JPH09294594A - マルトオリゴシルツラノース及びマルトオリゴシルパラチノース含有糖質とその製造方法並びに用途 - Google Patents

マルトオリゴシルツラノース及びマルトオリゴシルパラチノース含有糖質とその製造方法並びに用途

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JPH09294594A
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Abstract

(57)【要約】 【課題】 マルトオリゴシルスクロースからのマルトオ
リゴシルツラノース及びマルトオリゴシルパラチノース
生成率が高く、工業的実施の容易なマルトオリゴシルツ
ラノース及びマルトオリゴシルパラチノース含有糖質の
新規製造方法を提供するとともに、この製造方法により
得られるマルトオリゴシルツラノース及びマルトオリゴ
シルパラチノース含有糖質とこの糖質の用途を提供す
る。 【解決手段】 マルトオリゴシルスクロース含有溶液
に、非還元性糖質生成酵素を作用させることを特徴とす
るマルトオリゴシルツラノース及びマルトオリゴシルパ
ラチノース含有糖質の製造方法を確立し、併せて、この
製造方法で得られる非晶質マルトオリゴシルツラノース
及びマルトオリゴシルパラチノース含有糖質とこの糖質
を含有せしめた飲食物、化粧品、医薬品などの組成物を
確立することにより解決する。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、マルトオリゴシル
ツラノース及びマルトオリゴシルパラチノース含有糖質
とその製造方法並びに用途に関し、更に詳細にはマルト
オリゴシルツラノース及びマルトオリゴシルパラチノー
ス含有糖質、およびマルトオリゴシルスクロースに非還
元性糖質生成酵素を作用させるマルトオリゴシルツラノ
ース及びマルトオリゴシルパラチノース含有糖質の製造
方法、並びにこの糖質を含有せしめた組成物に関する。
【０００２】
【従来の技術】ツラノース及びパラチノースは、グルコ
ースとフルクトースとからなる二糖類であり、化学的に
は、ツラノースが３−０−α−Ｄ−グルコピラノシル−
Ｄ−フルクトースで示され、パラチノースが６−０−α
−Ｄ−グルコピラノシル−Ｄ−フルクトースで示される
還元性糖質である。
【０００３】ツラノースは、特開平５−２５２９７４号
公報に開示されているように澱粉質とフルクトースとを
含有する水溶液にシクロマルトデキストリン・グルカノ
トランスフェラーゼの作用により調製することが知られ
ている。パラチノースは、「精糖技術研究会誌」第３４
号、第３７乃至４４頁（１９８５年）に記載されている
ように、プロタミノバクター・ルブラム（Ｐｒｏｔａｍ
ｉｎｏｂａｃｔｅｒｒｕｂｒｕｍ）のα−グルコシダー
ゼの作用によりスクロースから調製することが知られて
いる。これら糖質は、比較的低甘味でう蝕を誘発しにく
い糖質で、種々の飲食物への甘味付素材として利用が期
待されるものの、晶出を起こし易く、高濃度シラップ状
甘味料の製造が困難であったり、甘味糖質を多く含む食
品、例えば、あん、羊羹等の製造に際しては、シャリ防
止の工夫を施す必要のあることが知られている。これら
糖質の味質の特徴を生かしつつ、非晶質で、粘度調整、
水分調整の機能をも併せ持つ、更に高分子のオリゴ糖の
開発が望まれる。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、マルトオリ
ゴシルスクロースからのマルトオリゴシルツラノース及
びマルトオリゴシルパラチノース生成率が高く、工業的
実施の容易なマルトオリゴシルツラノース及びマルトオ
リゴシルパラチノースの製造方法を提供するとともに、
この製造方法により得られるマルトオリゴシルツラノー
ス及びマルトオリゴシルパラチノース含有糖質とこの糖
質の用途を提供することである。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明者等は、マルトオ
リゴシルツラノース及びマルトオリゴシルパラチノース
の製造方法について鋭意検討してきた。その結果、本発
明者等が先に特開平７−１４３８７６号公報で開示した
非還元性糖質生成酵素（別名、マルトオリゴシルトレハ
ロース生成酵素）が、マルトオリゴ糖をマルトオリゴシ
ルトレハロースへ変換するのみならず、マルトオリゴシ
ルスクロースから非晶質のマルトオリゴシルツラノース
及びマルトオリゴシルパラチノースを容易に高率で生成
する意外な事実を見いだし、マルトオリゴシルスクロー
ス含有溶液に非還元性糖質生成酵素を作用させることを
特徴とするマルトオリゴシルツラノース及びマルトオリ
ゴシルパラチノース含有糖質の製造方法を確立し、併せ
て、この製造方法で得られるマルトオリゴシルツラノー
ス及びマルトオリゴシルパラチノース含有糖質とこの糖
質を含有せしめた飲食物、化粧品、医薬品などの組成物
を確立して本発明を完成した。
【０００６】非還元性糖質生成酵素は、特開平７−１４
３８７６号公報で開示したように、リゾビウム・スピー
シーズ（Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｓｐ．）Ｍ−１１ ＦＥ
ＲＭＢＰ−４１３０、アルスロバクター・スピーシーズ
（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ ｓｐ．）Ｑ３６ ＦＥＲ
Ｍ ＢＰ−４３１６、ブレビバクテリウム・ヘロボルム
（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｈｅｌｏｖｏｌｕ
ｍ）ＡＴＣＣ１１８２２、フラボバクテリウム・アクア
ティレ（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｑｕａｔｉ
ｌｅ）ＩＦＯ３７７２、ミクロコッカス・ロゼウス（Ｍ
ｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ ｒｏｓｅｕｓ）ＡＴＣＣ１８
６、クルトバクテリウム・シトレウム（Ｃｕｒｔｏｂａ
ｃｔｅｒｉｕｍ ｃｉｔｒｅｕｍ）ＩＦＯ１５２３１、
マイコバクテリウム・スメグマチス（Ｍｙｃｏｂａｃｔ
ｅｒｉｕｍ ｓｍｅｇｍａｔｉｓ）ＡＴＣＣ１９４２
０、テラバクター・ツメスセンス（Ｔｅｒｒａｂａｃｔ
ｅｒｔｕｍｅｓｃｅｎｓ）ＩＦＯ１２９６０、あるい
は、特願平６−１６６０１１号公報に記載の、スルフォ
ロブス（Ｓｕｌｆｏｌｏｂｕｓ）属に属する微生物など
により生産され、マルトオリゴ糖をマルトオリゴシルト
レハロースに変換する分子内糖転移酵素である。この反
応の平衡点は圧倒的にマルトオリゴシルトレハロース側
に片寄っており、例えば、マルトペンタースを基質とし
た場合のマルトトリオシルトレハロース生成率は約９０
ｗ／ｗ％（以下、特にことわらない限り、本発明書では
ｗ／ｗ％を％と略記する。）以上にも達する。
【０００７】本発明では、上記菌株の酵素のみならず、
リゾビウム属及びアルスロバクター属、ブレビバクテリ
ウム属、フラボバクテリウム属、ミクロコッカス属、ク
ルトバクテリウム属、マイコバクテリウム属、テラバク
ター属及びスルフォロブス属に属し、非還元性糖質生成
酵素産生能を有する他の菌株やこれらの変異株、さら
に、これらの菌株の非還元性糖質生成酵素遺伝子を組み
込んだ微生物が生産する酵素も適宜使用することができ
る。また、スルフォロブス属に属する微生物としては、
例えば、スルフォロブス・アシドカリダリウス（Ｓｕｌ
ｆｏｌｏｂｕｓａｃｉｄｏｃａｌｄａｒｉｕｓ）ＡＴＣ
Ｃ３３９０９及びＡＴＣＣ４９４２６、スルフォロブス
・ソルファタリカス（Ｓｕｌｆｏｌｏｂｕｓ ｓｏｌｆ
ａｔａｒｉｃｕｓ）ＡＴＣＣ３５０９１及びＡＴＣＣ３
５０９２などが有利に利用できる。
【０００８】非還元性糖質生成酵素を産生する微生物の
培養に用いる培地は、微生物が生育でき、本酵素を産生
するものであればよく、合成培地及び天然培地のいずれ
でもよい。炭素源としては、微生物が資化できる物であ
ればよく、例えば、グルコース、フルクトース、糖蜜、
トレハロース、ラクトース、スクロース、マンニトー
ル、ソルビトール、澱粉部分分解物などの糖質、また、
クエン酸、コハク酸などの有機酸又はそれらの塩なども
使用することができる。培地におけるこれらの炭素源の
濃度は炭素源の種類により適宜選択される。例えば、グ
ルコースを用いる場合には、その濃度は、４０ｗ／ｖ％
以下が望ましく、とりわけ、微生物の生育及び増殖から
は１０ｗ／ｖ％以下が好ましい。窒素源としては、例え
ば、アンモニウム塩、硝酸塩などの無機窒素化合物や、
例えば、尿素、コーン・スティープ・リカー、カゼイ
ン、ペプトン、酵母エキス、肉エキスなどの有機窒素含
有物などが用いられる。また、無機成分としては、例え
ば、カルシウム塩、マグネシウム塩、カリウム塩、ナト
リウム塩、リン酸塩、マンガン塩、亜鉛塩、鉄塩、銅
塩、モリブデン塩、コバルト塩などが適宜用いられる。
【０００９】培養条件は、微生物が生育し、本発明に用
いる非還元性糖質生成酵素を産生する条件であればよ
く、通常、温度約４乃至８０℃、好ましくは２０乃至７
５℃、ｐＨ５乃至９、好ましくはｐＨ６乃至８．５から
選ばれる条件で、好気的に行われる。培養時間は微生物
が増殖し得る時間であればよく、好ましくは約１０乃至
１００時間である。また、培養液の溶存酸素濃度には特
に制限はないが、通常は、約０．５乃至２０ｐｐｍが好
ましい。そのために、通気量を調節したり、攪拌した
り、酸素を使用したり、また、培養槽内の圧力を高める
などの手段が採用される。また、培養方式は、回分培養
または連続培養のいずれでもよい。
【００１０】このようにして、微生物を培養した後、得
られる培養物から酵素を回収する。非還元性糖質生成酵
素の活性は、培養物の菌体外培養液及び菌体のいずれに
も認められ、菌体外培養液及び菌体を粗酵素として回収
すればよく、また、培養物全体を粗酵素として用いるこ
ともできる。菌体外培養液と菌体との分離には通常の固
液分離手段が採用される。例えば、培養物そのものをそ
のまま遠心分離する手段、培養物に濾過助剤を加えた
り、あるいは、プレコートすることにより濾過分離する
手段、平膜、中空糸膜などを用いる膜濾過分離する手段
などを適用し得る。菌体外培養液をそのまま粗酵素液と
して用いることができるが、好ましくは通常の手段で濃
縮して用いる。例えば、硫安塩析法、アセトン及びアル
コール沈殿法、平膜、中空糸膜などを用いる膜濃縮法な
どが採用される。
【００１１】菌体内酵素は、通常の手段を用いて菌体か
ら抽出し、粗酵素液として用いることができる。例え
ば、超音波による破砕法、ガラスビーズ及びアルミナに
よる機械的破砕法、フレンチプレスによる破砕法などで
菌体から酵素を抽出し、遠心分離または膜濾過などで清
澄な粗酵素液を得ることができる。
【００１２】更に、菌体外培養液およびその濃縮物また
は菌体抽出液は、通常の手段で固定化することもでき
る。例えば、イオン交換体への結合法、樹脂および膜な
どとの共有結合・吸着法、高分子物質を用いた包括法な
どが採用される。また、培養物から分離した菌体をその
まま粗酵素として用いることができるが、菌体を固定化
し固定化酵素として用いてもよい。例えば、菌体をアル
ギン酸ナトリウムと混合して、塩化カルシウム溶液中に
滴下して粒状にゲル化させ得られる粒状化菌体を、さら
にポリエチレンイミン、グルタルアルデヒドで処理した
固定化酵素として用いてもよい。
【００１３】粗酵素はそのまま用いてもよいが、通常の
手段によって精製することもできる。一例として、菌体
破砕抽出液を硫安塩析して濃縮した粗酵素標品を透析
後、セパビーズＦＰ−ＤＡ１３ゲルを用いた陰イオン交
換カラムクロマトグラフィー、続いて、ＤＥＡＥセファ
デックスＡ−５０を用いた陰イオン交換カラムクロマト
グラフィー、ウルトラゲルＡｃＡ４４を用いたゲル濾過
クロマトグラフィー、ブチルトヨパール６５０Ｍゲルを
用いた疎水クロマトグラフィーなどを組合わせて電気泳
動的に単一な酵素を得ることができる。
【００１４】本発明の非還元性糖質生成酵素の活性測定
方法は、基質としてマルトペンタオース１．２５ｗ／ｖ
％（５０ｍＭリン酸緩衝液、ｐＨ７．０）４ｍｌに酵素
液を１ｍｌ加え４０℃で６０分間反応させた後、１００
℃で１０分間加熱して反応を停止させ、その反応液を正
確に脱イオン水で１０倍に希釈し、その希釈液の還元力
をソモギー・ネルソン法にて測定する。対照として、あ
らかじめ１００℃で１０分間加熱することにより失活さ
せた酵素液を用いて同様に測定する。上記の測定方法を
用いて、１分間に１μｍｏｌｅのマルトペンタオースに
相当する還元力を減少させる酵素量を１単位と定義し
た。なお、スルフォロブス属由来の酵素の場合、反応温
度を６０℃、ｐＨを５．５として反応を行い、酵素失活
を１００℃、３０分で行った。
【００１５】本発明の基質濃度は特に限定されない。基
質溶液としてマルトオリゴシルスクロース濃度を、例え
ば、０．１％で用いた場合でも、５０％で用いた場合で
も、本酵素の反応は進行し、マルトオリゴシルツラノー
ス及びマルトオリゴシルパラチノースを生成する。ま
た、基質溶液中に完全に溶けきれない基質を含有する高
濃度溶液であってもよい。反応温度は酵素が失活しない
温度、すなわち８０℃付近までで行えばよいが、好まし
くは約０乃至７０℃の範囲、とりわけアルスロバクター
属に属する微生物由来の酵素の場合には、約３０乃至５
０℃の範囲において、マルトオリゴシルスクロースから
のマルトオリゴシルツラノース及びマルトオリゴシルパ
ラチノース生成率が高く好都合である。反応ｐＨは、通
常、５．５乃至９．０の範囲に調整すればよいが、好ま
しくはｐＨ約６．０乃至８．５の範囲に調整する。反応
時間は、酵素反応の進行具合により適宜選択すればよ
く、通常、基質固形物グラム当たり約１０乃至１，００
０単位の酵素使用量で約０．１乃至２００時間程度であ
る。
【００１６】このようにして得られる反応液は、糖組成
でマルトオリゴシルツラノース及びマルトオリゴシルパ
ラチノースが、通常１０％以上、好ましくは１５％以
上、最大で約６０％以上にも達することが判明した。
【００１７】反応液は、常法により、瀘過、遠心分離な
どして不溶物を除去した後、活性炭で脱色、Ｈ型、ＯＨ
型イオン交換樹脂で脱塩し、濃縮し、シラップ状製品と
することも、更に、乾燥して粉末状製品にすることも随
意である。
【００１８】必要ならば、更に、高度な精製をすること
も随意である。例えば、イオン交換カラムクロマトグラ
フィーによる分画、活性炭カラムクロマトグラフィーに
よる分画、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによる
分画などの方法で精製することにより、高含有のマルト
オリゴシルツラノース及びマルトオリゴシルパラチノー
ス製品を得ることも容易である。また、カラムクロマト
グラフィーなどにより分離し得られるマルトオリゴシル
スクロースを、再び、非還元性糖質生成酵素の基質に用
いてマルトオリゴシルツラノース及びマルトオリゴシル
パラチノース生成反応を行うことも有利に実施できる。
【００１９】このようにして得られた本発明のマルトオ
リゴシルツラノース及びマルトオリゴシルパラチノース
含有糖質を、必要により、グルコアミラーゼ、β−アミ
ラーゼなどで加水分解したり、澱粉部分分解物などを加
え、シクロマルトデキストリン・グルカノトランスフェ
ラーゼやグルコシルトランスフェラーゼなどで糖転移し
たりして、甘味性、粘性などを調整することも、また、
酵母により発酵性糖質を除去することなど更なる加工処
理を施すことも随意である。これを、前述の精製方法、
例えば、イオン交換カラムクロマトグラフィーなどによ
り、グルコース及びフルクトースを除去し、マルトオリ
ゴシルツラノース及びマルトオリゴシルパラチノース高
含有画分を採取し、これを精製、濃縮して、シラップ状
製品を得ることも、更に乾燥して粉末製品を得ることも
有利に実施できる。
【００２０】イオン交換カラムクロマトグラフィーとし
ては、特開昭５８−２３７９９号公報、特開昭５８−７
２５９８号公報などに開示されている塩型強酸性カチオ
ン交換樹脂を用いるカラムクロマトグラフィーにより、
夾雑糖類を除去してマルトオリゴシルツラノース及びマ
ルトオリゴシルパラチノース高含有画分を採取する方法
が有利に実施できる。この際、固定床方式、移動床方
式、擬似移動床方式のいずれの方式を採用することも随
意である。
【００２１】このようにして製造される本発明のマルト
オリゴシルツラノース及びマルトオリゴシルパラチノー
ス含有糖質は、非晶質で水に対する溶解性が高く、良質
で上品な甘味を有している。更に、マルトオリゴシルツ
ラノース及びマルトオリゴシルパラチノースは、いずれ
も小腸の加水分解酵素によりグルコースとフルクトース
とに分解されることから、経口摂取した場合、容易に消
化吸収され、カロリー源として利用される。また、虫歯
誘発菌などによって、醗酵されにくく、虫歯誘発菌によ
るスクロースからの不溶性グルカン合成を阻害すること
から、非う蝕性甘味料としても利用できる。
【００２２】従って、本発明のマルトオリゴシルツラノ
ース及びマルトオリゴシルパラチノース含有糖質は、甘
味料、呈味改良剤、品質改良剤、安定剤などとして飲食
物、嗜好物、飼料、化粧品、医薬品などの各種組成物に
有利に利用できる。
【００２３】本発明のマルトオリゴシルツラノース及び
マルトオリゴシルパラチノース含有糖質は、そのまま甘
味付けのための調味料として使用することができる。必
要ならば、例えば、粉飴、ブドウ糖、フルクトース、マ
ルトース、スクロース、異性化糖、蜂蜜、メイプルシュ
ガー、ソルビトール、マルチトール、ラクチトール、ジ
ヒドロカルコン、ステビオシド、α−グリコシルステビ
オシド、レバウディオシド、グリチルリチン、Ｌ−アス
パルチル−Ｌ−フェニルアラニンメチルエステル、サッ
カリン、グリシン、アラニンなどのような他の甘味料の
一種または二種以上の適量と混合して使用してもよく、
また必要ならば、デキストリン、澱粉、乳糖などのよう
な増量剤と混合して使用することもできる。
【００２４】また、本発明のマルトオリゴシルツラノー
ス及びマルトオリゴシルパラチノース含有糖質の甘味
は、酸味、塩から味、渋味、旨味、苦味などの他の呈味
を有する各種物質とよく調和し、耐酸性、耐熱性も大き
いので、一般の飲食物の甘味付け、呈味改良に、また品
質改良などに有利に利用できる。
【００２５】例えば、醤油、粉末醤油、味噌、粉末味
噌、もろみ、ひしお、ふりかけ、マヨネーズ、ドレッシ
ング、食酢、三杯酢、粉末すし酢、中華の素、天つゆ、
麺つゆ、ソース、ケチャップ、たくあん漬の素、白菜漬
の素、焼肉のタレ、カレールウ、シチューの素、スープ
の素、ダシの素、複合調味料、みりん、新みりん、テー
ブルシュガー、コーヒーシュガーなど各種調味料として
有利に使用できる。
【００２６】また、例えば、せんべい、あられ、おこ
し、餅類、まんじゅう、ういろう、あん類、羊羮、水羊
羮、錦玉、ゼリー、カステラ、飴玉などの各種和菓子、
パン、ビスケット、クラッカー、クッキー、パイ、プリ
ン、バタークリーム、カスタードクリーム、シュークリ
ーム、ワッフル、スポンジケーキ、ドーナツ、チョコレ
ート、チューインガム、キャラメル、キャンデーなどの
洋菓子、アイスクリーム、シャーベットなどの氷菓、果
実のシロップ漬、氷蜜などのシロップ類、フラワーペー
スト、ピーナッツペースト、フルーツペースト、スプレ
ッドなどのペースト類、ジャム、マーマレード、シロッ
プ漬、糖果などの果実、野菜の加工食品類、福神漬、べ
ったら漬、千枚漬、らっきょう漬などの漬物類、ハム、
ソーセージなどの畜肉製品類、魚肉ハム、魚肉ソーセー
ジ、かまぼこ、ちくわ、天ぷらなどの魚肉製品、ウニ、
イカの塩辛、酢こんぶ、さきするめ、ふぐみりん干しな
どの各種珍味類、のり、山菜、するめ、小魚、貝などで
製造されるつくだ煮類、煮豆、ポテトサラダ、こんぶ巻
などの惣菜食品、乳製品、魚肉、畜肉、果実、野菜のビ
ン詰、缶詰類、清酒、合成酒、リキュール、洋酒などの
酒類、紅茶、コーヒー、ココア、ジュース、炭酸飲料、
乳酸飲料、乳酸菌飲料などの清涼飲料水、プリンミック
ス、ホットケーキミックス、即席しるこ、即席スープな
どの即席食品、更には、離乳食、治療食、ドリンク剤な
どの各種飲食物への甘味付に、呈味改良に、また、品質
改良などに有利に利用できる。
【００２７】また、家畜、家禽、その他蜜蜂、蚕、魚な
どの飼育動物のために飼料、餌料などの嗜好性を向上さ
せる目的で使用することもできる。その他、タバコ、練
歯磨、口紅、リップクリーム、内服液、錠剤、トロー
チ、肝油ドロップ、口中清涼剤、口中香剤、うがい剤な
ど各種固形物、ペースト状、液状などで嗜好物、化粧
品、医薬品などの各種組成物への甘味剤として、または
呈味改良剤、矯味剤として、更には、品質改良剤として
有利に利用できる。
【００２８】以上述べたような各種組成物にマルトオリ
ゴシルツラノース及びマルトオリゴシルパラチノース含
有糖質を含有せしめる方法は、その製品が完成するまで
の工程で含有せしめればよく、例えば、混和、溶解、融
解、浸漬、浸透、散布、塗布、被覆、噴霧、注入、固化
など公知の方法が適宜選ばれる。その量は、通常、マル
トオリゴシルツラノース及びマルトオリゴシルパラチノ
ースとして０．１％以上、望ましくは、１％以上含有せ
しめるのが好適である。次に実験により本発明をさらに
具体的に説明する。
【００２９】
【実験１ マルトテトラオシルスクロースの調製】マル
トテトラオシルスクロースの調製は、特公昭５７−５８
９０５号公報の実験の項記載の方法に準じて行った。す
なわち、マルトペンタオース（株式会社林原生物化学研
究所販売）２８重量部と市販のスクロース１２重量部を
水６０重量部に加熱溶解し、この溶液を４５℃、ｐＨ
６．５に調整した後、バチラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属
由来のレバンスクラーゼ（ＥＣ．２．４．１．１０）を
スクロースグラム当たり１単位加えて２０時間反応さ
せ、次いで１００℃に３０分間加熱して、酵素を失活さ
せた。この反応液の糖組成を高速液体クロマトグラフィ
ー（以下、ＨＰＬＣと略称する。）で分析した。高速液
体クロマトグラフ装置はＣＣＰＭ（東ソー株式会社
製）、カラムはＡＱ−３０３ ＯＤＳ（ＹＭＣ社製）
（４．６ｍｍφ×２５ｃｍ）、溶離液は精製脱イオン水
を流量０．７５ｍｌ／分で、カラム温度は３０℃で分析
した。検出は示差屈折計（ＲＩ−８０２０、東ソー株式
会社製）を用いた。その結果、マルトテトラオシルスク
ロースが固形物当たり２１％生成していた。水酸化ナト
リウムでｐＨ１２に調整した後、１００℃に３０分間加
熱して還元糖を分解した。本溶液を活性炭で脱色し、イ
オン交換樹脂（Ｈ型およびＯＨ型）にて脱塩して精製し
た。本溶液は糖組成でマルトテトラオシルスクロース６
２％とスクロース３８％を含んでいた。これを濃度約４
０％に濃縮して、分画用樹脂（塩型強酸性カチオン交換
樹脂（オルガノ株式会社販売、商品名アンバーライトＸ
Ｔ−１０１６Ｎａ型））を用いたカラムクロマトグラフ
ィーを行ない、純度約９８％のマルトテトラオシルスク
ロース高含有画分を採取した。図１にＨＰＬＣのクロマ
トグラムを示す。この溶液をｐＨ４．５、５５℃に調整
して、グルコアミラーゼ（ナガセ生化学工業販売、商品
名グルコチーム）を固形物グラム当たり２０単位加え１
６時間反応させ、次いで１００℃に１５分間加熱して、
酵素を失活させた。本品は、ＨＰＬＣにより、グルコー
スとスクロースをモル比で４：１の割合で生成したこと
から、マルトテトラオシルスクロース（１−Ｏ−α−マ
ルトペンタオシル ２−Ｏ−β−Ｄ−フラクトフラノシ
ド）であると判断された。
【００３０】
【実験２ 酵素の産生】マルトース（株式会社林原製）
２％ｗ／ｖ％、ペプトン０．５ｗ／ｖ％、酵母エキス
０．１ｗ／ｖ％、リン酸二ナトリウム０．２ｗ／ｖ％、
硫酸マグネシウム０．０５ｗ／ｖ％、および水からなる
液体培地を、ｐＨ７．０に調整した後、５００ｍｌ容三
角フラスコに１００ｍｌずつ入れ、オートクレーブで１
２０℃で、２０分間滅菌し、冷却して、アルスロバクタ
ー・スピーシーズ Ｑ３６株（ＦＥＲＭ ＢＰ−４３１
６）を接種し、２８℃、２００ｒｐｍで２４時間回転振
とう培養したものを種培養とした。
【００３１】容量３０ｌのファーメンターに種培養の場
合と同組成の培地をそれぞれ約２０ｌ入れて、加熱滅
菌、冷却して温度２８℃とした後、種培養液１ｖ／ｖ％
を接種し、温度２８℃、ｐＨ６．５乃至８．０に保ちつ
つ、約２２時間通気攪拌培養した。
【００３２】
【実験３ 酵素の精製】実験２で得られた培養液を遠心
分離して湿重量約０．６ｋｇの菌体を回収し、これを１
０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）に懸濁した。この菌
体懸濁液約１．９ｌを、超音波破砕機 モデルＵＳ３０
０（株式会社日本精機製作所製）で処理し、菌体を破砕
した。この破砕処理液を遠心分離（１５，０００Ｇ、３
０分間）することにより、約１．８ｌの上清を得た。そ
の上清に飽和度０．２になるように硫安を加え溶解さ
せ、４℃、一夜放置した後、遠心分離機にかけ上清を回
収した。さらに、この液に飽和度０．６になるように硫
安を加え溶解させ、４℃、一夜放置した後、遠心分離機
にかけ、硫安塩析物を回収した。
【００３３】得られた硫安塩析物を１０ｍＭリン酸緩衝
液（ｐＨ７．０）に溶解させた後、同じ緩衝液に対して
２４時間透析し、遠心分離して不溶物を除いた。その透
析液を、セパビーズＦＰ−ＤＡ１３ゲル（三菱化成製）
を用いた陰イオン交換カラムクロマトグラフィー（ゲル
量３８０ｍｌ）を行った。
【００３４】非還元性糖質生成酵素はセパビーズＦＰ−
ＤＡ１３ゲルに吸着し、食塩０Ｍから０．５Ｍを含む同
緩衝液のリニアグラジエントでカラムから溶出した。溶
出した酵素活性画分を回収した後、同緩衝液に対して透
析し、次に、ＤＥＡＥセファデックスＡ−５０（スウェ
ーデン国、ファルマシア・エルケイビー社製）を用いた
陰イオン交換カラムクロマトグラフィー（ゲル量１００
ｍｌ）を行った。非還元性糖質生成酵素はＤＥＡＥセフ
ァデックスＡ−５０ゲルに吸着し、食塩０Ｍから０．５
Ｍを含む同緩衝液のリニアグラジエントによりカラムよ
り溶出させ、酵素活性画分を回収し、限外濾過モジュー
ルＰＭ−１０（アミコン製）により６ｍｌに濃縮した。
【００３５】次に、ウルトラゲルＡｃＡ４４（Ｓｅｐｒ
ａｃｏｒ製）を用いたゲル濾過クロマトグラフィー（ゲ
ル量６３０ｍｌ）を行った。非還元性糖質生成酵素は吸
着されず、食塩１Ｍを含む同緩衝液で溶出された。
【００３６】続いて、ブチルトヨパール６５０Ｍゲル
（東ソー株式会社製）を用いた疎水クロマトグラフィー
（ゲル量７．８ｍｌ）を行い、硫安１Ｍから０Ｍのリニ
アグラジエントにより溶出した酵素活性画分を回収し、
電気泳動的に単一な非還元性糖質生成酵素標品を得た。
精製酵素標品の比活性は、蛋白ｍｇ当たり２０３単位で
あった。
【００３７】
【実験４ 非還元性糖質生成酵素のマルトテトラオシル
スクロースへの作用】実験１の方法で得たマルトテトラ
オシルスクロース４０重量部を水６０重量部に溶解し、
この溶液を４０℃、ｐＨ６．５に調整した後、実験３の
方法で得た、アルスロバクター・スピーシーズ Ｑ３６
（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ ｓｐ．Ｑ３６）株由来の
非還元性糖質生成酵素をマルトテトラオシルスクロース
グラム当たり１００単位加えて２４時間反応させ、次い
で１００℃に３０分間加熱して、酵素を失活させた。こ
の反応液を、実験１の方法に準じてＨＰＬＣで分析し
た。ＨＰＬＣのクロマトグラムを図２に示す。糖組成
は、ピーク１の糖質が２７．９％、ピーク２の糖質が３
５．９％であった。各ピークの糖質を分取用逆相カラム
（ＹＭＣ−Ｐａｃｋ ＯＤＳ Ｒ−３５５−１５，５ｃ
ｍφ×５０ｃｍ，ＹＭＣ社製）で分取した。各々の糖質
を濃度２ｗ／ｖ％、ｐＨ４．５、４０℃に保ち、グルコ
アミラーゼ（生化学工業製）を固形物当たり２０単位加
え、２４時間反応を行い、限外濾過膜（モルカットII、
ミリポア製）で酵素を除去し、ＨＰＬＣ及びキーゼルゲ
ル６０（メルク社製；アルミプレート，２０×２０ｃ
ｍ）を用いた薄層クロマトグラフィー（以下、ＴＬＣと
略称する。）で構成糖を調べた。ＴＬＣは展開溶媒に１
−ブタノール：ピリジン：水＝６：４：１（容積比）を
用い、室温で１回展開した。発色は２０ｖ／ｖ％硫酸−
メタノール溶液を噴霧し、１１０℃で１０分間加熱して
おこなった。ピーク１の糖質からは、グルコースとツラ
ノースをモル比でそれぞれ３．８１：１で生成した。こ
のことから、ピーク１の糖質はマルトテトラオシルツラ
ノースであることがわかった。ピーク２の糖質からは、
グルコースとパラチノースとトレハルロースをモル比で
それぞれ４．７７：１：０．２１で生成した。非還元性
糖質生成酵素のマルトオリゴ糖に対する作用特性及びピ
ーク１の糖質の構造を考慮すると、ピーク２の糖質は大
量のマルトテトラオシルパラチノースと少量のマルトテ
トラオシルトレハルロースを含んでいるものと判断され
た。以上の結果から、マルトテトラオシルスクロースか
ら主としてマルトテトラオシルツラノース及びマルトテ
トラオシルパラチノースを生成し、併せて少量のマルト
テトラオシルトレハルロースを生成することが判明し
た。
【００３８】
【実験５ マルトテトラオシルツラノー
ス、マルトテトラオシルパラチノース及びマルトテトラ
オシルトレハルロース生成に及ぼす酵素作用量の影響】
マルトテトラオシルスクロース濃度を４０％で、温度４
０℃、ｐＨ６．５にて、実験３の方法で得た精製非還元
性糖質生成酵素をマルトテトラオシルスクロースグラム
当たり１単位、４単位、１０単位、２０単位、あるいは
１００単位加えて２４時間反応させた。限外濾過膜（モ
ルカットII、ミリポア製）で酵素を除去し、実験４と同
様、ＨＰＬＣにて糖組成を分析した。各酵素作用量で生
成した目的物質であるピーク１の糖質及びピーク２の糖
質の含量を表１に示す。
【００３９】
【表１】
【００４０】表１の結果から明らかなように、４単位以
上の酵素作用量で目的のピーク１の糖質（マルトテトラ
オシルツラノース）及びピーク２の糖質（マルトテトラ
オシルパラチノース及びマルトテトラオシルトレハルロ
ース）を併せて１５％以上生成する。
【００４１】
【実験６ 他の微生物由来の非還元性糖質
生成酵素によるマルトテトラオシルスクロースからのマ
ルトテトラオシルツラノース、マルトテトラオシルパラ
チノース及びマルトテトラオシルトレハルロースの生
成】実験２及び３の方法に準じて、アルスロバクター・
スピーシーズ（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ ｓｐ．）Ｑ
３６ ＦＥＲＭ ＢＰ−４３１６、リゾビウム・スピー
シーズ（Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｓｐ．）Ｍ−１１（ＦＥ
ＲＭ ＢＰ−４１３０）の各精製非還元性糖質生成酵
素、及び、スルフォロブス・アシドカルダリウス（Ｓｕ
ｌｆｏｌｏｂｕｓ ａｃｉｄｏｃａｌｄａｒｉｕｓ）Ａ
ＴＣＣ３３９０９由来のＤＥＡＥ−トヨパール６５０カ
ラムクロマトグラフィーによる部分精製非還元性糖質生
成酵素を調製し、表２に示すそれぞれの作用条件で、２
０％のマルトテトラオシルスクロースへ９６時間作用さ
せた。この反応液を実験４と同様にＨＰＬＣにて分析
し、ピーク１の糖質及びピーク２の糖質の量からマルト
テトラオシルツラノース生成率と、マルトテトラオシル
パラチノース及びマルトテトラオシルトレハルロースの
生成率を求めた。結果は表２にまとめた。
【００４２】
【表２】
【００４３】表２の結果から明らかなように、アルスロ
バクター・スピーシーズ Ｑ３６ＦＥＲＭ ＢＰ−４３
１６、リゾビウム・スピーシーズ Ｍ−１１（ＦＥＲＭ
ＢＰ−４１３０）及び、スルフォロブス・アシドカルダ
リウス ＡＴＣＣ３３９０９のいずれの非還元性糖質生
成酵素を用いても、目的のマルトテトラオシルツラノー
ス、マルトテトラオシルパラチノース及びマルトテトラ
オシルトレハルロースを容易に高収率で生成することが
判明した。
【００４４】
【実験７ マルトオリゴシルスクロースへの非還元性糖
質生成酵素の作用】糖受容体として、マルトトリオー
ス、マルトテトラオース又はマルトヘキサオース（以上
いずれも 株式会社林原生物化学研究所製）及びスクロ
ースを用い、実験１と同様にレバンスクラーゼを作用さ
せて、それぞれ、マルトシルスクロース、マルトトリオ
シルスクロース及びマルトペンタオシルスクロースを調
製した。また、実験１で調製したマルトテトラオシルス
クロース及び、市販のスクロース及びグルコシルスクロ
ース（エルロース、株式会社林原生物化学研究所製）を
含め、スクロースにグルコースが０個から６個結合した
一連の糖質を準備した。これら一連の糖質に、実験３の
方法で得たアルスロバクター・スピーシーズ Ｑ３６株
由来の非還元性糖質生成酵素を、実験４と同様に作用さ
せた。この反応液を実験４と同様にＨＰＬＣにて分析
し、各基質の重合度に相当するマルトオリゴシルツラノ
ースの生成率とマルトオリゴシルパラチノース及びマル
トオリゴシルトレハルロースの生成率を求めた。結果は
表３にまとめた。
【００４５】
【表３】
【００４６】表３の結果から明らかなように、非還元性
糖質生成酵素は、基質として、マルトトリオシルスクロ
ース以上のマルトオリゴシルスクロースに良く作用し、
マルトオリゴシルスクロースのスクロース部分を分子内
変換してマルトオリゴシルツラノース、マルトオリゴシ
ルパラチノース及びマルトオリゴシルトレハルロースを
容易に高収率で生成することが判明した。
【００４７】
【実験８ マルトオリゴシルスクロースか
らのマルトオリゴシルツラノース 【実験８ マルトオリゴシルスクロースからのマルトオ
リゴシルツラノース、マルトオリゴシルパラチノース及
びマルトオリゴシルトレハルロースの調製】α−サイク
ロデキストリン（株式会社林原生物化学研究所販売）２
５重量部と市販のスクロース２５重量部を水５０重量部
に加熱溶解し、この溶液を６０℃、ｐＨ６．０に調整し
た後、バチルス・ステアロサーモフィラス由来のシクロ
マルトデキストリン・グルカノトランスフェラーゼ（株
式会社林原生物化学研究所販売）をα−サイクロデキス
トリングラム当たり５単位加えて２０時間反応させ、次
いで１００℃に３０分間加熱して、酵素を失活させた。
この溶液には一連のマルトオリゴシルスクロースを含ん
でいる。この溶液を４０℃、ｐＨ６．５に調整した後、
アルスロバクター・スピーシーズ Ｑ３６株由来の非還
元性糖質生成酵素を固形物当たり２００単位加えて２４
時間反応させ、次いで１００℃に３０分間加熱して、酵
素を失活させた。この反応液は比較的多量のマルトオリ
ゴシルツラノース及びマルトオリゴシルパラチノースを
含有し、他に少量のマルトオリゴシルトレハルロースを
含んでいた。
【００４８】以上の結果から明かなように、非還元性糖
質生成酵素は、マルトオリゴ糖をマルトオリゴシルトレ
ハロースに変換するのみならず、マルトオリゴシルスク
ロースにも作用して分子内変換し、マルトオリゴシルツ
ラノース及びマルトオリゴシルパラチノース含有糖質に
変換する。
【００４９】
【実験９ 急性毒性テスト】７週齢のｄｄ系マウスを使
用して、後述する実施例Ａ−４の方法で調製したマルト
テトラオシルツラノース及びマルトテトラオシルパラチ
ノース含有糖質を経口投与して急性毒性テストをしたと
ころ、体重１ｋｇ当たり１５ｇまで死亡例は見られず、
これ以上の投与は困難であった。従って、本糖質の毒性
は極めて低い。また、後述する実施例Ａ−２の方法で調
製したマルトオリゴシルツラノース及びマルトオリゴシ
ルパラチノース含有糖質を同様に経口投与して急性毒性
テストしたところ、同様に体重１ｋｇ当たり１５ｇまで
死亡例は見られず、本糖質の毒性は極めて低いことが判
明した。
【００５０】以下、酵素の生産を参考例で、本発明のマ
ルトオリゴシルツラノース及びマルトオリゴシルパラチ
ノース含有糖質の製造方法を実施例Ａで、マルトオリゴ
シルツラノース及びマルトオリゴシルパラチノース含有
糖質の用途を実施例Ｂで示す。
【００５１】
【参考例１】アルスロバクター・スピーシーズ Ｑ３６
（ＦＥＲＭ ＢＰ−４３１６）を、グルコース４．０ｗ
／ｖ％、ポリペプトン０．５ｗ／ｖ％、酵母エキス０．
１ｗ／ｖ％、リン酸二カリウム０．１ｗ／ｖ％、リン酸
一ナトリウム０．０６ｗ／ｖ％、硫酸マグネシウム・７
水塩０．０５ｗ／ｖ％、及び水からなる液体培地を用
い、温度を２７℃とした以外は実験２の方法に準じて、
ファーメンターで約６０時間、通気攪拌培養した。この
培養液約１８ｌを、超高圧菌体破砕装置ミニラボ（大日
本製薬株式会社製）で処理し、菌体を破砕した。この菌
体破砕懸濁液を遠心分離機にかけ、その上清を回収し
た。次いで実験３の方法に準じて精製を行い、非還元性
糖質生成酵素をｍｌ当たり約３０単位有する部分精製酵
素液約３００ｍｌを回収した。
【００５２】
【参考例２】リゾビウム・スピーシーズ Ｍ−１１（Ｆ
ＥＲＭ ＢＰ−４１３０）を、グルコース２．０ｗ／ｖ
％、ペプトン０．５ｗ／ｖ％、酵母エキス０．１ｗ／ｖ
％、リン酸二ナトリウム０．１ｗ／ｖ％、リン酸一カリ
ウム０．１ｗ／ｖ％及び水からなる液体培地を用い、温
度を３０℃とした以外は実験２の方法に準じて、ファー
メンターで約２４時間、通気攪拌培養した。この培養液
約１８ｌを遠心分離にかけ、湿重量約０．４ｋｇの菌体
を得た。これを４ｌの１０ｍＭリン酸緩衝液に懸濁し、
超音波破砕機で処理し、菌体を破砕した。この菌体破砕
懸濁液を遠心分離機にかけ、その上清を回収した。次い
で実験３の方法に準じ、非還元性糖質生成酵素をｍｌ当
たり約１５単位有する部分精製酵素液約１００ｍｌを回
収した。
【００５３】
【参考例３】ペプトン０．１ｗ／ｖ％、酵母エキス０．
１ｗ／ｖ％、硫酸アンモニウム０．２ｗ／ｖ％、リン酸
一カリウム０．０５ｗ／ｖ％、硫酸マグネシウム七水塩
０．０２ｗ／ｖ％、塩化カリウム０．０２ｗ／ｖ％及び
水からなる液体培地を、５００ｍｌ容三角フラスコに１
００ｍｌずつ入れ、オートクレーブで１２０℃で、２０
分間滅菌し、冷却した後、硫酸にてｐＨ３．０に調整し
た。この液体に、スルフォロブス・アシドカリダリウス
（Ｓｕｌｆｏｌｏｂｕｓ ａｃｉｄｏｃａｌｄａｒｉｕ
ｓ）ＡＴＣＣ３３９０９を接種し、７５℃、１３０ｒｐ
ｍで２４時間回転振とう培養したものを種培養とした。
【００５４】容量３０ｌのファーメンターに種培養の場
合と同組成の培地をそれぞれ約２０ｌ入れて、加熱滅
菌、冷却してｐＨ３．０、温度７５℃とした後、種培養
液１ｖ／ｖ％を接種し、温度７５℃、約４８時間通気攪
拌培養したものを第２次種培養液とした。容量３００ｌ
のファーメンターに第２次種培養の場合と同組成の培地
をそれぞれ約２５０ｌ入れて、加熱滅菌、冷却してｐＨ
３．０、温度７５℃とした後、第２次種培養液１ｖ／ｖ
％を接種し、温度７５℃、約４２時間通気攪拌培養し
た。この培養液約１７０ｌをＳＦ膜及び遠心分離するこ
とにより、菌体を湿重量として２５８ｇ回収した。この
菌体に１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）を３００ｍ
ｌ加え、懸濁した後、超音波破砕装置で処理し、菌体を
破砕した。この菌体破砕懸濁液を遠心分離機にかけ、そ
の上清を回収した。更にその液を硫安塩析、ＤＥＡＥト
ヨパールを用いたイオン交換クロマトグラフィー及びブ
チルトヨパール ６５０を用いた疎水カラムクロマトグ
ラフィーを行い、非還元性糖質生成酵素をｍｌ当たり約
１０単位有する部分精製酵素液約５０ｍｌを回収した。
【００５５】
【実施例Ａ−１】スクロース２．５重量部及びマルトオ
リゴ糖（株式会社林原商事販売、登録商標「ペントラッ
プ」）３．５重量部を水４重量部に加熱溶解しこの溶液
をｐＨ６．５、４５℃に調整して、バチラス属由来のレ
バンスクラーゼ（ＥＣ．２．４．１．１０）をスクロー
スグラム当たり１単位加えて２０時間反応させ、次いで
加熱して酵素を失活させた。本溶液に、参考例１の方法
で調製したアルスロバクター属由来の非還元性糖質生成
酵素を、固形物グラム当たり５０単位加えて、４０℃で
４０時間反応させ、次いで加熱して酵素を失活させた。
本反応液を、常法に従って、活性炭にて脱色、イオン交
換樹脂（Ｈ型およびＯＨ型）にて脱塩して精製し、濃縮
して濃度約７５％のマルトオリゴシルツラノース及びマ
ルトオリゴシルパラチノース含有糖質シラップを固形物
収率約９３％で得た。本品は、非晶質でマルトオリゴシ
ルツラノース及びマルトオリゴシルパラチノースを固形
物当たり約２０％含有しており、上品な甘味、適度の粘
度、保湿性を有し、飲食物、化粧品、医薬品など各種組
成物に有利に利用できる。更に、本品を水素添加して、
マルトオリゴシルツラノース及びマルトオリゴシルパラ
チノースを含む還元性糖質を、対応する非還元性の糖ア
ルコールに換えて利用することも有利に実施できる。
【００５６】
【実施例Ａ−２】スクロース２５重量部及びα−シクロ
マルトデキストリン（株式会社林原生物化学研究所販
売）２５重量部に水５０重量部加え加熱溶解した。この
溶液を６０℃、ｐＨ５．５に調整して、バチルス・ステ
アロサーモフィラス由来のシクロマルトデキストリン・
グルカノトランスフェラーゼ（株式会社林原生物化学研
究所販売）をα−シクロマルトデキストリングラム当た
り５単位加えて２０時間作用させ、次いで加熱して酵素
を失活させた。本溶液に参考例１の方法で調製したアル
スロバクター属由来の非還元性糖質生成酵素を、固形物
グラム当たり１００単位加えて、４０℃で２０時間反応
させ、次いで加熱して酵素を失活させた。
【００５７】本反応液を、常法に従って、活性炭にて脱
色、イオン交換樹脂（Ｈ型およびＯＨ型）にて脱塩・精
製し、濃縮し、真空乾燥し、粉砕して、マルトオリゴシ
ルツラノース及びマルトオリゴシルパラチノース含有糖
質粉末を固形物当たり、約９０％の収率で得た。本品
は、非晶質でマルトオリゴシルツラノース及びマルトオ
リゴシルパラチノースを固形物当たり約２０％含有して
いた。本品は、実施例１の場合と同様に、上品な甘味、
適度の粘度、保湿性を有し、各種組成物に有利に利用で
きる。
【００５８】
【実施例Ａ−３】砂糖結合水飴（株式会社林原商事販
売、登録商標「カップリングシュガー」、水分約２５
％）５重量部に水５重量部を加え、４５℃、ｐＨ６．５
に調整して、参考例２の方法で調製したリゾビウム属由
来の非還元性糖質生成酵素を、固形物グラム当たり５０
単位加えて、３０時間反応させ、次いで加熱して酵素を
失活させた。本反応液を、常法に従って、活性炭にて脱
色、イオン交換樹脂（Ｈ型およびＯＨ型）にて脱塩して
精製し、濃縮して濃度約７５％のマルトオリゴシルツラ
ノース及びマルトオリゴシルパラチノース含有糖質シラ
ップを固形物収率約９３％で得た。本品は、非晶質でマ
ルトオリゴシルツラノース及びマルトオリゴシルパラチ
ノースを固形物当たり約１５％含有しており、上品な甘
味、適度の粘度、保湿性を有し、飲食物、化粧品、医薬
品など各種組成物に有利に利用できる。
【００５９】
【実施例Ａ−４】スクロース２．５重量部及びマルトペ
ンタオース（株式会社林原生物化学研究所製）２．５重
量部を水５重量部に加熱溶解しこの溶液をｐＨ６．５、
４５℃に調整して、バチラス属由来のレバンスクラーゼ
をスクロースグラム当たり１単位加えて２０時間反応さ
せ、次いで加熱して酵素を失活させた。本反応液を、常
法に従って、活性炭にて脱色、イオン交換樹脂（Ｈ型お
よびＯＨ型）にて脱塩して精製し、次いで、分取用ＯＤ
Ｓカラムによる分取を行い、高純度のマルトテトラオシ
ルスクロースを得た。本溶液に、参考例３の方法により
調製したスルフォロブス属由来の耐熱性非還元性糖質生
成酵素を、固形物グラム当たり５０単位加えて、６５℃
で２０時間反応させ、次いで加熱して酵素を失活させ
た。本反応液を、常法に従って、活性炭にて脱色、イオ
ン交換樹脂（Ｈ型およびＯＨ型）にて脱塩して精製し、
濃縮して、噴霧乾燥して、マルトテトラオシルツラノー
ス及びマルトテトラオシルパラチノース含有粉末を固形
物当たり約８５％の収率で得た。本品は、非晶質でマル
トテトラオシルツラノース及びマルトテトラオシルパラ
チノースを固形物当たり約５５％と、マルトテトラオシ
ルスクロースを固形物当たり約１８％含有しており、上
品な甘味を有し、飲食物、化粧品、医薬品など各種組成
物に有利に利用できる。
【００６０】
【実施例 Ｂ−１】甘味料 実施例Ａ−４の方法で得たマルトテトラオシルツラノー
ス及びマルトテトラオシルパラチノース含有糖質粉末１
重量部に、α−グリコシルステビオシド（東洋精糖株式
会社販売、商品名αＧスイート）０．０５重量部を均一
に混合し、顆粒成形機にかけて、顆粒状甘味料を得た。
本品は、甘味の質が優れ、スクロースの約２倍の甘味度
を有し、甘味度当りカロリーは、スクロースの約１／２
に低下している。本甘味料は、低カロリー甘味料とし
て、カロリー摂取を制限している肥満者、糖尿病者など
のための低カロリー飲食物などに対する甘味付に好適で
ある。また、本甘味料は、虫歯誘発菌による酸の生成が
少なく、不溶性グルカンの生成も少ないことより、虫歯
を抑制する飲食物などに対する甘味付に好適である。
【００６１】
【実施例 Ｂ−２】ハードキャンデー 濃度５５％マルトオリゴシルスクロース溶液１００重量
部に、実施例Ａ−１の方法で得たマルトオリゴシルツラ
ノース及びマルトオリゴシルパラチノース含有糖質シラ
ップ３０重量部を加熱混合し、次いで減圧下で水分２％
未満になるまで加熱濃縮し、これにクエン酸１重量部お
よび適量のレモン香料と着色料とを混和し、常法に従っ
て成形し、製品を得た。本品は、歯切れ、呈味良好で、
マルトオリゴシルスクロースの晶出も起こらない高品質
のハードキャンデーである。
【００６２】
【実施例 Ｂ−３】いちごジャム 生いちご１５０重量部、マルトオリゴシルスクロース６
０重量部、マルトース２０重量部、実施例Ａ−１の方法
で得たマルトオリゴシルツラノース及びマルトオリゴシ
ルパラチノース含有糖質シラップ４０重量部、ペクチン
５重量部およびクエン酸１重量部をなべで煮詰め、ビン
詰めして製品を得た。本品は、風味、色調とも良好なジ
ャムである。
【００６３】
【実施例 Ｂ−４】乳酸飲料 脱脂乳１０重量部を８０℃で２０分間加熱殺菌した後、
４０℃に冷却し、これにスターター０．３重量部を加え
て約３７℃で１０時間醗酵させた。次いで、これをホモ
ジナイズした後、実施例Ａ−２の方法で得たマルトオリ
ゴシルツラノース及びマルトオリゴシルパラチノース含
有糖質粉末４重量部、マルトオリゴシルスクロース１重
量部および異性化糖シラップ２重量部を加えて７０℃に
保って殺菌した。これを冷却し、適量の香料を加え、ビ
ン詰めして製品を得た。本品は、風味、甘味が酸味とよ
く調和した高品質の乳酸飲料である。
【００６４】
【実施例 Ｂ−５】加糖練乳 原乳１００重量部に、実施例Ａ−３の方法で得たマルト
オリゴシルツラノース及びマルトオリゴシルパラチノー
ス含有糖質シラップ３重量部およびマルトオリゴシルス
クロース１重量部を溶解し、プレートヒーターで加熱殺
菌し、次いで濃度約７０％に濃縮し、無菌状態で缶詰め
して製品を得た。本品は、温和な甘味で、風味もよく、
乳幼児食品、フルーツ、コーヒー、ココア、紅茶などの
調味用に有利に利用できる。
【００６５】
【実施例 Ｂ−６】チューインガム ガムベース３重量部を柔らかくなる程度に加熱溶融し、
これにマルトオリゴシルスクロース６重量部および実施
例Ａ−４の方法で得たマルトテトラオシルツラノース及
びマルトテトラオシルパラチノース含有糖質粉末１重量
部とを加え、更に適量の香料と着色料とを混合し、常法
に従って、ロールにより練り合わせ、成形、包装して製
品を得た。本品は、テクスチャー、風味とも良好なチュ
ーインガムである。
【００６６】
【実施例 Ｂ−７】カスタードクリーム コーンスターチ１００重量部、実施例Ａ−３の方法で得
たマルトオリゴシルツラノース及びマルトオリゴシルパ
ラチノース含有糖質シラップ１００重量部、マルトース
８０重量部、マルトオリゴシルスクロース２０重量部お
よび食塩１重量部を充分に混合し、鶏卵２８０重量部を
加えて攪拌し、これに沸騰した牛乳１０００重量部を徐
々に加え、更に、これを火にかけて攪拌を続け、コーン
スターチが完全に糊化して全体が半透明になった時に火
を止め、これを冷却して適量のバニラ香料を加え、計
量、充填、包装して製品を得た。本品は、なめらかな光
沢を有し、温和な甘味で美味である。
【００６７】
【実施例 Ｂ−８】ういろうの素 米粉９０重量部に、コーンスターチ２０重量部、実施例
Ａ−４の方法で得たマルトテトラオシルツラノース及び
マルトテトラオシルパラチノース含有糖質粉末１２０重
量部、プルラン４重量部を均一に混合してういろうの素
を製造した。ういろうの素と適量の抹茶と水とを混練
し、これを容器に入れて６０分間蒸し上げて抹茶ういろ
うを製造した。本品は、照り、口当りも良好で、風味も
良い。また、澱粉の老化も抑制され、日持ちもよい。
【００６８】
【実施例 Ｂ−９】流動食用固体製剤 実施例Ａ−４の方法で得たマルトテトラオシルツラノー
ス及びマルトテトラオシルパラチノース含有糖質粉末５
００重量部、粉末卵黄２７０重量部、脱脂粉乳２０９重
量部、塩化ナトリウム４．４重量部、塩化カリウム１．
８５重量部、硫酸マグネシウム４重量部、チアミン０．
０１重量部、アスコルビン酸ナトリウム０．１重量部、
ビタミンＥアセテート０．６重量部およびニコチン酸ア
ミド０．０４重量部からなる配合物を調製し、この配合
物２５グラムずつ防湿性ラミネート小袋に充填し、ヒー
トシールして製品を得た。本品は、１袋分を約１５０乃
至３００ｍＬの水に溶解して流動食とし、経口的、また
は鼻腔、胃、腸などへ経管的使用方法により利用され
る。
【００６９】
【実施例 Ｂ−１０】外傷治療用膏薬 実施例Ａ−４の方法で得たマルトテトラオシルツラノー
ス及びマルトテトラオシルパラチノース含有糖質粉末５
００重量部に、ヨウ素３重量部を溶解したメタノール５
０重量部を加え混合し、更に１０％プルラン水溶液２０
０重量部を加えて混合し、適度の延び、付着性を示す外
傷冶療用膏薬を得た。本品は、治癒期間が短縮され、創
面もきれいに治る。
【００７０】
【発明の効果】上記から明らかなように、マルトオリゴ
シルスクロースを含有する水溶液に非還元性糖質生成酵
素を作用させ得られるマルトオリゴシルツラノース及び
マルトオリゴシルパラチノース含有糖質は、マルトオリ
ゴシルスクロースからのマルトオリゴシルツラノース及
びマルトオリゴシルパラチノース生成率が高く、分離、
精製も容易である。マルトオリゴシルツラノース及びマ
ルトオリゴシルパラチノースはいずれもグルコースとフ
ルクトースとからなる還元性オリゴ糖で、上品で良質な
甘味を有している。また、経口的または非経口的に使用
され、毒性、副作用の懸念もなく、よく代謝利用され
る。
【００７１】本発明のマルトオリゴシルツラノース及び
マルトオリゴシルパラチノース含有糖質は、非晶質の糖
質で、液状で、又は粉末状でその取扱いが容易である。
さらに、本糖質は、浸透圧調節性、賦型性、照り付与
性、保湿性、粘性、他糖の晶出防止性、難発酵性などの
諸性質を具備している。これらの諸性質は、甘味料、呈
味改良剤、品質改良剤、安定剤などとして各種組成物の
製造に有利に利用できる。 従って、本発明のマルトオ
リゴシルツラノース及びマルトオリゴシルパラチノース
含有糖質とその製造方法並びに用途を確立したことは、
食品、化粧品、医薬品分野などにおける工業的意義が極
めて大きい。
【図面の簡単な説明】
【図１】高純度マルトテトラオシルスクロースのＨＰＬ
Ｃのクロマトグラムを示す図である。
【図２】高純度マルトテトラオシルスクロースに非還元
性糖質生成酵素を作用させた後のＨＰＬＣのクロマトグ
ラムを示す図である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 // Ｃ１３Ｋ 13/00 Ｃ１３Ｋ 13/00

Claims (11)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 マルトオリゴシルツラノース及びマルト
    オリゴシルパラチノース含有糖質。
  2. 【請求項２】 マルトオリゴシルツラノース及びマルト
    オリゴシルパラチノースに加えてマルトオリゴシルトレ
    ハルロースを含有することを特徴とする請求項１記載の
    マルトオリゴシルツラノース及びマルトオリゴシルパラ
    チノース含有糖質。
  3. 【請求項３】 マルトオリゴシルスクロース含有溶液に
    非還元性糖質生成酵素を作用させ得られる請求項１又は
    ２記載のマルトオリゴシルツラノース及びマルトオリゴ
    シルパラチノース含有糖質。
  4. 【請求項４】 非還元性糖質生成酵素が微生物由来の酵
    素である請求項３記載のマルトオリゴシルツラノース及
    びマルトオリゴシルパラチノース含有糖質。
  5. 【請求項５】 微生物がリゾビウム属、アルスロバクタ
    ー属およびスルフォロブス属から選ばれる微生物である
    請求項４記載のマルトオリゴシルツラノース及びマルト
    オリゴシルパラチノース含有糖質。
  6. 【請求項６】 マルトオリゴシルツラノース及びマルト
    オリゴシルパラチノース含有糖質が、マルトオリゴシル
    ツラノース及びマルトオリゴシルパラチノースを固形物
    当たり１５ｗ／ｗ％以上含有している請求項１、２、
    ３、４または５記載のマルトオリゴシルツラノース及び
    マルトオリゴシルパラチノース含有糖質。
  7. 【請求項７】 マルトオリゴシルスクロース含有溶液に
    非還元性糖質生成酵素を作用させてマルトオリゴシルツ
    ラノース及びマルトオリゴシルパラチノースを生成せし
    め、これを採取することを特徴とするマルトオリゴシル
    ツラノース及びマルトオリゴシルパラチノース含有糖質
    の製造方法。
  8. 【請求項８】 マルトオリゴシルスクロース含有溶液に
    非還元性糖質生成酵素を固形物グラム当たり４単位以上
    作用させることを特徴とする請求項７記載のマルトオリ
    ゴシルツラノース及びマルトオリゴシルパラチノース含
    有糖質の製造方法。
  9. 【請求項９】 マルトオリゴシルツラノース及びマルト
    オリゴシルパラチノース含有糖質を含有せしめた組成
    物。
  10. 【請求項１０】 マルトオリゴシルツラノース及びマル
    トオリゴシルパラチノース含有糖質が、マルトオリゴシ
    ルスクロース含有溶液に非還元性糖質生成酵素を作用さ
    せ得られたものである請求項９記載の組成物。
  11. 【請求項１１】 組成物が、飲食物、化粧品または医薬
    品である請求項９又は１０記載の組成物。
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