JPH08107788A - セリンヒドロキシメチルトランスフェラーゼをコードする遺伝子を含むｄｎａ断片 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】 コリネ型細菌由来のセリンヒドロキシメチル
トランスフェラーゼをコードする遺伝子を含むＤＮＡ断
片。 【効果】 本発明により提供されるセリンヒドロキシメ
チルトランスフェラーゼをコードする遺伝子を含むＤＮ
Ａ断片を用いてコリネ型細菌を育種改良することによ
り、セリンヒドロキシメチルトランスフェラーゼ高産生
能を有するコリネ型細菌の取得が可能となる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、コリネ型細菌由来のセ
リンヒドロキシメチルトランスフェラーゼをコードする
遺伝子に関する。セリンヒドロキシメチルトランスフェ
ラーゼは、生体内においては主にＬ−セリンからグリシ
ンを生成する反応に関与しているが、Ｌ−セリンとグリ
シンの可逆的相互変換酵素であるため、グリシンを原料
とするＬ−セリンの生産において重要な酵素である。Ｌ
−セリンは化粧品、医薬の分野等での需要が多く、また
必須アミノ酸であるＬ−トリプトファンの製造原料とし
ても利用される工業的に重要なアミノ酸である。

【０００２】

【従来の技術】セリンヒドロキシメチルトランスフェラ
ーゼをコードする遺伝子については、微生物ではエシエ
リヒア・コリ（Escherichia coli）由来の遺伝子［Nucl
eic Acids Res., Vol.11, p.2065(1983)］、カンピロバ
クター・ジェジュニ（Campylobacter jejuni）由来の遺
伝子［Gene, Vol.101, p.51(1991) ］、サルモネラ・チ
フィマリウム（Salmonella typhimurium）由来の遺伝子
［DNA seq., Vol.1, p.107(1990)］、ブラディリゾビウ
ム・ジャポニカム（Bradyrhizobium japonicum）由来の
遺伝子［Mol. Microbiol., Vol.5, p.39(1991)］等が単
離され、その塩基配列が決定されている。

【０００３】しかしながら、産業上重要なコリネ型細菌
についてはコリネバクテリウム・グルタミカム（Coryne
bacterium glutamicum）よりセリンヒドロキシメチルト
ランスフェラーゼを含むＤＮＡ断片が単離されているも
のの［特開平２−４２９９４］、その塩基配列について
は、本発明者らの知る限り報告例がない。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、コリネ型細
菌内で発現可能な、コリネ型細菌由来のセリンヒドロキ
シメチルトランスフェラーゼをコードする遺伝子を含む
ＤＮＡ断片の提供を目的としてなされたものである。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記課題
を解決すべく鋭意研究を重ねた結果、遺伝子組み換えの
手法を駆使することにより、コリネ型細菌からセリンヒ
ドロキシメチルトランスフェラーゼをコードする遺伝子
が単離可能であることを見い出し、本発明を完成するに
至った。

【０００６】かくして本発明によれば、後記配列表の配
列番号１の配列中のアミノ酸番号１からアミノ酸番号４
３４までのアミノ酸配列で示されるセリンヒドロキシメ
チルトランスフェラーゼをコードする遺伝子を含むＤＮ
Ａ断片が提供される。

【０００７】本発明の「セリンヒドロキシメチルトラン
スフェラーゼをコードする遺伝子」とは、グリシンとホ
ルムアルデヒドからＬ−セリンを生成する反応を触媒す
る酵素であるセリンヒドロキシメチルトランスフェラー
ゼをコードするｇｌｙＡ遺伝子を意味するものであり、
以下これを「セリンヒドロキシメチルトランスフェラー
ゼ遺伝子」、該遺伝子を含むＤＮＡ断片を「ｇｌｙＡ断
片」と略称することがある。

【０００８】本発明のｇｌｙＡ断片は、その塩基配列が
決定された後においては合成することも可能であるが、
通常は、コリネ型細菌、例えばブレビバクテリウム・フ
ラバム(Brevibacterium flavum)ＭＪ−２３３(FERM BP-
1497)株等の染色体上に存在し、この染色体ＤＮＡを適
当な制限酵素で切断することにより生ずる切断断片の中
から以下に述べる方法で分離、取得することができる。

【０００９】まず、上記コリネ型細菌、例えばブレビバ
クテリウム・フラバムＭＪ−２３３を常法［例えば、特
開昭５１−１３０５９２参照］に従い培養し、培養物か
ら菌体を集め、該菌体から染色体ＤＮＡを抽出する。染
色体ＤＮＡは、例えば、特開平５−１５３７８の実施例
１（Ａ）に記載の方法等により菌体から容易に抽出する
ことができる。

【００１０】この染色体ＤＮＡを適当な制限酵素、例え
ばＥｃｏＲＩを用いて切り出し、得られたＤＮＡ断片を
適当なクローニングベクター、例えばｐＵＣ１１８（宝
酒造製）へクローニングし、セリンヒドロキシメチルト
ランスフェラーゼが欠損したグリシン要求性大腸菌変異
株を形質転換する。この形質転換株を適当な選択圧下で
培養し、培養物から菌体を回収し、菌体から常法、例え
ばアルカリ−ＳＤＳ法によりプラスミドを抽出する。こ
のプラスミドを適当な制限酵素で切断し、アガロースゲ
ル電気泳動により切断断片を分離および解析し、ブレビ
バクテリウム・フラバムＭＪ−２３３染色体由来の挿入
断片をゲルより抽出することにより、本発明のｇｌｙＡ
断片を取得することができる。

【００１１】ここで、上記グリシン要求性大腸菌変異株
としては、例えばエシエリヒア・コリＡＴ２４５７（ｇ
ｌｙＡ）［静岡県三島市谷田１−１１１ 国立遺伝学研
究所遺伝実験生物保存研究センターに系統番号：ＭＥ５
３６２として保管されており、同センターから入手可
能。］を挙げることができる。また、本発明のｇｌｙＡ
断片上のｇｌｙＡ遺伝子の存在は、上記グリシン要求性
大腸菌変異株への相補試験により容易に確認することが
できる。

【００１２】かくして得られる本発明のｇｌｙＡ断片の
１つとして、上記ブレビバクテリウム・フラバムＭＪ−
２３３の染色体ＤＮＡを制限酵素ＢａｍＨＩとＳｍａＩ
で切り出すことによって得られる大きさ約２．１ｋｂの
ＤＮＡ断片を挙げることができる。この大きさ約２．１
ｋｂのｇｌｙＡ断片の塩基配列は、プラスミドｐＵＣ１
８またはｐＵＣ１９等を用いるジデオキシヌクレオチド
酵素法［dideoxy chain termination 法；Sanger, F et
al., Proc. Nat. Acad. Sci. USA, Vol.74, p.5463,
(1977)］により決定することができる。このようにして
決定した上記大きさ約２．１ｋｂのＤＮＡ断片中の配列
を後記配列表の配列番号：１に示す。この配列中に存在
するオープンリーディングフレームから、セリンヒドロ
キシメチルトランスフェラーゼをコードする遺伝子（ｇ
ｌｙＡ遺伝子）は、配列番号１の配列中のアミノ酸番号
１からアミノ酸番号４３４までのアミノ酸配列をコード
するものであることが明らかとなった。

【００１３】上記ｇｌｙＡ遺伝子を包含してなる本発明
のセリンヒドロキシメチルトランスフェラーゼをコード
する遺伝子を含むＤＮＡ断片は、天然の細菌染色体ＤＮ
Ａ、例えばコリネ型細菌染色体ＤＮＡから分離されたも
ののみならず、通常用いられるＤＮＡ合成装置、例えば
ベックマン社製システム−１プラス（System-1 Plus）
を用いて合成されたものであってもよい。

【００１４】また、前記の如くブレビバクテリウム・フ
ラバムＭＪ−２３３等の細菌染色体から取得される本発
明のＤＮＡ断片は、セリンヒドロキシメチルトランスフ
ェラーゼをコードする機能を実質的に損なうことがない
限り、塩基配列の一部の塩基が他の塩基と置換されてい
ても、削除されていてもよく、新たに塩基が挿入されて
いてもよく、あるいは塩基配列の一部が転移されている
ものであってもよく、さらにそれらの塩基配列にハイブ
リダイズする塩基配列であってもよく、これらの誘導体
のいずれもが、本発明のセリンヒドロキシメチルトラン
スフェラーゼをコードする遺伝子を含むＤＮＡ断片に包
含されるものである。

【００１５】

【実施例】以上に本発明を説明してきたが、下記実施例
によりさらに具体的に説明する。しかしながら、実施例
は本発明の具体的な認識を得る一助とみなすべきもので
あり、本発明の範囲を些かなりとも限定するものではな
いことを理解しなければならない。

【００１６】実施例１ ブレビバクテリウム・フラバムＭＪ−２３３由来セリン
ヒドロキシメチルトラスフェラーゼ遺伝子を含むＤＮＡ
断片のクローン化 （Ａ） ブレビバクテリウム・フラバムＭＪ−２３３の
全ＤＮＡの抽出 ブレビバクテリウム・フラバムＭＪ−２３３(FERM BP-1
497)を、半合成培地であるＡ培地［組成：尿素２ｇ，
（ＮＨ₄ ）₂ ＳＯ₄ ７ｇ、Ｋ₂ ＨＰＯ₄ ０．５ｇ，
ＫＨ₂ ＰＯ₄ ０．５ｇ、ＭｇＳＯ₄ ０．５ｇ、Ｆｅ
ＳＯ₄ ・７Ｈ₂ Ｏ６ｍｇ、ＭｎＳＯ₄ ・４〜６Ｈ₂ Ｏ
６ｍｇ、酵母エキス２．５ｇ、カザミノ酸５ｇ、ビオチ
ン２００μｇ、塩酸チアミン２００μｇ、グルコース２
０ｇを蒸留水に溶解して１リットルとする］１リットル
中で対数増殖期後期まで培養した後に菌体を回収した。

【００１７】得られた菌体をリゾチームを１０mg/ml の
濃度で含有する溶液［組成：１０ｍＭ ＮａＣｌ、２０
ｍＭ トリス緩衝液（ｐＨ８．０）、１ｍＭ ＥＤＴＡ
・２Ｎａ］１５ｍｌに懸濁した。該懸濁液にプロテナー
ゼＫを１００μg/mlの最終濃度で添加し、これを３７℃
で１時間インキュベートした。次に、ドデシル硫酸ナト
リウムを最終濃度が０．５％になるように添加し、５０
℃で６時間インキュベートして溶菌させた。得られた溶
菌液に等量のフェノール／クロロホルム溶液を添加して
室温で１０分間穏やかに振盪した後、その全量を１０〜
１２℃で２０分間、５，０００×ｇの遠心分離に供し、
その上清画分を分取した。該上清画分中に酢酸ナトリウ
ムをその濃度が０．３Ｍとなるように添加し、次いで２
倍量のエタノールを穏やかに添加した。水層とエタノー
ル層の間に存在するＤＮＡをガラス棒で搦め取り、これ
を７０％エタノールで洗浄して風乾した。得られたＤＮ
Ａは、溶液［組成：１０ｍＭ トリス緩衝液（ｐＨ７．
５）、１ｍＭ ＥＤＴＡ・２Ｎａ］５ｍｌを加えて４℃
で一晩静置した後、実験に供した。

【００１８】（Ｂ）セリンヒドロキシメチルトランスフ
ェラーゼ遺伝子を含むＤＮＡ断片の調製 上記（Ａ）項で調製したブレビバクテリウム・フラバム
の染色体ＤＮＡ２５μｇを、制限酵素ＥｃｏＲＩ ５０
ｕｎｉｔと３７℃で１時間反応させて切断し、染色体Ｄ
ＮＡのＥｃｏＲＩ分解物を調製した。この分解物溶液
に、プラスミドｐＵＣ１１８（宝酒造製）１μｇを制限
酵素ＥｃｏＲＩと３７℃で１時間反応させて得た分解物
溶液を混合し、これにそれぞれ最終濃度が５０ｍＭトリ
ス緩衝液（ｐＨ７．６）、１０ｍＭジチオスレイトー
ル、１ｍＭ ＡＴＰ、１０ｍＭ ＭｇＣｌ₂ 、およびＴ
４リガーゼ１ｕｎｉｔとなるように各成分を添加し、１
６℃で１５時間反応させて、ＤＮＡ分解物を結合させ
た。

【００１９】得られた溶液を用いて常法［M. Mandel,
A. Higa ; J. Mol. Biol., 53, 159(1970)参照］に従っ
て前記グリシン要求性大腸菌変異株、エシエリヒア・コ
リＡＴ２４５７（ｇｌｙＡ）を形質転換し、得られた形
質転換菌をアンピシリンを５０μg/ml含む選択培地［組
成；Ｋ₂ ＨＰＯ₄ ７ｇ、ＫＨ₂ ＰＯ₄ ２ｇ、（ＮＨ₄）
₂ ＳＯ₄ １ｇ、ＭｇＳＯ₄ ・７Ｈ₂ Ｏ ０．１ｇ、グル
コース２ｇ、および寒天１６ｇを蒸留水に溶解して１リ
ットルとする］に塗抹した。

【００２０】選択培地上に生育した菌株を、アンピシリ
ンを最終濃度で５０μg/ml含有するＬ培地に植菌し、こ
れを３７℃で７時間培養した。培養液を４℃で１０分間
８,０００×ｇの遠心分離にかけて菌体を回収した。回
収した菌体からアルカリ−ＳＤＳ法［T. Maniatis, E.
F. Fritsch, J. Sambrook, Molecular cloning, p.90-9
1(1982)参照］によりプラスミドを抽出した。該プラス
ミドを制限酵素ＥｃｏＲＩで切断し、その切断断片をア
ガロースゲル電気泳動に供したところ、プラスミドｐＵ
Ｃ１１８のＥｃｏＲＩ部位に大きさ約３．８ｋｂのＤＮ
Ａ断片の挿入が認められた。

【００２１】上記の大きさ約３．８ｋｂの挿入ＤＮＡ断
片をアガロースゲル中より回収し、さらに制限酵素Ｂａ
ｍＨＩと制限酵素ＳｍａＩとで処理した。この分解物溶
液と、プラスミドｐＵＣ１１９（宝酒造製）を制限酵素
ＢａｍＨＩと制限酵素ＳｍａＩとで処理して得た分解物
溶液を混合し、ｐＨ７．６で １０ｍＭジチオスレイト
ール、１ｍＭ ＡＴＰ、１０ｍＭ ＭｇＣｌ₂ の存在
下、Ｔ４ＤＮＡリガーゼによりＤＮＡ分解物を結合させ
た。

【００２２】得られた結合ＤＮＡ溶液を用いて常法に従
って、前記グリシン要求性大腸菌変異株エシエリヒア・
コリＡＴ２４５７を形質転換し、得られた形質転換菌を
アンピシリンを５０μg/ml含む前記選択培地に塗抹し
た。選択培地上に生育した菌株を、アンピシリンを最終
濃度で５０μg/ml含有するＬ培地［トリプトン１０ｇ、
酵母エキス５ｇ、塩化ナトリウム５ｇおよび寒天１６ｇ
を蒸留水１リットルに溶解して調製］に植菌し、これを
３７℃で７時間培養した。培養液を４℃で１０分間、
８,０００×ｇの遠心分離にて菌体を回収した。

【００２３】回収した菌体から前記のアルカリ−ＳＤＳ
法によりプラスミドを抽出し、該プラスミドを制限酵素
ＢａｍＨＩとＳｍａＩとで切断し、その切断断片をアガ
ロースゲル電気泳動に供したところ、プラスミドｐＵＣ
１１９のＢａｍＨＩ−ＳｍａＩ部位に大きさ約２．１ｋ
ｂのＤＮＡ断片の挿入が認められた。

【００２４】（Ｃ）グリシン要求性大腸菌変異株への相
補試験 上記（Ｂ）項で調製したプラスミド溶液を用いて前記グ
リシン要求性大腸菌変異株エシエリヒア・コリＡＴ２４
５７を形質転換したところ、約１０⁵ 細胞／μｇＤＮＡ
の頻度で前記選択培地上に形質転換株を得た。これによ
り、上記（Ｂ）項で調製したプラスミドの大きさ約２．
１ｋｂのＢａｍＨＩ−ＳｍａＩ ＤＮＡ断片上にセリン
ヒドロキシメチルトランスフェラーゼ遺伝子が含まれる
ことが確認された。

【００２５】実施例２ セリンヒドロキシメチルトラン
スフェラーゼ遺伝子を含むＤＮＡ断片の塩基配列の決定 上記実施例１の（Ｃ）項でセリンヒドロキシメチルトラ
ンスフェラーゼが含まれることが確認された大きさ約
２．１ｋｂのＤＮＡ断片の塩基配列を下記の操作により
決定し、このＤＮＡ断片上に存在するセリンヒドロキシ
メチルトランスフェラーゼ遺伝子の存在部位を特定し
た。

【００２６】大きさ約２．１ｋｂのＤＮＡ断片溶液１４
μｌを制限酵素Ｓａｕ３ＡＩを用いて３７℃で１〜５分
間処理してＤＮＡ断片を部分分解した。また、クローニ
ングベクターｐＵＣ１１８（宝酒造製）を制限酵素Ｂａ
ｍＨＩで切断した。得られたベクターＤＮＡ断片と部分
分解ＤＮＡ断片とを混合し、この混合液にそれぞれ最終
濃度が５０ｍＭトリス緩衝液（ｐＨ７．６）、１０ｍＭ
ジチオスレイトール、１ｍＭ ＡＴＰ、１０ｍＭ Ｍｇ
Ｃｌ₂ 、およびＴ４ＤＮＡリガーゼ１ｕｎｉｔとなるよ
うに各成分を添加し、ベクターＤＮＡ断片と部分分解Ｄ
ＮＡ断片とを結合させた。

【００２７】上記と同様に大きさ約２．１ｋｂのＤＮＡ
断片溶液１４μｌを制限酵素ＴａｑＩ ５０ｕｎｉｔと
５〜８分間反応させて部分分解ＤＮＡ断片を調製した。
クローニングベクターｐＵＣ１１８を制限酵素ＡｃｃＩ
で切断した後、これを上記と同様にして部分分解ＤＮＡ
と結合させた。

【００２８】得られたプラスミド混液を用い、常法［J.
Mol. Biol., 53, 159(1970)参照］によりエシエリヒア
・コリＪＭ１０９株（宝酒造製）を形質転換し、アンピ
シリンを５０μｇ含む前記のＬ培地に塗抹した。上記培
地に生育した菌株を常法に従い液体培養し、得られた培
養物よりプラスミドＤＮＡを抽出した。抽出したプラス
ミドＤＮＡを用いて、ベクターｐＵＣ１１８に挿入され
た部分分解ＤＮＡ断片の塩基配列をジデオキシヌクレオ
チド酵素法［dideoxy chain termination method, Sang
er, F. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 74, 546
3(1977) 参照］により決定した。

【００２９】具体的には、上記培養物より抽出したプラ
スミドＤＮＡをパーキン・エルマー社製カタリスト８０
０モレキュラー・バイオロジー・ラボステーション(CAT
ALYST 800 Moleculer Biology Labostation ; Prkin-El
mer)を用いてプロトコールに従い反応させた後、パーキ
ン・エルマー社製３７３Ａ ＤＮＡシークエンサーによ
り各々のプラスミドの挿入ＤＮＡ断片の塩基配列を決定
した。そして、これらの個々の配列の連結は、パーキン
・エルマー社製のシークエンス解析ソフト インヘリッ
ト(INHERIT) を用いて行い、大きさ約２．１ｋｂのＤＮ
Ａ断片の全塩基配列を決定した。その配列を後記配列表
の配列番号：１に示す。

【００３０】決定した塩基配列中にはオープンリーディ
ングフレームの存在が認められ、既知のエシエリヒア・
コリのｇｌｙＡ遺伝子との相同性の比較により、それが
ブレビバクテイウム・フラバムＭＪ−２３３のｇｌｙＡ
遺伝子（塩基番号５５６〜１８５７）であることが判明
した。

【００３１】

【発明の効果】本発明により提供されるセリンヒドロキ
シメチルトランスフェラーゼをコードする遺伝子を含む
ＤＮＡ断片を用いてコリネ型細菌を育種改良することに
より、セリンヒドロキシメチルトランスフェラーゼ高産
生能を有するコリネ型細菌の取得が可能となる。

【００３２】

【配列表】

配列番号：１ 配列の長さ：２１０４ 鎖の数：二本鎖 配列の型：核酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：Genomic DNA 起源： 生物名：ブレビバクテリウム・フラバム（Brevibacteri
um flavum ） 株名：ＭＪ−２３３ 配列の特徴： 特徴を表す記号：ＣＤＳ 存在位置：５５６−１８５７ 特徴を決定した方法：Ｅ

【００３３】 配列 GGATCCCGCG ACACCAATGA CAAACGGCAC AGAGGTGGAG GGGGAAGTTC CGAGGAAGGT 60 TTCGGTGGCT GCGGTAAGTT GCTGTCGGGC CGCTACCTGG AGGTGAATCA GACGGGACAG 120 CGGAAGGTAG ACTTCTGCCA CTTCAGCGAG GTCAATGTTT TCTCCGATGC CTCGAAGTTC 180 AATGACTTCT TTTTGGGTCA GCACCTGAGG CATTGAGTTT CTCAGCTCGC GCCATTGTGC 240 GCGGTCGAAA TCAAGGTAGG GGCTGAAATC TGGTGTGCGT GGGGAAGGTT TCACACCAGT 300 TGTGCTTGCA GCGTTTTGCT CTGCCATGAA TCCATTGTGC ACCTTAGCTA CTCCATTAGT 360 GTGATCGGGG TTATTTTTTC ACTTCAATGG GTGGCTAAAA GACGTGGGCA CGTGAGTAAA 420 CTCATGCGCG CGAAACGATG GAAGTGAACC CATACTTTTA TATATGGGTA TCGGCGGTCT 480 ATGCTTGTGG GCGTACCTGT CCCGCGAGTG AGGTCTTACG CGCGGGATTC GTCTTGTGAA 540 AGGTTAGCTG ACCTG ATG ACC GAT GCC CAC CAA GCG GAC GAT GTC CGT TAC 591 Met Thr Asp Ala His Gln Ala Asp Asp Val Arg Tyr 1 5 10 CAG CCA CTG AAC GAG CTT GAA CCT GAG GTG GCT GCT GCC ATC GCT GGG 639 Gln Pro Leu Asn Glu Leu Glu Pro Glu Val Ala Ala Ala Ile Ala Gly 15 20 25 GAA CTT GCC CGT CAA CGC GAT ACA TTA GAG ATG ATC GCG TCT GAG AAC 687 Glu Leu Ala Arg Gln Arg Asp Thr Leu Glu Met Ile Ala Ser Glu Asn 30 35 40 TTC GTT CCC CGT TCT GTT TTG CAG GCG CAG GGT TCT GTT CTT ACC AAT 735 Phe Val Pro Arg Ser Val Leu Gln Ala Gln Gly Ser Val Leu Thr Asn 45 50 55 60 AAG TAT GCC GAG GGT TAC CCT GGC CGC CGT TAC TAC GGT GGT TGC GAA 783 Lys Tyr Ala Glu Gly Tyr Pro Gly Arg Arg Tyr Tyr Gly Gly Cys Glu 65 70 75 CAA GTT GAC ATC ATT GAG GAT CTT GCA CGT GAT CGT GCG AAG GCT CTC 831 Gln Val Asp Ile Ile Glu Asp Leu Ala Arg Asp Arg Ala Lys Ala Leu 80 85 90 TTC GGT GCA GAG TTC GCC AAT GTT CAG CCT CAC TCC GGC GCG CAG GCT 879 Phe Gly Ala Glu Phe Ala Asn Val Gln Pro His Ser Gly Ala Gln Ala 95 100 105 AAT GCT GCT GTG CTG ATG ACT TTG GCT GAG CCA GGC GAC AAG ATC ATG 927 Asn Ala Ala Val Leu Met Thr Leu Ala Glu Pro Gly Asp Lys Ile Met 110 115 120 GGT CTG TCT TTG GCT CAT GGT GGT CAC TTG ACC CAC GGA ATG AAG TTG 975 Gly Leu Ser Leu Ala His Gly Gly His Leu Thr His Gly Met Lys Leu 125 130 135 140 AAC TTC TCC GGA AAG CTG TAC GAG GTT GTT GCG TAC GGT GTT GAT CCT 1023 Asn Phe Ser Gly Lys Leu Tyr Glu Val Val Ala Tyr Gly Val Asp Pro 145 150 155 GAG ACC ATG CGT GTT GAT ATG GAT CAG GTT CGT GAG ATT GCT CTG AAG 1071 Glu Thr Met Arg Val Asp Met Asp Gln Val Arg Glu Ile Ala Leu Lys 160 165 170 GAG CAG CCA AAG GTA ATT ATC GCT GGC TGG TCT GCA TAC CCT CGC CAC 1119 Glu Gln Pro Lys Val Ile Ile Ala Gly Trp Ser Ala Tyr Pro Arg His 175 180 185 CTT GAT TTC GAG GCT TTC CAG TCT ATT GCT GCG GAA GTT GGC GCG AAG 1167 Leu Asp Phe Glu Ala Phe Gln Ser Ile Ala Ala Glu Val Gly Ala Lys 190 195 200 CTG TGG GTC GAT ATG GCT CAC TTC GCT GGT CTT GTT GCT GCT GGT TTG 1215 Leu Trp Val Asp Met Ala His Phe Ala Gly Leu Val Ala Ala Gly Leu 205 210 215 220 CAC CCA AGC CCA GTT CCT TAC TCT GAT GTT GTT TCT TCC ACT GTC CAC 1263 His Pro Ser Pro Val Pro Tyr Ser Asp Val Val Ser Ser Thr Val His 225 230 235 AAG ACT TTG GGT GGA CCT CGT TCC GGC ATC ATT CTG GCT AAG CAG GAG 1311 Lys Thr Leu Gly Gly Pro Arg Ser Gly Ile Ile Leu Ala Lys Gln Glu 240 245 250 TAC GCG AAG AAG CTG AAC TCT TCC GTA TTC CCA GGT CAG CAG GGT GGT 1359 Tyr Ala Lys Lys Leu Asn Ser Ser Val Phe Pro Gly Gln Gln Gly Gly 255 260 265 CCT TTG ATG CAC GCA GTT GCT GCG AAG GCT ACT TCT TTG AAG ATT GCT 1407 Pro Leu Met His Ala Val Ala Ala Lys Ala Thr Ser Leu Lys Ile Ala 270 275 280 GGC AAT GAG CAG TTC CGT GAC CGT CAG GCT CGC ACG TTG GAG GGT GCT 1455 Gly Asn Glu Gln Phe Arg Asp Arg Gln Ala Arg Thr Leu Glu Gly Ala 285 290 295 300 CGC ATT CTT GCC GAG CGT CTG ACT GCT TCT GAT GCG AAG GCC GCT GGC 1503 Arg Ile Leu Ala Glu Arg Leu Thr Ala Ser Asp Ala Lys Ala Ala Gly 305 310 315 GTG GAT GTC TTG ACC GGT GGC ACT GAT GTG CAC TTG GTT TTG GCT GAT 1551 Val Asp Val Leu Thr Gly Gly Thr Asp Val His Leu Val Leu Ala Asp 320 325 330 CTG CGT AAC TCC CAG ATG GAT GGC CAA CAG GCG GAA GAT CTG CTG CAC 1599 Leu Arg Asn Ser Gln Met Asp Gly Gln Gln Ala Glu Asp Leu Leu His 335 340 345 GAG GTT GGT ATC ACT GTG AAC CGT AAC GCG GTT CCT TTC GAT CCT CGT 1647 Glu Val Gly Ile Thr Val Asn Arg Asn Ala Val Pro Phe Asp Pro Arg 350 355 360 CCA CCA ATG GTT ACT TCT GGT CTG CGT ATT GGT ACT CCT GCG CTG GCT 1695 Pro Pro Met Val Thr Ser Gly Leu Arg Ile Gly Thr Pro Ala Leu Ala 365 370 375 380 ACC CGT GGT TTC GAT ATT CCT GCA TTC ACT GAG GTT GCA GAC ATC ATC 1743 Thr Arg Gly Phe Asp Ile Pro Ala Phe Thr Glu Val Ala Asp Ile Ile 385 390 395 GGT ACT GCT TTG GCT AAT GGT AAG TCC GCA GAC ATT GAG TCC CTG CGT 1791 Gly Thr Ala Leu Ala Asn Gly Lys Ser Ala Asp Ile Glu Ser Leu Arg 400 405 410 GGC CGT GTA GCA AAG CTT GCT GCA GAT TAC CCA CTG TAT GAG GGC TTG 1839 Gly Arg Val Ala Lys Leu Ala Ala Asp Tyr Pro Leu Tyr Glu Gly Leu 415 420 425 GAA GAC TGG ACC ATC GTC TAAGCTTTTC TTTGAGTTTT CATATGTAGA 1887 Glu Asp Trp Thr Ile Va 430 434 AGGCATCGTC GGCTTCGGCC TGGCGGTGCT TTTCTCGTTG TTTTGTGGTT TTGTCAGAGG 1947 ATGTCATGCG CGTTTTAATT ATTGATAATT ATGATTCTTT CACGTTTAAT CTCGCCACCT 2007 ATGTGGAAGA GGTTACGGGT CAGGCACCTG TGGTGGTGCC TAATGATCAA GAAATAGATG 2067 AGACGCTTTT CGACGCCGTC ATCCTCTCAC CGGGCCC 2104

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 (Ｃ１２Ｎ 15/09 ＺＮＡ Ｃ１２Ｒ 1:13） Ｃ１２Ｒ 1:13） (72)発明者 小林 幹 茨城県稲敷郡阿見町中央八丁目３番１号 三菱化学株式会社筑波研究所内 (72)発明者 湯川 英明 茨城県稲敷郡阿見町中央八丁目３番１号 三菱化学株式会社筑波研究所内

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 配列表の配列番号１の配列中のアミノ酸
   番号１からアミノ酸番号４３４までのアミノ酸配列で示
   されるセリンヒドロキシメチルトランスフェラーゼをコ
   ードする遺伝子を含むＤＮＡ断片。