6）、
パントテン酸、イノシトール、ニコチン酸等が用いられ
る。
酢酸(IAA)、ナフタレン酢酸(NAA)、２,４−ジクロロフ
ェノキシ酢酸(2,4-D)等のオーキシン類、カイネチン、
ゼアチン、ジヒドロゼアチン等のサイトカイニン類が用
いられる。ビタミン類としては、例えばビオチン、チア
ミン（ビタミンＢ1）、ピリドキシン（ビタミンＢ6）、
パントテン酸、イノシトール、ニコチン酸等が用いられ
る。
【００５９】アミノ酸類としては、例えばグリシン、フ
ェニルアラニン、ロイシン、グルタミン、システイン等
を添加できる。一般に前記の各成分は、無機成分が約0.
1μM、ないし100mM、炭素源が約1〜約30g/l、植物ホル
モン類が約0.01〜約10μM、ビタミン類およびアミノ酸
類がそれぞれ約0.1〜約100mg/lの濃度で用いられる。
ェニルアラニン、ロイシン、グルタミン、システイン等
を添加できる。一般に前記の各成分は、無機成分が約0.
1μM、ないし100mM、炭素源が約1〜約30g/l、植物ホル
モン類が約0.01〜約10μM、ビタミン類およびアミノ酸
類がそれぞれ約0.1〜約100mg/lの濃度で用いられる。
【００６０】尚、本発明には液体培地および寒天やゲラ
ンガム等を通常0.1〜1％含有する固形培地のいずれも使
用できるが、通常は液体培地が好ましい。本発明の組織
培養においては、上記植物の根、生長点、葉、茎、種
子、花粉、葯、がく等の組織片または細胞、あるいはこ
れらを上記培地あるいは他の従来の培地によって組織培
養して得られる培養細胞を使用することができる。
ンガム等を通常0.1〜1％含有する固形培地のいずれも使
用できるが、通常は液体培地が好ましい。本発明の組織
培養においては、上記植物の根、生長点、葉、茎、種
子、花粉、葯、がく等の組織片または細胞、あるいはこ
れらを上記培地あるいは他の従来の培地によって組織培
養して得られる培養細胞を使用することができる。
【００６１】これらの組織または細胞をジャスモン酸類
の存在下に培養すると、無添加または無処理の場合と比
較して、当該植物種が生産する各二次代謝産物の高生産
性培養組織または培養細胞が得られる。以上のようにし
て生産された二次代謝産物は、得られた培養組織または
培養細胞および／または培地から、メタノール等の有機
溶媒による抽出によって分離することができる。また、
培地中に適当な吸着剤や有機溶媒を共存させ、連続的に
を回収することもできる。
の存在下に培養すると、無添加または無処理の場合と比
較して、当該植物種が生産する各二次代謝産物の高生産
性培養組織または培養細胞が得られる。以上のようにし
て生産された二次代謝産物は、得られた培養組織または
培養細胞および／または培地から、メタノール等の有機
溶媒による抽出によって分離することができる。また、
培地中に適当な吸着剤や有機溶媒を共存させ、連続的に
を回収することもできる。
【００６２】本発明における組織培養の好ましい一例と
しては、次の方法が挙げられる。イチョウ科、メギ科、
ツヅラフジ科、ウリ科、ニッサ科、ウコギ科、ヤマゴボ
ウ科、アカザ科、またはヤマノイモ科に属する植物の植
物体、例えば根、生長点、葉、茎、種子などから採取さ
れる植物片を殺菌処理後、ゲランガムで固めたムラシゲ
・スクーグ培地などの固体培地上に置床し、10〜35℃で
14〜60日程度経過させて組織片の一部から、苗条、培養
根またはカルスを生成させる。このようにして得られた
培養体を継代培養すると生育速度が漸次高まり安定化し
た培養体が得られる。ここで、安定化した培養体とは、
培養中に目的外の器官分化やカルス化が起こらない状態
を保持する性質をもち培養体の生育速度が均質であるも
のをいう。
しては、次の方法が挙げられる。イチョウ科、メギ科、
ツヅラフジ科、ウリ科、ニッサ科、ウコギ科、ヤマゴボ
ウ科、アカザ科、またはヤマノイモ科に属する植物の植
物体、例えば根、生長点、葉、茎、種子などから採取さ
れる植物片を殺菌処理後、ゲランガムで固めたムラシゲ
・スクーグ培地などの固体培地上に置床し、10〜35℃で
14〜60日程度経過させて組織片の一部から、苗条、培養
根またはカルスを生成させる。このようにして得られた
培養体を継代培養すると生育速度が漸次高まり安定化し
た培養体が得られる。ここで、安定化した培養体とは、
培養中に目的外の器官分化やカルス化が起こらない状態
を保持する性質をもち培養体の生育速度が均質であるも
のをいう。
【００６３】この安定化した培養体を増殖に適した液体
培地、例えばムラシゲ・スクーグの液体培地に移して増
殖させる。液体培地において更に生育速度が高められ
る。本発明では、この安定化した培養体は、ジャスモン
酸類を含有する固体培地または液体培地で培養される。
本発明で使用されるジャスモン酸類は、培養体が増殖の
誘導期に添加することがもっとも効果的であり、この中
でも特に誘導期初期に添加することが本発明の方法にと
って好ましく、培養直後〜７２時間がジャスモン酸類の
添加の適期として例示できる。ジャスモン酸類の添加方
法としては、一度に行ってもよいし、複数回に分けて行
ってもよい。
培地、例えばムラシゲ・スクーグの液体培地に移して増
殖させる。液体培地において更に生育速度が高められ
る。本発明では、この安定化した培養体は、ジャスモン
酸類を含有する固体培地または液体培地で培養される。
本発明で使用されるジャスモン酸類は、培養体が増殖の
誘導期に添加することがもっとも効果的であり、この中
でも特に誘導期初期に添加することが本発明の方法にと
って好ましく、培養直後〜７２時間がジャスモン酸類の
添加の適期として例示できる。ジャスモン酸類の添加方
法としては、一度に行ってもよいし、複数回に分けて行
ってもよい。
【００６４】本発明の培養のための温度としては、通常
は約10〜約35℃、特に約23〜28℃が増殖速度が大きいの
で好適である。また、培養期間としては、７〜４２日間
が好適である。また、培養体が苗条である場合、または
二次代謝産物の生成に光が必要な場合には、培養体を蛍
光灯など、1000〜10000ルックスの照明下で行うことも
可能である。
は約10〜約35℃、特に約23〜28℃が増殖速度が大きいの
で好適である。また、培養期間としては、７〜４２日間
が好適である。また、培養体が苗条である場合、または
二次代謝産物の生成に光が必要な場合には、培養体を蛍
光灯など、1000〜10000ルックスの照明下で行うことも
可能である。
【００６５】本発明の培養方法において液体培地を用い
た場合には、培養終了後に培養体をデカンテーションま
たは濾過等の方法によって培地から分離し、培養細胞お
よび／または培地から目的とする二次代謝産物を有機溶
媒による抽出等の方法によって分離することができる。
以上のようにして生産された二次代謝産物は、得られた
培養体からメタノール等の有機溶媒による抽出によって
分離することができる。
た場合には、培養終了後に培養体をデカンテーションま
たは濾過等の方法によって培地から分離し、培養細胞お
よび／または培地から目的とする二次代謝産物を有機溶
媒による抽出等の方法によって分離することができる。
以上のようにして生産された二次代謝産物は、得られた
培養体からメタノール等の有機溶媒による抽出によって
分離することができる。
【００６６】
【００６７】
【実施例】以下、実施例および比較例により本発明を更
に具体的に説明するが、本発明の範囲はこれらの実施例
に限定されるものではない。 ［参考例１］ズボイシア(Duboisia myoporoides)の茎か
ら誘導したカルスを、植物ホルモンとして10-5Ｍの2,4-
Dを含むムラシゲ・スクーグ液体培地に移植した後、三
角フラスコを用いて振盪培養し、暗黒下、３週間おきに
移植を繰り返すことによって得られた液体培養細胞を使
用した。培地に細胞を移植する直前または移植の２４時
間後、メタノールに溶解したジャスモン酸メチル（シス
体およびトランス体の混合物）を、培地中の濃度が１０
０μＭになるように添加し、振盪培養を継続した。培養
開始から３週間経過後、ろ過によって細胞を集め、凍結
乾燥した。得られた乾燥細胞に含まれるトロピン誘導
体、スコポラミンは、Yukimuneらの方法(Y. Yukimune e
t al., Biosci. Biotech. Biochem., 58, pp.1824-182
7, 1994)にしたがって抽出し、同文献に記載のＧＣ−Ｍ
Ｓを用いる方法で同定および定量した。結果を表１に示
した。
に具体的に説明するが、本発明の範囲はこれらの実施例
に限定されるものではない。 ［参考例１］ズボイシア(Duboisia myoporoides)の茎か
ら誘導したカルスを、植物ホルモンとして10-5Ｍの2,4-
Dを含むムラシゲ・スクーグ液体培地に移植した後、三
角フラスコを用いて振盪培養し、暗黒下、３週間おきに
移植を繰り返すことによって得られた液体培養細胞を使
用した。培地に細胞を移植する直前または移植の２４時
間後、メタノールに溶解したジャスモン酸メチル（シス
体およびトランス体の混合物）を、培地中の濃度が１０
０μＭになるように添加し、振盪培養を継続した。培養
開始から３週間経過後、ろ過によって細胞を集め、凍結
乾燥した。得られた乾燥細胞に含まれるトロピン誘導
体、スコポラミンは、Yukimuneらの方法(Y. Yukimune e
t al., Biosci. Biotech. Biochem., 58, pp.1824-182
7, 1994)にしたがって抽出し、同文献に記載のＧＣ−Ｍ
Ｓを用いる方法で同定および定量した。結果を表１に示
した。
【００６８】［参考例２］参考例１において、ジャスモ
ン酸メチルを添加しないこと以外は、参考例１と同様に
実施した。結果を表１に示した。 ［参考例３］参考例１において、取得した培養物が培養
根であり、その培養に用いた培地に含まれる植物ホルモ
ンが10-5ＭのIBAであること以外は、参考例１と同様に
実施した。結果を表１に示した。
ン酸メチルを添加しないこと以外は、参考例１と同様に
実施した。結果を表１に示した。 ［参考例３］参考例１において、取得した培養物が培養
根であり、その培養に用いた培地に含まれる植物ホルモ
ンが10-5ＭのIBAであること以外は、参考例１と同様に
実施した。結果を表１に示した。
【００６９】［参考例４］参考例３において、ジャスモ
ン酸メチルを添加しないこと以外は、参考例３と同様に
実施した。結果を表１に示した。
ン酸メチルを添加しないこと以外は、参考例３と同様に
実施した。結果を表１に示した。
【００７０】
【表１】
【００７１】［実施例１］イチョウ(Ginkgo biloba L.)
の幼葉から誘導したカルスを、植物ホルモンとして10-5
Ｍのα-ナフタレン酢酸および10-8Ｍのベンジルアデニ
ンを含むリンスマイヤー・スクーグ液体培地に移植した
後、三角フラスコを用いて振盪培養し、暗黒下、３週間
おきに移植を繰り返すことによって得られた液体培養細
胞を使用した。培地に細胞を移植する直前または移植の
24時間後、メタノールに溶解したジャスモン酸メチル
（シス体およびトランス体の混合物）を、培地中の濃度
が１００μＭになるように添加し、振盪培養を継続し
た。培養開始から３週間経過後、ろ過によって細胞を集
め、凍結乾燥した。得られた乾燥細胞に含まれるギンゴ
リド類は、Carrierらの方法(D.J. Carrier et al., In
"Progress in Plant Cellular and Molecular Biolog
y" eds. H.J.J. Nijkamp et al., Kluwer Academic Pub
lishers, Dordrecht, 1990, pp.614-618)にしたがって
抽出し、同文献に記載のＧＣ−ＭＳを用いる方法で同定
および定量した。結果を表２に示した。
の幼葉から誘導したカルスを、植物ホルモンとして10-5
Ｍのα-ナフタレン酢酸および10-8Ｍのベンジルアデニ
ンを含むリンスマイヤー・スクーグ液体培地に移植した
後、三角フラスコを用いて振盪培養し、暗黒下、３週間
おきに移植を繰り返すことによって得られた液体培養細
胞を使用した。培地に細胞を移植する直前または移植の
24時間後、メタノールに溶解したジャスモン酸メチル
（シス体およびトランス体の混合物）を、培地中の濃度
が１００μＭになるように添加し、振盪培養を継続し
た。培養開始から３週間経過後、ろ過によって細胞を集
め、凍結乾燥した。得られた乾燥細胞に含まれるギンゴ
リド類は、Carrierらの方法(D.J. Carrier et al., In
"Progress in Plant Cellular and Molecular Biolog
y" eds. H.J.J. Nijkamp et al., Kluwer Academic Pub
lishers, Dordrecht, 1990, pp.614-618)にしたがって
抽出し、同文献に記載のＧＣ−ＭＳを用いる方法で同定
および定量した。結果を表２に示した。
【００７２】［比較例１］実施例１において、ジャスモ
ン酸メチルを添加しないこと以外は、実施例１と同様に
実施した。結果を表２に示した。
ン酸メチルを添加しないこと以外は、実施例１と同様に
実施した。結果を表２に示した。
【００７３】
【表２】
【００７４】［実施例２］メギ(Berberis thunbergii D
C.)の幼葉から誘導したカルスを、植物ホルモンとして1
0-5Ｍのα−ナフタレン酢酸と10-8Ｍのベンジルアデニ
ンを含むムラシゲ・スクーグ液体培地に移植した後、暗
黒下、三角フラスコを用いて振盪培養し、２週間おきに
移植を繰り返すことによって得られた液体培養細胞を使
用した。培地に細胞を移植する直前または移植の24時間
後、メタノールに溶解したジャスモン酸メチル（シス体
およびトランス体の混合物）を、培地中の濃度が１００
μＭになるように添加し、振盪培養を継続した。培養開
始から２週間経過後、ろ過によって細胞を集め、凍結乾
燥した。得られた乾燥細胞に含まれるベルベリンは、Mo
rimotoらの方法(T. Morimoto et al., Agric. Biol. Ch
em., vol. 52, pp.1835-1836, 1988)にしたがって抽出
し、同文献に記載の液体クロマトグラフィー（ＬＣ）を
用いる方法で定量した。なお、化合物の同定は、塩化ベ
ルベリン標品とのＬＣ−ＭＳフラグメントの比較によっ
て行った。結果を表３に示した。
C.)の幼葉から誘導したカルスを、植物ホルモンとして1
0-5Ｍのα−ナフタレン酢酸と10-8Ｍのベンジルアデニ
ンを含むムラシゲ・スクーグ液体培地に移植した後、暗
黒下、三角フラスコを用いて振盪培養し、２週間おきに
移植を繰り返すことによって得られた液体培養細胞を使
用した。培地に細胞を移植する直前または移植の24時間
後、メタノールに溶解したジャスモン酸メチル（シス体
およびトランス体の混合物）を、培地中の濃度が１００
μＭになるように添加し、振盪培養を継続した。培養開
始から２週間経過後、ろ過によって細胞を集め、凍結乾
燥した。得られた乾燥細胞に含まれるベルベリンは、Mo
rimotoらの方法(T. Morimoto et al., Agric. Biol. Ch
em., vol. 52, pp.1835-1836, 1988)にしたがって抽出
し、同文献に記載の液体クロマトグラフィー（ＬＣ）を
用いる方法で定量した。なお、化合物の同定は、塩化ベ
ルベリン標品とのＬＣ−ＭＳフラグメントの比較によっ
て行った。結果を表３に示した。
【００７５】［比較例２］実施例２において、ジャスモ
ン酸メチルを添加しないこと以外は、実施例２と同様に
実施した。結果を表３に示した。
ン酸メチルを添加しないこと以外は、実施例２と同様に
実施した。結果を表３に示した。
【００７６】
【表３】
【００７７】［実施例３］Podophyllum peltatum L.の
胚から誘導した培養根を、植物ホルモンとして10- 6Ｍの
α−ナフタレン酢酸を含むガンボルグのＢ５液体培地に
移植した後、暗黒下、三角フラスコを用いて振盪培養
し、３週間おきに移植を繰り返すことによって得られた
安定化培養根を使用した。培地に培養根を移植する直前
または移植の24時間後、メタノールに溶解したジャスモ
ン酸メチル（シス体およびトランス体の混合物）を、培
地中の濃度が１００μＭになるように添加し、振盪培養
を継続した。培養開始から３週間経過後、培養根を回収
し、凍結乾燥した。得られた乾燥培養根に含まれるポド
フィロトキシンは、Van Udenらの方法(W. Van Uden eta
l., Plant Cell Reports Vol.8, 165-168, 1989)にした
がって抽出し、同文献に記載の液体クロマトグラフを用
いる方法で同定および定量した。結果を表４に示した。
胚から誘導した培養根を、植物ホルモンとして10- 6Ｍの
α−ナフタレン酢酸を含むガンボルグのＢ５液体培地に
移植した後、暗黒下、三角フラスコを用いて振盪培養
し、３週間おきに移植を繰り返すことによって得られた
安定化培養根を使用した。培地に培養根を移植する直前
または移植の24時間後、メタノールに溶解したジャスモ
ン酸メチル（シス体およびトランス体の混合物）を、培
地中の濃度が１００μＭになるように添加し、振盪培養
を継続した。培養開始から３週間経過後、培養根を回収
し、凍結乾燥した。得られた乾燥培養根に含まれるポド
フィロトキシンは、Van Udenらの方法(W. Van Uden eta
l., Plant Cell Reports Vol.8, 165-168, 1989)にした
がって抽出し、同文献に記載の液体クロマトグラフを用
いる方法で同定および定量した。結果を表４に示した。
【００７８】［比較例３］実施例３において、ジャスモ
ン酸メチルを添加しないこと以外は、実施例３と同様に
実施した。結果を表４に示した。
ン酸メチルを添加しないこと以外は、実施例３と同様に
実施した。結果を表４に示した。
【００７９】
【表４】
【００８０】［実施例４］タマサキツヅラフジ(Stephan
ia cephantha Hayata)の幼葉から誘導した培養根を、植
物ホルモンとして10-5Ｍの3-インドール酪酸を含むガン
ボルグのＢ５液体培地に移植した後、暗黒下、三角フラ
スコを用いて振盪培養し、３週間おきに移植を繰り返す
ことによって得られた培養根を使用した。培地に培養根
を移植する直前または移植の24時間後、メタノールに溶
解したジャスモン酸メチル（シス体およびトランス体の
混合物）を、培地中の濃度が１００μＭになるように添
加し、振盪培養を継続した。培養開始から３週間経過
後、ろ過によって細胞を集め、凍結乾燥した。得られた
乾燥細胞に含まれるアロモリンは、Sugimotoらの方法
(Y. Sugimoto et al., J. Nat. Prod., vol.52, 199-20
2, 1989)にしたがって抽出し、同文献に記載の液体クロ
マトグラフを用いる方法で同定および定量した。結果を
表５に示した。
ia cephantha Hayata)の幼葉から誘導した培養根を、植
物ホルモンとして10-5Ｍの3-インドール酪酸を含むガン
ボルグのＢ５液体培地に移植した後、暗黒下、三角フラ
スコを用いて振盪培養し、３週間おきに移植を繰り返す
ことによって得られた培養根を使用した。培地に培養根
を移植する直前または移植の24時間後、メタノールに溶
解したジャスモン酸メチル（シス体およびトランス体の
混合物）を、培地中の濃度が１００μＭになるように添
加し、振盪培養を継続した。培養開始から３週間経過
後、ろ過によって細胞を集め、凍結乾燥した。得られた
乾燥細胞に含まれるアロモリンは、Sugimotoらの方法
(Y. Sugimoto et al., J. Nat. Prod., vol.52, 199-20
2, 1989)にしたがって抽出し、同文献に記載の液体クロ
マトグラフを用いる方法で同定および定量した。結果を
表５に示した。
【００８１】［比較例４］実施例４において、ジャスモ
ン酸メチルを添加しないこと以外は、実施例４と同様に
実施した。結果を表５に示した。
ン酸メチルを添加しないこと以外は、実施例４と同様に
実施した。結果を表５に示した。
【００８２】
【表５】
【００８３】［実施例５］ヘチマ(Luffa cylindrica)の
胚軸から誘導したカルスを、植物ホルモンとして10-7Ｍ
のα−ナフタレン酢酸を含むリンスマイヤー・スクーグ
液体培地に移植した後、暗黒下、三角フラスコを用いて
振盪培養し、３週間おきに移植を繰り返すことによって
得られた液体培養細胞を使用した。培地に細胞を移植す
る直前または移植の24時間後、メタノールに溶解したジ
ャスモン酸メチル（シス体およびトランス体の混合物）
を、培地中の濃度が１００μＭになるように添加し、振
盪培養を継続した。培養開始から３週間経過後、ろ過に
よって細胞を集め、凍結乾燥した。得られた乾燥細胞に
含まれるブリオノール酸は、Kamisakoらの方法(W. Kami
sako et al., Plant & Cell Physiol., Vol.25, 1571-1
574, 1984)にしたがって抽出し、同文献に記載のＧＣ−
ＭＳを用いる方法で同定および定量した。結果を表６に
示した。
胚軸から誘導したカルスを、植物ホルモンとして10-7Ｍ
のα−ナフタレン酢酸を含むリンスマイヤー・スクーグ
液体培地に移植した後、暗黒下、三角フラスコを用いて
振盪培養し、３週間おきに移植を繰り返すことによって
得られた液体培養細胞を使用した。培地に細胞を移植す
る直前または移植の24時間後、メタノールに溶解したジ
ャスモン酸メチル（シス体およびトランス体の混合物）
を、培地中の濃度が１００μＭになるように添加し、振
盪培養を継続した。培養開始から３週間経過後、ろ過に
よって細胞を集め、凍結乾燥した。得られた乾燥細胞に
含まれるブリオノール酸は、Kamisakoらの方法(W. Kami
sako et al., Plant & Cell Physiol., Vol.25, 1571-1
574, 1984)にしたがって抽出し、同文献に記載のＧＣ−
ＭＳを用いる方法で同定および定量した。結果を表６に
示した。
【００８４】［比較例５］実施例５において、ジャスモ
ン酸メチルを添加しないこと以外は、実施例５と同様に
実施した。結果を表６に示した。
ン酸メチルを添加しないこと以外は、実施例５と同様に
実施した。結果を表６に示した。
【００８５】
【表６】
【００８６】［実施例６］キジュ(Camptotheca acumina
ta Dence)の茎から誘導したカルスを、植物ホルモンと
して10-5Ｍのαーナフタレン酢酸と10ー6Ｍのカイネチン
含むムラシゲ・スクーグ液体培地に移植した後、暗黒
下、三角フラスコを用いて振盪培養し、３週間おきに移
植を繰り返すことによって得られた液体培養細胞を使用
した。培地に細胞を移植する直前または移植の24時間
後、メタノールに溶解したジャスモン酸メチル（シス体
およびトランス体の混合物）を、培地中の濃度が１００
μＭになるように添加し、振盪培養を継続した。培養開
始から３週間経過後、ろ過によって細胞を集め、凍結乾
燥した。得られた乾燥細胞に含まれるカンプトテシン
は、Arjonらの方法(Plant Cell, Tissue and Organ Cul
ture, vol.28, pp.11-18, 1992)にしたがって抽出し、
同文献に記載の液体クロマトグラフィー条件にを用いる
方法で定量した。なお、カンプトテシンの同程は、前記
条件にしたがったＬＣ−ＭＳによった。結果を表７に示
した。
ta Dence)の茎から誘導したカルスを、植物ホルモンと
して10-5Ｍのαーナフタレン酢酸と10ー6Ｍのカイネチン
含むムラシゲ・スクーグ液体培地に移植した後、暗黒
下、三角フラスコを用いて振盪培養し、３週間おきに移
植を繰り返すことによって得られた液体培養細胞を使用
した。培地に細胞を移植する直前または移植の24時間
後、メタノールに溶解したジャスモン酸メチル（シス体
およびトランス体の混合物）を、培地中の濃度が１００
μＭになるように添加し、振盪培養を継続した。培養開
始から３週間経過後、ろ過によって細胞を集め、凍結乾
燥した。得られた乾燥細胞に含まれるカンプトテシン
は、Arjonらの方法(Plant Cell, Tissue and Organ Cul
ture, vol.28, pp.11-18, 1992)にしたがって抽出し、
同文献に記載の液体クロマトグラフィー条件にを用いる
方法で定量した。なお、カンプトテシンの同程は、前記
条件にしたがったＬＣ−ＭＳによった。結果を表７に示
した。
【００８７】［比較例６］実施例６において、ジャスモ
ン酸メチルを添加しないこと以外は、実施例６と同様に
実施した。結果を表７に示した。
ン酸メチルを添加しないこと以外は、実施例６と同様に
実施した。結果を表７に示した。
【００８８】
【表７】
【００８９】［実施例７］オタネニンジン(Panax ginse
ng C.A.Meyer)の幼葉から誘導した培養根を、植物ホル
モンとして2.2μＭの2,4-Dおよび0.8μＭのカイネチン
を含むムラシゲ・スクーグ液体培地に移植した後、暗黒
下、三角フラスコを用いて振盪培養し、３週間おきに移
植を繰り返すことによって得られた培養根を使用した。
培地に培養根を移植する直前または移植の24時間後、メ
タノールに溶解したジャスモン酸メチル（シス体および
トランス体の混合物）を、培地中の濃度が１００μＭに
なるように添加し、振盪培養を継続した。培養開始から
３週間経過後、培養根を集め、凍結乾燥した。得られた
乾燥培養根に含まれるジンセンサポニン類は、Furuyaら
の方法(T. Furuya et al., Chem. Pharm. Bull. Vol.2
1, 98-101, 1973)にしたがって抽出し、同文献に記載の
液体クロマトグラフを用いる方法で同定および定量し
た。結果を表８に示した。
ng C.A.Meyer)の幼葉から誘導した培養根を、植物ホル
モンとして2.2μＭの2,4-Dおよび0.8μＭのカイネチン
を含むムラシゲ・スクーグ液体培地に移植した後、暗黒
下、三角フラスコを用いて振盪培養し、３週間おきに移
植を繰り返すことによって得られた培養根を使用した。
培地に培養根を移植する直前または移植の24時間後、メ
タノールに溶解したジャスモン酸メチル（シス体および
トランス体の混合物）を、培地中の濃度が１００μＭに
なるように添加し、振盪培養を継続した。培養開始から
３週間経過後、培養根を集め、凍結乾燥した。得られた
乾燥培養根に含まれるジンセンサポニン類は、Furuyaら
の方法(T. Furuya et al., Chem. Pharm. Bull. Vol.2
1, 98-101, 1973)にしたがって抽出し、同文献に記載の
液体クロマトグラフを用いる方法で同定および定量し
た。結果を表８に示した。
【００９０】［比較例７］実施例７において、ジャスモ
ン酸メチルを添加しないこと以外は、実施例７と同様に
実施した。結果を表８に示した。
ン酸メチルを添加しないこと以外は、実施例７と同様に
実施した。結果を表８に示した。
【００９１】
【表８】
【００９２】［実施例８］ヨウシュヤマゴボウ(Phytola
cca americana)の茎から誘導したカルスを、植物ホルモ
ンとして10-5Ｍの2,4-Dを含むニッチ・アンド・ニッチ
液体培地に移植した後、約８０００ルックスの光照射
下、三角フラスコを用いて振盪培養し、３週間おきに移
植を繰り返すことによって得られた液体培養細胞を使用
した。培地に細胞を移植する直前または移植の24時間
後、メタノールに溶解したジャスモン酸メチル（シス体
およびトランス体の混合物）を、培地中の濃度が１００
μＭになるように添加し、振盪培養を継続した。培養開
始から３週間経過後、ろ過によって細胞を集め、凍結乾
燥した。得られた乾燥細胞に含まれるベタシアニンは、
三澤らの方法(化学と生物13巻、pp.625-632, 1977)にし
たがって抽出し、抽出液の535nmにおける吸光度を測定
し標品の吸光度と比較することによって定量した。結果
を表９に示した。
cca americana)の茎から誘導したカルスを、植物ホルモ
ンとして10-5Ｍの2,4-Dを含むニッチ・アンド・ニッチ
液体培地に移植した後、約８０００ルックスの光照射
下、三角フラスコを用いて振盪培養し、３週間おきに移
植を繰り返すことによって得られた液体培養細胞を使用
した。培地に細胞を移植する直前または移植の24時間
後、メタノールに溶解したジャスモン酸メチル（シス体
およびトランス体の混合物）を、培地中の濃度が１００
μＭになるように添加し、振盪培養を継続した。培養開
始から３週間経過後、ろ過によって細胞を集め、凍結乾
燥した。得られた乾燥細胞に含まれるベタシアニンは、
三澤らの方法(化学と生物13巻、pp.625-632, 1977)にし
たがって抽出し、抽出液の535nmにおける吸光度を測定
し標品の吸光度と比較することによって定量した。結果
を表９に示した。
【００９３】［比較例８］実施例８において、ジャスモ
ン酸メチルを添加しないこと以外は、実施例８と同様に
実施した。結果を表９に示した。
ン酸メチルを添加しないこと以外は、実施例８と同様に
実施した。結果を表９に示した。
【００９４】
【表９】
【００９５】［実施例９］ビート(Beta vulgaris)の茎
から誘導したカルスを、植物ホルモンとして10-5Ｍの2,
4-Dを含むムラシゲ・スクーグ液体培地に移植した後、
暗黒下、三角フラスコを用いて振盪培養し、３週間おき
に移植を繰り返すことによって得られた液体培養細胞を
使用した。培地に細胞を移植する直前または移植の24時
間後、メタノールに溶解したジャスモン酸メチル（シス
体およびトランス体の混合物）を、培地中の濃度が１０
０μＭになるように添加し、振盪培養を継続した。培養
開始から３週間経過後、ろ過によって細胞を集め、凍結
乾燥した。得られた乾燥細胞に含まれるベタシアニン
は、三澤らの方法(化学と生物13巻、pp.625-632, 1977)
にしたがって抽出し、抽出液の535 nmにおける吸光度を
測定し標品の吸光度と比較することによって定量した。
結果を表１０に示した。
から誘導したカルスを、植物ホルモンとして10-5Ｍの2,
4-Dを含むムラシゲ・スクーグ液体培地に移植した後、
暗黒下、三角フラスコを用いて振盪培養し、３週間おき
に移植を繰り返すことによって得られた液体培養細胞を
使用した。培地に細胞を移植する直前または移植の24時
間後、メタノールに溶解したジャスモン酸メチル（シス
体およびトランス体の混合物）を、培地中の濃度が１０
０μＭになるように添加し、振盪培養を継続した。培養
開始から３週間経過後、ろ過によって細胞を集め、凍結
乾燥した。得られた乾燥細胞に含まれるベタシアニン
は、三澤らの方法(化学と生物13巻、pp.625-632, 1977)
にしたがって抽出し、抽出液の535 nmにおける吸光度を
測定し標品の吸光度と比較することによって定量した。
結果を表１０に示した。
【００９６】［比較例９］実施例９において、ジャスモ
ン酸メチルを添加しないこと以外は、実施例９と同様に
実施した。結果を表１０に示した。
ン酸メチルを添加しないこと以外は、実施例９と同様に
実施した。結果を表１０に示した。
【００９７】
【表１０】
【００９８】［実施例１０］Dioscorea compositaの幼
葉から誘導した培養根を、植物ホルモンとして10-5Ｍの
αーナフタレン酢酸および10ー8Ｍのベンジルアデニンを
含むムラシゲ・スクーグ液体培地に移植した後、暗黒
下、三角フラスコを用いて振盪培養し、３週間おきに移
植を繰り返すことによって得られた培養根を使用した。
培地に培養根を移植する直前または移植の24時間後、メ
タノールに溶解したジャスモン酸メチル（シス体および
トランス体の混合物）を、培地中の濃度が１００μＭに
なるように添加し、振盪培養を継続した。培養開始から
３週間経過後、培養根を集め、凍結乾燥した。得られた
乾燥培養根に含まれるジオスゲニンは、Stohsらの方法
(S.T. Stohs et al., Lloydia, Vol.38, 191-194, 197
5)にしたがって抽出し、同文献に記載の液体クロマトグ
ラフを用いる方法で同定および定量した。結果を表１１
に示した。
葉から誘導した培養根を、植物ホルモンとして10-5Ｍの
αーナフタレン酢酸および10ー8Ｍのベンジルアデニンを
含むムラシゲ・スクーグ液体培地に移植した後、暗黒
下、三角フラスコを用いて振盪培養し、３週間おきに移
植を繰り返すことによって得られた培養根を使用した。
培地に培養根を移植する直前または移植の24時間後、メ
タノールに溶解したジャスモン酸メチル（シス体および
トランス体の混合物）を、培地中の濃度が１００μＭに
なるように添加し、振盪培養を継続した。培養開始から
３週間経過後、培養根を集め、凍結乾燥した。得られた
乾燥培養根に含まれるジオスゲニンは、Stohsらの方法
(S.T. Stohs et al., Lloydia, Vol.38, 191-194, 197
5)にしたがって抽出し、同文献に記載の液体クロマトグ
ラフを用いる方法で同定および定量した。結果を表１１
に示した。
【００９９】［比較例１０］実施例１０において、ジャ
スモン酸メチルを添加しないこと以外は、実施例１０と
同様に実施した。結果を表１１に示した。
スモン酸メチルを添加しないこと以外は、実施例１０と
同様に実施した。結果を表１１に示した。
【０１００】
【表１１】
【０１０１】
【発明の効果】本発明によれば、イチョウ科、メギ科、
ツヅラフジ科、ウリ科、ニッサ科、ウコギ科、ヤマゴボ
ウ科、アカザ科またはヤマノイモ科に属する植物の組織
または細胞培養において、ジャスモン酸類の存在下に培
養を行い、得られる培養物から各親植物に含まれる二次
代謝産物を効率よく回収することができる。
ツヅラフジ科、ウリ科、ニッサ科、ウコギ科、ヤマゴボ
ウ科、アカザ科またはヤマノイモ科に属する植物の組織
または細胞培養において、ジャスモン酸類の存在下に培
養を行い、得られる培養物から各親植物に含まれる二次
代謝産物を効率よく回収することができる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 東 庸介 山口県玖珂郡和木町和木六丁目１番２号 三井石油化学工業株式会社内 (72)発明者 三宅 篤子 山口県玖珂郡和木町和木六丁目１番２号 三井石油化学工業株式会社内
Claims (6)
- 【請求項１】 イチョウ科、メギ科、ツヅラフジ科、ウ
リ科、ニッサ科、ウコギ科、ヤマゴボウ科、アカザ科ま
たはヤマノイモ科に属する植物の組織または細胞培養に
おいて、ジャスモン酸類の存在下に培養を行い、得られ
る培養物から各親植物に含まれる二次代謝産物を回収す
ることを特徴とする植物二次代謝産物の製造方法。 - 【請求項２】 使用するジャスモン酸類が、ジャスモン
酸およびその誘導体、ククルビン酸およびその誘導体、
ならびにツベロン酸およびその誘導体の中から選ばれる
少なくとも１種以上の化合物であることを特徴とする請
求項１記載の植物二次代謝産物の製造方法。 - 【請求項３】 使用するジャスモン酸誘導体が、ジャス
モン酸の炭素数１〜６のアルキルエステルであることを
特徴とする請求項２記載の植物二次代謝産物の製造方
法。 - 【請求項４】 使用するジャスモン酸類が、シス型ジャ
スモン酸類であることを特徴とする請求項１乃至３のい
ずれか一項に記載の植物二次代謝産物の製造方法。 - 【請求項５】 ジャスモン酸類を添加または作用させる
時期が、培養開始直後〜７２時間の間であることを特徴
とする請求項１乃至４のいずれか一項に記載の植物二次
代謝産物の製造方法。 - 【請求項６】 培養組織または細胞に生産される二次代
謝産物が、ギンゴリド類、ビロバリド類、イソキノリン
アルカロイド類、ポドフィロトキシン類、ビスベンジル
イソキノリンアルカロイド類、ブリオノール酸類、カン
プトテシン類、ジンセンサポニン類、ベタシアニン類お
よびジオスゲニン類から選ばれる少なくとの１種以上の
化合物であることを特徴とする請求項１乃至５のいずれ
か一項に記載の植物二次代謝産物の製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8162150A JPH104955A (ja) | 1996-06-21 | 1996-06-21 | 植物二次代謝産物の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8162150A JPH104955A (ja) | 1996-06-21 | 1996-06-21 | 植物二次代謝産物の製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH104955A true JPH104955A (ja) | 1998-01-13 |
Family
ID=15748994
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8162150A Pending JPH104955A (ja) | 1996-06-21 | 1996-06-21 | 植物二次代謝産物の製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH104955A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2019510828A (ja) * | 2016-03-30 | 2019-04-18 | セルトリオン， インク． | 没食子酸含有量が増大したハスカルス抽出物、その製造方法及びそれを含有する美白用化粧料組成物 |
| CN110024787A (zh) * | 2019-04-24 | 2019-07-19 | 南京林业大学 | 利用茉莉酸甲酯诱导植物叶片黄酮类和萜内酯类化合物积累的方法和应用 |
-
1996
- 1996-06-21 JP JP8162150A patent/JPH104955A/ja active Pending
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2019510828A (ja) * | 2016-03-30 | 2019-04-18 | セルトリオン， インク． | 没食子酸含有量が増大したハスカルス抽出物、その製造方法及びそれを含有する美白用化粧料組成物 |
| US10947497B2 (en) | 2016-03-30 | 2021-03-16 | Celltrion Inc. | Nelumbo nucifera callus extract having increased content of gallic acid, method for preparing same, and whitening cosmetic composition containing same |
| CN110024787A (zh) * | 2019-04-24 | 2019-07-19 | 南京林业大学 | 利用茉莉酸甲酯诱导植物叶片黄酮类和萜内酯类化合物积累的方法和应用 |
| CN110024787B (zh) * | 2019-04-24 | 2021-08-24 | 南京林业大学 | 利用茉莉酸甲酯诱导植物叶片黄酮类和萜内酯类化合物积累的方法和应用 |
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Legal Events
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|---|---|---|---|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20051213 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20060411 |