JPH09512563A - 抗脈管形成活性及び腫瘍退行に対する作用を有するサメ軟骨の抽出物並びにその製法 - Google Patents
抗脈管形成活性及び腫瘍退行に対する作用を有するサメ軟骨の抽出物並びにその製法Info
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Abstract
Description
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1.サメの全軟骨の水性溶液の遠心分離の後に得られる凍結乾燥ペレットより 成る固体抽出物であって、インビボ抗脈管形成活性、インビボ腫瘍サイズ退行活 性及びインビトロ抗腫瘍活性を有し、正常細胞に対するインビトロ活性を有さな い固体抽出物。 2.以下を含む請求項1記載の固体抽出物: 脂質 7.35% タンパク質 46.2% ナトリウム 4.16mg/g カリウム 2.64mg/g カルシウム 114 mg/g マグネシウム 1.49mg/g 亜鉛及び鉄 微量。 3.前記抗脈管形成活性及び腫瘍サイズ退行活性が乳腺腫瘍において観察され るものである、請求項1記載の固体抽出物。 4.前記乳腺腫瘍がDMBAによりラットにおいて実験的に誘導されたものである 、請求項3記載の固体抽出物。 5.前記腫瘍サイズ退行活性が、処置前の腫瘍サイズが直径0.6〜0.9cm のと きに、8〜10週間の処置にわたって1日当り3〜5g/ラット体重Kgの用量率に おいて前記ラットにガベージにより前記固体抽出物を投与した場合に10〜15%の 腫瘍サイズの縮小より成る、請求項4記載の固体抽出物。 6.前記抗脈管形成活性が、前記腫瘍の中の血管面積の約55%の縮小より成る 、請求項5記載の固体抽出物。 7.前記抗腫瘍活性がホルモン依存性乳腺癌細胞系に対して観察されるもので ある、請求項1記載の固体抽出物。 8.前記ホルモン依存性乳腺癌細胞系が MCF−7及びZR75−1細胞系より成る 群から選ばれる、請求項7記載の固体抽出物。 9.前記抗腫瘍活性が、前記腫瘍細胞を3日間培養細胞培地1ml当り50〜100m g の前記固体抽出物の存在下で増殖させたときに腫瘍細胞増殖を実質的に完全に 阻害するものである、請求項8記載の固体抽出物。 10.前記正常細胞がヒト培養線維芽細胞である、請求項1記載の固体抽出物。 11.サメの全軟骨の水性溶液の遠心分離の後に得られる上清液より成る液体抽 出物であって、インビボ抗脈管形成活性、インビボ腫瘍サイズ退行活性及びイン ビトロ抗腫瘍活性を有し、正常細胞に対するインビトロ活性を有さない液体抽出 物。 12.以下を含む請求項1記載の固体抽出物: 脂質 0.10% タンパク質 1.77% 水分 98.8% ナトリウム 33.6mg/g カリウム 39.2mg/g カルシウム 2.0 mg/g マグネシウム 1.1 mg/g 亜鉛及び鉄 微量。 13.前記抗脈管形成活性及び腫瘍サイズ退行活性が乳腺腫瘍において観察され るものである、請求項11記載の液体抽出物。 14.前記乳腺腫瘍がDMBAによりラットにおいて実験的に誘導されたものである 、請求項13記載の液体抽出物。 15.前記腫瘍サイズ退行活性が、処置前の腫瘍サイズが直径0.6〜0.9cm のと きに、8〜10週間の処置にわたって1日当り約5mgの 前記液体抽出タンパク質含有量/ラット体重Kgの用量率において前記ラットにガ ベージにより前記固体抽出物を投与した場合に約5%の腫瘍サイズの縮小より成 る、請求項14記載の固体抽出物。 16.前記抗脈管形成活性が、前記腫瘍の中の血管面積の縮小より成る、請求項 15記載の固体抽出物。 17.前記抗腫瘍活性がホルモン依存性乳腺癌細胞系に対して観察されるもので ある、請求項11記載の固体抽出物。 18.前記ホルモン依存性乳腺癌細胞系が MCF−7及びZR75−1細胞系より成る 群から選ばれる、請求項17記載の固体抽出物。 19.前記正常細胞がヒト培養線維芽細胞である、請求項11記載の固体抽出物。 20.1〜10キロダルトン(KD)、10〜30KD,30〜100KD 及び 100〜500KD の分 子量を有する画分に分画されたものであり、この画分がそれぞれ149,127,114 及び64%の細胞増殖阻害率により反映されるようなZR75−1細胞系に対する抗腫 瘍活性を、その細胞系を3日間にわたり1mlの培養培地当り400,100,100 及び 100μgの粗軟骨重量で表わされる対応の量の前記液体抽出物の存在下で増殖さ せたときに有するものである、請求項11記載の液体抽出物。 21.1〜2.5 キロダルトン(KD)の分子量を有する請求項11記載の液体抽出物 の液体画分。 22.29キロダルトン(KD)の分子量及び5.30〜6.26の等電点を有する請求項11 記載の液体抽出物の液体画分。 23.35キロダルトン(KD)の分子量及び7.64〜7.94の等電点を有する請求項11 記載の液体抽出物の液体画分。 24.48キロダルトン(KD)の分子量及び7.29〜7.94の等電点を有する請求項11 記載の液体抽出物の液体画分。 25.60キロダルトン(KD)の分子量及び5.30〜6.26の等電点を有 する請求項11記載の液体抽出物の液体画分。 26.60〜120 キロダルトン(KD)の分子量を有する請求項11記載の液体抽出物 の液体抽出物。 27.請求項1記載の固体抽出物の獲得のための方法であって、全て4℃で行う 以下の段階: 中性pHの非変性水性溶液中のサメ軟骨由来のブレンドを獲得する、ここでこの ブレンドはもっぱら機械的手段により得られるものであり、そして 500μm未満 の粒子サイズを有する; 前記ブレンドを遠心分離し、ペレットを上清液から分離させる;そして 前記ペレットを凍結乾燥する; を含んで成る方法。 28.前記非変性水性溶液が純水である、請求項27記載の方法。 29.請求項11記載の液体抽出物を獲得するための方法であって、全て4℃で行 う以下の段階: 中性pHの非変性水性溶液中のサメ軟骨由来のブレンドを獲得する;ここでこの ブレンドはもっぱら機械的手段により得られるものであり、そして 500μm未満 の粒子サイズを有する; 前記ブレンドを遠心分離し、ペレットを上清液から分離する; 前記上清液を濾過し、500KD より大きい分子量の分子を浸透させる;そして 0.22μmの孔のフィルターで前記浸透物を濾過する; を含んで成る方法。 30.前記非変性水性溶液が純水である、請求項29記載の方法。 31.請求項21記載の液体画分の獲得のための方法であって、全て4℃で行う以 下の段階: 中性pHの非変性水性溶液中のサメ軟骨由来のブレンドを獲得する ;ここでこのブレンドはもっぱら機械的手段により得られるものであり、そして 500μm未満の粒子サイズを有する; 前記ブレンドを遠心分離し、ペレットを上清液から分離させる; 前記上清液を限外濾過にかけ、500KD未満の分子量の分子を浸透させる; 0.22μmの孔のフィルターで前記浸透物を濾過する;そして クロマトグラフィーにより前記浸透物から1〜2.5KD の前記液体画分を単離す る; を含んで成る方法。 32.請求項22記載の液体画分の獲得のための方法であって、全て4℃で行う以 下の段階: 中性pHの非変性水性溶液中のサメ軟骨由来のブレンドを獲得する;ここでこの ブレンドはもっぱら機械的手段により得られるものであり、そして500μm未満 の粒子サイズを有する; 前記ブレンドを遠心分離し、ペレットを上清液から分離させる; 前記上清液を限外濾過にかけ、500KD未満の分子量の分子を浸透させる; 0.22μmの孔のフィルターで前記浸透物を濾過する;そして クロマトグラフィーにより前記浸透物から29KDの前記液体画分を単離する; を含んで成る方法。 33.請求項23記載の液体画分の獲得のための方法であって、全て4℃で行う以 下の段階: 中性pHの非変性水性溶液中のサメ軟骨由来のブレンドを獲得する;ここでこの ブレンドはもっぱら機械的手段により得られるものであり、そして 500μm未満 の粒子サイズを有する; 前記ブレンドを遠心分離し、ペレットを上清液から分離させる; 前記上清液を限外濾過にかけ、500KD未満の分子量の分子を浸透させる; 0.22μmの孔のフィルターで前記浸透物を濾過する;そして クロマトグラフィーにより前記浸透物から35KDの前記液体画分を単離する; を含んで成る方法。 34.請求項24記載の液体画分の獲得のための方法であって、全て4℃で行う以 下の段階: 中性pHの非変性水性溶液中のサメ軟骨由来のブレンドを獲得する;ここでこの ブレンドはもっぱら機械的手段により得られるものであり、そして 500μm未満 の粒子サイズを有する; 前記ブレンドを遠心分離し、ペレットを上清液から分離させる; 前記上清液を限外濾過にかけ、500KD未満の分子量の分子を浸透させる; 0.22μmの孔のフィルターで前記浸透物を濾過する;そして クロマトグラフィーにより前記浸透物から48KDの前記液体画分を単離する; を含んで成る方法。 35.請求項25記載の液体画分の獲得のための方法であって、全て4℃で行う以 下の段階: 中性pHの非変性水性溶液中のサメ軟骨由来のブレンドを獲得する;ここでこの ブレンドはもっぱら機械的手段により得られるものであり、そして 500μm未満 の粒子サイズを有する; 前記ブレンドを遠心分離し、ペレットを上清液から分離させる; 前記上清液を限外濾過にかけ、500KD未満の分子量の分子を浸透させる; 0.22μmの孔のフィルターで前記浸透物を濾過する;そして クロマトグラフィーにより前記浸透物から60KDの前記液体画分を単離する; を含んで成る方法。 36.請求項26記載の液体画分の獲得のための方法であって、全て4℃で行う以 下の段階: 中性pHの非変性水性溶液中のサメ軟骨由来のブレンドを獲得する;ここでこの ブレンドはもっぱら機械的手段により得られるものであり、そして 500μm未満 の粒子サイズを有する; 前記ブレンドを遠心分離し、ペレットを上清液から分離させる; 前記上清液を限外濾過にかけ、500KD未満の分子量の分子を浸透させる; 0.22μmの孔のフィルターで前記浸透物を濾過する;そして クロマトグラフィーにより前記浸透物から60〜120KD の前記液体画分を単離す る; を含んで成る方法。 37.前記クロマトグラフィーをSephacryl S-300 又はSuperose S-12 精製カラ ムを用いてファスト・プロテイン・液体クロマトグラフィーで実施する、請求項 31〜36のいづれか1項記載の方法。 38.前記クロマトグラフィー段階を、前記液体抽出物を別々の画分に分離する 段階に置き換えた方法であって、この分離が前記画分の中に含まれる分子の等電 点を基礎とし、前記液体画分の分子量を電気泳動ゲルで見積る、請求項32〜35の いづれか1項記載の方法。
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