JPH08505069A - 感光剤を活性化する方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 フォトダイナミック治療を行なう方法は、感光剤に対して通常臨床で使われる投与量のおよそ２分の１未満である有効量の感光剤を動物に投与することで始まる。次いで、通常投与後にあける時間間隔のおよそ４分の１未満である投与後の時間間隔をおいて、感光剤と共に通常臨床で使われる光量のおよそ２分の１未満である有効量の光量が動物に照射される。

Description

【発明の詳細な説明】 ［発明の名称］ 感光剤を活性化する方法 ［発明の分野］ 本発明は一般に感光剤を用いた薬と薬物治療の領域に関わる。特に、本発明は 標的組織を選択的に害う又は破壊するために、感光剤を投与して光照射を行うこ とをふくむ標的組織を破壊する方法である。 ［発明の背景］ フォトダイナミック治療（photodynamic therapy）（PDT）は感光性化合物を 投与し、続いて該感光性化合物が濃縮した組織に光を照射することを含む。十分 に高濃度の感光性化合物を含む標的組織は選択的に光を吸収し、すぐまわりの細 胞を害う又は破壊されるように誘導される。１９９２年３月１０日発行のLevyの 米国特許５，０９５，０３０は、感光剤を動物に投与し、続いて外部光源を使っ て光を照射するという手順について記載している。例えば、この特許の実施例５ は、触診して分かる腫瘍にまで大きくなるP815腫瘍細胞をマウスに皮下注射する ことについて記載している。次いで、感光性化合物が注射される。次いで、その 動物は暗所に２時間置かれる。次に、その腫瘍に強い光が照射された。その処理 をされた動物の生存率は未処理のコントロール動物よりも有意に高かった。同様 に、 同特許の実施例８は、同様のプロトコールを使ったマウスの横紋筋腫の系の使用 について記載している。しかしながら、この場合、光照射は、注射後２４時間経 って開始した。さらに、トリチウム化BPD-MA及びBPD-HBの体内分布は注射して３ 〜１６８時間にわたる範囲の時間で決定された。静脈内（IV）投与して３時間後 が腫瘍−皮膚の割合は好ましいものであった。生物分解性はP815腫瘍をもつマウ スに静脈注射されたトリチウム化BPD-MAを用いて決定された。マウスは、BPD-MA 注射後３時間又は２４時間経ったときに殺された。腫瘍、肝臓、及び腎臓が調べ られた。３時間では、腫瘍において１００％のBPD-HAが活性があったが、２４時 間では３９％しか活性がなかった。肝臓及び腎臓は両方とも腫瘍よりも急速にBP D-MAを分解した。 Kostronら（J．Neuro-0ncology（1988）6：185-91）は、ラットのグリオサル コーマ（gliosarcomas）に直接ヘマトポルフィリン誘導体を皮下注射し、注射後 ４８時間で光を照射した。Kostronは、直接注射は非経口注射より安全であるよ うであると報告した。Kostronはまた注射後、光照射を行うまでに少なくとも２ 日、好ましくは３〜４日おくべきであり、なぜなら、そうすることによって、ヘ マトポルフィリン誘導体が腫瘍組織に濃縮するようになるからであると示した以 前の研究を述べた。 BPDは正常の非悪性細胞に対してよりも白血病細胞をふくめた腫瘍組織に対し てより高い親和性があることが示された（Jamieson et al．，Leukemia Res． 1 4 ：209-19，1990）。感光剤はまた米国特許番号４，５２１，７６２及び４，５ ７７，６３６の中で述べられているように、アテローム性動脈硬化症プラーク（ plaque）の検出と治療において有用である。ウィルス性疾病の治療はJudyらの１ ９８９年１１月７日発行の米国特許番号４，８７８，８９１及び shikowitzの １９９０年５月１５日発行の４，９２５，７３６及び４，９３５，４９８の中で 開示されている。乾癬（psoriasis）の治療はWeinsteinらの１９８８年６月２８ 日発行の米国特許番号４，７５３，９５８の中で開示されている。関節炎（arth ritis）の治療はCarsonの１９９１年７月２日発行の米国特許番号５，０２８， ９９４の中で開示されている。ポートワイン斑点（portwine stain）の治療はカ ナダ特許公報ＣＡ２，０１２，１７５の中で開示されている。 １９９２年３月１０日発行の米国特許番号５，０９５，０３０（その全文は本 願中に引用をもって組み込まれている）は一般に「緑色ポルフィリン」と述べら れている様々な波長特異的細胞毒性物質について開示し、かつクレームに記載し ている。これら化合物は吸収波長を長波長側へ効率よくシフトするディールス・ アルダー（Diels-Alder）反応により修飾されるポルフィリン誘導体である。こ れにより、これら化合物が一般にフォトダイナミック治療に使われるとき、例え ば、ヘマトポルフィリン誘導体と比較されると、いくつかの好ましい性質をもつ ようになる。同特許中に述べられているように、これら細胞毒性のある物質は、 組織に投与されるとき、望ましくない細胞、特に腫瘍細胞やウィルスにとどまる （home）。続いてこれらの化合物によって吸収される光の照射が行われ、細胞毒 性を帯る。 １９９２年２月５日提出の出願中の出願番号０７／８３２，５４２（その全文 は本願中に引用をもって組み込まれている）は、ポルフィリン感光剤のリポソー ムの調整について開示している。 出願中の出願番号０７／９４８，１１３（その全文は本願中に引用をもって組 み込まれている）は、血液−骨の標的絹胞を治療するために、マウスにBPDを注 射することについて開示している。同出願はまた注射後、１５分から２時間の間 の間隔をあけたときの薬物動態学上のデータについても開示している。６．３２ μｇ／ｍｌという量を投与され、投与後１５分から光照射を始めたマウスは全て 死亡した。しかしながら、低量のBPD注射又は注射後の時間を長くした（例えば １時間）他のマウスは健康なままであった。 って起こる有害な影響はダウアーティ（Dougherty）らにより詳細に報告された 。Lasers in Surg．Med．（1990）10：485-88；及びHarty et al．J．Urology（ 1989）141：1341-1346。Doughertyはポルファイマーナトリウムを投与された一 連の１８０名の患者において、患者達は多様なガンを治療するために０．５〜２ ．０ｍｇ／ｋｇの投与をうけたと報告したが、光照射量又は注射して照射するま での時間については述べなかった。しかしながら、同薬剤に対して推薦される注 射後の間隔は２４〜４８時間である。Doughertyは「全ての患者はPhotofrinの注 射に伴って感光性となる。」と警告している。治療を受けた患者は感光性反応に ついて面接でかつアンケートを通して調査された。反応についての面接報告では 、患者が１ヶ月間、日光を避ける旨の医療指示を守らなかったことを自認するこ とを避けたかもしれないので、非常に低いと信じられていた。にもかかわらず、 患者のほぼ４分の１は反応を報告しており、その大部分は投与を行って１ヶ月以 内に起っていた。「より低い量の薬剤ではより軽症の反応となる傾向があるかも しれないが、感光性と注射薬剤量とには見かけ上関係はなかった。」さらに、感 光性を失う時間の長さは５ｍｇ／ｋｇのグループに対してはやや短かったかもし れないが、統計学上、有意ではなか った。Doughertyは患者は感光性は６週間続くと警告されるべきであると結論づ けている。 ハーティ（Harty）らは、膀胱癌の７人の患者に２．０ｍｇ／ｋｇのPH0T0FRIN ポルファイマーナトリウムを静脈注射をして投与し（１人の患者は適量の２／３ の投与を受けた）、７２時間後、１００Ｊ／ｃｍ²のエネルギー密度に光を照ら した。「６人の患者は皮膚に光毒性を示し、各々の場合でこの現象は［薬剤］の 投与後１０日以内のうちに起こった。４人の場合は、手や顔に紅斑及び浮腫から 成る軽度（mild）に分類され、治療を必要とはしなかった。２人の患者において は光毒性が手や顔の２度のやけどから成る、中程度の症状であり、局所的治療を 必要とした。」５人の患者は平滑筋を失い、繊維組織でおき代わっている刺激性 膀胱症状（irritative bladder symptoms）を示した。 必要とされているのは、正常組織の破壊や感光性反応のような有害な副作用は さけるようにフォトダイナミック治療（photodynamic therapy）を行うのにより よい方法である。改良された治療方法は、より低量の光を使って、処置（treatm ent）はより速やかに効率よく施される（administer）ようになるだろう。光源 が限定された力で放射するとき、改良方法により、より短い光照射時間でよくな り、同じ光源で多くの患者 を処置できるようになるだろう。別の改良は、感光剤をより低量にして、投与の コストを下げ、また副作用を避けるのに役立つだろう。 ［発明の概要］ 本発明は動物にフォトダイナミック治療（photodynamic therapy）を行う方法 を提供する。本方法は２ステップを含む。第１に、有効量の感光剤が動物に投与 される。本方法における感光剤の有効量は同じ感光剤に対して通常臨床で用いら れる量のおよそ２分の１未満である。第２に、注射後に通常あける時間間隔のお よそ４分の１未満の間隔をおいて、有効量の光が動物に施される。光の有効投与 （照射）量（effective dose）は特定の感光剤とともに、通常臨床で使われる量 のおよそ２分の１未満である。 別の実施態様としては、本発明は、腫瘍、アテローム性動脈硬化症、局所ウィ ルス感染、乾癖（psoriasis）、関節炎をおこしている関節、目及び他の血管新 生又は血管過剰形成をふくむが、これらに限定されない標的に対して適用される 。 本発明は任意の感光剤の使用を提供するが、好ましくは、かかる薬剤はクロリ ン（クロリンｅ６のような）、バクテリオクロリン、フタロシアニン、ポルフィ リン、プルプリン、メロシアニン、フェオホルビド、ソラレン及び組織の中でプ ロトポルフィリンのような薬 剤をつくることのできるδ−アミノレブリン酸のようなプロドラッグ（pro-drug s）より選択される。他の実施態様によれば、ＢＰＤ−ＭＡ、モノアスパルチル クロリンｅ６、亜鉛フタロシアニン、スズエチオプルプリン、テトラヒドロキシ テトラフェニルポルフィリン及びポルファイマーナトリウムが感光剤である。 別の実施態様においては、動物にフォトダイナミック治療（photodynamic the rapy）を行うために２ステップの方法が提供される。第１に、感光剤はフォトダ イナミック効果を生み出すのに十分な量を動物に投与される。第２に、投与後、 およそ２時間未満経った後に、およそ７５Joules/cm²未満の光が動物に照射され る。 ［図面の簡単な説明］ 図１は、１mg/kgのＢＰＤ−ＭＡを注射し、ＢＰＤ−ＭＡ注射後１５分より１ ００Joules/cm²の光照射を行って、４８時間後のマウスを表す。 図２は、０．５mg/kgのＢＰＤ−ＭＡを注射し、ＢＰＤ−ＭＡ注射後１５分よ り７５Joules/cm²の光照射を行って、２４時間後のマウスを表す。 図３は、２．０mg/kgのＢＰＤ−ＭＡを注射し、ＢＰＤ−ＭＡ注射後３時間よ り１００Jou1es/cm²の光照射を行って、４日後のマウスを表す。 図４はＢＰＤ-ＭＡ量０．５、１．０、１．５、２． ０mg/kg（リポソーム調製）のときのＢＰＤ−ＭＡ量応答カーブを示すグラフで ある。光照射は注射後３時間より行われた。 図５は光量５０，７５，１００，１２５，１５０Ｊ／cm²（６９０nmで）のと きの光量応答カーブを示すグラフである。光照射は２mg/kgのＢＰＤ−ＭＡ注射 後３時間より行われた。 ［発明の簡単な説明］ 本発明はフォトダイナミック治療（photodynamic therapy）を行う方法である 。本方法は感光剤を投与し、完全な（intact）動物の少くとも一部分に標的組織 を選択的に害う又は破壊するのに有効な強度で光照射を行うことをふくむ。 本明細書中で使われているように、「標的」とは、本処理方法により害われる 又は破壊されるよう意図されている組織である。標的は感光剤をとりこむ。次い で、十分な光照射が行われると、標的組織は害われるか又は破壊される。標的は 、腫瘍、アテローム性動脈硬化症デポジット（deposits）、パピローマウィルス に感染した細胞（いぼwarts）のようなウィルス含有細胞、乾癬（psoriasis）、 及び関節炎を含むがこれらに限定されない。また標的細胞には、特に目で急速に 発達している毛細血管及び血管新生のおこっている部分もふくまれる。本改良方 法は、従来よりフォトダイ ナミック治療が用いられていたタイプの腫瘍に用いることができる。これらの腫 瘍は一般に光が透過するはずの全身のむしろ表層部にあるものである。これらは 、皮膚、膀胱（bladder）、顎部の様々な腫瘍、カポシ肉腫（Kaposi's sarcoma ）、いくつかの食道腫瘍をふくむ。 「非標的細胞」とは本処理方法により害われない又は破壊されないよう意図さ れている完全な動物の細胞全てである。これら非標的細胞は上をおおっている正 常皮膚をふくめて、他の健康組織の細胞をふくむが、これに限定されない。 「破壊する」（destroy）は、望まれる標的組織を殺すという意味で使われる 。「害う」（impair）は、その機能を妨げるように、標的組織を変えてしまうこ とを意味する。例えば、ノース（North）らは、BPDを投与したウィルス感染Ｔ細 胞に光を照射した後では、Ｔ細胞の膜上に穴があき、膜が完全に分解されるまで その穴の大きさが大きくなっていくことを観察した（Blood Cells 18：129-40， 1992）。標的細胞は、たとえ最終的にはマクロファージにより、やられるとして も、標的組織は害われる又は破壊されると解される。 「感光剤」は１以上のタイプの選ばれた標的組織にとどまるないしとりこまれ る（home）化学化合物であり、光照射により、光に接すると、その光を吸収し、 標的 組織を害い又は破壊を誘導する。実際、選ばれた標的にとどまり、光を吸収する 任意の化合物が本発明で使われることができる。かかる化合物はこれが投与され る動物に対して毒性がなく、又は毒性のでない組成で調合することができること が好ましい。その光分解型の化合物も毒性がないことが好ましい。感光物質の総 合的なリストは、Kreimer-Birnbaum，Sem．Hematol．26：157-73，1989に記載さ れている。感光物質は、クロリン、バクテリオクロリン、フタロシアニン、ポル フィリン、プルプリン、メロシアニン、フェオホルビド（pheophorbides）、ソ ラレン及びプロトポルフィリンのような薬剤をつくることのできるδ−アミノレ ブリン酸のようなプロドラッグ（pro-drugs）をふくむがこれらに限定されない 。新しいクラスの感光剤である、波長特異的感光性ポルファシアニン及び拡大さ れた（expanded）ポルフィリン様化合物が、１９９２年１０月３０日に提出され 、その全文が本願中に引用をもって組み込まれている米国出願（ケース番号 do cketNo．２７３０１−２００７８．００）の中で開示されており、その開示され た方法で用いることができる。好まれる感光剤は、ベンゾポルフィリン誘導体（ ＢＰＤ）、モノアスパルチルクロリンｅ６、亜鉛フタロシアニン、スズエチオプ ルプリン、テトラヒドロキシテトラフェニルポルフィリン及びポルファイマーナ トリ 導体モノアシッドリングＡ（ＢＰＤ−ＭＡ）が最も好まれる。 本明細書中で用いている、「照射」（radiation）又は「光」（light）の語は 全波長をふくむ。好ましくは、照射波長は感光剤を励起する波長に適合するよう に選ばれる。より好ましくは照射波長は感光剤の励起波長に適合していて、非標 的組織や完全な動物の残余部分にはあまり吸収されないものとする。たとえば、 ＢＰＤ−ＭＡにとって好ましい波長は６８５〜６９５nmの範囲である。好ましい 光源はおよそ６９０nmで放射を始めるアルゴンポンプド色素レーザー（argonpum ped dye laser）である。また、光の蛍光アレイ、ＬＥＤパネルやフィルターを 通した完全スペクトルのアーク灯も有用である。 本発明において、光照射は、その強度、継続時間、感光剤投与とのタイミング （投与後照射までにあける時間間隔）によってさらに規定される。強度は、照射 の際、皮膚を透過し、及び／又は処置されるべき標的組織に到達するのに十分な ものでなければならない。継続時間は感光剤が標的組織に対し作用するのに十分 な光活性化能をもつような十分な長さでなければならない。強度と継続時間は両 方とも動物に過剰処置となることは避けるように限定されなければならない。投 与後、光照射を行うまでの時間間隔は重要である。なぜなら、感光剤が投与され た後、一般に光照射が速く行われるほど、１）必要とされる光量は少なくなり、 ２）感光剤の有効投与量も少なくてすむからである。 本発明はヒト及び他の哺乳類をふくむが、これに限定されない動物を処置する 方法を与える。「哺乳類」という語はまた、馬、犬、猫のようなペット、娯楽用 動物（愛玩用動物）と同様に、牛、豚、羊のような家畜動物もふくむ。 「完全な動物」とは、全体の分割されていない動物のことであり、それに光照 射を行うことができるものである。動物の血液が光を照射されるため体の外を循 環しているようなフォトフォレシス（photophoresis）とは対照的に、本動物の どの部分も、光照射のために取り除くことはしない。動物全体が光に照らされる 必要はない。完全な動物の一部分のみが照射されればよい、又はされる必要があ る。孤立した腫瘍や比較的小さい体積に影響が及ぶその他の状態のものにとって 、腫瘍又はその他の状態のものの上にある皮膚のみに光を照射することが好まし い。 「皮膚を通して」とは、本明細書中で動物の皮膚を通してという意味として使 われている。 本処置の代表的効能例は固形腫瘍における腫瘍組織の破壊、血管におけるアテ ローム性動脈硬化症プラー クの分解、局所腫瘍、又はパピローマウィルス感染（例えばいぼwarts）を含め た皮膚病の処置、乾癬（psoriasis）、関節炎、特に目の血管新生又は、血管過 剰形成を特徴とする症状の処置をふくむ。 簡単に言って、動物が光照射をうける前に、その動物に感光剤が一般に投与さ れる。好ましくは、感光剤は投与してから動物に光があてられるまでの通常の時 間間隔の４分の１未満の間隔で行われる。 好まれる感光剤は、クロリン、バクテリオクロリン、フタロシアニン、ポルフ ィリン、プルプリン、メロシアニン、フェオホルビド（pheophorbides）、ソラ レン、及びプロトポルフィリンのような薬剤をつくることのできるδ−アミノレ ブリン酸のようなプロドラッグ（pro-drugs）をふくむがそれらに限られたもの ではない。ベンゾポルフィリン誘導体（ＢＰＤ）やポルファイマーナトリウムが より好まれる。ベンゾポルフィリン誘導体において、モノアシッドリングＡ（mo noacid ring A)（ＢＰＤ−ＭＡ）が最も好まれる。他の好まれる感光剤はモノア スパルチルクロリンｅ６、亜鉛フタロシアニン、スズエチオプルプリン、及びテ トラヒドロキシテトラフェニルポルフィリンを含むが、これらに限定されない。 感光剤は局所的に又は全身的に投与される。感光剤は胃腸内に投与又は静脈、 皮下、筋肉、又は腹膜内注 射される。感光剤はまたパッチ（patches）や移植片を使って腸や局所に投与す ることもできる。最も好まれる投与方法は静脈注射である。 感光剤はダイマーとして合成され、それにより１モル単位あたりより多くの光 を吸収することができる。 感光剤は、丸薬、カプセル、坐薬、又は貼布薬（パッチ）のような乾燥状態と して投与することができる。感光剤は水のみもしくはレミントン−ファルマス− ティカル・サイエンシズ（Remington'ｓ Pharmaceutical Sciences）の中で開示 されているような製薬的に許容される賦形薬のような液体状態の処方で投与され てもよい。液体状の調合はまた、懸濁状又は乳濁状にすることもできる。特に、 リポソーム状又は脂肪親和性の調合が最も好まれる。もし、懸濁状又は乳濁状が 利用されると、適当な賦形薬としては、水、生理的食塩水、ブドウ糖、グリセロ ールなどのようなものを含む。これらの組成物は湿潤剤又は乳化剤、酸化防止剤 、ｐＨ緩衝剤などの少量の無毒性補助物質を含んでいてもよい。 感光剤の投与量は、目的とする標的細胞、動物の体重、光照射のタイミングに より変わる。よく知られている感光剤に対して、本方法で必要とされる感光剤の 有効量はよく知られている通常臨床で使われる投与量のおよそ２分の１未満であ る。例えば、通常臨床で使 われる量は、ポルファイマーナトリウムでは２．５ｍｇ／ｋｇであり、ＢＰＤで は０．２５ｍｇ／ｋｇである。本方法におけるポルファイマーナトリウムの有効 量はおよそ０．３〜１．２５ｍｇ／ｋｇである。本発明におけるＢＰＤの有効量 はおよそ０．０１〜０．１２５ｍｇ／ｋｇである。通常臨床で使われる量、即ち モノアスパルチルクロリンｅ６（０．１〜２．５ｍｇ／ｋｇ）、亜鉛フタロシア ニン（０．５〜２ｍｇ／ｋｇ）、スズエチオプルプリン（０．５〜２ｍｇ／ｋｇ ）及びテトラヒドロキシテトラフェニルポルフィリン（１〜５ｍｇ／ｋｇ）とい う投与量は本方法において使用する際は半分にされる。 照射光量もまた、フォトダイナミック治療に対して知られている方法よりも本 方法ではかなり少ない。一般に、光量は以前の方法の光量の約２分の１未満であ る。例えば以前はＢＰＤと共に１５０Joules/ｃｍ²使われていた場合で、本発明 の方法ではわずか７５Joules／ｃｍ²以下しか必要としない。以前モノアスパル チルクロリンｅ６と一緒に１０〜５０Jou1es/ｃｍ²使われていたところで、本発 明の方法では以前の光量のわずか約２分の１以下しか必要としない。 照射を行なう時間は照射源のパワーに依存して５〜３０分の間が好まれる。 本発明における投与後照射までの時間は感光剤によ って変わる。しかしながら、１つの実施態様における投与後照射までの時間間隔 はよく知られている感光剤のときに用いられていた通常臨床で使われる投与後の 時間のおよそ４分の１未満である。例えば、通常臨床で使われる投与後の時間間 隔はＢＰＤではおよそ３時間である。対照的に本発明における投与後の時間間隔 はＢＰＤではそのおよそ４分の１未満或いはおよそ４５分未満である。通常臨床 で使われる投与後の時間間隔はポルファイマーナトリウムでは２４〜４８時間で ある。対照的に、本発明における投与後の時間間隔はポルファイマーナトリウム でおよそ６時間未満であり、好ましくはおよそ４時間未満である。 本発明は、投与後照射までの時間がはるかに短く、かつ感光剤投与量と光量の 両方が半分でよいため、より安全で有害な影響がほとんどない有効なフォトダイ ナミック治療（ＰＤＴ）法である。対照的に、感光剤は最初は非選択的に全身に わたって分布し、感光剤が選択的に標的細胞に蓄積するには数時間から数日かか ると以前は考えられていた。選択的な分布は、標的組織と循環している感光剤分 子のプール（pool）との間でのかなりの量の交換に伴って、徐々に起こると考え られていた。このため投与後に光照射を数時間から数日に遅らせて行うことが必 須であると考えられた。 しかしながら、最近の薬物動態研究ではこの長く受 け入れられていた考えに疑問が投じられた。Richterらは（Biochem．Pharmacol ． (1992)43：2349-58）、投与されたＢＰＤには、等濃度の２つのレジオアイソ マー（two regioisomers in equal concentrations）があることを報告した。投 与後３時間まではプラズマ中のアイソマーの割合は肝臓で代謝されるためおよそ １：１から１：０．２８へと変化する。しかしながら、投与後３時間１５分で腫 瘍組織を取出しそこからＢＤＰを抽出すると、アイソマーは実質的に等率（１： １．１５）であることが見出された。 理論により限定することは意図しないが、本発明者は、これらのデータにより 、ＢＰＤは速やかに腫瘍中に蓄積し、そこにＢＰＤはとどまり、そのため投与後 照射までの時間をより短くすることができるという可能性が示唆されるというこ とを提唱する。 投与後、感光剤はまず標的組織にも正常組織にも等しく分布すると以前は仮定 されていた。このことは投与後の時間を短くすれば正常組織、特に皮膚に対して 広範囲のダメージを与えるだろうという仮定の基礎であった。 しかし、米国出願番号９４８，３１１の実施例３の中で開示されているように 、ＢＰＤを投与されたマウスは、光照射が投与後の最初の２時間以内に行なわれ る限りは（通常の３時間とは対照的に）、見かけ上病 的な影響なく、その毛を刈られた背中に比較的高レべルの光（およそ１５０Ｊ／ ｃｍ²）を受けることができる。これらの処理されたマウスの血液を採取して循 環しているＢＰＤのほぼ８０％がこの処理により光漂白される（photobleached ）ことが示され光が薬剤を活性化したことを示している。それゆえ、まわりの細 胞に十分な感光剤が存在していない限りは、たとえ光により活性化されても感光 剤は全身にわたる組織ダメージを作り出すことはない。 このような２つの驚くべき結果は、ＰＤＴに際して腫瘍治療において初期に、 低量の光照射を行なう（つまり、感光剤が皮膚や他の正常組織に浸透していく前 に）という試みを奨励した。マウスにおける実験的な証拠（下記に示す）より、 本発明の方法は安全であり有効であることが示される。 後述の実施例は、本発明の効果を立証し、本発明の実施の手助けとなるべきも のである。次の実施例は１つの感光剤をカバーし、本発明の方法に使用するため 、他の感光剤又は新しい化合物を選び出すための手段を与える。以下の実施例は 実施例としてのみ意図したものであり、決して本発明を限定しようと意図したも のではない。 「一般的コメント」 材料と手順についての以下の一般的コメントは、特 段の記載のない限りは実施例１及び２に関する。 ＢＰＤ−ＭＡは本願中に引用により組み込まれている米国特許番号４，９２０ ，１４３及び４，８８３，７９０に述べられているようにして合成された。ＢＰ Ｄ−ＭＡはクアドラロジック・テクノロジーズ社（QuadraLogic Technologies， Inc．）により得られ、ＤＭＳＯに溶かして（４．５ｍｇ／ｍｌ）、−７０℃で 保存された。リポソームＢＰＤ（４．９５ｍｇ／ｍｌ）は１９９２年２月５日に 提出された米国出願番号０７／８３２，５４２の中で述べられているようにして 調製された。次の処方が使われた。 成分 量（ｍｇ／ｍｌ） ＢＰＤ−ＭＡ ４．９５ ジミリストイルフォスファチジルコリン ２３．２７ エッグホスファチジルグリセロール １６．０９ ラクトース又はトレハロース １４８．５０ アスコルビルパルミテート ０．０５ ブチル化ハイドロキシトルエン ０．００５ 注射用水 十分量 リポソームＢＰＤは乾燥させ、１ｍｌの分取サンプルにして−２０℃で凍らせて 保存された。適当数のサンプルが動物に注射するため、使う直前に解凍され、水 に溶かした５％ブドウ糖で希釈された。 特段の指定のない限り、オスのＤＢＡ／２マウス（週令７〜１１週；Charles River Laboratories，St．Constant，Quebec，Canada）が本研究で用いられた。 毛を刈り除毛して適当な体表面より非常に効果的に体毛を除いた。マウスは実験 に使われる少なくとも１日 を使って、体毛を刈り取られ除毛された。注射を行なって、マウスは以下のよう に様々な長さの時間、暗所に置かれた。実験の前後で、マウスは毎日１２時間明 所、１２時間暗所という条件で動物施設に置かれた。 パワー供給源がSpectraPhysics（Seriｅs 2000，Mountain View，CA）より得 られ、５Ｗアルゴンイオンポンプド色素レーザーがCoherent社（Model 599，Pal o A1to，CA）より得られたアルゴンポンプド色素レーザーが６９０（±３）ｎｍ の波長を持つ光の円柱ビームを供給するのに使われた。アルゴンレーザーが腫瘍 を照らすように皮膚に向けられた。光照射の時間を変化させ、５０、７５、１０ ０Joules／cm²といった異なる光量を与えられるようにした。 ［実施例１］投与後の時間間隔をより短くする実験的研究 ＤＢＡ／２マウス（体重２２±１ｇ）が本研究で使 われた。まず、Richterらのプロトコール（Br．J．Cancer （1991）63；87-93） に従って、マウスは脇腹にＭ−１（マウス横紋筋腫）腫瘍細胞を注射され、その 腫瘍は直径およそ５ｍｍ位まで成長された。マウスはリポソームＢＰＤ−ＭＡを 注射され、光を照射する前に１５分間暗所に置かれた。そして、そのマウスはレ ーザー光を照射された。 図１は、マウスが１ｍｇ／ｋｇのＢＰＤ−ＭＡと１００Ｊ／ｃｍ²の光で処理 されてから４８時間後に撮られた写真を示している。このマウスは生きており、 腹部を下にして、静止した姿勢でいるところが示された。その背中はきれいに体 毛を刈り取られているようにまだ見え、大きな三日月型の焼痂（eschar）（その 耳の大きさ位のもの）があることが示された。この焼痂は腫瘍が根絶されたマウ スの脇腹に存在した。腫瘍は触診で分からなかった。 図２は、マウスが０．５ｍｇ／ｋｇのＢＰＤ−ＭＡと７５Ｊ／ｃｍ²の光で処 理されてから２４時間後に撮られた写真を示している。このマウスは生きており 腹部を下にして静止した姿勢でいるところが示された。その背中はきれいに体毛 を刈り取られているようにまだ見え、腫瘍が根絶されたマウスの脇腹に存在する 、小さく丸い炎症又は黒っぽい色をした部分を示していた。焼痂はなかった。腫 瘍は触診では分からなかった。 図２は２４時間後、腫瘍の周りの正常皮膚はわずかに炎症を起こしただけであっ たということを示している。 両方の動物とも、２週間置いた。腫瘍は大きくなっていなかったし（not grow back）、皮膚の部分は治っており、平らになっていた。 図３はＭ１腫瘍をマウスに注射して４日後に撮られた写真を示している。その 処理については前の２つの方法とは多少異なっていた。このマウスは２．０ｍｇ ／ｋｇのＢＰＤ−ＭＡを投与され、投与後３時間経ってから１００Joules／ｃｍ² の光を照射した。このマウスは生きており、腹部を下にして静止した姿勢でい るところが示された。その背中はきれいに体毛を刈り取られているようにまだ見 え、大きな三日月型の焼痂（eschar）（その耳の大きさ位のもの）を示していた 。この焼痂は腫瘍が根絶されたマウスの脇腹に存在した。腫瘍は触診して分から なかった。 図１と図３を図２と比較すると、投与後の時間が短縮され、ＢＰＤ−ＭＡ量と 光量が低いとき、皮膚のダメージが小さくなることが図を用いて立証される。 ［実施例２］投与量を変化させる研究 別のＤＢＡ／２マウスが前記のようにしてＭ−１腫 瘍細胞を注射された。腫瘍は直径およそ５ｍｍ位まで成長された。そして、マウ スは２つの異なるＢＰＤ−ＭＡ量（０．５及び１．０ｍｇ／ｋｇ）のうちの一方 の量を投与され、３つの異なる照射光量（５０、７５及び１００Ｊ／ｃｍ²）の うちの１つの量を、３つの異なる投与後の時間（１、１５及び３０分）のうちの １つの時間をおいて光を照射された。投与後照射までの１５分と３０分の間の時 間は、マウスは暗所に置かれた。 表１は各薬剤投与量と各光量及び各投与後の時間に対する各観察時期での腫瘍 のない動物の数を示している。多くの動物が最近テストを開始したものである。 ほんのわずかの動物だけが１４日目までたどれる位十分前に処理されたものであ る。それらのうち多くは腫瘍がない。 ０．５ｍｇ／ｋｇのＢＰＤ−ＭＡ量を投与され、投与後３０分して５０Ｊ／ｃｍ² の光を照射されたとき、全てのマウスは腫瘍を進行させた。０．５ｍｇ／ｋｇ のＢＰＤ−ＭＡと、投与後１５分して１００Ｊ／ｃｍ²の光で処理された５匹の マウスのうち３匹もまた７日目にはみな腫瘍はなかったが１４日までに腫瘍を進 行させた。 比較のため、図４と５が与えられる。図４は４点の異なるＢＰＤ−ＭＡ量が与 えられた（０．５，１．０，１．５及び２．０ｍｇ／ｋｇ）、同じマウス−腫瘍 モデルを含むテストの結果を要約している。投与後３時間暗所に置いてから、１ ５０Ｊ／ｃｍ²の光照射が行なわれた。現在の臨床に使われる方法と似ている同 方法のもとでは、１４日目まで５０％超が腫瘍のなかった唯一のグループは２． ０ｍｇ／ｋｇの投与を受けたマウスのグループであった。この投与量は表１の中 で示されている有効量の少なくとも２倍であった。 図５は５点の異なる光量（５０，７５，１００，１２５及び１５０Ｊ／ｃｍ² ）が、２ｍｇ／ｋｇのＢＰＤ−ＭＡ投与後３時間して光照射に使われたときにお ける、同じマウス−腫瘍モデルを含むテストの結果を要約している。現在の臨床 に使われる方法と似ている同方法のもとでは、１５０Ｊ／ｃｍ²の照射を受けて いるマウスの７５％と１２５Ｊ／ｃｍ²の照射を受け ているマウスの５０％が１４日目に腫瘍がなかった。これらの光量は表１に示さ れた最も低い有効量よりも有意に高いものであった。 本発明は直接の記載と実施例により示されてきた。上記のように実施例は実施 例であるということのみが意図されており、決してその発明を限定することを意 味しているのではない。さらに本明細書と後続の請求の範囲（クレーム）につい て検討する際、本分野で通常の技術を持っている人は、本発明のクレームされた 特徴に均等なものがあるということを認めるだろう。発明者は、クレームされた 発明の妥当な範囲内で均等なものを含めることを意図している。

【手続補正書】特許法第１８４条の８ 【提出日】１９９４年６月３日 【補正内容】 請求の範囲 １ 血管新生中の領域と正常組織の両方を含んでいる動物において、血液新生中 の領域を破壊する又は害う方法であって、 （ａ）前記動物に対し、有効量の前記感光剤を投与し、 （ｂ）前記血管新生中の領域に対し、前記感光剤により吸収される有効光量の光 を照射し、前記感光剤が前記正常組織に浸透する前に、前記血管新生中の領域に 前記光が照射される ことを特徴とする方法。 ２ 感光剤の有効投与量が前記感光剤の臨床で使われる投与量のおよそ２分の１ 未満である請求項１に記載の方法。 ３ 光の有効光量がフォトダイナミック治療における感光剤の活性化にとって臨 床で使われる光量のおよそ２分の１未満である請求項１に記載の方法。 ４ 感光剤がクロリン、バクテリオクロリン、フタロシアニン、ポルフィリン、 プルプリン、メロシアニン、フェオホルヒド、ソラレン、及びポルファシアニン からなる群より選ばれる請求項１に記載の方法。 ５ 血管新生中の領域が腫瘍、アテローム性動脈硬化症デポジット（deposits） 、いぼ（wart）、及び乾癬病変からなる群より選ばれる請求項１に記載の方法。 ６ 前記感光剤がポルフィリンである請求項４に記載 の方法。 ７ ポルフィリンがＢＰＤ又はポルファイマーナトリウムである請求項６に記載 の方法。 ８ 動物が哺乳類である請求項１に記載の方法。 ９ 哺乳類がヒトである請求項８に記載の方法。 １０ 固形腫瘍と正常組織の両方を含んでいる動物において、固形腫瘍を破壊す る又は害う方法であって、 （ａ）前記動物に対して、有効投与量のべンゾポルフィリン誘導体−モノアシッ ド（ＢＰＤ−ＭＡ）を投与し、 （ｂ）前記腫瘍に対して、前記ＢＰＤ−ＭＡにより吸収される有効光量の光を照 射し、前記ＢＰＤ−ＭＡが前記正常組織に浸透する前に、前記腫瘍に対し前記光 が照射される、 ことを特徴とする方法。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 ウォーターフィールド、エリザベス カナダ ヴィ６エル ３エー４、ブリティ ッシュ コロンビア、バンクーバー、ブレ ナム ストリート 4610 (72)発明者 レヴィ、ジュリア ジー. カナダ ヴィ６エム １ケー９、ブリティ ッシュ コロンビア、バンクーバー、ウェ スト サーティシックスス アヴェニュー 2034

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 対象（subject）に対してフォトダイナミック治療を施す方法であって、 （ａ）前記対象に感光剤に対して通常臨床に使われる投与量のおよそ２分の１未 満である有効量の感光剤を投与すること、 （ｂ）前記対象に前記感光剤とともに通常臨床に使われる光量のおよそ２分の１ 未満である有効量の光量で通常投与後にあける時間間隔のおよそ４分の１未満で ある投与後時間間隔をおいて前記光量で照射を行なうこと、 のステップを含む前記方法。 ２ 前記感光剤がクロリン、バクテリオクロリン、フタロシアニン、ポルフィリ ン、プルプリン、メロシアニン、フェオホルヒド、又はソラレンからなる群より 選ばれる請求項１に記載の方法。 ３ 前記ポルフィリンがベンゾポルフィリン誘導体モノアシッド（ＢＰＤ−ＭＡ ）ポルファイマーナトリウム又はテトラヒドロキシテトラフエニルポルフィリン である請求項２に記載の方法。 ４ 前記光量がおよそ７５Joules／ｃｍ²未満であるか又は前記時間間隔がおよ そ２時間未満である請求項１に記載の方法。 ５ 対象に対してフォトダイナミック治療を行なう方 法であって、 （ａ）前記対象におよそ０．１２５ｍｇ／ｋｇ未満である投与量でベンゾポルフ ィリン誘導体モノアシッドを投与すること、 （ｂ）前記対象に前記ベンゾポルフィリン誘導体モノアシッドとともに通常臨床 で使われる光量のおよそ２分の１未満である有効光量で、およそ３０分未満であ る投与後の時間間隔をおいて前記光量で光照射を開始すること、 のステップを含む前記方法。