JPH07501822A

JPH07501822A - 抗癌剤として有用な高度に水溶性のビス−ナフタルイミド

Info

Publication number: JPH07501822A
Application number: JP5510990A
Authority: JP
Inventors: スン，ジユン−ホイ
Original assignee: デュポン・ファーマシュウティカルズ・カンパニー
Priority date: 1991-12-11
Filing date: 1992-12-11
Publication date: 1995-02-23
Also published as: AU3241593A; DE69211567T2; DE69211567D1; WO1993012092A1; CA2125142A1; EP0618901B1; ES2088661T3; US5488110A; EP0618901A1

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】発明の名称抗癌剤として有用な高度に水溶性のビス−ナフタルイミド発明の分野本発明は、２．２’−［１，２−エタンジイルビス（メチルイミノ−２，１−エタンジイル）〕−ビス〔５−ニトロ−１■−ベンズ（ｄｅｌイソキノリン−１，３（２１１）−ジオン］、２−　［２−［Ｎ−メチル−Ｎ−〔２−（［２−（５ −ニトロ−１，３−ジオキソ−１■−ベンズ［ｄｅｌイソキノリン−２（３１１）−イル）エチル〕アミノ］エチル〕アミン］エチル）−５−＝トｃ＋−１１１ −ベンズ［ｄｅ］イソキノリン−１，３（２１１）−ジオン、２．２’−Ｅｌ、２−エタンジイルビス（イミノ−２，１−エタンジイル）〕−ビス〔５−ニトロ −１８−ベンズ［ｄｅ］イソキノリン−１，３（２■）−ジオン〕を包含するビス−ナフタルイミド、これらの化合物を含有する医薬組成物、および哺乳動物における充実性腫瘍癌を治療するためにこれらの化合物を使用する方法に関するものである。

発明の背景Ｈａｒｎｉｓｃｈ等の米国特許第４．９１９．８４８号は、電子写真トーナーにおいて有用である電荷−調節物質として有用なナフタール酸イミドを開示している。

Ｂｒａｎａ等の米国特許第４．８７４．８６３号は、式〔式中、ＸＩ、　Ｎ２、Ｎ３およびＮ４は、同一または異なりそしてそれぞれ、Ｈ２ＳＯ４、Ｎ１１２、Ｃ，〜Ｃ６−アルキルアミノ、ジＣ，−Ｃ，−アルキルアミノ、０１１、Ｃ１〜Ｃ０−アルコキシ、ハロゲン、トリハロメチル、Ｃ６〜Ｃ。

アルキル、ホルミル、Ｃ，−Ｃ，−アルキルカルボニル、Ｃ５〜Ｃ６−アシルアミノ、ウレイル、自〜Ｃ６−アルキルウレイルまたはＣ１〜Ｃ６−アルルカルボニルアミノでありそしてＲは、連鎖の１つの点または２つの点において第２または第３アミノ基により中断されている（２個の窒素原子はさらに相互にアルキレン基により結合されていてもよい）直鎖状または分枝鎖状のＣ４〜Ｃ１゜−アルキレンである〕の抗癌化合物または、これらの化合物と生理学的に許容し得る酸との塩を開示している。

Ｂｒａｎａ等の米国特許第４．８７４．８６３号は、具体的に本発明の化合物を開示していない。米国特許第４．８７４．８６３号に具体的に開示されている化合物は、本発明の化合物よりも溶解性が低くそして、それ故に、このような化合物をヒトに使用するのに適した投与形態に処方しようと試みる場合は、処方上の問題を与える。

本発明の化合物は、目ざましく増大された水溶性を有しているということが見出された。この増大された水溶性は、上記特許の化合物以上の予期し得ない利点である。

さらに、本発明の化合物は、Ｂｒａｎａ等により具体的に開示されている化合物に比較して予期し得ないすぐれた抗腫瘍活性を示す。

発明の詳細な説明は、式〔式中、Ｒ１およびＲ２は、独立してＩ−１またはＣＩ＋３でありモしてＸおよびＸ′は独立してＩＩまたはＮ０２であり、そして但し、ＸまたはＸ′の少な（とも１個はＮｏ２である〕の化合物またはその医薬的に許容し得る塩に関するものである。

本発明の好ましい化合物は、具体的には、２．２’−［１，２−エタンジイルビス（メチルイミノ−２，１−エタンジイル）〕−ビス〔５−ニトロ−１■−ベンズ〔ｄｅ〕イソキノリン−１，３（２１１）−ジオン〕　；２−　［２−［Ｎ−メチル−Ｎ−（２−（［２−（５−ニトロ−１，３−ジオキソ−１１１−ベンズ（ｄｅ）イソキノリン−２（３＋１）−イル）エチル〕アミノ］エチル〕アミノ］エチル］−５−ニトロ−１■−ベンズ［ｄｅ］イソキノリン−１，３（２１１）−ジオン：２．２’−［１，２−エタンジイルビス（イミノ−２，１−エタンジイル）〕−ビス〔５−ニトロ−１１１−ベンズ［ｄｅｌイソキノリン−１，３（２１１）　−ジオン］　：およびこれらの化合物の医薬的に許容し得る塩である。

また、本発明によって、上述した式（ｉ）の化合物を含有する医薬組成物、および、哺乳動物における充実性腫瘍症（ｓｏｌｉｄ　ｔｕｍｏｒｓ）を治療するためにこれらの化合物を使用する方法が提供される。

本発明の化合物は、米国特許第４．８７４．８６３号の広い範囲に含まれ、るけれども、該特許に具体的に請求されていないしまた例示もされていない。本発明の化合物は、Ｂｒａｎａ等の米国特許第４．８７４．８６３号に具体的に開示されている化合物に比較して有意に増大された抗腫瘍活性を有していることが発見された。本発明の化合物が生体内で充実性腫瘍に対して非常に強力な活性を示すのに反して、Ｂｒａｎａ等によって具体的に開示されている構造的に類似した化合物は、不活性であることが見出された。

さらに、実施例１におけるような本発明のＮ−メチル置換化合物は、意外な増大された水溶性を有していることが見出された。分子に対する疎水性メチル基の付加は分子の水溶性を減少させることが予期されるので、これは意外なことである。

本発明の化合物は、周囲温度〜溶剤の沸騰温度の範囲の温度で、エタノールまたはジメチルホルムアミドまたはテトラヒドロフランのような不活性溶剤中において、２当量の式（ｎ）の無水物を１当量の式（ｔＤのポリアミンと反応させることによって合成される（以下のスキームＡ参照）。

それから、得られた懸濁液を濾過して（ｉ）の遊離塩基を得るか、またはそれを適当な鉱酸または有機酸で酸性にして医薬的に許容し得る塩を生成させ、この塩を濾過によって得ることができる。遊離塩基の塩は、また、エチルアルコールまたはジクロロメタン中の遊離塩基の懸濁液を適当な鉱酸または有機酸で酸性にしそして形成した固体を濾過により集めることによって製造することもできる。ある場合においては、塩を上述したようにして製造する前に、（ｉ）の遊離塩基を、カラムクロマトグラフィーによって精製することが必要である。

スキームＡ（ｉ）（聞）（ｉ）造することができる。式（ｔｔｉ）の化合物は、以下に記載する方法によって製造することができる。

実施例１２．２’−（１，２−エタンジイルビス（メチルイミノ−２，１−エタンジイル）〕−ビス〔５−ニトロ−１１１−ベンズ［ｄｅ］イソキノリン−１，３（２１１）−ジオンコメタンスルホン酸塩（１：　２）　（Ｉ　ａ）。

実施例１の化合物は、次の方法によって合成することができる（以下のスキーム１参照）。

Ａ部：ビス（１，１’−ジメチルエチルＨ１，２−エタンジイルビス（メチルイミノ−２−オキシ−２，１−エタンジイル）〕ビス（カルバメート）　（Ｉｌａ）Ｎ−１−ＢＯＣ−グリシン（１７，５２９，１００ミリモル）および１，１′− カルボニルジイミダゾール（１７，０２９，］０５ミ０５ミリの塩化メチレン（３００／）溶液を、水浴冷却を使用して２時間撹拌した。これに、０〜５℃のＮ、　Ｎ’−ジメチルエチレンジアミンの塩化メチレン（４０＋＋／）溶液を加えた。混合物を、周囲温度で一夜撹拌した。この溶液を、飽和Ｎａ２Ｃ０３（２Ｘ　１００ｍ１）　、食塩水（Ｉ　Ｘ　１００＋＋１）で洗浄し、無水のＭｇＳＯ４上で乾燥し、濾過しそして蒸発して白色の固体としてｌ１ａ１８．８３９　（収率４６，８％）を得た。融点１１２〜１１８℃。

ＮＭＲ（ＣＤＣ７！３）　δ　５．４３（ブロード、２１１．　２Ｎｌ’ｌ）、３．８５−３．９８（ｌａ、　４１１．２ＣＨ２）、　３．５５（ｓ、　４１１．２ＣＨ２）、　２．９５（１１，６１１，２ＣＩ＋３）および１．４４（ｓ、　１８１１．６ＣＩ＋３）。ｌｌ５（ＤＣ／）　ｍ／ｅ　４０３　（Ｍ＋］）。

８部：Ｎ、Ｎ’−１，２−エタンジイルビス〔２−アミノ−Ｎ−メチルアセトアミド〕　ジ塩酸塩（Ｈａ）ジオキサン５０ｍ／中のＵａ　（１２，４ｇ９．３１．０２ミリモル）およびジオキサン中の４．４Ｎ　ＩＩＣ／　１５．５＋＋／の混合物を０℃で３時間そしてそれから室温で４８時間撹拌した。混合物を、さらに２４時間５０〜５５℃で加温した。冷浸、混合物をエーテルに加えそして固体を窒素下で濾過器上で集めて白色の固体としてｍａ　５．５７ｇ（７９，６％）を得た。融点２２３℃（分解）。

ＮＭＲ（Ｄ２０）　δ３．８８．３．８０（２ｓ、　４１１．２Ｃ１１２）、　３．４５（Ｓ、　４■、　２ＣＨ，）および２．８５（ｔ、６１１．　２ＣＨ３）。ＭＳ（ＣＩ）　ｔｉ／ｅ　２０３　（ｌｌ１）。ＩＲ（ＫＢｒ）３４３５（Ｎ１１２）、　１６６５．１６４９（Ｃ＝０）ＣＩ−’。

９輝：　Ｎ、　Ｎ’−ビス（２−アミノエチル）−Ｎ、Ｎ’−ジメチル−１，２ −エタンジアミンテトラ塩酸塩（ＩＶａ）Ｈａ　（５，３０９，１８，３２ミリモル）のＴＩＩＦ　（１２５＠ｌ）懸濁液に、ＩＭＢＨ３・ＴＩＩＦ複合体１５０＋＋１を徐々に加えた。混合物を、−要用熱還流した。さらに、１ＭＢ＋１３・ＴＩＩＦ複合体５０ｍ１を加え、混合物を２４時間還流した。さらに、ＩＭＢＩＩ３・ＴＨＦ複合体４０ｍ１を加えそして混合物を、さらに、７２時間還流した。ＴＬＣ分析（ＮＨ４０１１／イソプロパツール＝１＝３）は、反応が完了していることを示す。反応溶液を、室温に冷却しそしてメタノール１１５＋＋／で徐々に反応停止した。溶液を一夜還流した。溶液中の溶剤を蒸発し、そして残留する液体を、４回メタノール（１０（ｍりに加えそして蒸発して、硼酸トリメチルを除去した。メタノール３０Ｉｌｌ中の得られた粘稠な油に１ｍ　ＩＩ（Ｊ！　８　ｍ　ｌを加えた。

白色の固体を濾過器上で集めて、ＩＶａ　３．５６９　（５８，２９）を得た。

ＮＩＩＲ（Ｄ２０）　６３．５３（ｓ、４８．２ＣＩｌｚ）、３．４８−３．３０（■、８１１．　４ＣＨ２）および２．８３（ｓ、　６１１．２ＣＪＩ３）。

ＭＳ（ＤＣＩ）　ｍ／ｅ　１７５　（Ｍ＋１）。

０部：Ｎ、Ｎ’−ビス（２−アミノエチル）−Ｎ、Ｎ’−ジメチル−１，２−エタンジアミン（Ｖａ）新しく製造されたナトリウムエトキシド溶液（エタノール５Ｑｍｌ中ナトリウム１．１５　ｑ　）に、ｒＶａ　３．５６９　（１１，１２ミリモル）を加えた。

混合物を、室温で２１７２時間撹拌した。混合物中の塩化ナトリウムを濾過器上で除去しそして濾液中の溶剤を蒸発した。残留物中の生成物を、クーゲルロール蒸留（８４〜１０４℃、０．７１）により精製して透明な液体としてＶａ　１．３９ｖ　（７２％）を得た。

ＮＭＲ（ＣＤＣ１３）　６２．７ｇ（ｔ、４１１．　２Ｃ１１２）、２．５０（Ｓ、４１１．　２Ｃ１１２）。

２．４５（ｔ、４１１．　２Ｃ１１２）および２．２５（ｓ、６１１．　２ＣＩＩｓ）。ＭＳ（ＣＤＩ）　ｔａ／ｅ　１７５（Ｍ＋１）。ＩＲ（ヌノヨール）　３３６０．３２８１（ＮＨ，ＮＩ＋２）ｃｍ−’。

Ｅ部：　２．２’　−［１，２−エタンジイルビス（メチルイミノ−２，１−エタンジイル）〕−ビス〔５−ニトロ−Ｉｌｌ−ベンズ（ｄｅ）イソキノリン−１，３（２１１）−ジオンコメタンスルホン酸塩（］　：　２）（Ｉ　ａ）エタノール３０ｍ１中の３−二トロー１．８−ナフタール酸無水物（１，９５ｇ、８．０３ミリモル）およびＶａ（０，７ｖ、　４．０２ミリモル）の混合物を、室温で２４時間撹拌した。固体を濾過器上に集めて■の粗製の遊離塩基（２，３０ｇ、収率９２％）を得た。これを、カラムクロマトグラフィー処理により精製して明るい褐色の固体として純粋な遊離塩基１．２７９を得た。塩化メチレン４０Ｍｅ中の遊離塩基（１，２６９，２，０ミリモル）に、メタンスルホン酸０．３９　ｇ（４，０ミリモル）を加えそして混合物を室温で一夜撹拌した。得られた沈殿を濾過器上に集めて１．７６すを得、これをメタノール中で一夜加熱することにより精製して、明るい黄色の固体としてＩａｌ、１８ｇを得た。融点２４４〜２４５℃（分解）。

ＮＨＲ（ＤＭＳＯ−ｄ＋）　６９．５０（ｄ、２１．　Ｊ＝１．９＋（ｚ、芳香族プロトン）。

９．００（ｄ、　２１１．　Ｊ＝１．９１１ｚ、芳香族プロトン）、　８．８５（ｄ、　２Ｈ，Ｊ＝８．０ＩＩｚ。

芳香族プロトン）、８．７４（ｄ、２＋１．　Ｊ＝７．３Ｈｚ、芳香族プロトン）。

８．１１（ｔ、２１１．　Ｊ＝７．９１１ｚ、芳香族プロトン）、４．４９（ブロードｓ、　４１１゜２ＣＩ＋２）、　３．３７（ブロードｓ、８１１．　４ＧＨｚ）、２．９２（ｓ、６１’！、２ＣＨｓ）および２．２５（ｓ、６８．　２ＣＨｓ）。　ｌｌ５（ＣＩ）　ｍ／ｅ　６２５　（菖＋ｌ）。

分析値：　Ｃ１２１１ｕ＋ＮｅＯｓ’２ＣＩＩ３ＳＯ３Ｆｌ（ＭＷ　８１６．８１）に対する計算値：　Ｃ５０，００Ｈ４，４４Ｎ　１０．２９　８７．８５実測値：　Ｃ４９，６９ＩＩ　４．３３　Ｎ　１０．２４　８７゜７７スキーム１ ■ ｌ　ｒＶ ■ 実施例２２−　［２−（Ｎ−メチル−Ｎ−［２−［（２−（５−ニトロ−１，２−シオキソーｌ１１−ベンズ（ｄｅ）イソキノリン−２（３１１）−イル）エチル］アミノ〕エチル〕アミノ〕エチル〕−５−二トロー１１１−ベンズ（ｄｅ）イソキノリン−１，３（２１１）−ジオンメタンスルホン酸塩（１：２）（Ｉ　ｂ）Ｎ、Ｎ−ジメチルエチレンジアミンをＮ−メチルエチレンジアミンで置換することによって、実施例１において上述した条件を使用して化合物１ｂを製造した。

黄色の固体。融点２３２〜２３４℃（分解）。

遊離塩基に対するＮＭＲ（ＣＤＣ４！ｓ）δ９．２８（ｓ、　Ｉｌｌ、芳香族プロトン）。

９、２５（ｓ、ＩＩＩ、芳香族プロトン）、　９．１０（ｓ、　２Ｈ，芳香族プロトン）。

８、７５（ｔ、　２１１．　Ｊ＝７．９Ｈｚ、芳香族プロトン）、　８．４０（町２１１．芳香族プロトン）、７．９２（ｍ、　２Ｈ１芳香族プロトン）、　４．５２（ｔ、　２）ｌ、　Ｊ＝６．６Ｈｚ。

ＣＨ２）、　４．２０（ｔ、　２＋１．　Ｊ＝６．４Ｈｚ、　Ｃｌ１ｚ）、　２．８９（ｔ、　２１１．　Ｊ＝６．４１１ｚ、　Ｃｌ１ｚ）B ２．７４（ｓ、４＋１．　２Ｃ１１２）、２．５９（ｔ、２Ｂ、Ｊ＝５．５Ｈｚ、　ＣＨ２）および２、３５（ｓ、　３１１．　Ｃ１１３）。メタンスルホン酸塩に対するＮＭＲ（ＤｌＩＳＯ−ｄ、）６９．５５（ｄ、　２１１．　Ｊ＝２．２１１ｚ、芳香族プロトン）、　８．９９（ｄ、　２１１．　Ｊ＝１．１ｌｌｚ。

芳香族プロトン）、８．８４（ｄ、２Ｈ，Ｊ＝８．４＋１ｚ、芳香族プロトン）。

８．７２（ｄ、２＋１．　Ｊ＝７．４Ｈｚ、芳香族プロトン）、　８．１０（ｔ、　２）１．　Ｊ＝７．０Ｉｌｚ。

芳香族プロトン）、４．４２（ｍ、４０．　２Ｃ）Ｉｔ）、３．４０（ブロード、９８．　３ＣＨ。

およびＣ１１３）、　２．９８（ブロード、　２１１．　ＣＦ＋２）および２．２２（ｓ、　６Ｂ、　２ＣＨｓ）。

ＩＲ（ＫＢｒ）　１７０９．１６６８（Ｃ＝０）ｃ＋＋−’。

分析値：　Ｃ３１Ｈ２８Ｎ８０１１・２Ｃ１１３ＳＯ３１１・Ｈ２Ｏ（ＭＹ　８２０．８０）に対する計算値：Ｃ４８，２９Ｈ４，４２Ｎ　１０．２４　５　７．８１実測値：Ｃ４ｇ、７３．４８．７３　Ｈ４，４０，４，３９Ｎ　！０．３０．１０．２７　Ｓ　７．４５．７．４０化合物■は、還流温度でエタノール中で３−ニトロ−１，８−ナフタール酸無水物（２，０当量）およびトリエチレンテトラミン（１，０当量）を反応させることにより製造することができる。それから、化合物を単離しそしてそのメタンスルホン酸塩として特徴づけられるスキーム２参照）。

実施例３２．２’−［１，２−エタンジイルビス（イミノ−２，１−エタンジイル）〕− ビス〔５−ニトロ−１，１１−ベンズ［ｄｅ］イソキノリン−１，３（２１１） −ジオンコメタンスルホン酸塩（１：　２）　（ＶＩ）エタノール９００ｍ１中の３−ニトロ−１，８−ナフタール酸無水物（２０，０９，８２，２ミリモル）およびトリエチレンテトラミン（６，２ｑ　。

４２、４　ミリモル）の混合物を、窒素上室温で７２時間撹拌しそしてそれから２時間加熱還流した。固体を濾過器に集めて遊離塩基２３．６０９（収率９６，３％）を集めた。融点１９８〜２０１’Ｃ（分解）。それから、この遊離塩基を、次のようにしてメタンスルホン酸塩に変換した。塩化メチレン５０■ｌ中の遊離塩基（３，０９，５，０ミリモル）のスラリーに、塩化メチレンｌ（１＋／中のメタンスルホン酸０．９６ｇ（１０ミリモル）を加えた。それから、混合物を一夜還流した。固体を濾過器上に集めて、黄色の固体を得た。これを、９８％エタノール（２００麿ｌ）中で４時間加熱することにより精製しそして濾過し、そして乾燥して■を得た（以下のスキーム２参照）。収量３．３６９（収率８５．２％）。融点２７１〜２７３℃（分解）。

ＮｉｌＲ（ＤＭＮｌｌＲ（Ｄ　δ９．５５（ｄ、２１１．　Ｊ＝８．１１１ｚ、芳香族プロトン）。

８．９９（ｄ、　２１１．　Ｊ＝２．５１１ｚ、芳香族プロトン）、　８．８４（ｄ、　２１１．　Ｊ＝８．１ＩＩｚ。

芳香族プロ１−ン）、８．７２（ｎ、２１１．　芳香族プロトン）、　８．１０（ｔ、　２Ｈ。

Ｊ＝７．９１１ｚ、芳香族プロトン）、４．４０（ｔ、４１１．　Ｊ　＝５．３１１ｚ、　２ＣＩ＋２）。

３．４０（ｍ、４１１．　２Ｃ１１２）、３．３１（８，４１１，２ＣＩ＋２）および２．２３（ｓ、　６■。

２Ｃ１ｈ）。

分析値：　Ｃ３ｏ１１ｚＪｓＯ＋＋・２ＣＩＩｓＳＯｓｌｌ（ＭＹ　７８８．７６）に対する計算値：Ｃ４８，７３Ｈ４，０９Ｎ　１０．６６　３　８．１３実測値：Ｃ４ｇ、７８　）（３，９７Ｎ　１０．５５　Ｓ　７．９２■ 紫外線スペクトルは、室温で、試料の飽和溶液（飽和溶液は、加熱することなしに過剰な試料を１５〜２０時間保持する水溶液として定義される）からとられる。試料の標準溶液は、可能ならば、水中で得られる。水中の溶解度がこれを行うのに余りに低い（＜ｌ＠ｑ／１００寓ｌ）場合は、試料のａｍｇをＤＭＳＯに溶解しそして水で１００ｍｊ’にうすめる。モルまたはグラム吸光係数を、標準溶液に対して計算しそしてこれらの値を使用して飽和溶液の濃度を測定する。

表　１実施例１　＞　２６．４　５．０２実施例２　９．６　４．７６実施例３　０．６　４．５０＊　化合物の中性形態に対するオクタツールおよび水の間の計算された分配係数表１のデータから明らかであるように、実施例１の化合物は目ざましい意外な水溶解度の増大を示す。分子に対するオクタツールおよび水の間の計算された分配係数（ｌｏｇ　Ｐ値）の増大のために、これは予期し得ないことである。

Ｌ１２１０細胞を、１０％の熱不活性化されたウシ胎仔血清および培地１１当リメルカプトエタノール５０ｍ１を補給したＲＰＭＩ＝１６４０培地（ＲＰＭＩ− Ｌ）中で維持した。Ｒ１６細胞を、１５％の熱不活性化されたウシ胎仔血消および抗菌剤を補給したＲＰＭＩ−１６４０培地（Ｒ川−Ｃ）中で維持した。

培地Ｑ、ｌ＋＋／中の指数増殖ネズミ白血病ＬＩ２１０細胞を、０日目に９６− ウェルマイクロタイタープレート中に種子として入れる。１日目に、試験アナログの段階的な濃度を含有する培地の一部Ｑ、　Ｊｗｓｌを初期容量に加えた。湿潤培養器中で３７℃で３日間培養した後に、プレートを簡単に遠心分離して生長培地Ｑ、１ｗ／を除去した。細胞培養菌を、３−（４，５−ジメチルチアゾール −２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロマイド（ＭＴＴ　；ダルベツコの燐酸塩緩衝液食塩溶液中１　ｗｑ／　置１）　５０１１７’を使用して３７℃で４時間培養した。得られた紫色のホルマザン沈殿を、イソプロピルアルコール中の０．０４Ｎ　ｌＩＣ４！で溶解する。吸光度を、５７０ｎｍの試験波長および６３０ｎ１１の参照波長で、ＴｉｔｅｒＬｅｋ　Ｍｕｌｌｊｓｋａｎ　ＭＣＣ走査ウェル分光光度計で表示した。

ＩＤ５ｏ値は、データ（１つの濃度当り８回の測定および１つの試験アナログ当り１２の濃度）のすべてを次式％式％））〔式中、八ｍは比較対照細胞の吸光度であり、＾０はもつとも高い薬剤濃度の存在下における細胞の吸光度であり、Ｘは薬剤濃度でありそしてＩＤ５ｏは、細胞の生長を比較対照細胞の生長の１八に阻害する薬剤の使用量である〕にあてはめるコンピュータープログラムにより測定した。

試験管内試験の結果は、表２に示す通りである。

１　０．０１１５２　＜０．０１３　０、００９生体内腫瘍モデル本発明の代表的化合物を、臨床的利用性を示す抗癌活性の予備臨床試験で試験した。例えば、ヌードマウスに異種移植したヒトのＤＬＤ−２結腸癌に対して目立った生体内有効性を示す。

生体内ヒト腫瘍異種移植における化合物の試験に使用された方法は、以下に記載する通りである。

生体内ヒト腫瘍異種移植モデルＤＬＤ−２ヒト結腸腫瘍、ｗｘ−ｉヒト乳癌およびＬＸ−１ヒト肺腫瘍を、はじめに、外科的に一次性結腸癌、乳房腫瘍および非−小肺癌それぞれから得た。ヒト腫瘍系統は、無感覚ヌードマウスにおいて連続的継代接種により維持した。ｌｌＸ−１ヒト乳癌およびＬＸ−１ヒト肺腫瘍は、ＭＣＩによって使用された確立した腫瘍である。ＤＬＤ−２、ＭＸ−１およびＬＸ−１腫瘍モデルは、よく特徴づけられる。

これらの実験に使用したマウスは、ヌード（ｎｕ／ｎｕ）遺伝子を有する異系交配したスイスマウスまたはＢＡＬＢ／ｃマウスである。０月日に体重２２〜３０９の雄および雌のマウスに、２５％腫瘍細片０．２ｙｒｌを接種した。この腫瘍細片は、滅菌した生理食塩水中で、継代マウス中で皮下的に生長した新らしい腫瘍組織を細かに切りきざむことにより製造される。接種後７〜１０日以内に約５０Ｉ１ｇの重量の明らかな腫瘍がマウスにおいて出現する。マウスは、腫瘍の重量および性別によってそれぞれ１０匹のグループにペアーマツチ（ｐａｉｒ　ｍａｔｃｈ）させそして試験化合物およびベヒクルコントロールを、９日の連続した日の間１日に１回静脈内的（ｉ、ｖ、）に投与する。化合物の投与後５月日の体重の〉２０減少は、毒性の徴候とみなす。腫瘍測定および体重を１週に１回記録する。初期の注射の１５〜１８日後に、マウスの重量を計り、犠牲にしそして腫瘍を切除しそして重量を計る。

試験化合物の効能は、薬剤処理したマウス対ベヒクル処理した比較対照マウスにおける腫瘍生長阻害の程度によって測定される。初期の腫瘍重量（１ｇ）は、長楕円体に対する式（腫瘍重量の１＝（長さＸ幅２）／　２　）を使用して、カリパス測定からの測定された腫瘍寸法（■）から８１算される。正味の腫瘍重量は、１５日目の最終腫瘍重量から初期の腫瘍重量を差引くことにより、処理したグループおよびベヒクル−処理した比較対照グループのそれぞれに対して計算される。結果は、比較対照のベヒクル−処理したグループに対する平均腫瘍重量に比較した減少％として表示される。

生体内癌モデルにおける活性度に対しては、国際病学会（ＭＣＩ）の基準が使用された。ＤＩ、Ｄ−２検査における５８〜８９％の腫瘍生長阻害は、中程度の活性度とみなされそして≧９０％の阻害は、良好〜すぐれた活性度とみなされる。

実際の腫瘍後退（ＩＲ＝不完全な後退、ＦＲ＝十分な後退）は、すぐれた〜顕著な活性度を示す。〈５８％の生長阻害を示す化合物は、不活性であるとみなされる。

実施例１．２および３の化合物は、ＤＬＤ−２ヒト結腸腫瘍に対してすぐれた〜顕著な活性を示す。

ヒト結腸腫瘍異種移植モデルにおける本発明の化合物の証明された有効性は、本発明の化合物がヒトにおける充実性腫瘍癌、特に結腸の腫瘍の治療に有用であることを示す。本発明の化合物により示されるヒト結腸腫瘍に対する生体内抗腫瘍活性の高いレベルは、本発明の化合物がヒトにおける癌の治療において重要な治療利用性を有するという強い証拠を提供する。

投与および処方本発明の抗腫瘍化合物（活性成分）は、活性成分を哺乳動物の体中における剤の作用部位と接触させる何れの手段によっても、腫瘍を阻害するために投与することができる。これらの化合物は、個々の治療活性成分としてまたは治療活性成分の組み合わせとして、医薬に使用するために利用できる何れかの普通の手段により投与することができる。これらの化合物は、単独で使用することができるけれども、一般に、選択された投与方法および標準医薬ブラクチスを基にして選定された医薬担体と一緒に投与される。

投与される投与量は、活性成分の腫瘍阻害量でありそして、勿論、特定の活性成分の薬力学的特性、および投与形式および投与方法、患者の年令、健康状態および体重、症状の性質および程度、同時的治療の種類、治療の頻度および望まれる作用のような既知の因子により変化される。普通、活性成分の１日当りの使用量は、体重１ｋｇ当り約５〜４０にである。普通、１日当り２〜４回の分割した投与量でまたは持続性の放出形態で与えられる、１日につき１ｂｙ当りｌＯ〜２００１９、好ましくは１０〜５０Ｉ９が、所望の結果を得るのに有効である。

内部投与に適した投与形態（組成物）は、１単位当り活性成分約１、　Ｑ璽ｇ〜約５００叩を含有する。これらの医薬組成物において、活性成分は、普通、組成物の全重量を基にして約０．５〜９５重量％の量で存在する。

活性成分は、カプセル、錠剤および粉剤のような固体の投与形態でまたはエリキサ−、シロップおよび懸濁液のような液状の投与形態で経口的に投与することができる。活性成分は、また滅菌された液状の投与形態で非経口的に投与することもできる。

ゼラチンカプセルは、活性成分および粉末状の担体、例えばラクトース、ンユクロース、マンニトール、澱粉、セルロース誘導体、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸などを含有する。同様な稀釈剤は、圧縮錠剤を製造するために使用することができる。錠剤およびカプセルは、何れも、一定の時間にわたって医薬の連続的な放出を与える持続性放出製品として製造することができる。圧縮した錠剤は、不快な味を遮蔽するためにまたは錠剤を大気から保護するために糖被覆するかまたはフィルム被覆することができるまたは錠剤は、胃腸管における選択的崩壊のためにエンテリツク被覆することもてきる。

経口的投与用の液状の投与形態は、患者の許容を増大するために着色剤および風味剤を含有することができる。

一般に、水、適当な油、生理食塩水、水性デキストロース（グルコース）、および関連した糖溶液、およびグリコール、例えばプロピレングリコールまたはポリエチレングリコールが、非経口的溶液に適した担体である。非経口的投与用の溶液は、好ましくは活性成分の水溶性塩、適当な安定剤および必要に応じて緩衝物質を含有する。単独でまたは組み合わせて使用される酸性亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウムまたはアスコルビン酸のような酸化防止剤が、適当な安定剤である。また、クエン酸およびその塩およびナトリウムＥＤＴ＾もまた使用される。

さらに、非経口的溶液は、防腐剤、例えばベンザルコニウムクロライド、メチル −またはプロピル−パラベンおよびクロロブタノールを含有することができる。

適当な医薬担体は、この分野における標準参考書であるＲｅ＋ｗｉｎｇｔｏｎ″ ｓ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｊｃａｌ　５ｃｉｅｎｃｅｓ、　１ａｃｋ　Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ　Ｃｏｍｐａｎｙに記載されている。

本発明の化合物を投与するための有用な医薬投与形態を以下に示す。

カプセル：それぞれのカプセルが、粉末状活性成分１００１９、ラクトース１７５真９、タルり２４諺９およびステアリン酸マグネシウム６肩９を含有するように、標準三片硬質ゼラチンカプセルに充填することによって、カプセルを製造する。

軟質ゼラチンカプセル二大豆油中の活性成分の混合物を、容量形ポンプによってゼラチンに注入して活性成分１００＊９を含有する軟質ゼラチンカプセルを形成させる。このカプセルは、洗浄しそして乾燥する。

（列：投与単位が活性成分１００１ｇ、コロイド二酸化珪素０．２８９、ステアリン酸マグネシウム５り、微小結晶性セルロース２７５ｍ９、とうもろこし澱粉１１ｍＶおよびラクトース９８．　ｈ９であるように、普通の操作によって錠剤を製造する。口あたりのよさを増大しまたは吸収を遅延するために適当な被膜を適用することができる。

ｆｉｌｔｏ：１０容量％のプロピレングリコールおよび水中の活性成分１．５重量％を撹拌することによって、注射による投与に適した非経口的組成物を製造する。この溶液を塩化ナトリウムで等俗化そして滅菌する。

竺！煎：それぞれ５ｄが、微細な活性成分１００ｍ９、ナトリウムカルホキジメチルセルロース２００＊ｆ、安息香酸ナトリウム５藺９、ソルビトール溶液（Ｕ、　Ｓ、　Ｐ、　０．０９およびバニリン０．０２５■ｌを含有するように、経口投与用の水性懸濁液を製造する。

本発明の開示において、具体的に述べられた物質および条件は本発明の実施化において重要であるが、本発明の利点を妨害しない限り、具体的に述べられていない物質および条件も除外されるものではない。

フロントページの続き（８１）指定国　ＥＰ（ＡＴ、ＢＥ、ＣＨ，ＤＥ。

ＤＫ、ＥＳ、ＦＲ，ＧＢ、ＧＲ，ＩＥ、ＩＴ、ＬＵ、ＭＣ，ＮＬ、ＰＴ、ＳＥ）、０Ａ（ＢＦ、ＢＪ、ＣＦ、ＣＧ、ＣＩ　、ＣＭ、ＧＡ、ＧＮ、ＭＬ、Ｎ丁Ｒ，ＳＮ、ＴＤ。

ＴＧ）、　ＡＵ、　ＢＢ、　ＢＧ、ＢＲ，ＣＡ、　Ｃ３，ＥＳ。

Ｆ　Ｉ、ＨＵ、Ｊ　Ｐ、ＫＰ、ＫＲ，ＬＫ、ＭＧ、ＭＮ、ＭＷ、　Ｎｏ、　ＮＺ、ＰＬ、Ｒ○、ＲＵ、ＳＤ、ＵＡ

Claims

【特許請求の範囲】

１．化合物２，２′−〔１，２−エタンジイルビス（メチルイミノ−２，１−エタンジイル）〕−ビス〔５−ニトロ−１Ｈ−ベンズ〔ｄｅ〕インキノリン−１，３（２Ｈ）−ジオン〕およびその医薬的に許容し得る塩。
２．化合物２−〔２−〔Ｎ−メチル−Ｎ−〔２−〔〔２−（５−ニトロ−１Ｈ− ベンズ〔ｄｅ〕インキノリン−２（３Ｈ）−イル）エチル〕アミノ〕エチル〕アミノ〕エチル〕−５−ニトロ−１Ｈ−ベンズ〔ｄｅ〕インキノリン−１，３（２Ｈ）−ジオンおよびその医薬的に許容し得る塩。
３．化合物２，２′−〔１，２−エタンジイルビス（イミノ−２，１−エタンジイル）〕−ビス〔５−ニトロ−１Ｈ−ベンズ〔ｄｅ〕インキノリン−１，３（２Ｈ）−ジオン〕およびその医薬的に許容し得る塩。
４．請求項１記載の化合物の治療的に有効な量および医薬的に許容し得る担体からなる医薬組成物。
５．請求項２記載の化合物の治療的に有効な量および医薬的に許容し得る担体からなる医薬組成物。
６．請求項３記載の化合物の治療的に有効な量および医薬的に許容し得る担体からなる医薬組成物。
７．請求項１記載の化合物の腫瘍−阻害量を、腫瘍を有する哺乳動物に投与することからなる哺乳動物における結腸腫瘍の治療方法。
８．請求項２記載の化合物の腫瘍−阻害量を、腫瘍を有する哺乳動物に投与することからなる哺乳動物における結腸腫瘍の治療方法。
９．請求項３記載の化合物の腫瘍−阻害量を、腫瘍を有する哺乳動物に投与することからなる哺乳動物における結腸腫瘍の治療方法。