JPH09252766A - ガス濃度調節剤及び低酸素濃度環境の調節方法 - Google Patents
ガス濃度調節剤及び低酸素濃度環境の調節方法Info
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- JPH09252766A JPH09252766A JP8070033A JP7003396A JPH09252766A JP H09252766 A JPH09252766 A JP H09252766A JP 8070033 A JP8070033 A JP 8070033A JP 7003396 A JP7003396 A JP 7003396A JP H09252766 A JPH09252766 A JP H09252766A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 本発明の目的は、従来方法の問題点を解決
し、培養細胞の低酸素障害試験等のための虚血性環境に
代表される低酸素濃度環境を簡便に作ることができる、
取扱の簡単な培養環境調節剤並びにこれを用いた低酸素
濃度環境の調節方法を提供することにある。 【解決手段】 培養細胞を密閉性容器内の低酸素・虚血
性の培養環境下で培養するに際し、密閉性容器内にアス
コルビン酸系炭酸ガス発生型酸素吸収組成物と炭酸ガス
吸収剤と水とからなるガス濃度調節剤を同封することに
より、培養雰囲気の酸素濃度を１％以下かつ炭酸ガス濃
度を３〜７％に調節する。
し、培養細胞の低酸素障害試験等のための虚血性環境に
代表される低酸素濃度環境を簡便に作ることができる、
取扱の簡単な培養環境調節剤並びにこれを用いた低酸素
濃度環境の調節方法を提供することにある。 【解決手段】 培養細胞を密閉性容器内の低酸素・虚血
性の培養環境下で培養するに際し、密閉性容器内にアス
コルビン酸系炭酸ガス発生型酸素吸収組成物と炭酸ガス
吸収剤と水とからなるガス濃度調節剤を同封することに
より、培養雰囲気の酸素濃度を１％以下かつ炭酸ガス濃
度を３〜７％に調節する。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明はガス濃度調節剤及び
低酸素濃度環境の調節方法に関する。詳しくは、酸素濃
度１％以下かつ炭酸ガス濃度３〜７％である低酸素濃度
環境、例えば、手術、心臓停止、臓器移植といった、臓
器や器官に血液の循環が足りなくなる虚血状態時におけ
る個々の臓器や器官の損傷を細胞レベルで調査するため
の基礎研究に必要な虚血性環境を、簡便に実現するため
のガス濃度調節剤並びにこれを用いた低酸素濃度環境の
調節方法に関する。
低酸素濃度環境の調節方法に関する。詳しくは、酸素濃
度１％以下かつ炭酸ガス濃度３〜７％である低酸素濃度
環境、例えば、手術、心臓停止、臓器移植といった、臓
器や器官に血液の循環が足りなくなる虚血状態時におけ
る個々の臓器や器官の損傷を細胞レベルで調査するため
の基礎研究に必要な虚血性環境を、簡便に実現するため
のガス濃度調節剤並びにこれを用いた低酸素濃度環境の
調節方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】従来、虚血性環境で培養細胞を試験する
ための低酸素濃度環境を作るには、培養容器に密閉性耐
圧容器を用い、この容器に真空ポンプと炭酸ガス濃度を
調節した窒素─炭酸ガスの混合ガスを充填したボンベと
をつなぎ、密閉容器内のガス吸引と混合ガスの供給を繰
り返して、容器内を炭酸ガスを含む窒素に置換するとい
う方法が主に行われてきた。また、培養雰囲気調整剤を
用いる方法も行われ、培養雰囲気調整剤として、嫌気性
細菌の培養に用いる嫌気培養剤、例えば、「ガスパッ
ク」（ＢＢＬ社製）、「アネロパック」（三菱ガス化学
製）等が用いられることがあった。
ための低酸素濃度環境を作るには、培養容器に密閉性耐
圧容器を用い、この容器に真空ポンプと炭酸ガス濃度を
調節した窒素─炭酸ガスの混合ガスを充填したボンベと
をつなぎ、密閉容器内のガス吸引と混合ガスの供給を繰
り返して、容器内を炭酸ガスを含む窒素に置換するとい
う方法が主に行われてきた。また、培養雰囲気調整剤を
用いる方法も行われ、培養雰囲気調整剤として、嫌気性
細菌の培養に用いる嫌気培養剤、例えば、「ガスパッ
ク」（ＢＢＬ社製）、「アネロパック」（三菱ガス化学
製）等が用いられることがあった。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、前記の
密閉性耐圧容器を用い強制的にガス置換する方法は、大
がかりな装置を必要とし、取扱いが面倒で手間がかか
り、装置の維持管理が必要となるなどの欠点があった。
特に培養細胞の状態変化を経時的にとらえるような試験
の場合には、幾つもの容器をガス置換しなければなら
ず、そのために時間がかかり、試験条件を一様に揃える
ことが困難であった。また、前記嫌気培養剤などの培養
雰囲気調整剤を用いる方法にも、次のように色々と問題
があった。例えば、「ガスパック」の場合、まず使用に
際して水の添加、触媒の準備などが必要であり、また脱
酸素速度にばらつきがあって、均一条件での培養が困難
であった。また「アネロパック」の場合は、培養環境の
炭酸ガス濃度が高くなるために、培地中に溶け込む炭酸
ガスの影響で培地のｐＨが下がり、細胞の培養に影響を
及ぼす欠点があった。本発明の目的は、上記従来の方法
の問題点を解決し、細胞培養の低酸素障害試験などのた
めの虚血性環境に代表されるような低酸素濃度環境を簡
便に作ることができる、取扱の簡単なガス濃度調節剤並
びにこれを用いた低酸素濃度環境の調節方法を提供する
ことにある。
密閉性耐圧容器を用い強制的にガス置換する方法は、大
がかりな装置を必要とし、取扱いが面倒で手間がかか
り、装置の維持管理が必要となるなどの欠点があった。
特に培養細胞の状態変化を経時的にとらえるような試験
の場合には、幾つもの容器をガス置換しなければなら
ず、そのために時間がかかり、試験条件を一様に揃える
ことが困難であった。また、前記嫌気培養剤などの培養
雰囲気調整剤を用いる方法にも、次のように色々と問題
があった。例えば、「ガスパック」の場合、まず使用に
際して水の添加、触媒の準備などが必要であり、また脱
酸素速度にばらつきがあって、均一条件での培養が困難
であった。また「アネロパック」の場合は、培養環境の
炭酸ガス濃度が高くなるために、培地中に溶け込む炭酸
ガスの影響で培地のｐＨが下がり、細胞の培養に影響を
及ぼす欠点があった。本発明の目的は、上記従来の方法
の問題点を解決し、細胞培養の低酸素障害試験などのた
めの虚血性環境に代表されるような低酸素濃度環境を簡
便に作ることができる、取扱の簡単なガス濃度調節剤並
びにこれを用いた低酸素濃度環境の調節方法を提供する
ことにある。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、従来技術
の問題点に鑑み鋭意研究を重ねた結果、酸素吸収能およ
び炭酸ガス発生能を併せもつアスコルビン酸系酸素吸収
剤と炭酸ガス吸収剤を組み合わせてなるガス濃度調節剤
を用い、密閉容器内の雰囲気を酸素濃度１％以下、炭酸
ガス濃度３〜７％に調節することにより、虚血状態のモ
デル実験系として理想的な低酸素濃度環境が容易に得ら
れることを見いだし、本発明を完成した。
の問題点に鑑み鋭意研究を重ねた結果、酸素吸収能およ
び炭酸ガス発生能を併せもつアスコルビン酸系酸素吸収
剤と炭酸ガス吸収剤を組み合わせてなるガス濃度調節剤
を用い、密閉容器内の雰囲気を酸素濃度１％以下、炭酸
ガス濃度３〜７％に調節することにより、虚血状態のモ
デル実験系として理想的な低酸素濃度環境が容易に得ら
れることを見いだし、本発明を完成した。
【０００５】すなわち、本発明は、アスコルビン酸類、
金属塩、多孔質担体、アルカリ土類金属水酸化物および
水からなる組成物であり、該組成物を密封系内に収納す
ることにより系内の酸素を吸収して酸素濃度を１時間以
内に１％以下としかつ炭酸ガス濃度を３〜７％に調節す
ることを特徴とするガス濃度調節剤を提供する。また上
記本発明のガス濃度調節剤は、密封系内の酸素濃度を３
０分以内に５％以下、１時間以内に１％以下とし、かつ
炭酸ガス濃度を、少なくとも１５分後から３時間後の
間、３〜７％の範囲に保持することを特徴とするもので
ある。本発明のガス濃度調節剤は、酸素吸収反応の主剤
としてアスコルビン酸類を含みかつ炭酸ガス吸収剤とし
てアルカリ土類金属水酸化物を含むものであり、上記本
発明のガス濃度調節剤にあっては、アスコルビン酸類
は、アスコルビン酸、エリソルビン酸またはその塩、も
しくはこれらの混合物であってもよい。また上記本発明
のガス濃度調節剤にあっては、前記金属塩は硫酸第一鉄
７水和物が好ましい。また前記多孔質担体は活性炭が好
ましい。
金属塩、多孔質担体、アルカリ土類金属水酸化物および
水からなる組成物であり、該組成物を密封系内に収納す
ることにより系内の酸素を吸収して酸素濃度を１時間以
内に１％以下としかつ炭酸ガス濃度を３〜７％に調節す
ることを特徴とするガス濃度調節剤を提供する。また上
記本発明のガス濃度調節剤は、密封系内の酸素濃度を３
０分以内に５％以下、１時間以内に１％以下とし、かつ
炭酸ガス濃度を、少なくとも１５分後から３時間後の
間、３〜７％の範囲に保持することを特徴とするもので
ある。本発明のガス濃度調節剤は、酸素吸収反応の主剤
としてアスコルビン酸類を含みかつ炭酸ガス吸収剤とし
てアルカリ土類金属水酸化物を含むものであり、上記本
発明のガス濃度調節剤にあっては、アスコルビン酸類
は、アスコルビン酸、エリソルビン酸またはその塩、も
しくはこれらの混合物であってもよい。また上記本発明
のガス濃度調節剤にあっては、前記金属塩は硫酸第一鉄
７水和物が好ましい。また前記多孔質担体は活性炭が好
ましい。
【０００６】さらに本発明は、上記本発明のガス濃度調
節剤を用い、該調節剤と試験材料とを密閉性容器内に収
納して密封することにより、密閉系内の酸素濃度を１％
以下かつ炭酸ガス濃度を３〜７％に調節することを特徴
とする低酸素濃度環境の調節方法を提供する。また本発
明の調節方法は、上記の方法において、密閉系内の酸素
濃度を３０分以内に５％以下、１時間以内に１％以下と
し、かつ炭酸ガス濃度を、少なくとも１５分後から３時
間後の間、３〜７％の範囲に保持することを特徴とする
方法である。また本発明の調節方法は、上記の方法にお
いて、試験材料が培養細胞であり低酸素濃度環境が虚血
性環境であることを特徴とする方法である。
節剤を用い、該調節剤と試験材料とを密閉性容器内に収
納して密封することにより、密閉系内の酸素濃度を１％
以下かつ炭酸ガス濃度を３〜７％に調節することを特徴
とする低酸素濃度環境の調節方法を提供する。また本発
明の調節方法は、上記の方法において、密閉系内の酸素
濃度を３０分以内に５％以下、１時間以内に１％以下と
し、かつ炭酸ガス濃度を、少なくとも１５分後から３時
間後の間、３〜７％の範囲に保持することを特徴とする
方法である。また本発明の調節方法は、上記の方法にお
いて、試験材料が培養細胞であり低酸素濃度環境が虚血
性環境であることを特徴とする方法である。
【０００７】
【発明の実施の形態】本発明のガス濃度調節剤及びこれ
を用いた低酸素濃度環境の調節方法は、培養細胞の低酸
素障害試験等、虚血性環境、つまり低酸素濃度環境下の
試験におけるガス雰囲気の調整に適用される。すなわ
ち、本発明においては、ガス濃度調節剤と試験材料の培
養細胞とを密閉性容器内に収納し密封することにより、
密閉系内の酸素濃度が１％以下かつ炭酸ガス濃度が３〜
７％に、より具体的には、密閉系内の酸素濃度が３０分
以内に５％以下、１時間以内に１％以下、かつ炭酸ガス
濃度が、少なくとも１５分後から３時間後の間、３〜７
％の範囲に保持される。また本発明においては、試験材
料は必ずしも培養細胞に限定されず、本発明の方法を適
用することによって目的を達成できるものであれば、試
験材料はどのような物であってもよい。
を用いた低酸素濃度環境の調節方法は、培養細胞の低酸
素障害試験等、虚血性環境、つまり低酸素濃度環境下の
試験におけるガス雰囲気の調整に適用される。すなわ
ち、本発明においては、ガス濃度調節剤と試験材料の培
養細胞とを密閉性容器内に収納し密封することにより、
密閉系内の酸素濃度が１％以下かつ炭酸ガス濃度が３〜
７％に、より具体的には、密閉系内の酸素濃度が３０分
以内に５％以下、１時間以内に１％以下、かつ炭酸ガス
濃度が、少なくとも１５分後から３時間後の間、３〜７
％の範囲に保持される。また本発明においては、試験材
料は必ずしも培養細胞に限定されず、本発明の方法を適
用することによって目的を達成できるものであれば、試
験材料はどのような物であってもよい。
【０００８】本発明のガス濃度調節剤には、酸素吸収反
応の主剤として酸素吸収能並びに炭酸ガス発生能を併せ
もつアスコルビン酸類が有効であり、これに組み合わせ
る炭酸ガス吸収剤としてアルカリ土類金属水酸化物が有
効であり、ガス濃度調節剤として、アスコルビン酸類、
金属塩、多孔質担体、アルカリ土類金属水酸化物および
水からなる組成物が用いられる。本発明ではガス濃度調
節剤は前記組成物を通気性包材で包装した包装体として
用いられる。
応の主剤として酸素吸収能並びに炭酸ガス発生能を併せ
もつアスコルビン酸類が有効であり、これに組み合わせ
る炭酸ガス吸収剤としてアルカリ土類金属水酸化物が有
効であり、ガス濃度調節剤として、アスコルビン酸類、
金属塩、多孔質担体、アルカリ土類金属水酸化物および
水からなる組成物が用いられる。本発明ではガス濃度調
節剤は前記組成物を通気性包材で包装した包装体として
用いられる。
【０００９】本発明に用いられるアスコルビン酸類は、
アスコルビン酸、エリソルビン酸またはその塩であり、
またこれらの混合物であってもよい。なお、アスコルビ
ン酸またはエリソルビン酸はナトリウム塩またはカリウ
ム塩として用いられ、結局、本発明では、主剤のアスコ
ルビン酸類は、アスコルビン酸またはエリソルビン酸の
ナトリウム塩またはカリウム塩の水溶液として用いられ
る。主剤のアスコルビン酸類の水溶液濃度は、塩濃度で
４０〜５５Wt％の範囲が好ましい。主剤の濃度が上記範
囲を外れて低くなると酸素吸収速度が遅くなり、また濃
くなると調節剤の調製が難しくなるので、いずれにして
も望ましくない。
アスコルビン酸、エリソルビン酸またはその塩であり、
またこれらの混合物であってもよい。なお、アスコルビ
ン酸またはエリソルビン酸はナトリウム塩またはカリウ
ム塩として用いられ、結局、本発明では、主剤のアスコ
ルビン酸類は、アスコルビン酸またはエリソルビン酸の
ナトリウム塩またはカリウム塩の水溶液として用いられ
る。主剤のアスコルビン酸類の水溶液濃度は、塩濃度で
４０〜５５Wt％の範囲が好ましい。主剤の濃度が上記範
囲を外れて低くなると酸素吸収速度が遅くなり、また濃
くなると調節剤の調製が難しくなるので、いずれにして
も望ましくない。
【００１０】金属塩は、主剤の酸素吸収反応の触媒とし
て用いられ、金属塩としては、鉄塩または銅塩が好まし
く、硫酸第一鉄７水和物が、溶解性の点から好適に用い
られる。金属塩の配合割合は、主剤１００重量部当たり
５〜１５重量部が好ましい。金属塩は前記主剤の水溶液
に溶解して用いられる。以下、アスコルビン酸類を主剤
といいい、主剤と金属塩を溶解した水溶液を単に主剤溶
液ということがある。
て用いられ、金属塩としては、鉄塩または銅塩が好まし
く、硫酸第一鉄７水和物が、溶解性の点から好適に用い
られる。金属塩の配合割合は、主剤１００重量部当たり
５〜１５重量部が好ましい。金属塩は前記主剤の水溶液
に溶解して用いられる。以下、アスコルビン酸類を主剤
といいい、主剤と金属塩を溶解した水溶液を単に主剤溶
液ということがある。
【００１１】多孔質担体は、主剤溶液を含浸、担持させ
るために用いられ、多孔質担体として、例えば、活性
炭、ケイソウ土、シリカゲル、ゼオライト、軽石、アル
ミナ等の粉粒体、または吸水性紙、吸水性樹脂等、公知
の担体物質が挙げられる。しかし、本発明では、特に活
性炭が、吸水量が多い点、酸素吸収反応の発熱を奪うこ
とが少なく反応を促進させるという点などから好まし
く、粒状活性炭がより好ましい。多孔質担体は主剤溶液
１００重量部当たり３０〜１００重量部の範囲で用いら
れるが、多孔質担体の配合量は、主剤溶液を含浸させた
多孔質担体とアルカリ土類金属水酸化物粉末と混合した
際に、主剤溶液でアルカリ土類金属水酸化物粉末が湿潤
するように、上記の範囲内で適切に選ぶ必要がある。
るために用いられ、多孔質担体として、例えば、活性
炭、ケイソウ土、シリカゲル、ゼオライト、軽石、アル
ミナ等の粉粒体、または吸水性紙、吸水性樹脂等、公知
の担体物質が挙げられる。しかし、本発明では、特に活
性炭が、吸水量が多い点、酸素吸収反応の発熱を奪うこ
とが少なく反応を促進させるという点などから好まし
く、粒状活性炭がより好ましい。多孔質担体は主剤溶液
１００重量部当たり３０〜１００重量部の範囲で用いら
れるが、多孔質担体の配合量は、主剤溶液を含浸させた
多孔質担体とアルカリ土類金属水酸化物粉末と混合した
際に、主剤溶液でアルカリ土類金属水酸化物粉末が湿潤
するように、上記の範囲内で適切に選ぶ必要がある。
【００１２】本発明では炭酸ガス吸収剤として、水に微
溶解性を示すアルカリ土類金属水酸化物が好ましく、水
酸化マグネシウムまたは水酸化カルシウムの粉末が好適
に使用される。アルカリ土類金属水酸化物の配合は、主
剤のアスコルビン酸類１モル当たり、アルカリ土類金属
水酸化物１．６〜２．５モル、好ましくは１．８〜２．
２モルの割合で用いられる。アルカリ土類金属水酸化物
の配合量が少ないと炭酸ガス所定濃度に下がらず、また
配合量が多すぎると炭酸ガス濃度が低くなりすぎるばか
りでなく、酸素吸収速度の低下につながりガス濃度調節
剤を多量に要することになるので、上記の範囲を超える
ことは好ましくない。
溶解性を示すアルカリ土類金属水酸化物が好ましく、水
酸化マグネシウムまたは水酸化カルシウムの粉末が好適
に使用される。アルカリ土類金属水酸化物の配合は、主
剤のアスコルビン酸類１モル当たり、アルカリ土類金属
水酸化物１．６〜２．５モル、好ましくは１．８〜２．
２モルの割合で用いられる。アルカリ土類金属水酸化物
の配合量が少ないと炭酸ガス所定濃度に下がらず、また
配合量が多すぎると炭酸ガス濃度が低くなりすぎるばか
りでなく、酸素吸収速度の低下につながりガス濃度調節
剤を多量に要することになるので、上記の範囲を超える
ことは好ましくない。
【００１３】主剤のアスコルビン酸類は、理論的には、
１モル当たり酸素１モルを吸収して炭酸ガス１モルを発
生する。ここで容器内の空気中の酸素を吸収して酸素濃
度１％以下とし炭酸ガス濃度３〜７％に保つためには、
発生炭酸ガス量の約９０〜７０％を吸収してしまう必要
があり、化学量論的には、主剤１モルの消費当たり、炭
酸ガス約０．９〜０．７モルを吸収する必要がある。ア
ルカリ土類金属水酸化物１モルの炭酸ガス吸収は、化学
量論的には４／３モルであり、このため、炭酸ガス濃度
３〜７％に保つためには、主剤１モルの消費当たり、ア
ルカリ土類金属水酸化物１．２〜０．９モルと計算され
る。このようにアルカリ土類金属水酸化物の必要量は、
主剤１モルの消費当たり、化学量論的には多くとも１．
２モルにすぎないのに、アルカリ土類金属水酸化物の配
合は実際には多くを要し、ガス濃度調節剤の使用量、酸
素吸収速度等を考慮して、前記した配合比の範囲内で適
切に選定する必要がある。
１モル当たり酸素１モルを吸収して炭酸ガス１モルを発
生する。ここで容器内の空気中の酸素を吸収して酸素濃
度１％以下とし炭酸ガス濃度３〜７％に保つためには、
発生炭酸ガス量の約９０〜７０％を吸収してしまう必要
があり、化学量論的には、主剤１モルの消費当たり、炭
酸ガス約０．９〜０．７モルを吸収する必要がある。ア
ルカリ土類金属水酸化物１モルの炭酸ガス吸収は、化学
量論的には４／３モルであり、このため、炭酸ガス濃度
３〜７％に保つためには、主剤１モルの消費当たり、ア
ルカリ土類金属水酸化物１．２〜０．９モルと計算され
る。このようにアルカリ土類金属水酸化物の必要量は、
主剤１モルの消費当たり、化学量論的には多くとも１．
２モルにすぎないのに、アルカリ土類金属水酸化物の配
合は実際には多くを要し、ガス濃度調節剤の使用量、酸
素吸収速度等を考慮して、前記した配合比の範囲内で適
切に選定する必要がある。
【００１４】ガス濃度調節剤の製造方法は必ずしも限定
されないが、ガス濃度調節剤は上記成分を混合した組成
物であり、例えば、主剤のアスコルビン酸類と金属塩の
水溶液（主剤溶液）と粒状担体とを混合して含浸させ、
さらに粉末アルカリ土類金属水酸化物を混合して表面に
分散、被覆させる方法がとられる。
されないが、ガス濃度調節剤は上記成分を混合した組成
物であり、例えば、主剤のアスコルビン酸類と金属塩の
水溶液（主剤溶液）と粒状担体とを混合して含浸させ、
さらに粉末アルカリ土類金属水酸化物を混合して表面に
分散、被覆させる方法がとられる。
【００１５】本発明のガス濃度調節剤は、前記組成物を
少なくとも一部を通気性包材で包装した包装体として用
いられ、使用の便宜上、酸素吸収能力と炭酸ガス発生能
力を併せ持つガス濃度調節剤として１剤の包装体で提供
することが望ましい。ただし、本発明のガス調節剤は、
炭酸ガス発生型の酸素吸収剤組成物と炭酸ガス吸収組成
物とを、それぞれ、別個の包装体として提供することが
できる。
少なくとも一部を通気性包材で包装した包装体として用
いられ、使用の便宜上、酸素吸収能力と炭酸ガス発生能
力を併せ持つガス濃度調節剤として１剤の包装体で提供
することが望ましい。ただし、本発明のガス調節剤は、
炭酸ガス発生型の酸素吸収剤組成物と炭酸ガス吸収組成
物とを、それぞれ、別個の包装体として提供することが
できる。
【００１６】ガス濃度調節剤の通気性包材は、酸素と炭
酸ガスを通過するものであればよく、酸素透気度３００
ml／Hr・m2以上かつ炭酸ガス透気度３００ml／Hr・m2以
上の包材が好ましい。通気性包材としては、公知の通気
性包材が使用でき、例えば、合成繊維からなる不織布、
合成紙、マイクロポーラスフィルム、紙等、さらには補
強材として開孔ポリエチレン、ワリフ等を貼り合わせた
複合包材等が用いられる。
酸ガスを通過するものであればよく、酸素透気度３００
ml／Hr・m2以上かつ炭酸ガス透気度３００ml／Hr・m2以
上の包材が好ましい。通気性包材としては、公知の通気
性包材が使用でき、例えば、合成繊維からなる不織布、
合成紙、マイクロポーラスフィルム、紙等、さらには補
強材として開孔ポリエチレン、ワリフ等を貼り合わせた
複合包材等が用いられる。
【００１７】製造されたガス濃度調節剤は、ガスバリヤ
性の容器や袋に保管されており、使用するにあたり、ガ
スバリヤ性容器や袋から取り出して用いられる。ガス濃
度調節剤は少なくとも、容器内に密閉された空気中の酸
素を吸収することができる量が必要であり、主剤のアス
コルビン酸類の酸素吸収量は、化学量論的には、主剤１
モル当たり酸素１モルである。ガス濃度調節剤の使用量
は、上記主剤の理論的必要量を目安として、好ましくは
１．５倍以上、より好ましくは１．８〜２．５倍の範囲
に選ばれ、酸素吸収速度や密閉容器のガスバリヤ性を考
慮して決められる。
性の容器や袋に保管されており、使用するにあたり、ガ
スバリヤ性容器や袋から取り出して用いられる。ガス濃
度調節剤は少なくとも、容器内に密閉された空気中の酸
素を吸収することができる量が必要であり、主剤のアス
コルビン酸類の酸素吸収量は、化学量論的には、主剤１
モル当たり酸素１モルである。ガス濃度調節剤の使用量
は、上記主剤の理論的必要量を目安として、好ましくは
１．５倍以上、より好ましくは１．８〜２．５倍の範囲
に選ばれ、酸素吸収速度や密閉容器のガスバリヤ性を考
慮して決められる。
【００１８】本発明に用いられる密封性容器は、ガスバ
リヤ性材料からなり、密封することによって実質的に気
密性を保つことができるものであればよく、容器の気密
性は外気侵入量で１日あたり容器内容積の３％以下、好
ましくは２％以下のものが用いられる。
リヤ性材料からなり、密封することによって実質的に気
密性を保つことができるものであればよく、容器の気密
性は外気侵入量で１日あたり容器内容積の３％以下、好
ましくは２％以下のものが用いられる。
【００１９】上記密封性容器は、少なくとも培養プレー
トと調節剤とを収容できる大きさがあればよく、その形
状は特に限定されない。一般に細胞培養には、３５ｍｍ
径のプラスチック製ペトリ皿が使われることが多いが、
その枚数に合わせて適当な大きさの密封性容器を選択
し、内部に生じる空間容積に対応してガス濃度調節剤の
使用量を決める必要がある。密封性容器としては従来の
耐圧容器も使用できるが、ガスバリアー性のプラスチッ
ク容器、袋等が使用できる。例えば、容器本体と蓋との
間にシール材はさみ留め具で締めつける簡単な密閉構造
のプラスチック容器が軽量で取扱いも便利であり、好適
に使用される。またポリ塩化ビニリデンコートしたプラ
スチックフィルム袋等も、袋の口部をヒートシールした
り、クリップで密封する等の方法をとるだけで容易に密
封性容器として使用できる。
トと調節剤とを収容できる大きさがあればよく、その形
状は特に限定されない。一般に細胞培養には、３５ｍｍ
径のプラスチック製ペトリ皿が使われることが多いが、
その枚数に合わせて適当な大きさの密封性容器を選択
し、内部に生じる空間容積に対応してガス濃度調節剤の
使用量を決める必要がある。密封性容器としては従来の
耐圧容器も使用できるが、ガスバリアー性のプラスチッ
ク容器、袋等が使用できる。例えば、容器本体と蓋との
間にシール材はさみ留め具で締めつける簡単な密閉構造
のプラスチック容器が軽量で取扱いも便利であり、好適
に使用される。またポリ塩化ビニリデンコートしたプラ
スチックフィルム袋等も、袋の口部をヒートシールした
り、クリップで密封する等の方法をとるだけで容易に密
封性容器として使用できる。
【００２０】
【実施例】以下に実施例を挙げて説明する。 実施例１ ５０％アスコルビン酸ソーダ水溶液１１３ｇに硫酸第一
鉄７水和物７ｇを溶解した液を顆粒状活性炭４９ｇに含
浸させた後、これに水酸化マグネシウム３６ｇを加えて
均一に混ぜ合わせ、ガス濃度調節剤原料粉末を調製し
た。得られた原料粉末２２．７ｇを、内側に開孔ポリエ
チレンフィルムをラミネートした紙（酸素拡散速度；２
００００ｍｌ／ｍ2 ・Ｈｒ）で作成した袋（サイズ；１
００ｍｍ×１４０ｍｍ）に充填してヒートシールし、ガ
ス濃度調節剤を作成した。作成したガス濃度調節剤をポ
リ塩化ビニリデンコートされたナイロンフィルムの袋
（サイズ；２５０ｍｍ×３５０ｍｍ）に空気１．６ｌと
共に密封し、次いでこの密封袋を３７℃の恒温槽中に保
持し、袋内のガス組成の変化を経時的に測定した。ガス
濃度調節剤について上記実験を３回ずつ行った。結果を
表１に示す。
鉄７水和物７ｇを溶解した液を顆粒状活性炭４９ｇに含
浸させた後、これに水酸化マグネシウム３６ｇを加えて
均一に混ぜ合わせ、ガス濃度調節剤原料粉末を調製し
た。得られた原料粉末２２．７ｇを、内側に開孔ポリエ
チレンフィルムをラミネートした紙（酸素拡散速度；２
００００ｍｌ／ｍ2 ・Ｈｒ）で作成した袋（サイズ；１
００ｍｍ×１４０ｍｍ）に充填してヒートシールし、ガ
ス濃度調節剤を作成した。作成したガス濃度調節剤をポ
リ塩化ビニリデンコートされたナイロンフィルムの袋
（サイズ；２５０ｍｍ×３５０ｍｍ）に空気１．６ｌと
共に密封し、次いでこの密封袋を３７℃の恒温槽中に保
持し、袋内のガス組成の変化を経時的に測定した。ガス
濃度調節剤について上記実験を３回ずつ行った。結果を
表１に示す。
【００２１】比較例１ ５０％アスコルビン酸ソーダ水溶液１０５ｇに硫酸第一
鉄７水和物６．５ｇを溶解した液を顆粒状活性炭４９ｇ
に含浸させた後、これに水酸化マグネシウム２０ｇを加
えて均一に混ぜ合わせ、ガス濃度調節剤原料粉末を調製
した。得られた原料粉末２０ｇを、実施例１と同様に、
紙／開孔ポリエチレンフィルム製の袋に充填し、ガス濃
度調節剤を作成した。作成したガス濃度調節剤について
実施例１と同様、ナイロンフィルムの袋に空気１．６ｌ
と共に密封し、次いでこの密封袋を３７℃の恒温槽中に
保持し、袋内のガス組成の変化を経時的に測定した。結
果を表１に示す。
鉄７水和物６．５ｇを溶解した液を顆粒状活性炭４９ｇ
に含浸させた後、これに水酸化マグネシウム２０ｇを加
えて均一に混ぜ合わせ、ガス濃度調節剤原料粉末を調製
した。得られた原料粉末２０ｇを、実施例１と同様に、
紙／開孔ポリエチレンフィルム製の袋に充填し、ガス濃
度調節剤を作成した。作成したガス濃度調節剤について
実施例１と同様、ナイロンフィルムの袋に空気１．６ｌ
と共に密封し、次いでこの密封袋を３７℃の恒温槽中に
保持し、袋内のガス組成の変化を経時的に測定した。結
果を表１に示す。
【００２２】
【表１】
【００２３】実施例２および比較例２ 実施例１および比較例１に作成したガス濃度調節剤を、
各々ウィリアムズメディウムＥ培地（ＧｉｂｃｏＢＲＬ
社製）２．０ｍｌを入れた３５ｍｍ径のプラスチック製
ペトリ皿と共に、三菱ガス化学製角型ジャー（内容積
１．６ｌ）に密封し、次いでこのジャーを３７℃の恒温
槽中に保持しておき、経時的に培地のｐＨの変化を調べ
た。結果を表２に示す。表２に示すように、実施例１の
ガス濃度調節剤を用いた実施例２の場合には、培地のｐ
Ｈは７．４と、元の培地のｐＨが維持されていた。これ
に対して、比較例１のガス濃度調節剤を用いた比較例２
の場合には、ｐＨ７．２と培地のｐＨの低下が認められ
たが、ｐＨ７．２は、一般的に人体内ではアシドーシス
の症状に相当する。結局、培地のｐＨの低下の認められ
なかったことは、実施例１のガス濃度調節剤が、虚血状
態の培養環境調節剤として好ましいことを示す。
各々ウィリアムズメディウムＥ培地（ＧｉｂｃｏＢＲＬ
社製）２．０ｍｌを入れた３５ｍｍ径のプラスチック製
ペトリ皿と共に、三菱ガス化学製角型ジャー（内容積
１．６ｌ）に密封し、次いでこのジャーを３７℃の恒温
槽中に保持しておき、経時的に培地のｐＨの変化を調べ
た。結果を表２に示す。表２に示すように、実施例１の
ガス濃度調節剤を用いた実施例２の場合には、培地のｐ
Ｈは７．４と、元の培地のｐＨが維持されていた。これ
に対して、比較例１のガス濃度調節剤を用いた比較例２
の場合には、ｐＨ７．２と培地のｐＨの低下が認められ
たが、ｐＨ７．２は、一般的に人体内ではアシドーシス
の症状に相当する。結局、培地のｐＨの低下の認められ
なかったことは、実施例１のガス濃度調節剤が、虚血状
態の培養環境調節剤として好ましいことを示す。
【００２４】
【表２】 実施例２；実施例１のガス濃度調節剤を使用 比較例２；比較例１のガス濃度調節剤を使用
【００２５】実施例３ Wister雄性ラットの肝臓を、カルシウムキレート剤およ
びコラゲナーゼを潅流させた後、平衡塩溶液中でメスお
よびピペットを用いて機械的に分散し、その浮遊液より
遠心分離により肝細胞のみを採取し、３５ｍｍ径プラス
チックディッシュで１．５ｍｌのウィリアムズメディウ
ムＥ培地にて培養し、初代培養肝細胞を作成した。作成
した初代培養肝細胞を用い低酸素障害試験を次のように
行った。角型ジャー（三菱ガス化学製、１．６Ｌ容）に
初代培養肝細胞を培養したプラスチックディッシュと実
施例１に作成したガス濃度調節剤とを入れて密封し、こ
の密封した角型ジャーを３７℃の恒温槽中に所定時間保
持したのち、ジャーの蓋を開けて開放状態を保持した。
密封状態の保持時間を、それぞれ、２時間、３時間およ
び４時間と変えて試験を行った。本試験では、ジャーが
密封状態にある間のジャー内の初代培養肝細胞は、生体
肝における虚血状態を反映する低酸素状態となり、ジャ
ーの蓋を開けることにより、生体肝における血行再開通
状態を反映する再酸素化状態となる。
びコラゲナーゼを潅流させた後、平衡塩溶液中でメスお
よびピペットを用いて機械的に分散し、その浮遊液より
遠心分離により肝細胞のみを採取し、３５ｍｍ径プラス
チックディッシュで１．５ｍｌのウィリアムズメディウ
ムＥ培地にて培養し、初代培養肝細胞を作成した。作成
した初代培養肝細胞を用い低酸素障害試験を次のように
行った。角型ジャー（三菱ガス化学製、１．６Ｌ容）に
初代培養肝細胞を培養したプラスチックディッシュと実
施例１に作成したガス濃度調節剤とを入れて密封し、こ
の密封した角型ジャーを３７℃の恒温槽中に所定時間保
持したのち、ジャーの蓋を開けて開放状態を保持した。
密封状態の保持時間を、それぞれ、２時間、３時間およ
び４時間と変えて試験を行った。本試験では、ジャーが
密封状態にある間のジャー内の初代培養肝細胞は、生体
肝における虚血状態を反映する低酸素状態となり、ジャ
ーの蓋を開けることにより、生体肝における血行再開通
状態を反映する再酸素化状態となる。
【００２６】本実施例では、複数の角型ジャーを準備し
ておき、低酸素状態を、それぞれ、２時間、３時間およ
び４時間の実験群に分けて低酸素障害試験を行った。そ
れぞれの実験群について、（１）細胞膜障害の指標とし
て培養液中に漏洩した乳酸脱水素酵素活性（ＬＤＨ）、
（２）肝ミトコンドリアで酸素呼吸を行う酸化的リン酸
化能の指標としてＮＡＤ+ ／ＮＡＤＨ比と平衡関係にあ
る培養液中ケトン体比（ＫＢＲ：アセト酢酸／3-ヒドロ
キシ酪酸比）、（３）肝ミトコンドリア内の酵素機能の
指標として培養液中に産生されたケトン体濃度（アセト
酢酸＋3ーヒドロキシ酪酸）、を経時的に測定し、低酸素
状態および再酸素化状態における各指標の変化と低酸素
時間の長さとの比較を行った。なお、低酸素状態を設け
ない実験を同様に行い対照群とした。各指標の測定結果
を、図１、図２および図３に示す。
ておき、低酸素状態を、それぞれ、２時間、３時間およ
び４時間の実験群に分けて低酸素障害試験を行った。そ
れぞれの実験群について、（１）細胞膜障害の指標とし
て培養液中に漏洩した乳酸脱水素酵素活性（ＬＤＨ）、
（２）肝ミトコンドリアで酸素呼吸を行う酸化的リン酸
化能の指標としてＮＡＤ+ ／ＮＡＤＨ比と平衡関係にあ
る培養液中ケトン体比（ＫＢＲ：アセト酢酸／3-ヒドロ
キシ酪酸比）、（３）肝ミトコンドリア内の酵素機能の
指標として培養液中に産生されたケトン体濃度（アセト
酢酸＋3ーヒドロキシ酪酸）、を経時的に測定し、低酸素
状態および再酸素化状態における各指標の変化と低酸素
時間の長さとの比較を行った。なお、低酸素状態を設け
ない実験を同様に行い対照群とした。各指標の測定結果
を、図１、図２および図３に示す。
【００２７】（１）培養液中に漏出したＬＤＨ量の経時
変化は、図１に示すように、２時間の低酸素障害試験で
は、低酸素状態・再酸素化状態を通じてＬＤＨの漏洩は
認められなかった。３時間の低酸素障害試験では、低酸
素状態中はＬＤＨの漏洩は認められなかったが、再酸素
化後ＬＤＨが若干の増加を認め、細胞膜障害が発生した
ことが示唆された。さらに４時間の低酸素障害試験で
は、低酸素状態開始後４時間目においてＬＤＨの増加が
認められ、再酸素化後にはさらに上昇した。 （２）ＫＢＲの経時変化は、図２に示すように、低酸素
状態においては、いずれの群も顕著に低下したが、再酸
素化後、２時間の低酸素障害試験においてはＫＢＲは速
やかに回復し前値に復したが、３時間の低酸素障害試験
では再酸素化後もＫＢＲの回復は抑制され、４時間の群
ではＫＢＲの回復はほとんど見られず、酸化的リン酸化
能に障害が出ていることが認められた。 （３）培養液中へのケトン体の産生は、図３に示すよう
に、低酸素状態中はいずれの群でもほぼ完全に停止し、
再酸素化とともに産生は再開されたが、その産生量は低
酸素時間が長いほど抑制されており、低酸素状態の長さ
により肝ミトコンドリア内の酵素機能に障害がおきてい
ることが認められた。
変化は、図１に示すように、２時間の低酸素障害試験で
は、低酸素状態・再酸素化状態を通じてＬＤＨの漏洩は
認められなかった。３時間の低酸素障害試験では、低酸
素状態中はＬＤＨの漏洩は認められなかったが、再酸素
化後ＬＤＨが若干の増加を認め、細胞膜障害が発生した
ことが示唆された。さらに４時間の低酸素障害試験で
は、低酸素状態開始後４時間目においてＬＤＨの増加が
認められ、再酸素化後にはさらに上昇した。 （２）ＫＢＲの経時変化は、図２に示すように、低酸素
状態においては、いずれの群も顕著に低下したが、再酸
素化後、２時間の低酸素障害試験においてはＫＢＲは速
やかに回復し前値に復したが、３時間の低酸素障害試験
では再酸素化後もＫＢＲの回復は抑制され、４時間の群
ではＫＢＲの回復はほとんど見られず、酸化的リン酸化
能に障害が出ていることが認められた。 （３）培養液中へのケトン体の産生は、図３に示すよう
に、低酸素状態中はいずれの群でもほぼ完全に停止し、
再酸素化とともに産生は再開されたが、その産生量は低
酸素時間が長いほど抑制されており、低酸素状態の長さ
により肝ミトコンドリア内の酵素機能に障害がおきてい
ることが認められた。
【００２８】本実施例で行った初代培養肝細胞の低酸素
障害試験では、低酸素状態および再酸素化状態ともに、
生体肝における虚血状態および血行再開通状態における
肝細胞の状態を機能的にも形態的にも良く反映してお
り、本発明の培養環境調節剤を用いた低酸素障害試験
は、温阻血再潅流障害研究のモデル実験系として非常に
有用である。
障害試験では、低酸素状態および再酸素化状態ともに、
生体肝における虚血状態および血行再開通状態における
肝細胞の状態を機能的にも形態的にも良く反映してお
り、本発明の培養環境調節剤を用いた低酸素障害試験
は、温阻血再潅流障害研究のモデル実験系として非常に
有用である。
【００２９】
【発明の効果】本発明のガス濃度調節剤およびガス濃度
調節方法は、密封された容器内のガス環境を培養細胞の
低酸素障害試験に適した環境とすることを実現したもの
であり、軽量で簡便な密封性容器および取扱いやすいガ
ス濃度調節剤を用いた培養環境調節法を開発したことに
特徴がある。すなわち、本発明によれば、培養細胞の低
酸素障害試験を行う環境を作り出すにあたり、高価で大
型な装置を準備する必要がなく、通常の実験室にある孵
卵器、恒温培養器等の中に細胞を接種した培地およびガ
ス濃度調節剤を封入した密閉性容器を入れることで、細
胞の低酸素障害試験を行なうことができる。また、多数
の系を同時に開始させることが可能となり、研究効率の
向上、作業時間の短縮を図ることができる。これによ
り、多くの医療研究機関において、培養細胞の低酸素障
害試験、低酸素・虚血状態の研究を、簡便に、かつ安価
に、効率的に行なうことが可能となる。また本発明にお
いては試験材料は必ずしも培養細胞に限定されず、本発
明の方法を適用することによって目的を達成できるもの
であれば、試験材料は何であってもよく、本発明は脱酸
素方法として広く応用できる。
調節方法は、密封された容器内のガス環境を培養細胞の
低酸素障害試験に適した環境とすることを実現したもの
であり、軽量で簡便な密封性容器および取扱いやすいガ
ス濃度調節剤を用いた培養環境調節法を開発したことに
特徴がある。すなわち、本発明によれば、培養細胞の低
酸素障害試験を行う環境を作り出すにあたり、高価で大
型な装置を準備する必要がなく、通常の実験室にある孵
卵器、恒温培養器等の中に細胞を接種した培地およびガ
ス濃度調節剤を封入した密閉性容器を入れることで、細
胞の低酸素障害試験を行なうことができる。また、多数
の系を同時に開始させることが可能となり、研究効率の
向上、作業時間の短縮を図ることができる。これによ
り、多くの医療研究機関において、培養細胞の低酸素障
害試験、低酸素・虚血状態の研究を、簡便に、かつ安価
に、効率的に行なうことが可能となる。また本発明にお
いては試験材料は必ずしも培養細胞に限定されず、本発
明の方法を適用することによって目的を達成できるもの
であれば、試験材料は何であってもよく、本発明は脱酸
素方法として広く応用できる。
【図１】 低酸素状態・再酸素化状態におけるＬＤＨの
培地への漏洩の変化を示す。
培地への漏洩の変化を示す。
【図２】 低酸素状態・再酸素化状態におけるＫＢＲの
変化を示す。
変化を示す。
【図３】 低酸素状態・再酸素化状態における培養液中
のケトン体産生の経過を示す。
のケトン体産生の経過を示す。
● 低酸素障害実験（２時間）群 ▲ 低酸素障害実験（３時間）群 ■ 低酸素障害実験（４時間）群 ○ 低酸素障害実験（２時間）の対照群（低酸素時間無
し） △ 低酸素障害実験（３時間）の対照群（低酸素時間無
し） □ 低酸素障害実験（４時間）の対照群（低酸素時間無
し）
し） △ 低酸素障害実験（３時間）の対照群（低酸素時間無
し） □ 低酸素障害実験（４時間）の対照群（低酸素時間無
し）
─────────────────────────────────────────────────────
【手続補正書】
【提出日】平成８年６月１４日
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２４
【補正方法】変更
【補正内容】
【００２４】
【表２】 実施例２；実施例１のガス濃度調節剤を使用 比較例２；比較例１のガス濃度調節剤を使用 ─────────────────────────────────────────────────────
【手続補正書】
【提出日】平成８年６月１８日
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１３
【補正方法】変更
【補正内容】
【００１３】主剤のアスコルビン酸類は、理論的には、
１モル当たり酸素１モルを吸収して炭酸ガス１モルを発
生する。ここで容器内の空気中の酸素を吸収して酸素濃
度１％以下とし炭酸ガス濃度３〜７％に保つためには、
発生炭酸ガス量の約９０〜７０％を吸収してしまう必要
があり、化学量論的には、主剤１モルの消費当たり、炭
酸ガス約０．９〜０．７モルを吸収する必要がある。ア
ルカリ土類金属水酸化物１モルの炭酸ガス吸収は、化学
量論的には３／４モルであり、このため、炭酸ガス濃度
３〜７％に保つためには、主剤１モルの消費当たり、ア
ルカリ土類金属水酸化物１．２〜０．９モルと計算され
る。このようにアルカリ土類金属水酸化物の必要量は、
主剤１モルの消費当たり、化学量論的には多くとも１．
２モルにすぎないのに、アルカリ土類金属水酸化物の配
合は実際には多くを要し、ガス濃度調節剤の使用量、酸
素吸収速度等を考慮して、前記した配合比の範囲内で適
切に選定する必要がある。
１モル当たり酸素１モルを吸収して炭酸ガス１モルを発
生する。ここで容器内の空気中の酸素を吸収して酸素濃
度１％以下とし炭酸ガス濃度３〜７％に保つためには、
発生炭酸ガス量の約９０〜７０％を吸収してしまう必要
があり、化学量論的には、主剤１モルの消費当たり、炭
酸ガス約０．９〜０．７モルを吸収する必要がある。ア
ルカリ土類金属水酸化物１モルの炭酸ガス吸収は、化学
量論的には３／４モルであり、このため、炭酸ガス濃度
３〜７％に保つためには、主剤１モルの消費当たり、ア
ルカリ土類金属水酸化物１．２〜０．９モルと計算され
る。このようにアルカリ土類金属水酸化物の必要量は、
主剤１モルの消費当たり、化学量論的には多くとも１．
２モルにすぎないのに、アルカリ土類金属水酸化物の配
合は実際には多くを要し、ガス濃度調節剤の使用量、酸
素吸収速度等を考慮して、前記した配合比の範囲内で適
切に選定する必要がある。
Claims (5)
- 【請求項１】 アスコルビン酸類、金属塩、多孔質担
体、アルカリ土類金属水酸化物および水からなる組成物
であり、該組成物を密封系内に収納することにより系内
の酸素を吸収して酸素濃度を１時間以内に１％以下とし
かつ炭酸ガス濃度を３〜７％に調節することを特徴とす
るガス濃度調節剤。 - 【請求項２】 密封系内の酸素濃度を３０分以内に５％
以下、１時間以内に１％以下とし、かつ炭酸ガス濃度
を、少なくとも１５分後から３時間後の間、３〜７％の
範囲に保持することを特徴とする請求項１記載のガス濃
度調節剤。 - 【請求項３】 アスコルビン酸類、金属塩、多孔質担
体、アルカリ土類金属水酸化物および水からなるガス濃
度調節剤と試験材料とを密閉性容器内に収納して密封す
ることにより、密閉系内の酸素濃度を１％以下かつ炭酸
ガス濃度を３〜７％に調節することを特徴とする低酸素
濃度環境の調節方法。 - 【請求項４】 密閉系内の酸素濃度を３０分以内に５％
以下、１時間以内に１％以下とし、かつ炭酸ガス濃度
を、少なくとも１５分後から３時間後の間、３〜７％の
範囲に保持することを特徴とする請求項３記載の調節方
法。 - 【請求項５】 試験材料が培養細胞であり低酸素濃度環
境が虚血性環境であることを特徴とする請求項３又は請
求項４記載の調節方法。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP07003396A JP3818324B2 (ja) | 1996-03-26 | 1996-03-26 | ガス濃度調節剤及び低酸素濃度環境の調節方法 |
| EP97301941A EP0798373B1 (en) | 1996-03-26 | 1997-03-21 | System and method for adjusting the gas concentration |
| DE69714894T DE69714894T2 (de) | 1996-03-26 | 1997-03-21 | Reagenz und Verfahren zur Regulierung der Zusammensetzung einer Gasmischung |
| US08/823,543 US5914070A (en) | 1996-03-26 | 1997-03-25 | Gas concentration adjusting agent, gas concentration adjusting method, and gas concentration adjusting system |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP07003396A JP3818324B2 (ja) | 1996-03-26 | 1996-03-26 | ガス濃度調節剤及び低酸素濃度環境の調節方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09252766A true JPH09252766A (ja) | 1997-09-30 |
| JP3818324B2 JP3818324B2 (ja) | 2006-09-06 |
Family
ID=13419887
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP07003396A Expired - Lifetime JP3818324B2 (ja) | 1996-03-26 | 1996-03-26 | ガス濃度調節剤及び低酸素濃度環境の調節方法 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5914070A (ja) |
| EP (1) | EP0798373B1 (ja) |
| JP (1) | JP3818324B2 (ja) |
| DE (1) | DE69714894T2 (ja) |
Cited By (6)
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|---|---|---|---|---|
| JP2007268326A (ja) * | 2006-03-30 | 2007-10-18 | Powdertech Co Ltd | 有機系脱酸素剤 |
| JP2007295826A (ja) * | 2006-04-28 | 2007-11-15 | Mitsubishi Gas Chem Co Inc | 培養状態を顕微鏡観察する方法 |
| JP2007307451A (ja) * | 2006-05-17 | 2007-11-29 | Mitsubishi Gas Chem Co Inc | 脱酸素剤組成物 |
| JP2009291166A (ja) * | 2008-06-09 | 2009-12-17 | Mitsubishi Gas Chem Co Inc | 雰囲気調整剤及びそれを用いた細胞培養方法 |
| WO2011065363A1 (ja) | 2009-11-24 | 2011-06-03 | 三菱瓦斯化学株式会社 | 雰囲気調整剤組成物 |
| JP2014023541A (ja) * | 2013-11-06 | 2014-02-06 | Mitsubishi Gas Chemical Co Inc | 雰囲気調整剤及びそれを用いた細胞培養方法 |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0869172B1 (en) * | 1997-04-01 | 2003-10-15 | Mitsubishi Gas Chemical Company, Inc. | Atmosphere regulator and method for culturing anaerobic bacteria |
| JP2003190784A (ja) * | 2001-10-17 | 2003-07-08 | Kawatetsu Techno Res Corp | 脱酸素剤およびその包装体 |
| JP6593564B1 (ja) * | 2019-03-20 | 2019-10-23 | 三菱瓦斯化学株式会社 | 細菌培養用ガス濃度調整剤及びこれを用いた細菌の培養方法 |
| JP7322545B2 (ja) | 2019-06-24 | 2023-08-08 | 三菱瓦斯化学株式会社 | 嫌気性細菌培養用ガス濃度調整剤及びこれを用いた嫌気性細菌の培養方法 |
Citations (6)
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