JPH09234091A - 発酵法によるＲ−β−ヒドロキシ酪酸の製造法 - Google Patents
発酵法によるＲ−β−ヒドロキシ酪酸の製造法Info
- Publication number
- JPH09234091A JPH09234091A JP15129896A JP15129896A JPH09234091A JP H09234091 A JPH09234091 A JP H09234091A JP 15129896 A JP15129896 A JP 15129896A JP 15129896 A JP15129896 A JP 15129896A JP H09234091 A JPH09234091 A JP H09234091A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- hydroxybutyric acid
- microorganism
- genus
- acid
- producing
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Abstract
(57)【要約】
【解決手段】 Ｒ−β−ヒドロキシ酪酸生産能を有する
シュ−ドモナス（Pseudomonas）属、バークホルデリア
（Burkholderia）属またはアルカリゲネス（Alcaligene
s）属等に属する微生物を栄養培地中で培養し、培養物
からＲ−β−ヒドロキシ酪酸を採取することを特徴とす
るＲ−β−ヒドロキシ酪酸の製造方法。 【効果】 安価な炭水化物から微生物を用いて発酵によ
り直接高い光学純度のＲ−β−ヒドロキシ酪酸を製造す
ることができる。
シュ−ドモナス（Pseudomonas）属、バークホルデリア
（Burkholderia）属またはアルカリゲネス（Alcaligene
s）属等に属する微生物を栄養培地中で培養し、培養物
からＲ−β−ヒドロキシ酪酸を採取することを特徴とす
るＲ−β−ヒドロキシ酪酸の製造方法。 【効果】 安価な炭水化物から微生物を用いて発酵によ
り直接高い光学純度のＲ−β−ヒドロキシ酪酸を製造す
ることができる。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は抗生物質や医薬の合
成原料として有用なＲ−β−ヒドロキシ酪酸を微生物を
用いた発酵法により製造する方法に関する。
成原料として有用なＲ−β−ヒドロキシ酪酸を微生物を
用いた発酵法により製造する方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】Ｒ−β−ヒドロキシ酪酸の製造法として
は、(1) 微生物によるn-酪酸のβ酸化法（特開昭58-158
190号公報）、(2) アセト酢酸エステルの化学的不斉水
素化法（Ryoji Noyori, Asymmetric Catalysis in Orga
nic Synthesis, 1994, John Wiley & Sons）等が知られ
ている。しかし、上記(1) の方法では生成物の光学純度
において、また上記(2) の方法では触媒のコスト面にお
いて、未だ改良の余地があると考えられる。
は、(1) 微生物によるn-酪酸のβ酸化法（特開昭58-158
190号公報）、(2) アセト酢酸エステルの化学的不斉水
素化法（Ryoji Noyori, Asymmetric Catalysis in Orga
nic Synthesis, 1994, John Wiley & Sons）等が知られ
ている。しかし、上記(1) の方法では生成物の光学純度
において、また上記(2) の方法では触媒のコスト面にお
いて、未だ改良の余地があると考えられる。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、微生物を用
いてＲ−β−ヒドロキシ酪酸を安価に且つ効率的に製造
する方法を提供することを目的とする。
いてＲ−β−ヒドロキシ酪酸を安価に且つ効率的に製造
する方法を提供することを目的とする。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、Ｒ−β−
ヒドロキシ酪酸の微生物による製造方法に関して鋭意検
討した結果、培養液、又は菌体懸濁液中に１００％eeの
Ｒ−β−ヒドロキシ酪酸を発酵的に生産する微生物を見
いだし、本発明を完成するに到った。すなわち、本発明
は、Ｒ−β−ヒドロキシ酪酸生産能を有する微生物を栄
養培地中で培養し、培養物からＲ−β−ヒドロキシ酪酸
を採取することを特徴とするＲ−β−ヒドロキシ酪酸の
製造方法である。上記微生物としては、シュ−ドモナス
（ Pseudomonas）属、バークホルデリア(Burkholderia)
属またはアルカリゲネス（ Alcaligenes）属に属する微
生物が挙げられる。また、栄養培地における炭素源とし
ては炭水化物、エタノール、酢酸および油脂類から選ば
れる少なくとも１種類以上を含むものが用いられる。
ヒドロキシ酪酸の微生物による製造方法に関して鋭意検
討した結果、培養液、又は菌体懸濁液中に１００％eeの
Ｒ−β−ヒドロキシ酪酸を発酵的に生産する微生物を見
いだし、本発明を完成するに到った。すなわち、本発明
は、Ｒ−β−ヒドロキシ酪酸生産能を有する微生物を栄
養培地中で培養し、培養物からＲ−β−ヒドロキシ酪酸
を採取することを特徴とするＲ−β−ヒドロキシ酪酸の
製造方法である。上記微生物としては、シュ−ドモナス
（ Pseudomonas）属、バークホルデリア(Burkholderia)
属またはアルカリゲネス（ Alcaligenes）属に属する微
生物が挙げられる。また、栄養培地における炭素源とし
ては炭水化物、エタノール、酢酸および油脂類から選ば
れる少なくとも１種類以上を含むものが用いられる。
【０００５】以下、本発明を詳細に説明する。本発明は
多数の微生物が細胞内に貯蔵物質としてポリ−β−ヒド
ロキシ酪酸を生産すること、又、この貯蔵物質が酵素的
に分解され再利用される事を示す多数の文献的知見か
ら、Ｒ−β−ヒドロキシ酪酸を発酵的に生産する微生物
の存在を仮定し、自然界からそれらの微生物の分離を試
みた結果、その分離に成功したものである。
多数の微生物が細胞内に貯蔵物質としてポリ−β−ヒド
ロキシ酪酸を生産すること、又、この貯蔵物質が酵素的
に分解され再利用される事を示す多数の文献的知見か
ら、Ｒ−β−ヒドロキシ酪酸を発酵的に生産する微生物
の存在を仮定し、自然界からそれらの微生物の分離を試
みた結果、その分離に成功したものである。
【０００６】これまでに、シュ−ドモナス属、バークホ
ルデリア属およびアルカリゲネス属に属する微生物がＲ
−β−ヒドロキシ酪酸を産生すること示す報告はなく、
さらにこれらの微生物が炭水化物、アルコール、酢酸、
又は油脂類を炭素源として発酵的に生産したとする報告
はない。特に、これらの方法は通常の方法では製造が困
難な１００％eeと言う高光学純度のＲ−β−ヒドロキシ
酪酸が得られる利点を有する。
ルデリア属およびアルカリゲネス属に属する微生物がＲ
−β−ヒドロキシ酪酸を産生すること示す報告はなく、
さらにこれらの微生物が炭水化物、アルコール、酢酸、
又は油脂類を炭素源として発酵的に生産したとする報告
はない。特に、これらの方法は通常の方法では製造が困
難な１００％eeと言う高光学純度のＲ−β−ヒドロキシ
酪酸が得られる利点を有する。
【０００７】本発明で使用される微生物としては、発明
者らが天然界から新たに分離した FM13、およびTE-5菌
株が挙げられる。これらの菌株の菌学的性質は次の通り
である。 菌学的性質 FM-13株 形態 桿菌 グラム染色性 不定性 (KOH試験 ＋） 芽胞 − 運動性 ＋ オキシダーセ ＋ カタラーゼ ＋ ＯＦ − 生育試験（37℃） − インドール生成 − グルコースから酸の生成 − 酵素活性 アルギニン ジヒドロラーゼ − ウレアーゼ 微弱 リジン脱炭酸酵素 − オルニチン脱炭酸酵素 − ＤＮアーゼ − フェニルアラニン デアミナーゼ − β−ガラクトシダーゼ ＋ 資化性 グルコース ＋ アラビノース ＋ マンノース ＋ マンニトール ＋ Ｎ−アセチルグルコサミン ＋ マルトース − グルコン酸 ＋ カプロン酸 ＋ アジピン酸 − りんご酸 ＋ クエン酸 ＋ フェニル酢酸 ＋ 加水分解 カゼイン − デンプン 微弱 Tween 80 ＋ エスクリン − ゼラチン − 硝酸還元 ＮＯ3→ＮＯ2還元 − ＮＯ2→Ｎ2還元 − チトクローム酸化酵素 ＋ シュークロースからレバン合成 − 色素生成（Kings B 培地） − 抗生物質に対する感受性 ペニシリン Ｇ − ストレプトマイシン ＋ クロラムフェニコール ＋ テトラサイクリン ＋ ノボビオシン − ポリミキシン Ｂ ＋
者らが天然界から新たに分離した FM13、およびTE-5菌
株が挙げられる。これらの菌株の菌学的性質は次の通り
である。 菌学的性質 FM-13株 形態 桿菌 グラム染色性 不定性 (KOH試験 ＋） 芽胞 − 運動性 ＋ オキシダーセ ＋ カタラーゼ ＋ ＯＦ − 生育試験（37℃） − インドール生成 − グルコースから酸の生成 − 酵素活性 アルギニン ジヒドロラーゼ − ウレアーゼ 微弱 リジン脱炭酸酵素 − オルニチン脱炭酸酵素 − ＤＮアーゼ − フェニルアラニン デアミナーゼ − β−ガラクトシダーゼ ＋ 資化性 グルコース ＋ アラビノース ＋ マンノース ＋ マンニトール ＋ Ｎ−アセチルグルコサミン ＋ マルトース − グルコン酸 ＋ カプロン酸 ＋ アジピン酸 − りんご酸 ＋ クエン酸 ＋ フェニル酢酸 ＋ 加水分解 カゼイン − デンプン 微弱 Tween 80 ＋ エスクリン − ゼラチン − 硝酸還元 ＮＯ3→ＮＯ2還元 − ＮＯ2→Ｎ2還元 − チトクローム酸化酵素 ＋ シュークロースからレバン合成 − 色素生成（Kings B 培地） − 抗生物質に対する感受性 ペニシリン Ｇ − ストレプトマイシン ＋ クロラムフェニコール ＋ テトラサイクリン ＋ ノボビオシン − ポリミキシン Ｂ ＋
【０００８】 菌学的性質 TE-5株 形態 桿菌 グラム染色性 − 胞子 − 運動性 ＋ 鞭毛 極多毛 酸素に対する態度 好気性 オキシダーセ ＋ カタラーゼ ＋ ＯＦ ０ 集落の色調 特徴的色素を生成せず 生育試験（40℃） − PHBの蓄積 ＋ プロカテキン酸の開裂 ortho型 キノン系 Ｑ−８
【０００９】以上の菌学的性質を Journal of Applied
Bacteriology 61(4) 299-334(1986); Manual of Nonfer
menting Gram-Negative Bacteria(1985), A Wiley Medi
calPublication; Bergey's Manual of Systematic Bact
eriology, Vol. 1(1984), Williams and Wilkinsに従っ
て分類すると、FM13株はシュードモナス（Pseudomonas)
属に、またBergey's Manual of Systematic Bacteriolo
gy, Vol.1(1984) Williams & Wilkins; Bergey's Manua
l of Determinative Bacteriology, Ninth Edition(199
4) Williams & Wilkins; E. Yabuuchi, et al, Microbi
ol. Immunol.,36, 1251(1992)に従って分類するとTE-5
株はバークホルデリア（Burkholderia）属に各々属する
細菌と同定された。FM-13株は平成７年１２月２７日
に、またTE-5株は平成８年４月１１日に、各々工業技術
院生命工学工業技術研究所（つくば市）にＦＥＲＭ Ｐ
−１５３７９およびＦＥＲＭ Ｐ−１５５５９として寄
託されている。
Bacteriology 61(4) 299-334(1986); Manual of Nonfer
menting Gram-Negative Bacteria(1985), A Wiley Medi
calPublication; Bergey's Manual of Systematic Bact
eriology, Vol. 1(1984), Williams and Wilkinsに従っ
て分類すると、FM13株はシュードモナス（Pseudomonas)
属に、またBergey's Manual of Systematic Bacteriolo
gy, Vol.1(1984) Williams & Wilkins; Bergey's Manua
l of Determinative Bacteriology, Ninth Edition(199
4) Williams & Wilkins; E. Yabuuchi, et al, Microbi
ol. Immunol.,36, 1251(1992)に従って分類するとTE-5
株はバークホルデリア（Burkholderia）属に各々属する
細菌と同定された。FM-13株は平成７年１２月２７日
に、またTE-5株は平成８年４月１１日に、各々工業技術
院生命工学工業技術研究所（つくば市）にＦＥＲＭ Ｐ
−１５３７９およびＦＥＲＭ Ｐ−１５５５９として寄
託されている。
【００１０】さらに、本発明に使用される微生物として
アルカリゲネス（ Alcaligenes）属に属しＲ−β−ヒド
ロキシ酪酸生産能を有する微生物が挙げられる。そし
て、この微生物の具体例としてはアルカリゲネス エウ
トロファス（Alcaligenes eutrophus ）ATCC 12567、及
びアルカリゲネス エウトロファス（Alcaligenes eutr
ophus） ATCC 13533 が挙げられ、これらの菌株はいず
れも公知でありアメリカン タイプカルチャー コレク
ション（Rockvill、Maryland USA）から容易に入手する
ことができる。
アルカリゲネス（ Alcaligenes）属に属しＲ−β−ヒド
ロキシ酪酸生産能を有する微生物が挙げられる。そし
て、この微生物の具体例としてはアルカリゲネス エウ
トロファス（Alcaligenes eutrophus ）ATCC 12567、及
びアルカリゲネス エウトロファス（Alcaligenes eutr
ophus） ATCC 13533 が挙げられ、これらの菌株はいず
れも公知でありアメリカン タイプカルチャー コレク
ション（Rockvill、Maryland USA）から容易に入手する
ことができる。
【００１１】本発明に使用されるシュードモナス属、バ
ークホルデリア属、またはアルカリゲネス属の微生物と
しては、上記菌株に限られるものではなく、シュードモ
ナス属、バークホルデリア属またはアルカリゲネス属に
属しＲ−β−ヒドロキシ酪酸生産能を有する菌株はいず
れも使用できる。
ークホルデリア属、またはアルカリゲネス属の微生物と
しては、上記菌株に限られるものではなく、シュードモ
ナス属、バークホルデリア属またはアルカリゲネス属に
属しＲ−β−ヒドロキシ酪酸生産能を有する菌株はいず
れも使用できる。
【００１２】上記微生物の培養は、炭素源として菌体が
資化し得る炭水化物（グルコース、シュークロース、フ
ラクトース、グリセロール等）、エタノール、酢酸およ
び油脂類（大豆油、椰子油等）を単独、又は混合物とし
て使用し、窒素源としては硫酸アンモニウム、硝酸アン
モニウム、尿素などを、また栄養源としては酵母エキ
ス、麦芽エキス、肉エキス、ペプトンなどを、更に微生
物の生育に必須の塩化マグネシウム、硫酸鉄などの無機
栄養素等を含有する栄養培地を用いて行われる。使用す
る炭素源の濃度は 0.1〜20重量％の範囲である。また、
培養は好気的条件下、pH４〜9.5 、培養温度20〜40℃、
培養時間は２〜14日間である。
資化し得る炭水化物（グルコース、シュークロース、フ
ラクトース、グリセロール等）、エタノール、酢酸およ
び油脂類（大豆油、椰子油等）を単独、又は混合物とし
て使用し、窒素源としては硫酸アンモニウム、硝酸アン
モニウム、尿素などを、また栄養源としては酵母エキ
ス、麦芽エキス、肉エキス、ペプトンなどを、更に微生
物の生育に必須の塩化マグネシウム、硫酸鉄などの無機
栄養素等を含有する栄養培地を用いて行われる。使用す
る炭素源の濃度は 0.1〜20重量％の範囲である。また、
培養は好気的条件下、pH４〜9.5 、培養温度20〜40℃、
培養時間は２〜14日間である。
【００１３】この微生物によるＲ−β−ヒドロキシ酪酸
の生産は、微生物の培養をそのまま継続するか、菌体を
遠心分離などで集菌後、0.01〜0.5M、 pH4〜9.5 のホウ
酸緩衝液、酢酸緩衝液または燐酸緩衝液などの緩衝液に
懸濁し、これに必要に応じて上記の炭素源を添加して好
気的に培養することにより行われる。Ｒ−β−ヒドロキ
シ酪酸の蓄積に伴い、pHが低下するので、水酸化ナトリ
ウム、水酸化カリウム、炭酸カルシウムなどのアルカリ
を用いてpHを４〜9.5 の範囲に調節する必要がある。か
くして、炭素源や栄養源は菌体によりＲ−β−ヒドロキ
シ酪酸に変換され、培養液や菌体懸濁液中に蓄積され
る。生成物の単離は、菌体などの不溶物を除去した溶液
につき、濃縮、イオン交換、電気透析、抽出、蒸留等の
公知の方法を利用して行うことができる。
の生産は、微生物の培養をそのまま継続するか、菌体を
遠心分離などで集菌後、0.01〜0.5M、 pH4〜9.5 のホウ
酸緩衝液、酢酸緩衝液または燐酸緩衝液などの緩衝液に
懸濁し、これに必要に応じて上記の炭素源を添加して好
気的に培養することにより行われる。Ｒ−β−ヒドロキ
シ酪酸の蓄積に伴い、pHが低下するので、水酸化ナトリ
ウム、水酸化カリウム、炭酸カルシウムなどのアルカリ
を用いてpHを４〜9.5 の範囲に調節する必要がある。か
くして、炭素源や栄養源は菌体によりＲ−β−ヒドロキ
シ酪酸に変換され、培養液や菌体懸濁液中に蓄積され
る。生成物の単離は、菌体などの不溶物を除去した溶液
につき、濃縮、イオン交換、電気透析、抽出、蒸留等の
公知の方法を利用して行うことができる。
【００１４】
【発明の実施の形態】次に、本発明を実施例により更に
詳細に説明する。ただし、本発明はこれらの実施例に限
定されるものではない。
詳細に説明する。ただし、本発明はこれらの実施例に限
定されるものではない。
【００１５】〔実施例１〕 (1) 培養 シュードモナス属 sp. FM13 およびアルカリゲネス エ
ウトロファス ATCC 12567 を各々下記の培地で30℃、７
日間好気的に培養した。 培地組成：培地１L （pH7.0 、水道水使用） グリセロール 10 g ＫＨ2ＰＯ4 0.5 g Ｋ2ＨＰＯ4 0.5 g ＭｇＳＯ4・Ｈ2Ｏ 0.5 g ＦｅＳＯ4・Ｈ2Ｏ 5 mg ペプトン 0.1 g チオプロピオンアミド 0.1 g (2) Ｒ−β−ヒドロキシ酪酸の生産反応 上記培養終了液100ml から遠心分離により取得した菌体
を、カリウム燐酸緩衝液（0.01M, pH7.5）で１回洗浄し
た後、0.1Mの同様な緩衝液 100mlに再懸濁した。この懸
濁液を30℃、20時間、好気的にインキュベートした。
ウトロファス ATCC 12567 を各々下記の培地で30℃、７
日間好気的に培養した。 培地組成：培地１L （pH7.0 、水道水使用） グリセロール 10 g ＫＨ2ＰＯ4 0.5 g Ｋ2ＨＰＯ4 0.5 g ＭｇＳＯ4・Ｈ2Ｏ 0.5 g ＦｅＳＯ4・Ｈ2Ｏ 5 mg ペプトン 0.1 g チオプロピオンアミド 0.1 g (2) Ｒ−β−ヒドロキシ酪酸の生産反応 上記培養終了液100ml から遠心分離により取得した菌体
を、カリウム燐酸緩衝液（0.01M, pH7.5）で１回洗浄し
た後、0.1Mの同様な緩衝液 100mlに再懸濁した。この懸
濁液を30℃、20時間、好気的にインキュベートした。
【００１６】(3) Ｒ−β−ヒドロキシ酪酸の定量 培養液、又は菌体懸濁液中のＲ−β−ヒドロキシ酪酸の
定量は、遠心分離により菌体を除去した後、その上清を
ガスクロマトグラフィー（GLサイエンス社OV-17 充填カ
ラム、カラム温度：110 ℃、キャリャー：Ｎ2ガス）に
より分析した。
定量は、遠心分離により菌体を除去した後、その上清を
ガスクロマトグラフィー（GLサイエンス社OV-17 充填カ
ラム、カラム温度：110 ℃、キャリャー：Ｎ2ガス）に
より分析した。
【００１７】(4) 光学純度の分析 培養液、又は菌体懸濁から遠心分離により菌体を除去し
た後、その上清１０ ｍｌを塩酸酸性下に２ｍｌの酢酸
エチルで抽出した。酢酸エチルを減圧除去し、ジアゾメ
タンによるメチル化、（−）−α−メトキシ−α−トリ
フルオローメチルフェニルアセチルクロライドによるア
セチル化を順次行った後、過剰量のＮ，Ｎ−ジエチル−
１，３−プロパンジアミン処理を室温で行った。これを
５ml蒸留水にて抽出し、水層部から液体クロマトグラフ
ィー（カラム：Sep-Pak C18, 30ml 蒸留水で洗浄、２ml
メタノールで抽出）にて目的物を分取し、光学純度測定
用のサンプルに供した。光学純度の測定は液体クロマト
グラフィー（カラム：YMC-PACICD-ODS-5、キャリアー：
アセトニトリル 20％、トリフルオロ酢酸 0.1％、ＫＨ
2ＰＯ4５mM, Ｈ3ＰＯ4５mM, pH 2.9）を用いて行った。
た後、その上清１０ ｍｌを塩酸酸性下に２ｍｌの酢酸
エチルで抽出した。酢酸エチルを減圧除去し、ジアゾメ
タンによるメチル化、（−）−α−メトキシ−α−トリ
フルオローメチルフェニルアセチルクロライドによるア
セチル化を順次行った後、過剰量のＮ，Ｎ−ジエチル−
１，３−プロパンジアミン処理を室温で行った。これを
５ml蒸留水にて抽出し、水層部から液体クロマトグラフ
ィー（カラム：Sep-Pak C18, 30ml 蒸留水で洗浄、２ml
メタノールで抽出）にて目的物を分取し、光学純度測定
用のサンプルに供した。光学純度の測定は液体クロマト
グラフィー（カラム：YMC-PACICD-ODS-5、キャリアー：
アセトニトリル 20％、トリフルオロ酢酸 0.1％、ＫＨ
2ＰＯ4５mM, Ｈ3ＰＯ4５mM, pH 2.9）を用いて行った。
【００１８】(5) 結果 菌体懸濁液中に生産されたＲ−β−ヒドロキシ酪酸の定
量と光学純度の分析を行った結果を以下に示す。また、
生成物はガスマススペクトルと FABマススペクトルによ
り同定し、βーヒドロキシ酪酸であることを確認した。
量と光学純度の分析を行った結果を以下に示す。また、
生成物はガスマススペクトルと FABマススペクトルによ
り同定し、βーヒドロキシ酪酸であることを確認した。
【００１９】
【００２０】〔実施例２〕 (1) 培養 シュードモナス属 sp. FM13 、アルカリゲネス エウト
ロファス ATCC 12567およびアルカリゲネス エウトロ
ファス ATCC 13533 を下記の栄養培地で３日間培養した
後、更に無窒素培地で４日間、各々好気的に培養（30
℃）した。
ロファス ATCC 12567およびアルカリゲネス エウトロ
ファス ATCC 13533 を下記の栄養培地で３日間培養した
後、更に無窒素培地で４日間、各々好気的に培養（30
℃）した。
【００２１】栄養培地：培地100 ml（pH7.0 、蒸留水使
用） 酵母エキス 1 g ペプトン 1 g 肉エキス ０．５ ｇ 硫酸アンモニウム ０．５ ｇ 無窒素培地：培地１L （pH7.0 、蒸留水使用） フラクトース 20 g Ｎａ2ＨＰＯ4 1.51 g ＫＨ2ＰＯ4 2.65 g ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ 0.2 g 微量元素溶液 1 ml 微量元素溶液：FeCl3、CaCl2, CoCl2, NiCl2, CuSO4, C
rCl3を含む
用） 酵母エキス 1 g ペプトン 1 g 肉エキス ０．５ ｇ 硫酸アンモニウム ０．５ ｇ 無窒素培地：培地１L （pH7.0 、蒸留水使用） フラクトース 20 g Ｎａ2ＨＰＯ4 1.51 g ＫＨ2ＰＯ4 2.65 g ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ 0.2 g 微量元素溶液 1 ml 微量元素溶液：FeCl3、CaCl2, CoCl2, NiCl2, CuSO4, C
rCl3を含む
【００２２】(2) Ｒ−β−ヒドロキシ酪酸の生産反応 無窒素培地で培養した培養液より、実施例１に示した方
法で菌体懸濁液を作成した。この菌体懸濁液に対しグル
コースを 50 mM添加し、30℃、40時間、好気的にインキ
ュベートした。
法で菌体懸濁液を作成した。この菌体懸濁液に対しグル
コースを 50 mM添加し、30℃、40時間、好気的にインキ
ュベートした。
【００２３】(3) 結果 実施例１と同様な操作により、菌体懸濁液中に生産され
たＲ−β−ヒドロキシ酪酸の定量分析を行った。結果を
以下に示す。
たＲ−β−ヒドロキシ酪酸の定量分析を行った。結果を
以下に示す。
【００２４】
【００２５】〔実施例３〕 (1) 培養および生産反応 バークホルデリア属 sp. TE-5を実施例２に示した方法
で培養し、同様に生産反応を行った。 (2) 結果 菌体懸濁液中に生産されたＲ−β−ヒドロキシ酪酸の光
学純度、および定量分析は実施例１に従って行った。
で培養し、同様に生産反応を行った。 (2) 結果 菌体懸濁液中に生産されたＲ−β−ヒドロキシ酪酸の光
学純度、および定量分析は実施例１に従って行った。
【００２６】
【００２７】
【発明の効果】本発明により安価な炭水化物から微生
物、特にシュードモナス属、バークホルデリア属または
アルカリゲネス属の属する微生物を用いて発酵により直
接高い光学純度のＲ−β−ヒドロキシ酪酸を製造する方
法が提供される。
物、特にシュードモナス属、バークホルデリア属または
アルカリゲネス属の属する微生物を用いて発酵により直
接高い光学純度のＲ−β−ヒドロキシ酪酸を製造する方
法が提供される。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:01） (Ｃ１２Ｐ 7/42 Ｃ１２Ｒ 1:05） Ｃ０７Ｍ 7:00
Claims (3)
- 【請求項１】 Ｒ−β−ヒドロキシ酪酸生産能を有する
微生物を栄養培地中で培養し、培養物からＲ−β−ヒド
ロキシ酪酸を採取することを特徴とするＲ−β−ヒドロ
キシ酪酸の製造方法。 - 【請求項２】 Ｒ−β−ヒドロキシ酪酸生産能を有する
微生物が、シュ−ドモナス（Pseudomonas）属、バーク
ホルデリア（Burkholderia）属またはアルカリゲネス
（Alcaligenes）属に属する微生物であることを特徴と
する請求項１記載のＲ−β−ヒドロキシ酪酸の製造法。 - 【請求項３】 栄養培地における炭素源が炭水化物、エ
タノール、酢酸および油脂類から選ばれる少なくとも１
種類以上を含むものであることを特徴とする請求項１記
載のＲ−β−ヒドロキシ酪酸の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP15129896A JPH09234091A (ja) | 1995-12-28 | 1996-06-12 | 発酵法によるＲ−β−ヒドロキシ酪酸の製造法 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7-343437 | 1995-12-28 | ||
| JP34343795 | 1995-12-28 | ||
| JP15129896A JPH09234091A (ja) | 1995-12-28 | 1996-06-12 | 発酵法によるＲ−β−ヒドロキシ酪酸の製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09234091A true JPH09234091A (ja) | 1997-09-09 |
Family
ID=26480596
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP15129896A Pending JPH09234091A (ja) | 1995-12-28 | 1996-06-12 | 発酵法によるＲ−β−ヒドロキシ酪酸の製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH09234091A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1999029889A1 (en) * | 1997-12-09 | 1999-06-17 | Lg Chemical Ltd. | A method for producing hydroxycarboxylic acids by auto-degradation of polyhydroxyalkanoates |
| WO2001088145A1 (en) * | 2000-05-16 | 2001-11-22 | Korea Advanced Institute Of Science And Technology | Recombinant microorganism expressing polyhydroxyalkanoate biosynthesis enzyme and intracellular pha depolymerase |
-
1996
- 1996-06-12 JP JP15129896A patent/JPH09234091A/ja active Pending
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1999029889A1 (en) * | 1997-12-09 | 1999-06-17 | Lg Chemical Ltd. | A method for producing hydroxycarboxylic acids by auto-degradation of polyhydroxyalkanoates |
| US6472188B1 (en) * | 1997-12-09 | 2002-10-29 | Chirobio Inc. | Method for producing hydroxycarboxylic acids by auto-degradation of polyhydroxyalkanoates |
| WO2001088145A1 (en) * | 2000-05-16 | 2001-11-22 | Korea Advanced Institute Of Science And Technology | Recombinant microorganism expressing polyhydroxyalkanoate biosynthesis enzyme and intracellular pha depolymerase |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0666320B1 (en) | Process for producing alpha-hydroxy acid or alpha-hydroxyamide by microorganisms | |
| JP2974737B2 (ja) | 光学活性乳酸の製造法 | |
| JP2844354B2 (ja) | Ｄ―パントラクトンの製造法 | |
| JPH07289284A (ja) | 光学活性４−ヒドロキシ−２−ケトグルタル酸の製造法 | |
| Lanzilotta et al. | Microbial reduction of ketopantoyl lactone to pantoyl lactone | |
| JP2840722B2 (ja) | ４‐ハロ‐３‐ヒドロキシブチロニトリルの製造法 | |
| JP2017012117A (ja) | ３−ヒドロキシ酪酸又はその塩の好気的生産方法 | |
| US5238827A (en) | Process for preparing glycine from glycinonitrile | |
| JP3014171B2 (ja) | ４−ハロ−３−ヒドロキシブチルアミドの製造法 | |
| JP3249566B2 (ja) | Ｓ−（＋）−２，２−ジメチルシクロプロパンカルボキサミドの生物工学的製造方法 | |
| JP2000245495A (ja) | Ｒ−３−キヌクリジノールの製造方法 | |
| JPH09234091A (ja) | 発酵法によるＲ−β−ヒドロキシ酪酸の製造法 | |
| US4540665A (en) | Process for producing D-β-hydroxyalkanoic acid | |
| US6379935B1 (en) | Method of producing α-halo-α,β-saturated carbonyl compounds from the corresponding α,β-unsaturated compounds | |
| JP2991395B2 (ja) | ５−アミノレブリン酸生産微生物および５−アミノレブリン酸の製造方法 | |
| JP4269416B2 (ja) | α−ハロ−α，β−飽和カルボニル化合物の製造方法 | |
| JP2563074B2 (ja) | 天然型β−フェネチルアルコールの製造法 | |
| JPH08196288A (ja) | 長鎖脂肪酸の製造法 | |
| JP3976355B2 (ja) | α−ヒドロキシ−４−メチルチオ酪酸の製造方法 | |
| JP2983695B2 (ja) | ４−ハロ−３−ヒドロキシ酪酸の製造法 | |
| JP2587183B2 (ja) | 微生物による片末端モノカルボン酸の製造方法 | |
| WO1992018637A1 (en) | Method for the production of d-gluconic acid | |
| JP2530984B2 (ja) | 微生物による片末端モノカルボン酸及びその塩の製造方法 | |
| JP2946055B2 (ja) | 光学活性（ｓ）‐（＋）‐３‐ハロ‐１，２―プロパンジオールの製造法 | |
| JPH104991A (ja) | 新規３−ヒドロキシ酪酸オリゴマー、およびそれらの製造法 |