JPH07500580A

JPH07500580A - 糖尿病の合併症及び病因の処理方法

Info

Publication number: JPH07500580A
Application number: JP5504766A
Authority: JP
Inventors: ミカエリス，ジューゲン; ヒプキッス，アラン　ロジャー; パナジオトパウロス，シアンナ
Original assignee: ペプテック　リミテッド; キングスカレッジロンドン
Priority date: 1991-09-09
Filing date: 1992-09-09
Publication date: 1995-01-19
Also published as: EP0666753B1; US5561110A; EP0666753A1; CA2117199C; CA2117199A1; DE69231576T2; WO1993004690A1; DE69231576D1; EP0666753B9; EP0666753A4

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】１駁旌Ω童更亙み１月１９Ａ崖１−抜本発明は、糖尿病の合併症と病因の処理方法に関する。

ジペプチドであるカルノシンは、肉から得られる熱安定性抽出物質として、約９０年前に発見された（ＧｕｌｅｗｉｔｌＩｃｈとＡｍ１ｒａｄｚｉ、ｂｉ、　１９９０）　＃以来これら初期の原物質については、ジペプチドの分布と代謝に関する多くのデータが蓄積された。

カルノシン（β−アラニル−Ｌ−ヒスチジン）、及びアンセリン（β−アラニル −１−メチル−Ｌ−ヒスチジン）やホモカルノシン（γ−アミノーブチリルーエ、−ヒスチジン）のような、その関連化合物は、多数の哺乳動物の骨格筋肉（２ −２０ｒｎＭ）や脳（０，３−５ｍＭ）を含む組織に、ミリモル濃度で存在している。

ジペプチドのこの群の、生理学的機能を説明するための統一された仮説は存在していないが、それらの抗酸化特性、放射線障害からのＤＮＡの保護能力、二価カチオンのキレート能、生理的ｐＨ値での顕著な＆ｌ衝能カから、それらのインビボでの主要な機能が、タンパク質、脂質及び他の巨大分子を保護するものであるとの援案がなされた。

自由ラジカル捕捉剤としての機能に付は加えて、カルノシンは［免疫調整剤」として作用しくナガイ（Ｎａｇａｉ）特許：　ＧＢ　２１４３７３２＾）、それは、ある槍の癌治療に有効な性質を持つことが主張されている（ナガイ、特許ＤＥ　３４２４７ｇ＋Ａ１１゜カルノシンは、過酸化脂質に誘起された白内障の治療にも有効であることが示された（Ｂａｖｉｚｈａｙｅｖ、　１９８９１　、また、カルノシンは、外傷の治癒過程を促進できるという証拠もある。

Ｌ鼠見腕ｌユｐシレーンヨン（奥」旦１基旬−自由ラジカル障害は、タンパク質及び核酸の構造に作用する唯一の過程ではない。非酵素的グリコシレーンヨン（グリヶーション（ｇｌｙｃａｔｉｏｎ））である、食物化学におけるメイラード反応（メイラード、１９１２）または褐色反応は、アミノ基と糟アルデヒドまたはケト基との反応を含み、それは変性アミノ基を生成し、結局グリコシレーンヨンが進行した最終生成物（ａｄｖａｎｃｅｄ−ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉ　ｏｎ− ｅｎｄ−ｐｒｏｄｕｃｔｌ＋）　（Ａ　Ｇ　Ｅ−生成物）を形成する。インビボでのグリケーションは遅いか、根本的にｌｌｌ！なのは、老いること、及び糖レベルが上昇する、即ち糖尿病という病理学的状況である。

タンパク質のグリケーションは試験管の中で実施することができる。いくつかの研究により、はとんどのタンパク質とＤＮＡが、非酵素的グリコシレージョンの潜在的ターゲラ１−であり、子こては、糖が分子のアミノ基に、シッフ塩基を通して結合し始めるということが示された。引続き再配列が起こり、着色された生成物を与える（アマトリ生成物と呼ばれる）、さらに、アマトリ生成物の遅く特定さｔｌていない反応が起こる。

タンパク質中の好ましいグリコーゲン部位の分析により、リジン残基のεアミノ基が、特にヒスデシン残基に近接しているとき、主要な目標になることが示された（Ｓｈｉｌｔｏｎと１ｌｏｌｔｏｎ、　１９９１）。インビボでの長い半減期を持つ安定なペプチドの探求において、カルノシンのアミノ酸配列がＬｙｓ−Ｈｉｓに類似しており、糖と反応し、アルデヒド捕捉剤として反応する能力を有していることを見いだした。さらに、カルノシンは実質的に非毒性であり、よく証明された毒性試験によれば、その材料は哺乳類に５−ｔｏｇ／体重１ｋｇのレベルまて投与することができ、長期間の治療にわたって毒性副作用は予習されないことを示した。

その他のただ一つの化合物だニブが、糖と反応し、アマトリ再配列を遮断することにより、グリケーションを遅延化することか示された。アミノグアニジンは、インビボとインビトロの両ノコで、グルコース訊起のグリケーンヨンが進行した最終生成物を減少させる。イ・幸にも核的なヒドラジンであるアミノグアニジンは、非生理的であり、知られていない長期の毒性がある。

！！ｌ！■！糖尿病は、インシュリンの急性または慢性欠乏に起因する代謝」二の疾患である。

これは、血液グルコースレベルの上昇によって診断される。急性状態は、インシュリン依存性組織のグルコース取り込みの減少によって特徴づけられる。生体は、その結果生ずる詣肋分解の増加とグリコーゲン合成の減少によるエネルギー欠乏を中和する。糖尿病の病状が重篤であるとき、熱量は２つの主要な源から失われる。即ち、グルコースは尿で失われ、体タンパク質もまた失われる。これは、インシュリンが促進する筋肉から導かれるアミノ酸からの糖新生が不十分だからである。急性の病気は、インシュリン注射によって制御できるが、その制御は決して完璧にはできないので、糖尿病の長期にわたる運命は、生涯の後期に、月（白内障発生や１１１ｍ疾患）、腎臓（腎臓病）、神軽（神軽症）、及び血管（血管症やアテローム性動脈硬化症（ａｒｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｇ））において起こる合併症に依存する。

冠状心疾患は、糖尿病及び非糖尿病も同様に、最も一般的な死因であることは充分確認されている。

尿タンパクの分析は、糖尿病患者の重大な腎臓疾患（腎臓病）の存在を排除するために通常要求される。尿タンパク結果が正であることは、一過性または重要でない検査室の発見であるかもしれないし、あるいは腎臓障害の初期徴候であるかもしれない、最も重大なタンパク尿は、腎臓症候群、ハイパーテンション、及び進行している腎臓障害と関連している。これらの条件下では、腎糸球体は、タンパク質の透過性が上昇するが、その機構はあまり解明されていない、その影響は、全腎臓障害をむしろ急速に促進させ、最終的に死に至らしめるので非常に重大である。このタンパク尿の生成は、糖尿病、類澱粉沈着症、紅斑性狼蒼のような疾患の二次的帰結として起こる。

糖尿病の他の合併症として、網膜疾患の進行におけるグリケーションの潜在的役割を考慮に入れなければならない。網膜毛細管は、毛細管内腔をに沿って並び、透過性（血液−網ＩＩ）障壁を形成する内皮細胞、及び周皮細胞（里輻胞）を含んでおり、それらは、その２つの細胞タイプにより生成される基底膜で包まれている。糖尿病性網膜疾患の初期段階において、壁間周皮細胞は選択的に失われ、基ｌ！Ｅｍを取り囲んだゴース］・のような嚢を放出する。血液−網膜障壁の破壌は、もうひとつの故障である。アルドース道元酵１１！［昭富剤が、動物の実験的網膜疾患の治療において研究されている。それらの作用の機構は、ソルビトールの蓄積と、結果としての浸透性の変化を阻害することである。しかし、）飄メスら（Ｈａ輸論ｅｓ　ｅｔａｌ、）（１９９１，）が、アミノグアニジンが実験的糖尿病性網膜疾患の進行を阻害することを示したという事実から、非酵素的グリコシレージョンとの結合が明らかになった。カルノシンのような他の潜在的なグリケーション阻害剤も積極的な効果を有していると思われる。

グリケーションとアテローム性動脈硬化症最近の研究により、ＡＧＥがアテローム性動脈硬化症の進行において機能を有しているかもしれないことが示唆されている。これは、ヒトの単球が、その表面にＡＧＥ特異性レセプターを有しており、リリーラング（ｒｅｌｉｅｓｉｎｇ）シトキンによって刺激されたとき応答するという発見に基づいている。血管壁に対する小さな障害は、サブ−内皮ＡＧＥに晒し、単球の浸預を促進し、アテローム性動照硬化症傷害の進行を開始する。

循環しているリポタンパクもまたグリケーションを受け、それは、グリケーションされていないリポタンパクより早い速度で内皮細胞によって取り込まれる。これは、糖尿病において重要であり、グリケーションされたりボタンバクの血清レベルの上昇が報告されている。従って、カルノシンのような抗グリケーンヨ、ｌ特性を有する化合物は、血管の疾患に積極的な効果を持つ。

糖尿病性合併症の理由は充分に理解されていないので、断続的な過血糖状態を避けるたぬに必要なグルコース一度の変化に応答して、皮下注射後にインシュリンを連続的に放出することは、適当ではないかもしれない、従って、ｍＴｊＡ病の血糖レベルは、平均し、て欅準人より高く、それはグリケーンヨンのレベルの増加をもたらす。最もよい例は、グリコヘモグロビンであり、それは細胞グルコースレヘルに比例した量が赤血球中で７１−酵素的に形成する。グリケーションされたヘモグロビンと血清アルブミンの割合が高いことは、糖尿病の過血糖の度合の監視に使用さｔする。

血液中の高いゲルコース１ノベルの長期にわたる影響を中和する化合物の、制御された食餌の摂取を、アミリン遮断での、インシュリン投与、スルホニル尿素とビグアニドｆｂｉｇｕａｎｉｄｅ）処理のような制御さｔまた糖尿病治欅に付は加えることは有効てあろう。グリコーゲンに参加するのは、グルコース、ガラクトース、フルクトース、リボース及びデオーキンリボースのような還元糖の開鎖形態だけである。この自由アルデヒド基を捕捉し、干れを非宿性形態に結合させることにより、インビボ及びインビトロでの高い糖レベルに起因する傷害を減少できるものと信している６合併症と病理の処理のために提案された化合物は、以下の特徴のうちのひとつまたはそれ以上を有するペプチドである。

ｌ）比較的高い投与量においても非毒性であること。

２）腸内の非特異的プロテアーゼによって開裂されず、完全に血液または器官に吸収されること、しかし、腎臓によってクリアされ、それによって糖尿病のグルコースとして類似の組織に分布させること。

３）そのペプチドは、タンパク質表面のアミノ基に比較して、還元糖と速く反応すること。

４）最終的にグリケーションしたペプチドは、グリケーションしたアミノ酸とは逆に、突然変異原性とならないこと。

５）そのペプチドが血液または組織中の特異的プロテアーゼにより開裂したならば、結束的なアミノ酸は、糖尿病の滋養価値がある、例えば糖新生を促進したり負の窒素平衡を中和したりすること。

光ｊ【Ｑ１０杓本発明者らは、カルノシンと類似の活性を持つペプチドは、糖尿病の合併症及び病因の処理に有効であると１８する。

従って、第１の態様において、本発明は、糖尿病の合併症及び病因の処理方法である。その処理方法では、糖尿病患者へ（β−Ａｌａ−Ｈｉｓ）ｎ、（ＬｙｓＨ１ｓ　）　ｎ　、一般式Ｒ１−Ｘ−Ｒ２の化合物、それらの製薬ト許容される塩、及びそれらの組合せからなる群から選ばれる化合物と、製薬上許容されるキャリアからなる組成物を投与する。ここで、ｎは２−５、Ｒ１は１または２の天然発生（ｎａｊｕｒａｌ　ｏｃｃｕｒｒｉｎｇ）アミノ酸で、炭素数１から１２、好ましくは２力）ら６のアルキルまたはアラルキルでエステル化されたα−カルボキシルを有して１１てもよい、Ｒ２は１または２の天然発生アミノ酸で、炭素数１から１２、好ましくは２から６のアルキルまたはアラルキルでアセチル化されたα−アミノを有してし１テモヨイ、マタ、ＸはＲ３−Ｌ＊ｔニーはＤ−Ｈｉ　ｓ　（Ｒ４）−Ｒ５テアッテ、Ｒ３ハ空位または炭素数１から１２、ＩＴましくは２から６のω−アミノアアシである。Ｒ４は空位またはアルキル−スルフィドリル、ヒドロキシル、ハロゲン及び／またはアミノ基て修飾されたイミダゾールであり、Ｒ５は空位または炭素数１から１２、好ましくは２から６のカルボキシル（アルキル）アミドである。

第２の態様において、本発明は、（β−Ａｌａ−Ｈｉｓ）ｎ、（Ｌｙｓ−ＨｉＳ）。、一般式Ｒ，ｌ−Ｘ−Ｒ２の化合物、それらの製菓上許容される塩、及びそれらの組合せからなる群から選ばれた化合物の、糖尿病の合併症及び病因の処理用医薬の合成における用途である。ここで、ｎは２−５、Ｒ１は１または２の天然発生アミノ酸で、炭素数１から１２．好ましくは２から６のアルキルまたはアラルキルでエステル化されたα−カルボキシルを有していてもよい、Ｒ２は１または２の天然発生アミノ酸で、炭素数１から１２、好ましくは２かも６のアルキルまたはアラルキルでアセチル化されたα−アミノを有していてもよい、また、ＸはＲ３−ＬまたはＤ−Ｈｊ　ｓ　（Ｒａ）−Ｒｓであって、Ｒ３は空位または炭素数１から１２、好ましくは２か６６のω−アミノアシルである。Ｒ４は空位またはアルキル−スルフィドリル、ヒドロキシル、ハロゲン及び／またはアミノ墨で＋ｌＩ飾されたイミダゾールであり、Ｒ５はボイドまたは炭素数１から１２、好ましくは２かも６のカルボキシル（アルキル）アミドである。

本発明の好ましい実施態様では、Ｒ１及びＲ２は、Ｌ−またはＤ−リジンあるいはＬ−またはＤ−アスパラギン酸あるいはＬ−またはＤ−グルタミン酸あるいはそれらの相同体である１本発明の好ましい実施態様では、その化合物はカルノシン、アンセリン、オフィレン、ホモカルノノン、ホモアンセリン、Ｄ−カルノシン、及びカルンニンからなる群から選ばれ、最も６？適には、化合物はカルノシンである。

本発明のさらに好ましい実施態様では、その組成物は、アミノグアニジンのような、糖尿病の合併症及び病理の処理に有利な効果を有する他の化合物を含む。

さらに、多くの治療されるべきｔ者が、イレンユリ／スルホニル尿素、ビグアニド、またはアミリン遮断治療を受１ｊていてもよく、本発明の組成物は、そのインシュリンスルホニル尿素、ビグアニド、またはアミリン遮断治療と共投与してもよい。

スルホニル尿票酸ビグアニド治療についてのさらなる情報は、ベック−ニールセンｆＢｅｃｋ−Ｎｉｅ１ｇｅｎｌの＋Ｐｈａｒａａｃｏｌｏｇｙ　ｏｆ　Ｄｉａｂｅｔｅｓ”、Ｃ，Ｅ、ＭｏｇｅｎｓｅｎとＣ，５ｔａｎｄ１編、＋９９１．　ｐｐ７５−９２、そこに含まれる参考文献の開示に見いだされる。

糖尿病におけるアミリンブロッカ−治療の使用についてのさらなる情報は、ウェスターマークら（Ｗｅｓｔｅｒｍｅｒｋ　ｅｔ　ａｌ、）　１９８７、ＤＮＡ５．８４．３８８１−３８８５、そこに含まれる参考文献の開示に見いだされる。

インシュリン治療の大きな欠点のうちのひとつは、注射を継続して必要とすることである６本発明は、カルノシンと、ビグアニドまたはスルボニル尿素との経口投与による他の方法を提供でき、それは糖尿病に対してより効果的である。

本発明の組成物は、注射、注入、摂取、吸入イオン浸透療法、または局所塗布のような任意の方法で投与することができる。しかし現時点では、経口で投与するのが好ましい。

さらに好ましい具体例では、活性化合物は、組成物の皮膚浸透、皮膚塗布、組繊吸収／＠着、皮膚感作、及び／または皮膚刺激を改善するような他の分子と混合または結合している。その分子は、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリルアンモニウムオキシド、オゾン、デシルメチルスルホキシド、ラウリルエトキシレート、エタノール及びそれらの混合物からなる群から選ばれるのが好ましい。

その化合物は、薬剤前駆体ｆｐｒｏｄｒａｇ）の形態であってもよい、プロドラッグ技術のさらなる情報は、「医薬品デザインと発達のテキストブック（＾Ｔｅｘｔ　Ｂｏｏｋｏｆ　Ｄｒｕｇ　Ｄｅｓｉｇｎ　ａｎｄ　Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ）」、ボブル・りａ−）グスガードーラーセンとハンス・プントガード（Ｐｏｖｌ　Ｋｒｏｇｓｇａａｒｄ−Ｌａｒｓｅｎ　ａｎｄ　Ｈａｎｓ　Ｂｕｎｄｇａａｒｄ１編、５１１「プロドラッグのデザインと応用（Ｄｅｓｉｇｎ　ａｎｄ　Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｐｒｏｄｒｕｇｓ）、Ｈ。

プントガードに見いだすことができる。この参考文献の開示は、ここでクロス・リファレンス（ｃｒｏｓｓ−ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｌ　として含まれている。

上で述べたように、本発明の組成物は経口投与されるのが好ましい、当業者には理解されるように、その組成物を経口デリバリ−ｆｄｅｌｉｖｅｒｙ）への適合性を改善するような多くの修飾をなすことができる。経口デリバリ−のさらなる情報は、「ペプチドとタンパク賓ドラッグデリバリ−（Ｐｅｐｔｉｄｅ　ａｎｄ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｄｒｕｇ　Ｄｅｌｉｖｅｒｙ）」、　ビンセントＨ，Ｌ、　ター（Ｖｉｎｃｅｎｔ　Ｈ，Ｌ、　Ｒｅｅ１編、１６章「ペプチドとタンパク賓ドラッグデリバリ−の軽口経路（Ｏｒａｌ　Ｒｏｕｔｅ　ｏｆ　Ｐｅｐｔｉｄｅ　ａｎｄ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｄｒｕｇ　Ｄｅｌｉｖｅｒｙｌ」、　Ｖ、　Ｈ，Ｌ、リ−ら、に見いだすことができる。この参考文献の開示は、ここでクロス・リファレンスとして含まれている。

上で述べたように、その組成物は注射によって投与してもよい０例えば、無菌の注射可能な水性もしくは油性憇濁液のような注射可能な薬剤は、適宜の分散または湿潤剤及び懸濁斉ｌを使用して、当業者によく知られた方法に従って製造できる。その無菌の注射可能な薬剤は、非毒性で非経口に許容されつる希釈剤または溶媒中の、無菌注射可能な溶液または！！濁浦てもよい、採用してよい媒体及び溶媒は、水、リンゲル液、及び生理食塩水である。さらに、無菌の固定油（ｆｉｘｅｄ　。

１１）は、溶媒または懸濁媒体として、従来通り採用することができる。この目的のために、合成上ノージグリセリドを含む任意の穏やかな固定油を採用してよい。

さらに、オレイン酸のような脂肪酸は、注射可能な薬剤で使用できることがわかった。

その組成物の投与すべき日毎の全投与量は、治療されるべきホスト及び、特に投与方法に依存するだろう。ある特定の患者への特定の投与量レベルは、採用されたその特定の化合物の活性、年齢、体重、一般的健康、性１食餌、投与時間、投与経路、排泄速度、及び患者が受ける１１作用の重さを含む要因の変化に依存することは理解できるであろう、必要とされる投与量レベルの選択は、この分野の声達した者の専門的技術の範囲内であると思われる。

カルノシンの投与量は、２０ｍｇから２ｇ／体１ｋｇ／日であり、りＴましくは１００ｍｇから２００ｍｇ／体噴ｋｇ／日であろうと思われる。

上で述べたように、糖尿病に関連した合併症のひとつは白内障である。従って、本発明の組成物の投与の特に好ましい形態は、点眼である。この状況において、製薬上許容されるキャリアは、無菌の水性または非水性溶液、懸濁液、乳化槽、及び軟膏である。点眼に遺した製薬」二許容される媒体の例は、プロピレングリコ−ｐｖＥｋＵ、　ＩＩＪＩ上許容されるアルコール、ゴマまたはビーナツツ油及び他の製薬上許容される油、石油ゼリー、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース塩、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロースのような水溶性の眼に許容されるＪＰ毒性ポリマー、ポリアクリル酸塩、アクリル酸エチル、ポリアクリルアミドのようなアクリレート、ゼラチン、アルギネート、ペクチンのような天然物、酢酸デンプン、ヒドロキシエチルデンプンエーテル、ヒドロキシプロピルデンプンのようなデンプン誘導体、同様に、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリビニルメチルエーテル、ポリエチレン皐シト、カルボポール（ｃａｒｂｏｐｏｌ　）及びキサンタンガムのような合成誘導体、そしてそれらのポリマーの混合物である。そのような組成物は、緩衝剤、保存剤、湿潤剤、乳化分散剤のような補薬を含んでいてもよい、好ましい保存剤は、四級アンモニウム化合物、フェニル水銀塩、ベンゾイルアルコール、ファニルエタノールなどの抗菌剤、及びメタビスルフィドナトリウムのような酸化防止剤を含んでいる。好ましい緩衝剤は、ボレート、アセテート、グリコネート及びホスフェート緩衝剤を含んでいる。製薬的な点眼の組成物はソリッド・インサート（ｓｏｌｉｄ　ｊｎｓｅｒｔ）の形態であってもよい。

これまでの議論で明らかなように、糖尿病の合併症及び病理は、非醇票的グリコシレーンヨンを減少または防止することによって処理できる。従って、本発明の方法は、非酵素的グリコネ−シヨンによる他の疾患状態の、他の有害な合併症及び病理の処理に有効であることが予想できる。

本発明の性質がより明確に理解されるために、好ましい形態を、以下の実施例及び図面を参照して説明する。

第１図は、Ｌ−カルノシンと糖との反応速度を示す、Ｌ−カルノシン（６０ｍＭ）は、ｐＨ７の５０ｍＭナトリウム−リン酸緩衝液中で、５時間６０℃で、糖（１８０ｍＭ）と反応させ、カルノシンの自由アミノ基の減少を、ＨＰＬＣによって検定した。ＳＥＭ（培養混合物中の全カルノシンの１１％）第２図は、カルノシンのアテローム性動脈硬化症に対する影響を示す、（■コレステロール、ロコレステロール（カルノシン）第３図は、糖尿病ラットにおける白内障の形成に対するカルノシンの影響を示す、（■標準、ａ糖尿病、口糖尿病＋カルノシン）。

発明の詳細な説明鳳糖に対するペプチドとアミノ　誘導体との反応別の方法を除き、反応は、６０℃ の水浴中、密封されたミクロ遠心分離用バイアルの中、リン酸塩で１１１ｉ化された塩溶槽、ＰＢＳ、（１４０ｍｌのＮａＣ１／１０ｔｎＭのリン酸ナトリウム、１）Ｈ７，４）で行われる。反応ｉｌｌ杏物は、５０ｍＭのベプチ］゛と、５００ｍＭの糖とを含む、ｍ定条件の時間のポイント毎にサンプルが取られ、水で１・２０に希釈され、ＨＰ　Ｌ　Ｃによる分析の前は一２０℃で薯えられる。

乙３ノ１迎」Ｕペプチドの遊離アミノ基の検出のためには、ウォーターズオート、（Ｗａｔｅｒｓ　ＡＵＴＯ）ＯＰＡ７′Ｍが使用される（Ｗａｔｅｒｓ　ＡＵＴＯ，ＴＡＩ］ ”操作便覧）、簡単に言うと、ペプチドは、０−フタルアルデヒドと反応され、蛍光性の誘導体が、溶媒どして１５分間にわたって１０％から９０％（容量／容量）のメタノールの勾配を用いたラジカル−Ｐ　Ａ、　Ｋ　ＴＭＣ１８カラム上のＨＰＬＣにより分離さｔする。励起３４０ｎｍ／ｌ！ｌ射４４０ｎ＋ｎのウォータース４７０蛍光検出セットｆＷａｔｅｒｓ　４７０　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　ｄｅｔｅｃｔｏｒ　５ｅｔ）が使用される・カラム　グルコース６　（Ｓａｐｅｒｏｓｅ　６）　＋ファーマシア（Ｐｈａｒｓ＋ａｃｉａ）＃ｔ、＃４　蛋白質の試料（約１００μｇ）の１００μｆＪ離剤：１０ｍＭのリンｌｉＩ＆ｌＷｂ剤ｐＨ７，３８，１４０ｍＭのＮａＣ１，２ｍＭのＫＣｌ、０．０２％のＮａＮ３，０．０５％のツイーン（７ｗ　６ｅｎン　２０流速（ＦＬＯＲＲＡＴＥ）　：　０．５ｍｌ／ｍｉｎ検出　２８０ｎｍ校正はファーマシア（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）の高分子１　（ＨＭＷ）と低分子量（ＬＭＷ）との校正キットを用いて成さねる。

校正成分　分子量　保持時間ＨＭＷ　ブルーテキストラン　＞２．ＯＯＯ，ＯＯｏ　１５．４９　ｎ＝５チログロブリン　６６９　、０００　２５．８４　ｎ＝６フエリチン　４４０，０００　２９．７３　ｎ＝５カタラーゼ　２３２，０００　３２．５８　ｎ＝６ア月」゛ラーゼ　１５８，０００　共溶出　３２．５８　ｎ＝６ＬＭＷ　ブルーデキストラン　＞２，０００，０００　１５．６５−’　ｎ＝５アルブミン　６７．０００　３３．７４　ｎ＝６オボアルブミン　４３．００Ｇ　３５．５７　ｎ＝５キモトリプシンＡ　２５，０００　３９．２３　ｎ＝６リボヌクレアーゼＡ　１３，７００　共溶出　３９．２３　ｎ＝６１俗倉璽辺ス塁支Ａ凰１辺１皿９透１１ど王ゴー包乙駁狭−グリケードした化合物の準備が、キム（Ｉｉ＊）も（１９９１）にしたがって成される。簡単に言えば、Ｄ−グルコース（ＩＭ）と、次のそれぞれ：Ｌ−カルノシン、Ｌ−リジン、Ｌ−アラニン（全てＬＭ）とが蒸留水中に溶解され、ｐＨが７に調整され、混合物が１００℃で８０分間加熱される。溶液（５０μｍと２５０μｌ）は、欅単的なネズミ肝臓のミクロソーム（Ｓ− ９）の準備による代謝活性を用い、または、用いずに、プレート導入方法（Ｍａｒｏｎと＾＠ｅｌ！、　１９８３）を使用するネズミチ２ス菌（各１μ■９旦Ｌ −リ１恒！肛−４ｕｍ）　ＴＡ　１００株に対する評価を行う、２−ＡＦと２− ＡＡＦとは、代謝刺激を持つ試験のために、陽性コントロールとして使用され、さもなければ、ナトリウム　アジ化物が、特別な陽性コントロールの菌株として含まれる。

アｊ−三−：づ、ａａａ５コいＷ左西ノーシンの効果高いコレステロール（２％）飼料で飼育された雄のニューシーラントホワイトクロスラビットが、コントロール、またはカルノシン処理２％のために無作為に使用され、そして、血漿がコレステロールとトリグリセリドとカルノシンとのために検査される。全ての動物は、−日当たり食料ペレット１００ｇの給餌とし、水は自由採取とした。

８週間の処理期間の後、各ラビソ１は、ベンドパルビタール（３２５ｍｇ／ｋｇ）を用いて麻酔し、全ての大動脈を取り除く。首部、胸部、腹部の領域は最初の一対の肋間の動脈と腹腔の動脈の上方０．３ｃｍとに最も近い周囲１ｃｍの大動脈を切ることにより分離する。動脈血管外膜を注意深く切り裂き、動脈は、脈管内膜の表面をさらすように縦に切断する。大動脈は、４８時間、１０％のホルマリン＆ｌ衝削の中で処理される。これらの容器の中の脂質クラークがスーダンｌＶ　（Ｓｕｄａｎ　ＩＶ）を用いて染色され、さらに水性媒体（カイザーズグリセロールゼリー（ＷａｉＩｌｅｒ’ｓ　Ｇｌｙｃｐｒｏｌ　Ｊｅｌｌｙ’）　）が載置される。障害が起き１部分は、直接的に、−像分析（アイコン（Ｅｙｅ　ｃｏ識）８５０１１像プロセツサ・〜）を用い、載置部分を直接走査１−る０、 −＋ソビュターを用いた面積測定は、影響を受けた領域のパーセンテージを肉眼的に決定するのに用いられる。アテローム性動脈硬化症のプラークの代表的な部分は、光Ｔ−關ａ鏡法による確認のために、取り除かれる。結果は、平均±ＳＥＭとして表される。

一本鼾±、ヌー久−６−）　を竹の迫−外！−Ｑ些成２００−２５０　ｇの重さで、生後６週間の雄のスブレイジダウレイ（Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｑｌｗｌｅｙ）ネズミは、次の三つの処理グル・−ブ　コントロール、糖尿病、カルノシンで処理された糖尿病のオズミを無作為使用した。糖尿病は、ストレプトシトシン（ｓｔｒｅｐｔｏｚｏｔｏｚｅｎ）　Ｓ　Ｔ　Ｄ　（＜λん酸緩衝剤、ｐＨ４，５中、体の重量に対し６０ｍｇ／ｋｇ）で引き起こさせ、−週間後、２０ｍＭ以上の血漿のグルコースのレベルを持つ全ての動物が研究に含まれる。糖尿病のネズミは、治療されてないもの、または、飲料水中１２％のカルノシンを受けたものが無作為化さｈ′６゜紅！大施諮−阜− −ｔノー±−４４ン杯ツ猪皮グリケーンヨン（ｇＩｙｃａｔｉｏｎｌ中のアルデヒドとアミノ基との間の反応速度は、単に温度だけでな（、反応物の濃度にも依存し、このように、平衡の影響を受けない反応の速度をＬげるために、生体外での実験中、非生理的な条件の使用が許される。メイラード反応の中の最初のステップは、アルデヒドと一次のアミノ基の間の、／ンフ塩基の形成であり、糖の直線状の鎧の形の置にしたがって変化する。これはアマトリ転（古と複雑な二次反応による結果として起こり、多くは七輪に理解されていない。

グルコーノ、］ｊラクＩ−ス、カルノシンを持−）ジヒドロキシアセトン（ｄｉｈｙｄｒｏｇａｃｔｅｔｏｎｅ　（Ｄ　ＨＡ　）　）のインキユベーシヨンは、メイラード（１９１２）により最初に述べられたように、グリケーンヨンの特色として茶色の溶液を生ずる＋糟どカルノシンの反応は、ＨＰ　Ｌ　Ｃ後に、蛍光定量的に測定された遊離アミン基の消失をもたらす。グルコース、ガラクトース、ＤＭＡは、それらとカルノシンとの反応において異なる（第１図）。グルコースは、反応性が少なく、ＤＭＡが多く、少なくとも１５倍の差を示す。その簡便性のために我々は以後の連続した多くの研究の中で、トリオースＤＨＡの使用を選択した。

火惠Ｍ又左西ノ２２刃丈３−Ｌ２−良膚ＩＡプユン９叉成１月Ａ工３ジヒ　ロキシアセ　ンｑ薩止ウシ血清アルブミン（５０＋ｎＭのリン酸ナトリウム緩衝剤、ｐＨが７．０で、５０ｍｇ／＋ｒ＋ｌ）の生理学上の濃度は、４週間のあいだ２３℃で、２５０＋ｎＭのＬ−カルノシンの存在と不在とにおいて２５０ｍＭのジヒドロキシアセトンを用い、または、これを用いないでイノキュベートされる。実験は無菌の状態下で行われ、イオン強度は全てのバイアル中で同一である。結果を、第１表に示す。

この長期間の実験において、ジヒドロキシアセトンは、グリケートしたアルブミンを有し、アマトリ転位の結果として、引き続いて、固体ゲルの形成を１１１発する。カルノシンが存在するときはバイアルの中身は液体のままである。

アルブミン＋リン酸緩衝則　無色、液体アルブミン→−ジヒドロキシアセトン　茶色、堅いゲルアルブミン＋ジヒｐＨキシアセトン　暗い茶色、槽体ウシ血清アルブミンの非酵素的なグリコンレーションのンヒドロキシアセトン誘発に関するカルノシンの効果。

寒Ｌ！２＋１．１− カッ’−ｖ　ｙ　２こンー返ルＬ鐸」（令、、７　Ｅ　／Ｊζグ、西ユースー四１医ｆｉ−較蛋白賀とグルコースによる核酸との穏やかな非ＷＩ素的なグリコ／レーションは、生理学的な値から５０℃にまで温度を引き上げることばより、インビトロで促音される。インビボ及びインビトａのグルコースの主なタープ・ノド１よ、塩基性のアミノ酸リジンとアルギニン（遊離か、蛋白質中の混合かのいずれか）である、第２表はカルノシン及び異なるアミノ酸とグルコースとの反応の比較を示す、還元鴫のためのメイラード反応の特異性を示すために、グルコースは、・ツノ１／ビトール（非還元糖）によりｍ！損される。グルコースまたはソルビトール′″Ｃ３０ｍＭのり＞Ｆａｆト’）ラムｉｌｌｊＭ、ｐＨ７，０１７１中、２５０ｍｇ／ｍｌ）　の５００．ｃｚｌは、１８時間、５０℃で、異なるアミノ酸またはカルノシン（５００ｍＭ）を用いてインキュベートされる。その結束生じる溶液の４００ｎｍの光学濃度が測定される（表２）、カルノシンは、最も早く反応するアミノ酸、Ｌ−リジン又はベーターアラニンの各々よりも、約２倍、または、８倍以上に、より多くのメイラード反応生成物を形成する。装置のメイラード反応の生成物は、カルノシンがソルビトールと反応したときに、多分還元糖へのソルビトールの自動酸化のために明白となる。

［以下余白］亀、２ＪＬグルコース又はソルビトールとジペプチド又はアミノ酸との間のメイラード反応生成物の４００ｎｍでの吸光度１之ま３ベーシヨンー５ｄ１　０Ｄ４００ｎｍグルコース十ＰＢＳ　０．１７５グルコース＋カルノシン　８．４５５ソルビトール十ＰＢ３　０．０００ソルビトール＋カルノシン　０．２０９カルノシン十ＰＢ３　０．０４１グル’：Ｊ−ス＋Ｄ、　Ｌ−７う＝ンｏ、２６６ソルビトール＋Ｄ、Ｌ−アラニン　０．００８グルコース＋ベーターアラニン　１．２４０ソルビトール＋ベーターアラニン　０．０１０グルコース＋Ｌ−アルギニン　０．４６９ソルビトール＋Ｌ−アルギニン　０．０１０グルコース＋Ｌ−リジン　、　１７０ソルビトール＋Ｌ−リジン　０．００９グルコース＋イミダゾール　０．０４６ソルビトール＋イミダゾール　０．０３５火五泗まカルノシン、関係するペプチド及びアミノ酸と７ヒドロキシアセトンの反応カルノシン、関係したペプチド及びアミノ酸に対するＤＨＡの反応率を比較する（第３表）時に、カルノシンはリジンよりも速やかに反応し、ジペプチドがグリケーションのためのアミノ基の他のソースに対して競合てきることを示唆している。

しかしながら、この定置においてリジンはその反応に寄与する２つのアミノ基を有しているのに、タンパク質中ではイブンロンアミノ基のみが有効に使用される。イプンロンアミノ基の単独のグリケーンヨン割合の比較は、アルファアミノ基を遮断する、Ｎ−アルファーカルボベンゾキシルーリジン（Ｚ−リジン）が用いられる。ＤＭＡがＺ−リジンのカルノシンの等モル混合物に添加される時、そのジペプチドは遮断アミノ酸よりも速やかに、約１０倍の反応をする（第３表）、相対的な反応性は、グルコースが多糖化の糟として消費されるときに保持され、その実験はＩＯ日日間完全に要する（表示せず）、蛋白質内に合併されたりンン残基によく類似した分子であるＡｃ−Ｌｙｓ−ＮＨＭｓは、カルノシンと比較してＤＭＡとより遅い反応を示した。ペプチドＡｃ−Ｌｙｓ−Ｈｉｓ−ＮＦ２は蛋白質中の優先のグリケーンヨンサイトに類似し、カルノシン投薬のような同様の作用を示した。ペプチドのベーターアラニルーグリシンはＤＨＡと実質的に反応せず、確固たるグリケーンヨンのためのペプチド中の２つの位置でヒスチジンノたメツ要求物が授与される（ＳｈｉｌｔｏｎとＶａｌｔｏｎ、　１９９１）　、　Ｄ−カルノシン（ベーターアラニル−Ｄ−ヒスチジン）が自然出現アイソマーと同じくらい速く反応する間に、より高い相同体の、相同カルノシン（ガンマ− アミノ−ブチリル−Ｌ−ヒスチジン）はゆっくりと反応した。これは、カルノシンに小さな構造上の変更（メチレン基の付加）がその反応性を減じていることを示す。それはまた、各種の基によるリジンの変型が反応率に間して意味のある効果を有していることが明白となる。Ａｃ−ＬｙＳ−ＮＨ２Ｍｅ　（遮断アミノとカルボキシル基）がより速やかに反応するのに対し、Ｚ−リジンは遊離アミノ酸よりもゆっくりと反応した。

それはまた、遊離イミダゾールとサクンニルヒスチジン（アルファーアミノ基が遮断された）が、ジペプチドのアミノ基の消失の割合の増大によって示されるようなりＨＡとカルノシンの反応性を増進させることが見出された。これは、アマトリ転移の触媒として又はＡＧＥ−生産物に向う反応の平衡をそれによって変化させる中間の形態との反応のいずれか一方のイミダソールであることの示唆と一致している（ＳｈｉｌｔｏｎとＷａｌｔｏｎ、　１９９１）　。

［以下余白］１１糞化合物　反応した％Ａ　ベーターＡｌａ−１−Ｈｉｓ−ＯＨ２６ベーターＡｌａ−Ｄ−Ｈｊｓ−ＯＨ２６Ａｃ−Ｌｙｓ−Ｈｉ　５−ＮＦ２　２５Ａｃ−Ｌｙｓ−ＮＨ２Ｍｅ　２１Ｈ−Ｌｙｓ−ＯＨｌ　７ガンマーアミノブチリルーＨｉｓ−ＯＨ１５Ｚ−Ｌｉｓ−ＯＨ３ベーターＡｌａ−Ｇｌｙ−ＯＨ２１３ヘ−一ター＾１ａ−Ｌ−）１ｉｓ−０１（＋　９クシ二に−１（ｉｓ３３へ゛−ターＡｌａ−Ｌ−１１ｉｓ−０）１＋イミタ゛ソー−１４３ペプチドのグリケーションとＤＨＡによるアミノ類似物。

ＡとＢ、化合物は６０℃で５時間のあいだＰＢＳ中でＤＨＡと反応させ、遊離アミン基の損失をＨＰＬＣによって定量した。データはＤＨＡと反応したアミノ基のパーセントとして表現した（インキュベーション混合物中の全ペプチド又はアミノ酸のＳＥＭ　±１％）、Ｂ単独　サクンニルーＨｉｓとイミダゾ−ルはベーターＡｌ　ａ−Ｌ−Ｈｉ　５−ＯＨと定量した後のアミノ基に蔓モル一度で添加した。

火ＪＬｆＬΣ グリケート化アミノ酸とグリケート化カルノシンの　異原性の　性リジンとアルギニンのようなグリケート化アミノ酸（ｇｌｙｃａｔｅｄ　ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄｓ）は、ＭａｒｏｎとＡｌｅｓ　ｆ１９８３どエイムス試験”によって最初に開示された分析システムにおいて変異原性のあること（Ｋｉｎら、　＋９９１）が報告されている。他のプロ９゛／とシスティンのようなグリケート化アミノ酸は変異原性が示されていない、我々はＬ−力ルノシンの変異原性を調査し、またＬ−カルノシン、Ｌ−リジン及びＬ−アラニンかもグリケート化している（第４表）、４つの溶液の全ては、特に２５０μｌ投与で、何等かの指示株の抑制が表われた。我々のデータでは、グリケート化されたＬ−リジンが変異原性であり、それによって発癌性があるであろうという、ＫｉＩＩら（＋９９１）による前の結果と一致する。その活性は、ラット肝のＳ−９代謝性活性化システムによってわずかに増加する。グリケート化されたＬ−アラニンは以前の報告では弱い変異原性であり、我々の実験においては変異原性でないことを示した。遊離カルノシンとグリケート化されたカルノシンの両方は変ｊ！原性ではなかった。これは、インビボのメイラード反応において意味の有る役割をカルノシンが演じるであろうことが予期される〒あろう、Ｌ−カルノシンとＬ−リジンのグリケート化の形態の差異の理由は知られていない。

［以下余白］：！ｉ」二人ＴＡ　１００によるプレート１悲１１纂斑化合物　投与（μｍ）　Ｓ−９なし　Ｓ−９ありＬ−カルノシン　２５０　１５８±Ｉ＋　１４９±１３５０　１５４ ±１４　１７９±１５グリケート化された　２５０　１４２±　１７　１５８±１９Ｌ−カルノシン　５０　１５９±７１６７±１０グリケート化された　２５０　２７７±２１　２４４±　１３Ｌ−リジン　５０　３５７±１７　５５３±１９グリケート化された　２５０　１４５±６１４６±９Ｌ−アラニン　５０　１６０±９１８１±１０陰性コントロール　１６１　±６１８８±　１０＋アジド　＞　１０００　Ｎ／＾＋　２　Ａ　Ｆ　Ｎ／＾　２５０±３３＋２ＡＡＦ　Ｎ／＾　５００グリケート化された化合物の変異原性ボテンシャルサルモネラタイフイムリウム（Ｓａｌｓｏｎｅｌｌａ　ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）　ＴＡ　１００は、ｈｉｓ −からｈｉｓ＋への突然変異系の指示株である。データはプレート毎の復帰細胞の平均値と、ラット肝のミクロソーム的な（Ｓ−９）調製物によって代謝性刺激の有るものと無いもののそれらの試験溶液とコントロールのための標準偏差とを表現した。

Ｋ４最１ｕＪＩＸ　ｔグリコシレー瀘」ンに　ア；ノグアニＳ゛ゝ　ルノゝＺ互鬼坦軟ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）とオボアルブミンのグリケート化ンに関するカルノシンとアミノグアニジンの両方の効果の比較は、ＤＮＡの一定量と、抗グリケータ−のいずれかについて濃度を変えたものとを６０℃でインキュベートしてなされた。反応の出発時点と７時間経過後の一定部分を取り、反応物の展開はスバロース６　（Ｓｐｅｒｏｓｅ　６）カラムによるゲルろ過によって分析した。蛋白質の架橋化とフラグメント状態は、コントロールとして使用した未処理の蛋白質と比較した保持時間中の変化として目に見えて明確となる。幾つかの化合物は、最も小さな化合物のために理論上の保持時間の後に現われた。それらは高いイオン濃度と溶離剤（ツイーン２０）の存在で一様なカラムＦＭｆ１で妨害される傾向がある。

それらは小さな化合物の必要性ではなく、むしろ高い充填度と反応性である。第５表にそのデータを要約する。２つの化合物はこのシステムにおいて別々に反応すると思われる　カルノシンは高分子量の化合物の形成が減じられ、アミノグアニジンに比べ低い濃度で実質的により多くの効果がある６反応生成物が特徴付けられない全てのアミノグアニジン試料は高一度で優性に形成される（低分子量の形態”ＬＭＷ”として記載され、何故ならばその保持時間は他の全ての化合物でのｒｉ測より長い）。アルブミンモノマーのピーク面積が減じられることから、これらはオボアルブミン、アミノグアニジンとＤＨＡの間の反応生成物であろう。３つの化合物の全ては、保持時間又はピーク面積が７時間のあいだ同様の条件のもとで別々にインキュベートされる時に変化しないことが示された＋ＬＭＷはまた、オボアルブミンがインキュベーション混合物中のウシ血清アルブミンによって取替えられる時に観測される（表記せず）。そのＬＭＷはカルノシン試料中に少しも存在していない。

第」０艮オボアルブミンクロマトグラムの面積パーセントＨＭＷ　モノマー　ＬＭＷｔＱ時カルノシン試料［Ａ］から［Ｄ］　０　１００　０［コントロール］　０　１００　０７ミノグアニシン試料［Ａ］から［Ｄ］　０　１００　０［コントロール］　０　１００　０７時間後カルノシン試料［］　９　９１　０［Ｂ］　６　９４　０［Ｃ］　３　９７　０［Ｄ　］　２５　７５　０［コントロール］　６８　３２　０アミノグアニジノ試料［Ａ］　０　３１　６９ＣＢ　］　ｓ　ｚｏ　７２［Ｃ］　０　４１　４９［Ｄ］　３８　４０　２２［コントロール］　６８　３２　０凡例：オボアルブミンは、カルノシンヌはアミノグアニジンのいずれか一方が各種の濃度で存在する中で７時間のあいだＤＨＡと一緒にインキュベートした０反応生成物はゲルろ過カラム（スバロース６）で分離し、ピークは保持時間に従って分類した　ＨＭＷ、高分子量（１５−３０分）　；アルブミンモノマ−（３５分）；及び遅れて流出する化合物ＬＭＷ、低分子１１Ｄ４０分）、カルノシンとアミノグアニジンａａｕ　［コ＞ト０−ル］　ＯｍＭ、［Ａ］　６００ｍＭ、［Ｂ］　３００ｎｎＭ、［Ｃ１１００ｍＭ、［Ｄ］　５０ｎｉＭ。

抗−グリケータ−の有効性のために良い尺度け、反応の７時間後に残存する未変成のアルブミンの鰻である。この点でカルノシンはアミノグアニジンと比べ全ての一度でより有効であった。

宵１Ｊ１１１ヱ刃：り」ｉ傷痕５」封Ｌ１左四、ムンンＪ四伽禾冠状動脈オし１臓疾患は糖尿病及び同様に非糖尿病の最も多い死因の１つである。

グリケージ＝１＞はアテローム性プラーク（ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｏｔｉｃ　ｐｌａｑｕｅｓ）に加え、糖尿性胃炎や目の疾患を含む多くの糖尿性合併症の進展を包含している。コレステロール給餌ウサギは８Ｊ！１間の期限を越えてアテローム性プラークに関するカルノシンの効果を試験に使用した。我々の研究では、カルノシンによりグリケータ−ノの抑制がプラーク形成を妨げ減じることができることをホしている。これらの結果は第２図にホされる。

そのデータのための２つのテールＰはマン−ホワイトニー（Ｍａｎｎ−Ｗｈｉ　ｔｎｅｙ）の２サンプル試験を用いて算出した　胸部大動脈＝　０．０５２９　；腹部大動脈＝０．５３６８；大動脈弓＝　０．６０２３、全てのデータはアミノグアニジン（ｎ＝ＩＩＪ給餌に対して糖尿病コントロール（ｎ＝Ｉ２）　、その他の動物は統計的により良い結果を与えるこの研究において使用した。しかしながら、これらは非酵素的グリコジル化の抑制の両方がプラーク形成を減じ得ないことを明確に示す。

その動物の体重は８週間の処理期限を越えて減少し、しかしながらコントロールとカルノシン処理群の間で差はなかった。

コントロールに対するカルノシン処理においてａＳされた各種器官の重量に差体１ｋｇ０Ｊ　８週コントロール　３．２７±０．０９　２．７５±０．１７カルノシン　３．３３ ±０．０９　２．６８土０．１２８週処理後の器官の重量（ｇ）肝ＩＩ　！臓　心臓コントロール　１３５．９４±５．０６　１６．２０±０．６７　７．９２±０．５３カルノシン　１２４．４０±６．３６　１７．５３±０．６９　６．１２ ±０．２７白内障は十分な視力が損なわれる眼球レンズの混濁化である。糖尿病は、白内障の原因の１つの形態が糖尿病であるということが多くの年月と多くの臨床実験で支持されるという観点により糖尿病と関連付けられている。動物中の糖尿病はストレブトゾトン＞　（！Ｉｔｒｅｐｔｚｏｔｏｚｉｎ）によって１１１発させることができ、レンズの混濁は注射２０日後により進展的に発生するが、濃い混濁は注射時の年齢によって約１００日後に出現した。

レンズの蛋白質を含んだ蛋白質への糖質の白内障内転は、確認され、定量されている。最も多数の組織では糖尿病において一様な後期のメイラード生成物の少しの蓄積があるが、レンズ核中の蛋白質は早期のグリケーション生成物の１積ばかりでなく、黄色のメイラード生成物に変化するそれらの時間を有する。化学的実在物と酵素の構造変化誘発物の各種を生じる糖質の最初の攻撃は、膜蛋白質とレンズの結晶体とそれら各々の経路が損傷を生じ得る。糖質の反応性アルデヒド基を補足可能なそのものとカルノシンに類似する化合物とは白内障の開始を減少させるであろう、我々はストレプトシトシンを導入した糖尿病う９トモデルにおいてこれを試験している。カルノシン食餌動物について８週後には、糖尿病コントロールＷ　（Ｍａｎｎ−１１ｈｉｔｎｓｙ　２サンプル試験、２テールｐ値＝　０．２０９２　；カルノシン給餌に体する糖尿病コントロール）に比べて高度な明瞭性（ｉｆ！濁なし）を示した（第３図参照）、これは５６日で測定されて以来、実験の半路点で、その傾向がカルノシン給餌によって白内障の形成における減少として示される。

白内障は動物モデルにおける糖質の減少のみでなくＳ発させることができる。

パビズハエブ（Ｂａｂｉｚｈａｙｅｖ、　１９８９）は過酸化した脂質が動物モデルにおいて進展する糖尿病の開始的原因の１つとし得ることを示している。リポソームの懸濁物の注入は後方貴下白内障のＩｌ展を誘発する過酸化した脂質を含有するリン脂質から調製した。同様な白内障モデルによる彼の発見は過酸化した脂質に単に基づき、カルノシンと類似の抗酸化剤によ一つて抑制し得る。メイラード反応生成物の形成は、しかしながら、経路に従属せず、抗酸化剤によって影響を及ぼすことができない。

［以下余白］罠惠男遣１駁豊之ヱ上旦」ける　０尿、グリケート化したヘモグロビンと血　グルコースに二止旦薯ｔ３ＬｉＬ、生−４ン」８週で有意の変化のないことが次のパラメーターについてｆｉ測された。

２．４ｘ／二１．３　２．５１ｘ／−４−１，０７２，５１ｘ／〒１．４８釦郭リタニス（ｍＭ値＋５ＥＸ）蛋白尿と網膜症における変化は糖尿病条件の約３０週後に唯一観察することかできる。そのアミノグアニジン化合物、非酵素的なグリコシレージョンの防止のための有効な使用は、給餌３０週後の一様な糖尿病モデルにおいてグリケート化したヘモグロビンの量が減少することはない、この研究は現在継続している。

明白に開示されたような発明の精神又は範囲から逸脱することなく、特有な実施Ｖ＊において示したような本発明により各種の変更及び／ヌは変形が形成されるであろうことは当業者においでは明らかとなるであろう８本発明の実施態様は、それ故、開示としての全ての関係において考慮されるものであり、それに限定されるものではない。

［以下余白］文献：Ｇｕｌｅｗｉｔｓｃｈ、　Ｗ、、と＾ｍ１ｒａｄｘｉｂｉ、　Ｓ、　（１９００）　Ｂｅｒ、　Ｄｔｓｃｈ、　Ｃｈｅｗ、　Ｇａｓ、　３３D１９０２− ５ｈｉｌｔｏｎ、Ｂ、Ｈ，、とＷａｌｔｏｎ、Ｄ、Ｊ、（１９９１）　Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｗ、２６６、　５５８７−５５９２Ｈａｍｓｅｓ、）１．Ｐ、、Ｍａｒｔｉｎ、Ｓ、、Ｆｅｄｅｒｌｉｎ＋　に、、Ｂｒｏｗｎｌｅｅ　（＋９９１）　Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、＾モ≠■ Ｅｉａ、Ｓ、Ｂ、、Ｋ１１ＩＩ　１．Ｓ、、Ｙｅｕｍ、Ｄ、Ｍ、とＰａｒｋ、Ｙ、Ｈ，（＋９９１）　Ｎｕｔ、１１ｅｓ、２５４．　６５−T９［以下余白］仔霧科冴膚〈Ａと％（＜斗−＞ｌ東論Ｖ国際調査報告　−一□− 国際調査報告　＋１−１□Ｎ。

ＰＣＴ／ＡＵηＩカ４瞳国際調査報告　＋□□９゜ＰＣＴＩＡＩＪ？ＺＩＯ１１４８＠］口ｈｉｓＡｎｎｅｘｌｉｓＬｓｔｂｅｋｎ（）１−ｆｉ１＋Ａ＋ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｌｅｖｅｌｐａＬｅｎ目ｗｉｌｙｍｅｍｂｅｒｓ窒■撃≠狽奄獅■P ０ｔｈｅｐａｔｅｎｔｄｏｃｕｍｅｎｔｃ＋１ｅｃｌ　ｔｎ　ｌｈｅａｂｏｖｅ −ｍｅｎｕｏｎｅｄ　＋＋ｎｅｍａｔ＋ｏｎｓｕ　尾ｈｒｅｐａｎ、　Ｔｈｅ＾ｕｓＬｎｌｉａｎ　oａｌｅｍＯｆｆｉｃｅ！ｓ　ｔｎ　ｎｏｗｙｒｙｌｉａｂｋｆｏｒ　＋ｈｅｓｅ　ｐａｒｔｉｃｕｌａｒｓ　ｗｈ＋ｃｈ　ａｒｅ　ｍｅｒｅｌｙ　ｇｉｖｅｎ　ｆｏｒ　ｍｅ　ｐｕｒｐｏｓｅ　ｏｒ　奄獅■盾窒高≠浮盾■ ＰＯＩＩＩＩＰｃｒ／１ｓＡ１２１０１１＋ａ＋５ｗ−１−向ｉ−ｒｗｗｘＷＪｖｌｙｌ！呵ｒｌ）ＣＯＰＬＪＭフロントページの続き（７２）発明者　ヒプキッス、アラン　ロジャーイギリス国　５ＥＬ２　０ＵＦ　ロンドンター　ゲイブルス　クローズ　８３（７２）発明者　パナジオトパウロス、シアンナオーストラリア国　３１０８　ヴイクトリアドンキャスター　ライアル　コート　２

Claims

【特許請求の範囲】

１．（β−ＡＩａ−Ｈｉｓ）ｎ、（Ｌｙｓ−Ｈｉｓ）ｎ、式Ｒ１−ｘ−Ｒ２の化合物、製薬上許容し得るそれらの塩類とそれらの組み合わせ；及び製薬上許容し得る媒体、ここでｎは２−５であり、Ｒ１は１又は２の自然発生アミノ酸であり、付随的にアルファーアミノが１から１２炭素原子、好適には２から６炭素原子のアルキル又はアルアルキルによってアセチル化され、Ｒ２は１又は２の自然発生アミノ酸であり、付随的にアルファーカルボキシルが１から１２炭素原子、好適には２から６炭素原子のアルキル又はアルアルキルによってエステル化又はアミド化され、及びＸはＲ３−Ｌ又はＤ−Ｈｉｓ（Ｒ４）−Ｒ５であり、ここでＲ３は空位か又は１から１２炭素原子、好適には２から６炭素原子のω−アミノアシルであり、Ｒ４は空位又はアルキルースルフィドリル、ヒドロキシル、ハロゲン及ひ／又はアミノ基による修飾イミダゾールであり、Ｒ５は空位又は１から１２炭素原子、好適には２から６炭素原子のカルボキシ（アルキル）アミドである、よりなる群から選択された化合物を備える組成物を被験者に投与することを備えた糖尿病患者における合併症と糖尿病の病因の治療方法。
２．前記化合物がカルノシン、アンセリン、オフィジン、ホモカルノシン、ホモアンセリン、Ｄ−カルノシンとカルシユンからなる辞から選択されたものであることを特徴とする請求の範囲第１項記載の方法。
３．前記化合物がカルノシンであることを特徴とする請求の範囲第２項記載の方法。
４．Ｒ１とＲ２がＬ−又はＤ−リジン又はＬ−又はＤ−アスバラギン酸又はＬ− 文はＤ−グルタミン酸又はそれらの相同物であることを特徴とする請求の範囲第１項記載の方法。
５．前記組成物かさらにアミノグアニジンを備えることを特徴とする請求の範囲第１項から第４項のうちいずれか１項記載の方法。
６．前記組成物かインシュリンスルホニル尿素、ビグアニジン及び／又はアミリン阻害体とともに共投与されることを特徴とする請求の範囲第１項から第５項のうちいずれか１項記載の方法。
７．前記組成物が注射、注入、摂取、吸入、点眼、イオン導入法又は局所付加によって投与されることを特徴とする請求の範囲第１項から第６項のうちいずれか１項記載の方法。
８．前記組成物が経口的又は点眼的に投与されることを特徴とする請求の範囲第１項から第７項のうちいずれか１項記載の方法。
９．前記組成物が、その組成物が皮膚穿通、皮膚付着、組織吸収／吸着、皮膚感作及び／又は皮膚刺激に関しては改善されたような分子であるところの別な分子と混合され又は結合されたものである請求の範囲第項から第７項のうちいずれか１項記載の方法。
１０．前記分子が、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリルアンモニウムオキシド、オゾン、デシルメチルスルホキシド、ラウリルエトキシレート、オクテノール、ジメチルスルホキシド、プロピレングリコール、ニトログリセリン、エタノール及びそれらの組み合わせよりなる群から選択されたものであることを特徴とする請求の範囲毎９項記載の方法。
１１．前記化合物が薬剤前駆体の形態中にあることを特徴とする請求の範囲第１項から第１０項のうちいずれか１項記載の方法。
１２．糖尿病の合併症と病因の治療のための薬の調製において、（β−ＡＩα− Ｈｉｓ）ｎ、（Ｌｙｓ−Ｈｉｓ）ｎ、式Ｒ１−ｘ−Ｒ２の化合物、製薬上許容し得るそれらの場類とそれらの組み合わせ；及び製薬上許容し得る媒体、ここでｎは２−５であり、Ｒ１は１又は２の自然発生アミノ酸であり、付随的にアルファーアミノが１から１２炭素原子、好適には２から６炭素原子のアルキル又はアルアルキルによってアセチル化され、Ｒ２は１又は２の自然発生アミノ酸であり、付随的にアルフアーカルボキシルが１から１２炭素原子、好適には２から６炭素原子のアルキル又はアルアルキルによってエステル化又はアミド化され、及びＸはＲ３−Ｌ又はＤ−Ｈｉｓ（Ｒ４）−Ｒ５であり、ここでＲ３は空位か又は１から１２炭素原子、好適には２から６炭素原子のω−アミノアシルであり、Ｒ４は空位又はアルキルースルフィドリル、ヒドロキシル、ハロゲン及び／又はアミノ基による修飾イミダソールであり、Ｒ５は空位又は１から１２炭素原子、好適には２から６炭素原子のカルボキシ（アルキル）アミドである、よりなる群から選択された化合物の使用。
１３．前記化合物がカルノシン、アンセリン、オフィジン、ホモカルノシン、ホモアンセリン、Ｄ−カルノシンとカルシユンからなる群から選択されたものであることを特徴とする請求の範囲第１２項記載の使用。
１４．前記化合物がカルノシンであることを特徴とする請求の範囲第１３項記載の使用。
１５．Ｒ１とＲ２がＬ−又はＤ−リジン又はＬ−又はＤ−アスバラギン酸又はＬ −又はＤ−グルタミン酸又はそれらの相同物であることを特徴とする請求の範囲第１２項記載の使用。
１６．前記薬がさらにアミノグアニジンを備えることを特赦とする請求の範囲第１２項から第１５項のうちいずれか１項記載の使用。
１７．前記薬がインシュリンスルホニル尿素、ビグアニジン及び／又はアミリン阻害体とともに共投与されることを特徴とする請求の範囲第１２項から第１６項のうちいずれか１項記載の使用。
１８．前記薬が注射、注入、摂取、吸入、点眼、イオン導入法文は局所付加によって投与されることを特徴とする請求の範囲第１２項から第１７項のうちいずれか１項記載の使用。
１９．前記薬が経口的又は点眼的に投与されることを特徴とする請求の範囲第１２項から第１８項のうちいずれか１項記載の使用。
２０．前記化合物が、その組成物が皮膚穿通、皮膚付着、組織吸収／吸着、皮膚感作及び／又は皮膚刺激に関しては改善されたような分子であるところの別な分子と混合され又は結合されたものである請求の範囲第１２項から第１９項のうちいずれか１項記載の使用。
２１．前記分子が、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリルアンモニウムオキシド、オゾン、デシルメチルスルホキシド、ラウリルエトキシレート、オクテノール、ジメチルスルホキシド、プロピレングリコール、ニトログリセリン、エタノール及びそれらの組み合わせよりなる群から選択されたものであることを特徴とする請求の範囲第２０項記載の使用。
２２．前記化合物か薬剤前躯体の形態中にあることを特赦とする請求の範囲第１２項から第２１項のうちいずれか１項記載の使用。