JPH10175997A - 海苔から得られるペプチド混合物 - Google Patents
海苔から得られるペプチド混合物Info
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- JPH10175997A JPH10175997A JP8332270A JP33227096A JPH10175997A JP H10175997 A JPH10175997 A JP H10175997A JP 8332270 A JP8332270 A JP 8332270A JP 33227096 A JP33227096 A JP 33227096A JP H10175997 A JPH10175997 A JP H10175997A
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Abstract
苔をより効果的に健康の向上に利用する。 【解決手段】海苔をペプシン分解して得られる下記の性
質を有するペプチド混合物。 (A)平均鎖長が2〜5で、ペプチドとして次の4種の
うち少なくとも2種を含む。イソロイシン−チロシ
ン、メチオニン−リジン−チロシン、ロイシン−ア
ルギニン−チロシン、アラニン−リジン−チロシン−
セリン−チロシン (B)分子量:200〜20,000(図1)(C)溶
剤に対する溶解性:水に易溶であるが、エタノール、ア
セトン、ヘキサンにほとんど溶解しない。このペプチド
混合物またはこれを含む海苔蛋白分解物は血圧降下作
用、カルシウム吸収促進作用、抗変異原活性、血漿コレ
ステロ−ル低下作用、免疫賦活作用等を有するので、血
圧降下剤としたり、食品に添加してこれらの作用に基づ
く健康食品とする。
Description
々の有効な薬理作用を有する新規なペプチド混合物に関
し、さらにこのペプチド混合物の用途に関する。
されている食品であり、近年特に健康食品として注目さ
れている。しかし、一般には海苔は板海苔として食する
か、あるいは多少の加工をして食するのが従来の利用方
法であって、海苔の機能や成分を他の食品形態や食品以
外の利用法にまで広げたものは少ない。その一つとし
て、あまのり属海藻から血管新生阻害活性を有するネオ
アガロオリゴ糖を製造したもの(特開平7−16092
号)等がある程度である。
能性としては一般に、高血圧症、骨粗鬆症、高コレステ
ロール症等に対する効果や改善がいわれているが、本発
明者は海苔のこのような作用に着目し、海苔成分の中に
これらの活性を有するものを見出すべく努めた。
能性に寄与する成分を見出し、これをより高めた状態で
取り出して、海苔をより効果的に健康の向上に利用する
ようにすることを目的とするものである。
苔をペプシン分解して得られる下記の性質を有するペプ
チド混合物に関する。 (A)平均鎖長:2〜5 (B)分子量:200〜20,000 (C)溶剤に対する溶解性:水に易溶であるが、エタノ
ール、アセトン、ヘキサンにほとんど溶解しない。
平均鎖長が2〜5の範囲(トリニトロベンゼンスルホン
酸法による)で、ペプチドとして次の4種のうち少なく
とも2種を含む。 イソロイシン−チロシン メチオニン−リジン−チロシン ロイシン−アルギニン−チロシン アラニン−リジン−チロシン−セリン−チロシン
で得られたペプチド混合物のGS−320HQカラムを
用いたHPLCカラムクロマトグラムを図1に示す。ま
た、図2にその紫外線吸収スペクトルを示す。
は上記ペプチド混合物を含む海苔蛋白分解物の用途に関
するもので、上記ペプチド混合物を有効成分とする血圧
降下剤、および上記ペプチドまたは上記ペプチドを含む
海苔蛋白分解物を食品に混入してなる健康食品に関す
る。
海苔をペプシンで適当な温度、例えば50℃前後で酵素
分解し、得られた分解液の上清を採取して粉末化する
か、あるいはこれをさらに精製して得る。ただし、平均
鎖長が2〜5の範囲に収まり、かつイソロイシン−チロ
シン、メチオニン−リジン−チロシン、ロイシン−アル
ギニン−チロシン、アラニン−リジン−チロシン−セリ
ン−チロシンの4種類のヘプチドのうち最低2種類は含
まれるような分解条件を選択する必要がある。実験的に
は酵素分解反応は12時間以上が好ましい。原料に用い
る海苔は、どのような海苔を用いても構わないが、乾海
苔を用いると得られるペプチド混合物も多い。通常、食
品として流通している、乾海苔を焙焼して製される焼海
苔を原料に用いた場合、ペプチド混合物の収率の低下、
本ペプチド混合物が有する生理活性の一つであるアンジ
オテンシンI変換酵素阻害活性の低下が認められる。但
し、焙焼されていない海苔であれば、品種、グレ−ド等
の差は収率に若干の影響を及ぼすのみで大きな問題には
ならない。
む海苔蛋白分解物を製造する工程において、通常考えら
れる手法として、酸、アルカリによる分解や種々の酵素
による分解が考えられるが、酸、アルカリによる分解は
反応が急速に進み過ぎて制御が難しい。一方、酵素分解
においては、用いる酵素により、得られるペプチドも様
々である。そのなかで、生理活性の一つであるアンジオ
テンシンI変換酵素阻害活性が高く、収率が高かったの
は、ペプシンによる分解であった。したがって、本発明
においては、ペプシンで分解することが必須条件とな
る。
いる場合には、海苔蛋白分解物をそのまま用いても構わ
ないが、ペプチド以外のものも含まれているので、必要
に応じ限外濾過、吸着剤処理、その他適宜の方法でペプ
チド以外の成分を除去するのが好ましい。また、さらに
必要により、単独もしくは澱粉、デキストリン等の賦形
剤や他の食品素材あるいは食品添加物とともにスプレ−
ドライ、凍結乾燥等適宜の方法により乾燥して用いる。
示し、血圧降下剤として使用することができる。血圧降
下作用は、アンジオテンシンI変換酵素(アンジオテン
シンIを血圧上昇をもたらすアンジオテンシンIIに変換
する酵素)を抑制することによって行われる。アンジオ
テンシンI変換酵素阻害剤としては、既に種々の物質が
見出されており、例えば合成物ではカプトプリル、エナ
プリル、アラセプリル等が、その高い阻害活性から現在
経口降圧剤として実用に供されている。また天然物由来
の阻害剤として、蛇毒ペプチドあるいは魚肉、カゼイン
等を酵素分解して得られるペプチド等が知られている。
本発明のペプチド混合物もアンジオテンシンI変換酵素
阻害活性が認められ、動物試験においても、血圧低下作
用を示した。
プチドを含む海苔蛋白分解物は、カルシウム沈殿阻止作
用、Trp−P−1、AF−2等の変異原に対する抗変
異原活性、血漿コレステロ−ル低下作用、免疫賦活作用
等を有し、本発明のペプチド混合物または該ペプチド混
合物を含む海苔蛋白分解物を食品に添加することによっ
て、これらの作用に基づく健康食品を得ることができ
る。
阻止作用によってもたらされ、CPPのカルシウム吸収
促進のメカニスムである。このような作用を有する食品
を摂取することで、骨粗鬆症の予防が期待できる。
ある変異原物質が数多く存在することが明らかにされて
いる。例えば焼き魚のこげにふくまれるTrp−P−1
などがある。一方、食品中には、逆にガン予防の可能性
を秘めた成分も発見されてきている。その一つに上記の
Trp−P−1等の変異原を無毒化する作用を有するも
ので抗変異原性物質と称するものがあり、ガン予防の食
品として期待されている。例えば、野菜の煮汁、食物繊
維等が抗変異原活性がある事がすでに確認されている。
本発明のペプチド混合物もTrp−P−1、AF−2等
の変異原に対して抗変異原活性を示した。
は、大豆蛋白質の酵素処理物、キトサンなどが開発さ
れ、特定保健用食品として実用化されている。本発明の
ペプチド混合物も血漿コレステロ−ル低下作用を示して
いる。
高めることにより、細菌、ウイルス等に対する抵抗力を
より高めたり、もともと人間が有する制癌作用を高める
という作用で、予防医学では重要な要素である。従来
は、インタ−フェロン産生増強物質として、リン脂質、
塩基性蛋白質、キトサン誘導体が、抗体産生増強物質と
してラクトフェリンが、食細胞の活性化物質として、海
藻由来の硫酸多糖、カゼインペプチド、大豆ペプチド等
が知られている。本発明のペプチド混合物もTNF(腫
瘍壊死因子)活性の上昇を指標とした試験において活性
が確認された。
造方法で得られ、しかも食品として汎用されていた天然
物から得られるものであるので、毒性や副作用の問題が
ない。したがって、医薬としてまたは健康食品として非
常に有用である。
らに詳細に説明するが、本発明はこれにより何等制限さ
れるものではない。 (実施例1) (1)海苔蛋白分解物の調製 乾海苔を高速粉砕機にて35meshに微粉化したもの
50gを、HCl−KCl緩衝液(PH=2.0)95
0mlに混濁し、ペプシン(天野製薬製)2gを加え、
攪拌下50℃で24時間反応させた。得られた分解液を
NaOHの1N溶液にて中和し、14000rpmで2
0分間遠心分離し、上清をグラスフィルタ−にて濾過し
た。その後、直ちに沸騰浴中に20分間保持して酵素を
失活させた。保存のために凍結乾燥を行い、粉末化し
た。
てプロテア−ゼP(天野製薬製)、ビオプラ−ゼSP−
4およびデナチ−ムAP(ナガセ生化学工業製)をそれ
ぞれ用いて、海苔蛋白分解物を同様に調製した。それぞ
れの収量結果を表1に示し、ペプシン分解より得られた
海苔蛋白分解物の一般成分分析値を表2に示す。
00mlに溶解し、HClで置換したバイオラッド社製
Dowex−50(H+)カラム(φ4.5cm×43
cm)に負荷し、5リットルの蒸留水で洗浄後、2Nア
ンモニア水にて吸着しているペプチドを溶出し、エバポ
レ−タ−にてアンモニアを除去した後、凍結乾燥にてペ
プチド混合物16gを得た。ペプチド混合物の一般成分
分析値を表3に示す。
性の測定 試験管に所定濃度に溶解した実施例1(1)の海苔蛋白
分解物および比較試験分解物をそれぞれ50μl入れ、
次いで酵素基質としてL−ヒプリルヒスチジルロイシン
(ペプチド研究所製)を12.5mMの濃度になるよう
に、1.0M塩化ナトリウムを含む硼酸緩衝液(PH=
8.3)に溶解して、これを上記試験管に100μl添
加し、最後に25mU/mlになるように蒸留水に溶か
したアンジオテンシンI変換酵素溶液を100μl加え
て37℃にて1時間反応させた。
を加えて反応を停止し、5分間放置後、酢酸エチル1.
5mlを管壁に伝わらせながら加え、激しく攪拌後、遠
心分離(3000rpm、10min)を行い、上層
(酢酸エチル層)0.5mlを採取し、乾熱器にて12
0℃、30分間で酢酸エチルを蒸発させた後、生成した
馬尿酸を1.0M塩化ナトリウム3mlにて溶解し、2
28nmにて吸光度を測定した。
わりに蒸留水を加えた時の値をEc、予め反応停止液を
加えて反応させた時の値をEbとして、阻害率(%)=
{(Ec−Es)/(Ec−Eb)}×100で表し
た。アンジオテンシン変換酵素阻害の阻害活性IC50
値は、アンジオテンシン変換酵素を50%阻害するため
に必要なサンプル濃度である。結果を表4に示した。
然発症ラット(SHR)を購入し、1週間の予備飼育
後、収縮期血圧が190mmHg以上(体重280−3
30g)の動物3匹1群として用い、実施例1(2)の
ペプチド混合物を50mg経口投与した。血圧は非観血
的尾動脈血圧測定装置((株)理研開発製、PS−10
0型)を用い、tail−cuff法により、投与前、
投与後1時間、2時間、3時間、4時間、5時間のSH
R尾動脈の収縮期血圧(SBP)、平均血圧(MB
P)、拡張期血圧(DBP)の測定を測定時間毎に5回
行い、得られた測定値の最高値と最低値を棄却し、3回
の平均値をもって各時間の測定値とした。結果を図3に
示す。
化カルシウムの沈殿阻止能を測定した。すなわち、サン
プルとして所定の濃度に蒸留水に溶解した実施例1
(2)のペプチド混合物溶液3mlと20mM塩化カル
シウム溶液1mlを混和後、5mMリン酸緩衝液(PH
7.0)4mlを加え、37℃で2時間放置し、遠心分
離後(3000×g、10分)の上清中に溶けているカ
ルシウムを測定した。尚、比較のためにCPPを用いて
同様の実験を行った。結果を図4に示す。
himurium菌の突然変異に関与しているumu遺
伝子の発現を、β−ガラクトシダ−ゼ活性を指標として
測定するumu−testを用いて行った。すなわち変
異原としてTrp−P−1、AF−2とを用い、実施例
1(2)のペプチド混合物を添加しないものをコントロ
−ルとし、β−ガラクトシダ−ゼ活性を発色基質X−g
alの発色により測定し比較した。結果を図5および図
6に示す。
テロ−ル濃度低下効果 実験動物として4週令の雄性Wistar系STラット
を市販固形飼料で1週間予備飼育し、5匹1群として3
週間の飼育実験を行った。試験飼料は、実施例1(2)
のペプチド混合物をMF粉末飼料(オリエンタル酵母工
業製)に7%(粗蛋白質量として6.9%)配合したも
のとし、対照区の飼料はMF粉末飼料のみとした。飼料
は毎日交換し、飲料水とともに自由摂取させた。動物飼
育室は室温25℃、湿度50±5%に保ち、12時間ご
との明暗サイクル(午前8時点灯、午後8時消灯)に調
製した。試験終了後、ラットを断頭して血液を採取後、
直ちに血漿脂質成分(総コレステロ−ル、遊離コレステ
ロ−ル、トリグリセリド、リン脂質)の定量を酵素法に
より行った。それぞれの測定値を表5に示す。
の上昇作用の測定 7週令の雄性C3H/HCマウスに、実施例1(2)の
ペプチド混合物を経口投与し、3時間後に0.3mgの
ピシバニ−ル(OK−432)を静脈内投与し、その2
時間後に血液を得、血中の腫瘍壊死因子活性をC928
細胞に対する阻害活性で検定した。結果を表6に示す。
苔蛋白分解物を5重量%になるように溶かした鶏卵にて
とき卵を50g調製し、食塩6g、醤油3g、グラニュ
−糖3g、風味調味料(かつお、椎茸、昆布)2g、水
150gにて調製したス−プストックと合わせ、それぞ
れ50gづつトレイに充填し、凍結乾燥を行い、たまご
ス−プを作製した。
プチド混合物5g、塩化ナトリウム9g、クロロブタノ
−ル5g、炭酸水素ナトリウム1gを、蒸留水1000
mlに溶解し、これを2本の点滴ビンに分注し、抗高血
圧用輸液を得た。
プシン分解して得られるペプチド混合物は血圧低下作用
があり、血圧降下剤として有用である。また、このペプ
チド混合物またはこれをを含む海苔蛋白分解物は、カル
シウム沈殿阻止、抗変異原性、血漿コレステロ−ル低
下、免疫賦活の生理活性を有し、これらを添加した食品
は健康食品として優れている。
PLCクロマトグラムを示す図。
ルを示す図。
たときの血圧降下効果を示す図。
ウム沈殿阻止作用測定値を示す図。
する抗変異原活性測定値を示す図。
変異原活性測定値を示す図。
Claims (4)
- 【請求項1】 海苔をペプシン分解して得られる下記の
性質を有するペプチド混合物。 (A)平均鎖長が2〜5の範囲で、ペプチドとして次の
4種のうち少なくとも2種を含む。 イソロイシン−チロシン メチオニン−リジン−チロシン ロイシン−アルギニン−チロシン アラニン−リジン−チロシン−セリン−チロシン (B)分子量:200〜20,000 (C)溶剤に対する溶解性:水に易溶であるが、エタノ
ール、アセトン、ヘキサンにほとんど溶解しない。 - 【請求項2】 請求項1記載のペプチド混合物を有効成
分とする血圧降下剤。 - 【請求項3】 請求項1記載のペプチド混合物またはこ
れを含む海苔蛋白分解物を食品に添加した健康食品。 - 【請求項4】 健康食品がカルシウム沈殿阻止作用、抗
変異原活性、血漿コレステロール低下作用、免疫賦活作
用に基づく請求項3記載の健康食品。
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JP33227096A JP3272621B2 (ja) | 1996-12-12 | 1996-12-12 | 海苔から得られるペプチド混合物 |
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WO2010082367A1 (ja) | 2009-01-19 | 2010-07-22 | キッコーマン株式会社 | アンジオテンシン変換酵素阻害ペプチド |
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1996
- 1996-12-12 JP JP33227096A patent/JP3272621B2/ja not_active Expired - Lifetime
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