JP3067869B2 - 抗生物質 - Google Patents
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- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/50—Cyclic peptides containing at least one abnormal peptide link
- C07K7/54—Cyclic peptides containing at least one abnormal peptide link with at least one abnormal peptide link in the ring
- C07K7/56—Cyclic peptides containing at least one abnormal peptide link with at least one abnormal peptide link in the ring the cyclisation not occurring through 2,4-diamino-butanoic acid
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- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
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- A—HUMAN NECESSITIES
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- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
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- A61P31/10—Antimycotics
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- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P33/00—Antiparasitic agents
- A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
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- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
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- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
【０００１】本発明は式
【化２】 （式中ＲはＨ又はＯＨである）を有する化合物及びその
製造方法に関する。ＲがＨである場合、その化合物は以
後化合物ＩＡと称せられる。ＲがＯＨである場合その化
合物は以後化合物ＩＢと称せられる。
製造方法に関する。ＲがＨである場合、その化合物は以
後化合物ＩＡと称せられる。ＲがＯＨである場合その化
合物は以後化合物ＩＢと称せられる。
【０００２】化合物の構造はスペクトル特性の詳細な解
析によって決定された。化合物ＩＡは次のスペクトル特
性を有する。 重量スペクトルデータ 電子衝撃（ＥＩ．７０er) 及び低分解能高速原子衝撃
（ＦＡＢ：ＭＳ及びＭＳ−ＭＳ）質量スペクトルデータ
はフィンニガン−ＭＡＴ ＴＳＱ７０Ｂ質量分析計によ
り得た。全酸水解物のＴＭＳ（トリメチルシリル）誘導
体のＧＣ−ＭＳ分析は同機器により行なった。高分解能
ＦＡＢ測定はフィンニガン−ＭＡＴ ＭＡＴ９０機器に
より記録した。化合物ＩＡはＦＡＢ−ＭＳにより分子式
C50H80N8O17（〔Ｍ＋ＣS 〕+ ：計算値１０６４．５６
４１、実測値１０６４．５５８５）を有する。全酸水解
物のＴＭＳ誘導体のＧＣ−ＭＳ分析は各々約１当量のト
レオニン、３−ヒドロキシグルタミン酸及び１０，１２
−ジメチルテトラデカン酸と２当量の４−ヒドロキシプ
ロリンを示した。
析によって決定された。化合物ＩＡは次のスペクトル特
性を有する。 重量スペクトルデータ 電子衝撃（ＥＩ．７０er) 及び低分解能高速原子衝撃
（ＦＡＢ：ＭＳ及びＭＳ−ＭＳ）質量スペクトルデータ
はフィンニガン−ＭＡＴ ＴＳＱ７０Ｂ質量分析計によ
り得た。全酸水解物のＴＭＳ（トリメチルシリル）誘導
体のＧＣ−ＭＳ分析は同機器により行なった。高分解能
ＦＡＢ測定はフィンニガン−ＭＡＴ ＭＡＴ９０機器に
より記録した。化合物ＩＡはＦＡＢ−ＭＳにより分子式
C50H80N8O17（〔Ｍ＋ＣS 〕+ ：計算値１０６４．５６
４１、実測値１０６４．５５８５）を有する。全酸水解
物のＴＭＳ誘導体のＧＣ−ＭＳ分析は各々約１当量のト
レオニン、３−ヒドロキシグルタミン酸及び１０，１２
−ジメチルテトラデカン酸と２当量の４−ヒドロキシプ
ロリンを示した。
【０００３】ＮＭＲスペクトルデータ CD3OD 中４００ＭHzに於ける 1Ｈ ＮＭＲスペクトルは
図１に示される。13 Ｃ ＮＭＲケミカルシフト（CD3OD)：１１．６、１
９．７、２０．２、２０．７、２７．０、２８．１、３
０．３（２ｘ）、３０．６、３０．８、３１．２、３
１．３、３２．９、３４．９、３６．７、３８．１、３
８．５（２ｘ）、３９．４、４５．９、５１．２、５
６．１、５６．３、５７．１、５７．９、５８．３、６
０．７、６２．４、６８．２、７０．６、７０．９、７
１．０、７１．３、７３．８、７５．８、７６．９、１
１６．２（２ｘ）、１２９．６（２ｘ）、１３３．０、
１５８．５、１６９．２、１７２．５、１７２．９、１
７３．４、１７４．５、１７４．６、１７５．７、１７
７．３ppm 。
図１に示される。13 Ｃ ＮＭＲケミカルシフト（CD3OD)：１１．６、１
９．７、２０．２、２０．７、２７．０、２８．１、３
０．３（２ｘ）、３０．６、３０．８、３１．２、３
１．３、３２．９、３４．９、３６．７、３８．１、３
８．５（２ｘ）、３９．４、４５．９、５１．２、５
６．１、５６．３、５７．１、５７．９、５８．３、６
０．７、６２．４、６８．２、７０．６、７０．９、７
１．０、７１．３、７３．８、７５．８、７６．９、１
１６．２（２ｘ）、１２９．６（２ｘ）、１３３．０、
１５８．５、１６９．２、１７２．５、１７２．９、１
７３．４、１７４．５、１７４．６、１７５．７、１７
７．３ppm 。
【０００４】化合物ＩＢは次のスペクトル特性を有す
る。 重量スペクトルデータ 化合物ＩＢはＦＡＢ−ＭＳにより分子式 C50H80N8O
13（〔Ｍ＋ＣS 〕+ ：計算値１０８０．５５９０、実測
値１０８０．５３４４）を有する。全酸水解物のＴＭＳ
誘導体のＧＣ−ＭＳ分析は各々約１当量のトレオニン、
４−ヒドロキシプロリン、３−ヒドロキシグルタミン
酸、３，４−ジヒドロキシプロリン及び１０，１２−ジ
メチルテトラデカン酸を示した。〔Ｍ＋Ｈ〕+ イオンの
ＦＡＢ−ＭＳ−ＭＳはＩＢがトレオニン残基の前の位置
に３，４−ジヒドロキシ−プロリンを含有することを示
す。
る。 重量スペクトルデータ 化合物ＩＢはＦＡＢ−ＭＳにより分子式 C50H80N8O
13（〔Ｍ＋ＣS 〕+ ：計算値１０８０．５５９０、実測
値１０８０．５３４４）を有する。全酸水解物のＴＭＳ
誘導体のＧＣ−ＭＳ分析は各々約１当量のトレオニン、
４−ヒドロキシプロリン、３−ヒドロキシグルタミン
酸、３，４−ジヒドロキシプロリン及び１０，１２−ジ
メチルテトラデカン酸を示した。〔Ｍ＋Ｈ〕+ イオンの
ＦＡＢ−ＭＳ−ＭＳはＩＢがトレオニン残基の前の位置
に３，４−ジヒドロキシ−プロリンを含有することを示
す。
【０００５】ＮＭＲスペクトルデータ CD3OD 中４００ＭHzに於ける 1Ｈ ＮＭＲスペクトルは
図２に示される。13 Ｃ ＮＭＲケミカルシフト（CD3OD)：１１．６、１
９．７、２０．２、２０．８、２７．０、２８．０、３
０．３、３０．６、３０．８、３１．２、３１．２、３
２．９、３２．９、３４．８、３６．７、３８．１、３
８．５、３９．４、４５．９、５１．２、５４．４、５
５．３、５６．２、５７．０、５８．３、６２．５、６
５．９、６８．２、７０．７、７０．８、７１．３、７
１．９、７３．８、７５．８、７５．９、７７．０、１
１６．３（２Ｃ）、１２９．７（２Ｃ）、１３２．９、
１５８．４、１６９．４、１７２．５、１７２．７、17
3.2、１７３．４、１７４．５、１７５．９、１７７．
２。 これらの及び他のデータに基づいて示された構造を有す
ることがかなり確かであると考えられる。
図２に示される。13 Ｃ ＮＭＲケミカルシフト（CD3OD)：１１．６、１
９．７、２０．２、２０．８、２７．０、２８．０、３
０．３、３０．６、３０．８、３１．２、３１．２、３
２．９、３２．９、３４．８、３６．７、３８．１、３
８．５、３９．４、４５．９、５１．２、５４．４、５
５．３、５６．２、５７．０、５８．３、６２．５、６
５．９、６８．２、７０．７、７０．８、７１．３、７
１．９、７３．８、７５．８、７５．９、７７．０、１
１６．３（２Ｃ）、１２９．７（２Ｃ）、１３２．９、
１５８．４、１６９．４、１７２．５、１７２．７、17
3.2、１７３．４、１７４．５、１７５．９、１７７．
２。 これらの及び他のデータに基づいて示された構造を有す
ることがかなり確かであると考えられる。
【０００６】化合物ＩＡ及びＩＢはメタノール、エタノ
ール、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、
酢酸エチル等の有機溶媒に可溶な白色固形物である。
ール、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、
酢酸エチル等の有機溶媒に可溶な白色固形物である。
【０００７】化合物Ｉ（ＩＡ及びＩＢ）は糸状菌及び酵
母の両方に対して抗真菌特性を有する。特にカンジダア
ルビカンス（Candida albicans) 、カンジダトロピカリ
ス（Candida tropicalis) 、カンジダシュードトロピカ
リス（Candida pseudotropicalis) 、カンジダパラプシ
ロシス（Candida parapsilosis) 等の病原性真菌感染症
の原因となる微生物に対して有用である。更にその上、
カンジダアルビカンスや他の真菌病原体に対して有効で
あるが都合の悪い危険な副作用のために効力が制限され
るアンフォテリシンＢのような多くの抗真菌剤と異な
り、本発明の抗真菌剤は極めて有効であるばかりでなく
実質的に望ましくない副反応がない。赤血球溶解、有害
で致死の可能性のある副反応は治療投与量に近い濃度の
化合物によって示され、この性質はこれらの化合物の薬
剤としての適用性を制限している。本発明の化合物は赤
血球溶解が生じる前の治療用に必要とされたよりはるか
に高い薬剤濃度を必要とする。
母の両方に対して抗真菌特性を有する。特にカンジダア
ルビカンス（Candida albicans) 、カンジダトロピカリ
ス（Candida tropicalis) 、カンジダシュードトロピカ
リス（Candida pseudotropicalis) 、カンジダパラプシ
ロシス（Candida parapsilosis) 等の病原性真菌感染症
の原因となる微生物に対して有用である。更にその上、
カンジダアルビカンスや他の真菌病原体に対して有効で
あるが都合の悪い危険な副作用のために効力が制限され
るアンフォテリシンＢのような多くの抗真菌剤と異な
り、本発明の抗真菌剤は極めて有効であるばかりでなく
実質的に望ましくない副反応がない。赤血球溶解、有害
で致死の可能性のある副反応は治療投与量に近い濃度の
化合物によって示され、この性質はこれらの化合物の薬
剤としての適用性を制限している。本発明の化合物は赤
血球溶解が生じる前の治療用に必要とされたよりはるか
に高い薬剤濃度を必要とする。
【０００８】化合物Ｉはまたアスペルギルス（Aspergil
lus)種、ペニシリウム（Penicillium)種、フサリウム
（Fusarium) 種、アルテルナリア（Alternaria) 種、ニ
ューロスポラ（Neurospora) 種等の糸状菌に対して使用
することができる。化合物Ｉはまた後天性免疫不全症候
群（エイズ）にかかっているような免疫妥協患者に対し
て特に重篤であるニューモシスチスカリニイ（Pneumocy
stis carinii) 病原体の肺炎の治療に使用することがで
きる。
lus)種、ペニシリウム（Penicillium)種、フサリウム
（Fusarium) 種、アルテルナリア（Alternaria) 種、ニ
ューロスポラ（Neurospora) 種等の糸状菌に対して使用
することができる。化合物Ｉはまた後天性免疫不全症候
群（エイズ）にかかっているような免疫妥協患者に対し
て特に重篤であるニューモシスチスカリニイ（Pneumocy
stis carinii) 病原体の肺炎の治療に使用することがで
きる。
【０００９】化合物Ｉは後述の通り産生されるグラレア
ロゾエンシス（Glarea lozoyensis）の変異誘発形を培
養することによって生産するのが便利であり、ＭＦ５５
３３としてメルクカルチュアコレクションに保持され
る。ＭＦ５５３３はアメリカンタイプカルチュアコレク
ションＭＤ２０８５２、ロックビル、パークラウンドラ
イブ１２３０１のカルチュアコレクションにブタペスト
条約に基づいて寄託されており受託番号ＡＴＣＣ７４０
３０を付与されている。グラレアロゾエンシスＡＴＣＣ
７４０３０はＡＴＣＣ２０８６８の変異誘発形であるグ
ラレアロゾエンシスＡＴＣＣ２０９５７の変異誘発形で
ある。この変異体は後に詳述されるように、グラレアロ
ゾエンシスＡＴＣＣ２０９５７の凍結栄養菌糸体を変異
誘発物質と培養した後、塗布、温置及び単離することに
よって産生させることができる。
ロゾエンシス（Glarea lozoyensis）の変異誘発形を培
養することによって生産するのが便利であり、ＭＦ５５
３３としてメルクカルチュアコレクションに保持され
る。ＭＦ５５３３はアメリカンタイプカルチュアコレク
ションＭＤ２０８５２、ロックビル、パークラウンドラ
イブ１２３０１のカルチュアコレクションにブタペスト
条約に基づいて寄託されており受託番号ＡＴＣＣ７４０
３０を付与されている。グラレアロゾエンシスＡＴＣＣ
７４０３０はＡＴＣＣ２０８６８の変異誘発形であるグ
ラレアロゾエンシスＡＴＣＣ２０９５７の変異誘発形で
ある。この変異体は後に詳述されるように、グラレアロ
ゾエンシスＡＴＣＣ２０９５７の凍結栄養菌糸体を変異
誘発物質と培養した後、塗布、温置及び単離することに
よって産生させることができる。
【００１０】グラレアロゾエンシスＭＦ５５３３の培養
に於ける主生産物は式
に於ける主生産物は式
【化１】 によって表わされる化合物Ｘである。
【００１１】この変異体の産生には、紫外線照射、化学
的変異誘発物質又は挿入剤のような変異体を産生させる
ために一般に用いられる多くの物質を使用することがで
きる。適当な化学的変異誘発物質としてはＮ−ニトロソ
−Ｎ−メチルウレタン及びＮ−メチル−Ｎ′−ニトロ−
Ｎ−ニトロソグアニジンがある。
的変異誘発物質又は挿入剤のような変異体を産生させる
ために一般に用いられる多くの物質を使用することがで
きる。適当な化学的変異誘発物質としてはＮ−ニトロソ
−Ｎ−メチルウレタン及びＮ−メチル−Ｎ′−ニトロ−
Ｎ−ニトロソグアニジンがある。
【００１２】本発明の場合には、グラレアロゾエンシス
変異体ＭＦ５５３３（ＡＴＣＣ７４０３０）は同時係属
中の出願第４９２，０２４号で開示及び特許請求したグ
ラレアロゾエンシスＭＦ５４０４（ＡＴＣＣ２０９５
７）の凍結栄養菌糸体を種培地に接種し、Ｎ−メチル−
Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジンを加え培養した
後増殖の一部をジャガイモデキストロース寒天に塗布
し、温置してコロニーを発育させ、次いで分離したコロ
ニーをジャガイモデキストロース寒天の斜面に移植し、
２５℃で１４日間温置して、グラレアロゾエンシス変異
体の培養物を得ることによって得られ、その１つが４７
−１９と称せられ、次にメルクカルチュアコレクション
にＭＦ５５３３として保持された。
変異体ＭＦ５５３３（ＡＴＣＣ７４０３０）は同時係属
中の出願第４９２，０２４号で開示及び特許請求したグ
ラレアロゾエンシスＭＦ５４０４（ＡＴＣＣ２０９５
７）の凍結栄養菌糸体を種培地に接種し、Ｎ−メチル−
Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジンを加え培養した
後増殖の一部をジャガイモデキストロース寒天に塗布
し、温置してコロニーを発育させ、次いで分離したコロ
ニーをジャガイモデキストロース寒天の斜面に移植し、
２５℃で１４日間温置して、グラレアロゾエンシス変異
体の培養物を得ることによって得られ、その１つが４７
−１９と称せられ、次にメルクカルチュアコレクション
にＭＦ５５３３として保持された。
【００１３】グラレアロゾエンシスＭＦ５５３３（ＡＴ
ＣＣ７４０３０）のコロニー及び形態の説明は次の通り
である。２０℃に於てジャガイモ−デキストロース寒天
（ジフコ）上のコロニーは徐々に増殖し、１週間で直径
８〜１２mmに達する。ジャガイモ−デキストロース寒天
上の成熟コロニー（３〜４週間）は浸出し、深部及び気
中菌糸を有し、表面は毛状、羊毛状又は珠柄状で、曇り
からかなり光沢しており、隆起し、密集した緻密なコロ
ニーを形成し、密集した分生子形成のための子座下組織
を有する。コロニーの色は薄いオリーブ−ブラウン、オ
リーブ、オリーブ−ブラウン、最後はオリーブ−ブラッ
ク、イザベラカラー（Isabella Color) 、セイヤルブラ
ウン（Sayal Brown)、トーニー−オリーブ（Tawny-oliv
e)、サッカードスアンバー（Saccardo's Umber) 、セピ
ア（Sepia)、ブラウニシュオリーブ（Brownish Olive)
、ローアンバー（Raw Umber)、ダークオリーブ（Dark
Olive) 、オリベシャスブラック（Olivaceous Black)
（大文字から始まる色名はＲ．リッジウェイ、１９１２
年、カラースタンダードアンドノーメンクラチュア、ワ
シントン、D. C. (R. Ridgway. 1912. Color Standards
and Nomenclature. Washington. D. C.) による)。コ
ロニーの裏面も同色。臭い、浸出液及び可溶性色素はな
い。菌糸（３％ＫＯＨ中）は、薄いイエロー−ブラウン
からオリーブ−ブラウンで有隔分岐し、しばしば不規則
な側生又は頂生突出部を有し、幅１〜３μｍ、薄いもの
からわずかに厚い壁で囲まれ、壁は平坦なものからわず
かにかさぶた状又はいぼ状である。気中菌糸はしばしば
束として一緒に付着する。とげ及び糸柄はない。分生子
発生細胞は単芽球で散在しているものから密集している
ものまで完全なもの、末端及び節間のものがあり、未分
化の菌糸から直接、右にわずかに鋭角を向いて生じる。
分生子は不規則な鎖状、線状又はコイル状として発生
し、後に６〜２５細胞の緻密で不規則な集団として発育
する。個々の分生子細胞は直径３〜６μｍであり、球
状、ほぼ球状又はわずかにふぞろいなものから分裂した
ものまで、平滑なものから細かいいぼ状まであり、イエ
ロー−ブラウンからオリーブブラウンである。
ＣＣ７４０３０）のコロニー及び形態の説明は次の通り
である。２０℃に於てジャガイモ−デキストロース寒天
（ジフコ）上のコロニーは徐々に増殖し、１週間で直径
８〜１２mmに達する。ジャガイモ−デキストロース寒天
上の成熟コロニー（３〜４週間）は浸出し、深部及び気
中菌糸を有し、表面は毛状、羊毛状又は珠柄状で、曇り
からかなり光沢しており、隆起し、密集した緻密なコロ
ニーを形成し、密集した分生子形成のための子座下組織
を有する。コロニーの色は薄いオリーブ−ブラウン、オ
リーブ、オリーブ−ブラウン、最後はオリーブ−ブラッ
ク、イザベラカラー（Isabella Color) 、セイヤルブラ
ウン（Sayal Brown)、トーニー−オリーブ（Tawny-oliv
e)、サッカードスアンバー（Saccardo's Umber) 、セピ
ア（Sepia)、ブラウニシュオリーブ（Brownish Olive)
、ローアンバー（Raw Umber)、ダークオリーブ（Dark
Olive) 、オリベシャスブラック（Olivaceous Black)
（大文字から始まる色名はＲ．リッジウェイ、１９１２
年、カラースタンダードアンドノーメンクラチュア、ワ
シントン、D. C. (R. Ridgway. 1912. Color Standards
and Nomenclature. Washington. D. C.) による)。コ
ロニーの裏面も同色。臭い、浸出液及び可溶性色素はな
い。菌糸（３％ＫＯＨ中）は、薄いイエロー−ブラウン
からオリーブ−ブラウンで有隔分岐し、しばしば不規則
な側生又は頂生突出部を有し、幅１〜３μｍ、薄いもの
からわずかに厚い壁で囲まれ、壁は平坦なものからわず
かにかさぶた状又はいぼ状である。気中菌糸はしばしば
束として一緒に付着する。とげ及び糸柄はない。分生子
発生細胞は単芽球で散在しているものから密集している
ものまで完全なもの、末端及び節間のものがあり、未分
化の菌糸から直接、右にわずかに鋭角を向いて生じる。
分生子は不規則な鎖状、線状又はコイル状として発生
し、後に６〜２５細胞の緻密で不規則な集団として発育
する。個々の分生子細胞は直径３〜６μｍであり、球
状、ほぼ球状又はわずかにふぞろいなものから分裂した
ものまで、平滑なものから細かいいぼ状まであり、イエ
ロー−ブラウンからオリーブブラウンである。
【００１４】生産 化合物ＩはグラレアロゾエンシスＭＦ５５３３を以下に
記載する適当な栄養培地中で実質量の抗真菌活性が培地
中に検出することができるまで培養し、発酵培地からの
活性成分を適当な溶媒で抽出することによって回収し、
所望の成分を含有する溶液を濃縮し、次いで濃縮物質を
クロマトグラフィー分離にかけて化合物Ｉを培地中に存
在する他の代謝物から分離することによって得ることが
できる。化合物Ｉを生産させる適当な栄養培地は微生物
によって同化される炭素及び窒素源を含有し、低レベル
の無機塩をも含有するものである。培地は微量金属で補
足することができるが炭素及び窒素の複合源を使用する
場合、微量金属は通常複合源中に存在させる。
記載する適当な栄養培地中で実質量の抗真菌活性が培地
中に検出することができるまで培養し、発酵培地からの
活性成分を適当な溶媒で抽出することによって回収し、
所望の成分を含有する溶液を濃縮し、次いで濃縮物質を
クロマトグラフィー分離にかけて化合物Ｉを培地中に存
在する他の代謝物から分離することによって得ることが
できる。化合物Ｉを生産させる適当な栄養培地は微生物
によって同化される炭素及び窒素源を含有し、低レベル
の無機塩をも含有するものである。培地は微量金属で補
足することができるが炭素及び窒素の複合源を使用する
場合、微量金属は通常複合源中に存在させる。
【００１５】炭素源としてはグリセリン、砂糖、糖アル
コール、デンプン及び他の炭水化物又は炭水化物誘導体
例えばデキストラン、セレロース並びに複合栄養素例え
ばオート麦粉、コーンミール、キビ、トウモロコシ等が
ある。培地中に使用される炭素源の正確な量は幾分、培
地中の他の成分に依存するが、通常培地の0.５〜４０重
量％の炭水化物量が十分であると見られる。これらの炭
素源は個々に使用することもできるし、数種の炭素源を
同一培地中で混合することもできる。窒素源としてはア
ミノ酸例えばグリシン、アルギニン、トレオニン、メチ
オニン等、アンモニウム塩及び複合源例えば酵母加水分
解物、酵母自己分解物、酵母細胞、トマトペースト、大
豆ミール、カゼイン加水分解物、酵母エキス、コーン浸
漬液、ジスチラーズソリューブル、綿実ミール、肉エキ
ス等がある。種々の窒素源は単独で又は混合して培地の
0.２〜１０重量％の量で使用することができる。栄養無
機塩中、培地に混入することができるものはナトリウ
ム、カリウム、マグネシウム、カルシウム、リン酸、硫
酸、塩素、炭酸イオンを生成することができる通常の塩
である。またコバルト、マンガン、鉄、モリブデン、亜
鉛、カドミウム等の微量金属も含まれる。
コール、デンプン及び他の炭水化物又は炭水化物誘導体
例えばデキストラン、セレロース並びに複合栄養素例え
ばオート麦粉、コーンミール、キビ、トウモロコシ等が
ある。培地中に使用される炭素源の正確な量は幾分、培
地中の他の成分に依存するが、通常培地の0.５〜４０重
量％の炭水化物量が十分であると見られる。これらの炭
素源は個々に使用することもできるし、数種の炭素源を
同一培地中で混合することもできる。窒素源としてはア
ミノ酸例えばグリシン、アルギニン、トレオニン、メチ
オニン等、アンモニウム塩及び複合源例えば酵母加水分
解物、酵母自己分解物、酵母細胞、トマトペースト、大
豆ミール、カゼイン加水分解物、酵母エキス、コーン浸
漬液、ジスチラーズソリューブル、綿実ミール、肉エキ
ス等がある。種々の窒素源は単独で又は混合して培地の
0.２〜１０重量％の量で使用することができる。栄養無
機塩中、培地に混入することができるものはナトリウ
ム、カリウム、マグネシウム、カルシウム、リン酸、硫
酸、塩素、炭酸イオンを生成することができる通常の塩
である。またコバルト、マンガン、鉄、モリブデン、亜
鉛、カドミウム等の微量金属も含まれる。
【００１６】増殖培地は前述の栄養素から常法で調製す
ることができるが、ある種栄養素及び栄養素の組合せを
存在させることにより化合物Ｉの生産を容易にする。従
って、アンモニウム塩は直接窒素源として重要であり、
一塩基性リン酸カリウムはpH制御に重要である。マンニ
トールは生成される所望生成物の量を増大させるばかり
でなく所望の生成物の生産速度を改良するのに組成中で
特に有用である。
ることができるが、ある種栄養素及び栄養素の組合せを
存在させることにより化合物Ｉの生産を容易にする。従
って、アンモニウム塩は直接窒素源として重要であり、
一塩基性リン酸カリウムはpH制御に重要である。マンニ
トールは生成される所望生成物の量を増大させるばかり
でなく所望の生成物の生産速度を改良するのに組成中で
特に有用である。
【００１７】培養培地は液体又は固体いずれでもよい。
化合物Ｉの生産に適当な代表的な培地は次のものであ
る。 ＴＧ１０６培地 １リットル当たり Ｄ−マンニトール １００ｇ ＮＺ−アミンタイプＥ* ３３ｇ Ｆidco 8005 酵母エキス １０ｇ (NH4)2SO4 ５ｇ KH2PO4 ９ｇ P-2000 ２ｍｌ ＊カゼイン加水分解物、シェフィールドプロダクツ、クラフト社 ＳＰ−５培地 １リットル当たり マンニトール ８０ｇ ＫＨ２ＰＯ４ ９ｇ セレロース １０ｇ ファーマメディア(PHARMAMEDIA) * ２０ｇ 滅菌前 pH７．３ ＊非加水分解球状タンパク質を含有する綿実胚からの黄
粉、トレイダースプロティン、バックアイオイルシード
プロダクツ社、メンフィステネシー
化合物Ｉの生産に適当な代表的な培地は次のものであ
る。 ＴＧ１０６培地 １リットル当たり Ｄ−マンニトール １００ｇ ＮＺ−アミンタイプＥ* ３３ｇ Ｆidco 8005 酵母エキス １０ｇ (NH4)2SO4 ５ｇ KH2PO4 ９ｇ P-2000 ２ｍｌ ＊カゼイン加水分解物、シェフィールドプロダクツ、クラフト社 ＳＰ−５培地 １リットル当たり マンニトール ８０ｇ ＫＨ２ＰＯ４ ９ｇ セレロース １０ｇ ファーマメディア(PHARMAMEDIA) * ２０ｇ 滅菌前 pH７．３ ＊非加水分解球状タンパク質を含有する綿実胚からの黄
粉、トレイダースプロティン、バックアイオイルシード
プロダクツ社、メンフィステネシー
【００１８】 ＲＧ２培地 ＲＧ１２０培地 １リットル当たり １リットル当たり マンニトール ４４ｇ マンニトール ９１ｇ コーン浸漬液 ４ｇ コーン浸漬液 ４ml ラード水 ４ｇ ラード水 ４ｇ ペクチン １０ｇ ペクチン １０ｇ KH2PO4 ２ｇ KH2PO4 ２ｇ トマトペースト ４ｇ トマトペースト ４ｇ 乳餅 ４ｇ 乳餅 ４ｇ グリシン ２ｇ グリシン ２ｇ 落花生ミール ４ｇ 落花生ミール ４ｇ pH７．０に調整 pH７．０に調整 ＴＧ１０２培地 ＴＧ１０３培地 １リットル当たり １リットル当たり Ｄ−マンニトール ４０ｇ Ｄ−マンニトール ４０ｇ バクト−ペプトン* ３３ｇ バクト−ペプトン* ３３ｇ バクト−酵母エキス １０ｇ バクト−酵母エキス １０ｇ （NH4)2SO4 ５ｇ （NH4)2SO4 ５ｇ KH2PO4 ９ｇ KH2PO4 ９ｇ pH調整なし pH調整なし
【００１９】 Ｓ２培地 Ｓ６培地 １リットル当たり １リットル当たり Ｄ−マンニトール ４４ｇ Ｄ−マンニトール ４４ｇ KH2PO4 ２ｇ KH2PO4 ２ｇ グリシン ２ｇ グリシン ２ｇ 乳餅 １５ｇ 乳餅 １５ｇ 乳酸 ２ｇ 乳酸 ２ｇ 微量元素 １０ml 微量元素 １０ml 大豆油 １０ｇ pH７．０（滅菌前） pH７．０（滅菌前） Ｆ２０４固形培地 ベース液 250mlフラ １リットル スコ当たり 当たり キビ １５ｇ アルダミンPH（ARDAMINE PH)(**) 33.0ｇ ベース液 １５ml 酒石酸ナトリウム 6.6ｇ FeSO4 ・7H2O 0.66 ｇ グルタミン酸−ナトリウム 6.6ml コーン油 6.6ml pH調整なし ＊＊酵母自己分解物 イーストプロダクツ社クリフト
ン、ニュージャージ
ン、ニュージャージ
【００２０】 Ｆ４−ＳＦ固形培地 ベース液 250mlフラ １リットル スコ当たり 当たり ひき割りトウモロコシ １５ｇ アルダミンＰＨ 0.2ｇ ベース液 １０ml H2PO4 0.1ｇ MgSO4 ・7H2O 0.1ｇ 酒石酸ナトリウム 0.1ｇ FeSO4 ・7H2O 0.01 ｇ ZnSO4 ・7H2O 0.01 ｇ pH調整なし
【００２１】前述又は類似培地の１つを用いる所望化合
物の生産は通常まず種栄養培地にグラレアロゾエンシス
ＭＦ５５３３の凍結栄養菌糸体を接種することによって
開始し、接種した培地を少なくとも３日間温置して式
（Ｉ）の化合物の生産に種として働く微生物含有ブロス
を生産する。生産用発酵ブロスの全部又は一部を用いる
代わりにブロスの一部を種培地の第２期生産で使用する
ことができる。予想される生産サイズにより、最後の化
合物Ｉの生産で種として発酵ブロスを使用する前に数段
階の種培地生産を行なうことができる。種培地は一般に
pH５〜８．１であり、至適pHはpH６〜７．５の範囲であ
る。
物の生産は通常まず種栄養培地にグラレアロゾエンシス
ＭＦ５５３３の凍結栄養菌糸体を接種することによって
開始し、接種した培地を少なくとも３日間温置して式
（Ｉ）の化合物の生産に種として働く微生物含有ブロス
を生産する。生産用発酵ブロスの全部又は一部を用いる
代わりにブロスの一部を種培地の第２期生産で使用する
ことができる。予想される生産サイズにより、最後の化
合物Ｉの生産で種として発酵ブロスを使用する前に数段
階の種培地生産を行なうことができる。種培地は一般に
pH５〜８．１であり、至適pHはpH６〜７．５の範囲であ
る。
【００２２】１つの有用な種培地は次の組成を有するＰ
３４−２培地である。 別の有用な種培地は次の組成を有するＫＦ培地である。
３４−２培地である。 別の有用な種培地は次の組成を有するＫＦ培地である。
【００２３】この方法を行なうには、保存培養ＭＦ５５
３３ＡＴＣＣ２０９５８の斜面切片を適当な種培地に接
種し、フラスコを攪拌しながら又はせずに約１５〜３０
℃の温度で２〜３０日間、好ましくは２０〜２８℃で２
〜１４日間温置する。攪拌する場合は１５０〜２２０rp
m の範囲が好ましいが４００rpm 以下でもよい。増殖が
多量の場合、通常２〜５日間、増殖を本発明の化合物の
生産のための生産培地に接種するために使用することが
できる。しかしながら培養増殖の一部を接種した後同様
の条件及び温置時間約１〜６日を用いることによって第
２期発酵、しばしば第３又は第４期発酵を行なうことが
好ましい。次いで増殖を生産培地に接種するために使用
する。培養増殖を接種した発酵生産培地は攪拌しながら
又はせずに３〜３０日間通常７〜１４日間温置される。
発酵は約２０〜４０℃の温度で好気的に行なうことがで
きる。最適結果のためにはこれらの発酵を約２４〜３０
℃の温度で行なうことが最も便利である。約２４〜２８
℃の温度が最も好ましい。本化合物の生産に適当な栄養
培地のpHは約５．０〜８．５で変化することができ、約
５．５〜６．０が好ましい範囲である。所望化合物又は
化合物類の生産に適当な期間の後、後者は以下で詳述さ
れる発酵培地から回収される。
３３ＡＴＣＣ２０９５８の斜面切片を適当な種培地に接
種し、フラスコを攪拌しながら又はせずに約１５〜３０
℃の温度で２〜３０日間、好ましくは２０〜２８℃で２
〜１４日間温置する。攪拌する場合は１５０〜２２０rp
m の範囲が好ましいが４００rpm 以下でもよい。増殖が
多量の場合、通常２〜５日間、増殖を本発明の化合物の
生産のための生産培地に接種するために使用することが
できる。しかしながら培養増殖の一部を接種した後同様
の条件及び温置時間約１〜６日を用いることによって第
２期発酵、しばしば第３又は第４期発酵を行なうことが
好ましい。次いで増殖を生産培地に接種するために使用
する。培養増殖を接種した発酵生産培地は攪拌しながら
又はせずに３〜３０日間通常７〜１４日間温置される。
発酵は約２０〜４０℃の温度で好気的に行なうことがで
きる。最適結果のためにはこれらの発酵を約２４〜３０
℃の温度で行なうことが最も便利である。約２４〜２８
℃の温度が最も好ましい。本化合物の生産に適当な栄養
培地のpHは約５．０〜８．５で変化することができ、約
５．５〜６．０が好ましい範囲である。所望化合物又は
化合物類の生産に適当な期間の後、後者は以下で詳述さ
れる発酵培地から回収される。
【００２４】回収及び単離 培養の完了後化合物Ｉは培地から回収及び単離される。
厳密な工程は発酵が液体又は固形培地のいずれで行なわ
れるかにより幾分異なる。発酵が固形培地で行なわれる
場合、第１工程はアルコール性溶媒を発酵培地に添加
し、十分混合した後、濾過し回収して水性アルコール濾
液を濃縮することができる。濃縮濾液をまずヘキサン又
は他のアルカンのような低級脂肪族炭化水素溶媒で逆抽
出又は洗浄してアルカン可溶性不純物を取り除くことが
できる。発酵が液体培地で行なわれる場合、１つの方法
としては、菌糸固形分を濾過又は遠心分離によって分離
し、発酵培地から回収することができる。アルコールを
菌糸のかたまりに添加し、菌糸固形物を十分に低級アル
コールで混合して所望生成物を抽出し、混合液を濾過又
は遠心分離し、濾液又は上清を集め濃縮する。別法とし
ては全ブロスを１倍容量の低級アルカノール好ましくは
メタノールを添加することによって抽出し、濾過又は遠
心分離して固形不純物を取り除くことができる。
厳密な工程は発酵が液体又は固形培地のいずれで行なわ
れるかにより幾分異なる。発酵が固形培地で行なわれる
場合、第１工程はアルコール性溶媒を発酵培地に添加
し、十分混合した後、濾過し回収して水性アルコール濾
液を濃縮することができる。濃縮濾液をまずヘキサン又
は他のアルカンのような低級脂肪族炭化水素溶媒で逆抽
出又は洗浄してアルカン可溶性不純物を取り除くことが
できる。発酵が液体培地で行なわれる場合、１つの方法
としては、菌糸固形分を濾過又は遠心分離によって分離
し、発酵培地から回収することができる。アルコールを
菌糸のかたまりに添加し、菌糸固形物を十分に低級アル
コールで混合して所望生成物を抽出し、混合液を濾過又
は遠心分離し、濾液又は上清を集め濃縮する。別法とし
ては全ブロスを１倍容量の低級アルカノール好ましくは
メタノールを添加することによって抽出し、濾過又は遠
心分離して固形不純物を取り除くことができる。
【００２５】遠心分離又は濾過により得られた固形栄養
培地又は菌糸パッドから活性薬剤を抽出するのに適当な
低級アルカノールとしてはメタノール、エタノール、イ
ソプロパノール又は高級アルコールがある。メタノール
が好ましい。次いでいずれの分離からのアルカノール抽
出液もクロマトグラフィー分離工程のカラムに装填され
る。“ジアイオン（DIAION) ”ＨＰ−２０、ＨＰ−３
０、ＨＰ−４０、ＳＰ−２０７（三菱化成工業社）及び
アンバーライト（AMBERLITE)”ＸＡＤ−２、ＸＡＤ−
４、ＸＡＤ−１６（ロームアンドハース社）として市販
されているスチレン−ジビニルベンゼン共重合体のよう
な市販で入手し得る吸着剤を最初の分離に使用すること
ができる。分離工程を行なうには、アルカノール抽出液
の組成を５０％の水に調節し、ＨＰ−２０又は他の選択
された樹脂に吸着させ、次いで１００％アルカノール、
好ましくはメタノールで溶離する。
培地又は菌糸パッドから活性薬剤を抽出するのに適当な
低級アルカノールとしてはメタノール、エタノール、イ
ソプロパノール又は高級アルコールがある。メタノール
が好ましい。次いでいずれの分離からのアルカノール抽
出液もクロマトグラフィー分離工程のカラムに装填され
る。“ジアイオン（DIAION) ”ＨＰ−２０、ＨＰ−３
０、ＨＰ−４０、ＳＰ−２０７（三菱化成工業社）及び
アンバーライト（AMBERLITE)”ＸＡＤ−２、ＸＡＤ−
４、ＸＡＤ−１６（ロームアンドハース社）として市販
されているスチレン−ジビニルベンゼン共重合体のよう
な市販で入手し得る吸着剤を最初の分離に使用すること
ができる。分離工程を行なうには、アルカノール抽出液
の組成を５０％の水に調節し、ＨＰ−２０又は他の選択
された樹脂に吸着させ、次いで１００％アルカノール、
好ましくはメタノールで溶離する。
【００２６】通常のカラムクロマトグラフィーを使用す
ることができる。通常のクロマトグラフィー分離が使用
される場合、“セファデックス（SEPHADEX)"ＬＨ−２０
（ファーマシア）又はシリカゲルを使用することができ
るがシリカゲルが好ましい。シリカゲルによるクロマト
グラフィーによる活性成分の分画及び回収にはエステル
／アルコール／水又はジクロロメタン／アルコール／水
を使用して良好な分離を得ることができる。酢酸エチ
ル、メタノール及び水又は５％水性酢酸の混合液が特に
有用であることが見出されている。“セファデックス”
ＬＨ−２０のようなデキストラン吸着剤を使用する場合
クロロ炭化水素／炭化水素／アルコール溶媒系を使用す
ることができる。塩化メチレン／ヘキサン／メタノール
の混合液が特に有用であることが見出されている。ＨＰ
ＬＣ分離を行なうには、通常のクロマトグラフィーで回
収した物質を含有するアルコール溶液を濃縮し、残留物
を移動相に見られるのと同じ比の塩化メチレン／メタノ
ール／水又は酢酸エチル／メタノール／水に溶解し、市
販のシリカゲル樹脂で充填したカラムに装填し流速約１
０ml／分を生じる約８００〜２０００psi で溶離する。
分離はＵＶにより２７６nmで監視される。
ることができる。通常のクロマトグラフィー分離が使用
される場合、“セファデックス（SEPHADEX)"ＬＨ−２０
（ファーマシア）又はシリカゲルを使用することができ
るがシリカゲルが好ましい。シリカゲルによるクロマト
グラフィーによる活性成分の分画及び回収にはエステル
／アルコール／水又はジクロロメタン／アルコール／水
を使用して良好な分離を得ることができる。酢酸エチ
ル、メタノール及び水又は５％水性酢酸の混合液が特に
有用であることが見出されている。“セファデックス”
ＬＨ−２０のようなデキストラン吸着剤を使用する場合
クロロ炭化水素／炭化水素／アルコール溶媒系を使用す
ることができる。塩化メチレン／ヘキサン／メタノール
の混合液が特に有用であることが見出されている。ＨＰ
ＬＣ分離を行なうには、通常のクロマトグラフィーで回
収した物質を含有するアルコール溶液を濃縮し、残留物
を移動相に見られるのと同じ比の塩化メチレン／メタノ
ール／水又は酢酸エチル／メタノール／水に溶解し、市
販のシリカゲル樹脂で充填したカラムに装填し流速約１
０ml／分を生じる約８００〜２０００psi で溶離する。
分離はＵＶにより２７６nmで監視される。
【００２７】化合物Ｉは多くの真菌更にニューモシスチ
スカリニイに対して有効である。抗真菌特性は１％デキ
ストロースを含有する酵母窒素ベース（ディフコ）（Ｙ
ＮＢＤ）で行なわれるミクロブロス希釈検定に於けるあ
る種のカンジダ菌に対する最小殺真菌濃度（ＭＦＣ）測
定により例示すくことができる。検定を行なうには化合
物Ｉを１０％ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に可溶
化し、２５６０μｇ／mlまで希釈した。次いで化合物を
ＹＮＢＤ中で２５６μｇ／mlまで希釈した。浮遊液０．
１５mlを９６穴プレート（各穴）はＹＮＢＤ０．１５ml
を含有する）の最上列に分配し薬剤濃度１２８μｇ／ml
となった。次いで２倍希釈液を最上列から生成して最終
薬剤濃度１２８〜０．０６μｇ／mlを得た。サブローデ
キストロース寒天上に維持した酵母培養物をＹＭブロス
（ディフコ）に移植し振盪しながら（２５０rpm ）３５
℃で一晩温置した。温置後、各培養物を滅菌水に希釈し
て最終濃度１〜５×１０6 コロニー形成単位（ＣＦＵ）
／mlを得た。
スカリニイに対して有効である。抗真菌特性は１％デキ
ストロースを含有する酵母窒素ベース（ディフコ）（Ｙ
ＮＢＤ）で行なわれるミクロブロス希釈検定に於けるあ
る種のカンジダ菌に対する最小殺真菌濃度（ＭＦＣ）測
定により例示すくことができる。検定を行なうには化合
物Ｉを１０％ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に可溶
化し、２５６０μｇ／mlまで希釈した。次いで化合物を
ＹＮＢＤ中で２５６μｇ／mlまで希釈した。浮遊液０．
１５mlを９６穴プレート（各穴）はＹＮＢＤ０．１５ml
を含有する）の最上列に分配し薬剤濃度１２８μｇ／ml
となった。次いで２倍希釈液を最上列から生成して最終
薬剤濃度１２８〜０．０６μｇ／mlを得た。サブローデ
キストロース寒天上に維持した酵母培養物をＹＭブロス
（ディフコ）に移植し振盪しながら（２５０rpm ）３５
℃で一晩温置した。温置後、各培養物を滅菌水に希釈し
て最終濃度１〜５×１０6 コロニー形成単位（ＣＦＵ）
／mlを得た。
【００２８】９６−穴ミクロプレートを１．５μｌ／穴
を送るＭＩＣ−２０００（ダイナテック）を用いて接種
し最終接種物／穴１．５〜７．５×１０3 細胞を得た。
ミクロプレートを３５℃で２４時間温置した。最小阻止
濃度（ＭＩＣ）を目に見える増殖を示さない薬剤の最低
濃度として記録した。ＭＩＣを記録した後プレートを振
盪して細胞を再浮遊させた。その後９６穴ミクロプレー
トの穴からの試料１．５μｌをサブローデキストロース
寒天を含有する１個のウェルトレー（welltray) に移植
した。接種したトレーを２８℃で２４時間温置した後読
み取った。ＭＦＣは発育しないか又は４コロニー／スポ
ット以下を示す薬剤の最低濃度として定義される。結果
（３試料）は次の表に示される。 真菌 菌株No. 最小殺真菌濃度（μｇ／ml） 化合物ＩＡ 化合物ＩＢ カンジダ アルビカンス ＭＹ １０５５ ２ １ ＭＹ １０２８ ２ ０．５ ＭＹ １７５０ ４ １カンジダ トロピカリス ＭＹ １０１２ １ ０．１２カンジダ シュードトロピカリス ＭＹ １１００ ４ ２
を送るＭＩＣ−２０００（ダイナテック）を用いて接種
し最終接種物／穴１．５〜７．５×１０3 細胞を得た。
ミクロプレートを３５℃で２４時間温置した。最小阻止
濃度（ＭＩＣ）を目に見える増殖を示さない薬剤の最低
濃度として記録した。ＭＩＣを記録した後プレートを振
盪して細胞を再浮遊させた。その後９６穴ミクロプレー
トの穴からの試料１．５μｌをサブローデキストロース
寒天を含有する１個のウェルトレー（welltray) に移植
した。接種したトレーを２８℃で２４時間温置した後読
み取った。ＭＦＣは発育しないか又は４コロニー／スポ
ット以下を示す薬剤の最低濃度として定義される。結果
（３試料）は次の表に示される。 真菌 菌株No. 最小殺真菌濃度（μｇ／ml） 化合物ＩＡ 化合物ＩＢ カンジダ アルビカンス ＭＹ １０５５ ２ １ ＭＹ １０２８ ２ ０．５ ＭＹ １７５０ ４ １カンジダ トロピカリス ＭＹ １０１２ １ ０．１２カンジダ シュードトロピカリス ＭＹ １１００ ４ ２
【００２９】化合物Ｉはニューモシスチスカリニイ感染
を抑制又は軽減するのに有用である。代表的な研究とし
て、ラットに於ける化合物Ｉの有効性を定量した。スプ
ラグードーレ−ラット（ＳＤ−ラット）（体重約２５０
ｇ）を飲料水中デキサゾン（２mg／ml）で免疫抑制し、
５週間低タンパク食で維持して潜伏感染からニューモシ
スチス肺炎の発症を誘発させた。薬剤処理の前に２匹の
ラットを犠牲にしてニューモシスチスカリニイ肺炎（Ｐ
ＣＰ）の存在を確かめた。両ラットは感染していた。残
りのラット（体重約１５０ｇ）を６グループに分け、賦
形剤（水中１０％ＤＭＳＯ又は水）０．２５ml中化合物
を１日２回４日間皮下注射した。対照グループの５匹の
ラットは賦形剤だけを与えた。全動物は薬剤処理期間中
飲料水中デキサゾンと低タイパク食を与え続けた。処理
完了時に全動物を犠牲にし、肺を取り出し、処理して、
染色スライドの顕微鏡分析によって疾病の程度を定量し
た。この研究の結果は２０−１０００×顕微鏡視野（次
の表に示される）と幾何平均の標準誤差を調べることに
よって決定した嚢胞／動物肺の対数平均数として示され
る。全ての群をｔ−検定により比較し、マーク（＊）し
た結果は有意性を示す。 表 対数平均／嚢胞 （Ｉ SEGM) 嚢胞の減少 残存数 ＤＭＳＯ対照 7.26 ±.12 ---- ６／６ 化合物ＩＡ 1.20 mg／kg 5.58 ±.11* 97.9 ％ ５／６ 0.60 mg／kg 5.68 ±.19* 97.4 ％ ６／６ 0.30 mg／kg 5.99 ±.18* 94.6 ％ ５／６ 0.15 mg／kg 6.32 ±.17* 88.5 ％ ６／６ 化合物ＩＢ 0.60 mg／kg 5.41 ±.17* 99.1 ％ ６／６ 0.30 mg／kg 5.22 ±.10* 99.4 ％ ６／６ 0.15 mg／kg 5.59 ±.11* 98.7 ％ ６／６ 0.07 mg／kg 5.97 ±.18* 96.8 ％ ６／６ 0.03 mg／kg 6.16 ±.14* 95.0 ％ ６／６
を抑制又は軽減するのに有用である。代表的な研究とし
て、ラットに於ける化合物Ｉの有効性を定量した。スプ
ラグードーレ−ラット（ＳＤ−ラット）（体重約２５０
ｇ）を飲料水中デキサゾン（２mg／ml）で免疫抑制し、
５週間低タンパク食で維持して潜伏感染からニューモシ
スチス肺炎の発症を誘発させた。薬剤処理の前に２匹の
ラットを犠牲にしてニューモシスチスカリニイ肺炎（Ｐ
ＣＰ）の存在を確かめた。両ラットは感染していた。残
りのラット（体重約１５０ｇ）を６グループに分け、賦
形剤（水中１０％ＤＭＳＯ又は水）０．２５ml中化合物
を１日２回４日間皮下注射した。対照グループの５匹の
ラットは賦形剤だけを与えた。全動物は薬剤処理期間中
飲料水中デキサゾンと低タイパク食を与え続けた。処理
完了時に全動物を犠牲にし、肺を取り出し、処理して、
染色スライドの顕微鏡分析によって疾病の程度を定量し
た。この研究の結果は２０−１０００×顕微鏡視野（次
の表に示される）と幾何平均の標準誤差を調べることに
よって決定した嚢胞／動物肺の対数平均数として示され
る。全ての群をｔ−検定により比較し、マーク（＊）し
た結果は有意性を示す。 表 対数平均／嚢胞 （Ｉ SEGM) 嚢胞の減少 残存数 ＤＭＳＯ対照 7.26 ±.12 ---- ６／６ 化合物ＩＡ 1.20 mg／kg 5.58 ±.11* 97.9 ％ ５／６ 0.60 mg／kg 5.68 ±.19* 97.4 ％ ６／６ 0.30 mg／kg 5.99 ±.18* 94.6 ％ ５／６ 0.15 mg／kg 6.32 ±.17* 88.5 ％ ６／６ 化合物ＩＢ 0.60 mg／kg 5.41 ±.17* 99.1 ％ ６／６ 0.30 mg／kg 5.22 ±.10* 99.4 ％ ６／６ 0.15 mg／kg 5.59 ±.11* 98.7 ％ ６／６ 0.07 mg／kg 5.97 ±.18* 96.8 ％ ６／６ 0.03 mg／kg 6.16 ±.14* 95.0 ％ ６／６
【００３０】顕著な特性は化合物を通常の製薬配合手法
に従って製薬的に使用し得る担体を含む新規な医薬組成
物に処方する場合最も効果的に用いられる。新規な組成
物は活性化合物の少なくとも抗真菌又は抗ニューモシス
チス治療量を含有する。一般に組成物は少なくとも１重
量％の化合物Ｉを含有する。使用前の希釈に適した濃縮
組成物は９０重量％以上を含有することができる。組成
物としては経口、直腸、局所、非経口（皮下、筋肉及び
静脈内を含む）、肺（鼻又は口腔内吸入）、他の経鼻投
与又はガス吸入に適した組成物がある。組成物は化合物
Ｉを所望の媒体に適した成分と密接に混合することによ
って予め充填することができる。
に従って製薬的に使用し得る担体を含む新規な医薬組成
物に処方する場合最も効果的に用いられる。新規な組成
物は活性化合物の少なくとも抗真菌又は抗ニューモシス
チス治療量を含有する。一般に組成物は少なくとも１重
量％の化合物Ｉを含有する。使用前の希釈に適した濃縮
組成物は９０重量％以上を含有することができる。組成
物としては経口、直腸、局所、非経口（皮下、筋肉及び
静脈内を含む）、肺（鼻又は口腔内吸入）、他の経鼻投
与又はガス吸入に適した組成物がある。組成物は化合物
Ｉを所望の媒体に適した成分と密接に混合することによ
って予め充填することができる。
【００３１】化合物が抗真菌用である場合いかなる投与
方法を用いてもよい。真菌感染を治療する場合経口投与
がしばしば好適である。経口投与を用いる場合、液体組
成物によることができる。液体製剤に対しては治療用剤
は水、グリコール、油、アルコール等の液体担体と共に
カプセル剤及び錠剤のような固形製剤に対してはデンプ
ン、砂糖、カオリン、エチルセルロース、炭酸カルシウ
ム及びナトリウム、リン酸カルシウム、カオリン、タル
ク、ラクトースを一般にはステアリン酸カルシウムのよ
うな滑沢剤と結合剤、崩壊剤等と共に処方される。投与
の容易さのため錠剤及びカプセル剤が最も有利な経口投
薬形である。特に投与の容易さ及び投薬の均一性のため
に組成物を単位投薬形（以下で定義される）で処方する
ことが有利である。単位投与形態における組成物は本発
明の一面を構成する。化合物Ｉまた静脈又は腹腔注射用
の治療用組成物として処方することができ、必要な場合
防腐剤を添加したアンプル又は多回投与用容器の単位投
薬形とすることができる。組成物はまた水中０．８５％
塩化ナトリウム又は５％デキストロースのような油性又
は水性賦形剤中の懸濁液剤、液剤又は乳剤のような形を
取ることができ、懸濁剤、安定化剤及び／又は分散剤の
ような処方剤を含有させることができる。緩衝剤並びに
添加剤例えば食塩水又はグルコースは等張な液剤を調製
するために添加することができる。また滴注静脈内投与
の場合、薬剤をアルコール／プロピレングリコール又は
ポリエチレングリコールに可溶化することができる。ま
た活性成分を投与前に適当な賦形剤で再構成する粉末形
とすることができる。
方法を用いてもよい。真菌感染を治療する場合経口投与
がしばしば好適である。経口投与を用いる場合、液体組
成物によることができる。液体製剤に対しては治療用剤
は水、グリコール、油、アルコール等の液体担体と共に
カプセル剤及び錠剤のような固形製剤に対してはデンプ
ン、砂糖、カオリン、エチルセルロース、炭酸カルシウ
ム及びナトリウム、リン酸カルシウム、カオリン、タル
ク、ラクトースを一般にはステアリン酸カルシウムのよ
うな滑沢剤と結合剤、崩壊剤等と共に処方される。投与
の容易さのため錠剤及びカプセル剤が最も有利な経口投
薬形である。特に投与の容易さ及び投薬の均一性のため
に組成物を単位投薬形（以下で定義される）で処方する
ことが有利である。単位投与形態における組成物は本発
明の一面を構成する。化合物Ｉまた静脈又は腹腔注射用
の治療用組成物として処方することができ、必要な場合
防腐剤を添加したアンプル又は多回投与用容器の単位投
薬形とすることができる。組成物はまた水中０．８５％
塩化ナトリウム又は５％デキストロースのような油性又
は水性賦形剤中の懸濁液剤、液剤又は乳剤のような形を
取ることができ、懸濁剤、安定化剤及び／又は分散剤の
ような処方剤を含有させることができる。緩衝剤並びに
添加剤例えば食塩水又はグルコースは等張な液剤を調製
するために添加することができる。また滴注静脈内投与
の場合、薬剤をアルコール／プロピレングリコール又は
ポリエチレングリコールに可溶化することができる。ま
た活性成分を投与前に適当な賦形剤で再構成する粉末形
とすることができる。
【００３２】明細書及び特許請求の範囲で用いられる
“単位投薬形”とは物理的に分離している単位を意味
し、各単位は医薬担体と共に所望の治療効果を生じるよ
うに計算された活性成分の所定量を含有する。このよう
な単位投薬形の具体例は錠剤、カプセル剤、丸剤、粉末
包、オブラート包、アンプル又は多回投与用容器の計量
単位である。本発明の単位投薬量は一般に化合物の１種
を１００〜２００mg含有する。化合物をニューモシスチ
ス感染の制御に使用する場合には、直接肺や気管支を治
療することが望ましい。このため吸入法が好ましい。吸
入による投与の場合には、本発明の化合物は噴霧器の加
圧充填物からのエアロゾル噴霧の形体で供給するのが便
利である。化合物はまた処方することができる粉末とし
て供給することもでき、この粉末組成物は通気粉末吸入
装置によって吸入させることができる。吸入に好ましい
供給系は定量投与吸入（ＭＤＩ）エアロゾルでありフル
オロカーボン又は炭化水素のような適当な推進薬中の化
合物Ｉの懸濁液又は溶液として処方することができる。
“単位投薬形”とは物理的に分離している単位を意味
し、各単位は医薬担体と共に所望の治療効果を生じるよ
うに計算された活性成分の所定量を含有する。このよう
な単位投薬形の具体例は錠剤、カプセル剤、丸剤、粉末
包、オブラート包、アンプル又は多回投与用容器の計量
単位である。本発明の単位投薬量は一般に化合物の１種
を１００〜２００mg含有する。化合物をニューモシスチ
ス感染の制御に使用する場合には、直接肺や気管支を治
療することが望ましい。このため吸入法が好ましい。吸
入による投与の場合には、本発明の化合物は噴霧器の加
圧充填物からのエアロゾル噴霧の形体で供給するのが便
利である。化合物はまた処方することができる粉末とし
て供給することもでき、この粉末組成物は通気粉末吸入
装置によって吸入させることができる。吸入に好ましい
供給系は定量投与吸入（ＭＤＩ）エアロゾルでありフル
オロカーボン又は炭化水素のような適当な推進薬中の化
合物Ｉの懸濁液又は溶液として処方することができる。
【００３３】別の投与方法は特に感染が耳や他の体腔に
広がってしまう場合には通気法である。適用が局所であ
る場合には、薬剤は白色ワセリン、無水ラノリン、セチ
ルアルコール、コールドクリーム、グリセリルモノステ
アレート、ローズ水等の通常のクリーム剤及び軟膏で処
方される。通常１〜２％のクリーム又は溶液が調製さ
れ、治療される面に適用される。
広がってしまう場合には通気法である。適用が局所であ
る場合には、薬剤は白色ワセリン、無水ラノリン、セチ
ルアルコール、コールドクリーム、グリセリルモノステ
アレート、ローズ水等の通常のクリーム剤及び軟膏で処
方される。通常１〜２％のクリーム又は溶液が調製さ
れ、治療される面に適用される。
【００３４】次の実施例は本発明を具体的に説明するも
のであるが限定するものとして解釈すべきではない。 〔実施例１〕 変異株グラレアロゾエンシスＭＦ５５３３（ＡＴＣＣ７
４０３０）の調製 グラレアロゾエンシスＭＦ５４０４（ＡＴＣＣ２０９５
７）の凍結栄養菌糸体を２５０mlの三角フラスコに含有
したＫＦ種培地５０mlに接種し、Ｎ−メチル−Ｎ′−ニ
トロ−Ｎ−ニトロソグアニジン（ＮＴＧ）を最終濃度
７．５μｇ／mlになるまで加えた。このフラスコを２２
０rpm で２５℃に於て５日間振盪してＮＴＧの存在下で
発育する細胞を含有するブロスを得た。このブロスの一
部をジャガイモデキストロース寒天面に塗布し、プレー
トを２５℃で１４日間温置して微生物胞子を得た。この
胞子を回収、滅菌食塩水で希釈、ジャガイモデキストロ
ース寒天面に塗布してコロニー形成のために２５℃で７
日間温置した。各コロニーをジャガイモデキストロース
寒天の分離斜面に移植してコロニーを分離した。接種し
た斜面を２５℃で１４日間温置し、斜面による栓を別に
取り、ＫＦ培地２０mlに接種して種子を産生させ次に種
子２mlを用いてＳＰ−５培地４０mlに接種した後２５℃
で１４日間温置した。次にブロスをメタノールで抽出し
抽出液をＨＰＬＣにより化合物Ｘと他の成分の産生を試
験した。培養物４７−１９と称される斜面の１つを以下
に記載される生産で使用した。次いで培養物４７−１９
を再び分離し、メルクカルチュアコレクションにＭＦ５
５３３として保存した。
のであるが限定するものとして解釈すべきではない。 〔実施例１〕 変異株グラレアロゾエンシスＭＦ５５３３（ＡＴＣＣ７
４０３０）の調製 グラレアロゾエンシスＭＦ５４０４（ＡＴＣＣ２０９５
７）の凍結栄養菌糸体を２５０mlの三角フラスコに含有
したＫＦ種培地５０mlに接種し、Ｎ−メチル−Ｎ′−ニ
トロ−Ｎ−ニトロソグアニジン（ＮＴＧ）を最終濃度
７．５μｇ／mlになるまで加えた。このフラスコを２２
０rpm で２５℃に於て５日間振盪してＮＴＧの存在下で
発育する細胞を含有するブロスを得た。このブロスの一
部をジャガイモデキストロース寒天面に塗布し、プレー
トを２５℃で１４日間温置して微生物胞子を得た。この
胞子を回収、滅菌食塩水で希釈、ジャガイモデキストロ
ース寒天面に塗布してコロニー形成のために２５℃で７
日間温置した。各コロニーをジャガイモデキストロース
寒天の分離斜面に移植してコロニーを分離した。接種し
た斜面を２５℃で１４日間温置し、斜面による栓を別に
取り、ＫＦ培地２０mlに接種して種子を産生させ次に種
子２mlを用いてＳＰ−５培地４０mlに接種した後２５℃
で１４日間温置した。次にブロスをメタノールで抽出し
抽出液をＨＰＬＣにより化合物Ｘと他の成分の産生を試
験した。培養物４７−１９と称される斜面の１つを以下
に記載される生産で使用した。次いで培養物４７−１９
を再び分離し、メルクカルチュアコレクションにＭＦ５
５３３として保存した。
【００３５】〔実施例２〕化合物Ｉ発酵の生産 まず種培養を数段階で調製した。最初の段階としてＰ３
４−２培地５４mlに培養物４７−１９と暫定的に称した
グラレアロゾエンシスの凍結バイアルによる栓で接種
し、次に分離し、メルクカルチュアコレクションにＭＦ
５５３３として保存した。接種培地を振盪しながら２２
０rpm で２５℃に於て４日間温置した。この種培地の２
０ml試料を用いてＰ３４−２培地５００mlを含有する４
本の２リットルフラスコの各々に接種し、接種した培地
を２２０rpm で２５℃に於て４日間温置した。次にフラ
スコ内容物をプールし、Ｐ３４−２培地１８０リットル
と泡立ちを減少させるポリプロピレングリコールＰ−２
０００ ２ml／リットルを含有する３００リットルの種
発酵槽に接種した。発酵槽を温度２５℃、気流９０リッ
トル／分、圧力０．７kg／cm2 ゲージ及び撹拌速度２０
０rpm で６日間操作した。次にこの種子の２５リットル
試料を用いてＰ３４−２培地４７５リットルとＰ２００
０ ２ml／リットルを含有する８００リットルの種発酵
槽に接種し、２５℃、気流２５０リットル／分、圧力
０．７kg／cm2 ゲージ及び撹拌速度１５０rpm で４日間
培養した。こうして調製した種ブロス４２５リットルを
１９，０００リットルの生産発酵槽中のＴＧ１０６培地
１３，７００リットルに接種した。混合液の発酵は２５
℃の温度、気流６３００リットル／分、圧力０．７kg／
cm2 ゲージ及び撹拌速度８０rpm で行なった。pHを水酸
化ナトリウム又は硫酸を用いて初期値６．０〜５．５か
ら低下させた後５．５±０．２に維持した。培養を１２
日間続けた後ブロスを生産物単離のために回収した。
４−２培地５４mlに培養物４７−１９と暫定的に称した
グラレアロゾエンシスの凍結バイアルによる栓で接種
し、次に分離し、メルクカルチュアコレクションにＭＦ
５５３３として保存した。接種培地を振盪しながら２２
０rpm で２５℃に於て４日間温置した。この種培地の２
０ml試料を用いてＰ３４−２培地５００mlを含有する４
本の２リットルフラスコの各々に接種し、接種した培地
を２２０rpm で２５℃に於て４日間温置した。次にフラ
スコ内容物をプールし、Ｐ３４−２培地１８０リットル
と泡立ちを減少させるポリプロピレングリコールＰ−２
０００ ２ml／リットルを含有する３００リットルの種
発酵槽に接種した。発酵槽を温度２５℃、気流９０リッ
トル／分、圧力０．７kg／cm2 ゲージ及び撹拌速度２０
０rpm で６日間操作した。次にこの種子の２５リットル
試料を用いてＰ３４−２培地４７５リットルとＰ２００
０ ２ml／リットルを含有する８００リットルの種発酵
槽に接種し、２５℃、気流２５０リットル／分、圧力
０．７kg／cm2 ゲージ及び撹拌速度１５０rpm で４日間
培養した。こうして調製した種ブロス４２５リットルを
１９，０００リットルの生産発酵槽中のＴＧ１０６培地
１３，７００リットルに接種した。混合液の発酵は２５
℃の温度、気流６３００リットル／分、圧力０．７kg／
cm2 ゲージ及び撹拌速度８０rpm で行なった。pHを水酸
化ナトリウム又は硫酸を用いて初期値６．０〜５．５か
ら低下させた後５．５±０．２に維持した。培養を１２
日間続けた後ブロスを生産物単離のために回収した。
【００３６】〔実施例３〕化合物ＩＡの単離
【化４】 まず全ブロス３１００ガロンをメタノール１９００ガロ
ンで抽出した。このメタノール液を遠心分離によって清
澄化して第１抽出液として清澄化液４２５０ガロンと固
形物６５０ガロンを得た。後者をメタノール１５００ガ
ロンで再抽出し遠心分離して第２抽出液としての清澄化
液１５５０ガロンを得た。この遠心分離からの固形分を
８０％水性メタノール１５００ガロンで抽出し、遠心分
離して第３抽出液を得た。第１抽出液をＳＰ−２０７
（臭素化ポリスチレン−ジビニルベンゼン共重合体）吸
着カラムに装填し、６５％水性メタノールで洗浄した。
６５％メタノール洗液中にいくらかの生産物が通り抜け
ていることが認められた。６５％メタノール洗液と第１
ＳＰ−２０７カラムからの選択されたサイドアウト分は
９００ガロンになりこれを全ブロスからの第２及び第３
抽出液と合わせ全量４０５０ガロンの合わせた抽出液を
ＳＰ−２０７カラムに吸着させ１００％メタノールで溶
離した。第１ＳＰ−２０７カラムからのリッチカット溶
出液を希釈し、吸着し、ＨＰ−２０カラムから１００％
メタノールで溶離した。第２ＳＰ−２０７カラムからの
リッチカット流出液を合わせ、水で希釈し、２本のＨＰ
−２０カラムに吸着させ、１００％メタノールで溶離し
た。３つのＨＰ−２０リッチカット流出液を合わせ、水
で希釈した後吸着させ濃縮及び脱水のためにＳＰ−２０
７カラムから１００％メタノールで溶離した。リッチカ
ットを蒸留によって４倍濃縮した。前述のカラムからの
４倍濃縮液の５００mlに酢酸イソプロピル４．５リット
ルを加えて溶液に残存するＰ−２０００から沈殿する生
成物を分離した。次いで沈殿を分取用ＨＰＬＣ用に調製
して粒子サイズ２０μｍ、孔サイズ６０オングストロー
ムの‘MATREX’不規則シリカゲル（AMICON）３kgを充填
したプロクロムＬＣ１５０ＶＥ１５cmカラムを備えたド
ール−オリバーピークパーホーマーと同一の市販のカラ
ムで行なった。調製にはまず沈殿を濾過、真空乾燥して
２：２：１の酢酸エチル／メタノール／５％酢酸溶媒混
合液５５０mlに溶解した。次に溶媒組成を７６／１６／
８の酢酸エチル／メタノール／５％水性酢酸の供給組成
に調整し、直ちに混合液７１５mlを移動相８０／１０／
５の酢酸エチル／メタノール／５％水性酢酸を用いる流
速６０５ml／分のプロクラムＬＣ１５０ＶＥカラムに注
入し、２２の２リットル画分を集めた。画分１６を濃縮
乾固しその１００mgを８０：２０：２の塩化メチレン／
メタノール／水２mlに溶解した。この溶液を濾過して清
澄化し、この透明溶液を５０cm×２２．５ml WHATMANシ
リカゲルＨＰＬＣカラムに注入した。クロマトグラフィ
ーの移動相は８０：２０：２の塩化メチレン／メタノー
ル／水であり、流速１０ml／分とした。クロマトグラフ
ィーはＵＶ検出器を用いて２７６nmに於て更に画分の分
析用ＨＰＬＣによって監視した。両検出方法は化合物Ｉ
Ａ、ＩＢ及びＸの基線分離を示し、全て原混合液に存在
した。９つの同一注入液全部を上で示した方法で行ない
化合物ＩＡを含有する画分を合わせ、濃縮乾固し５０：
５０のメタノール／水１００mlに溶解した。この溶液を
ＨＰ−２０ ２０mlに吸着させ、メタノールで溶離し、
真空下で乾燥して化合物ＩＡ９１mgを得た。
ンで抽出した。このメタノール液を遠心分離によって清
澄化して第１抽出液として清澄化液４２５０ガロンと固
形物６５０ガロンを得た。後者をメタノール１５００ガ
ロンで再抽出し遠心分離して第２抽出液としての清澄化
液１５５０ガロンを得た。この遠心分離からの固形分を
８０％水性メタノール１５００ガロンで抽出し、遠心分
離して第３抽出液を得た。第１抽出液をＳＰ−２０７
（臭素化ポリスチレン−ジビニルベンゼン共重合体）吸
着カラムに装填し、６５％水性メタノールで洗浄した。
６５％メタノール洗液中にいくらかの生産物が通り抜け
ていることが認められた。６５％メタノール洗液と第１
ＳＰ−２０７カラムからの選択されたサイドアウト分は
９００ガロンになりこれを全ブロスからの第２及び第３
抽出液と合わせ全量４０５０ガロンの合わせた抽出液を
ＳＰ−２０７カラムに吸着させ１００％メタノールで溶
離した。第１ＳＰ−２０７カラムからのリッチカット溶
出液を希釈し、吸着し、ＨＰ−２０カラムから１００％
メタノールで溶離した。第２ＳＰ−２０７カラムからの
リッチカット流出液を合わせ、水で希釈し、２本のＨＰ
−２０カラムに吸着させ、１００％メタノールで溶離し
た。３つのＨＰ−２０リッチカット流出液を合わせ、水
で希釈した後吸着させ濃縮及び脱水のためにＳＰ−２０
７カラムから１００％メタノールで溶離した。リッチカ
ットを蒸留によって４倍濃縮した。前述のカラムからの
４倍濃縮液の５００mlに酢酸イソプロピル４．５リット
ルを加えて溶液に残存するＰ−２０００から沈殿する生
成物を分離した。次いで沈殿を分取用ＨＰＬＣ用に調製
して粒子サイズ２０μｍ、孔サイズ６０オングストロー
ムの‘MATREX’不規則シリカゲル（AMICON）３kgを充填
したプロクロムＬＣ１５０ＶＥ１５cmカラムを備えたド
ール−オリバーピークパーホーマーと同一の市販のカラ
ムで行なった。調製にはまず沈殿を濾過、真空乾燥して
２：２：１の酢酸エチル／メタノール／５％酢酸溶媒混
合液５５０mlに溶解した。次に溶媒組成を７６／１６／
８の酢酸エチル／メタノール／５％水性酢酸の供給組成
に調整し、直ちに混合液７１５mlを移動相８０／１０／
５の酢酸エチル／メタノール／５％水性酢酸を用いる流
速６０５ml／分のプロクラムＬＣ１５０ＶＥカラムに注
入し、２２の２リットル画分を集めた。画分１６を濃縮
乾固しその１００mgを８０：２０：２の塩化メチレン／
メタノール／水２mlに溶解した。この溶液を濾過して清
澄化し、この透明溶液を５０cm×２２．５ml WHATMANシ
リカゲルＨＰＬＣカラムに注入した。クロマトグラフィ
ーの移動相は８０：２０：２の塩化メチレン／メタノー
ル／水であり、流速１０ml／分とした。クロマトグラフ
ィーはＵＶ検出器を用いて２７６nmに於て更に画分の分
析用ＨＰＬＣによって監視した。両検出方法は化合物Ｉ
Ａ、ＩＢ及びＸの基線分離を示し、全て原混合液に存在
した。９つの同一注入液全部を上で示した方法で行ない
化合物ＩＡを含有する画分を合わせ、濃縮乾固し５０：
５０のメタノール／水１００mlに溶解した。この溶液を
ＨＰ−２０ ２０mlに吸着させ、メタノールで溶離し、
真空下で乾燥して化合物ＩＡ９１mgを得た。
【００３７】〔実施例４〕化合物ＩＢの単離
【化５】 実施例３の第３ＳＰ−２０７カラムからの残りの４倍濃
縮液を酢酸イソプロピル１０倍容量に加えて化合物Ｘ、
ＩＡ及びＩＢを沈殿させた。沈殿を遠心分離によって集
め、物質を８５：１０：５酢酸エチル／メタノール／５
％水性酢酸で溶離される４本の５００mlシリカゲルカラ
ムでクロマトグラフィー処理した。化合物ＩＢ６０ｇ及
び化合物ＩＡ２０ｇ（ＨＰＬＣにより定量）を含有する
シリカゲルカラムの１つの混成試料を同様の方法で行な
われる１５０リットルシリカカラムでクロマトグラフィ
ー処理した。４つの５０ガロン画分を集め、次に２３の
１５ガロン画分を集めた。化合物ＩＢを多く含んだ（Ｈ
ＰＬＣにより定量した場合＞９５％）１５ガロン画分の
１つを濃縮乾固し、酢酸エチル／メタノール／水（７６
／１６／８）に溶解し、更に８５／１０／５の酢酸エチ
ル／メタノール／５％水性酢酸で溶離した。リッチカッ
トを合わせ、濃縮、５０／５０のMeOH／H2Oに再び溶解
し、４０mlのＨＰ−２０カラムで脱ケイ酸した。化合物
ＩＢを１００％ MeOH で溶離した。化合物ＩＢのカット
リッチを合わせ、回転蒸発器にかけてメタノールを蒸発
させ、水溶液を得、凍結乾燥して化合物ＩＢを白色粉末
として得た。白色粉末は前で化合物ＩＢとして示したス
ペクトル特性を有した。
縮液を酢酸イソプロピル１０倍容量に加えて化合物Ｘ、
ＩＡ及びＩＢを沈殿させた。沈殿を遠心分離によって集
め、物質を８５：１０：５酢酸エチル／メタノール／５
％水性酢酸で溶離される４本の５００mlシリカゲルカラ
ムでクロマトグラフィー処理した。化合物ＩＢ６０ｇ及
び化合物ＩＡ２０ｇ（ＨＰＬＣにより定量）を含有する
シリカゲルカラムの１つの混成試料を同様の方法で行な
われる１５０リットルシリカカラムでクロマトグラフィ
ー処理した。４つの５０ガロン画分を集め、次に２３の
１５ガロン画分を集めた。化合物ＩＢを多く含んだ（Ｈ
ＰＬＣにより定量した場合＞９５％）１５ガロン画分の
１つを濃縮乾固し、酢酸エチル／メタノール／水（７６
／１６／８）に溶解し、更に８５／１０／５の酢酸エチ
ル／メタノール／５％水性酢酸で溶離した。リッチカッ
トを合わせ、濃縮、５０／５０のMeOH／H2Oに再び溶解
し、４０mlのＨＰ−２０カラムで脱ケイ酸した。化合物
ＩＢを１００％ MeOH で溶離した。化合物ＩＢのカット
リッチを合わせ、回転蒸発器にかけてメタノールを蒸発
させ、水溶液を得、凍結乾燥して化合物ＩＢを白色粉末
として得た。白色粉末は前で化合物ＩＢとして示したス
ペクトル特性を有した。
【００３８】〔実施例５〕種フラスコからの種子を用い
てＴＧ−１０６培地４０mlに接種し、これを振盪しなが
ら２５℃で１４日間温置したほかは実施例１のＡ部と同
様の方法でＭＦ５４０４から変異株ＭＦ５５３３を得
た。
てＴＧ−１０６培地４０mlに接種し、これを振盪しなが
ら２５℃で１４日間温置したほかは実施例１のＡ部と同
様の方法でＭＦ５４０４から変異株ＭＦ５５３３を得
た。
【００３９】〔実施例６〕各々に化合物１Ａ５００mgを
含有する１０００個の錠剤を次の処方で調製する。 微粉末の成分を十分に混合し、１０％デンプンペースト
と顆粒にする。顆粒を乾燥し、錠剤に圧縮する。
含有する１０００個の錠剤を次の処方で調製する。 微粉末の成分を十分に混合し、１０％デンプンペースト
と顆粒にする。顆粒を乾燥し、錠剤に圧縮する。
【００４０】〔実施例７〕各々に化合物ＩＢ５００mgを
含有する１０００個の硬ゼラチンカプセルを次の方法で
調製する。 これらの成分の均一な混合物を混和により調製し２ピー
スの硬ゼラチンカプセルに充填するために使用した。
含有する１０００個の硬ゼラチンカプセルを次の方法で
調製する。 これらの成分の均一な混合物を混和により調製し２ピー
スの硬ゼラチンカプセルに充填するために使用した。
【００４１】〔実施例８〕次の処方を有する注射用懸濁
液２５０mlを通常の方法によって調製する。 ５％ＤＭＳＯ／水 ２５０ml 化合物ＩＢ ４００mg これらの成分を混和した後使用のために滅菌する。
液２５０mlを通常の方法によって調製する。 ５％ＤＭＳＯ／水 ２５０ml 化合物ＩＢ ４００mg これらの成分を混和した後使用のために滅菌する。
【００４２】〔実施例９〕化合物１Ａ１３mgを市販のポ
リエチレン／炭化水素ゲル１ｇに緊密に分散させること
によって局所適用に適当な軟膏を調製することができ
る。
リエチレン／炭化水素ゲル１ｇに緊密に分散させること
によって局所適用に適当な軟膏を調製することができ
る。
【００４３】〔実施例１０〕次の処方を有するエアロゾ
ル組成物を調製することができる。 缶当たり 化合物ＩＢ ２４mg レシチンＮＦ、液状濃縮物 １．２mg トリクロロフルオロメタン ４．０２５ｇ ジクロロデフルオロメタン １２．１５ｇ
ル組成物を調製することができる。 缶当たり 化合物ＩＢ ２４mg レシチンＮＦ、液状濃縮物 １．２mg トリクロロフルオロメタン ４．０２５ｇ ジクロロデフルオロメタン １２．１５ｇ
【００４４】ＭＦ５４０４の調製 培養グラレアロゾエンシスＡＴＣＣ２０８６８をペトリ
皿中のジャガイモデキストロース寒天上で２５℃に於て
３週間増殖させた。０．３Ｍトリス緩衝液pH７、１０ml
をペトリ皿に加え、胞子を滅菌綿棒で緩衝液に表面をこ
すり取った。緩衝液中の浮遊液をデカントで取り除きこ
の手順を２回繰り返した。胞子浮遊物を合わせ、ガラス
ウールで濾過して大きな胞子集団を取り出した。浮遊物
の濾液をまず６００rpm 、次に７００rpm 、最後に８０
０rpm で各々３分間遠心分離し、各々遠心分離した後沈
降物を捨てた。次いで第３の遠心分離からの上清液を３
０００rpm で５分間遠心分離した。この遠心分離からの
浮遊液を０．３Ｍトリス緩衝液３mlに再浮遊させ、変異
誘発処理に使用した。この浮遊液は１０3 〜１０4胞子
／mlを含有した。胞子浮遊液にＮ−ニトロソ−Ｎ−メチ
ルウレタン１００μｇ／mlを加え、得られた混合液を３
００rpm に於て室温で２０分間振盪した。この時間の終
わりに混合液を遠心分離し、上清液を除去した。沈降物
を０．３Ｍトリス緩衝液pH７．０で２回洗浄した後、同
じ緩衝液に再浮遊させ適当に希釈した後分離コロニーを
形成させるためにジャガイモデキストロース寒天に塗布
した。プレートをコロニー形成のために２５℃で２週間
温置した。コロニーをジャガイモデキストロース寒天の
斜面に別々に移植することによって単離した。接種した
斜面を２５℃で１０〜１４日間温置し、斜面による栓を
取り発酵に於ける化合物Ｘ及び他の成分の生産をＨＰＬ
Ｃ検定によって評価した。最初にＺ７−９と称した斜面
の１つによる栓をメルクカルチュアコレクションにＭＦ
５４０４として入れ、アメリカンタイプカルチュアコレ
クションにＡＴＣＣ２０９５７として寄託した。
皿中のジャガイモデキストロース寒天上で２５℃に於て
３週間増殖させた。０．３Ｍトリス緩衝液pH７、１０ml
をペトリ皿に加え、胞子を滅菌綿棒で緩衝液に表面をこ
すり取った。緩衝液中の浮遊液をデカントで取り除きこ
の手順を２回繰り返した。胞子浮遊物を合わせ、ガラス
ウールで濾過して大きな胞子集団を取り出した。浮遊物
の濾液をまず６００rpm 、次に７００rpm 、最後に８０
０rpm で各々３分間遠心分離し、各々遠心分離した後沈
降物を捨てた。次いで第３の遠心分離からの上清液を３
０００rpm で５分間遠心分離した。この遠心分離からの
浮遊液を０．３Ｍトリス緩衝液３mlに再浮遊させ、変異
誘発処理に使用した。この浮遊液は１０3 〜１０4胞子
／mlを含有した。胞子浮遊液にＮ−ニトロソ−Ｎ−メチ
ルウレタン１００μｇ／mlを加え、得られた混合液を３
００rpm に於て室温で２０分間振盪した。この時間の終
わりに混合液を遠心分離し、上清液を除去した。沈降物
を０．３Ｍトリス緩衝液pH７．０で２回洗浄した後、同
じ緩衝液に再浮遊させ適当に希釈した後分離コロニーを
形成させるためにジャガイモデキストロース寒天に塗布
した。プレートをコロニー形成のために２５℃で２週間
温置した。コロニーをジャガイモデキストロース寒天の
斜面に別々に移植することによって単離した。接種した
斜面を２５℃で１０〜１４日間温置し、斜面による栓を
取り発酵に於ける化合物Ｘ及び他の成分の生産をＨＰＬ
Ｃ検定によって評価した。最初にＺ７−９と称した斜面
の１つによる栓をメルクカルチュアコレクションにＭＦ
５４０４として入れ、アメリカンタイプカルチュアコレ
クションにＡＴＣＣ２０９５７として寄託した。
【００４５】配列番号：１ 配列の長さ：６ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：ＮＡ トポロジー：環状
【００４６】配列番号：２ 配列の長さ：６ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：ＮＡ トポロジー：環状
【００４７】配列番号：３ 配列の長さ：６ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：ＮＡ トポロジー：環状
【図１】化合物ＩＡの 1Ｈ−ＮＭＲスペクトルチャート
である。
である。
【図２】化合物ＩＢの 1Ｈ−ＮＭＲスペクトルチャート
である。
である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ Ｃ１２Ｐ 21/04 ＺＮＡ Ａ６１Ｋ 37/02 //(Ｃ１２Ｎ 1/14 Ｃ１２Ｒ 1:645） (Ｃ１２Ｐ 21/04 Ｃ１２Ｒ 1:645） (72)発明者 プラカシュ エス．マシュレカー アメリカ合衆国，07060 ニュージャー シィ，ウオーレン，クリスティ ドライ ヴ 35 (72)発明者 ジェロルド エム．リーシュ アメリカ合衆国，08850 ニュージャー シィ，プリンストン ジャンクション, シェーブルック ドライヴ 10 (72)発明者 トマス シー．ハラダ アメリカ合衆国，07090 ニュージャー シィ，ウエストフィールド，サンドラ サークル 25 (72)発明者 オットー デー．ヘンセンズ アメリカ合衆国，07701 ニュージャー シィ，レッド バンク，リヴァー プラ ザ，アレキサンダー ドライヴ 65 (72)発明者 ディヴィッド エフ．セシン アメリカ合衆国，07065 ニュージャー シィ，ローウェイ，モンゴメリー スト リート 1948 (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) C07K 7/56 C12P 21/00 - 21/04 C12N 1/14 ＣＡ（ＳＴＮ) ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ) ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ) ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ)
Claims (9)
- 【請求項１】 式 【化１】 （式中Ｒは水素又はヒドロキシルである）を有する化合
物。 - 【請求項２】 Ｒが水素である請求項１記載の化合物。
- 【請求項３】 Ｒがヒドロキシルである請求項１記載の
化合物。 - 【請求項４】 製薬的に使用し得る担体と混和した請求
項１記載の化合物を包含している組成物。 - 【請求項５】 更にフルオロカーボン推進薬を含有する
請求項４記載の組成物。 - 【請求項６】 好気的条件下同化される炭素、窒素源及
び無機塩を含有する栄養培地中でグラレアロゾエンシス
ＭＦ５５３３（ＡＴＣＣ７４０３０）を十分量の化合物
が産生されるまで培養した後、生産物を培地から分離す
ることを特徴とする請求項１記載の化合物の生産方法。 - 【請求項７】 請求項１記載の化合物を生産するグラレ
アロゾエンシスＭＦ５５３３（ＡＴＣＣ７４０３０）。 - 【請求項８】 請求項１記載の化合物からなるニューモ
シスチスカリニイ感染治療剤。 - 【請求項９】 請求項１記載の化合物からなる真菌感染
症治療剤。
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| CN102618604B (zh) * | 2011-01-31 | 2014-09-03 | 上海天伟生物制药有限公司 | 一种环脂肽化合物的制备方法 |
| WO2019207413A1 (en) | 2018-04-25 | 2019-10-31 | Universidad De La República (Udelar) | Cyclic hexapeptides compounds with anti-malarial activity |
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|---|---|---|---|---|
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| DK173802B1 (da) * | 1988-09-12 | 2001-11-05 | Merck & Co Inc | Præparat til behandling af Pneumocystis carinii infeksioner og anvendelse af et cyclohexapeptid til fremstilling af et lægemiddel mod Pneumocystis carinii infektioner |
| US5021341A (en) * | 1990-03-12 | 1991-06-04 | Merck & Co., Inc. | Antibiotic agent produced by the cultivation of Zalerion microorganism in the presence of mannitol |
-
1990
- 1990-12-19 US US07/630,457 patent/US5306708A/en not_active Expired - Fee Related
-
1991
- 1991-12-11 EP EP91311530A patent/EP0494515B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1991-12-11 AT AT91311530T patent/ATE111487T1/de not_active IP Right Cessation
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- 1991-12-16 CA CA002057711A patent/CA2057711C/en not_active Expired - Fee Related
- 1991-12-18 IE IE441891A patent/IE914418A1/en not_active Application Discontinuation
- 1991-12-19 JP JP3335432A patent/JP3067869B2/ja not_active Expired - Fee Related
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| ATE111487T1 (de) | 1994-09-15 |
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| DE69104022T2 (de) | 1995-04-13 |
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