JPH0856684A - 微生物によるアミド化合物の製造法 - Google Patents
微生物によるアミド化合物の製造法Info
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- JPH0856684A JPH0856684A JP19257294A JP19257294A JPH0856684A JP H0856684 A JPH0856684 A JP H0856684A JP 19257294 A JP19257294 A JP 19257294A JP 19257294 A JP19257294 A JP 19257294A JP H0856684 A JPH0856684 A JP H0856684A
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- nitrile compound
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 広いｐＨ安定性・至適ｐＨ範囲、高い耐熱性
及びアミド耐性を有し、ニトリル化合物を水和して対応
するアミド化合物に変換する能力を有する微生物を用い
た、効率のよいアミド化合物の製造法を提供する。 【構成】 生育上限温度が５５℃以上であるところの好
熱性菌であり、ニトリル化合物を水和して対応するアミ
ド化合物に変換する能力を有する微生物の培養液、菌体
もしくは菌体処理物を水性媒体中にて該ニトリル化合物
に作用させる。 【効果】 本発明の方法によれば、厳密にｐＨを調整す
る必要がないため簡便であり、高温での反応が可能なこ
とから効率のよいアミド化合物の製造が可能となる。ま
た高濃度でしかも純度の高いアミド化合物を製造するこ
とができる。
及びアミド耐性を有し、ニトリル化合物を水和して対応
するアミド化合物に変換する能力を有する微生物を用い
た、効率のよいアミド化合物の製造法を提供する。 【構成】 生育上限温度が５５℃以上であるところの好
熱性菌であり、ニトリル化合物を水和して対応するアミ
ド化合物に変換する能力を有する微生物の培養液、菌体
もしくは菌体処理物を水性媒体中にて該ニトリル化合物
に作用させる。 【効果】 本発明の方法によれば、厳密にｐＨを調整す
る必要がないため簡便であり、高温での反応が可能なこ
とから効率のよいアミド化合物の製造が可能となる。ま
た高濃度でしかも純度の高いアミド化合物を製造するこ
とができる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、微生物の作用によりニ
トリル化合物を水和して対応するアミド化合物を製造す
る方法に関する。
トリル化合物を水和して対応するアミド化合物を製造す
る方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】近年、微生物を用い、ニトリル化合物か
らアミド化合物を生産する方法がいくつか提案されてい
る。例えば、バチルス（Bacillus）属、バクテリジュー
ム（Bacteridium）属、ミクロコッカス（Micrococcus）
属、ブレビバクテリウム（Brevibacterium）属を用いる
方法（特公昭６２ー２１５１９）、コリネバクテリウム
（Corynebacterium）属、ノカルジア（Nocardia）属を
用いる方法（特公昭５６−１７９１８号公報）、シュー
ドモナス（Pseudomonas）属を用いる方法（特公昭５９
−３７９５１号公報）、ロドコッカス（Rhodococcus）
属、アルスロバクター（Arthrobacter）属、ミクロバク
テリウム（Microbacterium）属を用いる方法（特開昭６
１−１６２１９３号公報）、フサリウム（Fusarium）属
を用いる方法（特開昭６４−８６８８９号公報）、アシ
ネトバクター（Acinetobacter）属を用いる方法（特開
平２−１５４６９２号公報）、キサントバクター（Xant
hobacter）属を用いる方法（特開平４−１９７１８９号
公報）、クレブシエラ（Klebsiella）属を用いる方法
（Arch. Microbiology, Vol.156, p.231-238, (199
1)）、ストレプトマイセス（Streptomyces）属、セラチ
ア（Serratia）属、エルビニア（Erwinia）属、ツカム
レラ（Tukamurell）属、ゴルドナ（Gordona）属、モル
ガネラ（Morganella）属、プロテウス（Proteus）属、
エナテロバクター（Enterobacter）属、ミクロアスカス
（Microasucus）属、キャンディダ（Candida）属、パン
トエア（Pantoea）属を用いる方法（特開平５−１５３
８４号公報）、シトロバクター（Citrobacter)属を用い
る方法（特開平５−３０９８４号公報）、エアロモナス
（Aeromonas）属を用いる方法（5-30983）、リゾビウム
（Rhizobium）属を用いる方法（特開平５−２３６９７
７号公報）、アグロバクテリウム（Agrobacterum）属を
用いる方法（特開平６−１４７８６号公報）が知られて
いる。また、ニトリル化合物を水和して対応する有機酸
を製造する方法の１例として、４−ハロ−３−ヒドロキ
シブチロニトリルから４−ハロ−３−ヒドロキシ酪酸の
製造方法としてアルスロバクター（Arthrobacter）属、
カセオバクター（Caseobacter）属、ノカルディア（Noc
ardia）属、シュードノカルディア（Pseudonocardia）
属およびロドコッカス（Rhodococcus）属を用いる方法
（特開平４−３６０６８９号公報）が知られている。
らアミド化合物を生産する方法がいくつか提案されてい
る。例えば、バチルス（Bacillus）属、バクテリジュー
ム（Bacteridium）属、ミクロコッカス（Micrococcus）
属、ブレビバクテリウム（Brevibacterium）属を用いる
方法（特公昭６２ー２１５１９）、コリネバクテリウム
（Corynebacterium）属、ノカルジア（Nocardia）属を
用いる方法（特公昭５６−１７９１８号公報）、シュー
ドモナス（Pseudomonas）属を用いる方法（特公昭５９
−３７９５１号公報）、ロドコッカス（Rhodococcus）
属、アルスロバクター（Arthrobacter）属、ミクロバク
テリウム（Microbacterium）属を用いる方法（特開昭６
１−１６２１９３号公報）、フサリウム（Fusarium）属
を用いる方法（特開昭６４−８６８８９号公報）、アシ
ネトバクター（Acinetobacter）属を用いる方法（特開
平２−１５４６９２号公報）、キサントバクター（Xant
hobacter）属を用いる方法（特開平４−１９７１８９号
公報）、クレブシエラ（Klebsiella）属を用いる方法
（Arch. Microbiology, Vol.156, p.231-238, (199
1)）、ストレプトマイセス（Streptomyces）属、セラチ
ア（Serratia）属、エルビニア（Erwinia）属、ツカム
レラ（Tukamurell）属、ゴルドナ（Gordona）属、モル
ガネラ（Morganella）属、プロテウス（Proteus）属、
エナテロバクター（Enterobacter）属、ミクロアスカス
（Microasucus）属、キャンディダ（Candida）属、パン
トエア（Pantoea）属を用いる方法（特開平５−１５３
８４号公報）、シトロバクター（Citrobacter)属を用い
る方法（特開平５−３０９８４号公報）、エアロモナス
（Aeromonas）属を用いる方法（5-30983）、リゾビウム
（Rhizobium）属を用いる方法（特開平５−２３６９７
７号公報）、アグロバクテリウム（Agrobacterum）属を
用いる方法（特開平６−１４７８６号公報）が知られて
いる。また、ニトリル化合物を水和して対応する有機酸
を製造する方法の１例として、４−ハロ−３−ヒドロキ
シブチロニトリルから４−ハロ−３−ヒドロキシ酪酸の
製造方法としてアルスロバクター（Arthrobacter）属、
カセオバクター（Caseobacter）属、ノカルディア（Noc
ardia）属、シュードノカルディア（Pseudonocardia）
属およびロドコッカス（Rhodococcus）属を用いる方法
（特開平４−３６０６８９号公報）が知られている。
【０００３】上記のニトリル化合物を対応するアミド化
合物に変換する能力を有する微生物あるいはニトリル化
合物を対応する有機酸に変換する能力を有する微生物
は、いずれもその生育温度範囲が１０℃〜５０℃である
いわゆる常温菌と呼ばれる微生物である。これら微生物
の有するニトリル水和酵素は熱安定性が低いため、これ
ら微生物によりニトリル化合物からアミド化合物を製造
するに際しては、通常０〜３０℃、好ましくは０〜１５
℃で反応が行われる（特公昭５６−３８１１８号公
報）。また、これら微生物の有するニトリル水和酵素は
多くの場合安定なｐＨ範囲・至適ｐＨがｐＨ７〜９の範
囲にあることから、これら微生物を用いた反応のｐＨは
概ねｐＨ７〜９と比較的狭い中性から弱アルカリ性のｐ
Ｈの条件で行われる。
合物に変換する能力を有する微生物あるいはニトリル化
合物を対応する有機酸に変換する能力を有する微生物
は、いずれもその生育温度範囲が１０℃〜５０℃である
いわゆる常温菌と呼ばれる微生物である。これら微生物
の有するニトリル水和酵素は熱安定性が低いため、これ
ら微生物によりニトリル化合物からアミド化合物を製造
するに際しては、通常０〜３０℃、好ましくは０〜１５
℃で反応が行われる（特公昭５６−３８１１８号公
報）。また、これら微生物の有するニトリル水和酵素は
多くの場合安定なｐＨ範囲・至適ｐＨがｐＨ７〜９の範
囲にあることから、これら微生物を用いた反応のｐＨは
概ねｐＨ７〜９と比較的狭い中性から弱アルカリ性のｐ
Ｈの条件で行われる。
【０００４】このように、ニトリル化合物を対応するア
ミド化合物に変換させる能力を有する微生物またはニト
リル化合物を対応する有機酸に変換させる能力を有する
微生物及び該微生物が生産する酵素が幾種類か知られて
いるが、それら微生物の酵素は一般に熱安定性が低く、
ｐＨ安定性・至適ｐＨ範囲が狭いｐＨ範囲に限られ、更
に生成物であるアミド化合物に対する安定性などの面で
必ずしも十分ではない。そのため、上記問題点を克服し
た微生物を用いた、さらに効率の良いアミド化合物の製
造法が求められている。しかし、上記問題点を克服した
微生物はこれまで知られていない。
ミド化合物に変換させる能力を有する微生物またはニト
リル化合物を対応する有機酸に変換させる能力を有する
微生物及び該微生物が生産する酵素が幾種類か知られて
いるが、それら微生物の酵素は一般に熱安定性が低く、
ｐＨ安定性・至適ｐＨ範囲が狭いｐＨ範囲に限られ、更
に生成物であるアミド化合物に対する安定性などの面で
必ずしも十分ではない。そのため、上記問題点を克服し
た微生物を用いた、さらに効率の良いアミド化合物の製
造法が求められている。しかし、上記問題点を克服した
微生物はこれまで知られていない。
【０００５】一方、自然界には５５℃以上の高温下で生
育する好熱性菌が知られている。好熱性菌の生産する酵
素はしばしば高い耐熱性と広いｐＨ安定性を示すことが
知られている。しかし、広いｐＨ範囲にわたって高い活
性を示す酵素はこれまで知られていない。また、好熱性
菌の生産する酵素は、しばしば７Ｍ尿素、６Ｍ塩酸グア
ニジンあるいは１％ＳＤＳ等のタンパク変性剤に対して
安定であることが知られている。しかし、アクリルアミ
ドやメタクリルアミドの様に２重結合を持つ反応性の高
いアミド化合物に対する安定性についてはこれまで全く
知られていなかった。
育する好熱性菌が知られている。好熱性菌の生産する酵
素はしばしば高い耐熱性と広いｐＨ安定性を示すことが
知られている。しかし、広いｐＨ範囲にわたって高い活
性を示す酵素はこれまで知られていない。また、好熱性
菌の生産する酵素は、しばしば７Ｍ尿素、６Ｍ塩酸グア
ニジンあるいは１％ＳＤＳ等のタンパク変性剤に対して
安定であることが知られている。しかし、アクリルアミ
ドやメタクリルアミドの様に２重結合を持つ反応性の高
いアミド化合物に対する安定性についてはこれまで全く
知られていなかった。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、広い
ｐＨ安定性・至適ｐＨ範囲、高い耐熱性及びアミド耐性
を有し、ニトリル化合物を水和して対応するアミドに変
換する能力を有する微生物を用いた、効率のよいアミド
化合物の製造法を提供することにある。
ｐＨ安定性・至適ｐＨ範囲、高い耐熱性及びアミド耐性
を有し、ニトリル化合物を水和して対応するアミドに変
換する能力を有する微生物を用いた、効率のよいアミド
化合物の製造法を提供することにある。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、好熱性菌
の生産するニトリル水和酵素は高い耐熱性を持ち、広い
ｐＨ範囲で安定であろうと予測した。該予測に基づき、
ニトリル水和活性を有する好熱性微生物のスクリーニン
グを行った。その結果、生育上限温度が５５℃以上であ
る好熱性菌に属する微生物の中からニトリル化合物を水
和して対応するアミド化合物へ変換する能力を有する微
生物を見い出した。しかも、該微生物の有する酵素は高
い熱安定性と広いｐＨ範囲で安定であった。さらに驚く
べきことに該微生物の有する酵素は、広いｐＨ範囲で高
いアミド変換能を有し、生成物であるアクリルアミドや
メタアクリルアミドに対する安定性が極めて高いことを
見い出した。本発明者らは、上記微生物の培養液、菌体
もしくは菌体処理物を水性媒体中にて該ニトリル化合物
に作用させたところ、効率よくアミド化合物が生成する
ことを見いだした。本発明は、上記知見に基づきなされ
たものである。
の生産するニトリル水和酵素は高い耐熱性を持ち、広い
ｐＨ範囲で安定であろうと予測した。該予測に基づき、
ニトリル水和活性を有する好熱性微生物のスクリーニン
グを行った。その結果、生育上限温度が５５℃以上であ
る好熱性菌に属する微生物の中からニトリル化合物を水
和して対応するアミド化合物へ変換する能力を有する微
生物を見い出した。しかも、該微生物の有する酵素は高
い熱安定性と広いｐＨ範囲で安定であった。さらに驚く
べきことに該微生物の有する酵素は、広いｐＨ範囲で高
いアミド変換能を有し、生成物であるアクリルアミドや
メタアクリルアミドに対する安定性が極めて高いことを
見い出した。本発明者らは、上記微生物の培養液、菌体
もしくは菌体処理物を水性媒体中にて該ニトリル化合物
に作用させたところ、効率よくアミド化合物が生成する
ことを見いだした。本発明は、上記知見に基づきなされ
たものである。
【０００８】すなわち、本発明は生育上限温度が５５℃
以上であるところの好熱性菌であり、ニトリル化合物を
水和して対応するアミド化合物に変換する能力を有する
微生物の培養液、菌体もしくは菌体処理物もしくは菌体
より調製した酵素または該酵素の処理物を水性媒体中に
て該ニトリル化合物に作用させることを特徴とする微生
物によるアミド化合物の製造法を提供するものである。
以上であるところの好熱性菌であり、ニトリル化合物を
水和して対応するアミド化合物に変換する能力を有する
微生物の培養液、菌体もしくは菌体処理物もしくは菌体
より調製した酵素または該酵素の処理物を水性媒体中に
て該ニトリル化合物に作用させることを特徴とする微生
物によるアミド化合物の製造法を提供するものである。
【０００９】以下、本発明について詳細に説明する。本
発明において使用される微生物は、生育上限温度が５５
℃以上である好熱性菌に属する微生物であり、ニトリル
化合物を水和して対応するアミド化合物に変換する能力
を有するものであれば特に制限はなく、自然界から分離
されたものでも、突然変異、遺伝子操作等の手段により
創製されたものでも良い。これらの微生物の例として
は、シュードノカルディア（Psuedonocardia）属に属す
るものが好適に使用でき、具体的にはシュードノカルデ
ィア・サーモフィラ（Psuedonocardia thermophila）AT
CC19285 が挙げられる。この菌株は、アメリカン タイ
プカルチャーコレクション（American Typeculture Col
lection:ＡＴＣＣ）から容易に入手することができる。
本発明において使用される微生物の有するニトリル化合
物を水和して対応するアミド化合物に変換する能力と
は、ニトリル化合物を水和して対応するアミド化合物に
変換する活性を指し、その様な活性を有する酵素として
はニトリルヒドラターゼが知られている。
発明において使用される微生物は、生育上限温度が５５
℃以上である好熱性菌に属する微生物であり、ニトリル
化合物を水和して対応するアミド化合物に変換する能力
を有するものであれば特に制限はなく、自然界から分離
されたものでも、突然変異、遺伝子操作等の手段により
創製されたものでも良い。これらの微生物の例として
は、シュードノカルディア（Psuedonocardia）属に属す
るものが好適に使用でき、具体的にはシュードノカルデ
ィア・サーモフィラ（Psuedonocardia thermophila）AT
CC19285 が挙げられる。この菌株は、アメリカン タイ
プカルチャーコレクション（American Typeculture Col
lection:ＡＴＣＣ）から容易に入手することができる。
本発明において使用される微生物の有するニトリル化合
物を水和して対応するアミド化合物に変換する能力と
は、ニトリル化合物を水和して対応するアミド化合物に
変換する活性を指し、その様な活性を有する酵素として
はニトリルヒドラターゼが知られている。
【００１０】本発明において用いられる微生物を培養す
る培地は、目的を達する限り何ら特別の制限はなく、使
用菌株の利用し得る炭素源、窒素源、無機塩類、更に微
量の有機栄養物などを適当に含有するものであれば合成
培地、天然培地のいずれも使用できる。また、培養にあ
たってはイソブチロニトリルなどのニトリル類または、
クロトンアミドやメタクリルアミドなどのアミド化合物
を少量培地に添加することにより、ニトリル化合物から
のアミド化合物生成能力が高い微生物菌体を得ることが
できることもある。培養条件は菌株や培地によっても異
なるが、培養温度は２０〜７０℃、好ましくは４０〜６
０℃、より好ましくは５０〜６０℃であり、培地のｐＨ
は、４〜９、好ましくは６〜８である。本発明に関する
微生物は、上記条件で液体、或いは固体培養される。菌
体を大量に得るためには、液体培養が適している。本発
明においては、このようにして得られた培養液、遠心分
離、濾過等により集菌された菌体または菌体処理物を酵
素源として用いる。菌体処理物としては、菌体を機械的
破壊、超音波処理、凍結融解処理、乾燥処理、溶媒処
理、加圧減圧処理、浸透圧処理、自己消化、界面活性剤
処理、酸素処理したもの、菌体および菌体抽出物の固定
化物などが挙げられる。また、菌体より抽出された酵素
及びその固定化物も菌体処理物の範疇であり、酵素源と
して用いられる。
る培地は、目的を達する限り何ら特別の制限はなく、使
用菌株の利用し得る炭素源、窒素源、無機塩類、更に微
量の有機栄養物などを適当に含有するものであれば合成
培地、天然培地のいずれも使用できる。また、培養にあ
たってはイソブチロニトリルなどのニトリル類または、
クロトンアミドやメタクリルアミドなどのアミド化合物
を少量培地に添加することにより、ニトリル化合物から
のアミド化合物生成能力が高い微生物菌体を得ることが
できることもある。培養条件は菌株や培地によっても異
なるが、培養温度は２０〜７０℃、好ましくは４０〜６
０℃、より好ましくは５０〜６０℃であり、培地のｐＨ
は、４〜９、好ましくは６〜８である。本発明に関する
微生物は、上記条件で液体、或いは固体培養される。菌
体を大量に得るためには、液体培養が適している。本発
明においては、このようにして得られた培養液、遠心分
離、濾過等により集菌された菌体または菌体処理物を酵
素源として用いる。菌体処理物としては、菌体を機械的
破壊、超音波処理、凍結融解処理、乾燥処理、溶媒処
理、加圧減圧処理、浸透圧処理、自己消化、界面活性剤
処理、酸素処理したもの、菌体および菌体抽出物の固定
化物などが挙げられる。また、菌体より抽出された酵素
及びその固定化物も菌体処理物の範疇であり、酵素源と
して用いられる。
【００１１】本発明において水和反応に供されるニトリ
ル化合物としては、広い範囲のニトリル、たとえば脂肪
族ニトリル、芳香族ニトリル、複素環式ニトリル、シア
ノヒドリン類などが含まれる。脂肪族ニトリルとして
は、炭素数２〜６の飽和または不飽和ニトリル、たとえ
ば、アセトニトリル、プロピオニトリル、ブチロニトリ
ル、イソブチロニトリル、バレルニトリル、イソバレロ
ニトリル、カプロニトリルなどの飽和モノニトリル類；
マロノニトリル、サクシノニトリル、アジポニトリルな
どの飽和ジニトリル類；α−アミノプロピオニトリル、
α−アミノブチロニトリル、α−アミノアセトニトリ
ル、β−アミノプロピオニトリルなどのαまたはβアミ
ノニトリル類、ラクトニトリル、ヒドロキシアセトニト
リル、などのヒドロキシニトリル類、アクリルニトリ
ル、メタアクリロニトリル、クロトノニトリルなどの不
飽和ニトリルなどが挙げられる。芳香族ニトリルとして
は、ベンゾニトリル、ｏ−，ｍ−，およびｐ−クロロベ
ンゾニトリル、ｏ−，ｍ−，およびｐ−フルオロベンゾ
ニトリル、ｏ−，ｍ−，およびｐ−ニトロベンゾニトリ
ル、ｏ−，ｍ−，およびｐ−アミノベンゾニトリル、ｏ
−，ｍ−，およびｐ−トルニトリル、ベンジルシアナイ
ド、複素環式ニトリルとしては、シアノピリジン類、シ
アノピラジン類、シアノインドール類などが挙げられ
る。シアノヒドリンとしては、アセトンシアンヒドリ
ン、マンデルニトリルなどが挙げられる。
ル化合物としては、広い範囲のニトリル、たとえば脂肪
族ニトリル、芳香族ニトリル、複素環式ニトリル、シア
ノヒドリン類などが含まれる。脂肪族ニトリルとして
は、炭素数２〜６の飽和または不飽和ニトリル、たとえ
ば、アセトニトリル、プロピオニトリル、ブチロニトリ
ル、イソブチロニトリル、バレルニトリル、イソバレロ
ニトリル、カプロニトリルなどの飽和モノニトリル類；
マロノニトリル、サクシノニトリル、アジポニトリルな
どの飽和ジニトリル類；α−アミノプロピオニトリル、
α−アミノブチロニトリル、α−アミノアセトニトリ
ル、β−アミノプロピオニトリルなどのαまたはβアミ
ノニトリル類、ラクトニトリル、ヒドロキシアセトニト
リル、などのヒドロキシニトリル類、アクリルニトリ
ル、メタアクリロニトリル、クロトノニトリルなどの不
飽和ニトリルなどが挙げられる。芳香族ニトリルとして
は、ベンゾニトリル、ｏ−，ｍ−，およびｐ−クロロベ
ンゾニトリル、ｏ−，ｍ−，およびｐ−フルオロベンゾ
ニトリル、ｏ−，ｍ−，およびｐ−ニトロベンゾニトリ
ル、ｏ−，ｍ−，およびｐ−アミノベンゾニトリル、ｏ
−，ｍ−，およびｐ−トルニトリル、ベンジルシアナイ
ド、複素環式ニトリルとしては、シアノピリジン類、シ
アノピラジン類、シアノインドール類などが挙げられ
る。シアノヒドリンとしては、アセトンシアンヒドリ
ン、マンデルニトリルなどが挙げられる。
【００１２】ニトリル化合物を水和して対応するアミド
化合物に変換する反応は、上記酵素源とニトリル化合物
を水性媒体中にて静置またはゆるやかな攪拌下に接触さ
せることにより行われる。水性媒体中には、酵素源とニ
トリル化合物を含有する他特に制限はないが、必要によ
り、緩衝能を有する物質を適宜添加してもよい。基質で
あるニトリル化合物の濃度には特に制限はないが、通常
は０．１〜３０重量％程度である。また、ニトリル化合
物は連続的または間欠的に反応液に添加しても良い。酵
素源である培養液、菌体もしくは菌体処理物もしくは菌
体より調製したニトリル水和酵素または該酵素の処理物
の反応液への添加量は、特に制限はないが、乾燥菌体重
量換算で０．１〜１０ｇ／ｌの範囲で添加すればよい。
反応は通常０〜８０℃、好ましくは０〜７０℃、より好
ましくは１０〜６０℃、ｐＨ３〜１０、好ましくは４〜
１０、より好ましくは５〜１０の範囲で行われる。反応
時間は、酵素力価や基質であるニトリル化合物の種類や
濃度等の反応条件により異なるが、通常は１〜５０時間
程度である。このようにして反応を行うと反応液中に
は、基質のニトリル化合物に対応するアミド化合物が生
成する。反応液からアミド化合物を採取する方法として
は、濃縮晶析等公知の方法が用いられる。
化合物に変換する反応は、上記酵素源とニトリル化合物
を水性媒体中にて静置またはゆるやかな攪拌下に接触さ
せることにより行われる。水性媒体中には、酵素源とニ
トリル化合物を含有する他特に制限はないが、必要によ
り、緩衝能を有する物質を適宜添加してもよい。基質で
あるニトリル化合物の濃度には特に制限はないが、通常
は０．１〜３０重量％程度である。また、ニトリル化合
物は連続的または間欠的に反応液に添加しても良い。酵
素源である培養液、菌体もしくは菌体処理物もしくは菌
体より調製したニトリル水和酵素または該酵素の処理物
の反応液への添加量は、特に制限はないが、乾燥菌体重
量換算で０．１〜１０ｇ／ｌの範囲で添加すればよい。
反応は通常０〜８０℃、好ましくは０〜７０℃、より好
ましくは１０〜６０℃、ｐＨ３〜１０、好ましくは４〜
１０、より好ましくは５〜１０の範囲で行われる。反応
時間は、酵素力価や基質であるニトリル化合物の種類や
濃度等の反応条件により異なるが、通常は１〜５０時間
程度である。このようにして反応を行うと反応液中に
は、基質のニトリル化合物に対応するアミド化合物が生
成する。反応液からアミド化合物を採取する方法として
は、濃縮晶析等公知の方法が用いられる。
【００１３】
【実施例】以下、実施例により本発明を具体的に説明す
るがアミド化合物の定量は、強酸性カチオン交換樹脂充
填カラムとＵＶ吸光検出器を備えた液体クロマトグラフ
ィーにより行った。
るがアミド化合物の定量は、強酸性カチオン交換樹脂充
填カラムとＵＶ吸光検出器を備えた液体クロマトグラフ
ィーにより行った。
【００１４】実施例１ イーストエキス０．５％、可溶性でんぷん０．４％、リ
ン酸１カリウム０．０３％、リン酸２ナトリウム０．０
６％、硫酸マグネシウム７水和物０．０１％、ＮａＣｌ
０．５％、ギ酸ナトリウム０．０５％、塩化コバルト６
水和物１０ｍｇ／ｌ、およびメタクリルアミド０．２％
を含むｐＨ７．０の液体培地１００ｍｌにシュードノカ
ルディア・サーモフィラ（Psuedonocardia thermophil
a）ATCC19285を接種し、５０℃で４８時間振盪培養し
た。培養液より菌体を遠心分離し洗浄した。反応はアク
リロニトリル２００ｍＭ、菌体を乾燥重量換算で１ｇ／
ｌを含む水溶液（ｐＨはＮａＯＨにより６．０に調整）
中で、１０℃、１時間ゆるやかに攪拌しながら行った。
反応終了後、反応液の一部を希釈して、液体クロマトグ
ラフィーにより分析したところ、添加したアクリルニト
リルは全てアクリルアミドに変換されていた（変換率１
００％）。
ン酸１カリウム０．０３％、リン酸２ナトリウム０．０
６％、硫酸マグネシウム７水和物０．０１％、ＮａＣｌ
０．５％、ギ酸ナトリウム０．０５％、塩化コバルト６
水和物１０ｍｇ／ｌ、およびメタクリルアミド０．２％
を含むｐＨ７．０の液体培地１００ｍｌにシュードノカ
ルディア・サーモフィラ（Psuedonocardia thermophil
a）ATCC19285を接種し、５０℃で４８時間振盪培養し
た。培養液より菌体を遠心分離し洗浄した。反応はアク
リロニトリル２００ｍＭ、菌体を乾燥重量換算で１ｇ／
ｌを含む水溶液（ｐＨはＮａＯＨにより６．０に調整）
中で、１０℃、１時間ゆるやかに攪拌しながら行った。
反応終了後、反応液の一部を希釈して、液体クロマトグ
ラフィーにより分析したところ、添加したアクリルニト
リルは全てアクリルアミドに変換されていた（変換率１
００％）。
【００１５】実施例２ 反応基質のみ、第１表（表１）に示した各ニトリル化合
物に変更し、実施例１と同様の方法で反応を行った（ニ
トリル化合物の添加量はそれぞれ２００ｍＭ）。その結
果、それぞれの反応液中には第１表（表１）に示した濃
度で基質のニトリル化合物に対応するアミド化合物が生
成していた。
物に変更し、実施例１と同様の方法で反応を行った（ニ
トリル化合物の添加量はそれぞれ２００ｍＭ）。その結
果、それぞれの反応液中には第１表（表１）に示した濃
度で基質のニトリル化合物に対応するアミド化合物が生
成していた。
【００１６】
【表１】 第１表 ------------------------------------------------------------------------ 基質のニトリル化合物 生成アミド化合物 アミド生成量(mM) ------------------------------------------------------------------------ アセトニトリル アセトアミド 200 プロピオニトリル プロピオアミド 158 βーヒドロキシプロピオニトリル βーヒドロキシプロピオアミド 123 メタクリロニトリル メタクリルアミド 78 ブチロニトリル ブチルアミド 45 イソブチロニトリル イソブチルアミド 48 サクシノニトリル サクシンアミド 28 バレロニトリル バレルアミド 35 アジポニトリル アジポアミド 21 ニコチノニトリル ニコチンアミド 4 ベンゾニトリル ベンズアミド 2 シアノピラジン ピラジンカルボキサミド 5 DL マンデロニトリル マンデルアミド 7 ------------------------------------------------------------------------
【００１７】実施例３ 実施例１と同様の方法でシュードノカルディア・サーモ
フィラ（Psuedonocardia thermophila）ATCC19285を培
養した。培養液より菌体を遠心分離し、洗浄した。反応
は、菌体を乾燥重量換算で１０ｇ／ｌを含む２５ｍＭ燐
酸緩衝液（ｐＨ６．０）３０ｍｌ中に、ポンプを用いて
アクリルニトリルを１時間あたり２．４ｇの量で連続的
に添加しながら １０℃でゆるやかに攪拌して行った。
５時間後、反応液の一部を希釈して、液体クロマトグラ
フィーにより分析したところ、４００ｇ／ｌのアクリル
アミドが蓄積していた（対アクリルニトリル収率９８
％）。
フィラ（Psuedonocardia thermophila）ATCC19285を培
養した。培養液より菌体を遠心分離し、洗浄した。反応
は、菌体を乾燥重量換算で１０ｇ／ｌを含む２５ｍＭ燐
酸緩衝液（ｐＨ６．０）３０ｍｌ中に、ポンプを用いて
アクリルニトリルを１時間あたり２．４ｇの量で連続的
に添加しながら １０℃でゆるやかに攪拌して行った。
５時間後、反応液の一部を希釈して、液体クロマトグラ
フィーにより分析したところ、４００ｇ／ｌのアクリル
アミドが蓄積していた（対アクリルニトリル収率９８
％）。
【００１８】実施例４ 実施例１と同様の方法でシュードノカルディア・サーモ
フィラ（Psuedonocardia thermophila）ATCC19285を培
養した。培養液より菌体を遠心分離し、洗浄した。湿菌
体１０ｇに５０ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ６．
８）１０ｍｌ、アクリルアミド８．４ｇ、ジメチルアミ
ノメチルメタクリレート塩化メチル４級化物０．８ｇ、
メチレンビスアクリルアミド０．８ｇを均一に懸濁し
た。これに１０％ジメチルアミノプロピオニトリル１ｍ
ｌ、５％過硫酸カリウム１ｍｌを均一に混合し氷水中で
重合ゲル化させた。この菌体含有ゲルをブレンダーにて
小片に破砕し、これを洗浄し固定化菌体とした。反応
は、２５ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ６．０）３０ｍｌ中に
固定化菌体を乾燥重量換算で０．５ｇを加え、ポンプを
用いてアクリロニトリルを１時間あたり２．４ｇ連続的
に添加しながら１０℃でゆるやかに攪拌して行った。５
時間後、反応液中には４００ｇ／ｌのアクリルアミドが
蓄積していた（モル収率９８％）。
フィラ（Psuedonocardia thermophila）ATCC19285を培
養した。培養液より菌体を遠心分離し、洗浄した。湿菌
体１０ｇに５０ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ６．
８）１０ｍｌ、アクリルアミド８．４ｇ、ジメチルアミ
ノメチルメタクリレート塩化メチル４級化物０．８ｇ、
メチレンビスアクリルアミド０．８ｇを均一に懸濁し
た。これに１０％ジメチルアミノプロピオニトリル１ｍ
ｌ、５％過硫酸カリウム１ｍｌを均一に混合し氷水中で
重合ゲル化させた。この菌体含有ゲルをブレンダーにて
小片に破砕し、これを洗浄し固定化菌体とした。反応
は、２５ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ６．０）３０ｍｌ中に
固定化菌体を乾燥重量換算で０．５ｇを加え、ポンプを
用いてアクリロニトリルを１時間あたり２．４ｇ連続的
に添加しながら１０℃でゆるやかに攪拌して行った。５
時間後、反応液中には４００ｇ／ｌのアクリルアミドが
蓄積していた（モル収率９８％）。
【００１９】実施例５ 実施例１と同様の方法でシュードノカルディア・サーモ
フィラ（Psuedonocardia thermophila）ATCC19285を培
養した。培養液より菌体を遠心分離し、洗浄した。反応
はアクリルニトリル２００ｍＭ、菌体を乾燥重量換算で
１ｇ／ｌを含む水溶液（ｐＨはＮａＯＨによりｐＨ６．
０に調整）中で、各反応温度で、１時間ゆるやかに攪拌
しながら行った。反応終了後、反応液の一部を希釈し
て、液体クロマトグラフィーにより分析したところ、そ
れぞれの反応液中には第２表（表２）に示した濃度でア
クリルアミドが生成していた。このことから、本発明の
方法は従来の方法に比べ、より高い温度で反応すること
ができることがわかった。
フィラ（Psuedonocardia thermophila）ATCC19285を培
養した。培養液より菌体を遠心分離し、洗浄した。反応
はアクリルニトリル２００ｍＭ、菌体を乾燥重量換算で
１ｇ／ｌを含む水溶液（ｐＨはＮａＯＨによりｐＨ６．
０に調整）中で、各反応温度で、１時間ゆるやかに攪拌
しながら行った。反応終了後、反応液の一部を希釈し
て、液体クロマトグラフィーにより分析したところ、そ
れぞれの反応液中には第２表（表２）に示した濃度でア
クリルアミドが生成していた。このことから、本発明の
方法は従来の方法に比べ、より高い温度で反応すること
ができることがわかった。
【００２０】
【表２】
【００２１】実施例６ 実施例１と同様の方法でシュードノカルディア・サーモ
フィラ（Psuedonocar-dia thermophila）ATCC19285を培
養した。培養液より菌体を遠心分離し、洗浄した。反応
はアクリルニトリル２００ｍＭ、菌体を乾燥重量換算で
１ｇ／ｌを含む水溶液（ｐＨはＮａＯＨまたはＨ2ＳＯ4
により各ｐＨに調整）中で、１０℃、１時間ゆるやかに
攪拌しながら行った。反応終了後、反応液の一部を希釈
して、液体クロマトグラフィーにより分析したところ、
それぞれの反応液中には第３表（表３）に示した濃度で
アクリルアミドが生成していた。このことから、本発明
の方法は、従来の方法に比べ広いｐＨ範囲で高い反応性
を有することがわかった。
フィラ（Psuedonocar-dia thermophila）ATCC19285を培
養した。培養液より菌体を遠心分離し、洗浄した。反応
はアクリルニトリル２００ｍＭ、菌体を乾燥重量換算で
１ｇ／ｌを含む水溶液（ｐＨはＮａＯＨまたはＨ2ＳＯ4
により各ｐＨに調整）中で、１０℃、１時間ゆるやかに
攪拌しながら行った。反応終了後、反応液の一部を希釈
して、液体クロマトグラフィーにより分析したところ、
それぞれの反応液中には第３表（表３）に示した濃度で
アクリルアミドが生成していた。このことから、本発明
の方法は、従来の方法に比べ広いｐＨ範囲で高い反応性
を有することがわかった。
【００２２】
【表３】
【００２３】実施例７ 実施例１と同様の方法でシュードノカルディア・サーモ
フィラ（Psuedonocar-dia thermophila）ATCC19285を培
養した。培養液より菌体を遠心分離し、洗浄した。乾燥
重量にして約５ｍｇを５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．
０）１ｍｌに懸濁し、４０℃で２時間熱処理した。一
方、乾燥重量にして約５ｍｇを３０％のアクリルアミド
を添加した５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）１ｍｌ
に懸濁し、１０℃で２時間置いた後、５０ｍＭリン酸緩
衝液（ｐＨ７．０）で十分に洗浄し、再度５０ｍＭリン
酸緩衝液（ｐＨ７．０）１ｍｌで懸濁した。それぞれの
菌体懸濁液０．２ｍｌを取り、５０ｍＭリン酸緩衝液
（ｐＨ６．０）０．８ｍｌに加え、２００ｍＭのアクリ
ルニトリルを添加し、１０℃、１時間ゆるやかに攪拌し
ながら反応を行った。反応終了後、反応液の一部を希釈
して、液体クロマトグラフィーにより分析した。第４表
（表４）に、未処理区（コントロール）のアクリルアミ
ド蓄積量を１００％としたときの相対値でそれぞれの処
理区のアクリルアミド蓄積量を示した。
フィラ（Psuedonocar-dia thermophila）ATCC19285を培
養した。培養液より菌体を遠心分離し、洗浄した。乾燥
重量にして約５ｍｇを５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．
０）１ｍｌに懸濁し、４０℃で２時間熱処理した。一
方、乾燥重量にして約５ｍｇを３０％のアクリルアミド
を添加した５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）１ｍｌ
に懸濁し、１０℃で２時間置いた後、５０ｍＭリン酸緩
衝液（ｐＨ７．０）で十分に洗浄し、再度５０ｍＭリン
酸緩衝液（ｐＨ７．０）１ｍｌで懸濁した。それぞれの
菌体懸濁液０．２ｍｌを取り、５０ｍＭリン酸緩衝液
（ｐＨ６．０）０．８ｍｌに加え、２００ｍＭのアクリ
ルニトリルを添加し、１０℃、１時間ゆるやかに攪拌し
ながら反応を行った。反応終了後、反応液の一部を希釈
して、液体クロマトグラフィーにより分析した。第４表
（表４）に、未処理区（コントロール）のアクリルアミ
ド蓄積量を１００％としたときの相対値でそれぞれの処
理区のアクリルアミド蓄積量を示した。
【００２４】比較例１ 実施例１と同様の方法で培養温度だけ２８℃に変更し
て、シュードノカルディア・コンパクタ（Psuedonocard
ia compacta）IFO14325及びシュードノカルディア・コ
ンパクタ（Psuedonocardia compacta）IFO14343を培養
した。尚、これらの菌株は何れも発酵研究所（大阪府大
阪市淀川区十三本町２丁目１７番８５号）から容易に入
手される。培養液より菌体を遠心分離し、洗浄した。乾
燥重量にして約５ｍｇを５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ
７．０）１ｍｌに懸濁し、４０℃で２時間熱処理した。
一方、乾燥重量にして約５ｍｇを３０％のアクリルアミ
ドを添加した５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）１ｍ
ｌに懸濁し、１０℃で２時間置いた後、５０ｍＭリン酸
緩衝液（ｐＨ７．０）で十分に洗浄し、再度５０ｍＭリ
ン酸緩衝液（ｐＨ７．０）１ｍｌで懸濁した。それぞれ
の菌体懸濁液０．２ｍｌを取り、５０ｍＭリン酸緩衝液
（ｐＨ６．０）０．８ｍｌに加え、２００ｍＭのアクリ
ルニトリルを添加し、１０℃、１時間ゆるやかに攪拌し
ながら反応を行った。反応終了後、反応液の一部を希釈
して、液体クロマトグラフィーにより分析した。第４表
（表４）に、未処理区（コントロール）のアクリルアミ
ド蓄積量を１００％としたときの相対値でそれぞれの処
理区のアクリルアミド蓄積量を示した。このことから、
同じPsuedonocardia属に属する微生物であっても、好熱
菌性に比して常温菌は、耐熱性やアクリルアミドに対す
る耐性が劣ることがわかる。
て、シュードノカルディア・コンパクタ（Psuedonocard
ia compacta）IFO14325及びシュードノカルディア・コ
ンパクタ（Psuedonocardia compacta）IFO14343を培養
した。尚、これらの菌株は何れも発酵研究所（大阪府大
阪市淀川区十三本町２丁目１７番８５号）から容易に入
手される。培養液より菌体を遠心分離し、洗浄した。乾
燥重量にして約５ｍｇを５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ
７．０）１ｍｌに懸濁し、４０℃で２時間熱処理した。
一方、乾燥重量にして約５ｍｇを３０％のアクリルアミ
ドを添加した５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）１ｍ
ｌに懸濁し、１０℃で２時間置いた後、５０ｍＭリン酸
緩衝液（ｐＨ７．０）で十分に洗浄し、再度５０ｍＭリ
ン酸緩衝液（ｐＨ７．０）１ｍｌで懸濁した。それぞれ
の菌体懸濁液０．２ｍｌを取り、５０ｍＭリン酸緩衝液
（ｐＨ６．０）０．８ｍｌに加え、２００ｍＭのアクリ
ルニトリルを添加し、１０℃、１時間ゆるやかに攪拌し
ながら反応を行った。反応終了後、反応液の一部を希釈
して、液体クロマトグラフィーにより分析した。第４表
（表４）に、未処理区（コントロール）のアクリルアミ
ド蓄積量を１００％としたときの相対値でそれぞれの処
理区のアクリルアミド蓄積量を示した。このことから、
同じPsuedonocardia属に属する微生物であっても、好熱
菌性に比して常温菌は、耐熱性やアクリルアミドに対す
る耐性が劣ることがわかる。
【００２５】
【表４】 第４表 ──────────────────────────────────── 耐熱性 ＡＡｍ耐性 生育温度 Control 40℃,2hr 30%,10゜C,2hr ──────────────────────────────────── 実施例７ P.thermophila ATCC 19285 50℃ 100% 100% 100% 比較例1 P.compacta IFO14325 28℃ 100% 28% 1% P.compacta IFO14343 28℃ 100% 34% 6% ──────────────────────────────────── コントロールのアクリルアミド蓄積量を１００％としたときの相対値 ＡＡｍ：アクリルアミド
【００２６】
【発明の効果】本発明の方法によれば、より広い温度範
囲、特に４０℃以上の高い温度でニトリル化合物からア
ミド化合物を生成する反応が可能であり、従来の技術に
比べより効率のよいアミド化合物の製造が可能となる。
また、本発明の方法によれば、広いｐＨ範囲で安定な反
応が可能なため、ニトリル化合物を水和して対応するア
ミド化合物に変換するに際して厳密にｐＨを調整する必
要がない。また、本発明の方法によれば、高濃度でしか
も純度の高いアミド化合物を製造することが可能とな
る。
囲、特に４０℃以上の高い温度でニトリル化合物からア
ミド化合物を生成する反応が可能であり、従来の技術に
比べより効率のよいアミド化合物の製造が可能となる。
また、本発明の方法によれば、広いｐＨ範囲で安定な反
応が可能なため、ニトリル化合物を水和して対応するア
ミド化合物に変換するに際して厳密にｐＨを調整する必
要がない。また、本発明の方法によれば、高濃度でしか
も純度の高いアミド化合物を製造することが可能とな
る。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 鶴岡 みゆき 千葉県茂原市東郷1144番地 三井東圧化学 株式会社内
Claims (6)
- 【請求項１】 生育上限温度が５５℃以上であるところ
の好熱性菌であり、ニトリル化合物を水和して対応する
アミド化合物に変換する能力を有する微生物の培養液、
菌体もしくは菌体処理物を水性媒体中にて該ニトリル化
合物に作用させることを特徴とする微生物によるアミド
化合物の製造法。 - 【請求項２】 生育上限温度が５５℃以上であるところ
の好熱性菌でありシュードノカルディア（Psuedonocard
ia）属に属し、ニトリル化合物を水和して対応するアミ
ド化合物に変換する能力を有する微生物の培養液、菌体
もしくは菌体処理物を水性媒体中にて該ニトリル化合物
に作用させることを特徴とする微生物によるアミド化合
物の製造法。 - 【請求項３】 シュードノカルディア（Psuedonocardi
a）属に属する微生物がシュードノカルディア・サーモ
フィラ（Psuedonocardia thermophila）ATCC19285であ
ることを特徴とする請求項２記載のアミド化合物の製造
法。 - 【請求項４】 ニトリル化合物が、アクリルニトリル、
メタアクリロニトリルであることを特徴とする請求項２
または３記載のアミド化合物の製造法。 - 【請求項５】 反応温度が０〜８０℃であることを特徴
とする請求項１〜４記載のアミド化合物の製造法。 - 【請求項６】 反応のｐＨが３〜１０であることを特徴
とする請求項１〜５記載のアミド化合物の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP19257294A JPH0856684A (ja) | 1994-08-16 | 1994-08-16 | 微生物によるアミド化合物の製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP19257294A JPH0856684A (ja) | 1994-08-16 | 1994-08-16 | 微生物によるアミド化合物の製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0856684A true JPH0856684A (ja) | 1996-03-05 |
Family
ID=16293518
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP19257294A Pending JPH0856684A (ja) | 1994-08-16 | 1994-08-16 | 微生物によるアミド化合物の製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0856684A (ja) |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6730508B1 (en) | 1998-03-16 | 2004-05-04 | Mitsui Chemicals, Inc. | Protein participating in the activation of nitrile hydratase and gene encoding the same |
| US7531343B2 (en) | 2006-01-30 | 2009-05-12 | Georgia State University Research Foundation, Inc. | Induction and stabilization of enzymatic activity in microorganisms |
| US7595184B2 (en) | 2002-12-19 | 2009-09-29 | Mitsui Chemicals, Inc. | Nitrile hydratase variant |
| US7943549B2 (en) | 2007-04-02 | 2011-05-17 | Georgia State University Research Foundation, Inc. | Biological-based catalyst to delay plant development processes |
| US9993005B2 (en) | 2013-03-14 | 2018-06-12 | Georgia State University Research Foundation, Inc. | Preventing or delaying chill injury response in plants |
| US10300093B2 (en) | 2014-06-10 | 2019-05-28 | Georgia State University Research Foundation, Inc. | Inhibiting or reducing fungal infections |
| WO2022172880A1 (ja) | 2021-02-10 | 2022-08-18 | 三菱ケミカル株式会社 | アルデヒドによるニトリルヒドラターゼの反応性向上 |
-
1994
- 1994-08-16 JP JP19257294A patent/JPH0856684A/ja active Pending
Cited By (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6730508B1 (en) | 1998-03-16 | 2004-05-04 | Mitsui Chemicals, Inc. | Protein participating in the activation of nitrile hydratase and gene encoding the same |
| US7595184B2 (en) | 2002-12-19 | 2009-09-29 | Mitsui Chemicals, Inc. | Nitrile hydratase variant |
| US8323942B2 (en) | 2006-01-30 | 2012-12-04 | Georgia State University Research Foundation | Method for stabilizing activity of enzymes or microorganisms producing the enzymes |
| US7531344B2 (en) | 2006-01-30 | 2009-05-12 | Georgia State University Research Foundation, Inc. | Induction and stabilization of enzymatic activity in microorganisms |
| US7531343B2 (en) | 2006-01-30 | 2009-05-12 | Georgia State University Research Foundation, Inc. | Induction and stabilization of enzymatic activity in microorganisms |
| US9605241B2 (en) | 2006-01-30 | 2017-03-28 | Georgia State University Research Foundation, Inc. | Induction and stabilization of enzymatic activity in microorganisms |
| EP3399022A1 (en) | 2006-01-30 | 2018-11-07 | Georgia State University Research Foundation, Inc. | Induction and stabilization of enzymatic activity in microorganisms |
| US7943549B2 (en) | 2007-04-02 | 2011-05-17 | Georgia State University Research Foundation, Inc. | Biological-based catalyst to delay plant development processes |
| EP2471369A1 (en) | 2007-04-02 | 2012-07-04 | Georgia State University Research Foundation, Inc. | Biological-based catalyst to delay plant development processes |
| US8389441B2 (en) | 2007-04-02 | 2013-03-05 | Georgia State University Research Foundation, Inc. | Biological-based catalyst to delay plant development processes |
| US9462813B2 (en) | 2007-04-02 | 2016-10-11 | Georgia State University Research Foundation, Inc. | Biological-based catalyst to delay plant development processes |
| US9993005B2 (en) | 2013-03-14 | 2018-06-12 | Georgia State University Research Foundation, Inc. | Preventing or delaying chill injury response in plants |
| US10300093B2 (en) | 2014-06-10 | 2019-05-28 | Georgia State University Research Foundation, Inc. | Inhibiting or reducing fungal infections |
| WO2022172880A1 (ja) | 2021-02-10 | 2022-08-18 | 三菱ケミカル株式会社 | アルデヒドによるニトリルヒドラターゼの反応性向上 |
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