JPH10332697A - 免疫学的測定用試薬 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 固相担体、特に多孔性膜を使用する免疫学的
測定法において、生体試料中の非特異反応の原因物質の
影響を抑制する方法を提供する。 【解決手段】 アルキルグリコシド系界面活性剤または
ステロイド系界面活性剤を含有する免疫学的測定用固相
洗浄液、該洗浄液を使用する生体試料成分を測定する免
疫学的測定用試薬ならびに免疫学的測定法。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、固相担体、特に多
孔性膜上にて生体試料成分を免疫学的に測定する法にお
いて、測定値に悪影響を及ぼす、生体試料中の非特異反
応を生じる物質の影響を抑制し、より正確な測定を可能
にする方法およびそのための洗浄用試薬に関する。

【０００２】

【従来の技術】従来、生体試料中の様々な成分を測定す
る方法として、抗原抗体反応を利用した免疫学的測定法
がある。このような免疫学的測定法の中には、酵素免疫
測定法（ＥＩＡ）、放射免疫測定法（ＲＩＡ）、化学発
光免疫測定法（ＣＬＩＡ）、蛍光免疫測定法（ＦＩＡ）
等、検出系に西洋ワサビペルオキシダーゼやアルカリ性
ホスファターゼ等の酵素、ヨウ素¹²⁵ 等の放射性同位元
素（ＲＩ）、アクリジニウム化合物等の発光物質あるい
はフルオレセインイソチオシアネート等の蛍光物質など
を標識した抗体または抗原を用いる測定法などがあり、
それらの感度の高いことから現在、広く用いられてい
る。これらの測定法としては、固相担体を利用する免疫
学的測定法が広く使用されている。

【０００３】しかしながら、これら免疫学的測定法は生
体試料中の極微量の成分でも測定可能である反面、生体
試料中に含まれる非測定対象成分による非特異反応も生
じることがあり、微量の測定対象成分を測定する場合に
は、測定結果に大きな影響を与える。

【０００４】例えば、検出系に用いる酵素等の標識物質
と同様の活性をもつ物質が生体試料中に存在し、その物
質が検出反応の段階で反応系に残っていると、特異的な
免疫反応とは無関係の非特異的な反応が起こり、本来、
陰性と判定されるべき試料を誤って陽性と判定すること
もあり得る。

【０００５】また、免疫反応の際に抗原あるいは抗体と
結合しなかった遊離の標識物質そのものも、何らかの影
響により検出反応系に残ってしまうと非特異的反応の原
因となる。

【０００６】そこで、これら生体試料由来の非特異反応
の原因成分の影響を抑制すべく、これまでに種々の方法
が考えられている。例えば、固相担体を使用する方法で
は、これら非特異反応成分の固相担体への吸着を防止す
るためにカゼイン、牛血清アルブミン、ゼラチン等のブ
ロッキング剤を使用する方法などが知られている。ま
た、非特異反応を抑制する別の方法として、測定試薬中
に界面活性剤等を添加する方法が知られている。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】しかしながら、これら
の方法では生体試料由来の非特異反応を防止することが
できない場合がある。例えば、固相担体、特に多孔性膜
を使用する免疫学的測定法において、標識物質と同様の
活性を持ち、かつ、それが多孔性膜の細孔よりも大きい
ために、膜を通過できないような物質（血球等）が生体
試料中に混入している場合や、生体試料中の可溶成分が
不溶化して多孔性膜の目詰まりを起こし、本来は膜を通
過するような遊離の標識物質や、標識物質と同様の活性
をもつ生体試料中の物質などが膜上に残ってしまう場合
などはブロッキング剤では防止できない。また、測定試
薬中に界面活性剤を添加する方法においても、添加する
界面活性剤の種類によっては、固相担体に結合する抗体
あるいは抗原が、該担体より脱離したり免疫反応等が阻
害されてしまうために、特異的なシグナルが極端に低下
してしまうことがある。

【０００８】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、固相担体
を使用する免疫学的測定法において、生体試料中の非特
異反応の原因物質の影響を抑制すべく、鋭意検討を行っ
た結果、本発明に到達した。

【０００９】すなわち、本発明はアルキルグリコシド系
界面活性剤またはステロイド系界面活性剤を含有する免
疫学的測定用固相洗浄液である。

【００１０】また、本発明は生体試料成分と免疫学的に
反応する抗体または抗原が固定化された固相担体、生体
試料成分と免疫学的に反応する標識された抗体または抗
原を含有する試薬およびアルキルグリコシド系界面活性
剤またはステロイド系界面活性剤を含有する免疫学的測
定用固相洗浄液を含有する免疫学的測定用試薬である。

【００１１】さらに、本発明は、生体試料成分と免疫学
的に反応する抗体または抗原が固定化された固相担体上
にて、該抗体または抗原と生体試料成分を反応させ、次
いで反応した生体試料成分と、該成分と免疫学的に反応
する標識された抗体または抗原を含有する試薬を反応さ
せ、次いで、アルキルグリコシド系界面活性剤またはス
テロイド系界面活性剤を含有する免疫学的測定用固相洗
浄液にて固相担体を洗浄し、固相担体上の標識物質を測
定することを特徴とする免疫学的測定法である。

【００１２】また、本発明は、生体試料成分と免疫学的
に反応する抗体または抗原が固定化された固相担体上に
て、該抗体または抗原と生体試料成分を反応させ、アル
キルグリコシド系界面活性剤またはステロイド系界面活
性剤を含有する免疫学的測定用固相洗浄液にて固相担体
を洗浄し、次いで反応した生体試料成分と、該成分と免
疫学的に反応する標識された抗体または抗原を含有する
試薬を反応させ、アルキルグリコシド系界面活性剤また
はステロイド系界面活性剤を含有する免疫学的測定用固
相洗浄液にて固相担体を洗浄し、固相担体上の標識物質
を測定することを特徴とする免疫学的測定法である。

【００１３】また、本発明は、固相担体上にて生体試料
成分および該成分と免疫学的に反応する抗体または抗原
を反応させ、次いでアルキルグリコシド系界面活性剤ま
たはステロイド系界面活性剤を含有する免疫学的測定用
固相洗浄液にて洗浄する工程を含むことを特徴とする免
疫学的測定法である。

【００１４】

【発明の実施態様】本発明において、生体試料成分と
は、血液、血清、血漿、リンパ液、尿、糞便、腹水、胸
水などに含まれる成分であって、例えば、ＣＥＡ（癌胎
児性抗原）、ＡＦＰ（α−フェトプロテイン）、ＣＡ１
９−９、ＣＡ１２５、ＰＳＡ（前立腺特異抗原）などの
腫瘍マーカー、ＣＲＰ（Ｃ反応性蛋白）、ＩｇＡ（免疫
グロブリンＡ）、ＩｇＧ（免疫グロブリンＧ）、ＩｇＭ
（免疫グロブリンＭ）などの炎症関係マーカー、ＨＩＶ
（ヒト免疫不全ウイルス）、ＨＢＶ（Ｂ型肝炎ウイル
ス）、ＨＣＶ（Ｃ型肝炎ウイルス）、トキソプラズマ、
クラミジア、梅毒などの感染症関係のマーカー、アレル
ゲン特異ＩｇＥ（免疫グロブリンＥ）などが例示され
る。

【００１５】本発明において、生体試料成分と免疫学的
に反応する抗体または抗原とは、上記成分が抗原である
場合は、抗体であり、上記成分が抗体である場合は、抗
原である。生体試料成分（抗原）と反応する抗体として
は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体あるいは
それらの断片（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ')₂ 、Ｆｖ
等）などが含有される。

【００１６】本発明に用いられる固相担体とは、通常、
免疫学的測定法で用いられている固相担体であり、その
形態としては、例えば多孔性膜、微粒子、ビーズ、マイ
クロタイタープレート、チューブなどがあり、特に多孔
性膜が好ましい。本発明に用いる多孔性膜の素材は何で
あってもよく、例えば、ポリエチレン、ポリエチレンテ
レフタレート、ナイロン類、ガラス、セルロースやセル
ロース誘導体などの多糖類あるいはセラミックス等より
製造する。具体的には、東洋濾紙やワットマンなどのメ
ーカーより販売されいているガラス繊維濾紙やセルロー
ス濾紙などがある。また、微粒子としては、ポリスチレ
ン、ポリプロピレン等の高分子ポリマーより製するも
の、あるいはそれらを酸化鉄粒子等の磁性粒子にコーテ
ィングして製するものなどがある。

【００１７】固相担体に抗体あるいは抗原固定化する方
法は、通常、免疫学的試薬の調製に用いられる方法であ
れば、どのようなものでもよく、抗体あるいは抗原が固
相担体に物理吸着あるいは化学結合等により、直接また
は間接的に結合していればよい。

【００１８】標識された抗体または抗原とは、上記抗体
または抗原に標識物質を直接または間接に結合した物質
であり、標識物質としては、西洋ワサビペルオキシダー
ゼ、アルカリ性フォスファターゼ、β−Ｄ−ガラクトシ
ダーゼ等の酵素、ヨウ素¹²⁵等の放射性同位元素、アク
リジニウム化合物、ルミノール等の発光物質、フルオレ
セインイソチオシアネートあるいはユーロピウム(III)
キレート等の蛍光物質、金属コロイドなどが知られてい
る。

【００１９】本発明において、生体試料中の非特異反応
の原因物質とは、例えば、血液、尿等の生体試料中に含
まれ、検出系に用いる酵素等の標識物質と同様の活性を
もつ物質であり、例えば、検出系に西洋ワサビペルオキ
シダーゼを標識した抗体または抗原等を用いる場合、血
液中のペルオキシダーゼ様活性をもつ物質（ミエロペル
オキシダーゼ等の動物性ペルオキシダーゼまたはヘモグ
ロビンやカタラーゼ等の偽ペルオキシダーゼ活性を持つ
物質）等が含まれる。また、血液凝固系が働くなどの生
物学的変化や凍結融解等の物理的変化などにより生体試
料中の可溶成分が不溶化したものも非特異反応の原因物
質となる。

【００２０】本発明に用いるアルキルグリコシド系界面
活性剤とは、イオン性、非イオン性にかかわらず、親水
基に糖類、疎水基にアルキル基を有し、それらがエーテ
ルもしくはチオエーテル結合している界面活性剤を指
す。このような界面活性剤としては、例えばn-オクチル
- β-D- グルコピラノシド、n-ノニル- β-D- マルトピ
ラノシド、n-デシル- β-D- グルコピラノシド、n-ドデ
シル- β-D- グルコピラノシド、n-デシル- β-D- マル
トピラノシド、n-ヘプチル- β-D- チオグルコピラノシ
ド、n-オクチル- β-D- チオグルコピラノシド、n-ドデ
シル- β-D- マルトピラノシド、n-ノニル- β-D- チオ
マルトピラノシド、オクチル- β-D- チオガラクトピラ
ノシド等が挙げられ、特に、n-オクチル- β-D- グルコ
ピラノシド、n-ヘプチル- β-D- チオグルコピラノシド
またはn-オクチル- β-D- チオグルコピラノシドなどが
好ましい。

【００２１】また、本発明に用いられるステロイド系界
面活性剤とは、イオン性、非イオン性にかかわらず、疎
水基にステロイド骨格を有する界面活性剤のことを指
し、例えばコール酸塩、デオキシコール酸塩、デヒドロ
コール酸塩、タウロコール酸塩、グリココール酸塩、3-
[(3-コールアミドプロピル) ジメチルアンモニオ] プロ
パンスルホン酸、3-[(3-コールアミドプロピル) ジメチ
ルアンモニオ]-2-ヒドロキシプロパンスルホン酸、N,N-
ビス(3-D- グルコンアミドプロピル) コールアミドや、
ジギトニン等のステロイドサポニンなどが挙げられ、そ
の中でもデオキシコール酸ナトリウム、3-[(3-コールア
ミドプロピル) ジメチルアンモニオ] プロパンスルホン
酸などが好ましい。

【００２２】なお、上記界面活性剤は単独で用いても、
２種類以上組み合わせて用いてもよい。また、上記界面
活性剤は、好ましくは、0.01(w/v)%〜2.0(w/v)% 、特に
好ましくは、0.1(w/v)% 〜0.5(w/v)% の濃度範囲で用い
る。

【００２３】本発明に用いる固相洗浄液には、上記界面
活性剤のほかに、例えばリン酸緩衝剤、トリス緩衝剤や
グッド緩衝剤など、通常、洗浄液成分として用いられる
緩衝剤を含有していてもよい。また、該洗浄液のｐＨは
特に限定されないが、ｐＨ５〜９の範囲内であることが
望ましい。さらには、通常、洗浄液成分として用いられ
る塩化ナトリウム等の塩類、防腐剤等の添加物を適宜添
加してもよい。

【００２４】また、本発明に用いられる固相洗浄液に
は、アルキルグリコシド系界面活性剤またはステロイド
系界面活性剤の他に、通常、免疫学的測定法において用
いられ、かつ、測定系に悪影響を及ぼさない界面活性剤
（ポリオキシソルビタンモノラウレート、ポリオキシエ
チレンモノ-p- イソオクチルフェニルエーテルなどのポ
リオキシエチレン系非イオン界面活性剤等）が、通常、
この分野で用いられている範囲の濃度で添加されていて
もよい。

【００２５】本発明に用いられる固相洗浄液は、固相の
洗浄を必要とする免疫学的測定法、すなわち、ヘテロジ
ニアスイムノアッセイ全般に用いることができ、免疫反
応の様式は競合法であっても、非競合法であってもよ
い。

【００２６】本発明の免疫学的測定法の一実施態様は、
生体試料成分と免疫学的に反応する抗体または抗原が固
定化された固相担体上にて、該抗体または抗原と生体試
料成分を反応させ、次いで反応した生体試料成分と、該
成分と免疫学的に反応する標識された抗体または抗原を
含有する試薬を反応させ、次いで、アルキルグリコシド
系界面活性剤またはステロイド系界面活性剤を含有する
免疫学的測定用固相洗浄液にて固相担体を洗浄し、固相
担体上の標識物質を測定する。免疫学的反応はワン・ス
テップ反応でも、ツー・ステップ反応でもよい。標識物
質を測定する方法としては、公知の方法に従って行えば
よく、例えば標識物質が酵素の場合は、基質と反応させ
た後、吸光度あるいは反射光の強度を測定すればよい。
また、標識物質が放射性同位元素の場合は、放射線の線
量をカウンターにてカウントすればよい。

【００２７】本発明の別な実施態様は、生体試料成分と
免疫学的に反応する抗体または抗原が固定化された固相
担体上にて、該抗体または抗原と生体試料成分を反応さ
せ、アルキルグリコシド系界面活性剤またはステロイド
系界面活性剤を含有する免疫学的測定用固相洗浄液にて
固相担体を洗浄し、次いで反応した生体試料成分と、該
成分と免疫学的に反応する標識された抗体または抗原を
含有する試薬を反応させ、アルキルグリコシド系界面活
性剤またはステロイド系界面活性剤を含有する免疫学的
測定用固相洗浄液にて固相担体を洗浄し、固相担体上の
標識物質を測定する。

【００２８】さらに、本発明の別な実施態様は、固相担
体上にて、生体試料成分および該成分と免疫学的に反応
する抗体または抗原を反応させ、次いでアルキルグリコ
シド系界面活性剤またはステロイド系界面活性剤を含有
する免疫学的測定用固相洗浄液にて洗浄する工程を含
む。これらの免疫学的反応は、固相担体を用いる方法で
あればよく、上記サンドイッチ法による検出法に限られ
ない。

【００２９】

【実施例】以下に、実施例を挙げて本発明をさらに詳細
に説明するが、本発明はこれらによって何ら限定される
ものではない。

【００３０】実施例１ 固相洗浄液の調製 0.05(w/v)%ポリオキシソルビタンモノラウレート（商品
名：Tween20 ；ナカライテスク製）を含有するリン酸緩
衝生理食塩水(pH7.2) に、n-オクチル- β-D-チオグル
コピラノシド（同仁化学研究所製) 、3-[(3-コールアミ
ドプロピル) ジメチルアンモニオ] プロパンスルホン酸
（商品名：ＣＨＡＰＳ；同仁化学研究所製) 、および比
較のための界面活性剤として、臭化ヘキサデシルトリメ
チルアンモニウム（ナカライテスク製) を添加し、下記
６種類の固相洗浄液を調製した。 (a) 0.05(w/v)% n- オクチル- β-D- チオグルコピラノ
シド添加洗浄液 (b) 0.2(w/v)% n-オクチル- β-D- チオグルコピラノシ
ド添加洗浄液 (c) 0.05(w/v)% ＣＨＡＰＳ添加洗浄液 (d) 0.2(w/v)% ＣＨＡＰＳ添加洗浄液 (e) 0.05(w/v)%臭化ヘキサデシルトリメチルアンモニウ
ム添加洗浄液 (f) 0.2(w/v)% 臭化ヘキサデシルトリメチルアンモニウ
ム添加洗浄液

【００３１】実施例２ 特異的シグナルの比較 (1) 測定試薬 免疫学的測定試薬として、上部に免疫学的反応層である
抗ＣＥＡ（癌胎児性抗原）抗体が固定化された多孔性膜
（ガラス繊維フィルター）を有し、下部に免疫反応後の
液体を吸収する層を有する反応部材およびペルオキシダ
ーゼ標識抗ＣＥＡ抗体を含む試薬からなる免疫学的測定
試薬（商品名、イムノフローラ・ＣＥＡ、東洋紡績
製）、ブロック液（カゼイン等を含む）、希釈液（緩衝
剤等を含む）、発色液（ 10-N-メチルカルバモイル-3,7
- ジメチルアミノ-10H- フェノチアジン（ＭＣＤＰ）等
を含む）を使用した。固相洗浄液は、実施例１にて調製
した n- オクチル- β-D- チオグルコピラノシド添加洗
浄液、(a) 、(b) 、(c) 、(d) 、(e) （比較例）、(f)
（比較例）を用い、さらに対照として、0.05(w/v)%Twee
n20 含有リン酸緩衝生理食塩水(pH7.2) を用いた。 (2) 被検試料 ＣＥＡ標準液（東洋紡績製）を用いた。 (3) ＣＥＡ特異的シグナル測定 上部に免疫学的反応層である抗ＣＥＡ（癌胎児性抗原）
抗体が固定化された多孔性膜（ガラス繊維フィルター）
を有し、下部に免疫反応後の液体を吸収する層を有する
反応部材に、ブロック液、希釈液にて希釈した被検試
料、標識抗体、洗浄液、発色液の順に順次、滴下して、
多孔性膜上の発色の度合いを 670nmの波長の光を当てた
ときの反射光で測定し、ＣＥＡ標準液のＣＥＡ特異的シ
グナルを算出した。その測定結果を表１に示す。シグナ
ルの値は、Kubelka-Munk式（K/S ＝（１−反射率）＾2
／（２＊反射率））によって導かれるK/S 値の、単位時
間あたりの変化量（ΔK/S ）で示す。

【００３２】

【表１】

【００３３】表１から明らかなように、アルキルグリコ
シド型界面活性剤の１つである、n-オクチル- β-D- チ
オグルコピラノシド、あるいはステロイド型界面活性剤
の一つであるＣＨＡＰＳを添加した洗浄液を用いた場合
には、シグナルの低下は認められなかったが、臭化ヘキ
サデシルトリメチルアンモニウムを添加した洗浄液を用
いた場合には、明らかなシグナルの低下が認められた。

【００３４】実施例３ 血清中ＣＥＡ濃度の測定 (1) 測定試薬 実施例２と同様にして、ＣＥＡ測定試薬（イムノフロー
ラ・ＣＥＡ）、ブロック液、希釈液、発色剤を用いた。
洗浄液は、実施例１にて調製した n- オクチル- β-D-
チオグルコピラノシド添加洗浄液(a) および(b) を用
い、対照として、0.05(w/v)%Tween20 含有リン酸緩衝生
理食塩水(pH7.2) を用いた。比較のために、プラスチッ
クビーズを固相担体として用いる免疫測定試薬（イムノ
ボール・ＣＥＡ（東洋紡績製））を同様に、免疫測定に
供した。 (2) 被検試料 ヒト血清を非特異反応物質含有血清として用いた。 (3) ＣＥＡ濃度測定 実施例２と同様に多孔性膜またはプラスチックビーズを
使用する上記測定試薬を用い、血清中のＣＥＡ濃度の測
定を行った。その測定結果を表２に示す。

【００３５】

【表２】

【００３６】表２から明らかなように、対照組成（n-オ
クチル- β-D- チオグルコピラノシド無添加）の洗浄液
を用いて測定した場合には、プラスチックビーズ固相の
試薬で測定した場合に比べて、多孔性膜を使用する測定
試薬では測定値が高くなっているが、n-オクチル- β-D
- チオグルコピラノシドを添加した洗浄液を用いた場
合、多孔性膜を使用する測定試薬では、プラスチックビ
ーズ固相の試薬で測定した測定値とほぼ同じである。こ
れは、n-オクチル- β-D- チオグルコピラノシド添加洗
浄液が、血清中の非特異反応物質の影響を抑制している
ことを示している。

【００３７】実施例４ 固相洗浄液の調製 0.05(w/v)%Tween20 含有リン酸緩衝生理食塩水(pH7.2)
に、n-オクチル- β-D- チオグルコピラノシドおよびデ
オキシコール酸ナトリウム（ナカライテスク製) を添加
し、下記３種類の洗浄液を調製した。 (g) 0.2(w/v)% n-オクチル- β-D- チオグルコピラノシ
ド添加洗浄液 (h) 0.2(w/v)% n-オクチル- β-D- チオグルコピラノシ
ドおよび0.2(w/v)% デオキシコール酸ナトリウム添加洗
浄液 (i) 0.3(w/v)% n-オクチル- β-D- チオグルコピラノシ
ドおよび0.2(w/v)% デオキシコール酸ナトリウム添加洗
浄液

【００３８】実施例５ 血清中ＡＦＰ濃度の測定 (1) 測定試薬 多孔性膜を固相担体として用いる免疫測定試薬であるイ
ムノフローラ・ＡＦＰ（東洋紡績製）、ブロック液、希
釈液、発色剤を用いた。洗浄液には、0.05(w/v)%Tween2
0 含有リン酸緩衝生理食塩水(pH7.2) に、さらに、 n-
オクチル- β-D- チオグルコピラノシド、または該化合
物およびデオキシコール酸ナトリウムを添加した、実施
例４にて調製した洗浄液(g) 、(h) 、(i) を用いた。対
照として、 n- オクチル- β-D- チオグルコピラノシド
およびデオキシコール酸ナトリウムを添加しない、0.05
(w/v)%Tween20 含有リン酸緩衝生理食塩水(pH7.2) を用
い、さらに比較のために、プラスチックビーズを固相担
体として用いる免疫測定試薬であるイムノボール・ＡＦ
Ｐネオ（東洋紡績製）を用いた。 (2) 被検試料 ヒト血清を非特異反応物質含有血清として用いた。 (3) ＡＦＰ濃度測定 実施例３と同様に多孔性膜またはプラスチックビーズを
使用する上記測定試薬を用い、血清中のＡＦＰ濃度の測
定を行った。その測定結果を表３に示す。

【００３９】

【表３】

【００４０】表３から明らかなように、対照組成（n-オ
クチル- β-D- チオグルコピラノシドおよびデオキシコ
ール酸ナトリウムが無添加）の洗浄液を用いて測定した
場合には、ビーズ固相の試薬で測定した場合に比べて、
多孔性膜を使用する試薬では、測定値が高くなっている
が、n-オクチル- β-D- チオグルコピラノシドおよびデ
オキシコール酸ナトリウムを添加した洗浄液を用いた場
合、ビーズ固相の試薬で測定した測定値とほぼ同じであ
る。これは、n-オクチル- β-D- チオグルコピラノシド
およびデオキシコール酸ナトリウムを添加した洗浄液
が、血清中の非特異反応物質の影響を抑制していること
を示している。

【００４１】実施例６ 対照組成の洗浄液を用いたとき
のビーズ固相試薬との相関 (1) 測定試薬 実施例２と同様に多孔性膜を固相担体として用いる免疫
測定試薬（イムノフローラ・ＣＥＡ、東洋紡績製）、ブ
ロック液、希釈液、発色剤を用いた。洗浄液には、実施
例４にて調製した洗浄液の対照組成、0.05(w/v)%Tween2
0 含有リン酸緩衝生理食塩水(pH7.2) を用いた。比較の
ために、プラスチックビーズを固相担体として用いる免
疫測定試薬であるイムノボール・ＣＥＡを用いた。 (2) 被検試料 ヒト血清69検体を試料として用いた。 (3) ＣＥＡ濃度測定 実施例２と同様に、多孔性膜またはプラスチックビーズ
を使用する上記測定試薬を用い、血清中のＣＥＡ濃度の
測定を行った。その測定結果を図１に示す。

【００４２】実施例７ 本発明の洗浄液を用いたときの
ビーズ固相試薬との相関 (1) 測定試薬 実施例２と同様に、多孔性膜を固相担体として用いる免
疫測定試薬（イムノフローラ・ＣＥＡ、東洋紡績製）、
ブロック液、希釈液、発色剤を用いた。洗浄液には実施
例４にて調製した洗浄液(i) を用いた。比較のために、
プラスチックビーズを固相担体として用いる免疫測定試
薬（イムノボール・ＣＥＡ、東洋紡績製）を用いた。 (2) 被検試料 ヒト血清53検体を試料として用いた。 (3) ＣＥＡ濃度測定 上記測定試薬を用い、血清中のＣＥＡ濃度の測定を行っ
た。測定結果を図２に示す。

【００４３】図１および図２から明らかなように、多孔
性膜を固相担体として用いる試薬（イムノフローラ・Ｃ
ＥＡ）に、本発明の洗浄液を適用することによって、Ｃ
ＥＡの測定値が、ビーズを固相担体として用いる試薬
（イムノボール・ＣＥＡ）と同等の値を示すようにな
る。このことから、本発明の洗浄液を用いることによっ
て、多孔性膜特有の非特異反応物質の影響を抑制し、正
確な測定値を示すことがわかる。

【００４４】

【発明の効果】本発明は、固相担体、特に多孔性膜上に
て検出を行う生体試料成分の免疫学的測定法において測
定値に悪影響を及ぼす生体試料中の非特異反応の原因物
質の影響を抑制し、より正確な測定を可能にする方法お
よび測定試薬を提供するものである。また、洗浄力が向
上することによって、固相担体、特に多孔性膜上に残る
遊離の標識物質を洗い流す効果も大きくなり、その結果
として、シグナル／ノイズ比の向上、すなわち検出力の
向上も期待できる。

【図面の簡単な説明】

【図１】血清中のＣＥＡ濃度の測定結果を示す図であ
る。

【図２】血清中のＣＥＡ濃度の測定結果を示す図であ
る。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 川村 良久 福井県敦賀市東洋町10番24号 東洋紡績株 式会社敦賀バイオ研究所内

Claims (10)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 アルキルグリコシド系界面活性剤または
   ステロイド系界面活性剤を含有する免疫学的測定用固相
   洗浄液。
2. 【請求項２】 さらに、ポリオキシエチレン系非イオン
   界面活性剤を含有する請求項１記載の免疫学的測定用固
   相洗浄液。
3. 【請求項３】 生体試料成分と免疫学的に反応する抗体
   または抗原が固定化された固相担体、生体試料成分と免
   疫学的に反応する標識された抗体または抗原を含有する
   試薬およびアルキルグリコシド系界面活性剤またはステ
   ロイド系界面活性剤を含有する免疫学的測定用固相洗浄
   液を含有する免疫学的測定用試薬。
4. 【請求項４】 免疫学的測定用固相洗浄液が、さらにポ
   リオキシエチレン系非イオン界面活性剤を含有する請求
   項３記載の免疫学的測定用試薬。
5. 【請求項５】 固相担体が多孔性膜である請求項３また
   は４記載の免疫学的測定用試薬。
6. 【請求項６】 生体試料成分と免疫学的に反応する抗体
   または抗原が固定化された固相担体上にて、該抗体また
   は抗原と生体試料成分を反応させ、次いで反応した生体
   試料成分と、該成分と免疫学的に反応する標識された抗
   体または抗原を含有する試薬を反応させ、次いで、アル
   キルグリコシド系界面活性剤またはステロイド系界面活
   性剤を含有する免疫学的測定用固相洗浄液にて固相担体
   を洗浄し、固相担体上の標識物質を測定することを特徴
   とする免疫学的測定法。
7. 【請求項７】 生体試料成分と免疫学的に反応する抗体
   または抗原が固定化された固相担体上にて、該抗体また
   は抗原と生体試料成分を反応させ、アルキルグリコシド
   系界面活性剤またはステロイド系界面活性剤を含有する
   免疫学的測定用固相洗浄液にて固相担体を洗浄し、次い
   で反応した生体試料成分と、該成分と免疫学的に反応す
   る標識された抗体または抗原を含有する試薬を反応さ
   せ、アルキルグリコシド系界面活性剤またはステロイド
   系界面活性剤を含有する免疫学的測定用固相洗浄液にて
   固相担体を洗浄し、固相担体上の標識物質を測定するこ
   とを特徴とする免疫学的測定法。
8. 【請求項８】 固相担体上にて、生体試料成分および該
   成分と免疫学的に反応する抗体または抗原を反応させ、
   次いでアルキルグリコシド系界面活性剤またはステロイ
   ド系界面活性剤を含有する免疫学的測定用固相洗浄液に
   て洗浄する工程を含むことを特徴とする免疫学的測定
   法。
9. 【請求項９】 免疫学的測定用固相洗浄液が、さらにポ
   リオキシエチレン系非イオン界面活性剤を含有する請求
   項６〜８のいずれが１項記載の免疫学的測定法。
10. 【請求項１０】 固相担体が多孔性膜である請求項６〜
    ９のいずれか１項記載の免疫学的測定法。