JPH09313195A - Ｓ−フェニル−ｌ−システインの製造法 - Google Patents
Ｓ−フェニル−ｌ−システインの製造法Info
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- JPH09313195A JPH09313195A JP13842396A JP13842396A JPH09313195A JP H09313195 A JPH09313195 A JP H09313195A JP 13842396 A JP13842396 A JP 13842396A JP 13842396 A JP13842396 A JP 13842396A JP H09313195 A JPH09313195 A JP H09313195A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 酵素反応で合成して得られるＳ−フェニル−
Ｌ−システイン溶液からＳ−フェニル−Ｌ−システイン
を高純度に精製する。 【解決手段】 酵素反応によって得られるＳ−フェニル
−Ｌ−システイン溶液から、Ｓ−フェニル−Ｌ−システ
インを製造する際、（１）酵素反応終了液のｐＨを１．
５以下の強酸性にして、反応液中に析出した結晶を溶解
させる工程、（２）結晶を強酸性で溶解した溶液に活性
炭を添加して、空気あるいは酸素を通気しながら２０〜
６０℃に保つ工程、（３）活性炭を添加した溶液から、
活性炭および不溶物を分離除去する工程、（４）活性炭
濾過濾液にアルカリを添加してｐＨを２．５〜６．０に
調整し、Ｓ−フェニル−Ｌ−システインを析出させ、結
晶を分離する工程からなる製造法。
Ｌ−システイン溶液からＳ−フェニル−Ｌ−システイン
を高純度に精製する。 【解決手段】 酵素反応によって得られるＳ−フェニル
−Ｌ−システイン溶液から、Ｓ−フェニル−Ｌ−システ
インを製造する際、（１）酵素反応終了液のｐＨを１．
５以下の強酸性にして、反応液中に析出した結晶を溶解
させる工程、（２）結晶を強酸性で溶解した溶液に活性
炭を添加して、空気あるいは酸素を通気しながら２０〜
６０℃に保つ工程、（３）活性炭を添加した溶液から、
活性炭および不溶物を分離除去する工程、（４）活性炭
濾過濾液にアルカリを添加してｐＨを２．５〜６．０に
調整し、Ｓ−フェニル−Ｌ−システインを析出させ、結
晶を分離する工程からなる製造法。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明はＳ−フェニル−Ｌ−
システインの製造法に関し、詳しくは、酵素反応によっ
て得られるＳ−フェニル−Ｌ−システイン溶液から、Ｓ
−フェニル−Ｌ−システインを高純度で製造する方法に
関する。
システインの製造法に関し、詳しくは、酵素反応によっ
て得られるＳ−フェニル−Ｌ−システイン溶液から、Ｓ
−フェニル−Ｌ−システインを高純度で製造する方法に
関する。
【０００２】Ｓ−置換システイン誘導体は、医薬、農薬
の中間体としての用途が期待され、その合成法も検討さ
れているが、工業化された例はなく、安価な製造法が望
まれている。
の中間体としての用途が期待され、その合成法も検討さ
れているが、工業化された例はなく、安価な製造法が望
まれている。
【０００３】中でも、Ｓ−フェニル−Ｌ−システイン
は、アスパラテックプロテアーゼのペプチドアイソスタ
ーの構成要素のアミノ酸として、最近、抗エイズ薬であ
るＨＩＶプロテアーゼ・インヒビターの部分構造として
の用途が見い出され、その安価で純度の高い製造法が望
まれている。
は、アスパラテックプロテアーゼのペプチドアイソスタ
ーの構成要素のアミノ酸として、最近、抗エイズ薬であ
るＨＩＶプロテアーゼ・インヒビターの部分構造として
の用途が見い出され、その安価で純度の高い製造法が望
まれている。
【０００４】
【従来の技術】Ｓ−フェニル−Ｌ−システインは、酵素
反応によって合成できることが知られている。
反応によって合成できることが知られている。
【０００５】例えば、Ｓ−フェニル−Ｌ−システイン
は、トリプトファンシンターゼまたはシステインデスル
フヒドラーゼまたはメチオニン−γ−リアーゼ（メチオ
ニナーゼ）の触媒する酵素反応によってチオフェノール
と一般式［１］
は、トリプトファンシンターゼまたはシステインデスル
フヒドラーゼまたはメチオニン−γ−リアーゼ（メチオ
ニナーゼ）の触媒する酵素反応によってチオフェノール
と一般式［１］
【０００６】
【化２】 （式中、Ｘは−ＯＲ基または−ＳＲ基またはハロゲン原
子を示す。なお、−ＯＲ基、−ＳＲ基のＲは水素原子、
アルキル基、アリール基、アラルキル基、アリル基を示
す。）で表されるβ−置換−Ｌ−アラニンとから合成で
きることが知られている（特公平２−０５４０７７号公
報、特公昭５７−２１３１２号公報、特公昭５８−１３
１５４号公報、特公昭５８−１３１５５号公報、特開昭
５１−１５１３９１号公報）。
子を示す。なお、−ＯＲ基、−ＳＲ基のＲは水素原子、
アルキル基、アリール基、アラルキル基、アリル基を示
す。）で表されるβ−置換−Ｌ−アラニンとから合成で
きることが知られている（特公平２−０５４０７７号公
報、特公昭５７−２１３１２号公報、特公昭５８−１３
１５４号公報、特公昭５８−１３１５５号公報、特開昭
５１−１５１３９１号公報）。
【０００７】またＳ−フェニル−Ｌ−システインは、シ
ステインデスルフヒドラーゼの触媒する酵素反応によっ
て（１）ピルビン酸、オキサロ酢酸、乳酸、フマル酸ま
たはそれらの塩（２）アンモニアまたはアンモニウム塩
（３）チオフェノール、の３つの原料から合成すること
もできる（特公昭５６−２４５１５号公報、特公昭５７
−１９９１号公報）。
ステインデスルフヒドラーゼの触媒する酵素反応によっ
て（１）ピルビン酸、オキサロ酢酸、乳酸、フマル酸ま
たはそれらの塩（２）アンモニアまたはアンモニウム塩
（３）チオフェノール、の３つの原料から合成すること
もできる（特公昭５６−２４５１５号公報、特公昭５７
−１９９１号公報）。
【０００８】しかし、このような酵素反応による方法で
合成して得られるＳ−フェニル−Ｌ−システイン溶液か
らＳ−フェニル−Ｌ−システインを高純度に精製する方
法は知られていない。
合成して得られるＳ−フェニル−Ｌ−システイン溶液か
らＳ−フェニル−Ｌ−システインを高純度に精製する方
法は知られていない。
【０００９】
【発明が解決しようとする課題】上記のように、酵素反
応で合成して得られるＳ−フェニル−Ｌ−システイン溶
液からＳ−フェニル−Ｌ−システインを高純度に精製す
る技術は確立されていないのが現状である。
応で合成して得られるＳ−フェニル−Ｌ−システイン溶
液からＳ−フェニル−Ｌ−システインを高純度に精製す
る技術は確立されていないのが現状である。
【００１０】本発明の目的は、酵素反応で合成して得ら
れるＳ−フェニル−Ｌ−システイン溶液から高純度のＳ
−フェニル−Ｌ−システインの製造が可能な方法を提供
することである。
れるＳ−フェニル−Ｌ−システイン溶液から高純度のＳ
−フェニル−Ｌ−システインの製造が可能な方法を提供
することである。
【００１１】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、酵素反応
によって得られるＳ−フェニル−Ｌ−システイン溶液か
ら、Ｓ−フェニル−Ｌ−システインを製造する際、
（１）Ｓ−フェニル−Ｌ−システインの生成した酵素反
応終了液を強酸性にして、反応液中に析出したＳ−フェ
ニル−Ｌ−システイン結晶を溶解させ、次に（２）活性
炭を添加して特定の温度に保ちながら、空気あるいは酸
素を通気した後、（３）活性炭および不溶物を分離除去
し、（４）活性炭濾過濾液にアルカリを添加してＳ−フ
ェニル−Ｌ−システインを析出させ、結晶を分離するこ
とにより、高純度のＳ−フェニル−Ｌ−システイン結晶
が得られることを見出し、発明を完成するに至った。
によって得られるＳ−フェニル−Ｌ−システイン溶液か
ら、Ｓ−フェニル−Ｌ−システインを製造する際、
（１）Ｓ−フェニル−Ｌ−システインの生成した酵素反
応終了液を強酸性にして、反応液中に析出したＳ−フェ
ニル−Ｌ−システイン結晶を溶解させ、次に（２）活性
炭を添加して特定の温度に保ちながら、空気あるいは酸
素を通気した後、（３）活性炭および不溶物を分離除去
し、（４）活性炭濾過濾液にアルカリを添加してＳ−フ
ェニル−Ｌ−システインを析出させ、結晶を分離するこ
とにより、高純度のＳ−フェニル−Ｌ−システイン結晶
が得られることを見出し、発明を完成するに至った。
【００１２】すなわち、本発明は、酵素反応によって得
られるＳ−フェニル−Ｌ−システイン溶液から、Ｓ−フ
ェニル−Ｌ−システインを製造する際、製造工程が以下
の工程からなることを特徴とするＳ−フェニル−Ｌ−シ
ステインの製造法である。 （１）Ｓ−フェニル−Ｌ−システインの生成した酵素反
応終了液のｐＨを１．５以下の強酸性にして、反応液中
に析出したＳ−フェニル−Ｌ−システイン結晶を溶解さ
せる工程、（２）反応液中に析出したＳ−フェニル−Ｌ
−システイン結晶を強酸性で溶解した溶液に活性炭を添
加して、空気あるいは酸素を通気しながら２０〜６０℃
に保つ工程、（３）活性炭を添加した溶液から、活性炭
および不溶物を分離除去する工程、（４）活性炭濾過濾
液にアルカリを添加してｐＨを２．５〜６．０に調整
し、Ｓ−フェニル−Ｌ−システインを析出させ、結晶を
分離する工程。
られるＳ−フェニル−Ｌ−システイン溶液から、Ｓ−フ
ェニル−Ｌ−システインを製造する際、製造工程が以下
の工程からなることを特徴とするＳ−フェニル−Ｌ−シ
ステインの製造法である。 （１）Ｓ−フェニル−Ｌ−システインの生成した酵素反
応終了液のｐＨを１．５以下の強酸性にして、反応液中
に析出したＳ−フェニル−Ｌ−システイン結晶を溶解さ
せる工程、（２）反応液中に析出したＳ−フェニル−Ｌ
−システイン結晶を強酸性で溶解した溶液に活性炭を添
加して、空気あるいは酸素を通気しながら２０〜６０℃
に保つ工程、（３）活性炭を添加した溶液から、活性炭
および不溶物を分離除去する工程、（４）活性炭濾過濾
液にアルカリを添加してｐＨを２．５〜６．０に調整
し、Ｓ−フェニル−Ｌ−システインを析出させ、結晶を
分離する工程。
【００１３】チオフェノールを原料として、酵素反応に
よってＳ−フェニル−Ｌ−システインを合成して得られ
る反応液からＳ−フェニル−Ｌ−システインを精製する
には、まず第一に酵素または微生物細胞あるいは微生物
細胞由来成分を除去する必要がある。
よってＳ−フェニル−Ｌ−システインを合成して得られ
る反応液からＳ−フェニル−Ｌ−システインを精製する
には、まず第一に酵素または微生物細胞あるいは微生物
細胞由来成分を除去する必要がある。
【００１４】酵素または微生物細胞あるいは微生物細胞
由来成分を除去するためには、例えば活性炭吸着処理を
行うが、高温で処理するとＳ−フェニル−Ｌ−システイ
ンのラセミ化が生じるという問題がある。
由来成分を除去するためには、例えば活性炭吸着処理を
行うが、高温で処理するとＳ−フェニル−Ｌ−システイ
ンのラセミ化が生じるという問題がある。
【００１５】また、通常、反応液には未反応のチオフェ
ノールが残存するが、チオフェノールを除去せずにＳ−
フェニル−Ｌ−システインの精製を進めると、チオフェ
ノールあるいはその酸化物が不純物となるので、未反応
チオフェノールを何らかの方法で除去することが必要で
ある。
ノールが残存するが、チオフェノールを除去せずにＳ−
フェニル−Ｌ−システインの精製を進めると、チオフェ
ノールあるいはその酸化物が不純物となるので、未反応
チオフェノールを何らかの方法で除去することが必要で
ある。
【００１６】未反応チオフェノールを充分に活性炭吸着
により除去しようとすれば活性炭添加量を充分に行えば
よいが、Ｓ−フェニル−Ｌ−システインも活性炭に吸着
されることからＳ−フェニル−Ｌ−システインの収率が
悪くなる。酵素または微生物細胞あるいは微生物細胞由
来成分を除去するに充分な活性炭量で、活性炭へのＳ−
フェニル−Ｌ−システイン吸着ロスが許容される程度の
活性炭量では、チオフェノールの除去は活性炭処理だけ
では不充分である。
により除去しようとすれば活性炭添加量を充分に行えば
よいが、Ｓ−フェニル−Ｌ−システインも活性炭に吸着
されることからＳ−フェニル−Ｌ−システインの収率が
悪くなる。酵素または微生物細胞あるいは微生物細胞由
来成分を除去するに充分な活性炭量で、活性炭へのＳ−
フェニル−Ｌ−システイン吸着ロスが許容される程度の
活性炭量では、チオフェノールの除去は活性炭処理だけ
では不充分である。
【００１７】本発明の特徴は、酵素反応で得られたＳ−
フェニル−Ｌ−システイン溶液に活性炭を添加して、空
気あるいは酸素を通気しながら２０〜６０℃に保つと、
酵素または微生物細胞あるいは微生物細胞由来成分およ
び未反応のチオフェノールを吸着させると同時に、活性
炭に吸着されない一部のチオフェノールを酸化して不溶
化することができ、活性炭を添加した溶液から、活性炭
と、不溶化したチオフェノール酸化物を濾過などの方法
により除去すれば、Ｓ−フェニル−Ｌ−システインのラ
セミ化を起こすことなく、酵素または微生物細胞あるい
は微生物細胞由来成分を除去すると同時に未反応のチオ
フェノールも除去することができ、そのような処理を行
ったＳ−フェニル−Ｌ−システイン溶液に、適当なアル
カリを添加してｐＨを２．５〜６．０に調整し、Ｓ−フ
ェニル−Ｌ−システインを析出させれば、高度にＳ−フ
ェニル−Ｌ−システインを精製できることである。
フェニル−Ｌ−システイン溶液に活性炭を添加して、空
気あるいは酸素を通気しながら２０〜６０℃に保つと、
酵素または微生物細胞あるいは微生物細胞由来成分およ
び未反応のチオフェノールを吸着させると同時に、活性
炭に吸着されない一部のチオフェノールを酸化して不溶
化することができ、活性炭を添加した溶液から、活性炭
と、不溶化したチオフェノール酸化物を濾過などの方法
により除去すれば、Ｓ−フェニル−Ｌ−システインのラ
セミ化を起こすことなく、酵素または微生物細胞あるい
は微生物細胞由来成分を除去すると同時に未反応のチオ
フェノールも除去することができ、そのような処理を行
ったＳ−フェニル−Ｌ−システイン溶液に、適当なアル
カリを添加してｐＨを２．５〜６．０に調整し、Ｓ−フ
ェニル−Ｌ−システインを析出させれば、高度にＳ−フ
ェニル−Ｌ−システインを精製できることである。
【００１８】
【発明の実施の形態】本発明方法に用いられるＳ−フェ
ニル−Ｌ−システイン溶液は酵素反応によって得られる
ものであればよい。
ニル−Ｌ−システイン溶液は酵素反応によって得られる
ものであればよい。
【００１９】酵素反応としては、トリプトファンシンタ
ーゼまたはシステインデスルフヒドラーゼまたはメチオ
ニン−γ−リアーゼによってチオフェノールと一般式
［１］
ーゼまたはシステインデスルフヒドラーゼまたはメチオ
ニン−γ−リアーゼによってチオフェノールと一般式
［１］
【化３】 （式中、Ｘは−ＯＲ基または−ＳＲ基またはハロゲン原
子を示す。なお、−ＯＲ基、−ＳＲ基のＲは水素原子、
アルキル基、アリール基、アラルキル基、アリル基を示
す。）で表されるβ−置換−Ｌ−アラニンとからＳ−フ
ェニル−Ｌ−システインを合成する反応が利用できる。
子を示す。なお、−ＯＲ基、−ＳＲ基のＲは水素原子、
アルキル基、アリール基、アラルキル基、アリル基を示
す。）で表されるβ−置換−Ｌ−アラニンとからＳ−フ
ェニル−Ｌ−システインを合成する反応が利用できる。
【００２０】β−置換−Ｌ−アラニンとしては、Ｌ−セ
リン、Ｌ−システイン、β−クロロ−Ｌ−アラニンが好
ましいが、Ｓ−メチル−Ｌ−システイン、Ｓ−エチル−
Ｌ−システイン等のＳ−アルキル−Ｌ−システイン、Ｓ
−ベンジル−Ｌ−システインなどのＳ−アラルキル−Ｌ
−システイン、Ｏ−メチル−Ｌ−セリン、Ｏ−エチル−
Ｌ−セリン等のＯ−アルキル−Ｌ−セリン、Ｏ−フェニ
ル−Ｌ−セリン等のＯ−アリール−Ｌ−セリン、Ｏ−ベ
ンジル−Ｌ−セリン等のＯ−アラルキル−Ｌ−セリン、
β−ブロモ−Ｌ−アラニン、β−ヨード−Ｌ−アラニン
等も用いることが可能である。
リン、Ｌ−システイン、β−クロロ−Ｌ−アラニンが好
ましいが、Ｓ−メチル−Ｌ−システイン、Ｓ−エチル−
Ｌ−システイン等のＳ−アルキル−Ｌ−システイン、Ｓ
−ベンジル−Ｌ−システインなどのＳ−アラルキル−Ｌ
−システイン、Ｏ−メチル−Ｌ−セリン、Ｏ−エチル−
Ｌ−セリン等のＯ−アルキル−Ｌ−セリン、Ｏ−フェニ
ル−Ｌ−セリン等のＯ−アリール−Ｌ−セリン、Ｏ−ベ
ンジル−Ｌ−セリン等のＯ−アラルキル−Ｌ−セリン、
β−ブロモ−Ｌ−アラニン、β−ヨード−Ｌ−アラニン
等も用いることが可能である。
【００２１】また、酵素反応としては、システインデス
ルフヒドラーゼによって（１）チオフェノール（２）ピ
ルビン酸、オキサロ酢酸、乳酸、フマル酸またはそれら
の塩（３）アンモニアまたはアンモニウム塩、の３つの
原料から Ｓ−フェニル−Ｌ−システインを合成する反
応も利用できる。
ルフヒドラーゼによって（１）チオフェノール（２）ピ
ルビン酸、オキサロ酢酸、乳酸、フマル酸またはそれら
の塩（３）アンモニアまたはアンモニウム塩、の３つの
原料から Ｓ−フェニル−Ｌ−システインを合成する反
応も利用できる。
【００２２】ピルビン酸、オキサロ酢酸、乳酸、フマル
酸の塩としては、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩等
のアルカリ金属塩またはアンモニウム塩が挙げられる。
（３）のアンモニウム塩としては、硫酸アンモニウム、
塩化アンモニウム、硝酸アンモニウム、（２）の有機酸
のアンモニウム塩等が挙げられるが、反応系中でアンモ
ニアを生成するものであればいずれでもよい。
酸の塩としては、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩等
のアルカリ金属塩またはアンモニウム塩が挙げられる。
（３）のアンモニウム塩としては、硫酸アンモニウム、
塩化アンモニウム、硝酸アンモニウム、（２）の有機酸
のアンモニウム塩等が挙げられるが、反応系中でアンモ
ニアを生成するものであればいずれでもよい。
【００２３】トリプトファンシンターゼ、システインデ
スルフヒドラーゼ、メチオニン−γ−リアーゼの生産菌
としては、エシェリヒア・コリなど原核細胞の微生物あ
るいは該酵素の生産性を高めたＤＮＡ組み替え技術の応
用により創成された形質転換微生物が用いられる。ま
た、カビなど真核細胞の微生物でもよく、それら真核細
胞微生物の該酵素の生産性を高めるためＤＮＡ組み替え
技術の応用により創成された形質転換微生物であっても
良い。
スルフヒドラーゼ、メチオニン−γ−リアーゼの生産菌
としては、エシェリヒア・コリなど原核細胞の微生物あ
るいは該酵素の生産性を高めたＤＮＡ組み替え技術の応
用により創成された形質転換微生物が用いられる。ま
た、カビなど真核細胞の微生物でもよく、それら真核細
胞微生物の該酵素の生産性を高めるためＤＮＡ組み替え
技術の応用により創成された形質転換微生物であっても
良い。
【００２４】本発明に使用されるトリプトファンシンタ
ーゼ、システインデスルフヒドラーゼ、メチオニン−γ
−リアーゼは、必ずしも純粋である必要はない。すなわ
ち、各酵素生産菌の培養物、培養物から遠心分離などの
方法によって採取した生菌体、その乾燥菌体、あるいは
菌体を破砕、自己消化、超音波処理などによって得られ
た菌体処理物、さらにはこれらの菌体よりの抽出物なら
びに該抽出物より得られる酵素の粗精製物であっても利
用可能である。
ーゼ、システインデスルフヒドラーゼ、メチオニン−γ
−リアーゼは、必ずしも純粋である必要はない。すなわ
ち、各酵素生産菌の培養物、培養物から遠心分離などの
方法によって採取した生菌体、その乾燥菌体、あるいは
菌体を破砕、自己消化、超音波処理などによって得られ
た菌体処理物、さらにはこれらの菌体よりの抽出物なら
びに該抽出物より得られる酵素の粗精製物であっても利
用可能である。
【００２５】Ｓ−フェニル−Ｌ−システインを酵素反応
で合成すると、Ｓ−フェニル−Ｌ−システインは水に対
する溶解度が低いため、通常、酵素反応の進行にともな
い、Ｓ−フェニル−Ｌ−システインが反応液中で結晶と
なって析出する。
で合成すると、Ｓ−フェニル−Ｌ−システインは水に対
する溶解度が低いため、通常、酵素反応の進行にともな
い、Ｓ−フェニル−Ｌ−システインが反応液中で結晶と
なって析出する。
【００２６】酵素反応の終了した反応液からＳ−フェニ
ル−Ｌ−システインを精製するには、反応液のｐＨを塩
酸または硫酸などの適当な酸によって酸性に調整し、反
応液中に析出した結晶を溶解させた後、活性炭吸着処理
などにより微生物細胞もしくは酵素と未反応のチオフェ
ノールを除去し、その後、適当なアルカリで中和すれ
ば、Ｓ−フェニル−Ｌ−システインの結晶が析出するの
で、濾過等の手段で容易に単離できる。
ル−Ｌ−システインを精製するには、反応液のｐＨを塩
酸または硫酸などの適当な酸によって酸性に調整し、反
応液中に析出した結晶を溶解させた後、活性炭吸着処理
などにより微生物細胞もしくは酵素と未反応のチオフェ
ノールを除去し、その後、適当なアルカリで中和すれ
ば、Ｓ−フェニル−Ｌ−システインの結晶が析出するの
で、濾過等の手段で容易に単離できる。
【００２７】反応終了液を酸性にしてＳ−フェニル−Ｌ
−システイン結晶を溶解させる場合、ｐＨは１．５以下
に調整することが好ましい。Ｓ−フェニル−Ｌ−システ
インは、水溶液のｐＨが１．５以下でないと１重量％以
上の濃度で溶解させることができず、容積効率が悪くな
る。
−システイン結晶を溶解させる場合、ｐＨは１．５以下
に調整することが好ましい。Ｓ−フェニル−Ｌ−システ
インは、水溶液のｐＨが１．５以下でないと１重量％以
上の濃度で溶解させることができず、容積効率が悪くな
る。
【００２８】反応液中に析出したＳ−フェニル−Ｌ−シ
ステイン結晶を強酸性で溶解した後、酵素または微生物
細胞あるいは微生物細胞由来成分と未反応チオフェノー
ルを除去するためには、例えば活性炭吸着処理を行う
が、この場合は、Ｓ−フェニル−Ｌ−システインを強酸
性で溶解させた溶液に活性炭を添加して２０〜６０℃に
加熱し、酵素または微生物細胞あるいは微生物細胞由来
成分と未反応チオフェノールを活性炭に吸着させて濾過
等の手段で固液を分離すれば、Ｓ−フェニル−Ｌ−シス
テイン溶液から、酵素または微生物細胞あるいは微生物
細胞由来成分および未反応のチオフェノールを除去でき
る。
ステイン結晶を強酸性で溶解した後、酵素または微生物
細胞あるいは微生物細胞由来成分と未反応チオフェノー
ルを除去するためには、例えば活性炭吸着処理を行う
が、この場合は、Ｓ−フェニル−Ｌ−システインを強酸
性で溶解させた溶液に活性炭を添加して２０〜６０℃に
加熱し、酵素または微生物細胞あるいは微生物細胞由来
成分と未反応チオフェノールを活性炭に吸着させて濾過
等の手段で固液を分離すれば、Ｓ−フェニル−Ｌ−シス
テイン溶液から、酵素または微生物細胞あるいは微生物
細胞由来成分および未反応のチオフェノールを除去でき
る。
【００２９】活性炭としては、ＰＭ−ＳＸ、ＰＭ−Ｐ
Ａ、ＰＭ−ＫＩ、ＰＭ−ＫＳ、ＰＭ−ＡＡ（以上、三井
製薬製）、ＷＰＨ、ＰＣＢ−Ｇ、ＡＤＰ（以上、東洋カ
ルゴン製）、白鷺Ａ、白鷺Ｍ、白鷺Ｃ、カルボラフィン
（以上、武田薬品工業製）、太閤Ｓタイプ、太閤Ｋタイ
プ（以上、二村化学製）などを挙げることができる。
Ａ、ＰＭ−ＫＩ、ＰＭ−ＫＳ、ＰＭ−ＡＡ（以上、三井
製薬製）、ＷＰＨ、ＰＣＢ−Ｇ、ＡＤＰ（以上、東洋カ
ルゴン製）、白鷺Ａ、白鷺Ｍ、白鷺Ｃ、カルボラフィン
（以上、武田薬品工業製）、太閤Ｓタイプ、太閤Ｋタイ
プ（以上、二村化学製）などを挙げることができる。
【００３０】活性炭の添加量は、通常、溶液の質量に対
して０．５〜６％の量を添加するが、酵素反応に用いた
酵素または微生物細胞の量および未反応チオフェノール
の量によって、活性炭の添加量は変更し得るが、活性炭
量は溶液中のＳ−フェニル−Ｌ−システイン含有量（質
量）の３倍量を超えない範囲で添加する事が好ましい。
溶液中のＳ−フェニル−Ｌ−システイン含有量（質量）
の３倍量を超える量の活性炭を添加すると、活性炭によ
るＳ−フェニル−Ｌ−システインの吸着ロスが著しく大
きくなる。
して０．５〜６％の量を添加するが、酵素反応に用いた
酵素または微生物細胞の量および未反応チオフェノール
の量によって、活性炭の添加量は変更し得るが、活性炭
量は溶液中のＳ−フェニル−Ｌ−システイン含有量（質
量）の３倍量を超えない範囲で添加する事が好ましい。
溶液中のＳ−フェニル−Ｌ−システイン含有量（質量）
の３倍量を超える量の活性炭を添加すると、活性炭によ
るＳ−フェニル−Ｌ−システインの吸着ロスが著しく大
きくなる。
【００３１】酵素反応液中に析出したＳ−フェニル−Ｌ
−システイン結晶を強酸性で溶解した溶液中には、未反
応のチオフェノールが残存するが、未反応チオフェノー
ルの一部は活性炭処理の際、活性炭に吸着されるが、充
分には吸着除去されない。しかしながら、活性炭処理を
行う際、同時に、２０〜６０℃に保ちながら、溶液に空
気あるいは酸素を通気すると、残存する未反応チオフェ
ノールを除去することが可能である。活性炭未吸着のチ
オフェノールは酸化され、不溶性の固体となって濾過除
去される。２０℃よりも低い温度での通気処理は、チオ
フェノールを酸化するには効果が少なく望ましくない。
空気あるいは酸素の通気は、溶液１ｌに対し０．０１〜
６０ｌ／ｈの流量で０．５時間〜２０時間で十分であ
る。
−システイン結晶を強酸性で溶解した溶液中には、未反
応のチオフェノールが残存するが、未反応チオフェノー
ルの一部は活性炭処理の際、活性炭に吸着されるが、充
分には吸着除去されない。しかしながら、活性炭処理を
行う際、同時に、２０〜６０℃に保ちながら、溶液に空
気あるいは酸素を通気すると、残存する未反応チオフェ
ノールを除去することが可能である。活性炭未吸着のチ
オフェノールは酸化され、不溶性の固体となって濾過除
去される。２０℃よりも低い温度での通気処理は、チオ
フェノールを酸化するには効果が少なく望ましくない。
空気あるいは酸素の通気は、溶液１ｌに対し０．０１〜
６０ｌ／ｈの流量で０．５時間〜２０時間で十分であ
る。
【００３２】このように活性炭存在下に酸性溶液に通気
を行うことによりチオフェノールの酸化による不溶化を
促進し、活性炭吸着処理に用いる活性炭の量を削減出
来、Ｓ−フェニル−Ｌ−システインの活性炭への吸着ロ
スを低減できる。
を行うことによりチオフェノールの酸化による不溶化を
促進し、活性炭吸着処理に用いる活性炭の量を削減出
来、Ｓ−フェニル−Ｌ−システインの活性炭への吸着ロ
スを低減できる。
【００３３】また活性炭処理を行う際の温度は、６０℃
を超えるとＳ−フェニル−Ｌ−システインのラセミ化が
顕著になるので、活性炭処理は２０〜６０℃で行うこと
が望ましい。特に、活性炭存在下での加熱によってラセ
ミ化が促進されるので、加熱下での活性炭との接触時間
は不必要に長くしないことが必要である。以上の理由か
ら活性炭との接触時間は１２時間以内が好ましい。
を超えるとＳ−フェニル−Ｌ−システインのラセミ化が
顕著になるので、活性炭処理は２０〜６０℃で行うこと
が望ましい。特に、活性炭存在下での加熱によってラセ
ミ化が促進されるので、加熱下での活性炭との接触時間
は不必要に長くしないことが必要である。以上の理由か
ら活性炭との接触時間は１２時間以内が好ましい。
【００３４】酵素または微生物細胞あるいは微生物細胞
由来成分と、未反応チオフェノールが除去されたＳ−フ
ェニル−Ｌ−システインの酸性溶液から、Ｓ−フェニル
−Ｌ−システインを結晶として得るためには、適当なア
ルカリを加えて中和晶析を行えばよい。
由来成分と、未反応チオフェノールが除去されたＳ−フ
ェニル−Ｌ−システインの酸性溶液から、Ｓ−フェニル
−Ｌ−システインを結晶として得るためには、適当なア
ルカリを加えて中和晶析を行えばよい。
【００３５】中和晶析を行う際、ｐＨは２．５〜６に調
整すると、純白の結晶が得られる。ｐＨ６を超えるｐＨ
で晶析を行うと結晶の色が灰色から黄色味がかったもの
となる。
整すると、純白の結晶が得られる。ｐＨ６を超えるｐＨ
で晶析を行うと結晶の色が灰色から黄色味がかったもの
となる。
【００３６】中和に用いるアルカリとしては、水酸化ナ
トリウム、水酸化カリウム、水酸化リチウム、アンモニ
ア、炭酸ナトリウム、ピロリン酸ナトリウム、ピロリン
酸カリウムなどが使用可能である。
トリウム、水酸化カリウム、水酸化リチウム、アンモニ
ア、炭酸ナトリウム、ピロリン酸ナトリウム、ピロリン
酸カリウムなどが使用可能である。
【００３７】
【実施例】以下、本発明を実施例により更に詳細に説明
する。なお、Ｓ−フェニル−Ｌ−システインの定量は高
速液体クロマトグラフィー（以下ＨＰＬＣと略する）に
よって行った。Ｓ−フェニル−Ｌ−システインのＨＰＬＣ分析条件 カラム；Ｉｎｅｒｔｓｉｌ ＯＤＳ−２ （ＧＬ サイ
エンス製） 移動相；８．６ｍＭ ＫＨ2ＰＯ4（ｐＨ４リン酸で調
整）：ＭｅＯＨ＝ ７ ： ３ 温度 ；４０℃ 流速 ；１．０ｍｌ／ｍｉｎ 検出 ；ＵＶ ２５４ｎｍ
する。なお、Ｓ−フェニル−Ｌ−システインの定量は高
速液体クロマトグラフィー（以下ＨＰＬＣと略する）に
よって行った。Ｓ−フェニル−Ｌ−システインのＨＰＬＣ分析条件 カラム；Ｉｎｅｒｔｓｉｌ ＯＤＳ−２ （ＧＬ サイ
エンス製） 移動相；８．６ｍＭ ＫＨ2ＰＯ4（ｐＨ４リン酸で調
整）：ＭｅＯＨ＝ ７ ： ３ 温度 ；４０℃ 流速 ；１．０ｍｌ／ｍｉｎ 検出 ；ＵＶ ２５４ｎｍ
【００３８】実験例１ Ｓ−フェニル−Ｌ−システイン４．５ｇを３％塩酸１０
０ｍｌに溶解したＳ−フェニル−Ｌ−システインの酸性
溶液に活性炭ＰＭＳＸ（三井製薬製）を濃度１．７％に
なるように添加し、５０℃、７０℃、８０℃の各温度で
それぞれ２０時間加熱した。また、活性炭を加えずに８
０℃で２０時間、同様に加熱した。適時、溶液の一部を
サンプリングし、Ｓ−フェニル−Ｌ−システインの光学
純度を測定した。光学純度の経時変化を図１に示した。
０ｍｌに溶解したＳ−フェニル−Ｌ−システインの酸性
溶液に活性炭ＰＭＳＸ（三井製薬製）を濃度１．７％に
なるように添加し、５０℃、７０℃、８０℃の各温度で
それぞれ２０時間加熱した。また、活性炭を加えずに８
０℃で２０時間、同様に加熱した。適時、溶液の一部を
サンプリングし、Ｓ−フェニル−Ｌ−システインの光学
純度を測定した。光学純度の経時変化を図１に示した。
【００３９】Ｓ−フェニル−Ｌ−システインの光学純度
分析法 光学分割クロマトグラフィー用カラム ＴＳＫｇｅｌ
Ｅｎａｎｔｉｏ Ｌ１（東ソー製）を用いたＨＰＬＣ分
析におけるＳ−フェニルシステインのＤ−体ピークとＬ
−体ピークのエリアから光学純度を次式によって求め
た。
分析法 光学分割クロマトグラフィー用カラム ＴＳＫｇｅｌ
Ｅｎａｎｔｉｏ Ｌ１（東ソー製）を用いたＨＰＬＣ分
析におけるＳ−フェニルシステインのＤ−体ピークとＬ
−体ピークのエリアから光学純度を次式によって求め
た。
【００４０】
【数１】 光学分割ＨＰＬＣ条件 カラム；ＴＳＫｇｅｌ Ｅｎａｎｔｉｏ Ｌ１（東ソ
ー） 移動相；０．５ｍＭ ＣｕＳＯ4／アセトニトリル＝８
０／２０ 温度 ；４０℃ 流速 ；０．７ｍｌ／ｍｉｎ 検出 ；ＵＶ２５４ｎｍ
ー） 移動相；０．５ｍＭ ＣｕＳＯ4／アセトニトリル＝８
０／２０ 温度 ；４０℃ 流速 ；０．７ｍｌ／ｍｉｎ 検出 ；ＵＶ２５４ｎｍ
【００４１】実施例１ トリプトファンシンターゼ生産菌であるエシェリヒア・
コリ ＭＴ−１０２４２（ＦＥＲＭ ＢＰ−２０）を、
第１表に示す組成の培地１５０ｍｌが入った５００ｍｌ
容の坂口フラスコに接種し、３０℃で２４時間振とう培
養した。この培養液６００ｍｌ（フラスコ４本分）を第
２表に示す組成の培地 １０ｌを仕込んだ２０ｌのジャ
ーファーメンターに接種し、３０℃、ｐＨ６．８（濃ア
ンモニア水でコントロール）で、グルコースを逐時添加
しながら４０時間通気培養した。培養終了後、遠心分離
により菌体を集菌し、得られた湿菌体をトリプトファン
シンターゼ源とした。
コリ ＭＴ−１０２４２（ＦＥＲＭ ＢＰ−２０）を、
第１表に示す組成の培地１５０ｍｌが入った５００ｍｌ
容の坂口フラスコに接種し、３０℃で２４時間振とう培
養した。この培養液６００ｍｌ（フラスコ４本分）を第
２表に示す組成の培地 １０ｌを仕込んだ２０ｌのジャ
ーファーメンターに接種し、３０℃、ｐＨ６．８（濃ア
ンモニア水でコントロール）で、グルコースを逐時添加
しながら４０時間通気培養した。培養終了後、遠心分離
により菌体を集菌し、得られた湿菌体をトリプトファン
シンターゼ源とした。
【００４２】Ｌ−セリン３％、チオフェノール３．１
％、塩化アンモニウム１％、ピリドキサルリン酸２５ｐ
ｐｍを含むｐＨ９．０（ＮａＯＨで調整）の水溶液５０
０ｇに上記遠心菌体を乾燥菌体換算で０．７％濃度とな
るように加えた。３５℃で１５時間、窒素雰囲気下で撹
拌したところ、２２ｇのＳ−フェニル−Ｌ−システイン
が生成した。反応終了後、反応液に濃塩酸を加えてｐＨ
０．５とし、活性炭（ＰＭ−ＳＸ三井製薬製）を１０ｇ
加えて５０℃にて３時間加熱した。この際、液中に空気
を０．１ｌ／ｈの流量で通気しながら攪拌した。その
後、濾過を行い、濾液をＮａＯＨでｐＨ３に調整し、１
０℃に冷却後、濾過を行ってＳ−フェニル−Ｌ−システ
インの結晶を分離した。結晶を乾燥後、２０ｇのＳ−フ
ェニル−Ｌ−システインを得た。
％、塩化アンモニウム１％、ピリドキサルリン酸２５ｐ
ｐｍを含むｐＨ９．０（ＮａＯＨで調整）の水溶液５０
０ｇに上記遠心菌体を乾燥菌体換算で０．７％濃度とな
るように加えた。３５℃で１５時間、窒素雰囲気下で撹
拌したところ、２２ｇのＳ−フェニル−Ｌ−システイン
が生成した。反応終了後、反応液に濃塩酸を加えてｐＨ
０．５とし、活性炭（ＰＭ−ＳＸ三井製薬製）を１０ｇ
加えて５０℃にて３時間加熱した。この際、液中に空気
を０．１ｌ／ｈの流量で通気しながら攪拌した。その
後、濾過を行い、濾液をＮａＯＨでｐＨ３に調整し、１
０℃に冷却後、濾過を行ってＳ−フェニル−Ｌ−システ
インの結晶を分離した。結晶を乾燥後、２０ｇのＳ−フ
ェニル−Ｌ−システインを得た。
【００４３】得られた結晶の元素分析を行ったところ
Ｃ；５４．４８％、Ｈ；５．６９％、Ｎ；７．６４％、
Ｓ；１５．５７％であった（理論値 Ｃ；５４．８０
％、Ｈ；５．６２％、Ｎ；７．１０％、Ｓ；１６．２５
％）。
Ｃ；５４．４８％、Ｈ；５．６９％、Ｎ；７．６４％、
Ｓ；１５．５７％であった（理論値 Ｃ；５４．８０
％、Ｈ；５．６２％、Ｎ；７．１０％、Ｓ；１６．２５
％）。
【００４４】ＭＳスペクトル分析の結果、親イオンピー
クとしてｍ／ｚ＝１９７が検出された。
クとしてｍ／ｚ＝１９７が検出された。
【００４５】ＩＲスペクトル分析では、２９００ｃｍ-1
以上にＮＨ+ 3、ＣＯＯＨの伸縮振動が見られた。１６２
０〜１２００ｃｍ-1付近にアミノ酸特有のＮＨ+ 3、ＣＯ
Ｏ-、アルキルの伸縮および変角振動が見られた。７３
５、６８９ｃｍ-1にモノ置換ベンゼンの面外変角振動が
見られた。
以上にＮＨ+ 3、ＣＯＯＨの伸縮振動が見られた。１６２
０〜１２００ｃｍ-1付近にアミノ酸特有のＮＨ+ 3、ＣＯ
Ｏ-、アルキルの伸縮および変角振動が見られた。７３
５、６８９ｃｍ-1にモノ置換ベンゼンの面外変角振動が
見られた。
【００４６】ＮＭＲスペクトルのシグナル帰属結果は、
Ｓ−フェニル−Ｌ−システインの構造を満足した。
Ｓ−フェニル−Ｌ−システインの構造を満足した。
【００４７】また、Ｒａｍａｎスペクトル分析により、
Ｃ−Ｓ結合の存在を確認した。さらに、光学分割クロマ
トグラフィー用カラム ＴＳＫｇｅｌ Ｅｎａｎｔｉｏ
Ｌ１（東ソー製）を用いたＨＰＬＣ分析により、結晶
の立体構造はＬ−体であり、光学純度は１００％である
ことを確認した。
Ｃ−Ｓ結合の存在を確認した。さらに、光学分割クロマ
トグラフィー用カラム ＴＳＫｇｅｌ Ｅｎａｎｔｉｏ
Ｌ１（東ソー製）を用いたＨＰＬＣ分析により、結晶
の立体構造はＬ−体であり、光学純度は１００％である
ことを確認した。
【００４８】以上の機器分析結果から、得られた結晶は
Ｓ−フェニル−Ｌ−システインであることを確認した。
結晶中にチオフェノールおよびその酸化物は検出されな
かった。
Ｓ−フェニル−Ｌ−システインであることを確認した。
結晶中にチオフェノールおよびその酸化物は検出されな
かった。
【００４９】
【表１】
【００５０】
【表２】
【００５１】実施例２ Ｌ−システイン０．２％、酵母エキス０．５％、肉エキ
ス０．５％、ポリペプトン０．５％、グリセリン０．１
％、ＣａＣｌ2０．２％およびＮａＣｌ０．２％、ｐＨ
７．５の培地でエンテロバクター・エーロゲネス（ＩＦ
Ｏ３３２０）を３０℃で１６時間、好気的に培養した。
培養終了後、遠心分離により菌体を集菌し、得られた湿
菌体をシステインデスルフヒドラーゼ源とした。
ス０．５％、ポリペプトン０．５％、グリセリン０．１
％、ＣａＣｌ2０．２％およびＮａＣｌ０．２％、ｐＨ
７．５の培地でエンテロバクター・エーロゲネス（ＩＦ
Ｏ３３２０）を３０℃で１６時間、好気的に培養した。
培養終了後、遠心分離により菌体を集菌し、得られた湿
菌体をシステインデスルフヒドラーゼ源とした。
【００５２】Ｌ−セリン１０．５ｇ、チオフェノール１
１．０ｇ、ピリドキサルリン酸５０ｍｇを含むｐＨ９．
５（ＮａＯＨで調整）の水溶液５００ｇに上記遠心菌体
を乾燥菌体換算で３ｇになるように加えた。３５℃で２
０時間、窒素雰囲気下で撹拌したところ、１５ｇのＳ−
フェニル−Ｌ−システインが生成した。
１．０ｇ、ピリドキサルリン酸５０ｍｇを含むｐＨ９．
５（ＮａＯＨで調整）の水溶液５００ｇに上記遠心菌体
を乾燥菌体換算で３ｇになるように加えた。３５℃で２
０時間、窒素雰囲気下で撹拌したところ、１５ｇのＳ−
フェニル−Ｌ−システインが生成した。
【００５３】反応終了後、反応液に濃塩酸を加えてｐＨ
１．５とし、活性炭（ＰＭ−ＳＸ三井製薬製）を１０ｇ
加えて４０℃にて３時間加熱した。この際、液中に空気
を０．１５ｌ／ｈの流量で通気しながら攪拌した。その
後、濾過を行い、濾液をＮａＯＨでｐＨ５に調整し、１
０℃に冷却後、濾過を行ってＳ−フェニル−Ｌ−システ
インの結晶を分離した。結晶を乾燥後、１４ｇのＳ−フ
ェニル−Ｌ−システインを得た。光学分割クロマトグラ
フィー用カラム ＴＳＫｇｅｌ Ｅｎａｎｔｉｏ Ｌ１
（東ソー製）を用いたＨＰＬＣ分析により、結晶の立体
構造はＬ−体であり、光学純度は１００％であることを
確認した。結晶中にチオフェノールおよびその酸化物は
検出されなかった。
１．５とし、活性炭（ＰＭ−ＳＸ三井製薬製）を１０ｇ
加えて４０℃にて３時間加熱した。この際、液中に空気
を０．１５ｌ／ｈの流量で通気しながら攪拌した。その
後、濾過を行い、濾液をＮａＯＨでｐＨ５に調整し、１
０℃に冷却後、濾過を行ってＳ−フェニル−Ｌ−システ
インの結晶を分離した。結晶を乾燥後、１４ｇのＳ−フ
ェニル−Ｌ−システインを得た。光学分割クロマトグラ
フィー用カラム ＴＳＫｇｅｌ Ｅｎａｎｔｉｏ Ｌ１
（東ソー製）を用いたＨＰＬＣ分析により、結晶の立体
構造はＬ−体であり、光学純度は１００％であることを
確認した。結晶中にチオフェノールおよびその酸化物は
検出されなかった。
【００５４】実施例３ 実施例２と同様の方法でエンテロバクター・エーロゲネ
ス（ＩＦＯ３３２０）の集菌体を得た。Ｌ−システイン
１２．１ｇ、チオフェノール１１．０ｇ、ピリドキサル
リン酸５０ｍｇを含むｐＨ９．５（ＮａＯＨで調整）の
水溶液５００ｇに上記遠心菌体を乾燥菌体換算で３ｇに
なるように加えた。３５℃で２０時間、窒素雰囲気下で
撹拌したところ、１５ｇのＳ−フェニル−Ｌ−システイ
ンが生成した。
ス（ＩＦＯ３３２０）の集菌体を得た。Ｌ−システイン
１２．１ｇ、チオフェノール１１．０ｇ、ピリドキサル
リン酸５０ｍｇを含むｐＨ９．５（ＮａＯＨで調整）の
水溶液５００ｇに上記遠心菌体を乾燥菌体換算で３ｇに
なるように加えた。３５℃で２０時間、窒素雰囲気下で
撹拌したところ、１５ｇのＳ−フェニル−Ｌ−システイ
ンが生成した。
【００５５】反応終了後、反応液に濃硫酸を加えてｐＨ
０．５とし、活性炭（ＰＭ−ＳＸ三井製薬製）を１０ｇ
加えて４０℃にて１２時間加熱した。この際、液中に空
気を０．０５ｌ／ｈの流量で通気しながら攪拌した。そ
の後、濾過を行い、濾液をＫＯＨでｐＨ５に調整し、１
０℃に冷却後、濾過を行ってＳ−フェニル−Ｌ−システ
インの結晶を分離した。結晶を乾燥後、１２ｇのＳ−フ
ェニル−Ｌ−システインを得た。光学分割クロマトグラ
フィー用カラム ＴＳＫｇｅｌ Ｅｎａｎｔｉｏ Ｌ１
（東ソー製）を用いたＨＰＬＣ分析により、結晶の立体
構造はＬ−体であり、光学純度は１００％であることを
確認した。結晶中にチオフェノールおよびその酸化物は
検出されなかった。
０．５とし、活性炭（ＰＭ−ＳＸ三井製薬製）を１０ｇ
加えて４０℃にて１２時間加熱した。この際、液中に空
気を０．０５ｌ／ｈの流量で通気しながら攪拌した。そ
の後、濾過を行い、濾液をＫＯＨでｐＨ５に調整し、１
０℃に冷却後、濾過を行ってＳ−フェニル−Ｌ−システ
インの結晶を分離した。結晶を乾燥後、１２ｇのＳ−フ
ェニル−Ｌ−システインを得た。光学分割クロマトグラ
フィー用カラム ＴＳＫｇｅｌ Ｅｎａｎｔｉｏ Ｌ１
（東ソー製）を用いたＨＰＬＣ分析により、結晶の立体
構造はＬ−体であり、光学純度は１００％であることを
確認した。結晶中にチオフェノールおよびその酸化物は
検出されなかった。
【００５６】実施例４ 実施例２と同様の方法でエンテロバクター・エーロゲネ
ス（ＩＦＯ３３２０）の集菌体を得た。ピルビン酸ナト
リウム１１．０ｇ、硫酸アンモニウム６．６ｇ、チオフ
ェノール１１．０ｇを含むｐＨ１０．０（ＮａＯＨで調
整）の水溶液５００ｇに上記遠心菌体を乾燥菌体換算で
３ｇになるように加えた。３５℃で２０時間、窒素雰囲
気下で撹拌したところ、１４ｇのＳ−フェニル−Ｌ−シ
ステインが生成した。
ス（ＩＦＯ３３２０）の集菌体を得た。ピルビン酸ナト
リウム１１．０ｇ、硫酸アンモニウム６．６ｇ、チオフ
ェノール１１．０ｇを含むｐＨ１０．０（ＮａＯＨで調
整）の水溶液５００ｇに上記遠心菌体を乾燥菌体換算で
３ｇになるように加えた。３５℃で２０時間、窒素雰囲
気下で撹拌したところ、１４ｇのＳ−フェニル−Ｌ−シ
ステインが生成した。
【００５７】反応終了後、反応液に濃塩酸を加えてｐＨ
０．５とし、活性炭（ＰＭ−ＳＸ三井製薬製）を１０ｇ
加えて４０℃にて３時間加熱した。この際、液中に酸素
を０．０５ｌ／ｈの流量で通気しながら攪拌した。その
後、濾過を行い、濾液をＮａＯＨでｐＨ６に調整し、３
０℃に冷却後、濾過を行ってＳ−フェニル−Ｌ−システ
インの結晶を分離した。結晶を乾燥後、１３ｇのＳ−フ
ェニル−Ｌ−システインを得た。光学分割クロマトグラ
フィー用カラム ＴＳＫｇｅｌ Ｅｎａｎｔｉｏ Ｌ１
（東ソー製）を用いたＨＰＬＣ分析により、結晶の立体
構造はＬ−体であり、光学純度は１００％であることを
確認した。結晶中にチオフェノールおよびその酸化物は
検出されなかった。
０．５とし、活性炭（ＰＭ−ＳＸ三井製薬製）を１０ｇ
加えて４０℃にて３時間加熱した。この際、液中に酸素
を０．０５ｌ／ｈの流量で通気しながら攪拌した。その
後、濾過を行い、濾液をＮａＯＨでｐＨ６に調整し、３
０℃に冷却後、濾過を行ってＳ−フェニル−Ｌ−システ
インの結晶を分離した。結晶を乾燥後、１３ｇのＳ−フ
ェニル−Ｌ−システインを得た。光学分割クロマトグラ
フィー用カラム ＴＳＫｇｅｌ Ｅｎａｎｔｉｏ Ｌ１
（東ソー製）を用いたＨＰＬＣ分析により、結晶の立体
構造はＬ−体であり、光学純度は１００％であることを
確認した。結晶中にチオフェノールおよびその酸化物は
検出されなかった。
【００５８】実施例５ Ｌ−メチオニン０．２％、ペプトン０．１％、グリセリ
ン０．２％、ＫＨ2ＰＯ4０．１％、Ｋ2ＨＰＯ4０．１
％、ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．０１％、酵母エキス０．
０２５％、ｐＨ８．０（ＮａＯＨで調整）の液体培地で
シュードモナス・オバリス（ＩＦＯ３７３８）を２７℃
で２４時間、好気的に培養した。培養終了後、遠心分離
により菌体を集菌し、得られた湿菌体をメチオニン−γ
−リアーゼ源とした。
ン０．２％、ＫＨ2ＰＯ4０．１％、Ｋ2ＨＰＯ4０．１
％、ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．０１％、酵母エキス０．
０２５％、ｐＨ８．０（ＮａＯＨで調整）の液体培地で
シュードモナス・オバリス（ＩＦＯ３７３８）を２７℃
で２４時間、好気的に培養した。培養終了後、遠心分離
により菌体を集菌し、得られた湿菌体をメチオニン−γ
−リアーゼ源とした。
【００５９】Ｌ−システイン１２．１ｇ、チオフェノー
ル１１．０ｇ、ピリドキサルリン酸５０ｍｇを含むｐＨ
８．０（ＮａＯＨで調整）の水溶液５００ｇに上記遠心
菌体を乾燥菌体換算で３ｇになるように加えた。３５℃
で２０時間、窒素雰囲気下で撹拌したところ、１５ｇの
Ｓ−フェニル−Ｌ−システインが生成した。
ル１１．０ｇ、ピリドキサルリン酸５０ｍｇを含むｐＨ
８．０（ＮａＯＨで調整）の水溶液５００ｇに上記遠心
菌体を乾燥菌体換算で３ｇになるように加えた。３５℃
で２０時間、窒素雰囲気下で撹拌したところ、１５ｇの
Ｓ−フェニル−Ｌ−システインが生成した。
【００６０】反応終了後、反応液に濃塩酸を加えてｐＨ
０．５とし、活性炭（ＰＭ−ＳＸ三井製薬製）を１０ｇ
加えて６０℃にて３時間加熱した。この際、液中に空気
を０．２５ｌ／ｈの流量で通気しなら攪拌した。その
後、濾過を行い、濾液をアンモニア水でｐＨ２．５に調
整し、１０℃に冷却後、濾過を行ってＳ−フェニル−Ｌ
−システインの結晶を分離した。結晶を乾燥後、１４ｇ
のＳ−フェニル−Ｌ−システインを得た。光学分割クロ
マトグラフィー用カラム ＴＳＫｇｅｌ Ｅｎａｎｔｉ
ｏ Ｌ１（東ソー製）を用いたＨＰＬＣ分析により、結
晶の立体構造はＬ−体であり、光学純度は１００％であ
ることを確認した。結晶中にチオフェノールおよびその
酸化物は検出されなかった。
０．５とし、活性炭（ＰＭ−ＳＸ三井製薬製）を１０ｇ
加えて６０℃にて３時間加熱した。この際、液中に空気
を０．２５ｌ／ｈの流量で通気しなら攪拌した。その
後、濾過を行い、濾液をアンモニア水でｐＨ２．５に調
整し、１０℃に冷却後、濾過を行ってＳ−フェニル−Ｌ
−システインの結晶を分離した。結晶を乾燥後、１４ｇ
のＳ−フェニル−Ｌ−システインを得た。光学分割クロ
マトグラフィー用カラム ＴＳＫｇｅｌ Ｅｎａｎｔｉ
ｏ Ｌ１（東ソー製）を用いたＨＰＬＣ分析により、結
晶の立体構造はＬ−体であり、光学純度は１００％であ
ることを確認した。結晶中にチオフェノールおよびその
酸化物は検出されなかった。
【００６１】
【発明の効果】本発明方法によれば酵素反応により得ら
れたＳ−フェニル−Ｌ−システイン反応液からＳ−フェ
ニル−Ｌ−システインを高度に精製することができる。
れたＳ−フェニル−Ｌ−システイン反応液からＳ−フェ
ニル−Ｌ−システインを高度に精製することができる。
【図１】Ｓ−フェニル−Ｌ−システインの活性炭の有無
及び温度による光学純度の経時変化を示したグラフであ
る。
及び温度による光学純度の経時変化を示したグラフであ
る。
フロントページの続き (72)発明者 坂口 昭夫 福岡県大牟田市浅牟田町30番地 三井東圧 化学株式会社内 (72)発明者 福原 信裕 福岡県大牟田市浅牟田町30番地 三井東圧 化学株式会社内
Claims (3)
- 【請求項１】酵素反応によって得られるＳ−フェニル−
Ｌ−システイン溶液から、Ｓ−フェニル−Ｌ−システイ
ンを製造する際、製造工程が以下の工程からなることを
特徴とするＳ−フェニル−Ｌ−システインの製造法。 （１）Ｓ−フェニル−Ｌ−システインの生成した酵素反
応終了液のｐＨを１．５以下の強酸性にして、反応液中
に析出したＳ−フェニル−Ｌ−システイン結晶を溶解さ
せる工程、（２）反応液中に析出したＳ−フェニル−Ｌ
−システイン結晶を強酸性で溶解した溶液に活性炭を添
加して、空気あるいは酸素を通気しながら２０〜６０℃
に保つ工程、（３）活性炭を添加した溶液から、活性炭
および不溶物を分離除去する工程、（４）活性炭濾過濾
液にアルカリを添加してｐＨを２．５〜６．０に調整
し、Ｓ−フェニル−Ｌ−システインを析出させ、結晶を
分離する工程。 - 【請求項２】酵素反応によって得られるＳ−フェニル−
Ｌ−システイン溶液が、トリプトファンシンターゼまた
はシステインデスルフヒドラーゼまたはメチオニン−γ
−リアーゼ（メチオニナーゼ）の触媒する酵素反応によ
って、チオフェノールと一般式［１］ 【化１】 （式中、Ｘは−ＯＲ基または−ＳＲ基またはハロゲン原
子を示す。なお、−ＯＲ基、−ＳＲ基のＲは水素原子、
アルキル基、アリール基、アラルキル基、アリル基を示
す。）で表されるβ−置換−Ｌ−アラニンとからＳ−フ
ェニル−Ｌ−システインを合成して得られるＳ−フェニ
ル−Ｌ−システイン溶液であることを特徴とする請求項
１記載の製造法。 - 【請求項３】酵素反応によって得られるＳ−フェニル−
Ｌ−システイン溶液が、システインデスルフヒドラーゼ
の触媒する酵素反応により、チオフェノールと（１）ア
ンモニアまたはアンモニウム塩（２）ピルビン酸、オキ
サロ酢酸、乳酸、フマル酸の内から選ばれた有機酸また
はそれらの塩、の３つの原料からＳ−フェニル−Ｌ−シ
ステインを合成して得られるＳ−フェニル−Ｌ−システ
イン溶液であることを特徴とする請求項１記載の製造
法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13842396A JPH09313195A (ja) | 1996-05-31 | 1996-05-31 | Ｓ−フェニル−ｌ−システインの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13842396A JPH09313195A (ja) | 1996-05-31 | 1996-05-31 | Ｓ−フェニル−ｌ−システインの製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09313195A true JPH09313195A (ja) | 1997-12-09 |
Family
ID=15221625
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP13842396A Pending JPH09313195A (ja) | 1996-05-31 | 1996-05-31 | Ｓ−フェニル−ｌ−システインの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH09313195A (ja) |
-
1996
- 1996-05-31 JP JP13842396A patent/JPH09313195A/ja active Pending
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Effective date: 20060516 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20060926 |