JPH07149667A - 酵素により活性化される改良プロドラッグ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】 式Ｉ Ｓ−Ｚ−Ｗ （Ｉ） （式中、Ｗは薬理学的に活性な物質であり、Ｚは自己破
壊性スペーサーまたは結合を示し、Ｓは天然の酵素基質
と比較して少なくとも２倍低いミカエリス−メンテン定
数でＺ−Ｓ結合が酵素的に切断できるような残基であ
る）の構造を有する酵素によって活性化されるプロドラ
ッグ。 【効果】 本発明のプロドラッグは、酵素分析に用いら
れる天然もしくは標準基質または適当な現技術水準にお
けるプロドラッグの場合より、有意に低いプロドラッグ
モル濃度において、酵素によって切断される。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】本発明は、酵素的に切断可能な、低いミカ
エリス−メンテン定数（Ｋｍ）を有するプロドラッグに
関する。プロドラッグは、非毒性で薬動力学的に不活性
であるが、インビボにおいて薬理学的に活性な薬物に変
換可能な化合物と定義できる。本発明は、インビボにお
ける薬物の部位特異的送達を取り扱う薬物標的化の分野
に関するものである。部位特異的送達は好都合に、薬物
の選択性を増大させ、それらの望ましくない副作用を低
減させる。

【０００２】部位特異的送達を達成するための一つの可
能性あるアプローチには、その部位に予め局在する酵
素、酵素から誘導されるムテイン、触媒抗体、抗体酵素
接合体または融合蛋白質のようなプロドラッグ切断触媒
を用いて細胞毒性薬物に部位特異的に活性化することが
できる、非毒性プロドラッグの適用がある。このアプロ
ーチは、プロドラッグによる薬物送達の利点（すなわ
ち、安定性の増大、溶解度の調整、投与経路の改良、よ
り好ましい分布、薬物動力学的改良、バイパッシング抵
抗性；T.A. Connors, Xenobiotica, 16, 975-988, 198
6）と、触媒要素によって仲介される好ましい腫瘍特異
的活性化とを兼備させる。プロドラッグの活性化のため
の外因性酵素またはポリクローナル抗体酵素接合体の使
用は、Graffi（ドイツ特許公開明細書２２ １２ ０１
４）およびPhilpottら（J. Immunol. 111, 921, 1973）
によってはじめて開拓されたものである。

【０００３】さらに最近になって、GraffiおよびPhilpo
ttの最初の教示が、例証され、また、プロドラッグ活性
化触媒としてのモノクローナル抗体酵素接合体（Bagsha
weら，Brit. J. Cancer, 58, 700, 1988；Senterら，Bi
oconjugate Chem. 4,3-9, 1993）または融合蛋白質（Bo
ssletら, Brit. J. Cancer, 65, 234-238, 1992；Gosho
rnら, Cancer Res., 53, 2123-2127, 1993）の使用によ
り改良された。

【０００４】これらの改良にもかかわらず、これまでに
記載されているシステムには、臨床的応用に際して、い
くつかの重大な欠点がある。すなわち、 ａ） 化学的カップリングで製造されたモノクローナル
抗体酵素接合体は、重大な欠点として、抗体残基と酵素
の外来性起源によりヒトで強力な免疫原性を有する（Ba
gshaweら，Disease Markers, 9:233-238, 1991）。この
高度な免疫原性の結果として、ヒトにおける反復適用は
きわめて限られた程度においてのみ可能である。 ｂ） 組換えＤＮＡ技術によって製造された非人化結合
残基および外来性酵素からなる融合蛋白質は同様に、ヒ
トに免疫原性で、反復適用が必要であれば、モノクロー
ナル抗体酵素接合体の場合に匹敵する欠点を有する。

【０００５】ｃ） 人化結合残基および外来性酵素から
なる融合蛋白質は多分ヒトにそれほど免疫原性を示さ
ず、ヒトにおける反復処置サイクルが許容される可能性
は高いと思われる。しかしながら、ヒト融合蛋白質には
２つの大きな欠点がある。すなわち高いターンオーバー
速度（Ｖｍａｘ）と低いミカエリス−メントン定数（Ｋ
ｍ）をもつ外来性酵素に比較して、ヒト酵素残基のかな
り低いと思われるターンオーバー速度と有意な触媒効果
を得るために必要なかなり高いプロドラッグ（基質）濃
度である。

【０００６】ヒト酵素残基のもつ固有の性質によっても
たらされるるヒト融合蛋白質のこの限界（低いＶｍａｘ
および高いＫｍ）は、現在の技術水準における方法で
は、酵素の活性部位におけるランダムな突然変異誘発
（Munirら，PNAS USA，90：4012-4016, 1993）によっ
て、きわめて限られた程度（ファクター４）しか克服し
得ないのである。

【０００７】驚くべきことに、インビボにおけるプロド
ラッグの活性化に適用可能な大部分のヒト酵素の固有の
性質である高いＫｍによる限界は、新規なプロドラッグ
によって克服できることが見出されたのである。 これらのプロドラッグは、式Ｉ Ｓ−Ｚ−Ｗ (Ｉ) （式中、Ｗは薬理学的に活性な物質であり、Ｚは自己破
壊性スペーサーまたは結合を示し、Ｓは天然の酵素基質
と比較して少なくとも２倍低いミカエリス−メンテン定
数でＺ−Ｓ結合が酵素的に切断できるような残基であ
る）の構造を有する。

【０００８】本発明のプロドラッグは、酵素分析に用い
られる天然もしくは標準基質または適当な現技術水準に
おけるプロドラッグ（ＷＯ ９２／１９６３９）の場合
より有意に低いプロドラッグモル濃度において、酵素に
よって切断されるという共通の特性を有する。したがっ
て、これらは低Ｋｍプロドラッグと命名する。本発明の
プロドラッグの他の共通の性質には、直接またはスペー
サー残基(Ｚ)を介して薬理学的活性物質（Ｗ）に連結で
きる重要な構造成分として、修飾された競合的酵素活性
阻害物質（Ｓ）を有する。スペーサーは自己破壊性であ
ることが好ましく、Ｓ−Ｚ結合の酵素的切断後、薬理学
的に活性な物質を発生させる。自己破壊性スペーサーと
は、２つの結合で２つの分子に結合し、第一の分子との
結合が切断された場合には、それ自体を第二の分子から
も除去する残基と定義される。

【０００９】好ましい低Ｋｍプロドラッグはヒトグリコ
シダーゼに対する基質であり、一般式II：

【化５】 （式中、Ｒは互いに独立に、Ｈ、ＯＨ、Ｆ、ＮＨ₂、Ｃ
ＯＯＨ、ＣＨ₂−ＣＯＯＨ、ＣＨＯＨ−ＣＯＯＨ、ＰＯ₃
Ｈ₂、ＣＨ₂−ＰＯ₃Ｈ₂またはＣＨＯＨ−ＰＯ₃Ｈ₂であ
り、ＸはＮＨ、ＯまたはＳであり、ｍは０または１であ
り、Ｚは自己破壊性スペーサーまたは結合を示し、Ｗは
薬理学的に活性な物質を意味する。

【００１０】ただし、β−Ｄ−グルクロニド−Ｚ−アン
トラサイクリン化合物：

【化６】 は包含しない）の構造を有する。

【００１１】とくに好ましい低Ｋｍプロドラッグは、β
−グルクロニダーゼに対する基質であり、一般式III

【化７】 〔式中、ＹはＣＯＯＨ、ＣＨ₂−ＣＯＯＨ、ＣＨＯＨ−
ＣＯＯＨ、ＰＯ₃Ｈ₂、ＣＨ₂−ＰＯ₃Ｈ₂またはＣＨＯＨ
−ＰＯ₃Ｈ₂であり、ＸはＮＨ、ＯまたはＳであり、Ｒは
互いに独立に、Ｆ、ＮＨ₂、ＨまたはＯＨであり、ｍは
０または１であり、

【００１２】Ｚは結合または自己破壊性スペーサー、好
ましくは式 −Ｙ〔−Ｃ(＝Ｙ)−Ｘ−〕_p−Ｖ(Ｒ)_n−Ｘ−Ｃ(＝Ｙ)− （式中、Ｖは、芳香族基もしくはヘテロ芳香族基または
共役二重結合を有する脂肪族基あるいはアミノ酸残基で
あって、グリコシル残基の切断後には循環し、好ましく
は５〜２０個の炭素原子および０〜４個のヘテロ原子を
有し、この場合ヘテロ原子はＮ、ＯまたはＳを意味し、
Ｒで置換されていて、Ｒは互いに独立にＨ、メチル、メ
トキシ、カルボキシ、メチルオキシカルボニル、ＣＮ、
ヒドロキシ、ニトロ、フルオロ、クロロ、ブロモ、スル
ホニル、スルホンアミドまたはスルホン（Ｃ₁〜Ｃ₄）−
アルキルアミドであり、ｐは、０または１であり、ｎ
は、０〜２５の整数、好ましくは１または２であり、Ｘ
は、Ｏ、ＮＨ、メチレンオキシ、メチレンアミノまたは
メチレン(Ｃ₁〜Ｃ₄)−アルキルアミノであり、Ｙは、Ｏ
またはＮＨである）で示される残基であり、

【００１３】Ｗは、薬理学的に活性な物質、好ましく
は、ドキソルビシン、４′−エピ−ドキソルビシン、４
−もしくは４′−デソキシ−ドキソルビシン、もしくは
エトポシドのようなアントラサイクリン、Ｎ−ビス−
（２−クロロエチル）−４−ヒドロキシアニリン、４−
ヒドロキシシクロホスファミド、ビンデシン、ビンブラ
スチン、ビンクリスチン、テルフェナジン、テルブタリ
ン、フェノテロール、サルブタモール、ムスカリン、オ
キシフェンブタゾン、サリチル酸、ｐ−アミノサリチル
酸、５−フルオロウラシル、５−フルオロシチジン、５
−フルオロウリジン、メトトレキセート、ジクロフェナ
ック、フルフェナム酸、４−メチルアミノフェナゾン、
テオフィリン、ニフェジピン、マイトマイシンＣ、マイ
トキサントロン、カンプトテシン、ｍ−ＡＭＳＡ、タキ
ソール、ノコダキソール、コルヒチン、シクロホスファ
ミド、ラケルマイシン、シスプラチン、メルファラン、
ブレオマイシン、ナイトロジェンマスタード、ホスホラ
ミドマスタード、ケルセチン、ゲニスタイン、エルブス
タチン、トリホスチン、ロヒツキン誘導体（(−)−シス
−５,７−ジヒドロキシ−２−（２−クロロフェニル）
−８−〔４−（３−ヒドロキシ−１−メチル）−ピペリ
ジニル〕−４Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン；ＥＰ８
９１１９７１０.５）、レチノイン酸、酪酸、ホルボー
ルエステル、ＤＳＭＯ、アクラシノマイシン、プロゲス
テロン、ブセレリン、タモキシフェン、ミフェプリスト
ン、オナプリストン、Ｎ−（４−アミノブチル）−５−
クロロ−２−ナフタレンスルホンアミド、ピリジニルオ
キサゾール−２−オン、キノリル−、イソキノリル−オ
キサゾロン−２−オン、スタウロスポリン、エタノール
アミン、ベラパミール、フォルスコリン、１,９−ジデ
オキシフォルスコリン、キニン、キニジン、レセルピ
ン、１８−Ｏ−（３,５−ジメトキシ−４−ヒドロキシ
ベンゾイル）レセルペート、ロニダミン、ブチオニン、
スルフォキシミン、ジエチルジチオカルバメート、シク
ロスポリンＡ、アザチオプリン、クロラムブシル、Ｎ−
（４−トリフルオロメチル）−フェニル−２−シアノ−
３−ヒドロキシ−クロトン酸アミド（ＷＯ ９１／１７
７４８）、１５−デオキシスペルグアリン、ＦＫ５０
６、イブプロフェン、インドメタシン、アスピリン、ス
ルファサラジン、ペニシラミン、クロロキン、デキサメ
サゾン、プレドニソロン、リドカイン、プロパフェノ
ン、プロカイン、メフェナム酸、パラセタモール、４−
アミノフェナゾン、ムスコシン、オルシプレナリン、イ
ソプレナリン、アミロライド、ｐ−ニトロフェニルグア
ニジノベンゾアートまたはそれらのさらに１個もしくは
２個以上のヒドロキシ、アミノもしくはイミノ基で置換
され、ヒドロキシ、アミノもしくはイミノ基を介してＺ
に連結する誘導体である。

【００１４】ただし、β−Ｄ−グルクロニド−Ｚ−アン
トラサイクリン化合物：

【化８】 は包含しない〕の構造を有する。

【００１５】本出願における酵素は、触媒抗体をも意味
する。本明細書に記載された化合物は従来技術の方法に
よって製造できる。ヒトβ−グルクロニダーゼに選択的
な低Ｋｍプロドラッグは、以下の項に記載する。プロド
ラッグＡ（例１）は、競合的β−グルクロニダーゼ阻害
物質、サッカロラクトン：

【化９】 からの誘導体とみることもできる。

【００１６】実施例１ プロドラッグＡ、Ｂ、Ｃ：

【化１０】 プロドラッグＡ：Ｒ＝ＣＨＯＨ−ＣＯＯＨ プロドラッグＢ：Ｒ＝ＣＨ₂−ＣＯＯＨ プロドラッグＣ：Ｒ＝ＣＯＯＨ

【００１７】プロドラッグＡに関する実験操作：１,２,
５−トリ−Ｏ−アセチル−アルデヒド−Ｄ−グルクロノ
−３,６−ラクトン（化合物７）の製造

【化１１】 ３,６−グルカロラクトン（化合物５）(４５ｇ）を乾燥
ピリジン（２２５ml）とＡｃＯ₂（１８５ml）の冷却
（０〜５℃）混合物に徐々に加えた。添加時は内温を５
℃に維持し、すべてのラクトンが溶解したのち、反応混
合物をさらに２時間撹拌した。この無色の溶液をつい
で、水と砕氷の混合物３Ｌ中に注ぎ、約３時間激しく撹
拌した。沈殿を集め、水で洗浄し、乾燥すると、固体が
単離された。これは、αおよびβトリ−Ｏ−アセチル−
グルクロノラクトン（化合物７）の混合物７０ｇを含有
する。この混合物をそのまま次工程に使用した。

【００１８】２,５−ジ−Ｏ−アセチル−α−Ｄ−グル
クロノ−３,６−ラクトン−α−フラノシルブロミド
（化合物８）の製造 化合物７（７０ｇ，２３.３ミリモル）のジクロロメタ
ン（２００ml）中溶液を撹拌しながら暗所窒素雰囲気下
に保持し、これに臭化チタニウム（１６.６ｇ，４５ミ
リモル）を添加した。一夜撹拌後、さらにＴｉＢｒ
₄（８.３ｇ，２２ミリモル）を加えた。さらに２４時間
後に反応混合物をジクロロメタン(１５０ml)で希釈し、
有機溶液を砕氷−水中に注いだ。有機層を分離し、水で
洗浄し、乾燥し、減圧下に蒸発させた。化合物８（６５
ｇ）が次工程に用いるのに十分純粋に得られた。

【００１９】（２−ニトロ−４−ホルミルフェニル）−
２,５−ジ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルクロノ−３,６
−ラクトンフラノシド（化合物９）の製造 化合物８（１５ｇ，５０ミリモル）と４−ヒドロキシ−
３−ニトロベンズアルデヒドから、ＷＯ ９２／１９６
３９に既に記載されている操作により製造された。この
操作により、１２ｇ（６１.６％）の化合物９が得られ
た。

【００２０】（２−ニトロ−４−ホルミルフェニル）−
２,３,５−トリ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルクロネー
ト（化合物１ａ）の製造 メタノール（１２５ml）中固体水酸化ナトリウム（５０
mg）の溶液に、化合物９（１０ｇ）を加えた。この溶液
を室温で４時間撹拌し、減圧下に蒸発させた。得られた
粗製の混合物を直ちに無水ピリジン（５０ml）に溶解し
た。０℃に冷却したのち、無水酢酸（４０ml）を加え、
続いて反応混合物をさらに１８時間撹拌した。ジクロロ
メタンで抽出し、以下慣用方法により後処理すると、化
合物１ａ、６.６ｇ（総収率６５％）が得られた。

【００２１】（２−ニトロ−４−ヒドロキシメチルフェ
ニル）−２,３,５−トリ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グル
クロネート（化合物２ａ）の製造 化合物１ａ（６ｇ）を、ＷＯ ９２／１９６３９に既に
記載されている操作に従い、水素化ホウ素ナトリウムで
還元して製造された。これにより５.６ｇ（９５％）の
化合物２ａが得られた。

【００２２】４−(２,３,５−トリ−Ｏ−アセチル−β
−Ｄ−メチルグルクロノフラノシル)−３−ニトロ−ｐ
−ニトロベンジルオキシカルボネート（化合物３ａ）の
製造

【化１２】 化合物２ａ（６ｇ）を、ＷＯ ９２／１９６３９に既に
記載されている操作に従い、クロロギ酸４−ニトロフェ
ニルエステルとカップリングさせて（収率７５％）製造
した。

【００２３】プロドラッグＡの製造：プロドラッグＡ
は、化合物３ａとドキソルビシンから、メタノ−ル中ナ
トリウムメトキシドついで水酸化ナトリウムで処理して
製造された（収率８３％）。

【００２４】実施例２ ４−メチルウンベリフェリル（５Ｒ）−５−ホスホニル
−β−Ｄ−キシロピラノシド（１６）の製造：

【化１３】 アリル６−Ｏ−トリチル−α−Ｄ−グルコピラノシド
（２）。アリルα−Ｄ−グルコピラノシド（１）（R.E.
Wing & J.N. BeMiller, Carbohydr. Res., 1969, 10,
441に従って製造）（１２.５ｇ，５６.８ミリモル）と
トリフェニルメチルクロリド（２０.０ｇ，７１.７ミリ
モル）の乾燥ピリジン（１２０ml）中溶液を室温で１２
時間、６０℃で１時間撹拌した。トリフェニルメチルク
ロリド（１２.０ｇ，４３.０ミリモル）の添加後、溶液
を、出発原料がすべて消失するまで（３〜４時間）６０
℃で１時間撹拌した。まだ温い溶液にＨ₂Ｏ（１２０m
l）を加えた。ＥｔＯＡｃで抽出し、有機層を合せて、
１Ｍ Ｈ₂ＳＯ₄水溶液および食塩水で抽出し、有機層を
蒸発させ、ついで、ＦＣ（ＳｉＯ₂、４００ｇ、トルエ
ン／アセトン ２：１→トルエン／アセトン １：１）に
付すと、２３.３ｇ（９０％）の２が灰色のガラス状物
質として得られた。

【００２５】アリル２,３,４−トリ−Ｏ−ベンジル−６
−Ｏ−トリチル−α−Ｄ−グルコピラノシド（３）。２
（１５.９ｇ，３４.３ミリモル）の乾燥ＴＨＦ（３９０
ml）中溶液をＮａＨの懸濁液（６.９ｇ，約１５０ミリ
モル）により、室温で１０分間処理した。ＢｕＢｒ（２
５.０ml，２１１ミリモル）およびＢｕ₄ＮＩ（１.９
ｇ，５.１ミリモル）を添加した。溶液を、ＴＬＣによ
って反応の完結が指示されるまで（約１２時間）還流下
に加熱した。Ｅｔ₂Ｏを加えて、溶液をシリカを通して
ろ過した。ろ液を蒸発させ、残留物をＦＣ（ＳｉＯ₂，
６００ｇ，Ｅｔ₂Ｏ／ヘキサン １：９→Ｅｔ₂Ｏ）に付
すと、２１.４ｇ（８５％）の３が得られた。R_f（EtOAc
／ヘキサン １：４）0.36。¹³C-NMR（75MHz，C₆D₆）：6
3.46(t)；68.49(t)；71.33(d)；72.96(t)；75.12(t)；7
5.74(t)；78.93(d)；81.40(d)；82.85(d)；86.95(s)；9
6.44(d)；117.21(t)；127.29〜129.32(d，数本)；134.7
3(d)；139.11(s)；139.32(s)；139.89(s)；144.78(s,
３倍の強度)。

【００２６】アリル２,３,４−トリ−Ｏ−ベンジル−α
−Ｄ−グルコピラノシド（４）。ＭｅＣＮ（９０ml）中
ＢＦ₃・ＯＥｔ₂（５.０ml，３９.８ミリモル）の溶液
を、乾燥ＣＨ₂Ｃｌ₂（１５０ml）中３（１３.４ｇ，１
８.３ミリモル）とＥｔ₃ＳｉＨ（１４.５ml，９１.５ミ
リモル）の冷（０℃）溶液に滴加した。１０分後に、飽
和ＮａＨＣＯ₃（１００ml）およびＨ₂Ｏ（２００ml）を
添加した。混合物を激しく振盪し、水層をＣＨ₂Ｃｌ₂で
抽出し、有機層を合せて食塩水で洗浄し、乾燥し（Ｍｇ
ＳＯ₄）、蒸発させた。ＦＣ（ＳｉＯ₂，４００ｇ，Ｅｔ
ＯＡｃ／ヘキサン１：５→ＥｔＯＡｃ／ヘキサン １：
１）に付すと、８.３５ｇ（９３％）の４が得られた。
Ｒ_f（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン １：２）０.２０。

【００２７】アリル２,３,４−トリ−Ｏ−ベンジル−α
−Ｄ−グルコピラヌロニドtert−ブチルエステル
（５）。ＤＭＦ／ＣＨ₂Ｃｌ₂ ４：１（１８０ml）なら
びにピリジン（１１.０ml，１４２ミリモル）中ＣｒＯ₃
（６.８ｇ，６.８ミリモル）の溶液を予め室温で、３０
分間激しく撹拌したのち、これに、４（８.３５ｇ，１
７.０ミリモル）のＤＭＦ／ＣＨ₂Ｃｌ₂ ４：１（４５m
l）中溶液を添加した。Ａｃ₂Ｏ（１３.０ml，１１.８ミ
リモル）、およびtert−ＢｕＯＨ（３４.０ml，３６２
ミリモル）を加えたのち、溶液を室温で９時間撹拌し、
ついでメタノール（３０ml）を加えた。３０分後に，混
合物の容量を１／４に濃縮して、Ｅｔ₂Ｏ（２５０ml）
で希釈した。Ｎａ₂ＳＯ₄およびＳｉＯ₂（３００ｇ）を
通してろ過し、Ｅｔ₂Ｏで溶出し、蒸発させて、ＦＣ
（ＳｉＯ₂，３３０ｇ，ＥｔＯＡｃ／ヘキサン１：９）
に付すと、６.３０ｇ（６６％）の５が得られた。R_f（E
tOAc／ヘキサン １：２）：0.63。¹³C-NMR（50MHz，CDC
l₃）：27.94（q，３倍の強度）；68.69(t)；71.44(d)；
73.43(t)；75.89(t)；79.51(d)；79.73(d)；81.45(d)；
82.12(s)；96.78(d)；118.83(t)；127.66〜128.50（d，
数本）；133.56(d)；138.06(s)；138.21(s)；138.69
(s)；168.84(s)。

【００２８】アリル２,３,４−トリ−Ｏ−ベンジル−α
−Ｄ−グルコピラヌロニド（６）。ＨＣＯＯＨ（１５０
ml）中に５（６.５２ｇ，１１.１ミリモル）を溶解した
液を３０分間室温で撹拌した。これをついで蒸発させる
とクロマトグラフィー的に純粋な５.６０ｇ（９９％）
の６が得られた。R_f（EtOAc／ヘキサン／HCOOH １：
１：痕跡)：0.47。¹³C-NMR（75MHz，CDCl₃）：68.88
(t)；69.86(d)；73.40(t)；75.33(t)；75.06(t)；79.14
(d)；79.26(d)；81.42(d)；96.13(d)；118.90(t)；127.
77〜128.55(d，数本)；133.18(d)；137.47(s)；137.84
(s)；138.46(s)；174.18(s)。

【００２９】アリル（５Ｒ）−５−アセトキシ−２,３,
４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−キシロピラノシド
（７）。Ｃ₆Ｈ₆（５０ml）およびピリジン（５ml）中６
（５.６０ｇ，１１.１ミリモル）の溶液を撹拌しなが
ら、窒素雰囲気下、６０℃において、Ｐｂ(ＯＡｃ)
₄（１６.８０ｇ，約３２ミリモル）により、２５分間処
理した。ＳｉＯ₂を通してろ過し、Ｅｔ₂Ｏで溶出し、蒸
発させ、ＦＣ（ＳｉＯ₂，３００ｇ，ＡｃＯＥｔ／ヘキ
サン １：６）に付すと、４.１ｇ（７１％）の７が得ら
れた。R_f（EtOAc／ヘキサン １：４）0.29。IR（CHC
l₃）：3089ｗ，3067ｗ，3008ｗ，2933ｗ，2874ｗ，1759
ｓ，1497ｗ，1455ｍ，1367ｍ，1248ｗ，1161ｍ，1070
ｓ，1028ｓ，937ｗ。¹³C-NMR（50MHz，CDCl₃）：21.16
(q)；68.78(t)；73.67(t)；75.47(t)；76.33(t)；79.50
(d)；80.54(d)；81.37(d)；90.18(d)；95.35(d)；119.0
9(t)；128.05〜128.84(ｄ, 数本)；133.68(d)；138.36
(s)；138.63(s)；139.01(s)；169.75(d)。

【００３０】アリル（５Ｓ）−５−ヒドロキシ−２,３,
４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−キシロピラノシド
（８）。ＣＨ₂Ｃｌ₂（２０ml）中７（５５３mg，０.９
６ミリモル）の溶液に、−７８℃で、ＤＩＢＡＨ（トル
エン中２０％溶液２.８ml，約２.９ミリモル）を滴下し
た。１５分後に、ＮＨ₄Ｃｌの飽和溶液（２ml）を添加
した。混合物を室温まで加温し、Ｈ₂ＯおよびＨ₂ＳＯ₄
の１Ｍ溶液（１０ml）で希釈した。水層をＣＨ₂Ｃｌ
₂（３×）で抽出し、有機層を合せて食塩水（２×）で
洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ₄）、蒸発させると、４９９m
g（９８％）の８の結晶が生成し、これはさらに精製し
ないで次工程に用いた。R_f（EtOAc／ヘキサン１：２）
0.32。¹H-NMR（300MHz，CDCl₃）：2.92（br s，OH）；
3.33（dd，J=9.2，7.8, H-C(4)）；3.60（dd，J=9.7，
3.7，H-C(2)）；3.99（t，J=9.5，H-C(3)）；4.07（dd
t，J=12.9，6.6, 1.2, 全O）；4.23（ddt，J=12.9，5.
2，1.4，全O）；4.65（d，J=12.0）；4.79（d，J=12.
0，PhCH₂）；4.78（d，J=3.7，H-C(1)）；4.81（d，J=1
1.2）；4.89（d，J=11.9，PhCH₂）；4.85（d，J=10.
9）；4.93（d，J=10.9，PhCH₂）；5.06（d，J=7.8，H-C
(5)）；5.24（dq，J=10.3，1.5，全O）；5.34（dq，J=1
7.2，1.5，全O）；5.93（dddd，J=17.1，10.3，6.6，5.
2，全O）；7.28〜7.42（m，15芳香族Ｈ）。

【００３１】アリル（５Ｓ）−５−トリクロロアセトイ
ミジルオキシ−２,３,４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ
−キシロピラノシド（９）。粗製の８（２００mg，約
０.４２ミリモル）とＣｌ₃ＣＣＮ（０.６３ml，６.３ミ
リモル）の乾燥ＣｌＣＨ₂ＣＨ ₂Ｃｌ（６ml）中溶液を冷
却（−３０℃）し、これにＭＴＢＤ（６６μｌ，０.４
６ミリモル）を添加した。１０分後に、溶液をＳｉＯ₂
を通してろ過し、ＳｉＯ₂をＥｔ₂Ｏで溶出し、ろ液を合
せて蒸発させると、粗製の９が次工程に使用するのに十
分純粋な形で（¹Ｈ-ＮＭＲ，ＴＬＣ）得られた。R_f（Et
OAc／ヘキサン １：２）0.53。

【００３２】アリル（５Ｒ）−５−ジメチルホスホニル
−２,３,４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−キシロピラ
ノシド（１０）およびアリル（５Ｓ）−５−ジメチルホ
スホニル−２,３,４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−キ
シロピラノシド（１１）。粗製の９（３５０mg）とＰ
(ＯＭｅ)₃（２４０μｌ，１.２６ミリモル）の乾燥Ｍｅ
ＣＮ（６ml）中溶液を冷却（−１７℃）し、これにＭＳ
ＴＯＴｆ（８３μｌ，０.４６ミリモル）を添加した。
溶液を０℃加温し、この温度に３時間保持し、ＳｉＯ₂
を通してろ過した。ＳｉＯ₂をＥｔ₂Ｏで溶出し、ろ液を
合せて蒸発させた。残留物（３９６mg）をＦＣ（ＳｉＯ
₂，２２ｇ，ＥｔＯＡｃ／ヘキサン １：１）に付すと、
１０およびその（５Ｓ）異性体１１の混合物（１４７m
g，７から６２％）が得られた。この混合物をＨＰＬＣ
（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン ２：１）でさらに精製すると
４９mg（７から２１％）の１０および５２mg（７から２
２％）の１１が得られた。１０のデ−タ：R_f（EtOAc／
ヘキサン １：１）0.12。¹H-NMR（500MHz，CDCl₃）：3.
55（dd，J=9.6，3.6，H-C(2)）；3.69（d，J=10.8，OM
e)；3.80（d，J=10.5，OMe)；3.81（dt，J=10.6，8.8，
H-C(4)）；3.99（t，J=9.1，H-(3)）；4.00（ddt，J=1
2.8，6.6，1.2，全O）；4.05（dd，J=10.5，9.8，H-C
(5)）；4.16（ddt，J=12.8，5.2，1.4，全O）；4.62
（d，J=12.1）；4.77（d，J=12.1，PhCH₂）；4.80（d，
J=10.6）；4.89（d，J=10.3，PhCH₂）；4.81（d，J=4.
7，H-C(2)）；4.83（d，J=11.2）；4.97（d，J=10.9，P
hCH₂）；5.24（dq，J=10.3，1.1，全O）；5.33（dq，J=
17.2，1.6，全O）；5.93（dddd，J=17.1，10.3，6.7，
5.2，全O）；7.24〜7.35（m，15芳香族Ｈ）。¹³C-NMR
（125MHz，CDCl₃）：52.74（dq，J(P，C)=6.8）；53.88
（dq，J(P，C)=6.5）；65.86（dd, J(C，P)=175.1)；6
8.73(t)；73.46(t)；75.26(t)；75.90(t)；78.40（dd，
J(C，P)=2.7)；79.35（dd，J(C，P)=1.0）；82.01（d
d，J(C，P)=17.9）；96.40（dd，J(C，P)=15.0）；118.
66(t)；127.63〜128.49(d, 数本)；133.28(d)；138.00
(s)；138.11(s)；138.63(s)。³¹P-NMR（203MHz，CDC
l₃)：24.60。

【００３３】プロパ−１−エンイル（５Ｒ）−５−ジメ
チルホスホニル−２,３,４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−
Ｄ−キシロピラノシド（１２）。１０（２５７mg，０.
４５２ミリモル）の乾燥ＴＨＦ（１０ml）中溶液を撹拌
しながら、これに、乾燥ＴＨＦ（５ml）中活性化１,５
−シクロオクタジエン−ビス〔メチルジフェニルホスフ
ィン〕−イリジウムヘキサフルオロホスフェート（１５
mg）を添加した。ＴＬＣが反応の完結を示した２時間後
に、溶液を蒸発させると、５７mgの粗製の１２が得ら
れ、これを精製することなく、次工程に使用した。R
_f（EtOAc／ヘキサン３：１）0.39。

【００３４】（５Ｒ）−５−ジメチルホスホニル−２,
３,４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−キシロピラノ−
ス（１３）。粗製の１２（５７mg）および黄色ＨｇＯ
（１１８mg，０.５４ミリモル）のＨ₂Ｏ／アセトン
１：１０溶液（１０ml）中溶液を撹拌しながら、これを
Ｈ₂Ｏ／アセトン １：１０（５ml）中ＨｇＣｌ₂（１４
８mg，０.５５ミリモル）の溶液で処理した。反応完了
後、Ｅｔ₂Ｏを加えた。Ｅｔ₂Ｏ層をＫＩの半飽和溶液と
食塩水で洗浄した。ＳｉＯ₂（２ｇ）を加え、混合物を
蒸発させ、ＦＣ（ＳｉＯ₂，１５ｇ，ＥｔＯＡｃ／ヘキ
サン ３：１→ＥｔＯＡｃ／ヘキサン ５：１）に付す
と、２１６mg（１０から９０％）の１３が得られた。R_f
（EtOAc／ヘキサン ３：１）：0.16。

【００３５】Ｏ−〔（５Ｒ）−５−ジメチルホスホニル
−２,３,４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−キシロピラ
ノシド〕−トリクロロアセトイミデート（１４）。乾燥
ＣＨ ₂Ｃｌ₂中、１３およびＣｌ₃ＣＣＮ（１５当量）の
溶液（０.０５Ｍ）に、−３０℃において、ＭＴＢＤ
（１.１当量）を加えた。反応完了後、溶液をＳｉＯ₂を
通してろ過し、ＳｉＯ₂をＥｔ₂Ｏで溶出し、溶出液を合
せて蒸発させると、粗製の１４が得られ、これを精製す
ることなく、次工程に使用した。

【００３６】４−メチルウンベリフェリル（５Ｒ）−５
−ジメチルホスホニル−２,３,４−トリ−Ｏ−ベンジル
−β−Ｄ−キシロピラノシド（１５）。乾燥ＭｅＣＮ
（０.０５Ｍ）中粗製の１４（１当量）および４−メチ
ルウンベリフェロン（２当量）の溶液を、−２０℃にお
いて、ＢＦ₃ＯＥｔ₂（１当量）で処理した。反応完了
後、Ｈ₂Ｏを加えた。水相をＥｔＯＡｃ（３×）で抽出
し、有機相を合せて食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ₄上で乾
燥し、蒸発させた。残留物をＦＣに付すと、１５が得ら
れた。

【００３７】４−メチルウンベリフェリル（５Ｒ）−５
−ジメチルホスホニル−β−Ｄ−キシロピラノシド（１
６）。１５のＭｅＯＨ（０.０５Ｍ）中溶液を、Ｐｄ／
Ｃ １：１０の存在下にＨ₂で処理した〔K. Wallimann,
Helv. Chim. Acta, 1990, 73,1359〕。セライトを通し
てろ過し、蒸発させると粗製の１６が得られ、これをＦ
Ｃ（ＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ）で精製した。

【００３８】４−メチルウンベリフェリル（５Ｒ）−５
−ホスホニル−β−Ｄ−キシロピラノシド（１７）。Ｃ
Ｈ₂Ｃｌ₂中１６の溶液（０.０５Ｍ）をＮ₂下０℃でＭｅ
₃ＳｉＢｒ（３０当量）により処理した〔C.E. McKenn
a，Tetrahedron Lettr., 1977, 155〕。反応完了後、Ｍ
ｅＯＨを加え混合物を真空中で濃縮し、残留物をＨ₂Ｏ
に取り混合物を凍結乾燥した。残留物を陰イオン交換ク
ロマトグラフィーによって精製すると（Dowex １×８
(ＨＣＯＯ^-)：０〜０.７Ｍ ＨＣＯＯＨ）〔K. Walliman
n, Helv. Chim. Acta, 1990, 73, 1359〕、１７が得ら
れ、これを直ちに陰イオン交換クロマトグラフィー（Do
wex ５０Ｗ×４(Ｎａ⁺)）によってそのＮａ塩に変換し
た。

【００３９】プロドラッグＤはＷＯ ９２／１９６３９
の記載と同様にして合成した。 プロドラッグＤ：

【化１４】

【００４０】実施例３抗体β−グルクロニダーゼ融合蛋白質に対する天然およ
び改良基質のＫｍおよびＶｍａｘ値の比較 ＫｍおよびＶｍａｘの測定には、３′−Ｎ−〔４−（β
−Ｄ−グルクロニルオキシ）−３−ニトロ−ベンジルオ
キシカルボニル〕−ドキソルビシンおよびプロドラッグ
Ａを１００mMリン酸塩緩衝液＋１mg／ml ＢＳＡ，pH７.
２中１０〜１０００μＭの範囲に希釈しなければならな
い。酵素的切断は、３７℃において、一定量の融合蛋白
質を用いて実施する。切断はＨＰＬＣによってモニタリ
ングできる。ＫｍおよびＶｍａｘ値は、ソフトウエアプ
ログラムＧｒａＦｉｔ２０（Erithacus Software Lt
d.）によって計算できる。

【００４１】ＨＰＬＣ分析：ＨＰＬＣ装置は、オートサ
ンプラー（Abimed，２３１型）、Ｃ１８逆相シリカゲル
含有ミニカートリッジ（Analytichem）装着自動サンプ
ル抽出システム（AASP，Varian）、勾配ポンプ（Gynkot
ech，４８０型）、蛍光検出器（Shimazdu ＲＦ５３５，
励起光：４９５nm，放射光：５６０nm）から構成され
た。サンプルの注入前に、ミクロカートリッジを２.５m
lのメタノールおよび１.５mlのリン酸塩緩衝液pH６で予
め調整した。逆相シリカゲル上に保持された被検物質を
ついで、バルブスイッチを操作してミニカートリッジを
移動相に連結させることによって溶出した。クロマトグ
ラフィーは逆相充填剤（Nucleosil Ｃ１８，粒子サイズ
５μｍ，長さ１２０mm，I.D. ４.５mm）上、勾配溶出に
よって実施した。溶出は、２成分（Ａ：２０mMリン酸pH
３，Ｂ：アセトニトリル）からなる勾配によって実施し
た。勾配の時間−濃度像は以下の通りとした。 ０分：７５％Ａ、２５％Ｂ ２０分：２５％Ａ、７５％Ｂ ３０分：２５％Ａ、７５％Ｂ 次の試行を実施する前に、カラムは５分間、開始時条件
に平衡化した。

【００４２】

【表１】

【００４３】実施例４ プロドラッグＡは、D. Papahadjopoulosら（ＰＮＡＳ，
ＵＳＡ８８：１１４６０−１１４６４，１９９１）に従
い、スチールスリポソーム中に封入することができる。
ＣＤ１ｎｕ／ｎｕマウスに静脈内注射後、スチールスリ
ポソーム中に封入されたプロドラッグＡの血漿クリアラ
ンスは、遊離プロドラッグＡの場合の約２０分から封入
プロドラッグＡの場合の約４０時間に延長される。有意
なｔ１／２β延長により、薬理学的有効性が改善され
る。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (71)出願人 593197329 ラボラトワール・ヘキスト・ソシエテ・ア ノニム ＬＡＢＯＲＡＴＯＩＲＥＳ ＨＯＥＣＨＳ Ｔ Ｓ．Ａ. フランス国エフ−92080パリ．ラデフエン ス（番地なし) (72)発明者 クラウス・ボスレツト ドイツ連邦共和国デー−35037マルブルク. アンデアハウシユタト64 (72)発明者 イエルク・チエツク ドイツ連邦共和国デー−35041マルブルク. クロイツアカー２アー (72)発明者 デイーター・ホフマン ドイツ連邦共和国デー−35041マルブルク −エルンハウゼン．フオイエルドルンヴエ ーク12 (72)発明者 アンドレーア・ヴアゼラ スイス国ツエー・ハー−8057ツユーリヒ. ラングアカーシユトラーセ７ (72)発明者 ローラント・ホース スイス国ツエー・ハー−8050ツユーリヒ. アフオルテルンシユトラーセ107 (72)発明者 フランソワ・テイーケン フランス国エフ−75013パリ．リユドウラ ミラルムーシエ70 (72)発明者 ジヤン−クロード・フロラン フランス国エフ−91940レジユリ．リユデ コーシユ23 (72)発明者 ミシエル・アズレ フランス国エフ−75006パリ．リユデユレ ガール16 (72)発明者 クロード・モネレ フランス国エフ−75012パリ．アヴエヌラ モリシエール９ (72)発明者 ジヤン−クロード・ジヤークシ フランス国エフ−86360ビユクセローレ. リユデユプランテイ46 (72)発明者 ジヤン−ピエール・ジエソン フランス国エフ−86360シヤンセヌイデユ ポワトウ．モンタシ（番地なし）．ラジエ ルモニエール内 (72)発明者 ミシエル・コツホ フランス国エフ−78170ラセルサンクルー. エリゼードウゼム116

Claims (8)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 式Ｉ Ｓ−Ｚ−Ｗ (Ｉ) で表される化合物。上記式中、 Ｗは薬理学的に活性な物質であり、 Ｚは自己破壊性スペーサーまたは結合を示し、 Ｓは天然の酵素基質と比較して少なくとも２倍低いミカ
   エリス−メンテン定数でＺ−Ｓ結合が酵素的に切断でき
   る修飾された競合的酵素阻害物質である。
2. 【請求項２】 ＳとＺの間の結合は酵素または触媒抗体
   によって切断可能なグリコシド結合である請求項１に記
   載の化合物。
3. 【請求項３】 結合はヒトグリコシダーゼ、好ましくは
   ヒトβ−グルクロニダーゼによって切断可能である請求
   項２に記載の化合物。
4. 【請求項４】 式II 【化１】 を有する請求項２に記載の化合物。上記式中、 Ｒは互いに独立に、Ｈ、ＯＨ、Ｆ、ＮＨ₂、ＣＯＯＨ、
   ＣＨ₂−ＣＯＯＨ、ＣＨＯＨ−ＣＯＯＨ、ＰＯ₃Ｈ₂、Ｃ
   Ｈ₂−ＰＯ₃Ｈ₂またはＣＨＯＨ−ＰＯ₃Ｈ₂であり、 ＸはＮＨ、ＯまたはＳであり、 ｍは０または１であり、 Ｗは薬理学的に活性な物質であり、 Ｚは自己破壊性スペーサーまたは結合を示す。ただし、
   β−Ｄ−グルクロニド−Ｚ−アントラサイクリン化合
   物： 【化２】 は包含しない。
5. 【請求項５】 式III 【化３】 を有する請求項４に記載の化合物。上記式中、 ＹはＣＯＯＨ、ＣＨ₂−ＣＯＯＨ、ＣＨＯＨ−ＣＯＯ
   Ｈ、ＰＯ₃Ｈ₂、ＣＨ₂−ＰＯ₃Ｈ₂またはＣＨＯＨ−ＰＯ₃
   Ｈ₂であり、 ＸはＮＨ、ＯまたはＳであり、 Ｒは互いに独立に、Ｆ、ＮＨ₂、ＨまたはＯＨであり、 ｍは０または１であり、 Ｚは結合または自己破壊性スペーサー、好ましくは式 −Ｙ〔−Ｃ(＝Ｙ)−Ｘ−〕_p−Ｖ(Ｒ)_n−Ｘ−Ｃ(＝Ｙ)− （式中、 Ｖは、芳香族基もしくはヘテロ芳香族基または共役二重
   結合を有する脂肪族基あるいはアミノ酸残基であって、
   グリコシル残基の切断後には循環する、好ましくは５〜
   ２０個の炭素原子および０〜４個のヘテロ原子を有し、
   この場合ヘテロ原子はＮ、ＯまたはＳを意味し、Ｒで置
   換されていて、 Ｒは互いに独立にＨ、メチル、メトキシ、カルボキシ、
   メチルオキシカルボニル、ＣＮ、ヒドロキシ、ニトロ、
   フルオロ、クロロ、ブロモ、スルホニル、スルホンアミ
   ドまたはスルホン（Ｃ₁〜Ｃ₄）−アルキルアミドであ
   り、 ｐは、０または１であり、 ｎは、０〜２５の整数、好ましくは１または２であり、 Ｘは、Ｏ、ＮＨ、メチレンオキシ、メチレンアミノまた
   はメチレン(Ｃ₁〜Ｃ₄)−アルキルアミノであり、 Ｙは、ＯまたはＮＨである）で示される残基であり、 Ｗは、薬理学的に活性な物質、好ましくは、ドキソルビ
   シン、４′−エピ−ドキソルビシン、４−もしくは４′
   −デソキシ−ドキソルビシン、もしくはエトポシドのよ
   うなアントラサイクリン、Ｎ−ビス−（２−クロロエチ
   ル）−４−ヒドロキシアニリン、４−ヒドロキシシクロ
   ホスファミド、ビンデシン、ビンブラスチン、ビンクリ
   スチン、テルフェナジン、テルブタリン、フェノテロー
   ル、サルブタモール、ムスカリン、オキシフェンブタゾ
   ン、サリチル酸、ｐ−アミノサリチル酸、５−フルオロ
   ウラシル、５−フルオロシチジン、５−フルオロウリジ
   ン、メトトレキセート、ジクロフェナック、フルフェナ
   ム酸、４−メチルアミノフェナゾン、テオフィリン、ニ
   フェジピン、マイトマイシンＣ、マイトキサントロン、
   カンプトテシン、ｍ−ＡＭＳＡ、タキソール、ノコダキ
   ソール、コルヒチン、シクロホスファミド、ラケルマイ
   シン、シスプラチン、メルファラン、ブレオマイシン、
   ナイトロジェンマスタード、ホスホラミドマスタード、
   ケルセチン、ゲニスタイン、エルブスタチン、トリホス
   チン、ロヒツキン誘導体（(−)−シス−５,７−ジヒド
   ロキシ−２−（２−クロロフェニル）−８−〔４−（３
   −ヒドロキシ−１−メチル）−ピペリジニル〕−４Ｈ−
   １−ベンゾピラン−４−オン；ＥＰ ８９１１９７１０.
   ５）、レチノイン酸、酪酸、ホルボールエステル、ＤＳ
   ＭＯ、アクラシノマイシン、プロゲステロン、ブセレリ
   ン、タモキシフェン、ミフェプリストン、オナプリスト
   ン、Ｎ−（４−アミノブチル）−５−クロロ−２−ナフ
   タレンスルホンアミド、ピリジニルオキサゾール−２−
   オン、キノリル−、イソキノリル−オキサゾロン−２−
   オン、スタウロスポリン、エタノールアミン、ベラパミ
   ール、フォルスコリン、１,９−ジデオキシフォルスコ
   リン、キニン、キニジン、レセルピン、１８−Ｏ−
   （３,５−ジメトキシ−４−ヒドロキシベンゾイル）レ
   セルペート、ロニダミン、ブチオニン、スルフォキシミ
   ン、ジエチルジチオカルバメート、シクロスポリンＡ、
   アザチオプリン、クロラムブシル、Ｎ−（４−トリフル
   オロメチル）−フェニル−２−シアノ−３−ヒドロキシ
   −クロトン酸アミド（ＷＯ ９１／１７７４８）、１５
   −デオキシスペルグアリン、ＦＫ５０６、イブプロフェ
   ン、インドメタシン、アスピリン、スルファサラジン、
   ペニシラミン、クロロキン、デキサメサゾン、プレドニ
   ソロン、リドカイン、プロパフェノン、プロカイン、メ
   フェナム酸、パラセタモール、４−アミノフェナゾン、
   ムスコシン、オルシプレナリン、イソプレナリン、アミ
   ロライド、ｐ−ニトロフェニルグアニジノベンゾアート
   またはそれらのさらに１個もしくは２個以上のヒドロキ
   シ、アミノもしくはイミノ基で置換され、ヒドロキシ、
   アミノもしくはイミノ基を介してＺに連結する誘導体で
   ある。ただし、β−Ｄ−グルクロニド−Ｚ−アントラサ
   イクリン化合物： 【化４】 は包含しない。
6. 【請求項６】 請求項１に記載の化合物を含有する医
   薬。
7. 【請求項７】 リポソームに封入した請求項６に記載の
   医薬。
8. 【請求項８】 プレ標的化された酵素、触媒抗体、免疫
   毒素または免疫接合体と配合した請求項６に記載の医
   薬。