JPH08196281A - 水生成型ｎａｄｈオキシダーゼをコードするｄｎａ - Google Patents
水生成型ｎａｄｈオキシダーゼをコードするｄｎａInfo
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- JPH08196281A JPH08196281A JP7012617A JP1261795A JPH08196281A JP H08196281 A JPH08196281 A JP H08196281A JP 7012617 A JP7012617 A JP 7012617A JP 1261795 A JP1261795 A JP 1261795A JP H08196281 A JPH08196281 A JP H08196281A
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- nadh
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- Saccharide Compounds (AREA)
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 遺伝子組換え技術を用いることにより、水生
成型ＮＡＤＨオキシダーゼの生産性向上に利用できるＮ
ＡＤＨオキシダーゼをコードする遺伝子の提供。 【構成】 水生成型ＮＡＤＨオキシダーゼをコードする
ＤＮＡ。
成型ＮＡＤＨオキシダーゼの生産性向上に利用できるＮ
ＡＤＨオキシダーゼをコードする遺伝子の提供。 【構成】 水生成型ＮＡＤＨオキシダーゼをコードする
ＤＮＡ。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明はＮＡＤＨを分子状酸素に
より酸化して水を生成する反応を触媒する酵素をコード
するＤＮＡ断片及び該断片を含むプラスミドを導入した
微生物を用いて該酵素の製造に関するもので、ＮＡＤＨ
生成反応を利用した生体微量物質の検出、またＮＡＤＨ
を補酵素とする各種デヒドロゲナーゼ反応を利用したリ
アクターに有用である。
より酸化して水を生成する反応を触媒する酵素をコード
するＤＮＡ断片及び該断片を含むプラスミドを導入した
微生物を用いて該酵素の製造に関するもので、ＮＡＤＨ
生成反応を利用した生体微量物質の検出、またＮＡＤＨ
を補酵素とする各種デヒドロゲナーゼ反応を利用したリ
アクターに有用である。
【０００２】
【従来の技術】ＮＡＤＨオキシダーゼには、分子状酸素
と反応して水を生成するものと過酸化水素を生成するも
のがある。水生成型酵素は、ストレプトコッカス・ミュ
ータンスを培養することにより、その生産物中に見出す
ことができるが、通常の培養を行ったとき、安定な培養
条件が得難く、また過酸化水素生成型との分離が必要で
ある。そこで合理的かつ理論的に水生成型ＮＡＤＨオキ
シダーゼの生産性を高める製造法、すなわち遺伝子組換
え技術を用いたＮＡＤＨオキダーゼの製造法が望まれて
いる。
と反応して水を生成するものと過酸化水素を生成するも
のがある。水生成型酵素は、ストレプトコッカス・ミュ
ータンスを培養することにより、その生産物中に見出す
ことができるが、通常の培養を行ったとき、安定な培養
条件が得難く、また過酸化水素生成型との分離が必要で
ある。そこで合理的かつ理論的に水生成型ＮＡＤＨオキ
シダーゼの生産性を高める製造法、すなわち遺伝子組換
え技術を用いたＮＡＤＨオキダーゼの製造法が望まれて
いる。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】水生成型ＮＡＤＨオキ
シダーゼの生産性を高めるためには、ストレプトコッカ
ス・ミュータンスを用いた従来の方法では不十分であ
る。そこで本発明は、遺伝子組換え技術を用いることに
よりＮＡＤＨオキシダーゼの生産性の向上に利用できる
ＮＡＤＨオキシダーゼをコードする遺伝子を提供するこ
とを目的とする。
シダーゼの生産性を高めるためには、ストレプトコッカ
ス・ミュータンスを用いた従来の方法では不十分であ
る。そこで本発明は、遺伝子組換え技術を用いることに
よりＮＡＤＨオキシダーゼの生産性の向上に利用できる
ＮＡＤＨオキシダーゼをコードする遺伝子を提供するこ
とを目的とする。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、水生成型
ＮＡＤＨオキシダーゼの有利な製造方法を開発するため
に、鋭意研究を進めた結果、ストレプトコッカス・ミュ
ータンス菌体内水生成型ＮＡＤＨオキシダーゼ遺伝子を
クローン化し且つそのＤＮＡ塩基配列を決定するのに成
功し、本発明を完成するに至った。
ＮＡＤＨオキシダーゼの有利な製造方法を開発するため
に、鋭意研究を進めた結果、ストレプトコッカス・ミュ
ータンス菌体内水生成型ＮＡＤＨオキシダーゼ遺伝子を
クローン化し且つそのＤＮＡ塩基配列を決定するのに成
功し、本発明を完成するに至った。
【０００５】本発明は、水生成型ＮＡＤＨオキシダーゼ
をコードするＤＮＡを提供する。また、本発明は下記の
ＮＡＤＨ結合部位を含むアミノ酸配列で特定される水生
成型ＮＡＤＨオキシダーゼをコードするＤＮＡを提供す
る。
をコードするＤＮＡを提供する。また、本発明は下記の
ＮＡＤＨ結合部位を含むアミノ酸配列で特定される水生
成型ＮＡＤＨオキシダーゼをコードするＤＮＡを提供す
る。
【０００６】
【化８】Gly Ala Gly Tyr Ile Gly
【０００７】特に本発明は、下記のＮＡＤＨ結合部位を
含む塩基配列で特定される水生成型ＮＡＤＨオキシダー
ゼをコードするＤＮＡを提供する。
含む塩基配列で特定される水生成型ＮＡＤＨオキシダー
ゼをコードするＤＮＡを提供する。
【０００８】
【化９】GGTGCTGGTT ATATTGGT
【０００９】更に本発明は下記のＦＡＤ結合部位を含む
アミノ酸配列で特定される水生成型ＮＡＤＨオキシダー
ゼをコードするＤＮＡを提供する。
アミノ酸配列で特定される水生成型ＮＡＤＨオキシダー
ゼをコードするＤＮＡを提供する。
【００１０】
【化１０】Gly Ala Asn His Ala Gly
【００１２】
【化１１】GGAGCTAACC ATGCAGGT
【００１３】更にまた、本発明は下記の塩基配列で特定
される水生成型ＮＡＤＨオキシダーゼをコードするＤＮ
Ａを提供する。
される水生成型ＮＡＤＨオキシダーゼをコードするＤＮ
Ａを提供する。
【００１４】
【化１２】 ATGAGTAAAA TCGTTATTGT TGGAGCTAAC CATGCAGGTA CAGCTGCCAT TAATACTATT CTAGATAATT ACGGTAGTGA AAACGAAGTT GTCGTTTTTG ACCAAAATTC TAATATTTCA TTCTTGGGTT GTGGAATGGC ACTTTGGATT GGAAAACAAA TATCAGGCCC TCAAGGTCTT TTTTATGCTG ACAAGGAATC GTTAGAAGCA AAAGGTGCTA AAATTTATAT GGAATCGCCA GTGACAGCCA TTGATTATGA TGCTAAGAGG GTTACTGCTT TGGTCAATGG TCAAGAACAT GTTGAAAGCT ATGAGAAGCT TATTTTGGCA ACAGGATCAA CACCAATCTT ACCACCTATC AAAGGTGCAG CTATCAAAGA AGGTAGTCGT GATTTTGAAG CAACTTTGAA AAATCTTCAA TTTGTTAAAT TGTATCAAAA TGCAGAAGAT GTTATTAATA AATTACAGGA TAAGAGTCAA AATCTGAATC GTATTGCTGT TGTTGGTGCT GGTTATATTG GTGTAGAACT TGCTGAAGCC TTTAAACGCC TCGGAAAAGA AGTGATTCTT ATTGATGTTG TTGATACTTG CTTAGCTGGT TATTATGATC AGGATCTTTC AGAAATGATG CGTCAAAATT TGGAAGATCA TGGTATTGAA TTAGCATTCG GAGAAACTGT CAAAGCCATT GAAGGTGATG GTAAAGTCGA ACGTATTGTA ACTGATAAAG CGAGCCATGA TGTGGATATG GTTATTTTAG CTGTCGGTTT CCGTCCTAAT ACTGCACTTG GCAACGCTAA ACTCAAAACC TTCCGTAATG GTGCTTTCCT TGTTGATAAA AAACAAGAGA CAAGTATTCC TGACGTTTAT GCCATCGGCG ATTGCGCGAC TGTTTATGAC AACGCTATTA ATGATACCAA TTATATTGCC TTAGCTTCAA ACGCTCTTCG CTCAGGTATT GTAGCTGGTC ATAATGCAGC AGGGCATAAA TTGGAATCTC TTGGTGTTCA AGGTTCAAAT GGTATTTCAA TTTTTGGTCT CAATATGGTT TCAACTGGGT TAACACAAGA AAAAGCAAAG CGTTTTGGCT ATAATCCAGA AGTCACTGCA TTTACAGATT TTCAGAAGGC TAGTTTTATT GAACATGATA ATTATCCTGT TACACTTAAA ATTGTCTATG ATAAGGATAG CCGACTGGTT CTTGGTGCAC AAATGGCATC TAAAGAAGAT ATGTCAATGG GAATTCATAT GTTTTCATTG GCTATTCAGG AAAAAGTTAC CATTGAACGT TTAGCTCTAC TGGACTATTT CTTTCTTCCT CATTTCAATC AACCCTATAA TTATATGACC AAAGCAGCAT TAAAAGCTAA A
【００１５】特に、本発明は下記のアミノ酸配列で特定
される水生成型ＮＡＤＨオキシダーゼをコードするＤＮ
Ａを提供する。
される水生成型ＮＡＤＨオキシダーゼをコードするＤＮ
Ａを提供する。
【００１６】
【化１３】 MSKIVIVGAN HAGTAAINTI LDNYGSENEV VVFDQNSNIS FLGCGMALWI GKQISGPQGL 60 FYADKESLEA KGAKIYMESP VTAIDYDAKR VTALVNGQEH VESYEKLILA TGSTPILPPI 120 KGAAIKEGSR DFEATLKNLQ FVKLYQNAED VINKLQDKSQ NLNRIAVVGA GYIGVELAEA 180 FKRLGKEVIL IDVVDTCLAG YYDQDLSEMM RQNLEDHGIE LAFGETVKAI EGDGKVERIV 240 TDKASHDVDM VILAVGFRPN TALGNAKLKT FRNGAFLVDK KQETSIPDVY AIGDCATVYD 300 NAINDTNYIA LASNALRSGI VAGHNAAGHK LESLGVQGSN GISIFGLNMV STGLTQEKAK 360 RFGYNPEVTA FTDFQKASFI EHDNYPVTLK IVYDKDSRLV LGAQMASKED MSMGIHMFSL 420 AIQEKVTIER LALLDYFFLP HFNQPYNYMT KAALKAK 457
【００１７】本発明のＤＮＡの上流には、非翻訳領域と
して、以下の塩基配列が存在する。
して、以下の塩基配列が存在する。
【００１８】
【化１４】 TTAATTATAT TAAATCAAAA TAAAAATTTA AAATCACTCG ATATACAATC TTGTTTGAAT AGCTCTTGAA AGCTAGCAAT CAGGAACTTA TATATTGAGT GATTTTTTGA TTCCTTATCA ATTGTAAATT ATAGTAGAGA AGTCCATTTT GGAGATTATA AAGTTATTTT TATGAAAGAT GAGCATATTC TTTGTAAGCG TTTCAACCTC ATGCTATACT AATGAAGTAA TAATTAGATT ATATTGAAAA GAGGATTTGC TT
【００１９】本発明に係わる水生成型ＮＡＤＨオキシダ
ーゼをコードする遺伝子のクローニングは、常法に従
い、例えば次の様にして行う。先ず、水生成型ＮＡＤＨ
オキシダーゼ生産能を有する微生物より染色体ＤＮＡを
調製し、この染色体ＤＮＡを、適当な制限酵素で切断し
て得たＤＮＡ断片と、同様にしてベクターを切断して得
たベクター断片とを、例えば、Ｔ４リガーゼなどにより
結合させ、ＮＡＤＨオキシダーゼ遺伝子を含む組換えＤ
ＮＡを形成する。
ーゼをコードする遺伝子のクローニングは、常法に従
い、例えば次の様にして行う。先ず、水生成型ＮＡＤＨ
オキシダーゼ生産能を有する微生物より染色体ＤＮＡを
調製し、この染色体ＤＮＡを、適当な制限酵素で切断し
て得たＤＮＡ断片と、同様にしてベクターを切断して得
たベクター断片とを、例えば、Ｔ４リガーゼなどにより
結合させ、ＮＡＤＨオキシダーゼ遺伝子を含む組換えＤ
ＮＡを形成する。
【００２０】クローニングによって得られたＮＡＤＨオ
キシダーゼ遺伝子をコードするＤＮＡを制限酵素で切断
した後、クローニングベクターと結合し、これを宿主微
生物に導入し、目的とする形質転換体をスクリーニング
すること等により、常法に従ってＮＡＤＨオキシダーゼ
遺伝子をクローン化することができる。
キシダーゼ遺伝子をコードするＤＮＡを制限酵素で切断
した後、クローニングベクターと結合し、これを宿主微
生物に導入し、目的とする形質転換体をスクリーニング
すること等により、常法に従ってＮＡＤＨオキシダーゼ
遺伝子をクローン化することができる。
【００２１】クローニング法としては、具体的には、ス
トレプトコッカス・ミュータンスＮＣＩＢ１１７２３(S
treptococcus mutans ＮＣＩＢ１１７２３)を炭素源、
窒素源、無機塩類、その他の栄養素を程よく含有する培
地で培養し遠心分離して菌体を集める。培養培地の好適
な例としては、ブレインハートインフージョン培地が挙
げられる。培養温度は２０〜４０℃、好ましくは３０〜
３７℃の範囲、培養開始pHは６〜８、好ましくは７付近
で、対数増殖期中期まで静置培養する。目的とするＤＮ
Ａは、得られた菌体を溶菌させることによって調製する
ことができる。
トレプトコッカス・ミュータンスＮＣＩＢ１１７２３(S
treptococcus mutans ＮＣＩＢ１１７２３)を炭素源、
窒素源、無機塩類、その他の栄養素を程よく含有する培
地で培養し遠心分離して菌体を集める。培養培地の好適
な例としては、ブレインハートインフージョン培地が挙
げられる。培養温度は２０〜４０℃、好ましくは３０〜
３７℃の範囲、培養開始pHは６〜８、好ましくは７付近
で、対数増殖期中期まで静置培養する。目的とするＤＮ
Ａは、得られた菌体を溶菌させることによって調製する
ことができる。
【００２２】溶菌方法は、例えばリゾチームやα−グル
カナーゼなどの細胞壁溶解酵素による処理などが用いら
れる。また、必要により他の酵素剤やラウリル硫酸ナト
リウムなどの界面活性剤が併用される。
カナーゼなどの細胞壁溶解酵素による処理などが用いら
れる。また、必要により他の酵素剤やラウリル硫酸ナト
リウムなどの界面活性剤が併用される。
【００２３】このようにして得られる溶菌物からＤＮＡ
を分離、精製するには、常法に従って、例えばフェノー
ル抽出、除蛋白処理、プロテアーゼ処理、リボヌクレア
ーゼ処理、アルコール沈澱、遠心分離などの方法を適宜
組み合わせることによって行うことができる。
を分離、精製するには、常法に従って、例えばフェノー
ル抽出、除蛋白処理、プロテアーゼ処理、リボヌクレア
ーゼ処理、アルコール沈澱、遠心分離などの方法を適宜
組み合わせることによって行うことができる。
【００２４】ＤＮＡを切断する方法は、例えば、超音波
処理、制限酵素処理などにより行うことができる。切断
後、必要に応じてホスファターゼやＤＮＡポリメラーゼ
などの修飾酵素で処理してＤＮＡ断片末端の塩基配列を
変えることができる。切断されたＤＮＡから目的たんぱ
くをコードする塩基配列を持つＤＮＡ断片を得るには、
例えば目的たんぱくのアミノ酸配列を基に合成した合成
プローブを用いて、電気泳動したゲルでサザンハイブリ
ダイゼーション（Sauthern, E.M., J.Mol. Biol., 98,
503, (1975)） を行い、反応するＤＮＡ断片を抽出する
ことによって適当な長さの断片のみが得られる。
処理、制限酵素処理などにより行うことができる。切断
後、必要に応じてホスファターゼやＤＮＡポリメラーゼ
などの修飾酵素で処理してＤＮＡ断片末端の塩基配列を
変えることができる。切断されたＤＮＡから目的たんぱ
くをコードする塩基配列を持つＤＮＡ断片を得るには、
例えば目的たんぱくのアミノ酸配列を基に合成した合成
プローブを用いて、電気泳動したゲルでサザンハイブリ
ダイゼーション（Sauthern, E.M., J.Mol. Biol., 98,
503, (1975)） を行い、反応するＤＮＡ断片を抽出する
ことによって適当な長さの断片のみが得られる。
【００２５】ベクターとしては、宿主微生物で自律的に
増殖できるファージやプラスミド、例えばエッシェリヒ
ア コリ（Escherichia coli） を宿主微生物にする場
合には、λファージや M13 ファージ、またpBR322、pUC
118、pUC119 などが使用できる。ＤＮＡ断片とベクター
断片とを結合させる方法は、公知のＤＮＡリガーゼを用
いる方法であればよく、例えばＤＮＡ断片とベクター断
片を生体外で適当なＤＮＡリガーゼの作用により組換え
ＤＮＡを作成する。
増殖できるファージやプラスミド、例えばエッシェリヒ
ア コリ（Escherichia coli） を宿主微生物にする場
合には、λファージや M13 ファージ、またpBR322、pUC
118、pUC119 などが使用できる。ＤＮＡ断片とベクター
断片とを結合させる方法は、公知のＤＮＡリガーゼを用
いる方法であればよく、例えばＤＮＡ断片とベクター断
片を生体外で適当なＤＮＡリガーゼの作用により組換え
ＤＮＡを作成する。
【００２６】宿主微生物としては、組換えＤＮＡが安定
かつ自律的増殖が可能で、その形質発現のできるもので
あればどのようなものでもよい。宿主微生物に組換えＤ
ＮＡを導入する方法は、公知の方法、例えば宿主微生物
がエッシェリヒア コリの場合にはカルシウム法（Lede
rberg, E. M., & Cohen,S. N., J. Bacteriol., 119, 1
072, (1974)） などを採用することができる。
かつ自律的増殖が可能で、その形質発現のできるもので
あればどのようなものでもよい。宿主微生物に組換えＤ
ＮＡを導入する方法は、公知の方法、例えば宿主微生物
がエッシェリヒア コリの場合にはカルシウム法（Lede
rberg, E. M., & Cohen,S. N., J. Bacteriol., 119, 1
072, (1974)） などを採用することができる。
【００２７】λファージであれば、インビトロパッケー
ジンク法（Horn, B., Methods in Enzymol., 68, 299,
(1979)） によりλファージ粒子を形成し、このλファ
ージ粒子をエッシェリヒア コリの培養懸濁液に添加し
て、該ＮＡＤＨオキシダーゼ酵素生産能を保有する形質
導入ファージを得ることができる。
ジンク法（Horn, B., Methods in Enzymol., 68, 299,
(1979)） によりλファージ粒子を形成し、このλファ
ージ粒子をエッシェリヒア コリの培養懸濁液に添加し
て、該ＮＡＤＨオキシダーゼ酵素生産能を保有する形質
導入ファージを得ることができる。
【００２８】組換えＤＮＡが導入された形質転換微生物
の選択方法は、常法によって行い、例えばコロニーハイ
ブリダイゼーションによりポジティブクローンを得るこ
とができる。得られた形質転換体を37℃で液体培養し、
公知の方法、例えばアルカリ抽出法（Birnboim, H. C.
& Doly, J., Nucleic AcidS Res., 7,1513, (1979)）に
よってプラスミドを得る。このプラスミドを用い、ジデ
オキシ法（Sanger, F., Nickelen, S., & Colusion, A.
R., Proc. Natl. Acad. Sci. 74, 5493, (1977)）によ
ってシークエンスを決定することができる。また、得ら
れた形質転換体を培養することにより、目的とする水生
成型ＮＡＤＨオキシダーゼを大量に得ることができる。
の選択方法は、常法によって行い、例えばコロニーハイ
ブリダイゼーションによりポジティブクローンを得るこ
とができる。得られた形質転換体を37℃で液体培養し、
公知の方法、例えばアルカリ抽出法（Birnboim, H. C.
& Doly, J., Nucleic AcidS Res., 7,1513, (1979)）に
よってプラスミドを得る。このプラスミドを用い、ジデ
オキシ法（Sanger, F., Nickelen, S., & Colusion, A.
R., Proc. Natl. Acad. Sci. 74, 5493, (1977)）によ
ってシークエンスを決定することができる。また、得ら
れた形質転換体を培養することにより、目的とする水生
成型ＮＡＤＨオキシダーゼを大量に得ることができる。
【００２９】
【実施例】次に、本発明を実施例により説明する。 実施例１ 水生成型ＮＡＤＨオキシダーゼ遺伝子のクローン化。 ストレプトコッカス・ミュータンスＮＣＩＢ１１７２３
（ＮＣＩＭＢ（ナショナル・コレクション・オブ・イン
ダストリアル・アンド・マリーン・バクテリア）、イギ
リス、アバディーン、マーシャー、ドライブ、ストリー
ト２３番）をブレインハートインフュージョンの液体培
地にて３７℃６時間静置し、遠心分離にて集菌、洗浄し
て得られた菌体をリゾチーム、Ｎ−アセチルムラミダー
ゼ（２０００Ｕ／ml）処理後、Saito,H.＆Miura,K.,Bio
chem.Biophys.Acta,７２,６１９,（１９６３））に従っ
て染色体ＤＮＡを分離した。これをトリス塩酸・ＥＤＴ
Ａ緩衝液に溶解し、制限酵素Sau3AIで部分消化した。分
解物を１０〜４０％シュクロース密度勾配遠心法により
分画し、９〜２３kbの染色体ＤＮＡ断片を得た。このＤ
ＮＡ断片をＴ４ＤＮＡリガーゼによりλＥＭＢＬ３（ス
トラタジーン(Stratagene Cloning System)製、アメリ
カ合衆国、カリフォルニア、ラ・ジョラ、パインズ・ロ
ード、ノース・トリー１１０９９番）のアームに連結
し、これをインビトロパッケージングキット（ストラタ
ジーン(Stratagene Cloning System)製）を用いてファ
ージ粒子に組み込み、エッシェリヒア コリＰ２３９２
（ストラタジーン(Stratagene Cloning System)製）に
感染させた。
（ＮＣＩＭＢ（ナショナル・コレクション・オブ・イン
ダストリアル・アンド・マリーン・バクテリア）、イギ
リス、アバディーン、マーシャー、ドライブ、ストリー
ト２３番）をブレインハートインフュージョンの液体培
地にて３７℃６時間静置し、遠心分離にて集菌、洗浄し
て得られた菌体をリゾチーム、Ｎ−アセチルムラミダー
ゼ（２０００Ｕ／ml）処理後、Saito,H.＆Miura,K.,Bio
chem.Biophys.Acta,７２,６１９,（１９６３））に従っ
て染色体ＤＮＡを分離した。これをトリス塩酸・ＥＤＴ
Ａ緩衝液に溶解し、制限酵素Sau3AIで部分消化した。分
解物を１０〜４０％シュクロース密度勾配遠心法により
分画し、９〜２３kbの染色体ＤＮＡ断片を得た。このＤ
ＮＡ断片をＴ４ＤＮＡリガーゼによりλＥＭＢＬ３（ス
トラタジーン(Stratagene Cloning System)製、アメリ
カ合衆国、カリフォルニア、ラ・ジョラ、パインズ・ロ
ード、ノース・トリー１１０９９番）のアームに連結
し、これをインビトロパッケージングキット（ストラタ
ジーン(Stratagene Cloning System)製）を用いてファ
ージ粒子に組み込み、エッシェリヒア コリＰ２３９２
（ストラタジーン(Stratagene Cloning System)製）に
感染させた。
【００３０】この感染したエッシェリヒア コリのプラ
ークを、水生成型ＮＡＤＨオキシダーゼの抗体と反応を
行った。これにより抗体と反応する陽性クローンを得
た。
ークを、水生成型ＮＡＤＨオキシダーゼの抗体と反応を
行った。これにより抗体と反応する陽性クローンを得
た。
【００３１】実施例２ 水生成型ＮＡＤＨオキシダーゼ遺伝子の形質転換体の作
成 実施例１で得られた水生成型ＮＡＤＨオキシダーゼと反
応した陽性プラークからクローンＤＮＡを抽出し、制限
酵素 SacI にて分解し、５．６kbp ＤＮＡ断片を得た。
このＤＮＡ断片をBamHIで消化したプラスミドpMW(アン
ピシリン耐性でかつSacIで１ケ所切断可能なプラスミド
ＤＮＡ；ニッポンジーン製)と混合し、Ｔ４ＤＮＡリガ
ーゼを添加して連結処理した。この処理液を用い、エッ
シェリヒア コリＪＭ１０９（宝酒造製）を宿主とし
て、当該プラスミドを導入した。得られた形質転換体か
ら前記の抗体と反応するクローンを得た。当該形質転換
体を培養し、集菌洗浄後、アルカリ法でプラスミドを抽
出し、ここで得られた新規プラスミドをｐＳＳＷ６１と
命名した。
成 実施例１で得られた水生成型ＮＡＤＨオキシダーゼと反
応した陽性プラークからクローンＤＮＡを抽出し、制限
酵素 SacI にて分解し、５．６kbp ＤＮＡ断片を得た。
このＤＮＡ断片をBamHIで消化したプラスミドpMW(アン
ピシリン耐性でかつSacIで１ケ所切断可能なプラスミド
ＤＮＡ；ニッポンジーン製)と混合し、Ｔ４ＤＮＡリガ
ーゼを添加して連結処理した。この処理液を用い、エッ
シェリヒア コリＪＭ１０９（宝酒造製）を宿主とし
て、当該プラスミドを導入した。得られた形質転換体か
ら前記の抗体と反応するクローンを得た。当該形質転換
体を培養し、集菌洗浄後、アルカリ法でプラスミドを抽
出し、ここで得られた新規プラスミドをｐＳＳＷ６１と
命名した。
【００３２】実施例３ 水ＮＡＤＨオキシダーゼ遺伝子を含むＤＮＡ断片の塩基
配列決定 実施例２で得られた陽性ファージＤＮＡの制限酵素Ｓａ
ｃＩによる分解で生じる５．６ｋｂＤＮＡ断片とプラス
ミドpUC118（宝酒造製）を用いて当該酵素遺伝子の再ク
ローニングを行い、形質転換体を得た。両形質転換体よ
りプラスミドを抽出し、キロシークエンス用デレーショ
ンキット（宝酒造製）を用い、塩基配列決定に必要な各
種サイズＤＮＡを有するデレーション変異体を作製し
た。ＤＮＡ塩基配列の解析は、デオキシヌクレオチド鎖
終結法(Messing,J. ＆ Vieira,J.,Gene,19,269，(198
2))によって行った。
配列決定 実施例２で得られた陽性ファージＤＮＡの制限酵素Ｓａ
ｃＩによる分解で生じる５．６ｋｂＤＮＡ断片とプラス
ミドpUC118（宝酒造製）を用いて当該酵素遺伝子の再ク
ローニングを行い、形質転換体を得た。両形質転換体よ
りプラスミドを抽出し、キロシークエンス用デレーショ
ンキット（宝酒造製）を用い、塩基配列決定に必要な各
種サイズＤＮＡを有するデレーション変異体を作製し
た。ＤＮＡ塩基配列の解析は、デオキシヌクレオチド鎖
終結法(Messing,J. ＆ Vieira,J.,Gene,19,269，(198
2))によって行った。
【００３３】得られた塩基配列を配列表の配列番号：１
に示した。また当該配列の上流部分（１〜２６２塩基
対）を除く構造遺伝子を翻訳したアミノ酸配列を、配列
表の配列番号：２に示した。得られたアミノ酸配列はSt
reptococcus faecalisのＮＡＤＨオキシダーゼ構造遺
伝子の配列(GENETYX:Amino Acid Homology Data)と４
０．６％のホモロジーを有していた。
に示した。また当該配列の上流部分（１〜２６２塩基
対）を除く構造遺伝子を翻訳したアミノ酸配列を、配列
表の配列番号：２に示した。得られたアミノ酸配列はSt
reptococcus faecalisのＮＡＤＨオキシダーゼ構造遺
伝子の配列(GENETYX:Amino Acid Homology Data)と４
０．６％のホモロジーを有していた。
【００３４】実施例４ ＮＡＤＨ結合部位およびＦＡＤ結合部位の解析 ＮＡＤＨオキシダーゼの基質であるＮＡＤＨの結合部
位、およびフラビン補酵素（ＦＡＤ）の結合部位は、２
個のグリシン残基の間にいずれのアミノ酸でも良い４個
のアミノ酸残基を挟むアミノ酸配列、すなわち−ＧＸＸ
ＸＸＧ−（１文字表記、Ｘはいずれのアミノ酸でもよ
い）を共通に有することが予測される（Ho-Jin PARK,e
t.al,Eur. J. Biochem,205,875〜879(1992))。実施例３
で得られた配列番号：２に示した全アミノ酸配列中、−
ＧＸＸＸＸＧ−に相当する配列を検索したところ、５カ
所が当該配列と合致した。よって、このうちいずれかが
ＮＡＤＨ結合部位、ＦＡＤ結合部位であると考えられ
る。
位、およびフラビン補酵素（ＦＡＤ）の結合部位は、２
個のグリシン残基の間にいずれのアミノ酸でも良い４個
のアミノ酸残基を挟むアミノ酸配列、すなわち−ＧＸＸ
ＸＸＧ−（１文字表記、Ｘはいずれのアミノ酸でもよ
い）を共通に有することが予測される（Ho-Jin PARK,e
t.al,Eur. J. Biochem,205,875〜879(1992))。実施例３
で得られた配列番号：２に示した全アミノ酸配列中、−
ＧＸＸＸＸＧ−に相当する配列を検索したところ、５カ
所が当該配列と合致した。よって、このうちいずれかが
ＮＡＤＨ結合部位、ＦＡＤ結合部位であると考えられ
る。
【００３５】一方、Streptococcus faecalisのＦＡＤ
結合部位およびＮＡＤＨ結合部位は、ＮＡＤＨ結合部位
に相当するアミノ酸配列が−ＧＧＧＹＩＧ−（Gly Gly
GlyTyr Ile Gly)を含み、ＦＡＤ結合部位に相当するア
ミノ酸配列が−ＧＣＴＨＡＧ−(Gly Cys Thr His Ala G
ly)を含むものであると同定されている(Ross,R.P. and
A.Claiborne.J.Mol.Biol.,227,658-671(1992))。上記５
カ所の配列をStreptococcus faecalisＮＡＤＨ結合部
位およびＦＡＤ結合部位と比較すると、配列番号：２の
アミノ酸配列中、１６９〜１７４の配列がＮＡＤＨ結合
部位と、また８〜１２の配列がＦＡＤ結合部位と高い相
同性を有し、また、位置もほぼ一致していることより、
当該配列はそれぞれＮＡＤＨ結合部位およびＦＡＤ結合
部位を示すもの推定される。また、上記各アミノ酸配列
をコードするＤＮＡの塩基配列、すなわち配列番号：１
の配列中７６７〜７８４の配列はＮＡＤ結合部位、２８
４〜３０１の配列はＦＡＤ結合部位をコードするものと
推定される。
結合部位およびＮＡＤＨ結合部位は、ＮＡＤＨ結合部位
に相当するアミノ酸配列が−ＧＧＧＹＩＧ−（Gly Gly
GlyTyr Ile Gly)を含み、ＦＡＤ結合部位に相当するア
ミノ酸配列が−ＧＣＴＨＡＧ−(Gly Cys Thr His Ala G
ly)を含むものであると同定されている(Ross,R.P. and
A.Claiborne.J.Mol.Biol.,227,658-671(1992))。上記５
カ所の配列をStreptococcus faecalisＮＡＤＨ結合部
位およびＦＡＤ結合部位と比較すると、配列番号：２の
アミノ酸配列中、１６９〜１７４の配列がＮＡＤＨ結合
部位と、また８〜１２の配列がＦＡＤ結合部位と高い相
同性を有し、また、位置もほぼ一致していることより、
当該配列はそれぞれＮＡＤＨ結合部位およびＦＡＤ結合
部位を示すもの推定される。また、上記各アミノ酸配列
をコードするＤＮＡの塩基配列、すなわち配列番号：１
の配列中７６７〜７８４の配列はＮＡＤ結合部位、２８
４〜３０１の配列はＦＡＤ結合部位をコードするものと
推定される。
【００３６】
【００３７】配列番号：１ 配列の長さ：１４４０ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：Genomic DNA 起源 株名：ストレプトコッカス・ミュータンス(Streptococc
us mutans)ＮＣＩＢ１１７２３ 配列 TTAATTATAT TAAATCAAAA TAAAAATTTA AAATCACTCG ATATACAATC TTGTTTGAAT 60 AGCTCTTGAA AGCTAGCAAT CAGGAACTTA TATATTGAGT GATTTTTTGA TTCCTTATCA 120 ATTGTAAATT ATAGTAGAGA AGTCCATTTT GGAGATTATA AAGTTATTTT TATGAAAGAT 180 GAGCATATTC TTTGTAAGCG TTTCAACCTC ATGCTATACT AATGAAGTAA TAATTAGATT 240 ATATTGAAAA GAGGATTTGC TTATGAGTAA AATCGTTATT GTTGGAGCTA ACCATGCAGG 300 TACAGCTGCC ATTAATACTA TTCTAGATAA TTACGGTAGT GAAAACGAAG TTGTCGTTTT 360 TGACCAAAAT TCTAATATTT CATTCTTGGG TTGTGGAATG GCACTTTGGA TTGGAAAACA 420 AATATCAGGC CCTCAAGGTC TTTTTTATGC TGACAAGGAA TCGTTAGAAG CAAAAGGTGC 480 TAAAATTTAT ATGGAATCGC CAGTGACAGC CATTGATTAT GATGCTAAGA GGGTTACTGC 540 TTTGGTCAAT GGTCAAGAAC ATGTTGAAAG CTATGAGAAG CTTATTTTGG CAACAGGATC 600 AACACCAATC TTACCACCTA TCAAAGGTGC AGCTATCAAA GAAGGTAGTC GTGATTTTGA 660 AGCAACTTTG AAAAATCTTC AATTTGTTAA ATTGTATCAA AATGCAGAAG ATGTTATTAA 720 TAAATTACAG GATAAGAGTC AAAATCTGAA TCGTATTGCT GTTGTTGGTG CTGGTTATAT 780 TGGTGTAGAA CTTGCTGAAG CCTTTAAACG CCTCGGAAAA GAAGTGATTC TTATTGATGT 840 TGTTGATACT TGCTTAGCTG GTTATTATGA TCAGGATCTT TCAGAAATGA TGCGTCAAAA 900 TTTGGAAGAT CATGGTATTG AATTAGCATT CGGAGAAACT GTCAAAGCCA TTGAAGGTGA 960 TGGTAAAGTC GAACGTATTG TAACTGATAA AGCGAGCCAT GATGTGGATA TGGTTATTTT 1020 AGCTGTCGGT TTCCGTCCTA ATACTGCACT TGGCAACGCT AAACTCAAAA CCTTCCGTAA 1080 TGGTGCTTTC CTTGTTGATA AAAAACAAGA GACAAGTATT CCTGACGTTT ATGCCATCGG 1140 CGATTGCGCG ACTGTTTATG ACAACGCTAT TAATGATACC AATTATATTG CCTTAGCTTC 1200 AAACGCTCTT CGCTCAGGTA TTGTAGCTGG TCATAATGCA GCAGGGCATA AATTGGAATC 1260 TCTTGGTGTT CAAGGTTCAA ATGGTATTTC AATTTTTGGT CTCAATATGG TTTCAACTGG 1320 GTTAACACAA GAAAAAGCAA AGCGTTTTGG CTATAATCCA GAAGTCACTG CATTTACAGA 1380 TTTTCAGAAG GCTAGTTTTA TTGAACATGA TAATTATCCT GTTACACTTA AAATTGTCTA 1440 //
us mutans)ＮＣＩＢ１１７２３ 配列 TTAATTATAT TAAATCAAAA TAAAAATTTA AAATCACTCG ATATACAATC TTGTTTGAAT 60 AGCTCTTGAA AGCTAGCAAT CAGGAACTTA TATATTGAGT GATTTTTTGA TTCCTTATCA 120 ATTGTAAATT ATAGTAGAGA AGTCCATTTT GGAGATTATA AAGTTATTTT TATGAAAGAT 180 GAGCATATTC TTTGTAAGCG TTTCAACCTC ATGCTATACT AATGAAGTAA TAATTAGATT 240 ATATTGAAAA GAGGATTTGC TTATGAGTAA AATCGTTATT GTTGGAGCTA ACCATGCAGG 300 TACAGCTGCC ATTAATACTA TTCTAGATAA TTACGGTAGT GAAAACGAAG TTGTCGTTTT 360 TGACCAAAAT TCTAATATTT CATTCTTGGG TTGTGGAATG GCACTTTGGA TTGGAAAACA 420 AATATCAGGC CCTCAAGGTC TTTTTTATGC TGACAAGGAA TCGTTAGAAG CAAAAGGTGC 480 TAAAATTTAT ATGGAATCGC CAGTGACAGC CATTGATTAT GATGCTAAGA GGGTTACTGC 540 TTTGGTCAAT GGTCAAGAAC ATGTTGAAAG CTATGAGAAG CTTATTTTGG CAACAGGATC 600 AACACCAATC TTACCACCTA TCAAAGGTGC AGCTATCAAA GAAGGTAGTC GTGATTTTGA 660 AGCAACTTTG AAAAATCTTC AATTTGTTAA ATTGTATCAA AATGCAGAAG ATGTTATTAA 720 TAAATTACAG GATAAGAGTC AAAATCTGAA TCGTATTGCT GTTGTTGGTG CTGGTTATAT 780 TGGTGTAGAA CTTGCTGAAG CCTTTAAACG CCTCGGAAAA GAAGTGATTC TTATTGATGT 840 TGTTGATACT TGCTTAGCTG GTTATTATGA TCAGGATCTT TCAGAAATGA TGCGTCAAAA 900 TTTGGAAGAT CATGGTATTG AATTAGCATT CGGAGAAACT GTCAAAGCCA TTGAAGGTGA 960 TGGTAAAGTC GAACGTATTG TAACTGATAA AGCGAGCCAT GATGTGGATA TGGTTATTTT 1020 AGCTGTCGGT TTCCGTCCTA ATACTGCACT TGGCAACGCT AAACTCAAAA CCTTCCGTAA 1080 TGGTGCTTTC CTTGTTGATA AAAAACAAGA GACAAGTATT CCTGACGTTT ATGCCATCGG 1140 CGATTGCGCG ACTGTTTATG ACAACGCTAT TAATGATACC AATTATATTG CCTTAGCTTC 1200 AAACGCTCTT CGCTCAGGTA TTGTAGCTGG TCATAATGCA GCAGGGCATA AATTGGAATC 1260 TCTTGGTGTT CAAGGTTCAA ATGGTATTTC AATTTTTGGT CTCAATATGG TTTCAACTGG 1320 GTTAACACAA GAAAAAGCAA AGCGTTTTGG CTATAATCCA GAAGTCACTG CATTTACAGA 1380 TTTTCAGAAG GCTAGTTTTA TTGAACATGA TAATTATCCT GTTACACTTA AAATTGTCTA 1440 //
【００３８】配列番号：２ 配列の長さ：４５７ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：タンパク質 配列 Ｍｅｔ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｉｌｅ Ｖａｌ Ｉｌｅ Ｖａｌ Ｇｌｙ Ａｌａ
Ａｓｎ Ｈｉｓ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ａｌａ １ ２ ３ ４ ５ ６ ７ ８ ９
１０ １１ １２ １３ １４ １５ Ａｌａ Ｉｌｅ Ａｓｎ Ｔｈｒ Ｉｌｅ Ｌｅｕ Ａｓｐ Ａｓｎ Ｔｙｒ
Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｇｌｕ Ａｓｎ Ｇｌｕ Ｖａｌ １６ １７ １８ １９ ２０ ２１ ２２ ２３ ２４
２５ ２６ ２７ ２８ ２９ ３０ Ｖａｌ Ｖａｌ Ｐｈｅ Ａｓｐ Ｇｌｎ Ａｓｎ Ｓｅｒ Ａｓｎ Ｉｌｅ
Ｓｅｒ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｇｌｙ ３１ ３２ ３３ ３４ ３５ ３６ ３７ ３８ ３９
４０ ４１ ４２ ４３ ４４ ４５ Ｍｅｔ Ａｌａ Ｌｅｕ Ｔｒｐ Ｉｌｅ Ｇｌｙ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｉｌｅ
Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｐｒｏ Ｇｌｎ Ｇｌｙ Ｌｅｕ ４６ ４７ ４８ ４９ ５０ ５１ ５２ ５３ ５４
５５ ５６ ５７ ５８ ５９ ６０ Ｐｈｅ Ｔｙｒ Ａｌａ Ａｓｐ Ｌｙｓ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｇｌｕ
Ａｌａ Ｌｙｓ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｌｙｓ Ｉｌｅ ６１ ６２ ６３ ６４ ６５ ６６ ６７ ６８ ６９
７０ ７１ ７２ ７３ ７４ ７５ Ｔｙｒ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ｐｒｏ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｉｌｅ
Ａｓｐ Ｔｙｒ Ａｓｐ Ａｌａ Ｌｙｓ Ａｒｇ ７６ ７７ ７８ ７９ ８０ ７１ ８２ ８３ ８４
８５ ８６ ８７ ８８ ８９ ９０ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｌｅｕ Ｖａｌ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｇｌｎ Ｇｌｕ
Ｈｉｓ Ｖａｌ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ｔｙｒ Ｇｌｕ ９１ ９２ ９３ ９４ ９５ ９６ ９７ ９８ ９９
１００ １０１ １０２ １０３ １０４ １０５ Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ｉｌｅ Ｌｅｕ Ａｌａ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｔｈｒ
Ｐｒｏ Ｉｌｅ Ｌｅｕ Ｐｒｏ Ｐｒｏ Ｉｌｅ １０６ １０７ １０８ １０９ １１０ １１１ １１２ １１３ １１４
１１５ １１６ １１７ １１８ １１９ １２０ Ｌｙｓ Ｇｌｙ Ａｌａ Ａｌａ Ｉｌｅ Ｌｙｓ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｓｅｒ
Ａｒｇ Ａｓｐ Ｐｈｅ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｔｈｒ １２１ １２２ １２３ １２４ １２５ １２６ １２７ １２８ １２９
１３０ １３１ １３２ １３３ １３４ １３５ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｌｅｕ Ｇｌｎ Ｐｈｅ Ｖａｌ Ｌｙｓ Ｌｅｕ
Ｔｙｒ Ｇｌｎ Ａｓｎ Ａｌａ Ｇｌｕ Ａｓｐ １３６ １３７ １３８ １３９ １４０ １４１ １４２ １４３ １４４
１４５ １４６ １４７ １４８ １４９ １５０ Ｖａｌ Ｉｌｅ Ａｓｎ Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ｇｌｎ Ａｓｐ Ｌｙｓ Ｓｅｒ
Ｇｌｎ Ａｓｎ Ｌｅｕ Ａｓｎ Ａｒｇ Ｉｌｅ １５１ １５２ １５３ １５４ １５５ １５６ １５７ １５８ １５９
１６０ １６１ １６２ １６３ １６４ １６５ Ａｌａ Ｖａｌ Ｖａｌ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｔｙｒ Ｉｌｅ Ｇｌｙ
Ｖａｌ Ｇｌｕ Ｌｅｕ Ａｌａ Ｇｌｕ Ａｌａ １６６ １６７ １６８ １６９ １７０ １７１ １７２ １７３ １７４
１７５ １７６ １７７ １７８ １７９ １８０ Ｐｈｅ Ｌｙｓ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｌｙｓ Ｇｌｕ Ｖａｌ Ｉｌｅ
Ｌｅｕ Ｉｌｅ Ａｓｐ Ｖａｌ Ｖａｌ Ａｓｐ １８１ １８２ １８３ １８４ １８５ １８６ １８７ １８８ １８９
１９０ １９１ １９２ １９３ １９４ １９５ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｌｅｕ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｔｙｒ Ｔｙｒ Ａｓｐ Ｇｌｎ
Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｇｌｕ Ｍｅｔ Ｍｅｔ １９６ １９７ １９８ １９９ ２００ ２０１ ２０２ ２０３ ２０４
２０５ ２０６ ２０７ ２０８ ２０９ ２１０ Ａｒｇ Ｇｌｎ Ａｓｎ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ａｓｐ Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｉｌｅ
Ｇｌｕ Ｌｅｕ Ａｌａ Ｐｈｅ Ｇｌｙ Ｇｌｕ ２１１ ２１２ ２１３ ２１４ ２１５ ２１６ ２１７ ２１８ ２１９
２２０ ２２１ ２２２ ２２３ ２２４ ２２５ Ｔｈｒ Ｖａｌ Ｌｙｓ Ａｌａ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｇｌｙ
Ｌｙｓ Ｖａｌ Ｇｌｕ Ａｒｇ Ｉｌｅ Ｖａｌ ２２６ ２２７ ２２８ ２２９ ２３０ ２３１ ２３２ ２３３ ２３４
２３５ ２３６ ２３７ ２３８ ２３９ ２４０ Ｔｈｒ Ａｓｐ Ｌｙｓ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｈｉｓ Ａｓｐ Ｖａｌ Ａｓｐ
Ｍｅｔ Ｖａｌ Ｉｌｅ Ｌｅｕ Ａｌａ Ｖａｌ ２４１ ２４２ ２４３ ２４４ ２４５ ２４６ ２４７ ２４８ ２４９
２５０ ２５１ ２５２ ２５３ ２５４ ２５５ Ｇｌｙ Ｐｈｅ Ａｒｇ Ｐｒｏ Ａｓｎ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｌｅｕ Ｇｌｙ
Ａｓｎ Ａｌａ Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ｔｈｒ ２５６ ２５７ ２５８ ２５９ ２６０ ２６１ ２６２ ２６３ ２６４
２６５ ２６６ ２６７ ２６８ ２６９ ２７０ Ｐｈｅ Ａｒｇ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｖａｌ Ａｓｐ
Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｇｌｕ Ｔｈｒ Ｓｅｒ ２７１ ２７２ ２７３ ２７４ ２７５ ２７６ ２７７ ２７８ ２７９
２８０ ２８１ ２８２ ２８３ ２８４ ２８５ Ｉｌｅ Ｐｒｏ Ａｓｐ Ｖａｌ Ｔｙｒ Ａｌａ Ｉｌｅ Ｇｌｙ Ａｓｐ
Ｃｙｓ Ａｌａ Ｔｈｒ Ｖａｌ Ｔｙｒ Ａｓｐ ２８６ ２８７ ２８８ ２８９ ２９０ ２９１ ２９２ ２９３ ２９４
２９５ ２９６ ２９７ ２９８ ２９９ ３００ Ａｓｎ Ａｌａ Ｉｌｅ Ａｓｎ Ａｓｐ Ｔｈｒ Ａｓｎ Ｔｙｒ Ｉｌｅ
Ａｌａ Ｌｅｕ Ａｌａ Ｓｅｒ Ａｓｎ Ａｌａ ３０１ ３０２ ３０３ ３０４ ３０５ ３０６ ３０７ ３０８ ３０９
３１０ ３１１ ３１２ ３１３ ３１４ ３１５ Ｌｅｕ Ａｒｇ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｉｌｅ Ｖａｌ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｈｉｓ
Ａｓｎ Ａｌａ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｈｉｓ Ｌｙｓ ３１６ ３１７ ３１８ ３１９ ３２０ ３２１ ３２２ ３２３ ３２４
３２５ ３２６ ３２７ ３２８ ３２９ ３３０ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｖａｌ Ｇｌｎ Ｇｌｙ Ｓｅｒ
Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｉｌｅ Ｓｅｒ Ｉｌｅ Ｐｈｅ ３３１ ３３２ ３３３ ３３４ ３３５ ３３６ ３３７ ３３８ ３３９
３４０ ３４１ ３４２ ３４３ ３４４ ３４５ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ａｓｎ Ｍｅｔ Ｖａｌ Ｓｅｒ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｌｅｕ
Ｔｈｒ Ｇｌｎ Ｇｌｕ Ｌｙｓ Ａｌａ Ｌｙｓ ３４６ ３４７ ３４８ ３４９ ３５０ ３５１ ３５２ ３５３ ３５４
３５５ ３５６ ３５７ ３５８ ３５９ ３６０ Ａｒｇ Ｐｈｅ Ｇｌｙ Ｔｙｒ Ａｓｎ Ｐｒｏ Ｇｌｕ Ｖａｌ Ｔｈｒ
Ａｌａ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ａｓｐ Ｐｈｅ Ｇｌｎ ３６１ ３６２ ３６３ ３６４ ３６５ ３６６ ３６７ ３６８ ３６９
３７０ ３７１ ３７２ ３７３ ３７４ ３７５ Ｌｙｓ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｈｉｓ Ａｓｐ Ａｓｎ
Ｔｙｒ Ｐｒｏ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ｌｙｓ ３７６ ３７７ ３７８ ３７９ ３８０ ３８１ ３８２ ３８３ ３８４
３８５ ３８６ ３８７ ３８８ ３８９ ３９０ Ｉｌｅ Ｖａｌ Ｔｙｒ Ａｓｐ Ｌｙｓ Ａｓｐ Ｓｅｒ Ａｒｇ Ｌｅｕ
Ｖａｌ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｇｌｎ Ｍｅｔ ３９１ ３９２ ３９３ ３９４ ３９５ ３９６ ３９７ ３９８ ３９９
４００ ４０１ ４０２ ４０３ ４０４ ４０５ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｕ Ａｓｐ Ｍｅｔ Ｓｅｒ Ｍｅｔ Ｇｌｙ
Ｉｌｅ Ｈｉｓ Ｍｅｔ Ｐｈｅ Ｓｅｒ Ｌｅｕ ４０６ ４０７ ４０８ ４０９ ４１０ ４１１ ４１２ ４１３ ４１４
４１５ ４１６ ４１７ ４１８ ４１９ ４２０ Ａｌａ Ｉｌｅ Ｇｌｎ Ｇｌｕ Ｌｙｓ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ｉｌｅ Ｇｌｕ
Ａｒｇ Ｌｅｕ Ａｌａ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ａｓｐ ４２１ ４２２ ４２３ ４２４ ４２５ ４２６ ４２７ ４２８ ４２９
４３０ ４３１ ４３２ ４３３ ４３４ ４３５ Ｔｙｒ Ｐｈｅ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｐｒｏ Ｈｉｓ Ｐｈｅ Ａｓｎ Ｇｌｎ
Ｐｒｏ Ｔｙｒ Ａｓｎ Ｔｙｒ Ｍｅｔ Ｔｈｒ ４３６ ４３７ ４３８ ４３９ ４４０ ４４１ ４４２ ４４３ ４４４
４４５ ４４６ ４４７ ４４８ ４４９ ４５０ Ｌｙｓ Ａｌａ Ａｌａ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｌａ Ｌｙｓ ４５１ ４５２ ４５３ ４５４ ４５５ ４５６ ４５７
Ａｓｎ Ｈｉｓ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ａｌａ １ ２ ３ ４ ５ ６ ７ ８ ９
１０ １１ １２ １３ １４ １５ Ａｌａ Ｉｌｅ Ａｓｎ Ｔｈｒ Ｉｌｅ Ｌｅｕ Ａｓｐ Ａｓｎ Ｔｙｒ
Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｇｌｕ Ａｓｎ Ｇｌｕ Ｖａｌ １６ １７ １８ １９ ２０ ２１ ２２ ２３ ２４
２５ ２６ ２７ ２８ ２９ ３０ Ｖａｌ Ｖａｌ Ｐｈｅ Ａｓｐ Ｇｌｎ Ａｓｎ Ｓｅｒ Ａｓｎ Ｉｌｅ
Ｓｅｒ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｇｌｙ ３１ ３２ ３３ ３４ ３５ ３６ ３７ ３８ ３９
４０ ４１ ４２ ４３ ４４ ４５ Ｍｅｔ Ａｌａ Ｌｅｕ Ｔｒｐ Ｉｌｅ Ｇｌｙ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｉｌｅ
Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｐｒｏ Ｇｌｎ Ｇｌｙ Ｌｅｕ ４６ ４７ ４８ ４９ ５０ ５１ ５２ ５３ ５４
５５ ５６ ５７ ５８ ５９ ６０ Ｐｈｅ Ｔｙｒ Ａｌａ Ａｓｐ Ｌｙｓ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｇｌｕ
Ａｌａ Ｌｙｓ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｌｙｓ Ｉｌｅ ６１ ６２ ６３ ６４ ６５ ６６ ６７ ６８ ６９
７０ ７１ ７２ ７３ ７４ ７５ Ｔｙｒ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ｐｒｏ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｉｌｅ
Ａｓｐ Ｔｙｒ Ａｓｐ Ａｌａ Ｌｙｓ Ａｒｇ ７６ ７７ ７８ ７９ ８０ ７１ ８２ ８３ ８４
８５ ８６ ８７ ８８ ８９ ９０ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｌｅｕ Ｖａｌ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｇｌｎ Ｇｌｕ
Ｈｉｓ Ｖａｌ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ｔｙｒ Ｇｌｕ ９１ ９２ ９３ ９４ ９５ ９６ ９７ ９８ ９９
１００ １０１ １０２ １０３ １０４ １０５ Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ｉｌｅ Ｌｅｕ Ａｌａ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｔｈｒ
Ｐｒｏ Ｉｌｅ Ｌｅｕ Ｐｒｏ Ｐｒｏ Ｉｌｅ １０６ １０７ １０８ １０９ １１０ １１１ １１２ １１３ １１４
１１５ １１６ １１７ １１８ １１９ １２０ Ｌｙｓ Ｇｌｙ Ａｌａ Ａｌａ Ｉｌｅ Ｌｙｓ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｓｅｒ
Ａｒｇ Ａｓｐ Ｐｈｅ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｔｈｒ １２１ １２２ １２３ １２４ １２５ １２６ １２７ １２８ １２９
１３０ １３１ １３２ １３３ １３４ １３５ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｌｅｕ Ｇｌｎ Ｐｈｅ Ｖａｌ Ｌｙｓ Ｌｅｕ
Ｔｙｒ Ｇｌｎ Ａｓｎ Ａｌａ Ｇｌｕ Ａｓｐ １３６ １３７ １３８ １３９ １４０ １４１ １４２ １４３ １４４
１４５ １４６ １４７ １４８ １４９ １５０ Ｖａｌ Ｉｌｅ Ａｓｎ Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ｇｌｎ Ａｓｐ Ｌｙｓ Ｓｅｒ
Ｇｌｎ Ａｓｎ Ｌｅｕ Ａｓｎ Ａｒｇ Ｉｌｅ １５１ １５２ １５３ １５４ １５５ １５６ １５７ １５８ １５９
１６０ １６１ １６２ １６３ １６４ １６５ Ａｌａ Ｖａｌ Ｖａｌ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｔｙｒ Ｉｌｅ Ｇｌｙ
Ｖａｌ Ｇｌｕ Ｌｅｕ Ａｌａ Ｇｌｕ Ａｌａ １６６ １６７ １６８ １６９ １７０ １７１ １７２ １７３ １７４
１７５ １７６ １７７ １７８ １７９ １８０ Ｐｈｅ Ｌｙｓ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｌｙｓ Ｇｌｕ Ｖａｌ Ｉｌｅ
Ｌｅｕ Ｉｌｅ Ａｓｐ Ｖａｌ Ｖａｌ Ａｓｐ １８１ １８２ １８３ １８４ １８５ １８６ １８７ １８８ １８９
１９０ １９１ １９２ １９３ １９４ １９５ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｌｅｕ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｔｙｒ Ｔｙｒ Ａｓｐ Ｇｌｎ
Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｇｌｕ Ｍｅｔ Ｍｅｔ １９６ １９７ １９８ １９９ ２００ ２０１ ２０２ ２０３ ２０４
２０５ ２０６ ２０７ ２０８ ２０９ ２１０ Ａｒｇ Ｇｌｎ Ａｓｎ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ａｓｐ Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｉｌｅ
Ｇｌｕ Ｌｅｕ Ａｌａ Ｐｈｅ Ｇｌｙ Ｇｌｕ ２１１ ２１２ ２１３ ２１４ ２１５ ２１６ ２１７ ２１８ ２１９
２２０ ２２１ ２２２ ２２３ ２２４ ２２５ Ｔｈｒ Ｖａｌ Ｌｙｓ Ａｌａ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｇｌｙ
Ｌｙｓ Ｖａｌ Ｇｌｕ Ａｒｇ Ｉｌｅ Ｖａｌ ２２６ ２２７ ２２８ ２２９ ２３０ ２３１ ２３２ ２３３ ２３４
２３５ ２３６ ２３７ ２３８ ２３９ ２４０ Ｔｈｒ Ａｓｐ Ｌｙｓ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｈｉｓ Ａｓｐ Ｖａｌ Ａｓｐ
Ｍｅｔ Ｖａｌ Ｉｌｅ Ｌｅｕ Ａｌａ Ｖａｌ ２４１ ２４２ ２４３ ２４４ ２４５ ２４６ ２４７ ２４８ ２４９
２５０ ２５１ ２５２ ２５３ ２５４ ２５５ Ｇｌｙ Ｐｈｅ Ａｒｇ Ｐｒｏ Ａｓｎ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｌｅｕ Ｇｌｙ
Ａｓｎ Ａｌａ Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ｔｈｒ ２５６ ２５７ ２５８ ２５９ ２６０ ２６１ ２６２ ２６３ ２６４
２６５ ２６６ ２６７ ２６８ ２６９ ２７０ Ｐｈｅ Ａｒｇ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｖａｌ Ａｓｐ
Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｇｌｕ Ｔｈｒ Ｓｅｒ ２７１ ２７２ ２７３ ２７４ ２７５ ２７６ ２７７ ２７８ ２７９
２８０ ２８１ ２８２ ２８３ ２８４ ２８５ Ｉｌｅ Ｐｒｏ Ａｓｐ Ｖａｌ Ｔｙｒ Ａｌａ Ｉｌｅ Ｇｌｙ Ａｓｐ
Ｃｙｓ Ａｌａ Ｔｈｒ Ｖａｌ Ｔｙｒ Ａｓｐ ２８６ ２８７ ２８８ ２８９ ２９０ ２９１ ２９２ ２９３ ２９４
２９５ ２９６ ２９７ ２９８ ２９９ ３００ Ａｓｎ Ａｌａ Ｉｌｅ Ａｓｎ Ａｓｐ Ｔｈｒ Ａｓｎ Ｔｙｒ Ｉｌｅ
Ａｌａ Ｌｅｕ Ａｌａ Ｓｅｒ Ａｓｎ Ａｌａ ３０１ ３０２ ３０３ ３０４ ３０５ ３０６ ３０７ ３０８ ３０９
３１０ ３１１ ３１２ ３１３ ３１４ ３１５ Ｌｅｕ Ａｒｇ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｉｌｅ Ｖａｌ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｈｉｓ
Ａｓｎ Ａｌａ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｈｉｓ Ｌｙｓ ３１６ ３１７ ３１８ ３１９ ３２０ ３２１ ３２２ ３２３ ３２４
３２５ ３２６ ３２７ ３２８ ３２９ ３３０ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｖａｌ Ｇｌｎ Ｇｌｙ Ｓｅｒ
Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｉｌｅ Ｓｅｒ Ｉｌｅ Ｐｈｅ ３３１ ３３２ ３３３ ３３４ ３３５ ３３６ ３３７ ３３８ ３３９
３４０ ３４１ ３４２ ３４３ ３４４ ３４５ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ａｓｎ Ｍｅｔ Ｖａｌ Ｓｅｒ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｌｅｕ
Ｔｈｒ Ｇｌｎ Ｇｌｕ Ｌｙｓ Ａｌａ Ｌｙｓ ３４６ ３４７ ３４８ ３４９ ３５０ ３５１ ３５２ ３５３ ３５４
３５５ ３５６ ３５７ ３５８ ３５９ ３６０ Ａｒｇ Ｐｈｅ Ｇｌｙ Ｔｙｒ Ａｓｎ Ｐｒｏ Ｇｌｕ Ｖａｌ Ｔｈｒ
Ａｌａ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ａｓｐ Ｐｈｅ Ｇｌｎ ３６１ ３６２ ３６３ ３６４ ３６５ ３６６ ３６７ ３６８ ３６９
３７０ ３７１ ３７２ ３７３ ３７４ ３７５ Ｌｙｓ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｈｉｓ Ａｓｐ Ａｓｎ
Ｔｙｒ Ｐｒｏ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ｌｙｓ ３７６ ３７７ ３７８ ３７９ ３８０ ３８１ ３８２ ３８３ ３８４
３８５ ３８６ ３８７ ３８８ ３８９ ３９０ Ｉｌｅ Ｖａｌ Ｔｙｒ Ａｓｐ Ｌｙｓ Ａｓｐ Ｓｅｒ Ａｒｇ Ｌｅｕ
Ｖａｌ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｇｌｎ Ｍｅｔ ３９１ ３９２ ３９３ ３９４ ３９５ ３９６ ３９７ ３９８ ３９９
４００ ４０１ ４０２ ４０３ ４０４ ４０５ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｕ Ａｓｐ Ｍｅｔ Ｓｅｒ Ｍｅｔ Ｇｌｙ
Ｉｌｅ Ｈｉｓ Ｍｅｔ Ｐｈｅ Ｓｅｒ Ｌｅｕ ４０６ ４０７ ４０８ ４０９ ４１０ ４１１ ４１２ ４１３ ４１４
４１５ ４１６ ４１７ ４１８ ４１９ ４２０ Ａｌａ Ｉｌｅ Ｇｌｎ Ｇｌｕ Ｌｙｓ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ｉｌｅ Ｇｌｕ
Ａｒｇ Ｌｅｕ Ａｌａ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ａｓｐ ４２１ ４２２ ４２３ ４２４ ４２５ ４２６ ４２７ ４２８ ４２９
４３０ ４３１ ４３２ ４３３ ４３４ ４３５ Ｔｙｒ Ｐｈｅ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｐｒｏ Ｈｉｓ Ｐｈｅ Ａｓｎ Ｇｌｎ
Ｐｒｏ Ｔｙｒ Ａｓｎ Ｔｙｒ Ｍｅｔ Ｔｈｒ ４３６ ４３７ ４３８ ４３９ ４４０ ４４１ ４４２ ４４３ ４４４
４４５ ４４６ ４４７ ４４８ ４４９ ４５０ Ｌｙｓ Ａｌａ Ａｌａ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｌａ Ｌｙｓ ４５１ ４５２ ４５３ ４５４ ４５５ ４５６ ４５７
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 (Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｒ 1:19） (72)発明者 神尾 好是 宮城県仙台市泉区住吉台東２丁目１−１
Claims (11)
- 【請求項１】 水生成型ＮＡＤＨオキシダーゼをコード
するＤＮＡ - 【請求項２】 下記のＮＡＤＨ結合部位を含むアミノ酸
配列で特定される請求項１記載のＤＮＡ。 【化１】Gly Ala Gly Tyr Ile Gly - 【請求項３】 下記のＮＡＤＨ結合部位を含む塩基配列
で特定される請求項１記載のＤＮＡ。 【化２】GGTGCTGGTT ATATTGGT - 【請求項４】 下記のＦＡＤ結合部位を含むアミノ酸配
列で特定される請求項１記載のＤＮＡ。 【化３】Gly Ala Asn His Ala Gly - 【請求項５】 下記のＦＡＤ結合部位を含む塩基配列で
特定される請求項１記載のＤＮＡ。 【化４】GGAGCTAACC ATGCAGGT - 【請求項６】 下記の塩基配列で特定される請求項１記
載のＤＮＡ。 【化５】 ATGAGTAAAA TCGTTATTGT TGGAGCTAAC CATGCAGGTA CAGCTGCCAT TAATACTATT CTAGATAATT ACGGTAGTGA AAACGAAGTT GTCGTTTTTG ACCAAAATTC TAATATTTCA TTCTTGGGTT GTGGAATGGC ACTTTGGATT GGAAAACAAA TATCAGGCCC TCAAGGTCTT TTTTATGCTG ACAAGGAATC GTTAGAAGCA AAAGGTGCTA AAATTTATAT GGAATCGCCA GTGACAGCCA TTGATTATGA TGCTAAGAGG GTTACTGCTT TGGTCAATGG TCAAGAACAT GTTGAAAGCT ATGAGAAGCT TATTTTGGCA ACAGGATCAA CACCAATCTT ACCACCTATC AAAGGTGCAG CTATCAAAGA AGGTAGTCGT GATTTTGAAG CAACTTTGAA AAATCTTCAA TTTGTTAAAT TGTATCAAAA TGCAGAAGAT GTTATTAATA AATTACAGGA TAAGAGTCAA AATCTGAATC GTATTGCTGT TGTTGGTGCT GGTTATATTG GTGTAGAACT TGCTGAAGCC TTTAAACGCC TCGGAAAAGA AGTGATTCTT ATTGATGTTG TTGATACTTG CTTAGCTGGT TATTATGATC AGGATCTTTC AGAAATGATG CGTCAAAATT TGGAAGATCA TGGTATTGAA TTAGCATTCG GAGAAACTGT CAAAGCCATT GAAGGTGATG GTAAAGTCGA ACGTATTGTA ACTGATAAAG CGAGCCATGA TGTGGATATG GTTATTTTAG CTGTCGGTTT CCGTCCTAAT ACTGCACTTG GCAACGCTAA ACTCAAAACC TTCCGTAATG GTGCTTTCCT TGTTGATAAA AAACAAGAGA CAAGTATTCC TGACGTTTAT GCCATCGGCG ATTGCGCGAC TGTTTATGAC AACGCTATTA ATGATACCAA TTATATTGCC TTAGCTTCAA ACGCTCTTCG CTCAGGTATT GTAGCTGGTC ATAATGCAGC AGGGCATAAA TTGGAATCTC TTGGTGTTCA AGGTTCAAAT GGTATTTCAA TTTTTGGTCT CAATATGGTT TCAACTGGGT TAACACAAGA AAAAGCAAAG CGTTTTGGCT ATAATCCAGA AGTCACTGCA TTTACAGATT TTCAGAAGGC TAGTTTTATT GAACATGATA ATTATCCTGT TACACTTAAA ATTGTCTATG ATAAGGATAG CCGACTGGTT CTTGGTGCAC AAATGGCATC TAAAGAAGAT ATGTCAATGG GAATTCATAT GTTTTCATTG GCTATTCAGG AAAAAGTTAC CATTGAACGT TTAGCTCTAC TGGACTATTT CTTTCTTCCT CATTTCAATC AACCCTATAA TTATATGACC AAAGCAGCAT TAAAAGCTAA A - 【請求項７】 下記のアミノ酸配列で特定される請求項
１記載のＤＮＡ。 【化６】 MSKIVIVGAN HAGTAAINTI LDNYGSENEV VVFDQNSNIS FLGCGMALWI GKQISGPQGL FYADKESLEA KGAKIYMESP VTAIDYDAKR VTALVNGQEH VESYEKLILA TGSTPILPPI KGAAIKEGSR DFEATLKNLQ FVKLYQNAED VINKLQDKSQ NLNRIAVVGA GYIGVELAEA FKRLGKEVIL IDVVDTCLAG YYDQDLSEMM RQNLEDHGIE LAFGETVKAI EGDGKVERIV TDKASHDVDM VILAVGFRPN TALGNAKLKT FRNGAFLVDK KQETSIPDVY AIGDCATVYD NAINDTNYIA LASNALRSGI VAGHNAAGHK LESLGVQGSN GISIFGLNMV STGLTQEKAK RFGYNPEVTA FTDFQKASFI EHDNYPVTLK IVYDKDSRLV LGAQMASKED MSMGIHMFSL AIQEKVTIER LALLDYFFLP HFNQPYNYMT KAALKAK - 【請求項８】 請求項１また５のＤＮＡ上流に、水生成
型ＮＡＤＨオキシダーゼ遺伝子の転写および翻訳に関す
る５’末端の非翻訳領域を有する請求項１記載のＤＮ
Ａ。 - 【請求項９】 非翻訳領域が下記の塩基配列で特定され
る請求項８記載のＤＮＡ。 【化７】 TTAATTATAT TAAATCAAAA TAAAAATTTA AAATCACTCG ATATACAATC TTGTTTGAAT AGCTCTTGAA AGCTAGCAAT CAGGAACTTA TATATTGAGT GATTTTTTGA TTCCTTATCA ATTGTAAATT ATAGTAGAGA AGTCCATTTT GGAGATTATA AAGTTATTTT TATGAAAGAT GAGCATATTC TTTGTAAGCG TTTCAACCTC ATGCTATACT AATGAAGTAA TAATTAGATT ATATTGAAAA GAGGATTTGC TT - 【請求項１０】 請求項１〜７のいずれかに記載の水生
成型ＮＡＤＨオキシダーゼをコードするＤＮＡを含有す
るプラスミド。 - 【請求項１１】 請求項１０記載のプラスミドＤＮＡを
導入した微生物。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7012617A JPH08196281A (ja) | 1995-01-30 | 1995-01-30 | 水生成型ｎａｄｈオキシダーゼをコードするｄｎａ |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7012617A JPH08196281A (ja) | 1995-01-30 | 1995-01-30 | 水生成型ｎａｄｈオキシダーゼをコードするｄｎａ |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH08196281A true JPH08196281A (ja) | 1996-08-06 |
Family
ID=11810346
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP7012617A Pending JPH08196281A (ja) | 1995-01-30 | 1995-01-30 | 水生成型ｎａｄｈオキシダーゼをコードするｄｎａ |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH08196281A (ja) |
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-
1995
- 1995-01-30 JP JP7012617A patent/JPH08196281A/ja active Pending
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