JPH08253467A - 新規生理活性物質ｐｆ１０９２ａ物質、ｐｆ１０９２ｂ物質及びｐｆ１０９２ｃ物質，それらの製造法並びにそれらを有効成分とする避妊剤及び制癌剤 - Google Patents
新規生理活性物質ｐｆ１０９２ａ物質、ｐｆ１０９２ｂ物質及びｐｆ１０９２ｃ物質，それらの製造法並びにそれらを有効成分とする避妊剤及び制癌剤Info
- Publication number
- JPH08253467A JPH08253467A JP1707496A JP1707496A JPH08253467A JP H08253467 A JPH08253467 A JP H08253467A JP 1707496 A JP1707496 A JP 1707496A JP 1707496 A JP1707496 A JP 1707496A JP H08253467 A JPH08253467 A JP H08253467A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- substance
- pf1092a
- pf1092b
- pf1092c
- progesterone
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Furan Compounds (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【目的】糸状菌の培養法により新規生理活性物質PF1092
A物質、PF1092B物質及びPF1092C物質を提供する。 【構成】糸状菌ペニシリウムを通常の微生物が利用しう
る栄養物を含有する培地で培養し、得られた培養物中か
ら溶剤抽出法、シリカゲルカラムクロマト法等を用い
て、プロゲステロンのプロゲステロン受容体に対する結
合を阻害する目的物を単離した。新規生理活性物質の分
子式は、それぞれ、PF1092A物質：Ｃ17Ｈ20Ｏ5、PF1092
B物質：Ｃ17Ｈ20Ｏ5及びPF1092C物質：Ｃ15Ｈ18Ｏ4であ
る。
A物質、PF1092B物質及びPF1092C物質を提供する。 【構成】糸状菌ペニシリウムを通常の微生物が利用しう
る栄養物を含有する培地で培養し、得られた培養物中か
ら溶剤抽出法、シリカゲルカラムクロマト法等を用い
て、プロゲステロンのプロゲステロン受容体に対する結
合を阻害する目的物を単離した。新規生理活性物質の分
子式は、それぞれ、PF1092A物質：Ｃ17Ｈ20Ｏ5、PF1092
B物質：Ｃ17Ｈ20Ｏ5及びPF1092C物質：Ｃ15Ｈ18Ｏ4であ
る。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、避妊剤あるいはある種
の癌に対する治療剤として有用な新規生理活性物質PF10
92A物質、PF1092B物質及びPF1092C物質又はそれらの
塩、並びにその製造法に関する。
の癌に対する治療剤として有用な新規生理活性物質PF10
92A物質、PF1092B物質及びPF1092C物質又はそれらの
塩、並びにその製造法に関する。
【０００２】
【従来の技術】プロゲステロンは性ホルモンの一種であ
り、内分泌器官で生合成される有効なゲスターゲンであ
る。コレステロールから生合成される各種のステロイド
ホルモンの中間体であり、おもな分泌源は黄体と胎盤で
ある。子宮や乳腺においては、エストロゲンの前処理に
よりプロゲステロン受容体が誘導され、プロゲステロン
は、排卵後現れる黄体から分泌され、子宮での受精卵着
床を可能にする。この作用からプロゲステロン-プロゲ
ステロン受容体結合のアンタゴニスト阻害物質は避妊剤
として使用されている。
り、内分泌器官で生合成される有効なゲスターゲンであ
る。コレステロールから生合成される各種のステロイド
ホルモンの中間体であり、おもな分泌源は黄体と胎盤で
ある。子宮や乳腺においては、エストロゲンの前処理に
よりプロゲステロン受容体が誘導され、プロゲステロン
は、排卵後現れる黄体から分泌され、子宮での受精卵着
床を可能にする。この作用からプロゲステロン-プロゲ
ステロン受容体結合のアンタゴニスト阻害物質は避妊剤
として使用されている。
【０００３】一方、乳ガンの治療において、卵巣摘出
術、副腎摘出術等の外科的内分泌療法が１９世紀終わり
頃より盛んに行われてきた。その後、エストロゲン、プ
ロゲステロン等の性ホルモンの構造、生理的機能及びそ
れらのレセプターの研究の進歩とともに、エストロゲン
拮抗剤であるタモキシフェン（Wiseman氏、タモキシフ
ェン（Tamoxifen）,ジョン・ウィレイ・アンド・サンズ
（John Wiley & Sons）出版, England 1994年）の発見
により、乳ガンの内分泌療法は大きく変貌し、外科的内
分泌療法から内科的内分泌療法へと移行していった。さ
らに、合成ゲスターゲンであるMPA(Medroxyprogesteron
e acetate)（飯野祐一等、乳癌の臨床、第２号、第１
巻、５〜１９７頁、１９８６年）が使用されるようにな
り、 LH-RH(Luteinizing hormone releasing hormone)
アゴニストやアロマターゼ阻害物質など作用機作の異な
る薬剤が開発され始めており、乳ガンに対する内分泌療
法は新たな展開を示しつつある。
術、副腎摘出術等の外科的内分泌療法が１９世紀終わり
頃より盛んに行われてきた。その後、エストロゲン、プ
ロゲステロン等の性ホルモンの構造、生理的機能及びそ
れらのレセプターの研究の進歩とともに、エストロゲン
拮抗剤であるタモキシフェン（Wiseman氏、タモキシフ
ェン（Tamoxifen）,ジョン・ウィレイ・アンド・サンズ
（John Wiley & Sons）出版, England 1994年）の発見
により、乳ガンの内分泌療法は大きく変貌し、外科的内
分泌療法から内科的内分泌療法へと移行していった。さ
らに、合成ゲスターゲンであるMPA(Medroxyprogesteron
e acetate)（飯野祐一等、乳癌の臨床、第２号、第１
巻、５〜１９７頁、１９８６年）が使用されるようにな
り、 LH-RH(Luteinizing hormone releasing hormone)
アゴニストやアロマターゼ阻害物質など作用機作の異な
る薬剤が開発され始めており、乳ガンに対する内分泌療
法は新たな展開を示しつつある。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】経口避妊薬あるいは乳
ガンの治療薬を目的とした、プロゲステロン-プロゲス
テロン受容体の結合阻害物質としては、RU38486［キャ
ンサー・リサーチ(CancerRes.)、４９巻、2851-2856
頁、1989年］、ZK98299, ZK112993［ジャーナル・オブ
・ステロイド・バイオケミストリー・アンド・モレキュ
ラ・バイオロジー(J.Steroid Biochem. Molec. Bio
l.)、４１巻、339-348頁、1992年］が開発されつつあ
る。しかし、副作用あるいは生産コスト等の問題があ
り、また、その効果は充分なものとは言えず、新たなプ
ロゲステロン-プロゲステロン受容体の結合阻害物質の
発見は、薬剤耐性乳ガンの増加とともに期待されてい
る。
ガンの治療薬を目的とした、プロゲステロン-プロゲス
テロン受容体の結合阻害物質としては、RU38486［キャ
ンサー・リサーチ(CancerRes.)、４９巻、2851-2856
頁、1989年］、ZK98299, ZK112993［ジャーナル・オブ
・ステロイド・バイオケミストリー・アンド・モレキュ
ラ・バイオロジー(J.Steroid Biochem. Molec. Bio
l.)、４１巻、339-348頁、1992年］が開発されつつあ
る。しかし、副作用あるいは生産コスト等の問題があ
り、また、その効果は充分なものとは言えず、新たなプ
ロゲステロン-プロゲステロン受容体の結合阻害物質の
発見は、薬剤耐性乳ガンの増加とともに期待されてい
る。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上述の期
待にこたえるべくプロゲステロンのプロゲステロン受容
体に対する結合を阻害する物質の探索を続けていたとこ
ろ、ペニシリウム属に属する１菌株の培養物中にプロゲ
ステロンのプロゲステロン受容体に対する結合を阻害す
る物質が生産されていることを見いだし、有効物質PF10
92A物質、PF1092B物質及びPF1092C物質を単離し、本発
明を完成させた。さらに本発明の目的は、新規生理活性
物質PF1092A物質、PF1092B物質及びPF1092C物質又はそ
れらの塩、並びにその製造法を提供することにある。
待にこたえるべくプロゲステロンのプロゲステロン受容
体に対する結合を阻害する物質の探索を続けていたとこ
ろ、ペニシリウム属に属する１菌株の培養物中にプロゲ
ステロンのプロゲステロン受容体に対する結合を阻害す
る物質が生産されていることを見いだし、有効物質PF10
92A物質、PF1092B物質及びPF1092C物質を単離し、本発
明を完成させた。さらに本発明の目的は、新規生理活性
物質PF1092A物質、PF1092B物質及びPF1092C物質又はそ
れらの塩、並びにその製造法を提供することにある。
【０００６】第１の本発明の要旨とするところは、下記
の物理化学的性状を有するPF1092A物質を提供するもの
であり、 （１） 色及び形状：無色針状結晶 （２） 分子式：Ｃ17Ｈ20Ｏ5 （３） マススペクトル (FD-MS)： m/z 304 (M)+ （４） 比旋光度：[α]D 24= -10.86°(c 0.5, CHCl3) （５） 紫外部吸収スペクトル λmax : 322(17,500) nm(ε)（メタノール中） （６） 赤外部吸収スペクトル KBr錠剤で測定したスペクトルを図１に示す。 （７） 1ＨＮＭＲスペクトル：重クロロホルム溶液中
で測定したスペクトルは図２に示す通りである。 δ(ppm):5.97(1H), 5.66(1H), 5.28(1H), 4.53(1H), 2.
83(1H),2.19(3H), 2.18(1H), 2.05(OH), 1.97(1H), 1.9
1(3H),1.15(3H), 1.10(3H) （８） 13ＣＮＭＲスペクトル：重クロロホルム溶液中
で測定したスペクトルは図３に示す通りである。 δ(ppm):171.8(s), 170.9(s), 149.3(s), 146.3(s), 14
0.4(s),128.7(d), 122.3(s), 107.7(d), 73.6(d), 68.2
(d), 40.2(d),37.8(s), 35.6(t), 21.0(q), 20.9(q), 1
2.7(q), 8.6(q) （９） 溶解性：クロロホルム、アセトン、酢酸エチ
ル、メタノール、ジメチルスルホキシドに可溶で、水及
びヘキサンに不溶である。 （10） 塩基性、酸性、中性の区別：中性物質 （11） シリカゲル薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）
によるRf値：ヘキサン-酢酸エチル（１：１）の展開溶
媒で0.25を示す。
の物理化学的性状を有するPF1092A物質を提供するもの
であり、 （１） 色及び形状：無色針状結晶 （２） 分子式：Ｃ17Ｈ20Ｏ5 （３） マススペクトル (FD-MS)： m/z 304 (M)+ （４） 比旋光度：[α]D 24= -10.86°(c 0.5, CHCl3) （５） 紫外部吸収スペクトル λmax : 322(17,500) nm(ε)（メタノール中） （６） 赤外部吸収スペクトル KBr錠剤で測定したスペクトルを図１に示す。 （７） 1ＨＮＭＲスペクトル：重クロロホルム溶液中
で測定したスペクトルは図２に示す通りである。 δ(ppm):5.97(1H), 5.66(1H), 5.28(1H), 4.53(1H), 2.
83(1H),2.19(3H), 2.18(1H), 2.05(OH), 1.97(1H), 1.9
1(3H),1.15(3H), 1.10(3H) （８） 13ＣＮＭＲスペクトル：重クロロホルム溶液中
で測定したスペクトルは図３に示す通りである。 δ(ppm):171.8(s), 170.9(s), 149.3(s), 146.3(s), 14
0.4(s),128.7(d), 122.3(s), 107.7(d), 73.6(d), 68.2
(d), 40.2(d),37.8(s), 35.6(t), 21.0(q), 20.9(q), 1
2.7(q), 8.6(q) （９） 溶解性：クロロホルム、アセトン、酢酸エチ
ル、メタノール、ジメチルスルホキシドに可溶で、水及
びヘキサンに不溶である。 （10） 塩基性、酸性、中性の区別：中性物質 （11） シリカゲル薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）
によるRf値：ヘキサン-酢酸エチル（１：１）の展開溶
媒で0.25を示す。
【０００７】第２の本発明の要旨とするところは、下記
の物理化学的性状を有するPF1092B物質を提供するもの
であり、 （１） 色及び形状：無色針状結晶 （２） 分子式：Ｃ17Ｈ20Ｏ5 （３） マススペクトル (FD-MS)： m/z 304 (M)+ （４） 比旋光度：[α]D 24= -110.22°(c 0.5, CHCl3) （５） 紫外部吸収スペクトル λmax : 320(15,100) nm(ε)（メタノール中） （６） 赤外部吸収スペクトル KBr錠剤で測定したスペクトルを図４に示す。 （７） 1ＨＮＭＲスペクトル：重クロロホルム溶液中
で測定したスペクトルは図５に示す通りである。 δ(ppm):5.95(1H), 5.57(1H), 5.46(1H), 4.05(1H), 2.
84(1H),2.18(1H), 2.15(3H), 1.97(OH), 1.91(3H), 1.8
3(1H),1.23(3H), 1.22(3H) （８） 13ＣＮＭＲスペクトル：重クロロホルム溶液中
で測定したスペクトルは図６に示す通りである。 δ(ppm):170.9(s), 170.2(s), 149.5(s), 146.7(s), 14
2.4(s),124.5(d), 122.4(s), 107.4(d), 72.5(d), 70.5
(d), 41.0(d),38.1(s), 35.8(t), 21.4(q), 21.2(q), 1
2.8(q), 8.6(q) （９） 溶解性：クロロホルム、アセトン、酢酸エチ
ル、メタノール、ジメチルスルホキシドに可溶で、水及
びヘキサンに不溶である。 （10） 塩基性、酸性、中性の区別：中性物質 （11） シリカゲル薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）
によるRf値：ヘキサン-酢酸エチル（１：１）の展開溶
媒で0.42を示す。
の物理化学的性状を有するPF1092B物質を提供するもの
であり、 （１） 色及び形状：無色針状結晶 （２） 分子式：Ｃ17Ｈ20Ｏ5 （３） マススペクトル (FD-MS)： m/z 304 (M)+ （４） 比旋光度：[α]D 24= -110.22°(c 0.5, CHCl3) （５） 紫外部吸収スペクトル λmax : 320(15,100) nm(ε)（メタノール中） （６） 赤外部吸収スペクトル KBr錠剤で測定したスペクトルを図４に示す。 （７） 1ＨＮＭＲスペクトル：重クロロホルム溶液中
で測定したスペクトルは図５に示す通りである。 δ(ppm):5.95(1H), 5.57(1H), 5.46(1H), 4.05(1H), 2.
84(1H),2.18(1H), 2.15(3H), 1.97(OH), 1.91(3H), 1.8
3(1H),1.23(3H), 1.22(3H) （８） 13ＣＮＭＲスペクトル：重クロロホルム溶液中
で測定したスペクトルは図６に示す通りである。 δ(ppm):170.9(s), 170.2(s), 149.5(s), 146.7(s), 14
2.4(s),124.5(d), 122.4(s), 107.4(d), 72.5(d), 70.5
(d), 41.0(d),38.1(s), 35.8(t), 21.4(q), 21.2(q), 1
2.8(q), 8.6(q) （９） 溶解性：クロロホルム、アセトン、酢酸エチ
ル、メタノール、ジメチルスルホキシドに可溶で、水及
びヘキサンに不溶である。 （10） 塩基性、酸性、中性の区別：中性物質 （11） シリカゲル薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）
によるRf値：ヘキサン-酢酸エチル（１：１）の展開溶
媒で0.42を示す。
【０００８】第３の本発明の要旨とするところは、下記
の物理化学的性状を有するPF1092C物質を提供するもの
であり、 （１） 色及び形状：無色針状結晶 （２） 分子式：Ｃ15Ｈ18Ｏ4 （３） マススペクトル (FD-MS)： m/z 262 (M)+ （４） 比旋光度：[α]D 24= -96.36°(c 0.5, CHCl3) （５） 紫外部吸収スペクトル λmax : 324(14,900) nm(ε)（メタノール中） （６） 赤外部吸収スペクトル KBr錠剤で測定したスペクトルを図７に示す。 （７） 1ＨＮＭＲスペクトル：重クロロホルム溶液中
で測定したスペクトルは図８に示す通りである。 δ(ppm):5.96(1H), 5.64(1H), 4.37(1H), 3.93(1H), 2.
83(1H),2.22(OH), 2.20(OH), 2.17(1H), 1.91(3H), 1.2
4(3H),1.20(3H) （８） 13ＣＮＭＲスペクトル：重クロロホルム溶液中
で測定したスペクトルは図９に示す通りである。 δ(ppm):171.0(s), 149.3(s), 146.7(s), 141.0(s), 12
9.1(d),122.1(s), 107.8(d), 72.4(d), 69.0(d), 40.3
(d), 37.9(s),35.8(t), 21.5(q), 13.0(q), 8.5(q) （９） 溶解性：クロロホルム、アセトン、酢酸エチ
ル、メタノール、ジメチルスルホキシドに可溶で、水及
びヘキサンに不溶である。 （10） 塩基性、酸性、中性の区別：中性物質 （11） シリカゲル薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）
によるRf値：ヘキサン-酢酸エチル（１：１）の展開溶
媒で0.20を示す。
の物理化学的性状を有するPF1092C物質を提供するもの
であり、 （１） 色及び形状：無色針状結晶 （２） 分子式：Ｃ15Ｈ18Ｏ4 （３） マススペクトル (FD-MS)： m/z 262 (M)+ （４） 比旋光度：[α]D 24= -96.36°(c 0.5, CHCl3) （５） 紫外部吸収スペクトル λmax : 324(14,900) nm(ε)（メタノール中） （６） 赤外部吸収スペクトル KBr錠剤で測定したスペクトルを図７に示す。 （７） 1ＨＮＭＲスペクトル：重クロロホルム溶液中
で測定したスペクトルは図８に示す通りである。 δ(ppm):5.96(1H), 5.64(1H), 4.37(1H), 3.93(1H), 2.
83(1H),2.22(OH), 2.20(OH), 2.17(1H), 1.91(3H), 1.2
4(3H),1.20(3H) （８） 13ＣＮＭＲスペクトル：重クロロホルム溶液中
で測定したスペクトルは図９に示す通りである。 δ(ppm):171.0(s), 149.3(s), 146.7(s), 141.0(s), 12
9.1(d),122.1(s), 107.8(d), 72.4(d), 69.0(d), 40.3
(d), 37.9(s),35.8(t), 21.5(q), 13.0(q), 8.5(q) （９） 溶解性：クロロホルム、アセトン、酢酸エチ
ル、メタノール、ジメチルスルホキシドに可溶で、水及
びヘキサンに不溶である。 （10） 塩基性、酸性、中性の区別：中性物質 （11） シリカゲル薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）
によるRf値：ヘキサン-酢酸エチル（１：１）の展開溶
媒で0.20を示す。
【０００９】さらに第４の発明は、糸状菌に属する生理
活性物質PF1092物質生産菌を培養し、その培養物から生
理活性物質PF1092物質を採取する生理活性物質PF1092物
質の製造法にある。本発明に使用されるPF1092株は、19
91年に採集された土壌より分離された糸状菌である。
活性物質PF1092物質生産菌を培養し、その培養物から生
理活性物質PF1092物質を採取する生理活性物質PF1092物
質の製造法にある。本発明に使用されるPF1092株は、19
91年に採集された土壌より分離された糸状菌である。
【００１０】１．PF1092株の菌学的性状 (1)培養の特徴 ツァペック酵母エキス寒天培地上では、２５℃、７日間
の培養で、直径30〜40mmのコロニーとなる。白色、なわ
状で、分生子をまばらに形成する。裏面はうす茶色とな
る。麦芽エキス寒天培地上で生育良く、２５℃、７日間
の培養で、直径４０〜４５mmに達する。白色、なわ状
で、分生子をわずかに形成し、うす茶色の抽出液を生成
する。裏面は淡黄土色となる。３７℃の培養では２５℃
の培養よりどの培地においても生育が良く、分生子の形
成も良好であった。 (2)形態学的特徴 分生子柄は気菌糸よりほぼ垂直に直立し、粗面、大きさ
30〜70 x 2.5〜3.5μmである。ペニシリは単輪生とな
る。フィアライドは、針状、滑面からわずかに阻面、分
生子柄より4〜8本形成し、大きさは 8〜10 x 2.5〜3.0
μmである。分生子は球形〜亜球形、両端がややくぼみ
偏平状となり、滑面、大きさは 2.0〜2.5μmである。
以上の菌学的性状より、本菌株を、Penicillium属と同
定した。尚、本菌株は工業技術院生命工学工業技術研究
所に FERM BP-5350として寄託されている。PF1092株
は、他のカビに見られるようにその性状が変化し易い。
例えば、PF1092株の、又はこの株に由来する突然変異株
（自然発生又は誘発性）、形質接合体又は遺伝子組換え
体であっても、PF1092物質を生産するものは全て本発明
に使用できる。
の培養で、直径30〜40mmのコロニーとなる。白色、なわ
状で、分生子をまばらに形成する。裏面はうす茶色とな
る。麦芽エキス寒天培地上で生育良く、２５℃、７日間
の培養で、直径４０〜４５mmに達する。白色、なわ状
で、分生子をわずかに形成し、うす茶色の抽出液を生成
する。裏面は淡黄土色となる。３７℃の培養では２５℃
の培養よりどの培地においても生育が良く、分生子の形
成も良好であった。 (2)形態学的特徴 分生子柄は気菌糸よりほぼ垂直に直立し、粗面、大きさ
30〜70 x 2.5〜3.5μmである。ペニシリは単輪生とな
る。フィアライドは、針状、滑面からわずかに阻面、分
生子柄より4〜8本形成し、大きさは 8〜10 x 2.5〜3.0
μmである。分生子は球形〜亜球形、両端がややくぼみ
偏平状となり、滑面、大きさは 2.0〜2.5μmである。
以上の菌学的性状より、本菌株を、Penicillium属と同
定した。尚、本菌株は工業技術院生命工学工業技術研究
所に FERM BP-5350として寄託されている。PF1092株
は、他のカビに見られるようにその性状が変化し易い。
例えば、PF1092株の、又はこの株に由来する突然変異株
（自然発生又は誘発性）、形質接合体又は遺伝子組換え
体であっても、PF1092物質を生産するものは全て本発明
に使用できる。
【００１１】２．PF1092物質生産菌の培養法 PF1092物質生産菌を通常の微生物が利用しうる栄養物を
含有する培地で培養する。栄養源としては、従来カビの
培養に利用されている公知のものが使用できる。例え
ば、炭素源としては、グルコース、シュクロース、水
飴、デキストリン、澱粉、グリセロール、糖蜜、動・植
物油等を使用しうる。また、窒素源としては、大豆粉、
小麦胚芽、コーン・スティープ・リカー、綿実粕、肉エ
キス、ペプトン、酵母エキス、硫酸アンモニウム、硝酸
ナトリウム、尿素等を使用しうる。その他必要に応じ、
ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、コ
バルト、塩素、燐酸、硫酸及びその他のイオンを生成す
ることができる無機塩類を添加することは有効である。
また、菌の発育を助け、PF1092物質の生産を促進するよ
うな有機及び無機物を適当に添加することができる。培
養法としては、好気的条件での培養法、特に米培地での
静置培養及び深部培養法が適している。培養に適当な温
度は15〜40℃であるが、多くの場合26〜37℃付近で培養
する。PF1092物質の生産は培地や培養条件により異なる
が、米培地での静置培養の場合通常10〜20日間で、また
振盪培養、タンク培養のいずれにおいても通常2〜10日
間でその蓄積が最高に達する。培養中のPF1092物質の蓄
積量が最高になった時に培養を停止し、培養液から目的
物質を単離精製する。
含有する培地で培養する。栄養源としては、従来カビの
培養に利用されている公知のものが使用できる。例え
ば、炭素源としては、グルコース、シュクロース、水
飴、デキストリン、澱粉、グリセロール、糖蜜、動・植
物油等を使用しうる。また、窒素源としては、大豆粉、
小麦胚芽、コーン・スティープ・リカー、綿実粕、肉エ
キス、ペプトン、酵母エキス、硫酸アンモニウム、硝酸
ナトリウム、尿素等を使用しうる。その他必要に応じ、
ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、コ
バルト、塩素、燐酸、硫酸及びその他のイオンを生成す
ることができる無機塩類を添加することは有効である。
また、菌の発育を助け、PF1092物質の生産を促進するよ
うな有機及び無機物を適当に添加することができる。培
養法としては、好気的条件での培養法、特に米培地での
静置培養及び深部培養法が適している。培養に適当な温
度は15〜40℃であるが、多くの場合26〜37℃付近で培養
する。PF1092物質の生産は培地や培養条件により異なる
が、米培地での静置培養の場合通常10〜20日間で、また
振盪培養、タンク培養のいずれにおいても通常2〜10日
間でその蓄積が最高に達する。培養中のPF1092物質の蓄
積量が最高になった時に培養を停止し、培養液から目的
物質を単離精製する。
【００１２】３．PF1092物質の精製法 本発明によって得られるPF1092物質の培養物からの採取
に当たっては、その性状を利用した通常の分離手段、例
えば、溶剤抽出法、イオン交換樹脂法、吸着又は分配カ
ラムクロマト法、ゲルろ過法、透析法、沈澱法等を単独
で又は適宜組み合わせて抽出精製することができる。例
えば、PF1092物質は、米培地での培養後、アセトン−水
又は酢酸エチル等で抽出される。PF1092物質を更に精製
するには、シリカゲル（ワコーゲル C-200、和光純薬工
業社製等）、アルミナ等の吸着剤やセファデックス LH-
20（ファルマシア社製）、トヨパールHW-40SF（株式会
社東ソー社製）等を用いるクロマトグラフィーを行うと
よい。以上のような方法により、あるいはこれらを適宜
組み合わせることにより、高純度のPF1092A物質, B物質
及びC物質が得られる。得られたPF1092A物質, B物質及
びC物質の物理化学的性状と化学構造は次の通りであ
る。
に当たっては、その性状を利用した通常の分離手段、例
えば、溶剤抽出法、イオン交換樹脂法、吸着又は分配カ
ラムクロマト法、ゲルろ過法、透析法、沈澱法等を単独
で又は適宜組み合わせて抽出精製することができる。例
えば、PF1092物質は、米培地での培養後、アセトン−水
又は酢酸エチル等で抽出される。PF1092物質を更に精製
するには、シリカゲル（ワコーゲル C-200、和光純薬工
業社製等）、アルミナ等の吸着剤やセファデックス LH-
20（ファルマシア社製）、トヨパールHW-40SF（株式会
社東ソー社製）等を用いるクロマトグラフィーを行うと
よい。以上のような方法により、あるいはこれらを適宜
組み合わせることにより、高純度のPF1092A物質, B物質
及びC物質が得られる。得られたPF1092A物質, B物質及
びC物質の物理化学的性状と化学構造は次の通りであ
る。
【００１３】１．PF1092A物質の物理化学的性状と化学
構造 （１） 色及び形状：無色針状結晶 （２） 分子式：Ｃ17Ｈ20Ｏ5 （３） マススペクトル (FD-MS)： m/z 304 (M)+ （４） 比旋光度：[α]D 24= -10.86°(c 0.5, CHCl3) （５） 紫外部吸収スペクトル λmax : 322(17,500) nm(ε)（メタノール中） （６） 赤外部吸収スペクトル KBr錠剤で測定したスペクトルを図１に示す。 （７） 1ＨＮＭＲスペクトル：重クロロホルム溶液中
で測定したスペクトルは図２に示す通りである。 δ(ppm):5.97(1H), 5.66(1H), 5.28(1H), 4.53(1H), 2.
83(1H),2.19(3H), 2.18(1H), 2.05(OH), 1.97(1H), 1.9
1(3H),1.15(3H), 1.10(3H) （８） 13ＣＮＭＲスペクトル：重クロロホルム溶液中
で測定したスペクトルは図３に示す通りである。 δ(ppm):171.8(s), 170.9(s), 149.3(s), 146.3(s), 14
0.4(s),128.7(d), 122.3(s), 107.7(d), 73.6(d), 68.2
(d), 40.2(d),37.8(s), 35.6(t), 21.0(q), 20.9(q), 1
2.7(q), 8.6(q) （９） 溶解性：クロロホルム、アセトン、酢酸エチ
ル、メタノール、ジメチルスルホキシドに可溶で、水及
びヘキサンに不溶である。 （10） 塩基性、酸性、中性の区別：中性物質 （11） シリカゲル薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）
によるRf値：ヘキサン-酢酸エチル（１：１）の展開溶
媒で0.25を示す。
構造 （１） 色及び形状：無色針状結晶 （２） 分子式：Ｃ17Ｈ20Ｏ5 （３） マススペクトル (FD-MS)： m/z 304 (M)+ （４） 比旋光度：[α]D 24= -10.86°(c 0.5, CHCl3) （５） 紫外部吸収スペクトル λmax : 322(17,500) nm(ε)（メタノール中） （６） 赤外部吸収スペクトル KBr錠剤で測定したスペクトルを図１に示す。 （７） 1ＨＮＭＲスペクトル：重クロロホルム溶液中
で測定したスペクトルは図２に示す通りである。 δ(ppm):5.97(1H), 5.66(1H), 5.28(1H), 4.53(1H), 2.
83(1H),2.19(3H), 2.18(1H), 2.05(OH), 1.97(1H), 1.9
1(3H),1.15(3H), 1.10(3H) （８） 13ＣＮＭＲスペクトル：重クロロホルム溶液中
で測定したスペクトルは図３に示す通りである。 δ(ppm):171.8(s), 170.9(s), 149.3(s), 146.3(s), 14
0.4(s),128.7(d), 122.3(s), 107.7(d), 73.6(d), 68.2
(d), 40.2(d),37.8(s), 35.6(t), 21.0(q), 20.9(q), 1
2.7(q), 8.6(q) （９） 溶解性：クロロホルム、アセトン、酢酸エチ
ル、メタノール、ジメチルスルホキシドに可溶で、水及
びヘキサンに不溶である。 （10） 塩基性、酸性、中性の区別：中性物質 （11） シリカゲル薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）
によるRf値：ヘキサン-酢酸エチル（１：１）の展開溶
媒で0.25を示す。
【００１４】以上の物理化学的性状とＸ線結晶解析によ
り下記の化学構造と決定した。
り下記の化学構造と決定した。
【化４】
【００１５】２．PF1092B物質の物理化学的性状と化学
構造 （１） 色及び形状：無色針状結晶 （２） 分子式：Ｃ17Ｈ20Ｏ5 （３） マススペクトル (FD-MS)： m/z 304 (M)+ （４） 比旋光度：[α]D 24= -110.22°(c 0.5, CHCl3) （５） 紫外部吸収スペクトル λmax : 320(15,100) nm(ε)（メタノール中） （６） 赤外部吸収スペクトル KBr錠剤で測定したスペクトルを図４に示す。 （７） 1ＨＮＭＲスペクトル：重クロロホルム溶液中
で測定したスペクトルは図５に示す通りである。 δ(ppm):5.95(1H), 5.57(1H), 5.46(1H), 4.05(1H), 2.
84(1H),2.18(1H), 2.15(3H), 1.97(OH), 1.91(3H), 1.8
3(1H),1.23(3H), 1.22(3H) （８） 13ＣＮＭＲスペクトル：重クロロホルム溶液中
で測定したスペクトルは図６に示す通りである。 δ(ppm):170.9(s), 170.2(s), 149.5(s), 146.7(s), 14
2.4(s),124.5(d), 122.4(s), 107.4(d), 72.5(d), 70.5
(d), 41.0(d),38.1(s), 35.8(t), 21.4(q), 21.2(q), 1
2.8(q), 8.6(q) （９） 溶解性：クロロホルム、アセトン、酢酸エチ
ル、メタノール、ジメチルスルホキシドに可溶で、水及
びヘキサンに不溶である。 （10） 塩基性、酸性、中性の区別：中性物質 （11） シリカゲル薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）
によるRf値：ヘキサン-酢酸エチル（１：１）の展開溶
媒で0.42を示す。
構造 （１） 色及び形状：無色針状結晶 （２） 分子式：Ｃ17Ｈ20Ｏ5 （３） マススペクトル (FD-MS)： m/z 304 (M)+ （４） 比旋光度：[α]D 24= -110.22°(c 0.5, CHCl3) （５） 紫外部吸収スペクトル λmax : 320(15,100) nm(ε)（メタノール中） （６） 赤外部吸収スペクトル KBr錠剤で測定したスペクトルを図４に示す。 （７） 1ＨＮＭＲスペクトル：重クロロホルム溶液中
で測定したスペクトルは図５に示す通りである。 δ(ppm):5.95(1H), 5.57(1H), 5.46(1H), 4.05(1H), 2.
84(1H),2.18(1H), 2.15(3H), 1.97(OH), 1.91(3H), 1.8
3(1H),1.23(3H), 1.22(3H) （８） 13ＣＮＭＲスペクトル：重クロロホルム溶液中
で測定したスペクトルは図６に示す通りである。 δ(ppm):170.9(s), 170.2(s), 149.5(s), 146.7(s), 14
2.4(s),124.5(d), 122.4(s), 107.4(d), 72.5(d), 70.5
(d), 41.0(d),38.1(s), 35.8(t), 21.4(q), 21.2(q), 1
2.8(q), 8.6(q) （９） 溶解性：クロロホルム、アセトン、酢酸エチ
ル、メタノール、ジメチルスルホキシドに可溶で、水及
びヘキサンに不溶である。 （10） 塩基性、酸性、中性の区別：中性物質 （11） シリカゲル薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）
によるRf値：ヘキサン-酢酸エチル（１：１）の展開溶
媒で0.42を示す。
【００１６】以上の物理化学的性状とＸ線結晶解析によ
り下記の化学構造と決定した。
り下記の化学構造と決定した。
【化５】
【００１７】３．PF1092C物質の物理化学的性状と化学
構造 （１） 色及び形状：無色針状結晶 （２） 分子式：Ｃ15Ｈ18Ｏ4 （３） マススペクトル (FD-MS)： m/z 262 (M)+ （４） 比旋光度：[α]D 24= -96.36°(c 0.5, CHCl3) （５） 紫外部吸収スペクトル λmax : 324(14,900) nm(ε)（メタノール中） （６） 赤外部吸収スペクトル KBr錠剤で測定したスペクトルを図７に示す。 （７） 1ＨＮＭＲスペクトル：重クロロホルム溶液中
で測定したスペクトルは図８に示す通りである。 δ(ppm):5.96(1H), 5.64(1H), 4.37(1H), 3.93(1H), 2.
83(1H),2.22(OH), 2.20(OH), 2.17(1H), 1.91(3H), 1.2
4(3H),1.20(3H) （８） 13ＣＮＭＲスペクトル：重クロロホルム溶液中
で測定したスペクトルは図９に示す通りである。 δ(ppm):171.0(s), 149.3(s), 146.7(s), 141.0(s), 12
9.1(d),122.1(s), 107.8(d), 72.4(d), 69.0(d), 40.3
(d), 37.9(s),35.8(t), 21.5(q), 13.0(q), 8.5(q) （９） 溶解性：クロロホルム、アセトン、酢酸エチ
ル、メタノール、ジメチルスルホキシドに可溶で、水及
びヘキサンに不溶である。 （10） 塩基性、酸性、中性の区別：中性物質 （11） シリカゲル薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）
によるRf値：ヘキサン-酢酸エチル（１：１）の展開溶
媒で0.20を示す。
構造 （１） 色及び形状：無色針状結晶 （２） 分子式：Ｃ15Ｈ18Ｏ4 （３） マススペクトル (FD-MS)： m/z 262 (M)+ （４） 比旋光度：[α]D 24= -96.36°(c 0.5, CHCl3) （５） 紫外部吸収スペクトル λmax : 324(14,900) nm(ε)（メタノール中） （６） 赤外部吸収スペクトル KBr錠剤で測定したスペクトルを図７に示す。 （７） 1ＨＮＭＲスペクトル：重クロロホルム溶液中
で測定したスペクトルは図８に示す通りである。 δ(ppm):5.96(1H), 5.64(1H), 4.37(1H), 3.93(1H), 2.
83(1H),2.22(OH), 2.20(OH), 2.17(1H), 1.91(3H), 1.2
4(3H),1.20(3H) （８） 13ＣＮＭＲスペクトル：重クロロホルム溶液中
で測定したスペクトルは図９に示す通りである。 δ(ppm):171.0(s), 149.3(s), 146.7(s), 141.0(s), 12
9.1(d),122.1(s), 107.8(d), 72.4(d), 69.0(d), 40.3
(d), 37.9(s),35.8(t), 21.5(q), 13.0(q), 8.5(q) （９） 溶解性：クロロホルム、アセトン、酢酸エチ
ル、メタノール、ジメチルスルホキシドに可溶で、水及
びヘキサンに不溶である。 （10） 塩基性、酸性、中性の区別：中性物質 （11） シリカゲル薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）
によるRf値：ヘキサン-酢酸エチル（１：１）の展開溶
媒で0.20を示す。
【００１８】以上の物理化学的性状とＸ線結晶解析によ
り下記の化学構造と決定した。
り下記の化学構造と決定した。
【化６】
【００１９】PF1092物質の種々の塩としては、金属塩、
特にナトリウム塩の如きアルカリ金属塩、カルシウム塩
の如きアルカリ土類金属塩があり、また製薬学的に許容
できる無機酸あるいは有機酸との酸付加塩等がある。
特にナトリウム塩の如きアルカリ金属塩、カルシウム塩
の如きアルカリ土類金属塩があり、また製薬学的に許容
できる無機酸あるいは有機酸との酸付加塩等がある。
【００２０】本発明のPF1092A物質, PF1092B物質及びPF
1092C物質又はそれらの塩は後記の如く、避妊剤あるい
は制癌剤として期待されるものである。医薬品として使
用する場合の製剤化及び投与方法は従来公知の種々の方
法が適用できる。本発明に係わる薬剤組成物は、PF1092
A物質, PF1092B物質及びPF1092C物質又はそれらの塩を
有効成分としてこれに常用される無機又は有機の担体を
加えて、固体、半固体又は液体の形で、経口投与剤のほ
か、外用剤等の非経口投与剤に製剤化する。
1092C物質又はそれらの塩は後記の如く、避妊剤あるい
は制癌剤として期待されるものである。医薬品として使
用する場合の製剤化及び投与方法は従来公知の種々の方
法が適用できる。本発明に係わる薬剤組成物は、PF1092
A物質, PF1092B物質及びPF1092C物質又はそれらの塩を
有効成分としてこれに常用される無機又は有機の担体を
加えて、固体、半固体又は液体の形で、経口投与剤のほ
か、外用剤等の非経口投与剤に製剤化する。
【００２１】経口投与のための製剤としては、錠剤、丸
剤、顆粒剤、軟・硬カプセル剤、散剤、細粒剤、粉剤、
乳濁剤、懸濁剤、シロップ剤、ペレット剤、エレキシル
剤等が挙げられる。非経口投与のための製剤としては、
注射剤、点滴剤、輸液、軟膏、ローション、トニック、
スプレー、懸濁剤、油剤、乳剤、坐剤等が挙げられる。
本発明の有効成分を製剤化するには、常法にしたがえば
よく、界面活性剤、賦形剤、着色料、着香料、保存料、
安定剤、緩衝剤、懸濁剤、等張剤その他常用される佐薬
を適宜使用する。
剤、顆粒剤、軟・硬カプセル剤、散剤、細粒剤、粉剤、
乳濁剤、懸濁剤、シロップ剤、ペレット剤、エレキシル
剤等が挙げられる。非経口投与のための製剤としては、
注射剤、点滴剤、輸液、軟膏、ローション、トニック、
スプレー、懸濁剤、油剤、乳剤、坐剤等が挙げられる。
本発明の有効成分を製剤化するには、常法にしたがえば
よく、界面活性剤、賦形剤、着色料、着香料、保存料、
安定剤、緩衝剤、懸濁剤、等張剤その他常用される佐薬
を適宜使用する。
【００２２】本発明に係わる薬剤組成物の投与量は、そ
の種類、治療ないし予防対象疾病の種類、投与方法、患
者の年齢、患者の症状、処理時間等により相違するが、
静脈投与の場合は成人ひとり当り１日に有効成分を0.01
〜1000 mg/kg、好ましくは0.1〜100 mg/kg投与し、筋肉
投与の場合は同じく0.01〜1000 mg/kg、好ましくは0.1
〜100 mg/kg投与し、経口投与の場合も同じく0.5〜2000
mg/kg、好ましくは1〜1000 mg/kgの範囲内で投与す
る。
の種類、治療ないし予防対象疾病の種類、投与方法、患
者の年齢、患者の症状、処理時間等により相違するが、
静脈投与の場合は成人ひとり当り１日に有効成分を0.01
〜1000 mg/kg、好ましくは0.1〜100 mg/kg投与し、筋肉
投与の場合は同じく0.01〜1000 mg/kg、好ましくは0.1
〜100 mg/kg投与し、経口投与の場合も同じく0.5〜2000
mg/kg、好ましくは1〜1000 mg/kgの範囲内で投与す
る。
【００２３】
【実施例】以下に本発明の実施例を示すが、PF1092物質
の性状が本発明によって明らかにされたので、それらの
性状にもとずきPF1092物質の製造法を種々考案すること
ができる。従って本発明は実施例に限定されるものでは
なく、実施例の修飾手段は勿論、本発明によって明らか
にされたPF1092物質の性状にもとずいて公知の手段を施
してPF1092物質を生産、濃縮、抽出、精製する方法をす
べて包括する。
の性状が本発明によって明らかにされたので、それらの
性状にもとずきPF1092物質の製造法を種々考案すること
ができる。従って本発明は実施例に限定されるものでは
なく、実施例の修飾手段は勿論、本発明によって明らか
にされたPF1092物質の性状にもとずいて公知の手段を施
してPF1092物質を生産、濃縮、抽出、精製する方法をす
べて包括する。
【００２４】実施例１ 種培地として、澱粉 2.0％、グルコース 1.0％、ポリペ
プトン 0.5％、小麦胚芽 0.6％、酵母エキス 0.3％、大
豆粕 0.2％、炭酸カルシウム 0.2％の組成からなる培地
（殺菌前pHは 7.0）を用いた。また生産培地として、十
分に水を吸収させた米に0.3 %大豆粕を加えた培地を用
いた。前記の種培地（20 ml）を分注した100 ml容三角
フラスコを120℃で15分間殺菌し、これにPenicillium s
p. PF1092株（FERM BP-5350）の斜面寒天培養の１白金
耳を接種し、25℃で3日間振盪培養して種培養とした。
次いで、前記の生産培地（100 g）を分注した500 ml容
三角フラスコを120℃で15分間殺菌し、これに前記種培
養（5 ml）を接種して、よく撹拌後、28℃で 10日間静
置培養した。
プトン 0.5％、小麦胚芽 0.6％、酵母エキス 0.3％、大
豆粕 0.2％、炭酸カルシウム 0.2％の組成からなる培地
（殺菌前pHは 7.0）を用いた。また生産培地として、十
分に水を吸収させた米に0.3 %大豆粕を加えた培地を用
いた。前記の種培地（20 ml）を分注した100 ml容三角
フラスコを120℃で15分間殺菌し、これにPenicillium s
p. PF1092株（FERM BP-5350）の斜面寒天培養の１白金
耳を接種し、25℃で3日間振盪培養して種培養とした。
次いで、前記の生産培地（100 g）を分注した500 ml容
三角フラスコを120℃で15分間殺菌し、これに前記種培
養（5 ml）を接種して、よく撹拌後、28℃で 10日間静
置培養した。
【００２５】実施例２ こうして得られた培養物 6 kgを酢酸エチル（12 L）に
より活性成分を抽出し、酢酸エチル層を濃縮乾固し油状
物質 15.3 gを得た。この油状物をシリカゲル（和光純
薬工業社製、Wakogel C-200）カラム（400 g）の上部に
載せ、クロロホルムで洗浄したのち、クロロホルム-メ
タノール（100:1〜100:3）を展開溶媒とするクロマトグ
ラフィーを行い、活性画分を濃縮乾固することにより粗
粉末4.6gを得た。次いで、この粗粉末をシリカゲル（和
光純薬工業社製、Wakogel C-200）カラム（150 g）の上
部に載せ、ヘキサン-酢酸エチル（8:1〜5:1）で洗浄し
たのち、ヘキサン-酢酸エチル（4:1〜3:1）を展開溶媒
としてPF1092B物質を溶出し、濃縮乾固することによりP
F1092B物質を含む粗粉末を282 mgを得た。さらに、ヘキ
サン-酢酸エチル（2:1〜1:1）を展開溶媒としてPF1092A
物質及びPF1092C物質を溶出し、濃縮乾固することによ
りPF1092A物質及びPF1092C物質を含む粗粉末を763 mg得
た。次に、PF1092B物質を含む粉末をクロロホルム−メ
タノール（1:1）を展開溶媒とするセファデックス LH-2
0（700 ml、ファルマシア社製）カラムクロマトグラフ
ィーで精製し、PF1092B物質を含む画分を濃縮乾固し、
無色粉末としてPF1092B物質を157.0 mg得た。更に、PF1
092B物質の無色粉末をクロロホルム-メタノールの混合
液に溶解し、静置することにより、PF1092B物質を無色
針状結晶として49.1 mg得た。一方、シリカゲルカラム
クロマトのヘキサン-酢酸エチル（2:1〜1:1）を展開溶
媒として得られたPF1092A物質及びPF1092C物質を含む粗
粉末をクロロホルム−メタノール（1:1）を展開溶媒と
するセファデックス LH-20（700 ml）カラムクロマトグ
ラフィーで精製し、PF1092A物質を無色粉末として298 m
g、さらに、PF1092C物質を無色粉末として159 mg得た。
次に、PF1092A物質の無色粉末をクロロホルム-メタノー
ルの混合液に溶解し、静置することにより、PF1092A物
質を無色針状結晶として60.0 mg得た。更に、PF1092C物
質の無色粉末を酢酸エチルに溶解し、静置することによ
り、PF1092C物質を無色針状結晶として 30.1 mg得た。
本物質は前記の物理化学的性状を有する。
より活性成分を抽出し、酢酸エチル層を濃縮乾固し油状
物質 15.3 gを得た。この油状物をシリカゲル（和光純
薬工業社製、Wakogel C-200）カラム（400 g）の上部に
載せ、クロロホルムで洗浄したのち、クロロホルム-メ
タノール（100:1〜100:3）を展開溶媒とするクロマトグ
ラフィーを行い、活性画分を濃縮乾固することにより粗
粉末4.6gを得た。次いで、この粗粉末をシリカゲル（和
光純薬工業社製、Wakogel C-200）カラム（150 g）の上
部に載せ、ヘキサン-酢酸エチル（8:1〜5:1）で洗浄し
たのち、ヘキサン-酢酸エチル（4:1〜3:1）を展開溶媒
としてPF1092B物質を溶出し、濃縮乾固することによりP
F1092B物質を含む粗粉末を282 mgを得た。さらに、ヘキ
サン-酢酸エチル（2:1〜1:1）を展開溶媒としてPF1092A
物質及びPF1092C物質を溶出し、濃縮乾固することによ
りPF1092A物質及びPF1092C物質を含む粗粉末を763 mg得
た。次に、PF1092B物質を含む粉末をクロロホルム−メ
タノール（1:1）を展開溶媒とするセファデックス LH-2
0（700 ml、ファルマシア社製）カラムクロマトグラフ
ィーで精製し、PF1092B物質を含む画分を濃縮乾固し、
無色粉末としてPF1092B物質を157.0 mg得た。更に、PF1
092B物質の無色粉末をクロロホルム-メタノールの混合
液に溶解し、静置することにより、PF1092B物質を無色
針状結晶として49.1 mg得た。一方、シリカゲルカラム
クロマトのヘキサン-酢酸エチル（2:1〜1:1）を展開溶
媒として得られたPF1092A物質及びPF1092C物質を含む粗
粉末をクロロホルム−メタノール（1:1）を展開溶媒と
するセファデックス LH-20（700 ml）カラムクロマトグ
ラフィーで精製し、PF1092A物質を無色粉末として298 m
g、さらに、PF1092C物質を無色粉末として159 mg得た。
次に、PF1092A物質の無色粉末をクロロホルム-メタノー
ルの混合液に溶解し、静置することにより、PF1092A物
質を無色針状結晶として60.0 mg得た。更に、PF1092C物
質の無色粉末を酢酸エチルに溶解し、静置することによ
り、PF1092C物質を無色針状結晶として 30.1 mg得た。
本物質は前記の物理化学的性状を有する。
【００２６】試験例 本発明のPF1092A物質、PF1092B物質及びPF1092C物質の
プロゲステロン受容体結合活性についてはH.Kondoらの
方法［ジャーナル・オブ・アンチバイオチクス(J. Anti
biotics）、43巻、1533-1542頁、 1990年］に従い、次
のようにして測定した：豚の子宮細胞を5mMリン酸緩衝
液中においてポリトロンホモジナイザーにて粉砕した
後、この溶液を遠心分離(100,000 x g、30分間)処理し
て上清を分離した。この上清をプロゲステロン受容体を
含む細胞質画分液とした。
プロゲステロン受容体結合活性についてはH.Kondoらの
方法［ジャーナル・オブ・アンチバイオチクス(J. Anti
biotics）、43巻、1533-1542頁、 1990年］に従い、次
のようにして測定した：豚の子宮細胞を5mMリン酸緩衝
液中においてポリトロンホモジナイザーにて粉砕した
後、この溶液を遠心分離(100,000 x g、30分間)処理し
て上清を分離した。この上清をプロゲステロン受容体を
含む細胞質画分液とした。
【００２７】プロゲステロン受容体結合活性は本受容体
のリガンドである3H-プロゲステロン溶液（3.84TBq/mmo
l,18.5kBq/ml)40μl、細胞質画分溶液（2-3mg蛋白/ml）
50μl及びPF1092A物質、PF1092B物質及びPF1092C物質を
30μM、及びメドロキシプロゲステロンアセテート(MPA)
30μMを入れた試験管中で60分間、4℃で反応後、0.5%活
性炭溶液を100μl添加した。10分間静置した後、遠心分
離(2,000 x g、10分間)処理して得た上清の放射活性
を、液体シンチレーションカウンターによって測定し
た。 被験薬無添加での放射活性を細胞質画分に対する全
結合量、MPA添加での放射活性を非特異的結合量とし、
以下の式にて阻害率を算出した。阻害率＝（被験薬添加
時の全結合量−非特異的結合量／被験薬無添加時の全結
合量−非特異的結合量）×１００その結果、PF1092A物
質及びPF1092B物質は30μMで3H-プロゲステロンのプロ
ゲステロン受容体に対する結合を90%以上阻害した。ま
た、本濃度におけるPF1092C物質の阻害率は約70%であっ
た。以上の結果よりPF1092A物質、PF1092B物質及びPF10
92C物質はプロゲステロン受容体に対して結合能を有す
る事が判明した。
のリガンドである3H-プロゲステロン溶液（3.84TBq/mmo
l,18.5kBq/ml)40μl、細胞質画分溶液（2-3mg蛋白/ml）
50μl及びPF1092A物質、PF1092B物質及びPF1092C物質を
30μM、及びメドロキシプロゲステロンアセテート(MPA)
30μMを入れた試験管中で60分間、4℃で反応後、0.5%活
性炭溶液を100μl添加した。10分間静置した後、遠心分
離(2,000 x g、10分間)処理して得た上清の放射活性
を、液体シンチレーションカウンターによって測定し
た。 被験薬無添加での放射活性を細胞質画分に対する全
結合量、MPA添加での放射活性を非特異的結合量とし、
以下の式にて阻害率を算出した。阻害率＝（被験薬添加
時の全結合量−非特異的結合量／被験薬無添加時の全結
合量−非特異的結合量）×１００その結果、PF1092A物
質及びPF1092B物質は30μMで3H-プロゲステロンのプロ
ゲステロン受容体に対する結合を90%以上阻害した。ま
た、本濃度におけるPF1092C物質の阻害率は約70%であっ
た。以上の結果よりPF1092A物質、PF1092B物質及びPF10
92C物質はプロゲステロン受容体に対して結合能を有す
る事が判明した。
【００２８】
【発明の効果】本発明のPF1092A物質、PF1092B物質及び
PF1092C物質は、プロゲステロンのプロゲステロン受容
体に対する結合を阻害した。この性質に基づき本発明の
PF1092A物質、PF1092B物質及びPF1092C物質を避妊剤あ
るいは制癌剤、あるいはそれへの変換素材として用いる
ことができる。
PF1092C物質は、プロゲステロンのプロゲステロン受容
体に対する結合を阻害した。この性質に基づき本発明の
PF1092A物質、PF1092B物質及びPF1092C物質を避妊剤あ
るいは制癌剤、あるいはそれへの変換素材として用いる
ことができる。
【図１】 PF1092A物質のKBr錠中での赤外吸収スペクト
ル
ル
【図２】 PF1092A物質の重クロロホルム溶液中での400
MHz 1H NMRスペクトル
MHz 1H NMRスペクトル
【図３】 PF1092A物質の重クロロホルム溶液中での100
MHz 13C NMRスペクトル
MHz 13C NMRスペクトル
【図４】 PF1092B物質のKBr錠中での赤外吸収スペクト
ル
ル
【図５】 PF1092B物質の重クロロホルム溶液中での400
MHz 1H NMRスペクトル
MHz 1H NMRスペクトル
【図６】 PF1092B物質の重クロロホルム溶液中での100
MHz 13C NMRスペクトル
MHz 13C NMRスペクトル
【図７】 PF1092C物質のKBr錠中での赤外吸収スペクト
ル
ル
【図８】 PF1092C物質の重クロロホルム溶液中での400
MHz 1H NMRスペクトル
MHz 1H NMRスペクトル
【図９】 PF1092C物質の重クロロホルム溶液中での100
MHz 13C NMRスペクトル
MHz 13C NMRスペクトル
【手続補正書】
【提出日】平成８年２月１３日
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００２
【補正方法】変更
【補正内容】
【０００２】
【従来の技術】プロゲステロンは性ホルモンの一種であ
り、内分泌器官で生合成される有効なゲスターゲンであ
る。コレステロールから生合成される各種のステロイド
ホルモンの中間体であり、おもな分泌源は黄体と胎盤で
ある。子宮や乳腺においては、エストロゲンの前処理に
よりプロゲステロン受容体が誘導され、プロゲステロン
は、排卵後現れる黄体から分泌され、子宮での受精卵着
床を可能にする。この作用からプロゲステロン−プロゲ
ステロン受容体結合の阻害物質は避妊剤として使用され
ている。
り、内分泌器官で生合成される有効なゲスターゲンであ
る。コレステロールから生合成される各種のステロイド
ホルモンの中間体であり、おもな分泌源は黄体と胎盤で
ある。子宮や乳腺においては、エストロゲンの前処理に
よりプロゲステロン受容体が誘導され、プロゲステロン
は、排卵後現れる黄体から分泌され、子宮での受精卵着
床を可能にする。この作用からプロゲステロン−プロゲ
ステロン受容体結合の阻害物質は避妊剤として使用され
ている。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００３
【補正方法】変更
【補正内容】
【０００３】一方、乳ガンの治療において、卵巣摘出
術、副腎摘出術等の外科的内分泌療法が１９世紀終わり
頃より盛んに行われてきた。その後、エストロゲン、プ
ロゲステロン等の性ホルモンの構造、生理的機能及びそ
れらのレセプターの研究の進歩とともに、エストロゲン
拮抗剤であるタモキシフェン（Ｗｉｓｅｍａｎ氏、タモ
キシフェン（Ｔａｍｏｘｉｆｅｎ），ジョン・ウィレイ
・アンド・サンズ（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ）
出版，Ｅｎｇｌａｎｄ １９９４年）の発見により、乳
ガンの内分泌療法は大きく変貌し、外科的内分泌療法か
ら内科的内分泌療法へと移行していった。さらに、合成
ゲスターゲンであるＭＰＡ（Ｍｅｄｒｏｘｙｐｒｏｇｅ
ｓｔｅｒｏｎｅａｃｅｔａｔｅ）（飯野祐一等、乳癌の
臨床、第１巻、２０１〜２１３頁、１９８６年）が使用
されるようになり、 ＬＨ−ＲＨ（Ｌｕｔｅｉｎｉｚｉ
ｎｇ ｈｏｒｍｏｎｅ ｒｅｌｅａｓｉｎｇ ｈｏｒｍ
ｏｎｅ）アゴニストやアロマターゼ阻害物質など作用機
作の異なる薬剤が開発され始めており、乳ガンに対する
内分泌療法は新たな展開を示しつつある。
術、副腎摘出術等の外科的内分泌療法が１９世紀終わり
頃より盛んに行われてきた。その後、エストロゲン、プ
ロゲステロン等の性ホルモンの構造、生理的機能及びそ
れらのレセプターの研究の進歩とともに、エストロゲン
拮抗剤であるタモキシフェン（Ｗｉｓｅｍａｎ氏、タモ
キシフェン（Ｔａｍｏｘｉｆｅｎ），ジョン・ウィレイ
・アンド・サンズ（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ）
出版，Ｅｎｇｌａｎｄ １９９４年）の発見により、乳
ガンの内分泌療法は大きく変貌し、外科的内分泌療法か
ら内科的内分泌療法へと移行していった。さらに、合成
ゲスターゲンであるＭＰＡ（Ｍｅｄｒｏｘｙｐｒｏｇｅ
ｓｔｅｒｏｎｅａｃｅｔａｔｅ）（飯野祐一等、乳癌の
臨床、第１巻、２０１〜２１３頁、１９８６年）が使用
されるようになり、 ＬＨ−ＲＨ（Ｌｕｔｅｉｎｉｚｉ
ｎｇ ｈｏｒｍｏｎｅ ｒｅｌｅａｓｉｎｇ ｈｏｒｍ
ｏｎｅ）アゴニストやアロマターゼ阻害物質など作用機
作の異なる薬剤が開発され始めており、乳ガンに対する
内分泌療法は新たな展開を示しつつある。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１０
【補正方法】変更
【補正内容】
【００１０】１．ＰＦ１０９２株の菌学的性状 （１）培養の特徴 ツァペック酵母エキス寒天培地上では、２５℃、７日間
の培養で、直径３０〜４０ｍｍのコロニーとなる。白
色、なわ状で、分生子をまばらに形成する。裏面はうす
茶色となる。麦芽エキス寒天培地上で生育良く、２５
℃、７日間の培養で、直径４０〜４５ｍｍに達する。白
色、なわ状で、分生子をわずかに形成し、うす茶色の抽
出液を生成する。裏面は淡黄土色となる。３７℃の培養
では２５℃の培養よりどの培地においても生育が良く、
分生子の形成も良好であった。 （２）形態学的特徴 分生子柄は気菌糸よりほぼ垂直に直立し、粗面、大きさ
３０〜７０ｘ２．５〜３．５μｍである。ペニシリは単
輪生となる。フィアライドは、針状、滑面からわずかに
粗面、分生子柄より４〜８本形成し、大きさは８〜１０
ｘ ２．５〜３．０μｍである。分生子は球形〜亜球
形、両端がややくぼみ偏平状となり、滑面、大きさは
２．０〜２．５μｍである。以上の菌学的性状より、本
菌株を、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ属と同定した。尚、本
菌株は工業技術院生命工学工業技術研究所にＦＥＲＭ
ＢＰ−５３５０として寄託 されている。ＰＦ１０９２
株は、他のカビに見られるようにその性状が変化し易
い。例えば、ＰＦ１０９２株の、又はこの株に由来する
突然変異株（自然発生又は誘発性）、形質接合体又は遺
伝子組換え体であっても、ＰＦ１０９２物質を生産する
ものは全て本発明に使用できる。
の培養で、直径３０〜４０ｍｍのコロニーとなる。白
色、なわ状で、分生子をまばらに形成する。裏面はうす
茶色となる。麦芽エキス寒天培地上で生育良く、２５
℃、７日間の培養で、直径４０〜４５ｍｍに達する。白
色、なわ状で、分生子をわずかに形成し、うす茶色の抽
出液を生成する。裏面は淡黄土色となる。３７℃の培養
では２５℃の培養よりどの培地においても生育が良く、
分生子の形成も良好であった。 （２）形態学的特徴 分生子柄は気菌糸よりほぼ垂直に直立し、粗面、大きさ
３０〜７０ｘ２．５〜３．５μｍである。ペニシリは単
輪生となる。フィアライドは、針状、滑面からわずかに
粗面、分生子柄より４〜８本形成し、大きさは８〜１０
ｘ ２．５〜３．０μｍである。分生子は球形〜亜球
形、両端がややくぼみ偏平状となり、滑面、大きさは
２．０〜２．５μｍである。以上の菌学的性状より、本
菌株を、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ属と同定した。尚、本
菌株は工業技術院生命工学工業技術研究所にＦＥＲＭ
ＢＰ−５３５０として寄託 されている。ＰＦ１０９２
株は、他のカビに見られるようにその性状が変化し易
い。例えば、ＰＦ１０９２株の、又はこの株に由来する
突然変異株（自然発生又は誘発性）、形質接合体又は遺
伝子組換え体であっても、ＰＦ１０９２物質を生産する
ものは全て本発明に使用できる。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２７
【補正方法】変更
【補正内容】
【００２７】プロゲステロン受容体結合活性は本受容体
のリガンドである３Ｈ−プロゲステロン溶液（３．８４
ＴＢｑ／ｍｍｏｌ，１８．５ｋＢｑ／ｍｌ）４０μｌ）
細胞質画分溶液（２−３ｍｇ蛋白／ｍｌ）５０μｌ及び
ＰＦ１０９２Ａ物質、ＰＦ１０９２Ｂ物質及びＰＦ１０
９２Ｃ物質を３０μＭ、及びメドロキシプロゲステロン
アセテート（ＭＰＡ）３０μＭを入れた試験管中で６０
分間、４℃で反応後、０．５％活性炭溶液を１００μｌ
添加した。１０分間静置した後、遠心分離（２，０００
ｘｇ、１０分間）処理して得た上清の放射活性を、液体
シンチレーションカウンターによって測定した。被験薬
無添加での放射活性を細胞質画分に対する全結合量、Ｍ
ＰＡ添加での放射活性を非特異的結合量とし、以下の式
にて阻害率を算出した。 阻害率＝［１−〔（被験薬添加時の全結合量−非特異的
結合量）／（被験薬無添加時の全結合量−非特異的結合
量）〕］×１００ その結果、ＰＦ１０９２Ａ物質及びＰＦ１０９２Ｂ物質
は３０μＭで３Ｈ−プロゲステロンのプロゲステロン受
容体に対する結合を９０％以上阻害した。また、本濃度
におけるＰＦ１０９２Ｃ物質の阻害率は約７０％であっ
た。以上の結果よりＰＦ１０９２Ａ物質、ＰＦ１０９２
Ｂ物質及びＰＦ１０９２Ｃ物質はプロゲステロン受容体
に対して結合能を有する事が判明した。
のリガンドである３Ｈ−プロゲステロン溶液（３．８４
ＴＢｑ／ｍｍｏｌ，１８．５ｋＢｑ／ｍｌ）４０μｌ）
細胞質画分溶液（２−３ｍｇ蛋白／ｍｌ）５０μｌ及び
ＰＦ１０９２Ａ物質、ＰＦ１０９２Ｂ物質及びＰＦ１０
９２Ｃ物質を３０μＭ、及びメドロキシプロゲステロン
アセテート（ＭＰＡ）３０μＭを入れた試験管中で６０
分間、４℃で反応後、０．５％活性炭溶液を１００μｌ
添加した。１０分間静置した後、遠心分離（２，０００
ｘｇ、１０分間）処理して得た上清の放射活性を、液体
シンチレーションカウンターによって測定した。被験薬
無添加での放射活性を細胞質画分に対する全結合量、Ｍ
ＰＡ添加での放射活性を非特異的結合量とし、以下の式
にて阻害率を算出した。 阻害率＝［１−〔（被験薬添加時の全結合量−非特異的
結合量）／（被験薬無添加時の全結合量−非特異的結合
量）〕］×１００ その結果、ＰＦ１０９２Ａ物質及びＰＦ１０９２Ｂ物質
は３０μＭで３Ｈ−プロゲステロンのプロゲステロン受
容体に対する結合を９０％以上阻害した。また、本濃度
におけるＰＦ１０９２Ｃ物質の阻害率は約７０％であっ
た。以上の結果よりＰＦ１０９２Ａ物質、ＰＦ１０９２
Ｂ物質及びＰＦ１０９２Ｃ物質はプロゲステロン受容体
に対して結合能を有する事が判明した。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:80） (72)発明者 矢口 貴志 神奈川県横浜市港北区師岡町760番地 明 治製菓株式会社薬品総合研究所内 (72)発明者 染谷 文子 神奈川県横浜市港北区師岡町760番地 明 治製菓株式会社薬品総合研究所内 (72)発明者 倉田 靖 神奈川県横浜市港北区師岡町760番地 明 治製菓株式会社薬品総合研究所内
Claims (6)
- 【請求項１】 式(I) 【化１】 で表されるPF1092A物質又はその塩。
- 【請求項２】 式(II) 【化２】 で表されるPF1092B物質又はその塩。
- 【請求項３】 式(III) 【化３】 で表されるPF1092C物質又はその塩。
- 【請求項４】 ペニシリウム属（Penicillium属）に属
する、生理活性物質PF1092A物質、PF1092B物質及びPF10
92C物質生産菌を培養し、その培養物から生理活性物質P
F1092A物質、PF1092B物質及びPF1092C物質を採取するこ
とを特徴とする生理活性物質PF1092A物質、PF1092B物質
及びPF1092C物質又はそれらの塩の製造法。 - 【請求項５】 生理活性物質PF1092A物質、PF1092B物質
及びPF1092C物質又はそれらの塩の少なくとも１種を含
有してなる避妊剤。 - 【請求項６】 生理活性物質PF1092A物質、PF1092B物質
及びPF1092C物質又はそれらの塩の少なくとも１種を含
有してなる制癌剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1707496A JP3380667B2 (ja) | 1995-01-17 | 1996-01-08 | 新規生理活性物質ｐｆ１０９２ａ物質、ｐｆ１０９２ｂ物質及びｐｆ１０９２ｃ物質，それらの製造法並びにそれらを有効成分とする避妊剤及び制癌剤 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7-20860 | 1995-01-17 | ||
| JP2086095 | 1995-01-17 | ||
| JP1707496A JP3380667B2 (ja) | 1995-01-17 | 1996-01-08 | 新規生理活性物質ｐｆ１０９２ａ物質、ｐｆ１０９２ｂ物質及びｐｆ１０９２ｃ物質，それらの製造法並びにそれらを有効成分とする避妊剤及び制癌剤 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH08253467A true JPH08253467A (ja) | 1996-10-01 |
| JP3380667B2 JP3380667B2 (ja) | 2003-02-24 |
Family
ID=26353544
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1707496A Expired - Fee Related JP3380667B2 (ja) | 1995-01-17 | 1996-01-08 | 新規生理活性物質ｐｆ１０９２ａ物質、ｐｆ１０９２ｂ物質及びｐｆ１０９２ｃ物質，それらの製造法並びにそれらを有効成分とする避妊剤及び制癌剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3380667B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6255339B1 (en) | 1996-02-19 | 2001-07-03 | Meiji Seika Kaisha, Ltd. | Tetrahydronaphthofuranone derivatives and process for producing the same |
-
1996
- 1996-01-08 JP JP1707496A patent/JP3380667B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6255339B1 (en) | 1996-02-19 | 2001-07-03 | Meiji Seika Kaisha, Ltd. | Tetrahydronaphthofuranone derivatives and process for producing the same |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3380667B2 (ja) | 2003-02-24 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP3111470B2 (ja) | 新規ポリペプチド化合物およびその製造法 | |
| KR830002329B1 (ko) | 모나콜린 k의 제조방법 | |
| EP0411703A1 (en) | Novel HMG-COA synthase inhibitors | |
| JPH08175990A (ja) | Ｐｉ３キナーゼ阻害剤とその製造法 | |
| CN104892622B (zh) | 嗜氮酮类化合物及其制备方法和用途 | |
| GB1599863A (en) | Pharmaceutical compositions for use in the inhibition of the biosynthesis of mevalonic acid | |
| CZ261493A3 (en) | Pharmacologically active compounds, process of their preparation and pharmaceutical preparations in which they are comprised | |
| JPH06506202A (ja) | 医薬用キサントン誘導体 | |
| DE3832362A1 (de) | Neue cyclopeptolide, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung | |
| EP0722940B1 (en) | Physiologically active substances PF1092A, PF1092B and PF1092C, process for the production thereof, and contraceptives and anticancer drugs containing the same as active ingredients | |
| JP3380667B2 (ja) | 新規生理活性物質ｐｆ１０９２ａ物質、ｐｆ１０９２ｂ物質及びｐｆ１０９２ｃ物質，それらの製造法並びにそれらを有効成分とする避妊剤及び制癌剤 | |
| JP3067869B2 (ja) | 抗生物質 | |
| Saatov et al. | Distribution of phytoecdysteroids in plants of Uzbekistan and the possibility of using drugs based on them in neurological practice | |
| DE69009923T2 (de) | Antifungales Antibiotikum und seine Herstellung und Verwendung. | |
| US4963581A (en) | Naphthopyran derivatives and use thereof | |
| US6620938B1 (en) | Compounds that inhibit GRB2-SHC binding and process for preparing same | |
| KR100316011B1 (ko) | 5-디메틸오발리신을 함유하는 신생혈관 형성 저해 조성물 및 이를 생산하는 방법 | |
| JP4545868B2 (ja) | 新規なテルペノイドおよびそれらの生物学的活性を利用する医薬 | |
| SK77595A3 (en) | Pharmaceutical and veterinary agent containing the sesquiterpenes and method of their preparation | |
| JPH0532579A (ja) | エストロゲン物質ｂｅ−２５３２７及びその製造法 | |
| JP2879394B2 (ja) | ベンズアントラセン誘導体、該誘導体を含有する抗腫瘍剤及びその製造方法 | |
| JP2002500876A (ja) | ウスチリピド、その製法およびその使用 | |
| US20080306131A1 (en) | Progesterone receptor modulator and uses thereof | |
| JPH07278041A (ja) | 抗腫瘍性物質ｂｅ−２４８１１及びその製造法 | |
| JPH07126202A (ja) | 化合物ｔａｎ−１７８６およびその用途 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20081213 Year of fee payment: 6 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20081213 Year of fee payment: 6 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20091213 Year of fee payment: 7 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20101213 Year of fee payment: 8 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20111213 Year of fee payment: 9 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20111213 Year of fee payment: 9 |
|
| S533 | Written request for registration of change of name |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313533 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20111213 Year of fee payment: 9 |
|
| R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20121213 Year of fee payment: 10 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20131213 Year of fee payment: 11 |
|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |