JP5714790B2 - 雰囲気調整剤及びそれを用いた細胞培養方法 - Google Patents
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Description
例えば生細胞観察を長時間連続して行う場合、培養液中の生細胞を通常培養温度で一定に保持するとともに培養液のpHも一定に保持する必要がある。その際、例えば、重炭酸塩緩衝系培養液のpHを血液の通常状態と同じpH7.4に保持するための条件は雰囲気二酸化炭素濃度を5%程度にすることである。
1.細胞
ヒト腎臓由来細胞(Tig−3−20:ヒューマンサイエンス振興財団研究資源バンクより分譲 資源番号JCRB0506 ロット番号R034)
2.培地
MEM培地(製品名;GIBCO社製 11095−080(MEM Earle’s liquid))
3.培養容器
60mm径ディッシュ(製品名;AGCテクノグラス社製 IWAKI3010−060 60mm/Tissue Culture Dish)
L−アスコルビン酸ナトリウム水溶液(濃度45重量%)100gに硫酸第一鉄・7水塩6g及びアルデヒド除去剤であるエチレン尿素0.3gを溶解させ、水溶液を顆粒状活性炭(平均粒径0.6mm)60gに含浸させた後、低分子量ポリエチレン70g及び炭酸ナトリウム・10水塩20gを添加混合してアルデヒド除去剤が配合された酸素吸収・炭酸ガス発生剤(A)を得た。
L−アスコルビン酸ナトリウム水溶液(濃度45重量%)100gに硫酸第一鉄・7水塩6g及び炭酸ナトリウム・10水塩20gを溶解させ、水溶液を顆粒状活性炭(平均粒径0.6mm)60gに含浸させ、低分子量ポリエチレン70gを添加混合して酸素吸収・炭酸ガス発生剤(B)を得た。
有孔ポリエチレンフィルムでラミネートした和紙の通気性小袋90mm×横55mmに実施例2で得られた酸素吸収・炭酸ガス発生剤(B)を5g充填して酸素吸収・炭酸ガス発生包装体(B’)とした。
1.0×104個/mLまたは5.0×103個/mLの細胞密度でヒト腎臓由来細胞を播種した10%FBS添加MEM培地5mL入り60mm径ディッシュ各2枚を、イオン交換水5mL入り60mm径ディッシュ2枚と共に酸素18%炭酸ガス5%に設定したマルチガスインキュベーターに装填し、37℃で3日間培養した後、細胞数を計測した。それら結果を表1に記載する。アルデヒドの発生源である酸素吸収・炭酸ガス発生包装体を使用せず、マルチガスインキュベーターを使用して細胞を培養した結果、アルデヒド除去剤を併用した実施例1及び2と同程度の細胞数の増加が見られた。
Claims (2)
- アスコルビン酸類を主剤とする雰囲気調整剤、エチレン尿素、スルファニル酸及びアミノグアニジンからなる群より選択される少なくとも1種以上のアルデヒド除去剤並びに細胞及び培地を収容した培養容器を、ガスバリア性密閉容器内に設置し、該密閉容器内の酸素濃度を18%以下、炭酸ガス濃度を2%以上10%以下として細胞を培養することを特徴とする細胞培養方法。
- ガスバリア性密閉容器内に、イオン交換水が収容された開放型の容器がさらに設置され、培養期間中に該イオン交換水中へ移行するアルデヒド濃度が、2.0mg/Lを超えない請求項1記載の細胞培養方法。
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