JPH09124627A - 抗ａｉｄｓ活性を有する不可逆的ｈｉｖプロテアーゼ阻害剤およびその製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）プロテアー
ゼ阻害剤として有用な新規化合物およびその製造方法、
並びに前記化合物を有効成分として含有するＡＩＤＳま
たはＨＩＶ感染疾患の治療または予防用医薬組成物を提
供する。 【解決手段】 下記式（Ｉ）の化合物。 【化１】

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、ヒト免疫不全ウイ
ルス（ＨＩＶ）プロテアーゼを阻害する新規な化合物と
その製造方法、そして前記化合物を有効成分として含
む、ＨＩＶ感染で生じる後天性免疫不全症候群（ＡＩＤ
Ｓ）の治療または予防のための組成物に関する。

【０００２】

【従来の技術】ＨＩＶは、ＡＩＤＳを起こすレトロウイ
ルスである。レトロウイルスは遺伝情報物質であるＲＮ
Ａと、このＲＮＡから逆にＤＮＡを作り得る逆転写酵素
とを有するが、このＲＮＡと逆転写酵素はエンベロープ
蛋白によって取り囲まれており、その外側には脂質膜が
保護膜として形成されている。この脂質膜にはｇｐ１２
０及びｇｐ４０とよばれる糖蛋白が付着しているが、ウ
イルスがＴ細胞を認識して感染する際、ｇｐ１２０蛋白
が決定的な役割をすることが知られている。

【０００３】ウイルスの感染機序が複雑であるほど、そ
れに対する防御方法が開発される可能性が高まるが、多
数のウイルス中もっとも複雑な形態の複製機構を有して
いるＨＩＶの場合も色々な形態の治療剤が開発され、こ
のうちもっともよく知られている治療剤は逆転写酵素阻
害剤である。逆転写酵素は、ＲＮＡからＤＮＡを複製す
る酵素であり、これはＲＮＡウイルス、即ちレトロウイ
ルスのみに存在する。このようにレトロウイルスのみに
存在する逆転写酵素を阻害する化合物は、副作用を最少
に止めながらＨＩＶを無力化させ得ると期待され、これ
に基いて多数の逆転写酵素阻害剤が開発された。例え
ば、バロ−ズウェルカム社（Ｂｕｒｒｏｗｓ Ｗｅｌｌ
ｃｏｍｅ）のアジドチミジン（ａｚｉｄｏｔｈｙｍｉｄ
ｉｎｅ（ＡＺＴ））とブリストル−マイヤーズスクイブ
社（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｅｙｅｒｓ−Ｓｑｕｉｂｂ）の
２、３′−ジデオキシイノシン（ＤＤＩ）、そしてホフ
マン−ラロシュ社（Ｈｏｆｆｍａｎｎ ＬａＲｏｃｈ
ｅ）の２、３′−ジデオキシシトシン（ＤＤＣ）および
グラクソ社のＤ４Ｔなどがこの種類に該当する。しか
し、現在用いている化合物の大部分は細胞への感染を防
ぐだけであり、感染した細胞内でのウイルス複製は防ぐ
ことができない。このため、疾病を完全に治療するとい
うより生命をある程度延長する効果があるだけであり、
しかも血小板数の減少、骨髄血球の減少などの副作用を
惹起させる他に、これら化合物に耐性が生じたウイルス
も多く発見されている。

【０００４】ＨＩＶ感染疾患の他の治療剤はＨＩＶプロ
テアーゼ阻害剤である。ＨＩＶはエンベロープ蛋白と必
要な酵素を作る際、これらをｍＲＮＡから別々に合成せ
ず、エンベロープ蛋白と酵素などが全て一緒に結合して
いる長い形態のプロプロテイン（ｐｒｏｐｒｏｔｅｉ
ｎ）であるｇａｇ−蛋白質（ｐ５５）またはｇａｇ−Ｐ
ｏｌ蛋白質（ｐ１６５）を先ず作る。その後、このプロ
プロテインが内在するプロテアーゼによってエンベロー
プ蛋白と逆転写酵素、及びインテクラーゼなどのウイル
ス形成に必要な酵素に分解される。この分解過程を担当
するプロテアーゼを阻害すればウイルスの複製が中断さ
れるが、プロテアーゼ阻害剤はこのような原理を基にし
たものである。ＨＩＶプロテアーゼは９９個のアミノ酸
で構成され、二つの同一の単量体で構成される二量体の
形態で存在しており、各単量体の分子量は１０７９３で
ある。ＨＩＶプロテアーゼは反応部位にＡｓｐ−Ｔｈｒ
−Ｇｌｙの配列を有する典型的なアスパラギンプロテア
ーゼ（ａｓｐａｒｔｉｃ ｐｒｏｔｅａｓｅ）である。

【０００５】ＨＩＶプロテアーゼ阻害剤の開発は他の種
類のアスパラギンプロテアーゼ、特にレニン（ｒｅｎｉ
ｎ）阻害剤の開発動向に従っている。その基本的なアプ
ローチは、酵素に対する高い親和性を有する遷移状態に
類似した化合物（ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ ｓｔａｔｅ
ａｎａｌｏｇｕｅ，ＴＳＡ）を開発して酵素に対する結
合力を高めるものである。このような方法で開発された
ＨＩＶプロテアーゼ阻害剤が多数の文献に開示されてい
る（Ｒｏｂｅｒｔｓ，ら，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４８，３
５８（１９９０）；ヨーロッパ特許公開第０３３７７１
４，０３４６８４７，３５６２２３，３５２０００，３
５７３３２，３６２００２および３６１３４１号；Ｂｏ
ｎｅら，ＪＡＣＳ，１１３，９３８２（１９９１））。
これら公知のＨＩＶプロテアーゼ阻害剤は全て酵素との
親和性を高めた可逆的阻害剤である。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、不可
逆的にヒト免疫不全ウイルスプロテアーゼを阻害する新
規化合物およびその製造方法を提供することにある。

【０００７】また、本発明の他の目的は、前記化合物を
有効成分として含む、後天性免疫不全症候群すなわちＨ
ＩＶ感染の予防または治療に有用な組成物を提供するこ
とにある。

【０００８】

【課題を解決するための手段】前記目的に従って、本発
明では官能性アミン誘導体が導入されたシス−エポキシ
ド構造を有する下記式（Ｉ）の化合物およびその薬剤学
的に許容可能な塩、水和物および溶媒和物を提供する：

【化３】

【０００９】

【発明の実施の形態】本発明による化合物は不斉炭素を
有していてもよく、ラセミ化合物、ジアステレオマー混
合物および個々のジアステレオマーとして存在すること
ができ、これら全ての形態の異性体は本発明に含まれ
る。

【００１０】本発明による式（Ｉ）の化合物は下記スキ
ーム１に図示されたように製造することができる。

【００１１】

【化４】 前記スキーム１によれば、式（II）の化合物を式（III
）の化合物とカップリングさせて式（IV）の化合物を
得た後、この化合物をエポキシ化して式（Ｖ）の化合物
を得る。次に、式（Ｖ）の化合物からベンジルオキシカ
ボニル保護基を除いた後、式（VI）の化合物をカップリ
ングさせて目的とする式（Ｉ）の化合物を得る。

【００１２】スキーム１のカップリング反応にはカップ
リング試薬として例えば、ジシクロヘキシルカルボジイ
ミド（ＤＤＣ）、３−エチル−３′−（ジメチルアミ
ノ）−プロピルカルボジイミド（ＥＤＣ）、ビス−（２
−オキソ−３−オキサゾリジニル）−ホスフィン酸塩化
物（ＢＯＰ−Ｃｌ）、ジフェニルホスホリルアジド（Ｄ
ＰＰＡ）などを使用し得るが、これらに限られるもので
はない。前記式（II）のカルボン酸はハロゲン化物また
は活性エステル誘導体に転換させた後カップリング反応
させることもできる。酸ハロゲン化物誘導体としては酸
塩化物が含まれ、活性エステル誘導体は、アミンとのカ
ップリング反応によってアミド結合を、またはアルコー
ルとのカップリング反応によってエステル結合を形成す
る際にカルボキシル基の活性化に常用されるもので、例
えば、塩化メトキシカルボニル、塩化イソブトキシカル
ボニルのような塩化アルコキシカルボニルと、カルボン
酸無水物、Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール、Ｎ−ヒ
ドロキシフタルイミド、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミ
ド、Ｎ−ヒドロキシ−５−ノルボルネン−２、３−ジカ
ルボキシアミドおよび２、４、５−トリクロロフェノー
ルから誘導されたエステルが含まれるが、これらに限ら
れるものではない。

【００１３】エポキシ化反応はメタクロロペルオキシ安
息香酸を使用して通常の方法によって実施することがで
きる。ベンジルオキシカルボニル保護基の離脱反応もや
はり常法によって、例えばＰｄ／Ｃ触媒存在下、水素加
圧下で反応させてベンジルオキシカルボニル基を除くこ
とができる。

【００１４】一方、式（II）の化合物はシス−β、γ−
オレフィン酸化合物として、文献［Ｋｅｉｎａｎら，Ｔ
ｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，４７，４６３１−４６３８（１
９９１）；ａｎｄ Ｃｏｒｅｙ ＆ Ｓｈｉｍａｊｉ，
Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１０５，１６６２−１
８８４（１９８３）］に記述されている方法を応用した
ヨーロッパ特許公開第０６０１４８６ Ａ１号の方法に
よって製造することができる。

【００１５】本発明において、Ｃ−末端およびＮ−末端
に導入される官能性アミン（III ）および官能性カルボ
ン酸（VI）は下記スキーム２および３に図示されたよう
に製造し得る。

【００１６】

【化５】 前記スキーム２は、文献［Ｗｅｉｎｒｅｂ ら，Ｔｅｔ
ｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．，２２，３８１５（１９
８１）］に記述された方法によって製造されたＮ，Ｏ−
ジメチルアミドをグリニャール反応および保護基離脱反
応によって式（III ）の官能性アミンを製造する過程で
ある。

【００１７】下記スキーム３は、Ｌ−ペニシラミンのメ
ルカプト基をメチル化し、クロロギ酸イソプロピルをも
ってアミン基を保護した後、オキソン（ｏｘｏｎｅ）と
反応させて式（VI）のスルホン化合物を製造する過程を
示す。

【００１８】

【化６】 本発明の化合物は、１日体重１ｋｇ当り５ないし３０ｍ
ｇの量を一回または数回にわけて投与することができ、
特定の患者に対する投与量は体重、性別、健康状態、食
事、投与時間、投与方法、排泄率、薬剤混合および症状
によって調節され得る。

【００１９】本発明の化合物は、目的によって非経口投
与または経口投与することができる。注射用製剤、例え
ば滅菌注射用水性もしくは油性懸濁液は通常の技術によ
って適正な分散剤、水和剤または懸濁化剤を使用して製
造し得る。使用し得る溶媒はポリエチレングリコール、
エチレングリコール、ポリプロピレングリコール、エタ
ノールなどである。

【００２０】経口投与用の固形製剤はカプセル剤、錠
剤、丸剤、散剤および顆粒剤などの形態で作られるが、
化合物の特性を考慮するとカプセル剤が特に好ましく、
錠剤の場合は腸溶被剤の形態で製造することが好まし
い。固形投与形態には、活性化合物に加えて、ショ糖、
乳糖または澱粉のような一以上の不活性希釈剤およびス
テアリン酸マグネシウムのような潤滑剤を含め得る。

【００２１】本発明の化合物は他の抗ＡＩＤＳ剤、免疫
調節剤などと一緒に投与し得る。

【００２２】ＨＩＶ感染の治療および予防のための本発
明の化合物の製剤は上述したものに限定されず、ＨＩＶ
感染の治療および予防に有効な他の剤形も含まれる。

【００２３】

【実施例】以下、製造例および実施例に基づいて本発明
をより具体的に説明する。下記の実施例は本発明による
新規化合物を理解するための例示であって、本発明の範
囲を制限するものではない。

【００２４】＜製造例１：（Ｓ）−５−［（Ｎ−ベンジ
ルオキシカルボニル）アミノ］−６−フェニル−ヘキス
−３−（シス）−エン−１−カルボニル酸（化合物（I
I））の製造＞ １−１） ５−Ｌ−（Ｎ−ベンジルオキシカルボニル）
アミノ−６−フェニル−ヘキス−３−（シス）−エニル
−４′−メチル−２′，６′，７′−トリオキサ−ビシ
クロ［２′，２′，２′］−オキセタンの製造 ケイナンらの方法（Ｋｅｉｎａｎら，Ｔｅｔｒａｈｅｄ
ｒｏｎ，２６，４６３１−４６３８（１９９１））によ
って合成された臭化１−（２−トリフェニルホスホニウ
ム−メチル）−４′−メチル−２′，６′，７′−トリ
オキサ−ビシクロ［２′，２′，２′］−オキセタン６
０．８９ｇ（０．１２モル）を４００ｍｌのテトラヒド
ロフランに溶かし、−７８℃で撹拌した後、２２０ｍｌ
（０．１モル）のカリウムヘキサメチルジシラザン０．
５Ｍ溶液を加え１時間−７８℃で撹拌した。Ｌ−（Ｎ−
ベンジルオキシカルボニル）フェニルアラニナール３０
ｇ（０．１０６モル）をテトラヒドロフラン１５０ｍｌ
に溶かして−７８℃に維持した。これを前記溶液に２０
分にわたって徐々に加え、−７８℃で１時間、次いで常
温で１時間撹拌した後、水を加え反応を終結させた。溶
媒を除去した後、残留物を酢酸エチルに溶かし、ＮａＨ
ＣＯ₃ 飽和溶液と水で洗浄し、有機層を無水ＭｇＳＯ₄
で乾燥させ、カラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢
酸エチル：トリエチルアミン＝７０：３０：５）を行っ
て３６．５ｇ（収率８４％）の標記化合物を得た。

【００２５】¹Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃ ）：δ ０．８
（ｓ，３Ｈ），２．２−３．０（ｍ，４Ｈ），３．９
（ｓ，６Ｈ），４．６（ｍ，１Ｈ），４．８（ｂｒ，１
Ｈ），５．０５（ｓ，２Ｈ），５．４−５．６（ｍ，２
Ｈ），７．１−７．５（ｍ，１０Ｈ） ［α］_D ＝＋２５．２（Ｃ＝０．５０，メタノール） １−２） （Ｓ）−５−［（Ｎ−ベンジルオキシカルボ
ニル）アミノ］−６−フェニル−ヘキス−３−（シス）
−エン−１−カルボン酸の製造 製造例１−１）で得た化合物２．５ｇ（６ミリモル）を
１％未満の濃塩酸を含むｔ−ブタノールと水の混合溶液
に溶解し、溶媒の還流温度で約２０時間撹拌した。その
後、溶媒を減圧留去し、Ｋ₂ ＣＯ₃ 溶液を加えてｐＨを
９以上に調節し、酢酸エチルで洗浄した。水層をｐＨ２
で合わせた後、酢酸エチルで抽出し、無水ＭｇＳＯ₄ 上
で乾燥した後、有機溶媒を除去して１．６２ｇ（収率８
０％）の標記化合物を得た。

【００２６】¹Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃ ）：δ ２．７
−３．３（ｍ，４Ｈ），４．６（ｍ，１Ｈ），４．８
（ｂｒ，１Ｈ），５．０５（ｓ，２Ｈ），５．４（ｔ，
１Ｈ），５．６（ｍ，１Ｈ），７．１−７．５（ｍ，１
０Ｈ） Ｍａｓｓ（ＦＡＢ，ｍ／ｅ）３４０（Ｍ＋１） ＜製造例２：（２Ｓ）−１−フェニル−３−メチル−２
−アミノ−１−ブタノン（化合物（III ））の製造＞ ２−１）（２Ｓ）−［（Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル）
アミノ］−１−フェニル−３−メチル−１−ブタノンの
製造 Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−Ｎ′−メトキシ−Ｎ′−
メチル−Ｄ−バリンアミド９．２ｇ（３７．４ミリモ
ル）を１２０ｍｌの無水テトラヒドロフランに溶かした
後、５６．１ｍｌ（１１２．２ミリモル）の２Ｍ塩化フ
ェニルマグネシウムテトラヒドロフラン溶液を０℃で加
えた。常温で１２時間撹拌した後、０℃で水を加えて反
応を終結させ、溶媒を減圧留去した後、塩化メチレン６
００ｍｌを加えて希釈し、アンモニウムクロライド溶液
（３×４００ｍｌ）で洗浄した。有機層を無水ＭｇＳＯ
₄ 上で乾燥させ、溶媒を減圧留去した後、カラムクロマ
トグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝９：１）を行っ
て標記化合物７．５ｇ（収率７２％）を得た。

【００２７】¹Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃ ）：δ ０．８
５（ｄ，３Ｈ），１．１１（ｄ，３Ｈ），１．５５
（ｓ，９Ｈ），２．２３（ｍ，１Ｈ），５．３１（ｍ，
１Ｈ），５．５０（ｍ，１Ｈ），７．５１−８．１２
（ｍ，５Ｈ） ２−２）（２Ｓ）−１−フェニル−３−メチル−２−ア
ミノ−１−ブタノンの製造 前記製造例２−１）の生成物７．５ｇを２００ｍｌのジ
クロロメタンに溶かした後、１００ｍｌのトリフルオロ
酢酸を加え常温で１２時間撹拌した。溶媒を減圧留去し
た後、不純物を除くために１００ｍｌの水とエーテルを
添加し、有機層を除去した。次いで水層に酢酸エチル１
５０ｍｌを添加し、飽和炭酸カリウム水溶液でｐＨを１
２以上に高めた後、標記化合物３．８ｇ（収率７９％）
を酢酸溶液から単離した。

【００２８】¹Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃ ）：δ ０．７
８（ｄ，３Ｈ），１．１０（ｄ，３Ｈ），１．７２
（ｓ，２Ｈ），２．１５（ｍ，１Ｈ），４．３３（ｄ，
１Ｈ），７．５０−７．９１（ｍ，５Ｈ） ＜製造例３：［（５Ｓ）−［（Ｎ−ベンジルオキシカル
ボニル）アミノ］−６−フェニル−３−（シス）−エン
−１−ヘキサノイル］−［（２Ｓ）−（１−フェニル−
３−メチル−１−オキソ）ブチルアミノ］アミド（化合
物（IV））の製造＞ ５．３５ｇ（１５．８ミリモル）の製造例２で得られた
生成物にそれぞれ１．２当量のＥＤＣ，ＨＯＢＴおよび
トリエチルアミンを加え、１５０ｍｌのジメチルホルム
アミドに溶解した後、製造例１で得られた生成物２．８
ｇ（１５．８ミリモル）を０℃で加えて常温で１６時間
撹拌した。溶媒を減圧留去した後、酢酸エチルに溶か
し、ＮａＨＣＯ₃ 飽和溶液で洗浄した。有機層を無水Ｍ
ｇＳＯ₄ 上で乾燥し、溶媒を減圧留去した後、カラムク
ロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン＝１：４）を
行って標記化合物６．１ｇ（収率７７％）を得た。

【００２９】¹Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃ ）：δ ０．８
５（ｄ，３Ｈ），１．０４（ｄ，３Ｈ），２．２４
（ｍ，１Ｈ），２．８１−２．９９（ｍ，４Ｈ），３．
７５（ｍ，１Ｈ），５．０１（ｍ，１Ｈ），５．１３
（ｍ，２Ｈ），５．４５（ｔ，１Ｈ），５．５９（ｍ，
１Ｈ），５．６９（ｍ，１Ｈ），７．０１（ｍ，１
Ｈ），７．１７−８．０１（ｍ，１５Ｈ） ＜製造例４：［（５Ｓ）−［（Ｎ−ベンジルオキシカル
ボニル）アミノ］−（４Ｒ，３Ｓ）−エポキシ−６−フ
ェニル−１−ヘキサノイル］−［（２Ｓ）−（１−フェ
ニル−３−メチル−１−オキソ）ブチルアミノ］アミド
（化合物（Ｖ））の製造＞ 製造例３の生成物３．１ｇ（６．２２ミリモル）を１５
０ｍｌのジクロロメタンに溶かし、２当量のメタクロロ
ペルオキシ安息香酸を加えた後、常温で１８時間撹拌し
た。１００ｍｌの１０％Ｎａ₂ Ｓ₂ Ｏ₃ 溶液を添加して
３０分間撹拌した後、有機層をＮａＨＣＯ₃ 飽和溶液で
洗浄した。有機層を無水ＭｇＳＯ₄ 上で乾燥し、溶媒を
除去して標記化合物２．５ｇ（収率８０％）を得た。

【００３０】¹Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃ ）：δ ０．７
５（ｄ，３Ｈ），１．０２（ｄ，３Ｈ），２．０１
（ｍ，１Ｈ），２．１４−２．４０（ｍ，２Ｈ），２．
８２−３．１５（ｍ，３Ｈ），３．３１（ｍ，１Ｈ），
３．８０（ｍ，１Ｈ），５．０５（ｄ，１Ｈ），５．１
３（ｓ，２Ｈ），５．６１（ｍ，１Ｈ），６．６１
（ｄ，１Ｈ），７．１５−８．００（ｍ，１５Ｈ） ＜製造例５：Ｎ−イソプロピルオキシカルボニル−β−
メタンスルホニル−Ｌ−バリン（化合物（VI））の製造
＞ ５−１）Ｎ−イソプロピルオキシカルボニル−β−（Ｓ
−メチル）−Ｌ−バリンの製造 β−メルカプト−Ｌ−バリン４．５ｇ（３０ミリモル）
をジオキサン６０ｍｌと水２０ｍｌの混合物に添加し、
０℃に冷却した後、６Ｎ水酸化ナトリウム水溶液１０ｍ
ｌを加えて溶解した。この溶液にヨードメタン４．６２
ｇ（３３ミリモル）を加え、フラスコに蓋をした後、０
℃で３時間、次いで常温で２時間反応させた。この反応
物を０℃に冷却し、６Ｎ水酸化ナトリウム水溶液５ｍｌ
とクロロギ酸イソプロピルの１Ｍトルエン溶液４０ｍｌ
を徐々に加えた。反応物を０℃で１時間、次いで常温で
２時間撹拌した後、反応を終結させた。溶媒を減圧留去
した後、未反応クロロギ酸イソプロピルを除去するため
に５０ｍｌの水とエーテルを加え、有機層を除去した。
水層に酢酸エチル１０ｍｌを添加し、６Ｎ塩酸でｐＨを
３以下に調節した。有機層を分離した後、無水ＭｇＳＯ
₄ 上で乾燥し、溶媒を減圧留去して標記化合物５．５ｇ
（収率７３％）を得た。

【００３１】¹Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃ ）：δ １．３
０（ｓ，６Ｈ），１．４８（ｓ，６Ｈ），２．１３
（ｓ，３Ｈ），４．４１（ｍ，１Ｈ），４．９９（ｍ，
１Ｈ），５．６１（ｍ，１Ｈ），８．５０（ｂｒ，１
Ｈ） ５−２）Ｎ−イソプロピルオキシカルボニル−β−メタ
ンスルホニル−Ｌ−バリンの製造 １５０ｍｌのメタノールに製造例５−１）の生成物５．
５ｇ（２２ミリモル）を溶かし０℃に冷却した。この溶
液にオキソン３当量を加え３時間反応させた。反応終了
後、溶媒を減圧留去し、酢酸エチル２００ｍｌと水１０
０ｍｌとを加え、有機層を分離した。その後、無水Ｍｇ
ＳＯ₄ 上で乾燥させ、溶媒を減圧留去して標記化合物
５．７ｇ（収率９２％）を得た。

【００３２】¹Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃ ）：δ １．２
７（ｍ，６Ｈ），１．５３（ｓ，３Ｈ），１．６１
（ｓ，３Ｈ），２．９９（ｓ，３Ｈ），３．６１−３．
９２（ｂｒ，１Ｈ），４．７２（ｍ，１Ｈ），４．９８
（ｍ，１Ｈ），５．９７（ｂｒ，１Ｈ） ＜実施例１：［（５Ｓ）−［（Ｎ−イソプロピルオキシ
カルボニル−β−メタンスルホニル−Ｌ−バリニル］ア
ミノ］−（４Ｒ，３Ｓ）−エポキシ−６−フェニル−１
−ヘキサノイル］［（２Ｓ）−（１−フェニル−３−メ
チル−１−オキソ）ブチルアミノ］アミドの製造＞ 製造例４の生成物２００ｍｇ（０．３９ミリモル）を２
０ｍｌのメタノールに溶かした後、１０重量％の１０％
Ｐｄ／Ｃを混合し、水素雰囲気で２時間撹拌した。反応
溶液をセライトに通過させて触媒を除いた後、溶媒を減
圧留去して保護基を除いたアミノ化合物を得た。１１０
ｍｇ（０．３９ミリモル）の製造例５の生成物を５００
ｍｌのジメチルホルムアミドに溶かした後、１当量の４
−メチルモルホリン（３９ｍｇ）を加えて−２０℃に冷
却し、さらにクロロギ酸イソブチル１当量（５２ｍｇ）
を加えて３０分間撹拌し−７８℃に冷却した。次いで、
この混合物に、前記の保護基が除かれたアミン化合物１
当量（１５０ｍｇ）を５ｍｌのジクロロメタンに希釈し
て加え、温度を２時間にわたって２５℃に上昇させた
後、１時間撹拌した。水を加え反応を中断させた後、ジ
クロロメタンを加えて希釈し、ＮａＨＣＯ₃ 飽和溶液で
洗浄した。有機層を無水ＭｇＳＯ₄ 上で乾燥させ、溶媒
を減圧留去した後、カラムクロマトグラフィー（酢酸エ
チル：ヘキサン＝６：４）を行って標記化合物１２５ｍ
ｇ（収率５５％）を得た。

【００３３】¹Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃ ）：δ ０．８
５（ｄ，３Ｈ），１．０２（ｄ，３Ｈ），１．２５
（ｍ，６Ｈ），１．５０（ｓ，３Ｈ），１．５８（ｓ，
３Ｈ），２．１１（ｍ，１Ｈ），２．２１（ｍ，１
Ｈ），２．３５（ｍ，１Ｈ），２．９２（ｓ，３Ｈ），
２．９９−３．１２（ｍ，３Ｈ），３．３２（ｍ，１
Ｈ），４．１５（ｍ，１Ｈ），４．６２（ｄ，１Ｈ），
４．９５（ｍ，１Ｈ），５．５８（ｍ，１Ｈ），５．９
０（ｄ，１Ｈ），６．７５（ｄ，１Ｈ），７．０５
（ｄ，１Ｈ），７．２０−８．００（ｍ，１０Ｈ） ＜ＨＩＶプロテアーゼに対する阻害効果の分析＞本発明
の化合物のＨＩＶプロテアーゼに対する阻害効果を確認
するために下記の方法を使用した。

【００３４】先ず、前記酵素と本発明の化合物を混ぜて
阻害反応を開始させ、反応溶液の一部を過量の反応基質
を含む溶液（分析液）に加え、以下の通りに酵素の残留
活性を検定する実験を行った。

【００３５】上記実施例１において調製した化合物を、
５０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ５．５、１ｍＭジチオト
レートル（ＤＤＴ）、１ｍＭ四酢酸エチルジアミン（Ｅ
ＤＴＡ）、０．７５Ｍ硫酸アンモニウム及び０．１％Ｎ
Ｐ４０を含む緩衝液に様々な濃度で加えて予備培養液を
作り、これに２．６ｎＭのＨＩＶ−１プロテアーゼを加
えることによって阻害反応を開始した。一定時間ごとに
１０μｌを採取し、前記と同一の緩衝溶液に１００μＭ
の反応基質が含まれている８０μｌの分析液に加えて残
留酵素活性を検定した。この際、反応基質としては、Ｈ
−Ｈｉｓ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−
（ｐ−ニトロ）−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｉｌｅ−Ｓ
ｅｒ−ＮＨ₂ の１１個のアミノ酸からなるオリゴペプチ
ドを使用した。この基質はＨＩＶプロテアーゼによって
（ｐ−ニトロ）−ＰｈｅとＬｅｕ間とのアミド結合が切
れる。反応速度は、反応前の基質と反応後の生成物とを
それぞれＨＰＬＣ分離し、（ｐ−ニトロ）−Ｐｈｅの２
８０ｎｍでの強い吸収を用いて基質に対する生成物の相
対的な量を測定することによって決定した。酵素活性の
経時減少量を求め、減少量の自然対数値（ｌｎ）を時間
に対しグラフにプロットしてｋ_obs を求めた。阻害定数
は下記式によって求めた。

【００３６】

【数１】 （ここで、ｋ_obs は阻害剤の存在下における酵素活性の
減少速度を表す速度定数、ｋ_ina は（ミカエリス−メン
テン複合体における）酵素と阻害剤との不可逆的共有結
合形成の速度を表す速度定数、Ｋ_I は酵素と阻害剤とか
らのミカエリス−メンテン複合体の形成の平衡定数によ
って表される阻害定数、および［Ｉ］は阻害剤濃度を示
す） この式は、阻害剤の濃度が酵素の濃度よりずっと高い条
件のもとで行われる実験（定常状態速度論）に適用さ
れ、阻害活性が非常に高い阻害剤の場合は前記式を使わ
ず下記の方法を採用した。

【００３７】０．１のプロテアーゼ濃度で１当量の本発
明の化合物と充分な時間（３０分）反応させた後、残留
活性測定（活性部位タイトレーション）をした結果、１
個の酵素を不活性化させるのに１個の化合物が必要であ
る（１：１化学量論）ことが明らかになった。従って、
下記式：

【数２】 （ここで、Ｅ、Ｉ、ＥＩおよびＥＩ´は酵素、阻害剤、
ミカエリス−メンテン複合体および酵素と阻害剤との間
に共有結合が形成されている複合体を表し、Ｋ_Iおよび
ｋ_ina は上記定義と同じ意味を有する）に基づいて各時
間ごとの活性酵素の相対的濃度、即ち［Ｅ］／（［Ｅ］
＋［ＥＩ］＋［ＥＩ′］）の値をＫＩＮＳＩＭ／ＦＩＴ
ＳＩＭプログラムに入力して阻害定数Ｋ_I と速度定数ｋ
_ina そして２次速度定数であるｋ_ina ／Ｋ_I を算出した
結果、Ｋ_I は１２ｎＭ、ｋ_ina は３．２ｍｉｎ^-1、そし
てｋ_ina ／Ｋ_I は２．７×１０⁷ ｍｉｎ^-1Ｍ^-1であっ
た。これに比べて、可逆的ＨＩＶプロテアーゼ阻害剤で
あるメルク（Ｍｅｒｃｋ）社の化合物ＭＫ−６３９は
０．３８ｎＭのＫ_I を有する。

【００３８】

【化７】 ＜抗ウイルス活性および細胞毒性の測定＞抗ウイルス活
性は、シンシチウム形成の調査と逆転写酵素の検定によ
ってウイルスの複製を５０％阻害する化合物の濃度（Ｉ
Ｃ₅₀）をもって表した。

【００３９】それぞれ１×１０⁵ 細胞のＨ９（ＡＴＣＣ
ＨＴＢ１７６）とＳｕｐ Ｔ１細胞株を２４ウェル平
板に入れて、種々の濃度の本発明の化合物を加えた。こ
こに２００ＴＣＩＤ₅₀（５０％細胞感染濃度（ｔｉｓｓ
ｕｅ ｃｕｌｔｕｒｅ ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ ｄｏｓ
ｅ）の２００倍）のＨＩＶ−１接種物をｒｐｍｉ−１６
４０培地（Ｓｉｇｍａ）と一緒に加えた後、３７℃で培
養した。Ｓｕｐ Ｔ１の場合は、３ないし９日後にシン
シチウムが形成された個数を調べた。Ｈ９の場合は、３
日間隔で培養液の３／４を新しい培養液で代えた。９日
後、培養液６ｍｌを取って１０００ｒｐｍで１０分間遠
心分離した後、上澄液５ｍｌを取って３０％ＰＥＧ（ポ
リエチレングリコール、分子量約６０００ないし約８０
００）２．５ｍｌと０．４Ｍ ＮａＣｌを加え、０℃で
一晩静置してウイルスを沈殿させた。２０００ｒｐｍで
４５分間遠心分離して上澄液を捨て、沈殿物に２０ｍｌ
の逆転写酵素懸濁緩衝液（５０ｍＭトリス緩衝液（Ｓｉ
ｇｍａ）、ｐＨ７．５、１ｍＭジチオトレイトール、
０．２５Ｍ ＫＣｌおよびトリトンＸ−１００ ０．２
５％を含む）を加えて希釈し、エフェンドルフ管（Ｅｆ
ｆｅｎｄｏｒｆ ｔｕｂｅ）に入れて−７０℃で保管し
た。前記懸濁液をドライアイスで２分間凍結させ２分間
３７℃で溶解する過程を３回繰返した後、４℃で遠心分
離して上澄液を採取し、これを使用して逆転写酵素を検
定した。逆転写酵素の検定溶液としては、前記ウイルス
懸濁液１０μｌ、１０μｌの２５０ｍＭトリス緩衝液
（ｐＨ７．５、３７．５ｍＭ ＭｇＣｌ₂ 、０．２５％
トリトンＸ−１００）、１．２μｌの２００ｍＭジチオ
トレイトール、５μｌの１００μＭオリゴ（ｄＴ）−ポ
リ（Ａ）（Ｂｏｅｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ、１
２−１８オリゴマー）、 ³Ｈ−ＴＴＰ（チミジントリホ
スフィン酸）１μｌ（１μＣｉ）、および水を混合して
用いた。１時間後に、前記溶液をＷＨＡＴＭＡＮ ＤＥ
Ｂ１濾紙に通し、この濾紙を２ Ｘ ＳＳＣ緩衝液で３
回（１回に１０分程度所要）、次いで９５％のエタノー
ルで１０秒間２回洗浄した。その後、濾紙をアルミニウ
ムホイルに入れて赤外線ランプで乾燥し、液体シンチレ
ーションカウンターで計測した。

【００４０】抗ＡＩＤＳ剤の最大許容値を決定するため
の細胞毒性を測定するために、Ｈ９細胞またはＳｕｐ
Ｔ１細胞に０．１μＭないし１００μＭの範囲の化合物
を加えた後、ｒｐｍｉ−１６４０培地において３７℃で
培養し、３日間隔に培養液を代えながら細胞の増殖度を
トリパンブルー染料排除法（Ｔｒｙｐａｎ ｂｌｕｅｄ
ｙｅ ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ）に従
って血球計算機で２週間観察して細胞毒性ＣＴ₅₀を決定
した。このような実験の結果として、抗ウイルス活性
（ＩＣ₅₀）は１５ｎＭ、細胞毒性（ＣＴ₅₀）は１０，０
００ｎＭ以上とそれぞれ測定された。これに比べて、化
合物ＭＫ−６３９は１０ｎＭのＩＣ₅₀と１０，０００ｎ
Ｍ以上のＣＴ₅₀を示し、アボット（Ａｂｏｔｔ）社の化
合物ＡＢＴ−５３８は５３ｎＭのＩＣ₅₀と１０，０００
ｎＭ以上のＣＴ₅₀を有する。

【００４１】

【化８】

【００４２】

【発明の効果】以上のように、本発明の式（Ｉ）の化合
物はＨＩＶプロテアーゼの不可逆的阻害剤として阻害効
果が高く、かつその反面細胞毒性は低いため、ＡＩＤＳ
またはＨＩＶ感染疾患の治療または予防のための優れた
医薬組成物として使用できる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 // Ｃ０７Ｍ 7:00 (72)発明者 崔鎬日 大韓民国、大田廣域市儒城区新城洞ハンウ ルアパート108−901 (72)発明者 尹興植 大韓民国、大田廣域市儒城区道龍洞ラッキ ーアパート９−103 (72)発明者 朴志▲ひょ▼ 大韓民国、大田廣域市儒城区道龍洞ラッキ ーアパート・ビー − 404 (72)発明者 崔洛賢 大韓民国、大田廣域市儒城区田民洞ＥＸＰ Ｏアパート211−1201 (72)発明者 李昌宣 大韓民国、大田廣域市儒城区道龍洞ラッキ ーアパート・ビー − 401 (72)発明者 高鍾聲 大韓民国、ソウル特別市恩平区葛▲けん▼ 洞446−12 (72)発明者 文光律 大韓民国、大田廣域市儒城区道龍洞ラッキ ーアパート５−105 (72)発明者 鄭元煕 大韓民国、大田廣域市儒城区道龍洞エルジ 寄宿舎203 (72)発明者 金忠烈 大韓民国、大田廣域市儒城区道龍洞ラッキ ーアパート６−304

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 シス−エポキシド構造を有する下記式
   （Ｉ）の化合物およびその薬剤学的に許容可能な塩、水
   和物および溶媒和物。 【化１】
2. 【請求項２】 下記式（II）の化合物を下記式（III ）
   の化合物とカップリング反応させて下記式（IV）の化合
   物を得；構造式（IV）の化合物をエポキシ化して下記式
   （Ｖ）の化合物を得；構造式（Ｖ）の化合物からベンジ
   ルオキシカルボニル保護基を除いた後、下記式（VI）の
   化合物とカップリング反応させる段階を含む、請求項１
   に記載の化合物の製造方法。 【化２】
3. 【請求項３】 請求項１に記載の化合物と薬剤学的に許
   容可能な担体を含有する、ＨＩＶ感染症の治療または予
   防のための組成物。