JPH10174598A - 生体成分測定用試薬の安定化方法 - Google Patents
生体成分測定用試薬の安定化方法Info
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Abstract
およびアルカリ緩衝液を含む試薬溶液を長期間安定に保
存する方法を提供する。 【解決手段】 生体試料中の特定成分を測定するための
酵素およびアルカリ緩衝液を含む試薬溶液中に、キレー
ト剤、アミノ酸およびスルフヒドリル化合物から選択さ
れる少なくとも1つを含有する。
Description
用いた生体成分測定用試薬を溶液で供給する際に、吸光
度上昇(ブランクアップ)を抑え長期間安定に保存する
方法に関する。
的に測定する臨床化学検査は、迅速さ、正確さ、さらに
は簡便化、微量化が求められ、検査の自動化が進められ
てきた。これに伴い、測定用の試薬も自動検査装置に適
用できる形態で供給されることが求められている。従来
は、酵素や基質を含む試薬はその保存安定性を考慮し
て、反応に必要な成分を含む凍結乾燥品として提供さ
れ、使用時に緩衝液等で溶解して用いられていたが、近
年は作業性やコスト面から、予め必要な成分が調製され
た試薬溶液(以下液状試薬という)で供給され、自動検
査装置にそのまま供給できる2試薬系で構成されること
が主流となってきている。このような液状試薬で供給す
る場合、酵素類の安定性が著しく低下するため、長期間
(例えば半年から1年)安定に保存するために各種安定
化剤の添加等が検討されている。また、日本臨床化学会
(JSCC)の勧告法では試薬の品質を一定に保つため
に緩衝液の種類や濃度および基質の濃度や反応時のpH
を定め、これに準拠した試薬を奨励している。特にアル
カリ緩衝液を用いた試薬の場合、保存中に酸化されて紫
外部に吸収をもつ物質が生じることにより吸光度が自然
上昇する現象(ブランクアップ)が認められる。このた
め、測定範囲の低下、測定感度の低下、試薬の保存安定
性の低下による有効期限の短縮、共存物質による測定値
への影響を受け易い等の問題があった。
止する方法として、従来、アルカリ緩衝液の添加濃度を
増加させたり、空気との接触を少なくすることで影響を
回避することが行われていた。しかしながら、添加濃度
を増加させると勧告法の基準から外れ、また空気との接
触面積を減らすのに試薬ボトルにチューブを差し込む方
法などが取られていたが充分な効果は得られていない。
本発明は上記事情に鑑みてなされたもので、液状試薬を
保存中にアルカリ緩衝液の酸化を抑えて経時安定性を高
めることで、液状試薬を長期にわたり安定に保存できる
方法を提供することを目的とする。
定成分を測定するための酵素およびアルカリ緩衝液を含
む試薬溶液において、前記試薬溶液中にキレート剤、ア
ミノ酸およびスルフヒドリル化合物からなる化合物から
選択される少なくとも1つを含んでなる生体成分測定用
試薬の安定化方法である。ここで試薬溶液中のキレート
剤の添加濃度は2.5〜40mM、アミノ酸の添加濃度
は25〜400mM、スルフヒドリル化合物の添加濃度
は0.4〜50mMの範囲で使用されることが好まし
い。
レンジアミン四酢酸、ジヒドロキシエチルグリシン、ジ
アミノプロパノール四酢酸、トランスシクロヘキサンジ
アミン四酢酸、ジエチレントリアミン五酢酸、エチレン
ジアミン二酢酸、エチレンジアミン二プロオン酸、エチ
レンジアミン−ビス(メチレンリン酸)1/2水和物、
ヒドロキシエチレンジアミン三酢酸、エチレンジアミン
テトラキスメチレンスルホン酸、グリコールエーテルジ
アミン四酢酸等が挙げられ、その添加濃度としては2.
5〜40mMであることが好ましい。2.5mM以下の
濃度では十分なブランクアップ防止効果が得られにく
く、40mM以上の濃度では初期吸光度が高値になるこ
とや反応阻害が起こること等の影響が生じる傾向があ
る。
ン、アスパラギン酸、システイン等が挙げられ、その添
加濃度としては25〜400mMであることが好まし
い。25mM以下の濃度では十分なブランクアップ防止
効果が得られず、400mM以上の濃度では初期吸光度
が高値になることや反応阻害が起こること等の影響が生
じる傾向がある。
ては2−メルカプトエタノール、N−アセチルシステイ
ン、還元形グルタチオン等が挙げられ、その添加濃度は
0.4〜50mMであることが好ましい。0.4mM以
下の濃度では十分なブランクアップ防止効果が得られに
くく、50mM以上の濃度では初期吸光度が高値になる
ことや反応阻害が起こること等の影響が生じる傾向があ
る。
囲が100〜1000mMであり、pHが8から10ま
での範囲のものが好ましい。アルカリ緩衝液としては、
2−アミノ−2−メチル−1−プロパノール(AM
P)、モノエタノールアミン(MEA)、ジエタノール
アミン(DEA)、トリエタノールアミン(TEA)、
2−エチルアミノエタノール(EAE)、N−シクロヘ
キシル−2−アミノエタンスルホン酸(CHES)、N
−シクロヘキシル−2−ヒドロキシ−3−アミノプロパ
ンスルホン酸(CAPSO)、N−シクロヘキシル−2
−ヒドロキシ−3−アミノエタンスルホン酸(CAP
S)等が挙げられる。
体成分測定用試薬としては、乳酸脱水素酵素(LDH)
測定用試薬、アルカリホスファターゼ(ALP)測定用
試薬等が挙げられる。
詳細に述べる。 〔実施例1〕93mMのL− (+) −乳酸リチウムと
0.1%(W/V) アジ化ナトリウムを含む464mMジエ
タノールアミン(DEA)緩衝液(pH8.8)に0m
M、25mM、50mM、100mM、200mM、4
00mMのアラニンを添加し試薬の調製を行った。前記
調製試薬を自動分析装置用容器に充填し、開栓したまま
2〜10℃で保存を行い、1週間ごとに分光光度計(日
立U−3210)で340nmにおける吸光度の測定を
行った。その結果を図1に示す。なお図中の横軸は保存
期間(週)を示し、縦軸は吸光度(Abs) を示す。
リチウムと0.1%(W/V) アジ化ナトリウムを含む46
4mMジエタノールアミン(DEA)緩衝液(pH8.
8)に0mM、3.5mM、7mM、14mM、28m
M、56mMの2−メルカプトエタノールを添加して試
薬の調製を行った。前記調製試薬を自動分析装置用容器
に充填し、開栓したまま2〜10℃で保存を行い、1週
間ごとに分光光度計(日立U−3210)で340nm
における吸光度の測定を行った。その結果を図2に示
す。なお図中の横軸は保存期間(週)を示し、縦軸は吸
光度(Abs) を示す。
リチウムと0.1%(W/V) アジ化ナトリウムを含む46
4mMジエタノールアミン(DEA)緩衝液(pH8.
8)に0mM、0.4mM、0.8mM、1.6mM、
3.2mM、6.4mMの還元形グルタチオンを添加し
て試薬の調製を行った。前記調製試薬を自動分析装置用
容器に充填し、開栓したまま2〜10℃で保存を行い、
1週間ごとに分光光度計(日立U−3210)で340
nmにおける吸光度の測定を行った。その結果を図3に
示す。なお図中の横軸は保存期間(週)を示し、縦軸は
吸光度(Abs) を示す。
リチウムと0.1%(W/V) アジ化ナトリウムを含む46
4mMジエタノールアミン(DEA)緩衝液(pH8.
8)に0mM、2.5mM、5mM、10mM、20m
M、40mMのエチレンジアミン四酢酸二ナトリウム
(EDTA−2Na)を添加して試薬の調製を行った。
前記調製試薬を自動分析装置用容器に充填し、開栓した
まま2〜10℃で保存を行い、1週間ごとに分光光度計
(日立U−3210)で340nmにおける吸光度の測
定を行った。その結果を図4に示す。なお図中の横軸は
保存期間(週)を示し、縦軸は吸光度(Abs) を示す。
リチウムと0.1%(W/V) アジ化ナトリウムを含む46
4mMジエタノールアミン(DEA)緩衝液(pH8.
8)に ・50mMアラニンと10mM EDTA−2Na、 ・50mMアラニンと1.6mM還元形グルタチオン、 ・25mMアスパラギン酸と1.6mM還元形グルタチ
オン、 ・50mMアラニンと10mM EDTA−2Naと
1.6mM還元形グルタチオン、 ・25mMアスパラギン酸と10mM EDTA−2N
aと25mM N−アセチルシステイン、をそれぞれ添
加して試薬の調製を行った。前記調製試薬と安定化剤を
添加してない試薬とを自動分析装置用容器に充填し、開
栓したまま2〜10℃で保存を行い、1週間ごとに分光
光度計(日立U−3210)で340nmにおける吸光
度の測定を行った。その結果を図5に示す。なお図中の
横軸は保存期間(週)を示し、縦軸は吸光度(Abs) を示
す。
ノ酸類、メルカプトエタノールや還元形グルタチオンな
どのスルフヒドリル化合物、エチレンジアミン四酢酸二
ナトリウムなどのキレート剤などを添加した液状試薬
は、安定化剤を添加しない液状試薬に比べて経時的なブ
ランクアップを抑えることができる。また、図5の結果
より、アミノ酸、スルフヒドリル化合物、キレート剤な
どの安定化剤を1種以上混合して使用した場合でも、単
独で使用した場合と同様に経時的なブランクアップを抑
えることができる。
によって生じる紫外部に吸収を持つ物質が生じることを
抑制できるため、試薬ブランクの上昇を抑えることがで
きる。この方法によって、測定値のバラツキがなく、試
薬性能の劣化も防ぐことができるため、安定した酵素お
よびアルカリ緩衝液を含む液状試薬の供給が可能にな
る。
フである。
フである。
フである。
フである。
フである。
Claims (4)
- 【請求項1】 生体試料中の特定成分を測定するための
酵素およびアルカリ緩衝液を含む試薬溶液において、前
記試薬溶液中にキレート剤、アミノ酸およびスルフヒド
リル化合物から選択される少なくとも1つを含んでなる
生体成分測定用試薬の安定化方法。 - 【請求項2】 試薬溶液中におけるキレート剤の添加濃
度が2.5〜40mMであることを特徴とする請求項1
記載の生体成分測定用試薬の安定化方法。 - 【請求項3】 試薬溶液中におけるアミノ酸の添加濃度
が25〜400mMであることを特徴とする請求項1記
載の生体成分測定用試薬の安定化方法。 - 【請求項4】 試薬溶液中におけるスルフヒドリル化合
物の添加濃度が0.4〜50mMであることを特徴とす
る請求項1記載の生体成分測定用試薬の安定化方法。
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---|---|---|---|
JP33784096A JP3702450B2 (ja) | 1996-12-18 | 1996-12-18 | 乳酸脱水素酵素測定用試薬 |
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---|---|---|---|
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Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
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-
1996
- 1996-12-18 JP JP33784096A patent/JP3702450B2/ja not_active Expired - Fee Related
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US9410141B2 (en) | 2006-10-10 | 2016-08-09 | Acorda Therapeutics, Inc. | Compositions and methods of using chondroitinase ABCI mutants |
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