JPH10323190A - 微生物検出用オリゴヌクレオチド及び微生物検出方法 - Google Patents
微生物検出用オリゴヌクレオチド及び微生物検出方法Info
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- JPH10323190A JPH10323190A JP9148411A JP14841197A JPH10323190A JP H10323190 A JPH10323190 A JP H10323190A JP 9148411 A JP9148411 A JP 9148411A JP 14841197 A JP14841197 A JP 14841197A JP H10323190 A JPH10323190 A JP H10323190A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 ビール有害菌メガスフェラ セレビシエ（Me
gasphaera cerevisiae）菌を検出または同定するため
のオリゴヌクレオチドおよびこれを用いる該菌の検出方
法を提供すること。 【解決手段】 検体中に存在するメガスフェラ セレビ
シエ（Megasphaera cerevisiae）菌を選択的に検出す
るため、メガスフェラ セレビシエ菌の16SリボソームR
NA遺伝子をコードするヌクレオチド配列を標的とし、そ
のヌクレオチド配列と相補的であるオリゴヌクレオチド
であって、該オリゴヌクレオチドが特定の配列を有する
ことを特徴とするオリゴヌクレオチドを使用する。
gasphaera cerevisiae）菌を検出または同定するため
のオリゴヌクレオチドおよびこれを用いる該菌の検出方
法を提供すること。 【解決手段】 検体中に存在するメガスフェラ セレビ
シエ（Megasphaera cerevisiae）菌を選択的に検出す
るため、メガスフェラ セレビシエ菌の16SリボソームR
NA遺伝子をコードするヌクレオチド配列を標的とし、そ
のヌクレオチド配列と相補的であるオリゴヌクレオチド
であって、該オリゴヌクレオチドが特定の配列を有する
ことを特徴とするオリゴヌクレオチドを使用する。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、ビール有害菌メガ
スフェラ セレビシエ（Megasphaera cerevisiae）菌
を検出または同定するためのオリゴヌクレオチドおよび
これを用いる該菌の検出方法に関する。
スフェラ セレビシエ（Megasphaera cerevisiae）菌
を検出または同定するためのオリゴヌクレオチドおよび
これを用いる該菌の検出方法に関する。
【０００２】
【従来の技術と発明が解決しようとする課題】現在、ビ
ール製造における微生物検査では、菌種を同定するため
に、増殖培養、分離培養をへて菌を単離しなければなら
ず、少なくとも７日は要する。その後、単離した菌を増
殖させ、形態観察、グラム染色性、カタラーゼ試験、糖
資化性など多くの性状試験を行うことにより同定を行っ
ている。これらの多種多岐にわたる検査は煩雑であり、
時間も費用もかかる。また、これら一般に行われている
同定試験のほかに、単離した菌からDNAを抽出し、それ
を膜状あるいは他の支持体上に固定し、標準菌のDNAを
プローブとしてハイブリダイゼーション試験を行うこと
により菌種を同定する方法がある。しかし、この方法も
数日を必要とし、さらに十分な検出感度及び選択性を得
るのが難しい。
ール製造における微生物検査では、菌種を同定するため
に、増殖培養、分離培養をへて菌を単離しなければなら
ず、少なくとも７日は要する。その後、単離した菌を増
殖させ、形態観察、グラム染色性、カタラーゼ試験、糖
資化性など多くの性状試験を行うことにより同定を行っ
ている。これらの多種多岐にわたる検査は煩雑であり、
時間も費用もかかる。また、これら一般に行われている
同定試験のほかに、単離した菌からDNAを抽出し、それ
を膜状あるいは他の支持体上に固定し、標準菌のDNAを
プローブとしてハイブリダイゼーション試験を行うこと
により菌種を同定する方法がある。しかし、この方法も
数日を必要とし、さらに十分な検出感度及び選択性を得
るのが難しい。
【０００３】より迅速な菌検査法として、最近では、J.
Am.Soc.Brew.Chem.:52(1)19-23,1994に報告されている
生物ルミネッセンスを利用したATP発光法により生菌の
検出を行う方法があるが、菌種を問わずに検出するた
め、同定には全く利用できない。また、ビールに有害な
一部の乳酸菌、例えば、Lactobacillus brevis, Lactob
acillus casei, Lactobacillus plantarum, Lactobacil
lus coryniformis等については、特開平6-311894に開示
されているように乳酸菌に特異的な抗体を使用すること
によって、比較的早期の同定が可能となっている。しか
し、この方法を適用するためには菌を単離するまでの操
作が必要であるために、その分日数を要し、さらに十分
な検出感度および選択性を得るのが難しい。
Am.Soc.Brew.Chem.:52(1)19-23,1994に報告されている
生物ルミネッセンスを利用したATP発光法により生菌の
検出を行う方法があるが、菌種を問わずに検出するた
め、同定には全く利用できない。また、ビールに有害な
一部の乳酸菌、例えば、Lactobacillus brevis, Lactob
acillus casei, Lactobacillus plantarum, Lactobacil
lus coryniformis等については、特開平6-311894に開示
されているように乳酸菌に特異的な抗体を使用すること
によって、比較的早期の同定が可能となっている。しか
し、この方法を適用するためには菌を単離するまでの操
作が必要であるために、その分日数を要し、さらに十分
な検出感度および選択性を得るのが難しい。
【０００４】そこで、さらに迅速な検出法が検討され、
最近では、特開平5-15400、特開平6-141899、特開平7-2
89295に開示または、J.Am.Soc.Chem.:52(3)95-99,1994
に報告されているように、検体となる乳酸菌のDNAを抽
出し、このDNAに相補的なオリゴヌクレオチドをプライ
マーとして機能させたPCR法を用いた乳酸菌を検出する
方法がある。
最近では、特開平5-15400、特開平6-141899、特開平7-2
89295に開示または、J.Am.Soc.Chem.:52(3)95-99,1994
に報告されているように、検体となる乳酸菌のDNAを抽
出し、このDNAに相補的なオリゴヌクレオチドをプライ
マーとして機能させたPCR法を用いた乳酸菌を検出する
方法がある。
【０００５】一方、近年、製品ビールに対して影響を与
える菌として、ペクチネータス属菌、ラクトバチルス属
菌が確認されている。これらの菌に対して、特異的なオ
リゴヌクレオチドを用いたＰＣＲ法による検出が出願さ
れている（特願平７−３３１１７２、特願平７−３３１
１７３、特願平９−２８２５９）。しかし、同様の菌と
して報告されているメガスフェラ セレビシエ（Megasp
haera cerevisiae）菌については、まだＰＣＲに有効
なオリゴヌクレオチドの報告はない。そこで、本発明で
は、メガスフェラ セレビシエ菌をより迅速に感度よく
検出し、同時に同定できる方法を開発することを目的と
する。
える菌として、ペクチネータス属菌、ラクトバチルス属
菌が確認されている。これらの菌に対して、特異的なオ
リゴヌクレオチドを用いたＰＣＲ法による検出が出願さ
れている（特願平７−３３１１７２、特願平７−３３１
１７３、特願平９−２８２５９）。しかし、同様の菌と
して報告されているメガスフェラ セレビシエ（Megasp
haera cerevisiae）菌については、まだＰＣＲに有効
なオリゴヌクレオチドの報告はない。そこで、本発明で
は、メガスフェラ セレビシエ菌をより迅速に感度よく
検出し、同時に同定できる方法を開発することを目的と
する。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明は、メガスフェラ
セレビシエ菌の16SリボソームRNA遺伝子と特異的にハ
イブリダイズするオリゴヌクレオチドを作製し、これら
をプライマーとして機能させて遺伝子増幅に用い、メガ
スフェラ セレビシエを選択的に検出することを特徴と
する方法を提供するものである。そして、前記オリゴヌ
クレオチドは以下の配列、 ５’−ＣＴＧＣＣＧＧＡＣＴＧＧＡＧＴＧＴＣ−３’ ５’−ＣＡＧＧＡＴＡＴＣＴＣＴＡＴＣＣＣＴＧＧ−３’ の少なくとも一つを有するか、または対応する相補的配
列の少なくとも一つを有することを特徴とする。
セレビシエ菌の16SリボソームRNA遺伝子と特異的にハ
イブリダイズするオリゴヌクレオチドを作製し、これら
をプライマーとして機能させて遺伝子増幅に用い、メガ
スフェラ セレビシエを選択的に検出することを特徴と
する方法を提供するものである。そして、前記オリゴヌ
クレオチドは以下の配列、 ５’−ＣＴＧＣＣＧＧＡＣＴＧＧＡＧＴＧＴＣ−３’ ５’−ＣＡＧＧＡＴＡＴＣＴＣＴＡＴＣＣＣＴＧＧ−３’ の少なくとも一つを有するか、または対応する相補的配
列の少なくとも一つを有することを特徴とする。
【０００７】遺伝子増幅に関する技術は既に公知であ
り、Saikiらが開発したPolymerase Chain Reaction法
(以下、PCR法を略す；Science 230,1350,1985）を基に
行うことができる。この方法は、特定の遺伝子配列を増
幅させる反応で、迅速・高感度で高い特異性を持ち、か
つ簡便であることから、遺伝学的分野のみならず、近年
は医療分野における病原菌の迅速判定や、食品分野にお
ける有害菌の迅速検出にも応用が試みられている。PCR
法を行うことにより、検体中に僅かな量しか標的配列が
存在していなくても、2つのプライマーが挟む標的ヌク
レオチド配列は何百倍にも増幅され、検出が可能までに
大量にそのコピーが産生される。また、PCR法を行うに
は、検体中に存在する菌から核酸成分を遊離させる必要
があるが、PCR法は標的配列が数分子以上存在すれば増
幅反応が進むので、溶菌酵素や界面活性剤を用いた簡便
な前処理をするだけで十分に試験に供することができ
る。そのため、従来の細菌検出法に比べ、利用価値が非
常に高い。
り、Saikiらが開発したPolymerase Chain Reaction法
(以下、PCR法を略す；Science 230,1350,1985）を基に
行うことができる。この方法は、特定の遺伝子配列を増
幅させる反応で、迅速・高感度で高い特異性を持ち、か
つ簡便であることから、遺伝学的分野のみならず、近年
は医療分野における病原菌の迅速判定や、食品分野にお
ける有害菌の迅速検出にも応用が試みられている。PCR
法を行うことにより、検体中に僅かな量しか標的配列が
存在していなくても、2つのプライマーが挟む標的ヌク
レオチド配列は何百倍にも増幅され、検出が可能までに
大量にそのコピーが産生される。また、PCR法を行うに
は、検体中に存在する菌から核酸成分を遊離させる必要
があるが、PCR法は標的配列が数分子以上存在すれば増
幅反応が進むので、溶菌酵素や界面活性剤を用いた簡便
な前処理をするだけで十分に試験に供することができ
る。そのため、従来の細菌検出法に比べ、利用価値が非
常に高い。
【０００８】これらのことを利用すべく、本発明では、
メガスフェラ セレビシエ菌の16SリボソームRNA遺伝子
と特異的にハイブリダイズするように作製したオリゴヌ
クレオチドをプライマーとしてPCRを行い、認識される
べき配列の検出を行うことにより、検体中にメガスフェ
ラ セレビシエ4菌が存在するか否かを、迅速、高感度
に判定する方法を開発した。検体は、ビール及びビール
製造途中の半製品、または下水などの環境から採取され
たサンプルでもよい。また、プライマーに用いるオリゴ
ヌクレオチドは化学合成されたものでも天然のもので
も、いずれの使用でも可能である。
メガスフェラ セレビシエ菌の16SリボソームRNA遺伝子
と特異的にハイブリダイズするように作製したオリゴヌ
クレオチドをプライマーとしてPCRを行い、認識される
べき配列の検出を行うことにより、検体中にメガスフェ
ラ セレビシエ4菌が存在するか否かを、迅速、高感度
に判定する方法を開発した。検体は、ビール及びビール
製造途中の半製品、または下水などの環境から採取され
たサンプルでもよい。また、プライマーに用いるオリゴ
ヌクレオチドは化学合成されたものでも天然のもので
も、いずれの使用でも可能である。
【０００９】PCRに用いるDNAポリメラーゼは、90℃以上
の温度の耐熱性があればよい。PCRにおける温度条件
は、2本鎖DNAを1本鎖にする熱変性反応で90〜98℃、プ
ライマーを鋳型DNAにハイブリダイズさせるアニーリン
グ反応で37〜65℃、DNAポリメラーゼを作用させる鎖長
反応で50〜75℃で行い、これを1サイクルとしたものを
数十サイクル行わせることにより、標的配列を増幅させ
ることができる。
の温度の耐熱性があればよい。PCRにおける温度条件
は、2本鎖DNAを1本鎖にする熱変性反応で90〜98℃、プ
ライマーを鋳型DNAにハイブリダイズさせるアニーリン
グ反応で37〜65℃、DNAポリメラーゼを作用させる鎖長
反応で50〜75℃で行い、これを1サイクルとしたものを
数十サイクル行わせることにより、標的配列を増幅させ
ることができる。
【００１０】PCR反応後、反応物を電気泳動により分離
し、臭化エチジウム等で核酸染色を行い、増幅されたヌ
クレオチド配列の塩基長が、上述の標的配列の塩基長と
等しければ検体中にPectinatus sp.DSM20764菌が存在し
たと判定できる。増幅されたヌクレオチド配列の検出に
は、クロマトグラフィーも有効である。
し、臭化エチジウム等で核酸染色を行い、増幅されたヌ
クレオチド配列の塩基長が、上述の標的配列の塩基長と
等しければ検体中にPectinatus sp.DSM20764菌が存在し
たと判定できる。増幅されたヌクレオチド配列の検出に
は、クロマトグラフィーも有効である。
【００１１】
【発明の実施の形態】 検体の調製 メガスフェラ セレビシエ菌は、表１に示したMegaspha
era cerevisiae（DSM20462）およびMegasphaera cere
visiae（JCM6129）の２株を使用した。また、本発明の
特異性を確かめるために、ビール微生物検査において検
査対象となりうる細菌および酵母、さらに一般に研究室
でよく用いられる大腸菌を用いた。これらを適当な増殖
用培地にて培養を行った後、菌体を遠心操作により回収
した。その後、菌体からのDNA抽出は、新生化学実験講
座２ 核酸Ｉ 分離精製p20〜21（日本生化学会編、東京
化学同人）に従って行い、DNA溶液を得た。
era cerevisiae（DSM20462）およびMegasphaera cere
visiae（JCM6129）の２株を使用した。また、本発明の
特異性を確かめるために、ビール微生物検査において検
査対象となりうる細菌および酵母、さらに一般に研究室
でよく用いられる大腸菌を用いた。これらを適当な増殖
用培地にて培養を行った後、菌体を遠心操作により回収
した。その後、菌体からのDNA抽出は、新生化学実験講
座２ 核酸Ｉ 分離精製p20〜21（日本生化学会編、東京
化学同人）に従って行い、DNA溶液を得た。
【００１２】
【表１】
【００１３】 Megasphaera cerevisiae菌の16Sリボ
ソームRNA遺伝子の塩基配列の確認 実施例１で調製したMegasphaera cerevisiaeのDNA溶液
を鋳型に用い、ModernMicrobiological Methods 'Nucle
ic Acid Techniques in Bacterial Systematics' "16S/
23S rRNA Sequencing"p115〜175（J.Wiley & Sons Lt
d., New York)に記載の多くの細菌に共通なユニバーサ
ルプライマーの5'側にM13プライマー配列を配置したプ
ライマーを用いて、PCRを行った。
ソームRNA遺伝子の塩基配列の確認 実施例１で調製したMegasphaera cerevisiaeのDNA溶液
を鋳型に用い、ModernMicrobiological Methods 'Nucle
ic Acid Techniques in Bacterial Systematics' "16S/
23S rRNA Sequencing"p115〜175（J.Wiley & Sons Lt
d., New York)に記載の多くの細菌に共通なユニバーサ
ルプライマーの5'側にM13プライマー配列を配置したプ
ライマーを用いて、PCRを行った。
【００１４】PCR終了後の増幅DNA断片を、アガロースゲ
ル電気泳動により分離して切り出し、SUPREC*-01(宝酒
造社製）を用いてゲルから溶出させ、エタノール沈殿に
より回収した。このようにして得られたDNA断片を鋳型
とし、シーケンス反応を行った。シーケンシングプライ
マーはIRD41 Infared Dye Labeled M13 Forward プライ
マー（日清紡製造、アロカ（株）販売）を、反応液はSe
quiTherm儉ong-Read僂ycle Sequencing Kit-LC（EPICEN
TRE TECHNOLOGIES社製）を使用した。塩基配列決定は、
4000L Long ReadIR* DNA Sequencing System（LI-COR社
製）を用いた。
ル電気泳動により分離して切り出し、SUPREC*-01(宝酒
造社製）を用いてゲルから溶出させ、エタノール沈殿に
より回収した。このようにして得られたDNA断片を鋳型
とし、シーケンス反応を行った。シーケンシングプライ
マーはIRD41 Infared Dye Labeled M13 Forward プライ
マー（日清紡製造、アロカ（株）販売）を、反応液はSe
quiTherm儉ong-Read僂ycle Sequencing Kit-LC（EPICEN
TRE TECHNOLOGIES社製）を使用した。塩基配列決定は、
4000L Long ReadIR* DNA Sequencing System（LI-COR社
製）を用いた。
【００１５】オリゴヌクレオチドの合成 前述の試験で得られたMegasphaera cerevisiae菌から
の16SリボソームRNA遺伝子配列から、次の配列を選び、
それと同じ配列を持つオリゴヌクレオチドを化学合成し
た。 ５’−ＣＴＧＣＣＧＧＡＣＴＧＧＡＧＴＧＴＣ−３’ ５’−ＣＡＧＧＡＴＡＴＣＴＣＴＡＴＣＣＣＴＧＧ−３’
の16SリボソームRNA遺伝子配列から、次の配列を選び、
それと同じ配列を持つオリゴヌクレオチドを化学合成し
た。 ５’−ＣＴＧＣＣＧＧＡＣＴＧＧＡＧＴＧＴＣ−３’ ５’−ＣＡＧＧＡＴＡＴＣＴＣＴＡＴＣＣＣＴＧＧ−３’
【００１６】各種菌体の検出及び同定。 で調製した各菌のDNA溶液を、で合成したオリゴヌ
クレオチドをプライマーとして用いてPCRを行った。PCR
は以下の温度条件： 熱変性；94℃ 30秒 アニーリング；55℃ 30秒 鎖長反応；72℃ 30秒 を1サイクルとし、これを35サイクル繰り返して行っ
た。PCR終了後、反応液をアガロースゲルにて、100V定
電圧で30分間電気泳動に供した。反応液の他に、分子量
マーカーとしてφX174/HincIIも同時に泳動した。泳動
終了後、約0.5μg/mlの臭化エチジウム溶液中で20分間
染色した後、紫外線照射下でゲルを観察し、写真撮影を
行った。ゲルの観察または撮影した写真より、増幅産物
の塩基長を分子量マーカーとの相対移動度から求めた。
クレオチドをプライマーとして用いてPCRを行った。PCR
は以下の温度条件： 熱変性；94℃ 30秒 アニーリング；55℃ 30秒 鎖長反応；72℃ 30秒 を1サイクルとし、これを35サイクル繰り返して行っ
た。PCR終了後、反応液をアガロースゲルにて、100V定
電圧で30分間電気泳動に供した。反応液の他に、分子量
マーカーとしてφX174/HincIIも同時に泳動した。泳動
終了後、約0.5μg/mlの臭化エチジウム溶液中で20分間
染色した後、紫外線照射下でゲルを観察し、写真撮影を
行った。ゲルの観察または撮影した写真より、増幅産物
の塩基長を分子量マーカーとの相対移動度から求めた。
【００１７】その結果、試験したすべての菌について、
検出バンドの結果を表２に示した。表中、数字は検出バ
ンドの塩基長（キロ塩基対）を示し、（−）はバンドが
検出されなかったことを示す。
検出バンドの結果を表２に示した。表中、数字は検出バ
ンドの塩基長（キロ塩基対）を示し、（−）はバンドが
検出されなかったことを示す。
【００１８】
【表２】菌番号 プライマーによる検出 １ ０．３９ ２ ０．３９ ３〜２３ − また、ＰＣＲ反応後の電気泳動の結果を図１に示した。
【００１９】これらの結果より、本発明のオリゴヌクレ
オチドをPCRプライマーとして用いた場合、Megasphaera
cerevisiae菌にのみ目的長のバンドが検出されること
が確認できた。すなわち、このことは、本発明のオリゴ
ヌクレオチドが、 Megasphaera cerevisiae菌の16Sリ
ボソームRNA遺伝子上の標的とする塩基配列を正しく認
識していることが示している。さらに、表１に示すペク
チネータス属菌やラクトバチルス属菌など他のビール有
害菌やビール酵母等には菌にも目的長のバンドは一切検
出されなかったことから、本発明は、 Megasphaera ce
revisiae菌を特異的に検出、同定も行うことが出来るも
のである。
オチドをPCRプライマーとして用いた場合、Megasphaera
cerevisiae菌にのみ目的長のバンドが検出されること
が確認できた。すなわち、このことは、本発明のオリゴ
ヌクレオチドが、 Megasphaera cerevisiae菌の16Sリ
ボソームRNA遺伝子上の標的とする塩基配列を正しく認
識していることが示している。さらに、表１に示すペク
チネータス属菌やラクトバチルス属菌など他のビール有
害菌やビール酵母等には菌にも目的長のバンドは一切検
出されなかったことから、本発明は、 Megasphaera ce
revisiae菌を特異的に検出、同定も行うことが出来るも
のである。
【００２０】本発明により、Megasphaera cerevisiae
菌の16SリボソームRNA遺伝子の塩基配列が提供され、そ
のオリゴヌクレオチドをプライマーとしてＰＣＲ法に利
用することにより、従来の方法では７日は必要であった
菌種の検出または同定が、１〜３日と短期間に迅速・簡
便に行えるようになった。
菌の16SリボソームRNA遺伝子の塩基配列が提供され、そ
のオリゴヌクレオチドをプライマーとしてＰＣＲ法に利
用することにより、従来の方法では７日は必要であった
菌種の検出または同定が、１〜３日と短期間に迅速・簡
便に行えるようになった。
【図１】表１中の菌についてPCRを行った際の、電気泳
動の結果を表す図である。各レーン番号は表１の菌番号
と一致する。但し、Ｍは分子量マーカーφX174/HincII
を表す。
動の結果を表す図である。各レーン番号は表１の菌番号
と一致する。但し、Ｍは分子量マーカーφX174/HincII
を表す。
─────────────────────────────────────────────────────
【手続補正書】
【提出日】平成９年１０月１３日
【手続補正２】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】全図
【補正方法】追加
【補正内容】
【図１】
Claims (7)
- 【請求項１】検体中に存在するメガスフェラ セレビシ
エ（Megasphaera cerevisiae）菌を選択的に検出する
ため、メガスフェラ セレビシエ菌の16SリボソームRNA
遺伝子をコードするヌクレオチド配列を標的とし、その
ヌクレオチド配列と相補的であるオリゴヌクレオチドで
あって、該オリゴヌクレオチドが以下の配列、 ５’−ＣＴＧＣＣＧＧＡＣＴＧＧＡＧＴＧＴＣ−３’ ５’−ＣＡＧＧＡＴＡＴＣＴＣＴＡＴＣＣＣＴＧＧ−３’ の少なくとも一つを有するか、または対応する相補的配
列を有することを特徴とするオリゴヌクレオチド。 - 【請求項２】請求項１に記載された各オリゴヌクレオチ
ドの配列のうち、少なくとも連続した１０塩基以上を含
むオリゴヌクレオチド。 - 【請求項３】請求項１に記載された各オリゴヌクレオチ
ド配列のうち、少なくとも１つを有するオリゴヌクレオ
チドを鎖長反応のプライマーとして機能させ、標的のヌ
クレオチド配列を増幅させる方法。 - 【請求項４】請求項３に記載の方法で増幅されたヌクレ
オチド配列を、電気泳動、またはクロマトグラフィーで
分離し、その結果、認識されるべき配列が存在している
か否かを判定することで検知中のメガスフェラ セレビ
シエの検出を行う方法。 - 【請求項５】請求項３に記載の方法で増幅されたヌクレ
オチド配列を、ゲル電気泳動および核酸染色液により検
出する方法。 - 【請求項６】請求項１に記載のオリゴヌクレオチドのう
ち、少なくとも一つをＤＮＡ検出用プローブとして機能
させる方法。 - 【請求項７】請求項１に記載のオリゴヌクレオチド配列
のうち、少なくとも一つが標識物により修飾させたオリ
ゴヌクレオチド。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9148411A JPH10323190A (ja) | 1997-05-23 | 1997-05-23 | 微生物検出用オリゴヌクレオチド及び微生物検出方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9148411A JPH10323190A (ja) | 1997-05-23 | 1997-05-23 | 微生物検出用オリゴヌクレオチド及び微生物検出方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH10323190A true JPH10323190A (ja) | 1998-12-08 |
Family
ID=15452198
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP9148411A Pending JPH10323190A (ja) | 1997-05-23 | 1997-05-23 | 微生物検出用オリゴヌクレオチド及び微生物検出方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH10323190A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2001046235A1 (fr) * | 1999-12-21 | 2001-06-28 | Fudan University | Nouveau polypeptide, proteine ribosomale s3 17, et polynucleotide codant pour ce polypeptide |
-
1997
- 1997-05-23 JP JP9148411A patent/JPH10323190A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2001046235A1 (fr) * | 1999-12-21 | 2001-06-28 | Fudan University | Nouveau polypeptide, proteine ribosomale s3 17, et polynucleotide codant pour ce polypeptide |
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