JPH0856680A - タキサン型ジテルペンの製造方法 - Google Patents
タキサン型ジテルペンの製造方法Info
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- JPH0856680A JPH0856680A JP6201150A JP20115094A JPH0856680A JP H0856680 A JPH0856680 A JP H0856680A JP 6201150 A JP6201150 A JP 6201150A JP 20115094 A JP20115094 A JP 20115094A JP H0856680 A JPH0856680 A JP H0856680A
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- Japan
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- taxane
- silver
- type diterpene
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Abstract
(57)【要約】
【構成】 タキサン型ジテルペンを産生する植物の組織
又は細胞を、重金属の化合物及び／又は重金属イオンの
存在下に培養し、得られる培養物及び／又は培地からタ
キサン型ジテルペンを回収することを特徴とするタキサ
ン型ジテルペンの製造方法。 【効果】 本発明の方法は、タキサン型ジテルペンの生
産性の向上を可能にする。
又は細胞を、重金属の化合物及び／又は重金属イオンの
存在下に培養し、得られる培養物及び／又は培地からタ
キサン型ジテルペンを回収することを特徴とするタキサ
ン型ジテルペンの製造方法。 【効果】 本発明の方法は、タキサン型ジテルペンの生
産性の向上を可能にする。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、卵巣癌、乳癌、肺癌等
の治療薬として有用であるタキソールを含むタキサン型
ジテルペンの製造法に関する。
の治療薬として有用であるタキソールを含むタキサン型
ジテルペンの製造法に関する。
【０００２】
【従来の技術】卵巣癌、乳癌、肺癌等の治療薬として有
用であるタキソール(Taxol)は、イチイ科イチイ属植物
であるタイヘイヨウイチイ(Taxus brevifolia NUTT)よ
り単離同定されたタキサン型ジテルペンであり、活性と
関連する複雑なエステルグループを有している。タキソ
ールはタイヘイヨウイチイ植物体中のどの部位にも存在
し、その含量は樹皮で最も高いことが報告されている。
現在、タキソールは天然のまたは栽培された植物体中か
ら採取されているが、イチイ属植物は地上20cmの高さに
成長するのに10年以上かかる生育の遅い植物であり、ま
た樹皮を剥ぐと木が枯れてしまうことから容易に大量の
タキソールを得ることは困難である。もし、タキソール
またはタキソールの前駆物質であるバッカチンIII等の
タキサン型ジテルペンを組織培養を利用して生産するこ
とができれば、樹木を伐採することなく、大量のタキソ
ールを容易に得ることができるので有利である。
用であるタキソール(Taxol)は、イチイ科イチイ属植物
であるタイヘイヨウイチイ(Taxus brevifolia NUTT)よ
り単離同定されたタキサン型ジテルペンであり、活性と
関連する複雑なエステルグループを有している。タキソ
ールはタイヘイヨウイチイ植物体中のどの部位にも存在
し、その含量は樹皮で最も高いことが報告されている。
現在、タキソールは天然のまたは栽培された植物体中か
ら採取されているが、イチイ属植物は地上20cmの高さに
成長するのに10年以上かかる生育の遅い植物であり、ま
た樹皮を剥ぐと木が枯れてしまうことから容易に大量の
タキソールを得ることは困難である。もし、タキソール
またはタキソールの前駆物質であるバッカチンIII等の
タキサン型ジテルペンを組織培養を利用して生産するこ
とができれば、樹木を伐採することなく、大量のタキソ
ールを容易に得ることができるので有利である。
【０００３】これまでの植物の培養細胞を利用したタキ
ソール生産方法については、タイヘイヨウイチイ（Taxu
s brevifolia NUTT）培養細胞によるタキソール生産が
米国で特許〔US Patent:5019504〕になっているが、そ
のタキソール生産量は１〜3mg/lと記載されており、工
業的生産には不十分である。また、細胞培養によるタキ
ソールの生産性は不安定であり、選抜で一次的に生産性
の高い細胞が得られても、継代培養してその含量を維持
することは難しい〔E.R.M.Wickremesine et al.,World
Congress on Cell and Tissue Culture(1992)〕。
ソール生産方法については、タイヘイヨウイチイ（Taxu
s brevifolia NUTT）培養細胞によるタキソール生産が
米国で特許〔US Patent:5019504〕になっているが、そ
のタキソール生産量は１〜3mg/lと記載されており、工
業的生産には不十分である。また、細胞培養によるタキ
ソールの生産性は不安定であり、選抜で一次的に生産性
の高い細胞が得られても、継代培養してその含量を維持
することは難しい〔E.R.M.Wickremesine et al.,World
Congress on Cell and Tissue Culture(1992)〕。
【０００４】一方、タキソール生産法の先行技術として
は、タキソール生合成前駆体であるバッカチンIII(bacc
atin III) からの半合成法がHoltonらの米国特許に開示
されている〔US Patent:5015744〕。植物の組織培養法
を用いれば、バッカチンIII等の半合成原料の生産も可
能であり、前記半合成法によるタキソール生産にも利用
できる。
は、タキソール生合成前駆体であるバッカチンIII(bacc
atin III) からの半合成法がHoltonらの米国特許に開示
されている〔US Patent:5015744〕。植物の組織培養法
を用いれば、バッカチンIII等の半合成原料の生産も可
能であり、前記半合成法によるタキソール生産にも利用
できる。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、植物
組織培養により、タキサン型ジテルペンの簡便な製造法
を提供することである。
組織培養により、タキサン型ジテルペンの簡便な製造法
を提供することである。
【０００６】
【課題を達成するための手段】本発明者らは、鋭意研究
の結果、タキサン型ジテルペンを産生する植物の組織及
び／又は細胞を、重金属を含む化合物類、重金属を含む
錯イオン類、及び重金属イオンよりなる群から選ばれた
少なくとも一つの存在下に培養を行うと、タキサン型ジ
テルペンの生産性が向上することを見いだし、本発明を
完成するに至った。
の結果、タキサン型ジテルペンを産生する植物の組織及
び／又は細胞を、重金属を含む化合物類、重金属を含む
錯イオン類、及び重金属イオンよりなる群から選ばれた
少なくとも一つの存在下に培養を行うと、タキサン型ジ
テルペンの生産性が向上することを見いだし、本発明を
完成するに至った。
【０００７】すなわち、本発明はタキサン型ジテルペン
を産生する植物の組織及び／又は細胞を、重金属を含む
化合物類、重金属を含む錯イオン類、及び重金属イオン
よりなる群から選ばれた少なくとも一つの存在下に培養
し、得られる培養物及び／又は培地からタキサン型ジテ
ルペンを回収することを特徴とするタキサン型ジテルペ
ンの製造方法である。
を産生する植物の組織及び／又は細胞を、重金属を含む
化合物類、重金属を含む錯イオン類、及び重金属イオン
よりなる群から選ばれた少なくとも一つの存在下に培養
し、得られる培養物及び／又は培地からタキサン型ジテ
ルペンを回収することを特徴とするタキサン型ジテルペ
ンの製造方法である。
【０００８】以下、本発明を詳細に説明する。本発明の
製造方法の対象となるタキサン型ジテルペンとしては、
タキサン骨格を有するジテルペンであれば特に制限はな
く、例えばタキソール、10−デアセチルタキソール、７
−エピタキソ−ル、バッカチンIII、10−デアセチルバ
ッカチンIII、７−エピバッカチンIII、セファロマニ
ン、10−デアセチルセファロマニン、７−エピセファロ
マニン、タキサギフィン及びその類縁体、タキサン１ａ
及びその類縁体、キシロシルセファロマニン、キシロシ
ルタキソール等が挙げられる。
製造方法の対象となるタキサン型ジテルペンとしては、
タキサン骨格を有するジテルペンであれば特に制限はな
く、例えばタキソール、10−デアセチルタキソール、７
−エピタキソ−ル、バッカチンIII、10−デアセチルバ
ッカチンIII、７−エピバッカチンIII、セファロマニ
ン、10−デアセチルセファロマニン、７−エピセファロ
マニン、タキサギフィン及びその類縁体、タキサン１ａ
及びその類縁体、キシロシルセファロマニン、キシロシ
ルタキソール等が挙げられる。
【０００９】本発明の組織培養に用いられるタキサン型
ジテルペンを産生する植物としては、例えばセイヨウイ
チイ(Taxus baccata LINN)、イチイ(T. cuspidata SIE
B.etZUCC)、キャラボク(T. cuspidata SIEB.et ZUCC va
r. nana REHDER)、タイヘイヨウイチイ(T. brevifolia
NUTT)、カナダイチイ(T. canadiensis MARSH)、中国イ
チイ(T. chinensis)、T.media等のイチイ属植物を挙げ
ることができる。
ジテルペンを産生する植物としては、例えばセイヨウイ
チイ(Taxus baccata LINN)、イチイ(T. cuspidata SIE
B.etZUCC)、キャラボク(T. cuspidata SIEB.et ZUCC va
r. nana REHDER)、タイヘイヨウイチイ(T. brevifolia
NUTT)、カナダイチイ(T. canadiensis MARSH)、中国イ
チイ(T. chinensis)、T.media等のイチイ属植物を挙げ
ることができる。
【００１０】前記植物の培養は本発明により、植物の組
織及び／又は細胞を、重金属を含む化合物類、重金属を
含む錯イオン類、及び重金属イオンよりなる群から選ば
れた少なくとも一つの存在下に培養を行うこと以外は、
従来から知られている方法によって行うことができる。
本発明の対象となる重金属類としては、銅族或いは鉄族
に属する重金属類であれば特に限定するものではない
が、銅族に属する金属類としては特に銀を使用すること
が本発明の方法にとってより好ましく、また鉄族に属す
る金属類としてはコバルトを使用することが本発明の方
法にとってより好ましい。更に、銀或いはコバルトを使
用する際は、当該重金属類を含む化合物、当該金属類を
含む錯イオン類、又は当該金属イオンの形で使用するこ
とが好ましい。また、これらの化合物等は、それぞれ単
独で使用してもよく、組み合わせて使用してもよい。
織及び／又は細胞を、重金属を含む化合物類、重金属を
含む錯イオン類、及び重金属イオンよりなる群から選ば
れた少なくとも一つの存在下に培養を行うこと以外は、
従来から知られている方法によって行うことができる。
本発明の対象となる重金属類としては、銅族或いは鉄族
に属する重金属類であれば特に限定するものではない
が、銅族に属する金属類としては特に銀を使用すること
が本発明の方法にとってより好ましく、また鉄族に属す
る金属類としてはコバルトを使用することが本発明の方
法にとってより好ましい。更に、銀或いはコバルトを使
用する際は、当該重金属類を含む化合物、当該金属類を
含む錯イオン類、又は当該金属イオンの形で使用するこ
とが好ましい。また、これらの化合物等は、それぞれ単
独で使用してもよく、組み合わせて使用してもよい。
【００１１】銀を含む化合物類としては、例えば硝酸
銀、或いは硫酸銀、或いはフッ化銀、或いは塩素酸銀、
或いは過塩素酸銀、或いは酢酸銀、或いは亜硫酸銀、或
いはヘキサフルオロリン（Ｖ）酸銀、或いはテトラフル
オロホウ酸銀、或いはジアミン銀（Ｉ）硫酸塩、或いは
ジアミノ銀（Ｉ）酸カリウム等の化合物類を例示するこ
とができる。これらの中でも特に硝酸銀、硫酸銀等を好
適な化合物類として例示できる。
銀、或いは硫酸銀、或いはフッ化銀、或いは塩素酸銀、
或いは過塩素酸銀、或いは酢酸銀、或いは亜硫酸銀、或
いはヘキサフルオロリン（Ｖ）酸銀、或いはテトラフル
オロホウ酸銀、或いはジアミン銀（Ｉ）硫酸塩、或いは
ジアミノ銀（Ｉ）酸カリウム等の化合物類を例示するこ
とができる。これらの中でも特に硝酸銀、硫酸銀等を好
適な化合物類として例示できる。
【００１２】銀を含む錯イオン類としては、例えば〔Ag
(S2O3)2〕3-、或いは〔Ag(S2O3)3〕 5-、或いは〔Ag(N
H3)2〕+、或いは〔Ag(CN)2〕-、或いは〔Ag(CN)3〕2-、
或いは〔Ag(SCN)2〕-、或いは〔Ag(SCN)4〕3-の等の錯
イオン類を例示することができる。これらの中でも特に
〔Ag(S2O3)2〕3-、〔Ag(S2O3)3〕5-等を好適な錯イオン
類として例示できる。
(S2O3)2〕3-、或いは〔Ag(S2O3)3〕 5-、或いは〔Ag(N
H3)2〕+、或いは〔Ag(CN)2〕-、或いは〔Ag(CN)3〕2-、
或いは〔Ag(SCN)2〕-、或いは〔Ag(SCN)4〕3-の等の錯
イオン類を例示することができる。これらの中でも特に
〔Ag(S2O3)2〕3-、〔Ag(S2O3)3〕5-等を好適な錯イオン
類として例示できる。
【００１３】コバルトを含む化合物としては、例えば塩
化コバルト、或いは硝酸コバルト、或いは硫酸コバル
ト、或いはフッ化コバルト、或いは過塩素酸コバルト、
或いは臭化コバルト、或いはヨウ化コバルト、或いはセ
レン酸コバルト、或いはチオシアン酸コバルト、或いは
酢酸コバルト、或いは硫酸アンモニウムコバルト、或い
は硫酸コバルト（II）カリウム、或いはヘキサアンミン
コバルト（III）塩化物、或いはペンタアンミンアクア
コバルト（III）塩化物、或いはニトロペンタアンミン
コバルト（III）塩化物、或いはジクロロテトラアンミ
ンコバルト（III）塩化物半水和物、或いはジニトロテ
トラアンミンコバルト（III）塩化物、或いはカルボナ
トテトラアンミンコバルト（III）塩化物、或いはテト
ラニトロジアンミンコバルト（III）酸アンモニウム、
或いはヘキサニトロコバルト（III）酸ナトリウム、或
いはトリス（エチレンジアミン）コバルト（III）塩化
物三水和物、或いはジクロロビス（エチレンジアミン）
コバルト（III）塩化物、或いはトリス（オキサラト）
コバルト（III）酸カリウム三水和物、或いはヘキサシ
アノコバルト（III）酸カリウム、或いは（エチレンジ
アミンテトラアセタト）コバルト（III）酸カリウム二
水和物、或いはヒドリドテトラカルボニルコバルト
（Ｉ）、或いはジカルボニル（シクロペンタジエニル）
コバルト（Ｉ）、或いはオクタカルボニル二コバルト
（０）、或いはヘキサカルボニル（アセチレン）二コバ
ルト（０）、ビス（シクロペンタジエニル）コバルト
（Ｉ）、或いは（シクロペンタジエニル）（1,5-シクロ
オクタジエン）コバルト（Ｉ）等の化合物類を例示する
ことができる。これらの中でも特に塩化コバルト、硝酸
コバルト、硫酸コバルト等を好適な化合物類として例示
できる。
化コバルト、或いは硝酸コバルト、或いは硫酸コバル
ト、或いはフッ化コバルト、或いは過塩素酸コバルト、
或いは臭化コバルト、或いはヨウ化コバルト、或いはセ
レン酸コバルト、或いはチオシアン酸コバルト、或いは
酢酸コバルト、或いは硫酸アンモニウムコバルト、或い
は硫酸コバルト（II）カリウム、或いはヘキサアンミン
コバルト（III）塩化物、或いはペンタアンミンアクア
コバルト（III）塩化物、或いはニトロペンタアンミン
コバルト（III）塩化物、或いはジクロロテトラアンミ
ンコバルト（III）塩化物半水和物、或いはジニトロテ
トラアンミンコバルト（III）塩化物、或いはカルボナ
トテトラアンミンコバルト（III）塩化物、或いはテト
ラニトロジアンミンコバルト（III）酸アンモニウム、
或いはヘキサニトロコバルト（III）酸ナトリウム、或
いはトリス（エチレンジアミン）コバルト（III）塩化
物三水和物、或いはジクロロビス（エチレンジアミン）
コバルト（III）塩化物、或いはトリス（オキサラト）
コバルト（III）酸カリウム三水和物、或いはヘキサシ
アノコバルト（III）酸カリウム、或いは（エチレンジ
アミンテトラアセタト）コバルト（III）酸カリウム二
水和物、或いはヒドリドテトラカルボニルコバルト
（Ｉ）、或いはジカルボニル（シクロペンタジエニル）
コバルト（Ｉ）、或いはオクタカルボニル二コバルト
（０）、或いはヘキサカルボニル（アセチレン）二コバ
ルト（０）、ビス（シクロペンタジエニル）コバルト
（Ｉ）、或いは（シクロペンタジエニル）（1,5-シクロ
オクタジエン）コバルト（Ｉ）等の化合物類を例示する
ことができる。これらの中でも特に塩化コバルト、硝酸
コバルト、硫酸コバルト等を好適な化合物類として例示
できる。
【００１４】コバルトを含む錯イオン類としては、ペン
タアンミンアクアコバルトイオン、或いはニトロペンタ
アンミンコバルトイオン、或いはジクロロテトラアンミ
ンコバルトイオン、或いはジニトロテトラアンミンコバ
ルトイオン、或いはカルボナトテトラアンミンコバルト
イオン、或いはテトラニトロジアンミンコバルトイオ
ン、或いはヘキサニトロコバルトイオン、或いはトリス
（エチレンジアミン）コバルトイオン、或いはジクロロ
ビス（エチレンジアミン）コバルトイオン、或いはトリ
ス（オキサラト）コバルトイオン、或いはヘキサシアノ
コバルトイオン、或いは（エチレンジアミンテトラアセ
タト）コバルトイオン等の錯イオン類を例示することが
できる。
タアンミンアクアコバルトイオン、或いはニトロペンタ
アンミンコバルトイオン、或いはジクロロテトラアンミ
ンコバルトイオン、或いはジニトロテトラアンミンコバ
ルトイオン、或いはカルボナトテトラアンミンコバルト
イオン、或いはテトラニトロジアンミンコバルトイオ
ン、或いはヘキサニトロコバルトイオン、或いはトリス
（エチレンジアミン）コバルトイオン、或いはジクロロ
ビス（エチレンジアミン）コバルトイオン、或いはトリ
ス（オキサラト）コバルトイオン、或いはヘキサシアノ
コバルトイオン、或いは（エチレンジアミンテトラアセ
タト）コバルトイオン等の錯イオン類を例示することが
できる。
【００１５】上記重金属類の内、銀を含む化合物類、銀
を含む錯イオン類、又は銀イオンは、培地における濃度
が10-8M〜10-1Mとすることが好ましく、特に10-7M〜10
-2Mの範囲に調製することが本発明の方法にとって更に
好ましい。またコバルトを含む化合物類、コバルトを含
む錯イオン類、又はコバルトイオンは、培地における濃
度が10-6〜10-1Mとすることが好ましく、特に10-5〜10
-2Mの範囲にすることが本発明の方法にとって更に好ま
しい。
を含む錯イオン類、又は銀イオンは、培地における濃度
が10-8M〜10-1Mとすることが好ましく、特に10-7M〜10
-2Mの範囲に調製することが本発明の方法にとって更に
好ましい。またコバルトを含む化合物類、コバルトを含
む錯イオン類、又はコバルトイオンは、培地における濃
度が10-6〜10-1Mとすることが好ましく、特に10-5〜10
-2Mの範囲にすることが本発明の方法にとって更に好ま
しい。
【００１６】従来、タキサン型ジテルペンを産生する植
物の組織培養に於いて、培地添加物として銀を含む化合
物類、銀を含む錯イオン類、又は銀イオンを存在させて
組織培養を行った例は報告されていない。またコバルト
を含む化合物、又はコバルトイオン類は、イチイ属植物
の組織培養用の培地として一般に用いられる培地、例え
ばリンスマイヤー・スクーグ〔Linsmaier Skoog〕の培
地、或いはムラシゲ・スクーグ〔Murashige Skoog〕の
培地、或いはガンボルグ〔Gamborg〕のＢ−５培地等に
培地成分の一つとして含まれているが、当該濃度は１×
10-7M〜４×10-7Mと〔最新バイオテクノロジー全書編集
委員会編、木本植物の増殖と育種、農業図書、P265-26
8〕、本発明のかかる方法に比べて極めて低い濃度で使
用されている。一方、本発明の如くタキサン型ジテルペ
ンを産生する植物の組織培養に於いて、高濃度のコバル
トを含む化合物、又はコバルトイオン類を存在させて組
織培養を行った例は、上述の銀化合物同様報告されてい
ない。しかもこれら重金属類存在下で培養することによ
りタキサン型ジテルペンの産生量が増大することは予想
外のことであった。
物の組織培養に於いて、培地添加物として銀を含む化合
物類、銀を含む錯イオン類、又は銀イオンを存在させて
組織培養を行った例は報告されていない。またコバルト
を含む化合物、又はコバルトイオン類は、イチイ属植物
の組織培養用の培地として一般に用いられる培地、例え
ばリンスマイヤー・スクーグ〔Linsmaier Skoog〕の培
地、或いはムラシゲ・スクーグ〔Murashige Skoog〕の
培地、或いはガンボルグ〔Gamborg〕のＢ−５培地等に
培地成分の一つとして含まれているが、当該濃度は１×
10-7M〜４×10-7Mと〔最新バイオテクノロジー全書編集
委員会編、木本植物の増殖と育種、農業図書、P265-26
8〕、本発明のかかる方法に比べて極めて低い濃度で使
用されている。一方、本発明の如くタキサン型ジテルペ
ンを産生する植物の組織培養に於いて、高濃度のコバル
トを含む化合物、又はコバルトイオン類を存在させて組
織培養を行った例は、上述の銀化合物同様報告されてい
ない。しかもこれら重金属類存在下で培養することによ
りタキサン型ジテルペンの産生量が増大することは予想
外のことであった。
【００１７】本発明の組織培養に使用される培地として
は、従来から知られている植物の組織培養に用いられる
培地、例えばムラシゲ・スクーグ(1962年)〔Murashige
& Skoog〕の培地、リンスマイヤー・スクーグ(1965年)
〔Linsmaier Skoog〕の培地、ウッディー・プラント・
メディウム(1981年) 〔Woody Plant Medium〕の培地、
ガンボルグ〔Gamborg〕のＢ−５培地、三井のＭ−９培
地等が挙げられる。
は、従来から知られている植物の組織培養に用いられる
培地、例えばムラシゲ・スクーグ(1962年)〔Murashige
& Skoog〕の培地、リンスマイヤー・スクーグ(1965年)
〔Linsmaier Skoog〕の培地、ウッディー・プラント・
メディウム(1981年) 〔Woody Plant Medium〕の培地、
ガンボルグ〔Gamborg〕のＢ−５培地、三井のＭ−９培
地等が挙げられる。
【００１８】これら培地に植物ホルモンを添加し、更に
必要に応じて炭素源、無機成分、ビタミン類、アミノ酸
等を添加することもできる。炭素源としては、シュクロ
ース、マルトース、ラクトース等の二糖類、グルコー
ス、フルクトース、ガラクトース等の単糖類、デンプン
あるいはこれら糖源の２種類以上を適当な比率で混合し
たものを使用できる。
必要に応じて炭素源、無機成分、ビタミン類、アミノ酸
等を添加することもできる。炭素源としては、シュクロ
ース、マルトース、ラクトース等の二糖類、グルコー
ス、フルクトース、ガラクトース等の単糖類、デンプン
あるいはこれら糖源の２種類以上を適当な比率で混合し
たものを使用できる。
【００１９】無機成分としては、例えばリン、窒素、カ
リウム、カルシウム、マグネシウム、イオウ、鉄、マン
ガン、亜鉛、ホウ素、銅、モリブデン、塩素、ナトリウ
ム、ヨウ素、コバルト等があげられ、これらの成分は例
えば硝酸カリウム、硝酸ナトリウム、硝酸カルシウム、
塩化カリウム、リン酸１水素カリウム、リン酸２水素カ
リウム、塩化カルシウム、硫酸マグネシウム、硫酸ナト
リウム、硫酸第一鉄、硫酸第二鉄、硫酸マンガン、硫酸
亜鉛、ホウ酸、硫酸銅、モリブデン酸ナトリウム、三酸
化モリブデン、ヨウ化カリウム、塩化コバルト等の化合
物として添加できる。
リウム、カルシウム、マグネシウム、イオウ、鉄、マン
ガン、亜鉛、ホウ素、銅、モリブデン、塩素、ナトリウ
ム、ヨウ素、コバルト等があげられ、これらの成分は例
えば硝酸カリウム、硝酸ナトリウム、硝酸カルシウム、
塩化カリウム、リン酸１水素カリウム、リン酸２水素カ
リウム、塩化カルシウム、硫酸マグネシウム、硫酸ナト
リウム、硫酸第一鉄、硫酸第二鉄、硫酸マンガン、硫酸
亜鉛、ホウ酸、硫酸銅、モリブデン酸ナトリウム、三酸
化モリブデン、ヨウ化カリウム、塩化コバルト等の化合
物として添加できる。
【００２０】植物ホルモンとしては、例えばインドール
酢酸(IAA)、ナフタレン酢酸(NAA)、２,４−ジクロロフ
ェノキシ酢酸(2,4-D)等のオーキシン類、カイネチン、
ゼアチン、ジヒドロゼアチン等のサイトカイニン類が用
いられる。ビタミン類としては、例えばビオチン、チア
ミン（ビタミンＢ１）、ピリドキシン（ビタミンＢ
６）、パントテン酸、イノシトール、ニコチン酸等が用
いられる。
酢酸(IAA)、ナフタレン酢酸(NAA)、２,４−ジクロロフ
ェノキシ酢酸(2,4-D)等のオーキシン類、カイネチン、
ゼアチン、ジヒドロゼアチン等のサイトカイニン類が用
いられる。ビタミン類としては、例えばビオチン、チア
ミン（ビタミンＢ１）、ピリドキシン（ビタミンＢ
６）、パントテン酸、イノシトール、ニコチン酸等が用
いられる。
【００２１】アミノ酸類としては、例えばグリシン、フ
ェニルアラニン、ロイシン、グルタミン、システイン等
を添加できる。一般に前記の各成分は、無機成分が約0.
1μM〜100mM、炭素源が約１〜約30g/l、植物ホルモン類
が約0.01〜約10μM、ビタミン類及びアミノ酸類がそれ
ぞれ約0.1〜約100mg/lの濃度で用いられる。
ェニルアラニン、ロイシン、グルタミン、システイン等
を添加できる。一般に前記の各成分は、無機成分が約0.
1μM〜100mM、炭素源が約１〜約30g/l、植物ホルモン類
が約0.01〜約10μM、ビタミン類及びアミノ酸類がそれ
ぞれ約0.1〜約100mg/lの濃度で用いられる。
【００２２】尚、本発明には液体培地及び寒天やゲラン
ガム等を通常0.1〜１％含有する固形培地のいずれも使
用できる。本発明の組織培養においては、上記植物の
根、生長点、葉、茎、種子、花粉、葯、がく等の組織片
または細胞、あるいはこれらを上記培地あるいは他の従
来の培地によって組織培養して得られる培養細胞を使用
することができる。
ガム等を通常0.1〜１％含有する固形培地のいずれも使
用できる。本発明の組織培養においては、上記植物の
根、生長点、葉、茎、種子、花粉、葯、がく等の組織片
または細胞、あるいはこれらを上記培地あるいは他の従
来の培地によって組織培養して得られる培養細胞を使用
することができる。
【００２３】また本発明は、Agrobacterium tumefacien
s或いはAgrobacterium rhizogenesを植物組織に感染す
ることによって得られる腫瘍細胞及び／又は毛状根にも
使用できる。これらの組織及び／又は細胞を、重金属を
含む化合物類、重金属を含む錯イオン類、及び重金属イ
オンよりなる群から選ばれた少なくとも一つの存在下に
培養すると、通常の培養条件下で組織培養した場合と比
較してタキサン型ジテルペンの高生産性培養組織又は培
養細胞が得られる。
s或いはAgrobacterium rhizogenesを植物組織に感染す
ることによって得られる腫瘍細胞及び／又は毛状根にも
使用できる。これらの組織及び／又は細胞を、重金属を
含む化合物類、重金属を含む錯イオン類、及び重金属イ
オンよりなる群から選ばれた少なくとも一つの存在下に
培養すると、通常の培養条件下で組織培養した場合と比
較してタキサン型ジテルペンの高生産性培養組織又は培
養細胞が得られる。
【００２４】本発明の効果を高める方法として、特願平
６−３６１５６号明細書、特願平６−１０４２１１号明
細書、特願平６−１０４２１２号明細書にタキサン系化
合物の生産促進物質として開示されている、ジャスモン
酸類の存在下に培養する方法との併用が挙げられる。ジ
ャスモン酸類としては、例えば、特願平６−１０４２１
３号明細書に開示されている一般式（Ｉ）：
６−３６１５６号明細書、特願平６−１０４２１１号明
細書、特願平６−１０４２１２号明細書にタキサン系化
合物の生産促進物質として開示されている、ジャスモン
酸類の存在下に培養する方法との併用が挙げられる。ジ
ャスモン酸類としては、例えば、特願平６−１０４２１
３号明細書に開示されている一般式（Ｉ）：
【００２５】
【化２】
【００２６】［式中、Ｒ1 は炭素数１〜４のアルキル基
又は次式： −（ＣＨ2 ）n −ＣＯ−Ｒ6 （式中、Ｒ6 は水酸基、ＯＭ（ここで、Ｍはアルカリ金
属原子、アルカリ土類金属原子又はＮＨ4 を表す。）、
ＮＨＲ7 （ここで、Ｒ7 は、水素原子、炭素数１〜４の
アシル基、炭素数１〜４のアルキル基又はアミノ酸残基
を表す。）又はＯＲ8 （ここで、Ｒ8 は炭素数１〜４の
アルキル基又は炭水化物残基を表す。）を表し、ｎは１
〜７の整数を表す。）で示される基を表し；Ｒ2 、
Ｒ3 、Ｒ4 及びＲ5 は、それぞれ水素原子を表すか、或
いはＲ2 とＲ3 、Ｒ3 とＲ4 、又はＲ4とＲ5 は、共同
して二重結合を表してもよく；前記５員環は、更に水酸
基で置換されていてもよく、隣接する環員炭素原子間で
二重結合を形成してもよい。］で示されるジャスモン酸
類、特願平６−１０４２１１号明細書に開示されている
一般式（II）：
又は次式： −（ＣＨ2 ）n −ＣＯ−Ｒ6 （式中、Ｒ6 は水酸基、ＯＭ（ここで、Ｍはアルカリ金
属原子、アルカリ土類金属原子又はＮＨ4 を表す。）、
ＮＨＲ7 （ここで、Ｒ7 は、水素原子、炭素数１〜４の
アシル基、炭素数１〜４のアルキル基又はアミノ酸残基
を表す。）又はＯＲ8 （ここで、Ｒ8 は炭素数１〜４の
アルキル基又は炭水化物残基を表す。）を表し、ｎは１
〜７の整数を表す。）で示される基を表し；Ｒ2 、
Ｒ3 、Ｒ4 及びＲ5 は、それぞれ水素原子を表すか、或
いはＲ2 とＲ3 、Ｒ3 とＲ4 、又はＲ4とＲ5 は、共同
して二重結合を表してもよく；前記５員環は、更に水酸
基で置換されていてもよく、隣接する環員炭素原子間で
二重結合を形成してもよい。］で示されるジャスモン酸
類、特願平６−１０４２１１号明細書に開示されている
一般式（II）：
【００２７】
【化３】
【００２８】（式中、Ｒ1 、Ｒ2 、Ｒ3 、Ｒ4 及びＲ5
は前記と同義であり、Ｒ9 は水酸基又は−Ｏ−炭水化物
残基を表す。）で示されるジャスモン酸類、特願平６−
１０４２１２号明細書に開示されている一般式 (III)：
は前記と同義であり、Ｒ9 は水酸基又は−Ｏ−炭水化物
残基を表す。）で示されるジャスモン酸類、特願平６−
１０４２１２号明細書に開示されている一般式 (III)：
【００２９】
【化４】
【００３０】（式中、Ｒ1 、Ｒ2 、Ｒ3 、Ｒ4 及びＲ5
は前記と同義である。）で示されるジャスモン酸類が挙
げられる。前記一般式（Ｉ）、（II）及び (III)におい
て、Ｒ1 、Ｒ7 又はＲ8 で表される炭素数１〜４のアル
キル基としては、例えばメチル基、エチル基、ｎ−プロ
ピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル
基、sec-ブチル基、ｔ−ブチル基が挙げられる。
は前記と同義である。）で示されるジャスモン酸類が挙
げられる。前記一般式（Ｉ）、（II）及び (III)におい
て、Ｒ1 、Ｒ7 又はＲ8 で表される炭素数１〜４のアル
キル基としては、例えばメチル基、エチル基、ｎ−プロ
ピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル
基、sec-ブチル基、ｔ−ブチル基が挙げられる。
【００３１】Ｒ6 がＯＭである場合において、Ｍで表さ
れるアルカリ金属原子又はアルカリ土類金属原子として
は、例えばナトリウム、カリウム、カルシウムが挙げら
れる。Ｒ6 がＮＨＲ7 である場合において、Ｒ7 で表さ
れる炭素数１〜４のアシル基は、直鎖、分岐鎖のいずれ
でもよく、例えばホルミル基、アセチル基、プロピオニ
ル基、ブチリル基、アクリロイル基が挙げられる。
れるアルカリ金属原子又はアルカリ土類金属原子として
は、例えばナトリウム、カリウム、カルシウムが挙げら
れる。Ｒ6 がＮＨＲ7 である場合において、Ｒ7 で表さ
れる炭素数１〜４のアシル基は、直鎖、分岐鎖のいずれ
でもよく、例えばホルミル基、アセチル基、プロピオニ
ル基、ブチリル基、アクリロイル基が挙げられる。
【００３２】Ｒ6 がＮＨＲ7 である場合において、Ｒ7
で表されるアミノ酸残基としては、例えばイソロイシル
基、チロシル基、トリプトフィル基が挙げられる。Ｒ6
がＯＲ8 である場合において、Ｒ8 で表される炭水化物
残基としては、例えばグルコピラノシル基が挙げられ
る。前記一般式（II）において、Ｒ9 が−Ｏ−炭水化物
残基である場合における炭水化物残基としては、例えば
グルコピラノシル基が挙げられる。
で表されるアミノ酸残基としては、例えばイソロイシル
基、チロシル基、トリプトフィル基が挙げられる。Ｒ6
がＯＲ8 である場合において、Ｒ8 で表される炭水化物
残基としては、例えばグルコピラノシル基が挙げられ
る。前記一般式（II）において、Ｒ9 が−Ｏ−炭水化物
残基である場合における炭水化物残基としては、例えば
グルコピラノシル基が挙げられる。
【００３３】前記一般式（Ｉ）、（II）又は (III)で示
される化合物の好ましいものとしては、Ｒ1 が−（ＣＨ
2 ）n ＣＯＯＨ又は−（ＣＨ2 ）n ＣＯＯＣＨ3 であ
り、Ｒ 2 、Ｒ3 、Ｒ4 及びＲ5 が、それぞれ水素原子を
表すか、或いはＲ2 とＲ3 、Ｒ 3 とＲ4 、又はＲ4 とＲ
5 が、共同して二重結合を表す化合物が挙げられる。前
記一般式（Ｉ）で示されるジャスモン酸類の好ましい具
体例としては、例えば、以下に示す化合物が挙げられ
る。 （化合物Ａ） Ｒ1 ：−（ＣＨ2 ）n ＣＯＯＨ又は−（ＣＨ2 ）n ＣＯ
ＯＣＨ3 （ｎ＝１〜３） Ｒ2 ，Ｒ3 ：Ｈ Ｒ4 ＋Ｒ5 ：二重結合 （化合物Ｂ） Ｒ1 ：−ＣＨ2 ＣＯＯＨ Ｒ2 ，Ｒ3 ，Ｒ4 ，Ｒ5 ：Ｈ また、前記一般式（Ｉ）で示される化合物は、５員環
が、更に水酸基で置換されていてもよく、隣接する環員
炭素原子間で二重結合を形成してもよい。
される化合物の好ましいものとしては、Ｒ1 が−（ＣＨ
2 ）n ＣＯＯＨ又は−（ＣＨ2 ）n ＣＯＯＣＨ3 であ
り、Ｒ 2 、Ｒ3 、Ｒ4 及びＲ5 が、それぞれ水素原子を
表すか、或いはＲ2 とＲ3 、Ｒ 3 とＲ4 、又はＲ4 とＲ
5 が、共同して二重結合を表す化合物が挙げられる。前
記一般式（Ｉ）で示されるジャスモン酸類の好ましい具
体例としては、例えば、以下に示す化合物が挙げられ
る。 （化合物Ａ） Ｒ1 ：−（ＣＨ2 ）n ＣＯＯＨ又は−（ＣＨ2 ）n ＣＯ
ＯＣＨ3 （ｎ＝１〜３） Ｒ2 ，Ｒ3 ：Ｈ Ｒ4 ＋Ｒ5 ：二重結合 （化合物Ｂ） Ｒ1 ：−ＣＨ2 ＣＯＯＨ Ｒ2 ，Ｒ3 ，Ｒ4 ，Ｒ5 ：Ｈ また、前記一般式（Ｉ）で示される化合物は、５員環
が、更に水酸基で置換されていてもよく、隣接する環員
炭素原子間で二重結合を形成してもよい。
【００３４】５員環が、更に水酸基で置換された化合
物、又は隣接する環員炭素原子間で二重結合が形成され
た化合物の具体例としては、例えば、以下に示す化合物
が挙げられる。 （化合物Ｃ）
物、又は隣接する環員炭素原子間で二重結合が形成され
た化合物の具体例としては、例えば、以下に示す化合物
が挙げられる。 （化合物Ｃ）
【００３５】
【化５】
【００３６】（化合物Ｄ）
【００３７】
【化６】
【００３８】（化合物Ｅ）
【００３９】
【化７】
【００４０】（化合物Ｆ）
【００４１】
【化８】
【００４２】前記一般式（II）で示されるジャスモン酸
類の好ましい具体例としては、例えば、以下に示す化合
物が挙げられる。 （化合物Ｇ）
類の好ましい具体例としては、例えば、以下に示す化合
物が挙げられる。 （化合物Ｇ）
【００４３】
【化９】
【００４４】（化合物Ｈ）
【００４５】
【化１０】
【００４６】（化合物Ｉ）
【００４７】
【化１１】
【００４８】（化合物Ｊ）
【００４９】
【化１２】
【００５０】前記一般式 (III)で示されるジャスモン酸
類の好ましい具体例としては、例えば、以下に示す化合
物が挙げられる。 （化合物Ｋ）
類の好ましい具体例としては、例えば、以下に示す化合
物が挙げられる。 （化合物Ｋ）
【００５１】
【化１３】
【００５２】（化合物Ｌ）
【００５３】
【化１４】
【００５４】（化合物Ｍ）
【００５５】
【化１５】
【００５６】（化合物Ｎ）
【００５７】
【化１６】
【００５８】前記ジャスモン酸類には種々の立体異性体
（シストランス異性体、光学異性体）が存在するが、そ
れぞれの異性体を単独で用いても、混合物の形で用いて
もよい。以上のジャスモン酸類は、全てタキサン型ジテ
ルペンの生産性向上に効果を有するが、中でも前記一般
式（Ｉ）においてＲ1 が−ＣＨ2 ＣＯＯＨ又は−ＣＨ2
ＣＯＯＣＨ3 であり、Ｒ2 及びＲ3 が水素原子であり、
Ｒ4 とＲ5 が共同して二重結合を形成している化合物で
あるジャスモン酸又はジャスモン酸メチル、ツベロン酸
又はツベロン酸メチル、及びククルビン酸又はククルビ
ン酸メチルが生産性向上に対する効果の大きさの点から
特に好ましい。
（シストランス異性体、光学異性体）が存在するが、そ
れぞれの異性体を単独で用いても、混合物の形で用いて
もよい。以上のジャスモン酸類は、全てタキサン型ジテ
ルペンの生産性向上に効果を有するが、中でも前記一般
式（Ｉ）においてＲ1 が−ＣＨ2 ＣＯＯＨ又は−ＣＨ2
ＣＯＯＣＨ3 であり、Ｒ2 及びＲ3 が水素原子であり、
Ｒ4 とＲ5 が共同して二重結合を形成している化合物で
あるジャスモン酸又はジャスモン酸メチル、ツベロン酸
又はツベロン酸メチル、及びククルビン酸又はククルビ
ン酸メチルが生産性向上に対する効果の大きさの点から
特に好ましい。
【００５９】これらジャスモン酸類は、合成により、又
は植物からの抽出等により調製される（H. Yamane et a
l., Agric. Biol. Chem., 44, 2857-2864(1980) ）。一
方、ジャスモン酸類は、生長促進や組織の成熟、病害抵
抗性の発現にかかわる諸反応を誘起する植物ホルモン様
物質として、種々の植物が自ら生産することが、吉原照
彦著、植物細胞工学第２巻第４号523〜531頁（1990年）
に記載されている。
は植物からの抽出等により調製される（H. Yamane et a
l., Agric. Biol. Chem., 44, 2857-2864(1980) ）。一
方、ジャスモン酸類は、生長促進や組織の成熟、病害抵
抗性の発現にかかわる諸反応を誘起する植物ホルモン様
物質として、種々の植物が自ら生産することが、吉原照
彦著、植物細胞工学第２巻第４号523〜531頁（1990年）
に記載されている。
【００６０】従って、前記ジャスモン酸類は、培養系外
から添加するほかに、使用する培養細胞又は培養組織に
自ら生産させることもできる。この内在性ジャスモン酸
類の培養細胞又は培養組織による生産を促進する方法と
しては、微生物の培養物又はその抽出物、熱処理物或い
は植物抽出物などの培地への添加を例示することがで
き、具体的にはM.J.Mueller et al., Proc. Natl. Aca
d. Sci. U.S.A.,90(16),7490-7494 (1993) に記載の、
カビ細胞壁画分を添加する方法を例示することができ
る。更に、使用する培養細胞又は培養組織に、機械的に
又は紫外線、熱などによって部分的に傷害を与えること
によっても、内在性ジャスモン酸の生産量を高めること
が可能であり、具体的には、R.A.Cleeman et al., Pro
c. Natl. Acad. Sci. U.S.A.,89(11), 4938-4941 (198
9) に記載の、機械的に一部の細胞を破壊する方法を例
示することができる。
から添加するほかに、使用する培養細胞又は培養組織に
自ら生産させることもできる。この内在性ジャスモン酸
類の培養細胞又は培養組織による生産を促進する方法と
しては、微生物の培養物又はその抽出物、熱処理物或い
は植物抽出物などの培地への添加を例示することがで
き、具体的にはM.J.Mueller et al., Proc. Natl. Aca
d. Sci. U.S.A.,90(16),7490-7494 (1993) に記載の、
カビ細胞壁画分を添加する方法を例示することができ
る。更に、使用する培養細胞又は培養組織に、機械的に
又は紫外線、熱などによって部分的に傷害を与えること
によっても、内在性ジャスモン酸の生産量を高めること
が可能であり、具体的には、R.A.Cleeman et al., Pro
c. Natl. Acad. Sci. U.S.A.,89(11), 4938-4941 (198
9) に記載の、機械的に一部の細胞を破壊する方法を例
示することができる。
【００６１】ジャスモン酸類は、水に対して難溶性のた
め、通常エタノール、メタノール等の有機溶媒、又は界
面活性剤等に溶解した後、培地に添加する。また、遊離
形のジャスモン酸類は、そのまま用いてもよいし、アル
カリで中和して塩にして用いてもよい。ジャスモン酸類
は、５員環カルボニル基のα位が、酸、アルカリ、熱に
よってエピマー化を起こすため、不安定なシス型より安
定なトランス型になりやすい。天然又は合成ジャスモン
酸を用いた平衡実験では、トランス型が90％、シス型が
10％の状態で存在する。一般にはシス型の方が活性が強
いとされているが、本発明で使用することができるジャ
スモン酸類は、前記式（Ｉ）で示される全ての立体異性
体化合物及びその混合物を包含する。
め、通常エタノール、メタノール等の有機溶媒、又は界
面活性剤等に溶解した後、培地に添加する。また、遊離
形のジャスモン酸類は、そのまま用いてもよいし、アル
カリで中和して塩にして用いてもよい。ジャスモン酸類
は、５員環カルボニル基のα位が、酸、アルカリ、熱に
よってエピマー化を起こすため、不安定なシス型より安
定なトランス型になりやすい。天然又は合成ジャスモン
酸を用いた平衡実験では、トランス型が90％、シス型が
10％の状態で存在する。一般にはシス型の方が活性が強
いとされているが、本発明で使用することができるジャ
スモン酸類は、前記式（Ｉ）で示される全ての立体異性
体化合物及びその混合物を包含する。
【００６２】ジャスモン酸類は、培地における濃度が0.
01〜1000μＭとすることが必要であり、この中でも特に
ジャスモン酸類の濃度を0.1〜500μＭの範囲に調整する
ことが好ましい。ジャスモン酸類は、培養細胞の増殖期
ないし定常期に添加することが効果的であり、この中で
も特に増殖期から定常期に移行する時期にジャスモン酸
類を添加することが好ましい。また、内在性ジャスモン
酸類の生産量を高めるための処理の時期についてもこれ
と同様である。例えば、21日おきに細胞を移植している
場合には７〜16日目がジャスモン酸類の添加又は内在性
ジャスモン酸類の生産量を高めるための処理の適期にあ
たる。また、ジャスモン酸類の添加及び内在性ジャスモ
ン酸類の生産量を高める処理は、一度に行ってもよい
し、複数回に分けて行ってもよい。
01〜1000μＭとすることが必要であり、この中でも特に
ジャスモン酸類の濃度を0.1〜500μＭの範囲に調整する
ことが好ましい。ジャスモン酸類は、培養細胞の増殖期
ないし定常期に添加することが効果的であり、この中で
も特に増殖期から定常期に移行する時期にジャスモン酸
類を添加することが好ましい。また、内在性ジャスモン
酸類の生産量を高めるための処理の時期についてもこれ
と同様である。例えば、21日おきに細胞を移植している
場合には７〜16日目がジャスモン酸類の添加又は内在性
ジャスモン酸類の生産量を高めるための処理の適期にあ
たる。また、ジャスモン酸類の添加及び内在性ジャスモ
ン酸類の生産量を高める処理は、一度に行ってもよい
し、複数回に分けて行ってもよい。
【００６３】また、本発明は、特願平５−２８４８９３
号、同６−１０４２１３号明細書に開示されている、細
胞を比重の違いにより複数の層に分け、少なくとも１つ
の層に含まれる細胞を培養する方法と併用することもで
きる。細胞を比重によって分離する方法としては、一般
に遠心分離用媒体を用いて密度勾配を作成し、細胞を重
層した後、遠心分離する方法が知られている。
号、同６−１０４２１３号明細書に開示されている、細
胞を比重の違いにより複数の層に分け、少なくとも１つ
の層に含まれる細胞を培養する方法と併用することもで
きる。細胞を比重によって分離する方法としては、一般
に遠心分離用媒体を用いて密度勾配を作成し、細胞を重
層した後、遠心分離する方法が知られている。
【００６４】遠心分離用媒体としては、Ficoll、Percol
l （共にPharmacia LKB Biotechnology 社製）、ショ
糖、塩化セシウム等が用いられる。密度勾配を形成する
層の数に特に制限はない。各層の比重差は、特に限定さ
れるものではなく、また各比重差は同じであっても異な
っていてもよい。従って、この密度勾配の定義には勾配
が連続的に変化する場合（密度勾配を形成する層の数が
無限大、各層の比重差が０に近い状態）も含む。
l （共にPharmacia LKB Biotechnology 社製）、ショ
糖、塩化セシウム等が用いられる。密度勾配を形成する
層の数に特に制限はない。各層の比重差は、特に限定さ
れるものではなく、また各比重差は同じであっても異な
っていてもよい。従って、この密度勾配の定義には勾配
が連続的に変化する場合（密度勾配を形成する層の数が
無限大、各層の比重差が０に近い状態）も含む。
【００６５】このようにして密度勾配を形成し、細胞を
重層、遠心分離することにより細胞を比重の違いにより
複数の層に分けることができる。作成する層の比重は、
通常1.00〜1.20g/ml、好ましくは1.03〜1.11g/mlの範囲
である。培養の対象となる層としては、少なくとも１つ
の層を選択し、また全ての層を選択して培養してもよ
い。
重層、遠心分離することにより細胞を比重の違いにより
複数の層に分けることができる。作成する層の比重は、
通常1.00〜1.20g/ml、好ましくは1.03〜1.11g/mlの範囲
である。培養の対象となる層としては、少なくとも１つ
の層を選択し、また全ての層を選択して培養してもよ
い。
【００６６】複数の層を選択して培養する場合、これら
の複数の層は、それぞれ個別に培養することもできる
が、選択した複数の層のうちの２層以上の層を混合して
培養することもできる。タキサン型ジテルペン産生能の
高い培養細胞は、通常、比重が1.07以下の層に含まれる
細胞を培養して得られるが、培養する細胞や培養の条件
により変動する場合があり、必ずしもこの範囲に限定さ
れるものではない。また、単に比重の違いによって分画
しただけでは、比重の高い層の細胞の方がタキサン型ジ
テルペン含量が高くなる傾向が認められる。従って、よ
り確実にタキサン型ジテルペン高産生培養細胞を取得す
るためには、分画された全ての層の細胞を一定期間培養
した後、各層の細胞に含まれるタキサン型ジテルペン濃
度を測定し、それらの中からタキサン型ジテルペン高産
生細胞を含む層を選択することが望ましい。
の複数の層は、それぞれ個別に培養することもできる
が、選択した複数の層のうちの２層以上の層を混合して
培養することもできる。タキサン型ジテルペン産生能の
高い培養細胞は、通常、比重が1.07以下の層に含まれる
細胞を培養して得られるが、培養する細胞や培養の条件
により変動する場合があり、必ずしもこの範囲に限定さ
れるものではない。また、単に比重の違いによって分画
しただけでは、比重の高い層の細胞の方がタキサン型ジ
テルペン含量が高くなる傾向が認められる。従って、よ
り確実にタキサン型ジテルペン高産生培養細胞を取得す
るためには、分画された全ての層の細胞を一定期間培養
した後、各層の細胞に含まれるタキサン型ジテルペン濃
度を測定し、それらの中からタキサン型ジテルペン高産
生細胞を含む層を選択することが望ましい。
【００６７】また、例えば1.07g/mlのように、ある１つ
の特定の比重の遠心分離媒体を作成し、前述の方法で遠
心分離することによっても、培養細胞を比重の違いによ
り複数の層に分けることができる。更に、本発明は、特
願平６−１４６８２６号明細書に開示されている、培養
器内の気相中の酸素濃度を培養初期より大気中の酸素濃
度未満の条件下に制御して培養を行うか、或いは組織及
び／又は細胞と接する流動性の培地中の溶存酸素濃度を
培養初期よりその温度に於ける飽和溶存酸素濃度未満で
ある条件下に制御して培養する方法とも併用することが
できる。
の特定の比重の遠心分離媒体を作成し、前述の方法で遠
心分離することによっても、培養細胞を比重の違いによ
り複数の層に分けることができる。更に、本発明は、特
願平６−１４６８２６号明細書に開示されている、培養
器内の気相中の酸素濃度を培養初期より大気中の酸素濃
度未満の条件下に制御して培養を行うか、或いは組織及
び／又は細胞と接する流動性の培地中の溶存酸素濃度を
培養初期よりその温度に於ける飽和溶存酸素濃度未満で
ある条件下に制御して培養する方法とも併用することが
できる。
【００６８】ここで、培養初期とは、培養開始時ないし
培養開始後７日目をいい、培養器内の気相中の酸素濃
度、又は組織及び／又は細胞と接する流動性の培地中の
溶存酸素濃度の制御は、培養開始時から行うことが好ま
しい。また、制御の期間としては、培養全期間を通して
該条件に制御してもよいし、培養全期間中の一部期間の
みを制御してもよく、特に限定するものではないが、全
培養期間中の、少なくとも３日間制御することが好まし
い。
培養開始後７日目をいい、培養器内の気相中の酸素濃
度、又は組織及び／又は細胞と接する流動性の培地中の
溶存酸素濃度の制御は、培養開始時から行うことが好ま
しい。また、制御の期間としては、培養全期間を通して
該条件に制御してもよいし、培養全期間中の一部期間の
みを制御してもよく、特に限定するものではないが、全
培養期間中の、少なくとも３日間制御することが好まし
い。
【００６９】培養器内の気相中の酸素濃度は、４ないし
15％に制御することが必要であり、特に６ないし12％に
制御することが好ましい。また、流動性の培地中の溶存
酸素濃度は、その温度における飽和溶存酸素濃度値の１
ないし75％に制御することが必要であり、特に10ないし
75％に制御することが好ましい。本発明にかかる方法
と、上述の先願特許出願に記載の３つの方法をすべて組
み合わせることも可能である。
15％に制御することが必要であり、特に６ないし12％に
制御することが好ましい。また、流動性の培地中の溶存
酸素濃度は、その温度における飽和溶存酸素濃度値の１
ないし75％に制御することが必要であり、特に10ないし
75％に制御することが好ましい。本発明にかかる方法
と、上述の先願特許出願に記載の３つの方法をすべて組
み合わせることも可能である。
【００７０】以上のようにして得られた培養組織又は培
養細胞から、メタノール等の有機溶媒による抽出によっ
てタキサン型ジテルペンをを分離することができる。ま
た、培地中に適当な吸着剤や有機溶媒を共存させ、培養
中に連続的にタキサン型ジテルペンを回収することもで
きる。本発明の組織培養の好ましい一例としては、次の
方法が挙げられる。
養細胞から、メタノール等の有機溶媒による抽出によっ
てタキサン型ジテルペンをを分離することができる。ま
た、培地中に適当な吸着剤や有機溶媒を共存させ、培養
中に連続的にタキサン型ジテルペンを回収することもで
きる。本発明の組織培養の好ましい一例としては、次の
方法が挙げられる。
【００７１】先ずイチイ属に属する植物の植物体、例え
ば根、生長点、葉、茎、種子などから採取される植物片
を殺菌処理後、ゲランガムで固めたウッディー・プラン
ト・メディウムの固体培地上に置床し、10〜35℃で14〜
60日程度経過させて組織片の一部をカルス化させる。こ
のようにして得られたカルスを継代培養すると生育速度
が漸次高まり安定化したカルスが得られる。ここで、安
定化したカルスとは、培養中にカルスの一部がシュート
や根に分化しないでカルスの状態を保持する性質をもち
細胞の生育速度が均質であるものをいう。
ば根、生長点、葉、茎、種子などから採取される植物片
を殺菌処理後、ゲランガムで固めたウッディー・プラン
ト・メディウムの固体培地上に置床し、10〜35℃で14〜
60日程度経過させて組織片の一部をカルス化させる。こ
のようにして得られたカルスを継代培養すると生育速度
が漸次高まり安定化したカルスが得られる。ここで、安
定化したカルスとは、培養中にカルスの一部がシュート
や根に分化しないでカルスの状態を保持する性質をもち
細胞の生育速度が均質であるものをいう。
【００７２】この安定化したカルスを増殖に適した液体
培地、例えばウッディー・プラント・メディウムの液体
培地に移して増殖させる。液体培地において更に生育速
度が高められる。本発明では、この安定化したカルスま
たは該カルスを構成する細胞は、重金属を含む化合物
類、重金属を含む錯イオン類、及び重金属イオンよりな
る群から選ばれた少なくとも一つの存在下、固体培地又
は液体培地で培養される。
培地、例えばウッディー・プラント・メディウムの液体
培地に移して増殖させる。液体培地において更に生育速
度が高められる。本発明では、この安定化したカルスま
たは該カルスを構成する細胞は、重金属を含む化合物
類、重金属を含む錯イオン類、及び重金属イオンよりな
る群から選ばれた少なくとも一つの存在下、固体培地又
は液体培地で培養される。
【００７３】重金属を含む化合物類、重金属を含む錯イ
オン類、又は重金属イオンは、培養開始時ないし培養細
胞が増殖期から定常期に移行する時期までに添加するこ
とが効果的であり、特に培養開始時に添加することが好
ましい。また当該化合物又はイオンの添加は、一度に行
っても良いし、数回に分けて行っても良い。本発明の組
織培養における培養温度としては、通常は約10〜約35
℃、特に約23〜28℃が増殖速度が大きいので好適であ
る。また、培養期間としては、14〜42日間が好適であ
る。
オン類、又は重金属イオンは、培養開始時ないし培養細
胞が増殖期から定常期に移行する時期までに添加するこ
とが効果的であり、特に培養開始時に添加することが好
ましい。また当該化合物又はイオンの添加は、一度に行
っても良いし、数回に分けて行っても良い。本発明の組
織培養における培養温度としては、通常は約10〜約35
℃、特に約23〜28℃が増殖速度が大きいので好適であ
る。また、培養期間としては、14〜42日間が好適であ
る。
【００７４】本発明の培養方法において液体培地を用い
た場合には、培養終了後に培養細胞をデカンテーション
または濾過等の方法によって培地から分離し、培養細胞
および／または培地から目的とする代謝産物を有機溶媒
による抽出等の方法によって分離することができる。
た場合には、培養終了後に培養細胞をデカンテーション
または濾過等の方法によって培地から分離し、培養細胞
および／または培地から目的とする代謝産物を有機溶媒
による抽出等の方法によって分離することができる。
【００７５】
【実施例】以下、実施例及び比較例により本発明を更に
具体的に説明するが、本発明の範囲はこれらの実施例に
限定されるものではない。
具体的に説明するが、本発明の範囲はこれらの実施例に
限定されるものではない。
【００７６】〔実施例１〕ナフタレン酢酸を10-5Mの濃
度になるように添加したウッディー・プラント・メディ
ウムの固体培地（ゲランガム0.25重量％）に、前もって
2％アンチホルミン溶液または70％エタノール溶液等で
滅菌処理したセイヨウイチイ(Taxus baccata LINN)の茎
の一部を置床し、25℃で暗所にて静置培養してセイヨウ
イチイカルスを得た。次にこのカルス１g（新鮮重）
を、上記成分を同じ濃度で添加したウッディー・プラン
ト・メディウムの液体培地20ml入りの三角フラスコに移
し、ロータリーシェーカー上で旋回培養（振幅25mm、10
0rpm）し、21日毎に植えつぎ、該カルスの生育速度を速
めた。
度になるように添加したウッディー・プラント・メディ
ウムの固体培地（ゲランガム0.25重量％）に、前もって
2％アンチホルミン溶液または70％エタノール溶液等で
滅菌処理したセイヨウイチイ(Taxus baccata LINN)の茎
の一部を置床し、25℃で暗所にて静置培養してセイヨウ
イチイカルスを得た。次にこのカルス１g（新鮮重）
を、上記成分を同じ濃度で添加したウッディー・プラン
ト・メディウムの液体培地20ml入りの三角フラスコに移
し、ロータリーシェーカー上で旋回培養（振幅25mm、10
0rpm）し、21日毎に植えつぎ、該カルスの生育速度を速
めた。
【００７７】このようにして得られた培養細胞１ｇ（新
鮮重）を、上記成分を同じ濃度で添加したウッディー・
プラント・メディウムの液体培地20ml入りの三角フラス
コに移した後、重金属を含む化合物として〔Ag(S
2O3)2〕3-をその終濃度が10-9M〜1Mになるように添加し
た。そして25℃で21日間、旋回培養を行った。培養終了
後、セイヨウイチイ培養細胞を濾過により採取し、凍結
乾燥した後その乾燥重量を測定し、生育倍率を求めた。
得られた乾燥カルスからメタノール等を用いてタキサン
型ジテルペンを抽出し、高速液体クロマトグラフィーを
用いて標準品タキソール、セファロマニン、バッカチン
IIIと比較定量することによってタキサン型ジテルペン
収量を測定した。その結果を表１に示す。
鮮重）を、上記成分を同じ濃度で添加したウッディー・
プラント・メディウムの液体培地20ml入りの三角フラス
コに移した後、重金属を含む化合物として〔Ag(S
2O3)2〕3-をその終濃度が10-9M〜1Mになるように添加し
た。そして25℃で21日間、旋回培養を行った。培養終了
後、セイヨウイチイ培養細胞を濾過により採取し、凍結
乾燥した後その乾燥重量を測定し、生育倍率を求めた。
得られた乾燥カルスからメタノール等を用いてタキサン
型ジテルペンを抽出し、高速液体クロマトグラフィーを
用いて標準品タキソール、セファロマニン、バッカチン
IIIと比較定量することによってタキサン型ジテルペン
収量を測定した。その結果を表１に示す。
【００７８】〔実施例２〕実施例１に於いて、〔Ag(S2O
3)2〕3-をその終濃度が10-3Mになるよう培養開始７日目
に添加し、更に14日間培養した。培養終了後は該実施例
と同様に操作した。その結果を表１に示す。
3)2〕3-をその終濃度が10-3Mになるよう培養開始７日目
に添加し、更に14日間培養した。培養終了後は該実施例
と同様に操作した。その結果を表１に示す。
【００７９】〔実施例３〕実施例１に於いて、〔Ag(S2O
3)2〕3-をその終濃度が10-3Mになるよう培養開始14日目
に添加し、更に７日間培養した。培養終了後は該実施例
と同様に操作した。その結果を表１に示す。
3)2〕3-をその終濃度が10-3Mになるよう培養開始14日目
に添加し、更に７日間培養した。培養終了後は該実施例
と同様に操作した。その結果を表１に示す。
【００８０】〔実施例４〕実施例１に於いて、〔Ag(S2O
3)2〕3-をその終濃度が10-3Mになるよう培養開始18日目
に添加し、更に３日間培養した。培養終了後は該実施例
と同様に操作した。その結果を表１に示す。
3)2〕3-をその終濃度が10-3Mになるよう培養開始18日目
に添加し、更に３日間培養した。培養終了後は該実施例
と同様に操作した。その結果を表１に示す。
【００８１】〔実施例５〕実施例１に於いて、〔Ag(S2O
3)2〕3-を培養開始時（0日目）より４日置きに計５回逐
次添加（１回当たりの終濃度は２×10-4M、合計10-3M）
すること以外は該実施例と同様に操作した。その結果を
表１に示す。
3)2〕3-を培養開始時（0日目）より４日置きに計５回逐
次添加（１回当たりの終濃度は２×10-4M、合計10-3M）
すること以外は該実施例と同様に操作した。その結果を
表１に示す。
【００８２】〔実施例６〕実施例１に於いて、培養14日
目にジャスモン酸類としてジャスモン酸類のメチルエス
テル〔式〔Ｉ〕に於いて、Ｒ1がＣＨ2ＣＯＯＣＨ3であ
り、Ｒ2およびＲ3がＨであり、Ｒ4、Ｒ5が二重結合を形
成する化合物〕をその終濃度が10-4Mになるよう添加す
ること以外は該実施例と同様に操作した。その結果を表
１に示す。
目にジャスモン酸類としてジャスモン酸類のメチルエス
テル〔式〔Ｉ〕に於いて、Ｒ1がＣＨ2ＣＯＯＣＨ3であ
り、Ｒ2およびＲ3がＨであり、Ｒ4、Ｒ5が二重結合を形
成する化合物〕をその終濃度が10-4Mになるよう添加す
ること以外は該実施例と同様に操作した。その結果を表
１に示す。
【００８３】〔実施例７〕実施例１に於いて、該フラス
コを気体供給口と排出口を有する容器（内容量3000ml）
内に入れ密閉した後、空気と窒素を用いて、該培養細胞
に供給する酸素濃度が10%となるよう混合比を調節し、
更に毎分25mlの割合で該気体を供給口より供給すること
以外は該実施例と同様に操作した。その結果を表１に示
す。
コを気体供給口と排出口を有する容器（内容量3000ml）
内に入れ密閉した後、空気と窒素を用いて、該培養細胞
に供給する酸素濃度が10%となるよう混合比を調節し、
更に毎分25mlの割合で該気体を供給口より供給すること
以外は該実施例と同様に操作した。その結果を表１に示
す。
【００８４】〔実施例８〕実施例７に於いて、培養14日
目にジャスモン酸類のメチルエステルを、その終濃度が
10-4Mになるよう添加すること以外は該実施例と同様に
操作した。その結果を表１に示す。
目にジャスモン酸類のメチルエステルを、その終濃度が
10-4Mになるよう添加すること以外は該実施例と同様に
操作した。その結果を表１に示す。
【００８５】〔実施例９〕実施例１に於いて、〔Ag(S2O
3)2〕3-の代わりに硝酸銀〔AgNO3〕10-3Mを、培養開始
時（０日目）に添加したこと以外は該実施例と同様に操
作した。その結果を表１に示す。
3)2〕3-の代わりに硝酸銀〔AgNO3〕10-3Mを、培養開始
時（０日目）に添加したこと以外は該実施例と同様に操
作した。その結果を表１に示す。
【００８６】〔実施例１０〕実施例９に於いて、硝酸銀
10-3Mを、培養開始14日目に添加したこと以外は該実施
例と同様に操作した。その結果を表１に示す。
10-3Mを、培養開始14日目に添加したこと以外は該実施
例と同様に操作した。その結果を表１に示す。
【００８７】〔比較例１〕実施例１に於いて、〔Ag(S2O
3)2〕3-を添加しない以外は該実施例と同様に操作し
た。その結果を表１に示す。
3)2〕3-を添加しない以外は該実施例と同様に操作し
た。その結果を表１に示す。
【００８８】〔実施例１１〕実施例１に於いて、重金属
を含む化合物として〔Ag(S2O3)2〕3-の代わりに塩化コ
バルト〔CoCl2〕を、その終濃度が10-9M〜1Mになるよう
に添加したこと以外は該実施例と同様に操作した。その
結果を表２に示す。
を含む化合物として〔Ag(S2O3)2〕3-の代わりに塩化コ
バルト〔CoCl2〕を、その終濃度が10-9M〜1Mになるよう
に添加したこと以外は該実施例と同様に操作した。その
結果を表２に示す。
【００８９】〔実施例１２〕実施例１１に於いて、〔Ag
(S2O3)2〕3-の代わりに塩化コバルトをその終濃度が10
-5Mになるよう培養開始7日目に添加し、更に14日間培養
した。培養終了後は該実施例と同様に操作した。その結
果を表２に示す。
(S2O3)2〕3-の代わりに塩化コバルトをその終濃度が10
-5Mになるよう培養開始7日目に添加し、更に14日間培養
した。培養終了後は該実施例と同様に操作した。その結
果を表２に示す。
【００９０】〔実施例１３〕実施例１１に於いて、塩化
コバルトをその終濃度が10-5Mになるよう培養開始14日
目に添加し、更に７日間培養した。培養終了後は該実施
例と同様に操作した。その結果を表２に示す。
コバルトをその終濃度が10-5Mになるよう培養開始14日
目に添加し、更に７日間培養した。培養終了後は該実施
例と同様に操作した。その結果を表２に示す。
【００９１】〔実施例１４〕実施例１１に於いて、塩化
コバルトをその終濃度が10-5Mになるよう培養開始18日
目に添加し、更に３日間培養した。培養終了後は該実施
例と同様に操作した。その結果を表２に示す。
コバルトをその終濃度が10-5Mになるよう培養開始18日
目に添加し、更に３日間培養した。培養終了後は該実施
例と同様に操作した。その結果を表２に示す。
【００９２】〔実施例１５〕実施例１１に於いて、塩化
コバルトを培養開始時（０日目）より４日置きに計５回
逐次添加（１回当たりの終濃度は２×10-6M、合計10
-5M）すること以外は該実施例と同様に操作した。その
結果を表２に示す。
コバルトを培養開始時（０日目）より４日置きに計５回
逐次添加（１回当たりの終濃度は２×10-6M、合計10
-5M）すること以外は該実施例と同様に操作した。その
結果を表２に示す。
【００９３】〔実施例１６〕実施例１１に於いて、培養
14日目にジャスモン酸類としてジャスモン酸類のメチル
エステル〔式〔Ｉ〕に於いて、Ｒ1がＣＨ2ＣＯＯＣＨ3
であり、Ｒ2およびＲ 3がＨであり、Ｒ4、Ｒ5が二重結合
を形成する化合物〕をその終濃度が10-4Mになるよう添
加すること以外は該実施例と同様に操作した。その結果
を表２に示す。
14日目にジャスモン酸類としてジャスモン酸類のメチル
エステル〔式〔Ｉ〕に於いて、Ｒ1がＣＨ2ＣＯＯＣＨ3
であり、Ｒ2およびＲ 3がＨであり、Ｒ4、Ｒ5が二重結合
を形成する化合物〕をその終濃度が10-4Mになるよう添
加すること以外は該実施例と同様に操作した。その結果
を表２に示す。
【００９４】〔実施例１７〕実施例１１に於いて、該フ
ラスコを気体供給口と排出口を有する容器（内容量3000
ml）内に入れ密閉した後、空気と窒素を用いて、該培養
細胞に供給する酸素濃度が10%となるよう混合比を調節
し、更に毎分25mlの割合で該気体を供給口より供給する
こと以外は該実施例と同様に操作した。その結果を表２
に示す。
ラスコを気体供給口と排出口を有する容器（内容量3000
ml）内に入れ密閉した後、空気と窒素を用いて、該培養
細胞に供給する酸素濃度が10%となるよう混合比を調節
し、更に毎分25mlの割合で該気体を供給口より供給する
こと以外は該実施例と同様に操作した。その結果を表２
に示す。
【００９５】〔実施例１８〕実施例１７に於いて、培養
14日目にジャスモン酸類のメチルエステルを、その終濃
度が10-4Mになるよう添加すること以外は該実施例と同
様に操作した。その結果を表２に示す。
14日目にジャスモン酸類のメチルエステルを、その終濃
度が10-4Mになるよう添加すること以外は該実施例と同
様に操作した。その結果を表２に示す。
【００９６】
【表１】
【００９７】
【表２】
【００９８】
【発明の効果】本発明によれば、植物の組織又は細胞
を、重金属の化合物及び／又は重金属イオンの存在下に
培養することにより、植物由来の代謝産物を大量に且つ
簡便に得ることが可能となった。
を、重金属の化合物及び／又は重金属イオンの存在下に
培養することにより、植物由来の代謝産物を大量に且つ
簡便に得ることが可能となった。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 (Ｃ１２Ｐ 17/02 Ｃ１２Ｒ 1:91）
Claims (18)
- 【請求項１】 タキサン型ジテルペンを産生する植物の
組織及び／又は細胞を、重金属を含む化合物類、重金属
を含む錯イオン類、及び重金属イオンよりなる群から選
ばれた少なくとも一つの存在下に培養し、得られる培養
物及び／又は培地からタキサン型ジテルペンを回収する
ことを特徴とするタキサン型ジテルペンの製造方法。 - 【請求項２】 重金属が、銀であることを特徴とする請
求項１記載のタキサン型ジテルペンの製造方法。 - 【請求項３】 銀を含む化合物類が、硝酸銀、硫酸銀か
ら選ばれる少なくとも１種類以上であることを特徴とす
る請求項２記載のタキサン型ジテルペンの製造方法。 - 【請求項４】 銀を含む化合物類が、フッ化銀、塩素酸
銀、過塩素酸銀、酢酸銀、亜硫酸銀、ヘキサフルオロリ
ン（Ｖ）酸銀、テトラフルオロホウ酸銀、ジアミン銀
（Ｉ）硫酸塩、ジアミノ銀（Ｉ）酸カリウムから選ばれ
る少なくとも１種類以上であることを特徴とする請求項
２記載のタキサン型ジテルペンの製造方法。 - 【請求項５】 銀を含む錯イオン類が、〔Ag(S2O3)2〕
3-、〔Ag(S2O3)3〕5-、から選ばれる少なくとも１種類
以上であることを特徴とする請求項２記載のタキサン型
ジテルペンの製造方法。 - 【請求項６】 銀を含む錯イオン類が、〔Ag(N
H3)2〕+、〔Ag(CN)2〕-、〔Ag(CN)3〕2-、〔Ag(SCN)2〕
-、〔Ag(SCN)4〕3-から選ばれる少なくとも１種類以上
であることを特徴とする請求項２記載のタキサン型ジテ
ルペンの製造方法。 - 【請求項７】 銀を含む化合物類、銀を含む錯イオン
類、又は銀イオンの濃度が、10-8M〜10-1Mであることを
特徴とする請求項２記載のタキサン型ジテルペンの製造
方法。 - 【請求項８】 銀を含む化合物類、銀を含む錯イオン
類、又は銀イオンの濃度が、10-7M〜10-2Mであることを
特徴とする請求項２記載のタキサン型ジテルペンの製造
方法。 - 【請求項９】 重金属が、コバルトであることを特徴と
する請求項１記載のタキサン型ジテルペンの製造方法。 - 【請求項１０】 コバルトを含む化合物類が、塩化コバ
ルト、硝酸コバルト、硫酸コバルトから選ばれる少なく
とも１種類以上であることを特徴とする請求項９記載の
タキサン型ジテルペンの製造方法。 - 【請求項１１】 コバルトを含む化合物類が、フッ化コ
バルト、過塩素酸コバルト、臭化コバルト、ヨウ化コバ
ルト、セレン酸コバルト、チオシアン酸コバルト、酢酸
コバルト、硫酸アンモニウムコバルト、硫酸コバルト
（II）カリウム、ヘキサアンミンコバルト（III）塩化
物、ペンタアンミンアクアコバルト（III）塩化物、ニ
トロペンタアンミンコバルト（III）塩化物、ジクロロ
テトラアンミンコバルト（III）塩化物半水和物、ジニ
トロテトラアンミンコバルト（III）塩化物、カルボナ
トテトラアンミンコバルト（III）塩化物、テトラニト
ロジアンミンコバルト（III）酸アンモニウム、ヘキサ
ニトロコバルト（III）酸ナトリウム、トリス（エチレ
ンジアミン）コバルト（III）塩化物三水和物、ジクロ
ロビス（エチレンジアミン）コバルト（III）塩化物、
トリス（オキサラト）コバルト（III）酸カリウム三水
和物、ヘキサシアノコバルト（III）酸カリウム、（エ
チレンジアミンテトラアセタト）コバルト（III）酸カ
リウム二水和物、ヒドリドテトラカルボニルコバルト
（Ｉ）、ジカルボニル（シクロペンタジエニル）コバル
ト（Ｉ）、オクタカルボニル二コバルト（０）、ヘキサ
カルボニル（アセチレン）二コバルト（０）、ビス（シ
クロペンタジエニル）コバルト（Ｉ）、（シクロペンタ
ジエニル）（1,5-シクロオクタジエン）コバルト（Ｉ）
から選ばれる少なくとも１種類以上であることを特徴と
する請求項９記載のタキサン型ジテルペンの製造方法。 - 【請求項１２】 コバルトを含む錯イオン類が、ペンタ
アンミンアクアコバルトイオン、ニトロペンタアンミン
コバルトイオン、ジクロロテトラアンミンコバルトイオ
ン、ジニトロテトラアンミンコバルトイオン、カルボナ
トテトラアンミンコバルトイオン、テトラニトロジアン
ミンコバルトイオン、ヘキサニトロコバルトイオン、ト
リス（エチレンジアミン）コバルトイオン、ジクロロビ
ス（エチレンジアミン）コバルトイオン、トリス（オキ
サラト）コバルトイオン、ヘキサシアノコバルトイオ
ン、（エチレンジアミンテトラアセタト）コバルトイオ
ンから選ばれる少なくとも１種類以上であることを特徴
とする請求項９記載のタキサン型ジテルペンの製造方
法。 - 【請求項１３】 コバルトを含む化合物類、コバルトを
含む錯イオン類、又はコバルトイオンの濃度が、10-6M
〜10-1Mであることを特徴とする請求項９記載のタキサ
ン型ジテルペンの製造方法。 - 【請求項１４】 コバルトを含む化合物類、コバルトを
含む錯イオン類、又はコバルトイオンの濃度が、10-5M
〜10-2Mであることを特徴とする請求項９記載のタキサ
ン型ジテルペンの製造方法。 - 【請求項１５】 タキサン型ジテルペンが、タキソー
ル、10−デアセチルタキソール、７−エピタキソ−ル、
バッカチンIII、10−デアセチルバッカチンIII、７−エ
ピバッカチンIII、セファロマニン、10−デアセチルセ
ファロマニン、７−エピセファロマニンよりなる群から
選ばれた少なくとも一つであることを特徴とする請求項
１記載のタキサン型ジテルペンの製造方法。 - 【請求項１６】 タキサン型ジテルペンを産生する植物
がイチイ属植物であることを特徴とする請求項１記載の
タキサン型ジテルペンの製造方法。 - 【請求項１７】 タキサン型ジテルペンを植物の組織及
び／又は細胞を下記の一般式〔Ｉ〕： 【化１】 ［式中、Ｒ1 は炭素数１〜４のアルキル基又は次式： −（ＣＨ2 ）n −ＣＯ−Ｒ6 （式中、Ｒ6 は水酸基、ＯＭ（ここで、Ｍはアルカリ金
属原子、アルカリ土類金属原子又はＮＨ4 を表す。）、
ＮＨＲ7 （ここで、Ｒ7 は、水素原子、炭素数１〜４の
アシル基、炭素数１〜４のアルキル基又はアミノ酸残基
を表す。）又はＯＲ8 （ここで、Ｒ8 は炭素数１〜４の
アルキル基又は炭水化物残基を表す。）を表し、ｎは１
〜７の整数を表す。）で示される基を表し；Ｒ2 、
Ｒ3 、Ｒ4 及びＲ5 は、それぞれ水素原子を表すか、或
いはＲ2 とＲ3 、Ｒ3 とＲ4 、又はＲ4とＲ5 は、共同
して二重結合を表してもよく；前記５員環は、更に水酸
基で置換されていてもよく、隣接する環員炭素原子間で
二重結合を形成してもよい。］で示されるジャスモン酸
類の存在下に培養することを特徴とする請求項１記載の
タキサン型ジテルペンの製造方法。 - 【請求項１８】 タキサン型ジテルペンを産生する植物
の組織及び／又は細胞を培養するに当たり、培養器内の
気相中の酸素濃度を培養初期より大気中の酸素濃度未満
の条件下に制御して培養を行うか、或いは組織及び／又
は細胞と接する流動性の培地中の溶存酸素濃度を培養初
期よりその温度に於ける飽和溶存酸素濃度未満である条
件下に制御して培養することを特徴とする請求項１記載
のタキサン型ジテルペンの製造方法。
Priority Applications (21)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6201150A JPH0856680A (ja) | 1994-08-25 | 1994-08-25 | タキサン型ジテルペンの製造方法 |
| EP94931697A EP0683232B1 (en) | 1993-11-15 | 1994-11-09 | Process for producing taxane diterpene and method of harvesting cultred cell capable of producing taxane diterpene in high yield |
| KR1019950702779A KR0172606B1 (ko) | 1993-11-15 | 1994-11-09 | 탁산형 디테르펜의 제조방법 |
| US08/491,844 US5637484A (en) | 1993-11-15 | 1994-11-09 | Method of producing a taxane-type diterpene and a method of obtaining cultured cells which produce the taxane-type diterpene at a high rate |
| DE69433120T DE69433120T2 (de) | 1993-11-15 | 1994-11-09 | Methode zur Herstellung von Taxan-Typ Diterpen und Methode zur Gewinnung von Kulturzellen die Taxan-Typ Diterpen in hohen Ausbeuten herstellen |
| EP03015169A EP1348764A1 (en) | 1993-11-15 | 1994-11-09 | A Method of Producing a Taxane-Type Diterpene and Method of Obtaining Cultured Cells which Produce the Taxane-Type Diterpene at a High Rate |
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-
1994
- 1994-08-25 JP JP6201150A patent/JPH0856680A/ja active Pending
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