JPH0899994A - ペプチド及び血圧降下剤及びその製造法 - Google Patents
ペプチド及び血圧降下剤及びその製造法Info
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- JPH0899994A JPH0899994A JP7105262A JP10526295A JPH0899994A JP H0899994 A JPH0899994 A JP H0899994A JP 7105262 A JP7105262 A JP 7105262A JP 10526295 A JP10526295 A JP 10526295A JP H0899994 A JPH0899994 A JP H0899994A
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- peptide
- proteinase
- salt
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- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【構成】（Ｒ)n Lys Val Leu Pro Val Pro（ＲはSerを
示し、ｎは０又は１を示す）のアミノ酸配列で示される
ペプチド及びその塩、並びにこのペプチド及びその塩を
有効成分として含有する血圧降下剤、及び獣乳成分を原
料として、プロティナーゼ処理及びカルボキシペプチダ
ーゼ処理とを併用した前記血圧降下剤の製造法。 【効果】前記ペプチドは、アンジオテンシン変換酵素阻
害活性を有する血圧降下剤等として利用可能な安全性の
高い新規なペプチドであり、種々の医薬品、機能性食品
等への利用が期待できる。また前記血圧降下剤は、ヒト
並びに哺乳動物の血圧を有効に降下させることができ
る。前記製造法ではこの血圧降下剤を、獣乳成分を原料
として容易にしかも安価に製造することができる。
示し、ｎは０又は１を示す）のアミノ酸配列で示される
ペプチド及びその塩、並びにこのペプチド及びその塩を
有効成分として含有する血圧降下剤、及び獣乳成分を原
料として、プロティナーゼ処理及びカルボキシペプチダ
ーゼ処理とを併用した前記血圧降下剤の製造法。 【効果】前記ペプチドは、アンジオテンシン変換酵素阻
害活性を有する血圧降下剤等として利用可能な安全性の
高い新規なペプチドであり、種々の医薬品、機能性食品
等への利用が期待できる。また前記血圧降下剤は、ヒト
並びに哺乳動物の血圧を有効に降下させることができ
る。前記製造法ではこの血圧降下剤を、獣乳成分を原料
として容易にしかも安価に製造することができる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、血圧降下作用等を有
し、医薬品、特定保健用食品、健康食品等に利用できる
新規なペプチド及びその塩、該ペプチド及びその塩を有
効成分として含有する血圧降下剤及びその製造法に関す
る。
し、医薬品、特定保健用食品、健康食品等に利用できる
新規なペプチド及びその塩、該ペプチド及びその塩を有
効成分として含有する血圧降下剤及びその製造法に関す
る。
【０００２】
【従来の技術】高血圧症の発症には、レニン−アンジオ
テンシン系が深い関わりを持っていることが知られてい
る。このレニン−アンジオテンシン系には、アンジオテ
ンシン変換酵素（以下ＡＣＥと称す）が重要な役割を果
たしており、主に肺や血管内皮細胞に存在する。ＡＣＥ
は、アンジオテンシノーゲンが腎臓で産生される酵素レ
ニンにより分解されて生成したアンジオテンシンＩ(Asp
Arg Val Tyr Ile HisPro Phe His Leu)に対して作用し
て、アンジオテンシンＩのＣ末端からジペプチド(His L
eu)を遊離し、強力な血圧上昇作用を有するアンジオテ
ンシンII(AspArg Val Tyr Ile His Pro Phe)を生成す
る。それと共に、ＡＣＥは、降圧性ペプチド（ブラジキ
ニン）を分解、不活性化する作用も有するので、結果と
して両作用により血圧上昇作用を示す。従って、ＡＣＥ
が酵素活性を阻害することにより血圧上昇を抑制するこ
と（降圧）が可能であり、これまでに種々のＡＣＥ活性
阻害を有する物質が報告されている。
テンシン系が深い関わりを持っていることが知られてい
る。このレニン−アンジオテンシン系には、アンジオテ
ンシン変換酵素（以下ＡＣＥと称す）が重要な役割を果
たしており、主に肺や血管内皮細胞に存在する。ＡＣＥ
は、アンジオテンシノーゲンが腎臓で産生される酵素レ
ニンにより分解されて生成したアンジオテンシンＩ(Asp
Arg Val Tyr Ile HisPro Phe His Leu)に対して作用し
て、アンジオテンシンＩのＣ末端からジペプチド(His L
eu)を遊離し、強力な血圧上昇作用を有するアンジオテ
ンシンII(AspArg Val Tyr Ile His Pro Phe)を生成す
る。それと共に、ＡＣＥは、降圧性ペプチド（ブラジキ
ニン）を分解、不活性化する作用も有するので、結果と
して両作用により血圧上昇作用を示す。従って、ＡＣＥ
が酵素活性を阻害することにより血圧上昇を抑制するこ
と（降圧）が可能であり、これまでに種々のＡＣＥ活性
阻害を有する物質が報告されている。
【０００３】ＡＣＥ活性阻害物質としては、天然物、化
学合成物が多数報告されており、例えば化学合成物とし
ては、カプトプリル（Ｄ−２−メチル−３−メルカプト
プロパノイル−Ｌ−プロリン）が有名であり、既に経口
用降圧剤として実用化されている。しかし、これらの化
学合成医薬品は、常に安全性の問題に注意を払わなけれ
ばならない。
学合成物が多数報告されており、例えば化学合成物とし
ては、カプトプリル（Ｄ−２−メチル−３−メルカプト
プロパノイル−Ｌ−プロリン）が有名であり、既に経口
用降圧剤として実用化されている。しかし、これらの化
学合成医薬品は、常に安全性の問題に注意を払わなけれ
ばならない。
【０００４】また、天然物あるいは天然物由来の阻害物
質としては、蛇毒ペプチド及びその類縁体等が知られて
いる。特に食品原料由来のＡＣＥ阻害物質は、より安全
性に優れた降圧剤となり得ることが期待できる。例えば
獣乳カゼイン、魚肉蛋白質等の酵素分解物から得られる
ＡＣＥ阻害物質等が報告されており、特にプロティナー
ゼによるカゼイン分解ペプチドの血圧降下作用に関する
報告がなされている（N. Yamamoto et, al. J. Daily S
ci. 77: 917-922 (1994)、N. Yamamoto et, al., Biosc
i. Biotech. Biochem., 58, 776-778 (1994)）。
質としては、蛇毒ペプチド及びその類縁体等が知られて
いる。特に食品原料由来のＡＣＥ阻害物質は、より安全
性に優れた降圧剤となり得ることが期待できる。例えば
獣乳カゼイン、魚肉蛋白質等の酵素分解物から得られる
ＡＣＥ阻害物質等が報告されており、特にプロティナー
ゼによるカゼイン分解ペプチドの血圧降下作用に関する
報告がなされている（N. Yamamoto et, al. J. Daily S
ci. 77: 917-922 (1994)、N. Yamamoto et, al., Biosc
i. Biotech. Biochem., 58, 776-778 (1994)）。
【０００５】前記プロティナーゼにより獣乳カゼインを
酵素加水分解する方法は従来知られており、例えばラク
トバチルス ヘルベティカス(Lactobacillus helveticu
s)産生プロティナーゼの性質と特異性について報告され
ている(Claude ZEVACO and J.C.GRIPON,Le Lait,68,393
-408(1988))。更にラクトバチルス ラクティス サブス
ペシィーズクレモリス(Lactobacillus lactis subsp. c
remoris)産生P1及びP3タイプのプロティナーゼによるβ
−カゼイン加水分解の比較についても報告されている
（Julian R. Reid et.al.,Applied Microbiology and B
iotechnology,36,344-351(1991))。しかし、プロティナ
ーゼ処理と、カルボキシペプチダーゼ処理とを併用した
際に得られるペプチドについては知られていない。
酵素加水分解する方法は従来知られており、例えばラク
トバチルス ヘルベティカス(Lactobacillus helveticu
s)産生プロティナーゼの性質と特異性について報告され
ている(Claude ZEVACO and J.C.GRIPON,Le Lait,68,393
-408(1988))。更にラクトバチルス ラクティス サブス
ペシィーズクレモリス(Lactobacillus lactis subsp. c
remoris)産生P1及びP3タイプのプロティナーゼによるβ
−カゼイン加水分解の比較についても報告されている
（Julian R. Reid et.al.,Applied Microbiology and B
iotechnology,36,344-351(1991))。しかし、プロティナ
ーゼ処理と、カルボキシペプチダーゼ処理とを併用した
際に得られるペプチドについては知られていない。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、血圧
降下作用等を示し、医薬品、特定保健用食品、健康食品
等に利用できる新規なペプチド及びその塩を提供するこ
とにある。本発明の別の目的は、安全性が高く、微量の
経口投与で有効なＡＣＥ阻害活性を示す血圧降下剤及び
その製造法を提供することにある。
降下作用等を示し、医薬品、特定保健用食品、健康食品
等に利用できる新規なペプチド及びその塩を提供するこ
とにある。本発明の別の目的は、安全性が高く、微量の
経口投与で有効なＡＣＥ阻害活性を示す血圧降下剤及び
その製造法を提供することにある。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明によれば、下記ア
ミノ酸配列で示されるペプチド及びその塩が提供され
る。 （Ｒ)n Lys Val Leu Pro Val Pro（ＲはSerを示し、ｎ
は０又は１を示す） また本発明によれば、前記ペプチド及びその塩を有効成
分として含有する血圧降下剤が提供される。更に本発明
によれば、獣乳成分を原料として、プロティナーゼ処理
を行った後、カルボキシペプチダーゼ処理することを特
徴とする前記血圧降下剤の製造法が提供される。
ミノ酸配列で示されるペプチド及びその塩が提供され
る。 （Ｒ)n Lys Val Leu Pro Val Pro（ＲはSerを示し、ｎ
は０又は１を示す） また本発明によれば、前記ペプチド及びその塩を有効成
分として含有する血圧降下剤が提供される。更に本発明
によれば、獣乳成分を原料として、プロティナーゼ処理
を行った後、カルボキシペプチダーゼ処理することを特
徴とする前記血圧降下剤の製造法が提供される。
【０００８】以下、本発明を更に詳細に説明する。本発
明のペプチドは、前記アミノ酸配列で示されるものであ
って、具体的にはSer Lys Val Leu Pro Val Pro、Lys V
al Leu Pro Val Proである。またその塩としては、薬理
学上許容される塩類、例えば塩酸塩、硫酸塩、リン酸塩
等の無機酸塩及びクエン酸塩、マレイン酸塩、フマル酸
塩、酒石酸塩、乳酸塩等の有機酸塩を挙げることができ
る。
明のペプチドは、前記アミノ酸配列で示されるものであ
って、具体的にはSer Lys Val Leu Pro Val Pro、Lys V
al Leu Pro Val Proである。またその塩としては、薬理
学上許容される塩類、例えば塩酸塩、硫酸塩、リン酸塩
等の無機酸塩及びクエン酸塩、マレイン酸塩、フマル酸
塩、酒石酸塩、乳酸塩等の有機酸塩を挙げることができ
る。
【０００９】本発明のペプチドを調製するには、公知の
有機化学合成法により得ることができる。また後述する
獣乳成分を原料として、プロティナーゼ処理と、カルボ
キシペプチダーゼ処理とを併用して得られる処理物を、
例えば逆相液体カラムクロマトグラフィー（以下ＨＰＬ
Ｃと略記する）等の公知の方法で精製することにより得
ることができる。得られる目的とするペプチドは、獣乳
蛋白質成分の１種であるβ-カゼインを構成するペプチ
ド単位の一部である。
有機化学合成法により得ることができる。また後述する
獣乳成分を原料として、プロティナーゼ処理と、カルボ
キシペプチダーゼ処理とを併用して得られる処理物を、
例えば逆相液体カラムクロマトグラフィー（以下ＨＰＬ
Ｃと略記する）等の公知の方法で精製することにより得
ることができる。得られる目的とするペプチドは、獣乳
蛋白質成分の１種であるβ-カゼインを構成するペプチ
ド単位の一部である。
【００１０】本発明の血圧降下剤は、前記ペプチド及び
その塩を有効成分として含有する。本発明の血圧降下剤
を調製するには、公知の有機化学合成法で調製したペプ
チドを含有させる方法、また獣乳成分を原料として、プ
ロティナーゼ処理を行った後、カルボキシペプチダーゼ
処理する酵素加水分解法等により製造することができ
る。
その塩を有効成分として含有する。本発明の血圧降下剤
を調製するには、公知の有機化学合成法で調製したペプ
チドを含有させる方法、また獣乳成分を原料として、プ
ロティナーゼ処理を行った後、カルボキシペプチダーゼ
処理する酵素加水分解法等により製造することができ
る。
【００１１】前記獣乳成分を原料とする酵素加水分解法
において、原料としての獣乳成分としては、獣乳カゼイ
ン、獣乳カゼイン塩等を用いることができる。
において、原料としての獣乳成分としては、獣乳カゼイ
ン、獣乳カゼイン塩等を用いることができる。
【００１２】前記プロティナーゼとしては、微生物由来
のプロティナーゼ、植物由来のプロティナーゼ、動物由
来のプロティナーゼのいずれも使用することができる。
のプロティナーゼ、植物由来のプロティナーゼ、動物由
来のプロティナーゼのいずれも使用することができる。
【００１３】前記プロティナーゼの調製は、公知の方法
で行うことができ、例えば微生物由来のプロティナーゼ
として、乳酸菌産生プロティナーゼを例にして説明する
と、使用する乳酸菌としては、ラクトバチルス・ヘルベ
ティカス（Lactobacillus helveticus)、ラクトバチル
ス・デルブルィキィ・サブスペシィーズ・ブルガリカス
(Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus）、ラ
クトバチルス・アシドフィラス（Lactobacillus acidop
hilus）等のラクトバチルス属乳酸菌を用いることがで
きる。更に好ましくはラクトバチルス・ヘルベティカス
JCM-1003（Lactobacillus helveticus JCM-1003）、ラ
クトバチルス・デルブルィキィ・サブスペシィーズ・ブ
ルガリカス JCM-1002（Lactobacillus delbrueckii sub
sp. bulgaricus JCM-1002）、ラクトバチルス・アシド
フィラス JCM-1132（Lactobaticillus acidophilus JCM
-1132）等を挙げることができる。また培地としては、
牛乳、山羊乳、馬乳又はこれらの脱脂乳、更に乳酸菌用
培地、例えばＢＬ培地、Briggs liver broth培地、ＭＲ
Ｓ培地、ＧＡＭ培地、ＴＴＹ培地、ＭＧＬＰ培地等が好
ましい。
で行うことができ、例えば微生物由来のプロティナーゼ
として、乳酸菌産生プロティナーゼを例にして説明する
と、使用する乳酸菌としては、ラクトバチルス・ヘルベ
ティカス（Lactobacillus helveticus)、ラクトバチル
ス・デルブルィキィ・サブスペシィーズ・ブルガリカス
(Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus）、ラ
クトバチルス・アシドフィラス（Lactobacillus acidop
hilus）等のラクトバチルス属乳酸菌を用いることがで
きる。更に好ましくはラクトバチルス・ヘルベティカス
JCM-1003（Lactobacillus helveticus JCM-1003）、ラ
クトバチルス・デルブルィキィ・サブスペシィーズ・ブ
ルガリカス JCM-1002（Lactobacillus delbrueckii sub
sp. bulgaricus JCM-1002）、ラクトバチルス・アシド
フィラス JCM-1132（Lactobaticillus acidophilus JCM
-1132）等を挙げることができる。また培地としては、
牛乳、山羊乳、馬乳又はこれらの脱脂乳、更に乳酸菌用
培地、例えばＢＬ培地、Briggs liver broth培地、ＭＲ
Ｓ培地、ＧＡＭ培地、ＴＴＹ培地、ＭＧＬＰ培地等が好
ましい。
【００１４】発酵条件としては、発酵温度２０〜５０
℃、更に好ましくは３０〜４０℃。発酵時間３〜２０時
間、更に好ましくは８〜１２時間の条件下で行うことが
できる。また、得られる発酵液は、通常ｐＨ３〜４を示
すが、目的とするプロティナーゼの収率を増加させるた
めには、前記発酵液を中性域のｐＨに保持して行うのが
好ましい。
℃、更に好ましくは３０〜４０℃。発酵時間３〜２０時
間、更に好ましくは８〜１２時間の条件下で行うことが
できる。また、得られる発酵液は、通常ｐＨ３〜４を示
すが、目的とするプロティナーゼの収率を増加させるた
めには、前記発酵液を中性域のｐＨに保持して行うのが
好ましい。
【００１５】乳酸菌産生プロティナーゼの回収は、公知
の方法(Yamamoto,N.et.al.,J.Biochem 14.p740-745(199
3)等)に従って行うことができるが、好ましくは対数増
殖期に集菌し、次いでカルシウムイオンを含むリン酸緩
衝液またはトリス塩酸緩衝液等により洗浄した後、カル
シウムイオンを含まないリン酸緩衝液またはトリス塩酸
緩衝液等により抽出する方法、または、更にＤＥＡＥセ
ファロースカラム、ゲル濾過カラム等により精製する方
法を好ましく挙げることができる。前記プロティナーゼ
の抽出は、好ましくは５〜４０℃にて１０〜６０分抽出
する工程、若しくはこの工程を２〜５回繰り返すことに
より行うことができる。
の方法(Yamamoto,N.et.al.,J.Biochem 14.p740-745(199
3)等)に従って行うことができるが、好ましくは対数増
殖期に集菌し、次いでカルシウムイオンを含むリン酸緩
衝液またはトリス塩酸緩衝液等により洗浄した後、カル
シウムイオンを含まないリン酸緩衝液またはトリス塩酸
緩衝液等により抽出する方法、または、更にＤＥＡＥセ
ファロースカラム、ゲル濾過カラム等により精製する方
法を好ましく挙げることができる。前記プロティナーゼ
の抽出は、好ましくは５〜４０℃にて１０〜６０分抽出
する工程、若しくはこの工程を２〜５回繰り返すことに
より行うことができる。
【００１６】前記プロティナーゼ処理は、獣乳カゼイン
等の獣乳成分をプロティナーゼにより酵素加水分解する
処理であって、例えばまずプロティナーゼと、リン酸緩
衝液等の緩衝液に溶解した獣乳成分とを混合し、３０〜
５０℃にて、１〜１２時間反応させる。この際プロティ
ナーゼと獣乳成分との混合割合は、重量比で１：１００
〜１：５０００であるのが好ましい。次いで、そのま
ま、若しくは９０℃、５分間程度の処理等でプロティナ
ーゼを失活させた後、好ましくは分子量分画１００００
〜５００００の限外濾過膜等で限外濾過する処理方法等
により行うことができる。
等の獣乳成分をプロティナーゼにより酵素加水分解する
処理であって、例えばまずプロティナーゼと、リン酸緩
衝液等の緩衝液に溶解した獣乳成分とを混合し、３０〜
５０℃にて、１〜１２時間反応させる。この際プロティ
ナーゼと獣乳成分との混合割合は、重量比で１：１００
〜１：５０００であるのが好ましい。次いで、そのま
ま、若しくは９０℃、５分間程度の処理等でプロティナ
ーゼを失活させた後、好ましくは分子量分画１００００
〜５００００の限外濾過膜等で限外濾過する処理方法等
により行うことができる。
【００１７】前記カルボキシペプチダーゼ処理は、前記
プロティナーゼ処理により得られた濾過液と、カルボキ
シペプチダーゼとを混合し、好ましくは３０〜５０℃に
て２〜２０時間反応させ、酵素加水分解させる方法等に
よって行うことができる。このカルボキシペプチダーゼ
処理により、目的のペプチドを含む混合液を調製するこ
とができる。この際カルボキシペプチダーゼと前記濾過
液との混合割合は、重量比で１：１００〜１：５０００
であるのが好ましい。
プロティナーゼ処理により得られた濾過液と、カルボキ
シペプチダーゼとを混合し、好ましくは３０〜５０℃に
て２〜２０時間反応させ、酵素加水分解させる方法等に
よって行うことができる。このカルボキシペプチダーゼ
処理により、目的のペプチドを含む混合液を調製するこ
とができる。この際カルボキシペプチダーゼと前記濾過
液との混合割合は、重量比で１：１００〜１：５０００
であるのが好ましい。
【００１８】本発明の血圧降下剤は、ACE阻害活性を示
し血圧降下作用を有する前記ペプチド及びその塩を有効
成分として含有するので、ヒトをはじめとする哺乳動物
の高血圧の治療、予防に有効である。
し血圧降下作用を有する前記ペプチド及びその塩を有効
成分として含有するので、ヒトをはじめとする哺乳動物
の高血圧の治療、予防に有効である。
【００１９】本発明の血圧降下剤の投与方法は、主に経
口投与、静脈注射等で行うことができる。剤形は、乾燥
粉末とした後に錠剤、顆粒製剤、カプセル製剤等とし
て、更には液体製剤として用いることもできる。前記ペ
プチド及びその塩は、それ自体を前記種々の剤形と成る
ように調製して使用することができるが、前記ペプチド
及びその塩は、後述するように微量でも血圧降下作用を
発揮するので、前記プロティナーゼ処理とカルボキシペ
プチダーゼ処理との併用により得られる酵素加水分解物
溶液を、そのまま、または種々の栄養分等を加えて、も
しくは飲食品内に含有させて血圧降下作用、高血圧予防
の機能をもたせた機能性食品、特定保健用食品及び健康
食品等として用いることができる。
口投与、静脈注射等で行うことができる。剤形は、乾燥
粉末とした後に錠剤、顆粒製剤、カプセル製剤等とし
て、更には液体製剤として用いることもできる。前記ペ
プチド及びその塩は、それ自体を前記種々の剤形と成る
ように調製して使用することができるが、前記ペプチド
及びその塩は、後述するように微量でも血圧降下作用を
発揮するので、前記プロティナーゼ処理とカルボキシペ
プチダーゼ処理との併用により得られる酵素加水分解物
溶液を、そのまま、または種々の栄養分等を加えて、も
しくは飲食品内に含有させて血圧降下作用、高血圧予防
の機能をもたせた機能性食品、特定保健用食品及び健康
食品等として用いることができる。
【００２０】本発明の血圧降下剤の投与量は、患者の年
齢、症状により異なるが、前記ペプチド及びその塩の含
有量に換算して、０．１ｍｇ／体重ｋｇ・日以上で有効
である。好ましくは１ｍｇ／体重ｋｇ・日前後で使用す
るのが望ましい。
齢、症状により異なるが、前記ペプチド及びその塩の含
有量に換算して、０．１ｍｇ／体重ｋｇ・日以上で有効
である。好ましくは１ｍｇ／体重ｋｇ・日前後で使用す
るのが望ましい。
【００２１】前記ペプチドを正常血圧値を示すＷＫＹラ
ット（１５週令、体重約３００ｇ、ｎ＝５）へ１０ｍｇ
／ｋｇ・日、１か月間経口投与したが、ラットの行動、
外観、血圧値、剖検所見に異常は認められず、本発明の
ペプチドの安全性が確認された。
ット（１５週令、体重約３００ｇ、ｎ＝５）へ１０ｍｇ
／ｋｇ・日、１か月間経口投与したが、ラットの行動、
外観、血圧値、剖検所見に異常は認められず、本発明の
ペプチドの安全性が確認された。
【００２２】
【発明の効果】本発明のペプチドは、ＡＣＥ阻害作用を
有する血圧降下剤等として利用可能な安全性が高く、副
作用のない新規なペプチドであり、種々の医薬品、特定
保健用食品、機能性食品等への利用が期待できる。また
本発明の血圧降下剤は、前記ペプチド及びその塩を有効
成分として含有するので、ヒト並びに哺乳動物の血圧を
有効に降下させることができる。また有効成分であるペ
プチドは、獣乳成分を原料として、容易にしかも安価に
製造することができる。
有する血圧降下剤等として利用可能な安全性が高く、副
作用のない新規なペプチドであり、種々の医薬品、特定
保健用食品、機能性食品等への利用が期待できる。また
本発明の血圧降下剤は、前記ペプチド及びその塩を有効
成分として含有するので、ヒト並びに哺乳動物の血圧を
有効に降下させることができる。また有効成分であるペ
プチドは、獣乳成分を原料として、容易にしかも安価に
製造することができる。
【００２３】
【実施例】以下実施例により更に詳細に説明するが、本
発明はこれらに限定されるものではない。
発明はこれらに限定されるものではない。
【００２４】
【実施例１】β−カゼイン内の乳酸菌プロティナーゼに
よる切断部位及びβ−カゼイン配列を参考にして、ペプ
チドLys Val Leu Pro Val Proを以下に示す有機化学合
成法により合成した。またその配列を基本にして表１に
示す種々のペプチドを設計し、同様に有機化学合成法に
より合成した。
よる切断部位及びβ−カゼイン配列を参考にして、ペプ
チドLys Val Leu Pro Val Proを以下に示す有機化学合
成法により合成した。またその配列を基本にして表１に
示す種々のペプチドを設計し、同様に有機化学合成法に
より合成した。
【００２５】合成は島津製作所製のペプチド自動合成装
置（型式ＰＰＳＭ−８型）を用いた固相法によって行っ
た。固相担体としてベンジルオキシベンジルアルコール
タイプのポリスチレン樹脂であって、アミノ基をフルオ
レニルメトキシカルボニル基（以下Fmocと略記する）で
保護されたプロリンが結合した樹脂２０μｍｏｌを使用
した。前記アミノ酸配列に従って、アミノ基がFmoc基で
保護されたFmoc-Val、Fmoc-Pro、Fmoc-Leu、Fmoc-Lysを
１００μｍｏｌずつ、常法に従い、ペプチド配列通り順
次反応させてペプチド結合樹脂を得た。次にこのペプチ
ド結合樹脂１ｍｌの反応液（１重量％エタンジチオー
ル、５重量％アニソール、９５重量％トリフルオロ酢
酸）に懸濁し、室温で２時間反応させてペプチドを樹脂
から切り離し、同時に側鎖保護基を外した。次に反応混
合液をガラスフィルターで濾過した後、無水エーテル１
０ｍｌを加えて生成したペプチドを沈澱させて、３００
０回転、５分間遠心して分離した。その沈澱を無水エー
テルにて数回洗浄した後、窒素ガスを吹き付けて乾燥し
た。このようにして得られた未精製の合成ペプチドを
０．１規定のＨＣｌ水溶液２ｍｌに溶解した後に全量を
Ｃ18の逆相カラムを用いたＨＰＬＣで、以下の条件に従
って精製した。
置（型式ＰＰＳＭ−８型）を用いた固相法によって行っ
た。固相担体としてベンジルオキシベンジルアルコール
タイプのポリスチレン樹脂であって、アミノ基をフルオ
レニルメトキシカルボニル基（以下Fmocと略記する）で
保護されたプロリンが結合した樹脂２０μｍｏｌを使用
した。前記アミノ酸配列に従って、アミノ基がFmoc基で
保護されたFmoc-Val、Fmoc-Pro、Fmoc-Leu、Fmoc-Lysを
１００μｍｏｌずつ、常法に従い、ペプチド配列通り順
次反応させてペプチド結合樹脂を得た。次にこのペプチ
ド結合樹脂１ｍｌの反応液（１重量％エタンジチオー
ル、５重量％アニソール、９５重量％トリフルオロ酢
酸）に懸濁し、室温で２時間反応させてペプチドを樹脂
から切り離し、同時に側鎖保護基を外した。次に反応混
合液をガラスフィルターで濾過した後、無水エーテル１
０ｍｌを加えて生成したペプチドを沈澱させて、３００
０回転、５分間遠心して分離した。その沈澱を無水エー
テルにて数回洗浄した後、窒素ガスを吹き付けて乾燥し
た。このようにして得られた未精製の合成ペプチドを
０．１規定のＨＣｌ水溶液２ｍｌに溶解した後に全量を
Ｃ18の逆相カラムを用いたＨＰＬＣで、以下の条件に従
って精製した。
【００２６】ポンプ：型式Ｌ６２００インティリジェン
トポンプ（日立製作所製） 検出器：２１５ｎｍの紫外部吸収、型式Ｌ４０００ＵＶ
検出器（日立製作所製） カラム：マイクロボンダスフ
ェアー５μＣ18（ウオーターズ社製） 溶離液：Ａ液：０．１％重量ＴＦＡ水溶液 Ｂ液：０．１％重量ＴＦＡ入りアセトニトリル （Ｂ／Ａ＋Ｂ）×１００（％）：０％→４０％（６０
分） 流速：１ｍｌ／分。
トポンプ（日立製作所製） 検出器：２１５ｎｍの紫外部吸収、型式Ｌ４０００ＵＶ
検出器（日立製作所製） カラム：マイクロボンダスフ
ェアー５μＣ18（ウオーターズ社製） 溶離液：Ａ液：０．１％重量ＴＦＡ水溶液 Ｂ液：０．１％重量ＴＦＡ入りアセトニトリル （Ｂ／Ａ＋Ｂ）×１００（％）：０％→４０％（６０
分） 流速：１ｍｌ／分。
【００２７】２１５ｎｍで最大吸収を示した溶出画分を
分取し、これを凍結乾燥することにより目的とする合成
ペプチドを５．６ｍｇ得た。精製ペプチドを全自動タン
パク質一次構造分析装置（型式ＰＰＳＱ−１０、島津製
作所製）により、ペプチドのＮ末端から分析し、更にア
ミノ酸組成分析装置（型式８００シリーズ、日本分光社
製）にて分析した結果、設計通りであることが確認でき
た。
分取し、これを凍結乾燥することにより目的とする合成
ペプチドを５．６ｍｇ得た。精製ペプチドを全自動タン
パク質一次構造分析装置（型式ＰＰＳＱ−１０、島津製
作所製）により、ペプチドのＮ末端から分析し、更にア
ミノ酸組成分析装置（型式８００シリーズ、日本分光社
製）にて分析した結果、設計通りであることが確認でき
た。
【００２８】Ser Lys Val Leu Pro Val Pro及び表１に
示すその他のペプチドについても、上記合成方法に準じ
て固相法によりそれぞれＣ末端側から反応させて合成し
た。また合成ペプチドの精製法も上記方法に準じて行
い、それぞれの精製ペプチドを全自動タンパク質一次構
造分析装置（型式ＰＰＳＱ−１０、島津製作所製）によ
り、ペプチドのＮ末端から分析し、更にアミノ酸組成分
析装置（型式８００シリーズ、日本分光社製）にて分析
した結果、設計通りであることが確認できた。
示すその他のペプチドについても、上記合成方法に準じ
て固相法によりそれぞれＣ末端側から反応させて合成し
た。また合成ペプチドの精製法も上記方法に準じて行
い、それぞれの精製ペプチドを全自動タンパク質一次構
造分析装置（型式ＰＰＳＱ−１０、島津製作所製）によ
り、ペプチドのＮ末端から分析し、更にアミノ酸組成分
析装置（型式８００シリーズ、日本分光社製）にて分析
した結果、設計通りであることが確認できた。
【００２９】次に、合成した種々のペプチドについてＡ
ＣＥ阻害活性を以下の条件で測定した。化学合成したペ
プチドについて、CheungとCushmanの方法「D.W.Cushman
andH. S. Cheung,Biochem. Pharmacol.,20,1637(197
1)」に準じ、ＡＣＥの阻害活性を測定した。即ち、前記
ペプチドを含む試料８０μｌと、基質として０．１Ｍホ
ウ酸緩衝液（０．３Ｍ ＮａＣｌを含む、ｐＨ８．３）
を用いて５ｍＭに調製したヒプリルヒスチジルロイシン
（Hip His Leu、シグマ社製)２００μｌを加えた後、更
にＡＣＥ水溶液（０．１Ｕ／ｍｌ、シグマ社製）２０μ
ｌを添加し、３７℃、３０分間反応させた。その後、１
Ｎ塩酸２５０μｌを添加して反応を停止させた後、１．
７ｍｌの酢酸エチルを加えて２０秒間撹拌した。次いで
３０００回転で１０分間遠心して酢酸エチル層１．４ｍ
ｌを採取した後、１２０℃、４０分間加熱して溶媒を除
去した。溶媒除去後、蒸留水１ｍｌを加え、抽出された
ヒプリル酸の２２８ｎｍにおける吸光度を測定し、これ
をＡＣＥ阻害活性とした。ＡＣＥ阻害活性は下記式より
算出した。
ＣＥ阻害活性を以下の条件で測定した。化学合成したペ
プチドについて、CheungとCushmanの方法「D.W.Cushman
andH. S. Cheung,Biochem. Pharmacol.,20,1637(197
1)」に準じ、ＡＣＥの阻害活性を測定した。即ち、前記
ペプチドを含む試料８０μｌと、基質として０．１Ｍホ
ウ酸緩衝液（０．３Ｍ ＮａＣｌを含む、ｐＨ８．３）
を用いて５ｍＭに調製したヒプリルヒスチジルロイシン
（Hip His Leu、シグマ社製)２００μｌを加えた後、更
にＡＣＥ水溶液（０．１Ｕ／ｍｌ、シグマ社製）２０μ
ｌを添加し、３７℃、３０分間反応させた。その後、１
Ｎ塩酸２５０μｌを添加して反応を停止させた後、１．
７ｍｌの酢酸エチルを加えて２０秒間撹拌した。次いで
３０００回転で１０分間遠心して酢酸エチル層１．４ｍ
ｌを採取した後、１２０℃、４０分間加熱して溶媒を除
去した。溶媒除去後、蒸留水１ｍｌを加え、抽出された
ヒプリル酸の２２８ｎｍにおける吸光度を測定し、これ
をＡＣＥ阻害活性とした。ＡＣＥ阻害活性は下記式より
算出した。
【００３０】ＡＣＥ阻害率＝［（Ａ−Ｂ）／（Ａ−
Ｃ）］×１００（％） Ａ：試料を含まない場合の２２８ｎｍの吸光度 Ｂ：試料を添加した場合の２２８ｎｍの吸光度 Ｃ：酵素及び試料を添加しない場合の２２８ｎｍの吸光
度 ＡＣＥの酵素活性を５０％阻害するために必要な試料の
濃度（μＭ）をＩＣ50として表１に示す。その結果Ser
Lys Val Leu Pro Val ProおよびLys Val Leu Pro Val P
roに強い活性を得た。またVal Leu Pro Val Pro Glnお
よびVal Leu ProVal Proにも若干の活性が見られた。
Ｃ）］×１００（％） Ａ：試料を含まない場合の２２８ｎｍの吸光度 Ｂ：試料を添加した場合の２２８ｎｍの吸光度 Ｃ：酵素及び試料を添加しない場合の２２８ｎｍの吸光
度 ＡＣＥの酵素活性を５０％阻害するために必要な試料の
濃度（μＭ）をＩＣ50として表１に示す。その結果Ser
Lys Val Leu Pro Val ProおよびLys Val Leu Pro Val P
roに強い活性を得た。またVal Leu Pro Val Pro Glnお
よびVal Leu ProVal Proにも若干の活性が見られた。
【００３１】
【表１】
【００３２】
【実施例２】実施例１で合成した２種のペプチドSer Ly
s Val Leu Pro Val ProおよびLys Val Leu Pro Val Pro
について下記に示す方法に従い、それぞれの降圧作用を
測定した。
s Val Leu Pro Val ProおよびLys Val Leu Pro Val Pro
について下記に示す方法に従い、それぞれの降圧作用を
測定した。
【００３３】各々のペプチド１ｍｇ／ｋｇを、高血圧自
然発症ラット（ＳＨＲ：日本チャールス・リバー社）の
雄、１９〜２５週令、１群５匹に対して、胃ゾンデにて
強制投与し、６時間後にコントロール群（０．０５％カ
ゼイン投与群）との血圧降下値を比較した。血圧測定
は、非観血式血圧測定装置（型式ＰＥ−３００、ナルコ
バイオシステムズ社製）を用い、tail-cuff法で最高血
圧値を求めた。その結果、ペプチドLys Val Leu Pro Va
l ProおよびSer Lys Val Leu Pro Val Proが有意に血圧
降下作用を示すことが確認された。血圧降下値は、それ
ぞれ−32.2±2.9***、及び−24.5±11.1**で、コントロ
ール群に対して有意差があった（**；P<0.01、***；P<
0.001）。結果を（投与前最高血圧値−投与後最高血圧
値）±S.E.として表２に示す。
然発症ラット（ＳＨＲ：日本チャールス・リバー社）の
雄、１９〜２５週令、１群５匹に対して、胃ゾンデにて
強制投与し、６時間後にコントロール群（０．０５％カ
ゼイン投与群）との血圧降下値を比較した。血圧測定
は、非観血式血圧測定装置（型式ＰＥ−３００、ナルコ
バイオシステムズ社製）を用い、tail-cuff法で最高血
圧値を求めた。その結果、ペプチドLys Val Leu Pro Va
l ProおよびSer Lys Val Leu Pro Val Proが有意に血圧
降下作用を示すことが確認された。血圧降下値は、それ
ぞれ−32.2±2.9***、及び−24.5±11.1**で、コントロ
ール群に対して有意差があった（**；P<0.01、***；P<
0.001）。結果を（投与前最高血圧値−投与後最高血圧
値）±S.E.として表２に示す。
【００３４】
【表２】
【００３５】
【実施例３】ペプチドSer Lys Val Leu Pro Val Pro 及
び Lys Val Leu Pro Val Pro について、投与量と血圧
降下度に関するドーズレスポンスを調べた結果を図１及
び図２に示す。動物及び血圧測定方法は、実施例１に準
じて行った。即ち、各々のペプチド０．１、０．３、
１．０ｍｇ／体重ｋｇをラットに経口投与した後、SerL
ys Val Leu Pro Val Pro においては４時間後、Lys Val
Leu Pro Val Pro においては６時間後の最高血圧値を
測定し、コントロール群（０．０５％カゼイン投与群）
と比較した。その結果、Ser Lys Val Leu Pro Val Pr
o、Lys Val Leu ProVal Pro共に、０．１〜１．０ｍｇ
／体重ｋｇの範囲で、用量依存的な効果が認められた。
び Lys Val Leu Pro Val Pro について、投与量と血圧
降下度に関するドーズレスポンスを調べた結果を図１及
び図２に示す。動物及び血圧測定方法は、実施例１に準
じて行った。即ち、各々のペプチド０．１、０．３、
１．０ｍｇ／体重ｋｇをラットに経口投与した後、SerL
ys Val Leu Pro Val Pro においては４時間後、Lys Val
Leu Pro Val Pro においては６時間後の最高血圧値を
測定し、コントロール群（０．０５％カゼイン投与群）
と比較した。その結果、Ser Lys Val Leu Pro Val Pr
o、Lys Val Leu ProVal Pro共に、０．１〜１．０ｍｇ
／体重ｋｇの範囲で、用量依存的な効果が認められた。
【００３６】
【実施例４】ラクトバチルス・ヘルベティカス JCM-100
3のスターター発酵液３００ｇを用い、９重量％の脱脂
粉乳１０ｋｇに植菌した。次いで３Ｎ ＮａＯＨを自動
的に加えて、ｐＨ６．０に保ちながら、濁度１．０にな
るまで３７℃、５時間培養した（濁度測定方法は、培養
液１０ｍｌへクエン酸ナトリウムを終濃度１重量％にな
るように加え、乳蛋白質を可溶化した後、５９０ｎｍの
吸光度を測定した）。次にクエン酸ナトリウムを全発酵
液に１重量％となるように添加して乳蛋白質を可溶化し
た。続いて５０００回転、２０分間の遠心分離を行い集
菌し、菌体を２０ｍＭ塩化カルシウム、５０ｍＭβ−グ
リセロリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ８．０）で洗浄し
た後、５０ｍＭトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ８．０）を５
０ｍｌ加えて、３７℃で３０分間保持した。次いで１０
０００回転、１０分間の遠心分離を行い上清液を採取
し、粗抽出液とした。この粗抽出液を予め５ｍＭエチレ
ンジアミンテトラ酢酸（ＥＤＴＡ）−２０ｍＭトリス−
塩酸緩衝液（ｐＨ７．８、ＴＥ緩衝液）で平衡にしたＤ
ＥＡＥ−セファロースカラム（５ｍｌ）に通した。カラ
ムを０．３Ｍの塩化ナトリウムを含むＴＥ緩衝液３０ｍ
ｌで洗浄後、１．０Ｍ塩化ナトリウムを含むＴＥ緩衝液
１５ｍｌで溶出し、乳酸菌産生プロティナーゼをほぼ単
一なものとして約１５０μｇ得た。
3のスターター発酵液３００ｇを用い、９重量％の脱脂
粉乳１０ｋｇに植菌した。次いで３Ｎ ＮａＯＨを自動
的に加えて、ｐＨ６．０に保ちながら、濁度１．０にな
るまで３７℃、５時間培養した（濁度測定方法は、培養
液１０ｍｌへクエン酸ナトリウムを終濃度１重量％にな
るように加え、乳蛋白質を可溶化した後、５９０ｎｍの
吸光度を測定した）。次にクエン酸ナトリウムを全発酵
液に１重量％となるように添加して乳蛋白質を可溶化し
た。続いて５０００回転、２０分間の遠心分離を行い集
菌し、菌体を２０ｍＭ塩化カルシウム、５０ｍＭβ−グ
リセロリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ８．０）で洗浄し
た後、５０ｍＭトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ８．０）を５
０ｍｌ加えて、３７℃で３０分間保持した。次いで１０
０００回転、１０分間の遠心分離を行い上清液を採取
し、粗抽出液とした。この粗抽出液を予め５ｍＭエチレ
ンジアミンテトラ酢酸（ＥＤＴＡ）−２０ｍＭトリス−
塩酸緩衝液（ｐＨ７．８、ＴＥ緩衝液）で平衡にしたＤ
ＥＡＥ−セファロースカラム（５ｍｌ）に通した。カラ
ムを０．３Ｍの塩化ナトリウムを含むＴＥ緩衝液３０ｍ
ｌで洗浄後、１．０Ｍ塩化ナトリウムを含むＴＥ緩衝液
１５ｍｌで溶出し、乳酸菌産生プロティナーゼをほぼ単
一なものとして約１５０μｇ得た。
【００３７】次にカゼイン２ｇを２０ｍＭのリン酸緩衝
液（ｐＨ７．５）２００ｍｌに溶解し、上記で得られた
乳酸菌産生プロティナーゼ１００μｇと混合し、４２℃
で１５時間反応させた。その反応液を１００００回転、
１０分間の遠心後に上清を回収し、限外濾過膜処理（商
品名「アドバンテック東洋ＵＨＰ １５０」、限外濾過
膜分画分子量１００００、富士フィルター工業株式会社
製）を行ったところ、カゼイン２ｇからプロティナーゼ
分解ペプチド約１４００ｍｇ（収率約７０％）のペプチ
ドが限外濾過膜透過液１８０ｍｌ中に得られた。
液（ｐＨ７．５）２００ｍｌに溶解し、上記で得られた
乳酸菌産生プロティナーゼ１００μｇと混合し、４２℃
で１５時間反応させた。その反応液を１００００回転、
１０分間の遠心後に上清を回収し、限外濾過膜処理（商
品名「アドバンテック東洋ＵＨＰ １５０」、限外濾過
膜分画分子量１００００、富士フィルター工業株式会社
製）を行ったところ、カゼイン２ｇからプロティナーゼ
分解ペプチド約１４００ｍｇ（収率約７０％）のペプチ
ドが限外濾過膜透過液１８０ｍｌ中に得られた。
【００３８】次いで得られた限外濾過膜透過液９０ｍｌ
を、実施例１に従いＨＰＬＣを用いて溶出し、合成ペプ
チドと同じ溶出時間のペプチドを回収した。得られた限
外濾過膜透過液９０ｍｌからLys Val Leu Pro Val Pro
Glnを２．７ｍｇ精製回収できた。
を、実施例１に従いＨＰＬＣを用いて溶出し、合成ペプ
チドと同じ溶出時間のペプチドを回収した。得られた限
外濾過膜透過液９０ｍｌからLys Val Leu Pro Val Pro
Glnを２．７ｍｇ精製回収できた。
【００３９】次に精製回収ペプチド５０μｇを１５０μ
ｌの３５０ｍＭ ＫＣｌ−４０ｍＭトリスＨＣｌ緩衝液
（ｐＨ７．５）に溶解し、カルボキシペプチダーゼＡ
（シグマ社製）１０ユニットと混合した後、３７℃、１
０時間反応させた。反応液を実施例１の条件に従ってＨ
ＰＬＣ分析した。その結果を図３に示す。新たに生じた
ピークを精製し、そのアミノ酸配列を全自動タンパク質
一次構造分析装置（型式ＰＰＳＱ−１０システム、島津
製作所社製）およびアミノ酸組成分析装置（型式８００
シリーズ、日本分光社製）で分析した結果、アミノ酸配
列はLys Val LeuPro Val Proであることが確認できた。
反応回収率は約４０％であった。前記精製回収ペプチド
を含む溶液にカルボキシペプチダーゼＡを混合直後の試
料の溶出時間と吸光度との関係を図３に、１０時間反応
後の試料の溶出時間と吸光度との関係を図４に示す。
ｌの３５０ｍＭ ＫＣｌ−４０ｍＭトリスＨＣｌ緩衝液
（ｐＨ７．５）に溶解し、カルボキシペプチダーゼＡ
（シグマ社製）１０ユニットと混合した後、３７℃、１
０時間反応させた。反応液を実施例１の条件に従ってＨ
ＰＬＣ分析した。その結果を図３に示す。新たに生じた
ピークを精製し、そのアミノ酸配列を全自動タンパク質
一次構造分析装置（型式ＰＰＳＱ−１０システム、島津
製作所社製）およびアミノ酸組成分析装置（型式８００
シリーズ、日本分光社製）で分析した結果、アミノ酸配
列はLys Val LeuPro Val Proであることが確認できた。
反応回収率は約４０％であった。前記精製回収ペプチド
を含む溶液にカルボキシペプチダーゼＡを混合直後の試
料の溶出時間と吸光度との関係を図３に、１０時間反応
後の試料の溶出時間と吸光度との関係を図４に示す。
【００４０】また前記カルボキシペプチダーゼＡを混合
反応させた反応液について、実施例１と同様にＡＣＥ阻
害活性を測定したところ、強い活性が認められた。更に
実施例２と同様に降圧作用を測定したところ、有意な血
圧降下作用が得られた。
反応させた反応液について、実施例１と同様にＡＣＥ阻
害活性を測定したところ、強い活性が認められた。更に
実施例２と同様に降圧作用を測定したところ、有意な血
圧降下作用が得られた。
【００４１】
【実施例５】実施例４で得られたプロティナーゼ分解ペ
プチド約７００ｍｇを含む限外濾過液９０ｍｌを凍結
後、真空凍結乾燥機（ＦＤＵ−８３０型 東京理化社
製）で乾燥した。得られた乾燥粉末６７０ｍｇを、４０
ｍｌの３５０ｍＭ ＫＣｌ−４０ｍＭトリスＨＣｌ緩衝
液（ｐＨ７．５）に溶解し、カルボキシペプチダーゼＡ
（シグマ社製）５００ユニットと混合した後、３７℃、
１０時間反応させた。反応液を実施例１の条件に従って
ＨＰＬＣ分析し、合成ペプチドLys Val Leu Pro Val Pr
oと同じ溶出時間のペプチドを回収した。
プチド約７００ｍｇを含む限外濾過液９０ｍｌを凍結
後、真空凍結乾燥機（ＦＤＵ−８３０型 東京理化社
製）で乾燥した。得られた乾燥粉末６７０ｍｇを、４０
ｍｌの３５０ｍＭ ＫＣｌ−４０ｍＭトリスＨＣｌ緩衝
液（ｐＨ７．５）に溶解し、カルボキシペプチダーゼＡ
（シグマ社製）５００ユニットと混合した後、３７℃、
１０時間反応させた。反応液を実施例１の条件に従って
ＨＰＬＣ分析し、合成ペプチドLys Val Leu Pro Val Pr
oと同じ溶出時間のペプチドを回収した。
【００４２】得られたペプチドのアミノ酸配列を全自動
タンパク質一次構造分析装置（型式ＰＰＳＱ−１０シス
テム、島津製作所社製）およびアミノ酸組成分析装置
（型式８００シリーズ、日本分光社製）で分析した結
果、アミノ酸配列はLys Val LeuPro Val Proであること
が確認できた。乾燥粉末６５０ｍｇをカルボキシペプチ
ダーゼ処理することで、Lys Val Leu Pro Val Proを
０．９ｍｇ精製回収できたた（回収率約３３％）。
タンパク質一次構造分析装置（型式ＰＰＳＱ−１０シス
テム、島津製作所社製）およびアミノ酸組成分析装置
（型式８００シリーズ、日本分光社製）で分析した結
果、アミノ酸配列はLys Val LeuPro Val Proであること
が確認できた。乾燥粉末６５０ｍｇをカルボキシペプチ
ダーゼ処理することで、Lys Val Leu Pro Val Proを
０．９ｍｇ精製回収できたた（回収率約３３％）。
【００４３】また前記カルボキシペプチダーゼＡを混合
反応させた反応液について、実施例１と同様にＡＣＥ阻
害活性を測定したところ、強い活性が認められた。更に
実施例２と同様に降圧作用を測定したところ、有意な血
圧降下作用が得られた。
反応させた反応液について、実施例１と同様にＡＣＥ阻
害活性を測定したところ、強い活性が認められた。更に
実施例２と同様に降圧作用を測定したところ、有意な血
圧降下作用が得られた。
【００４４】
配列番号：１ 配列の長さ：７ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Ser Lys Val Leu Pro Val Pro 1 5
【００４５】
配列番号：２ 配列の長さ：６ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Lys Val Leu Pro Val Pro 1 5
【図１】実施例３で行った Ser Lys Val Leu Pro Val P
ro の投与量と血圧降下度の関係を示すグラフである。
ro の投与量と血圧降下度の関係を示すグラフである。
【図２】実施例３で行った Lys Val Leu Pro Val Pro
の投与量と血圧降下度の関係を示すグラフである。
の投与量と血圧降下度の関係を示すグラフである。
【図３】実施例４において得られた Lys Val Leu Pro V
al Pro Glnを含む溶出液にカルボキシペプチダーゼＡを
混合した直後の試料の溶出時間と吸光度との関係を示す
グラフである。
al Pro Glnを含む溶出液にカルボキシペプチダーゼＡを
混合した直後の試料の溶出時間と吸光度との関係を示す
グラフである。
【図４】実施例４において得られた Lys Val Leu Pro V
al Pro Glnを含む溶出液にカルボキシペプチダーゼＡを
混合し、１０時間反応させた後の試料の溶出時間と吸光
度との関係を示すグラフである。
al Pro Glnを含む溶出液にカルボキシペプチダーゼＡを
混合し、１０時間反応させた後の試料の溶出時間と吸光
度との関係を示すグラフである。
【符号の説明】 １：Lys Val Leu Pro Val Pro Glnのピーク ２：Lys Val Leu Pro Val Proのピーク
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ６１Ｋ 38/55 ＡＢＵ Ｃ０７Ｋ 1/12 8318−4Ｈ
Claims (3)
- 【請求項１】 下記アミノ酸配列で示されるペプチド及
びその塩。 （Ｒ)n Lys Val Leu Pro Val Pro（ＲはSerを示し、ｎ
は０又は１を示す） - 【請求項２】 請求項１記載のペプチド及びその塩を有
効成分として含有する血圧降下剤。 - 【請求項３】 獣乳成分を原料として、プロティナーゼ
処理を行った後、カルボキシペプチダーゼ処理すること
を特徴とする請求項２記載の血圧降下剤の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10526295A JP3665663B2 (ja) | 1994-08-02 | 1995-04-28 | 血圧降下剤及びその製造法 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6-181653 | 1994-08-02 | ||
| JP18165394 | 1994-08-02 | ||
| JP10526295A JP3665663B2 (ja) | 1994-08-02 | 1995-04-28 | 血圧降下剤及びその製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0899994A true JPH0899994A (ja) | 1996-04-16 |
| JP3665663B2 JP3665663B2 (ja) | 2005-06-29 |
Family
ID=26445581
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP10526295A Expired - Lifetime JP3665663B2 (ja) | 1994-08-02 | 1995-04-28 | 血圧降下剤及びその製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3665663B2 (ja) |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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